وأيد هذا العمل من المنح المقدمة من المعاهد الوطنية للصحة (NIH) إلى SSH (R01-DK078640)، من معهد هوارد هيوز الطبي (HHMI) من خلال برنامج HHMI / فاندربيلت شهادة جامعية في الطب الجزيئي لTJW (GRDOT56006779)، في فاندربيلت السكري مركز البحوث والتدريب (P30-DK020593) ومرض الجهاز الهضمي فاندربيلت مركز أبحاث (P30-DK058404) توفير الخدمات الأساسية.

1. إعداد قنية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدفئة الباب 1 بوصة طويلة من الأنابيب مع PE10 متناول يدك وتمتد بحيث تصبح أنابيب رقيقة. ملاحظة: حجم السفينة أو القناة التي سوف مقنى تحديد درجة تمتد المطلوبة. يجب أن يكون قنية جيدا امتدت ليلقي القناة الصفراوية ولكن لا يجوز أن يشترط أن يكون معتدل تمتد لتناسب داخل الوريد أكبر موقع البوابة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع الأنابيب الممتدة في قطر لإنشاء تلميح مشطوف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع حافة أخرى من الأنابيب لإنشاء الجزء 5-6 بوصة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج مقياس 32، ½ بوصة إبرة تحت الجلد في حافة غير مشطوف من الأنابيب. </li></ol> 2. إعداد المحاقن مع PBS <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملء حقنة 3 مل مع برنامج تلفزيوني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سحبت المسمار الحقنة تحت الجلد على الإبرة مع المرفقة PE10 أنابيب معدة مسبقا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نفض الغبار قد ملأت حقنة حقنة ودفع المكبس لضمان PBS الإبرة والأنابيب ولا توجد فقاعات الهواء في الحقنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الحقنة المعدة مع PBS في شكل حقنة صاحب من الطين النمذجة. وهذا يبقي حامل حقنة ثابت بينما يتم إدراج أنابيب في القناة. </li></ol> 3. الأخرى المنصوص المتابعة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تزن 0.1 غرام من المواد الحفازة في وعاء صغير، على سبيل المثال، واحدة من جانب لوحة 24 أيضا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 1 مل سحب الراتنج إلى حقنة مل 3. ويمكن تعديل المبالغ النسبية للمحفز والراتنج لتغيير وقت المعالجة: مذكرة. خفض كمية مايو محفز، ولكن زيادة يلقي الانكماش وتؤدي إلى مجموعة من الممثلين اقل من المرغوب. ملاحظة: عند التعامل مع الراتنج، واتخاذ الاحتياطات اللازمة لتجنب الاتصال مع الراتنج أو استنشاق الأبخرة من الراتنج. ارتداء القفازات دائما وتنفيذ الخطوات التي تنطوي على الراتنج في منطقة جيدة التهوية، مثل غطاء الدخان الكيميائي </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع قطعة من الحرير خياطة 5.0 من 5 بوصات تقريبا لاستخدامه بمثابة رباط. </li></ol> 4. إعداد الماوس <ol&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> التضحية الماوس الكبار. وضع الماوس على ظهرها وفتح تجويف البطن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الماوس على تشريح منصة النطاق. وضع أنبوب 15 مل المخروطية عموديا تحت الماوس لزيادة وضوح الرؤية والوصول إلى الكبد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مسحة القطن الرطب مع PBS واستخدامها على الوجه الكبد صعودا وبعيدا عنك لفضح عرض الظهرية من الكبد مع الوريد البابي أو خارج الكبد القناة الصفراوية المشتركة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ليلقي الوريد البابي، يمكنك منع تخثر الدم عن طريق الوريد مع بيغ درجة حرارة الغرفة PBS. إرفاق الإبرة إلى حقنة 3 مل مليئة PBS وإدراج إبرة في الوريد البابي خارج الكبد بقدر من الكبد ما تستطيع. دفع برفق من خلال PBS في الوريد البابي. جعل نيك في الوريد الكاردينال المشتركة لتصريف الدم. استخدام مسحة القطن مبللة لتدليك الكبد، وتعزيز الصرف الدم. لا ينصح لهذه الخطوة القناة الصفراوية، وربما لا يكون من الضروري لجميع أنظمة الأوعية الدموية. ملاحظة: هذه الخطوة يمكن أن تكون أيضا performed مع بارافورمالدهيد 4٪ بدلا من PBS. قد تستخدم من بارافورمالدهيد 4٪ زيادة سلامة الأوعية الدموية ويؤدي إلى المدلى بها أكثر دقة وتحديدا من هياكل أصغر الأوعية الدموية. </li></ol> 5. يقني؛ يدخل القنية خارج الكبد الوريد البابي أو القناة الصفراوية المشتركة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ملقط المنحني لتمرير ضمد خياطة جراحية تحت الوريد البابي أو القناة الصفراوية، ما يقرب من ربع بوصة من الكبد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ربط عقدة في خياطة مشترك فضفاض. لا تشديد عقدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا كنت تعمل مع نظام مفتوح العضوية، قد يكون من المفيد لادراك التعادل وتشديد ربطة على الطرف الآخر من النظام. إذا كان لديك فتح الوريد المشتركة الكاردينال لاستنزاف الدم من الوريد البابي، والتعادل رباط حولها لزيادة الضغط داخل الوريد البابي ومنع تسرب راتنج في الوريد الكبدي المركزية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام مقص الربيع لإجراء قطع صغير في الوريد البابي أو القناة الصفراوية، ما يقرب من ربع بوصة تحت عقدة الخيط. هذا مكعبيجب ر اختراق أي أكثر من منتصف الطريق من خلال قطر الوريد البابي أو القناة الصفراوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام ملقط # 5، أمسك الوريد البابي أو القناة الصفراوية في موقع القطع وإدراج نهاية مشطوف من أنابيب في القناة الصفراوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دفع غيض من أنابيب الماضي ضمد قبل نحو ربط والكبد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اختبار للتأكد من دقتها عن طريق حقن PBS كيفية تركيب الكانيولا من خلال قنية ومشاهدة لمعرفة ما اذا كان يدخل الوريد البابي أو القناة الصفراوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشديد ربطة على عقد قنية في المكان. </li></ol> 6. الراتنج المصبوب الوريد البابي داخل الكبد أو القناة الصفراوية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة الراتنج قبل قياسها 1 مل إلى ما قبل قياسها حافزا ز 0.1 و تخلط جيدا. تجنب توليد فقاعات الهواء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رسم محفز راتنج خليط مرة أخرى إلى حقنة مل 3. إزالة أي فقاعات الهواء عن طريق الحقنة بلطف عبها وطرد فقاعات. ملاحظة: لصب الهياكل الصغيرة، قد يكون من المفيد استخدام فراغ الغرفة لإزالة فقاعات الهواء صغيرة جدا من الالراتنج الإلكتروني وتحسين نوعية الزهر. للسماح لوقت لتنفيذ هذه الخطوة، سوف يكون من الضروري تقليل نسبة حافز / الراتنج من أن المقترح أعلاه من أجل إبطاء علاج الراتنج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استبدال بعناية PBS التي تحتوي على المحاقن مع الراتنج التي تحتوي على المحاقن، وترك إبرة قياس 32 تعلق على قنية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ببطء وبرفق دفع الراتنج في الوريد البابي أو القناة الصفراوية حتى يتم تعبئة الزيادات المقاومة والكبد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام مسحة القطن مبللة لتدليك بلطف الكبد وتشجيع التعبئة حتى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة قنية من هيكل وبسرعة إعادة إحكام ربطة لمنع تسرب الراتنج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح الماوس لوضع مسطح في درجة حرارة الغرفة لمدة 20 دقيقة في حين أن يشفي الراتنج، ثم إزالة الكبد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المضي قدما في تطهير أو تنقيع الكبد. </li></ol> 7. واضحة لرؤية الكبد في الموقع <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إصلاح الكبد في بارافورمالدهيد 4٪ بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية، هزاز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يغسل الكبدفي برنامج تلفزيوني لمدة ساعة على الأقل أربعة، هزاز. عند هذه النقطة، قد فصل فصوص الكبد إذا لزم الأمر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يذوى في الميثانول بنسبة 50٪ ثم في الميثانول بنسبة 100٪ لساعة لا يقل عن أربعة لكل منهما، هزاز في درجة حرارة الغرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مسح الكبد في محلول البنزيل الكحول 01:02 والبنزيل بنزوات (BABB) لمدة لا تقل عن 24 ساعة، هزاز. قد تكون هناك حاجة مرات غسيل لفترة أطول. إذا كان الكبد لا واضحة تماما بعد 2-3 أيام، نقل مرة أخرى إلى 100٪ الميثانول لمدة 24 ساعة وكرر BABB المقاصة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الكبد يغرق في BABB في طبق بتري الزجاج للتصوير في الموقع. </li></ol> 8. يعطن أنسجة الكبد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الكبد من الماوس ووضعها في أنبوب مخروطي 50 مل مع الماء. 1 ساعة الانتظار لعلاج الراتنج كاملة. فصوص الكبد منفصلة إذا لزم الأمر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> صب قبالة المياه ونقل الكبد لزجاجة. يغرق في KOH 15٪. ترك بين عشية وضحاها في درجة حرارة الغرفة. لا موسيقى الروك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> صب بعناية قبالة KOH وغسل الزهر في الماء المقطر. ملاحظة: الزهر هو النسخةيجب التعامل مع ذ هشة وبعناية فائقة. تجنب تعطيل المدلى بها عند إضافة أو إزالة السائل من أنبوب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عندما يلقي الراتنج نظيفة، وضع بلطف على Kimwipe لتجف، ثم نقل إلى وعاء ليتم تخزينها. </li></ol> 9. ممثل النتائج وسوف يلقي A الناجح للالوريد البابي أو القناة الصفراوية تظهر شبكة من الفروع المستمر أصغر تدريجيا تمتد من المحيط إلى نقير الكبد. ويظهر الشكل 1 الوريد البابي المدبر تصور في الموقع بعد BABB المقاصة. الشكل 1A يظهر المدلى بها من الفص الأيسر الكبد كامل وشكل وحجم الزهر. 1B الشكل يبين وجهة نظر عن قرب من المدلى بها نفسه، مما يدل على الاختراق من الراتنج في فروع الوريد أصغر في محيط بوابة الكبد. ويبين الشكل 2 يلقي الوريد البابي التي مرت KOH أماهceration. الشكل 2A يبين كامل الفص الأيسر والكبد 2B الشكل هو قرب فروع الطرفية الصغيرة. كما تم تطبيق هذه التقنية بنجاح إلى داخل الكبد والقناة الصفراوية باستخدام كل من نشر المقاصة BABB وتقنيات التعطين KOH 1،2،7. وتشمل المشاكل المشتركة ناقصة يملأ، فقاعات في الراتنج، وتجاوز في الأنظمة المحيطة أو الأنسجة. الشكل 3 يوضح كيفية تعبئة تعترف ناقصة (الشكل 3A)، فقاعات (الشكل 3A)، وتجاوز من راتنج من الوريد البابي إلى الوريد المركزي (الشكل 3B). اتخاذ جميع الصور باستخدام MZ ايكا المجسام FA 16 و QImaging RETIGA 4000R الكاميرا. <img alt="الشكل 1" src="/files/ftp_upload/4272/4272fig1.jpg" /> الشكل 1<html> غادر. يلقي الراتنج BABB-الفص الكبدي تطهيرها من الوريد البابي. A. يلقي الراتنج يظهر الهيكل الهرمي المتفرعة التي تمتد من المحيط إلى نقير الكبد. يلقي الراتنج يظهر في اللون الأصفر داخل الفص الأزرق الكبد ملون. B. A إغلاق يظهر الراتنج التي تملأ يمتد إلى فروع صغيرة في محيط الكبد. الراتنج هو اللون الأبيض من خلال مسح الكبد. شريط مقياس = 1 مم. <img alt="الشكل 2" src="/files/ftp_upload/4272/4272fig2.jpg" /> غادر الشكل 2. الأنسجة، المتهتك يلقي الراتنج من الفص الكبدي الوريد البابي. A. الراتنج يلقي من الفص الكبد كله يظهر العديد من الفروع ذات أحجام مختلفة. B. عن قرب تبين فروع صغيرة في محيط الكبد. ريش ظهور الفروع الصغيرة يمثل الراتنج ملء الفراغات الجيبية وتكون أو لا تكون مرئية على الراتنج يلقي وسوف تزيد من كثافة واضحة فرع إذا كان موجودا. الراتنج هو أبيض اللون. شريط مقياس = 1 مم. FO: المحافظة على together.within صفحة = &quot;دائما&quot;&gt; <img alt="الشكل 3" src="/files/ftp_upload/4272/4272fig3.jpg" /> الشكل 3. المشاكل المشتركة مع يلقي الراتنج. A. هناك تعبئة كاملة من الوريد الفص الأيسر هو المدخل واضح من قبل فروع يلقي بعض أو كل فشله في توسيع نطاق إلى المحيط الكبد. هذا يلقي يعرض أيضا فقاعات وظاهرة للعيان وفواصل الصب المستمر في (السهم). B. نظرا لقربها من الوريد البابي والوريد المركزي فروع في بعض الأماكن، وسوف الراتنج الوريد البابي تدخل في كثير من الأحيان وملء الوريد المركزي. ويمكن التعرف على هذا عندما يكون هناك فرعين نقيري متميزة (الأسهم) واثنين من الهياكل المتفرعة التي لديها أنماط مختلفة والتداخل. ويمكن أن يتم التفريق بين الأخطاء التقنية والتغيرات المورفولوجية الحقيقية بطريقتين. أولا، يجب مقارنة هيكل الزهر للهيكل المتوقع يعتمد على 2 الأبعاد تحليل أو أساليب أخرى. الثانية، من المهم لأداء عدة نسخ متماثلة، وعندما يكون ذلك ممكنا، تحديد البنيةولدى عودتهم لتحليل احصائى لتحديد تكرار وإذا كان هناك تغيير ذات دلالة إحصائية بين وداخل المورفولوجية التجريبية المختلفة وتحديد الأسلحة.

<ol>
	<li>Sparks, E. E., Perrien, D. S., Huppert, K. A., Peterson, T. E., Huppert, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defects+in+hepatic+Notch+signaling+result+in+disruption+of+the+communicating+intrahepatic+bile+duct+network+in+mice.">Defects in hepatic Notch signaling result in disruption of the communicating intrahepatic bile duct network in mice.</a> Dis. Model Mech. 4, 359-367 (2011).</li><li>Vanderpool, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+interactions+between+hepatocyte+nuclear+factor-6+and+notch+signaling+regulate+mouse+intrahepatic+bile+duct+development+in+vivo.">Genetic interactions between hepatocyte nuclear factor-6 and notch signaling regulate mouse intrahepatic bile duct development in vivo.</a> Hepatology. 55, 233-243 (2012).</li><li>Meyer, E. P., Ulmann-Schuler, A., Staufenbiel, M., Krucker, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+morphology+and+3D+architecture+of+brain+vasculature+in+a+mouse+model+for+Alzheimer's+disease.">Altered morphology and 3D architecture of brain vasculature in a mouse model for Alzheimer's disease.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 105, 3587-3592 (2008).</li><li>Van Steenkiste, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+corrosion+casting:+analyzing+wall+shear+stress+in+the+portal+vein+and+vascular+abnormalities+in+portal+hypertensive+and+cirrhotic+rodents.">Vascular corrosion casting: analyzing wall shear stress in the portal vein and vascular abnormalities in portal hypertensive and cirrhotic rodents.</a> Lab Invest. 90, 1558-1572 (2010).</li><li>Dickie, R., Cormack, M., Semmler-Behnke, M., Kreyling, W. G., Tsuda, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deep+pulmonary+lymphatics+in+immature+lungs.">Deep pulmonary lymphatics in immature lungs.</a> Journal of Applied Physiology. 107, 859-863 (2009).</li><li>Kelly, D. M., McEntee, G. P., McGeenery, K. F., Fitzpatrick, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microvasculature+of+the+pancreas,+liver,+and+kidney+in+cerulein-induced+pancreatitis.">Microvasculature of the pancreas, liver, and kidney in cerulein-induced pancreatitis.</a> Archives of Surgery. 128, 293-295 (1993).</li><li>Sparks, E. E., Huppert, K. A., Brown, M. A., Washington, M. K., Huppert, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notch+signaling+regulates+formation+of+the+three-dimensional+architecture+of+intrahepatic+bile+ducts+in+mice.">Notch signaling regulates formation of the three-dimensional architecture of intrahepatic bile ducts in mice.</a> Hepatology. 51, 1391-1400 (2010).</li><li>Carlson, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+expression+of+constitutively+active+Notch4+elicits+reversible+arteriovenous+malformations+in+adult+mice.">Endothelial expression of constitutively active Notch4 elicits reversible arteriovenous malformations in adult mice.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102, 9884-9889 (2005).</li><li>Hemmeryckx, B., Emmerechts, J., Bovill, E. G., Hoylaerts, M. F., Lijnen, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+ageing+on+the+murine+venous+circulation.">Effect of ageing on the murine venous circulation.</a> Histochem. Cell Biol. , (2012).</li><li>Hossler, F. E., Olson, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microvasculature+of+the+nasal+salt+gland+of+the+duckling,+Anas+platyrhynchos:+quantitative+responses+to+osmotic+adaptation+and+deadaptation+studied+with+vascular+corrosion+casting.">Microvasculature of the nasal salt gland of the duckling, Anas platyrhynchos: quantitative responses to osmotic adaptation and deadaptation studied with vascular corrosion casting.</a> J. Exp. Zool. 254, 237-247 (1990).</li><li>Hossler, F. E., West, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Venous+valve+anatomy+and+morphometry:+studies+on+the+duckling+using+vascular+corrosion+casting.">Venous valve anatomy and morphometry: studies on the duckling using vascular corrosion casting.</a> Am. J. Anat. 181, 425-432 (1988).</li><li>Hossler, F. E., Monson, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+blood+supply+of+intrinsic+lymph+nodes+in+the+wall+of+the+rabbit+urinary+bladder--studies+with+light+microscopy,+electron+microscopy,+and+vascular+corrosion+casting.">Structure and blood supply of intrinsic lymph nodes in the wall of the rabbit urinary bladder--studies with light microscopy, electron microscopy, and vascular corrosion casting.</a> Anat. Rec. 252, 477-484 (1998).</li><li>Hossler, F. E., Monson, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+a+unique+elastic+sheath+surrounding+the+vesicular+arteries+of+the+rabbit+urinary+bladder--studies+of+the+microvasculature+with+microscopy+and+vascular+corrosion+casting.">Evidence for a unique elastic sheath surrounding the vesicular arteries of the rabbit urinary bladder--studies of the microvasculature with microscopy and vascular corrosion casting.</a> Anat. Rec. 252, 472-476 (1998).</li><li>Hossler, F. E., Kao, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microvasculature+of+the+urinary+bladder+of+the+dog:+a+study+using+vascular+corrosion+casting.">Microvasculature of the urinary bladder of the dog: a study using vascular corrosion casting.</a> Microsc. Microanal. 13, 220-227 (2007).</li><li>Wischgoll, T., Choy, J. S., Kassab, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+of+morphometry+and+branching+angles+of+porcine+coronary+arterial+tree+from+CT+images.">Extraction of morphometry and branching angles of porcine coronary arterial tree from CT images.</a> Am J Physiol. Heart. Circ. Physiol. 297, H1949-H1955 (2009).</li><li>Hossler, F. E., Douglas, J. E., Douglas, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomy+and+morphometry+of+myocardial+capillaries+studied+with+vascular+corrosion+casting+and+scanning+electron+microscopy:+a+method+for+rat+heart.">Anatomy and morphometry of myocardial capillaries studied with vascular corrosion casting and scanning electron microscopy: a method for rat heart.</a> Scan Electron Microsc. , 1469-1475 (1986).</li><li>Hossler, F. E., Douglas, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+Corrosion+Casting:+Review+of+Advantages+and+Limitations+in+the+Application+of+Some+Simple+Quantitative+Methods.">Vascular Corrosion Casting: Review of Advantages and Limitations in the Application of Some Simple Quantitative Methods.</a> Microsc. Microanal. 7, 253-264 (2001).</li><li>Mondy, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Micro-CT+of+corrosion+casts+for+use+in+the+computer-aided+design+of+microvasculature.">Micro-CT of corrosion casts for use in the computer-aided design of microvasculature.</a> Tissue Eng. Part C Methods. 15, 729-738 (2009).</li><li>Masyuk, T. V., Ritman, E. L., LaRusso, N. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+Assessment+of+the+Rat+Intrahepatic+Biliary+System+by+Three-Dimensional+Reconstruction.">Quantitative Assessment of the Rat Intrahepatic Biliary System by Three-Dimensional Reconstruction.</a> The American Journal of Pathology. 158, 2079-2088 (2001).</li><li>Masyuk, T. V., Ritman, E. L., LaRusso, N. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatic+Artery+and+Portal+Vein+Remodeling+in+Rat+Liver:+Vascular+Response+to+Selective+Cholangiocyte+Proliferation.">Hepatic Artery and Portal Vein Remodeling in Rat Liver: Vascular Response to Selective Cholangiocyte Proliferation.</a> The American Journal of Pathology. 162, 1175-1182 (2003).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

وقد وصفت لنا أمثلة محددة عن الكيفية التي يمكن أن يلقي الوريد البابي داخل الكبد والقناة الصفراوية نظم في الكبد، ولكن يمكن تطبيق هذه التقنية لنظام الأقنية الأخرى تقريبا أي تعديلات أو الأوعية الدموية مع طفيفة. وقد أظهرت الأعمال السابقة جدوى هذه التقنية في أنواع متعددة?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> PE10 البولي ايثيلين أنابيب </td><td> فيشر العلمية </td><td> 1417012P </td><td></td></tr><tr><td> 5-0 الجراحية الحرير الأسود مضفر </td><td> Roboz الجراحية </td><td> SUT-15-1 </td><td></td></tr><tr><td> Steriject 32 غرام X 13 ملم إبرة </td><td> الهواء تيتي </td><td> TSK3213 </td><td></td></tr><tr><td> ربيع مقص </td><td> أدوات العلوم الجميلة </td><td> 15000-08 </td><td></td></tr><tr><td> عدد 5 ملقط </td><td> أدوات العلوم الجميلة </td><td> 91150-20 </td><td></td></tr><tr><td> Mercox II طقم </td><td> البحث لاد </td><td> 21247 </td><td></td></tr><tr><td> البنزيل الكحول </td><td> فيشر العلمية </td><td> 1816-1804 </td><td> Oنلي اللازمة لإزالة BABB </td></tr><tr><td> بنزيل بنزوات </td><td> MP Biomedicals، LLC </td><td> 154839 </td><td> المطلوب فقط لإزالة BABB </td></tr><tr><td> الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> النمذجة الطين </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> جدول </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> مختبر مقص </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 15 مل أنابيب البولي بروبلين كاب </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 4٪ paraformaldahyde </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 15٪ هيدروكسيد البوتاسيوم (KOH) </td><td></td><td></td><td> المطلوب فقط لالتعطين </td></tr><tr><td> موس </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 100٪ الميثانول </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 3 مل بالتركيبة قفل حقنة </td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

3-dimensional resin casting and imaging of mouse portal vein or intrahepatic bile duct system

في الهيئات، والهندسة المعمارية الصحيح للهياكل الأوعية الدموية والأقنية لا غنى عنه لمناسبة ظيفة فسيولوجية، وتشكيل وصيانة هذه الهياكل هي عملية عالية التنظيم. ويعتمد تحليل هذه الهياكل المعقدة 3-الأبعاد، إما بصورة كبيرة على الفحص 2-الأبعاد في الفرع أو على حقن صبغة الدراسات. هذه التقنيات، ومع ذلك، ليست قادرة على توفير التمثيل الكامل وقابلة للقياس الكمي للهياكل الأقنية أو الأوعية الدموية وهي تهدف إلى توضيح. بدلا من ذلك، طبيعة الأبعاد 3-يلقي راتنج البلاستيك يولد لقطة الدائمة للمنظومة ورواية وتقنية مفيدة على نطاق واسع لتصور وقياس الأبعاد 3-الهياكل والشبكات. وهناك ميزة حاسمة للنظام الصب الراتنج هو القدرة على تحديد سليمة ومتصلة، أو التواصل وبناء وعاء دموي أو لاصق. هيكل الأوعية الدموية ودوكشبكات تل حاسمة من أجل وظيفة الجهاز، وهذه التقنية لديها القدرة على مساعدة دراسة شبكات الأوعية الدموية والأقنية في عدة طرق. ويمكن استخدام الصب الراتنج لتحليل مورفولوجيا العادي والعمارة الفنية للبنية اللمعية، وتحديد التغييرات تخلقية التنموية، وكشف الاختلافات المورفولوجية في العمارة الأنسجة الطبيعية بين الدول والمرض. وقد استخدمت الأعمال السابقة الصب الراتنج للدراسة، على سبيل المثال، العيوب المعمارية والوظيفية داخل نظام الصفراوية داخل الكبد الماوس القناة التي لم ترد في 2-تحليل الأبعاد 1،2 الهيكل، تغييرات في الأوعية الدموية في المخ لمرض الزهايمر نموذج الفأر 3 ، تشوهات في الوريد البابي بوابة ارتفاع ضغط الدم والتليف الكبدى الفئران 4، الخطوات التنموية في النضج اللمفاوي الفئران غير ناضجة والرئتين بين الكبار 5، تغييرات فورية الاوعية الدموية الدقيقة في كبد الفئران والبنكرياس والكلى واستجابة لإصابة في الكيميائية6. هنا نقدم وسيلة لتوليد يلقي الراتنج الأبعاد 3-شبكة الأوعية الدموية أو الماوس الأقنية، مع التركيز بشكل خاص على الوريد البابي داخل الكبد والقناة الصفراوية. ويمكن تصور هذه يلقي بمسح أو تنقيع الأنسجة ويمكن بعد ذلك تحليل. ويمكن تطبيق هذه التقنية لنظام الأوعية الدموية أو أي تقريبا الأقنية وقابلا للتطبيق مباشرة إلى أي دراسة التساؤل في التنمية، وظيفة، والصيانة، أو إصابة بنية الأبعاد 3-الأقنية أو الأوعية الدموية.

Watch this Scientific Journal Video about 3-Dimensional Resin Casting and Imaging of Mouse Portal Vein or Intrahepatic Bile Duct System at JoVE.com

3-Dimensional Resin Casting and Imaging of Mouse Portal Vein or Intrahepatic Bile Duct System

ووصف طريقة تصور وقياس هيكل 3 الأبعاد للالكبدي الوريد البابي أو الماوس القناة الصفراوية داخل الكبد. ويمكن أيضا هذه التقنية يلقي الراتنج يمكن تطبيقها على غيرها من أنظمة الأقنية أو الأوعية الدموية ويسمح لل<em&gt; في الموقع</em&gt; التصور أو الكمي للبنية سليمة لنظام التواصل.

الأبعاد 3-صب الراتنج والتصوير من الوريد البابي داخل الكبد أو ماوس نظام القناة الصفراوية

In  organs, the correct architecture of vascular and ductal structures is  indispensable for proper physiological function, and the formation and  ...

3-dimensional-resin-casting-imaging-mouse-portal-vein-or-intrahepatic

Research

JoVE Journal

Medicine

17.1K Views.  Vanderbilt University. ووصف طريقة تصور وقياس هيكل 3 الأبعاد للالكبدي الوريد البابي أو الماوس القناة الصفراوية داخل الكبد. ويمكن أيضا هذه التقنية يلقي الراتنج يمكن تطبيقها على غيرها من أنظمة الأقنية أو الأوعية الدموية ويسمح لل في الموقع التصور أو الكمي للبنية سليمة لنظام التو?...

Video: 3-Dimensional Resin Casting and Imaging of Mouse Portal Vein or Intrahepatic Bile Duct System

Modeling and Imaging 3-Dimensional Collective Cell Invasion

A defining characteristic of cancer malignancy is invasion and metastasis 1. In some cancers (e.g. glioma 2), local invasion into surrounding healthy tissue is the root cause of disease and death. For other cancers (e.g. breast, lung, etc.), it is the process of metastasis, in which tumor cells move from a primary tumor mass, colonize distal sites and ultimately contribute to organ failure, that eventually leads to morbidity and mortality 3. It has been estimated that invasion and metastasis are responsible for 90&#37; of cancer deaths 4. As a result, there has been intense interest in identifying the molecular processes and critical protein mediators of invasion and metastasis for the purposes of improving diagnosis and treatment 5.
A challenge for cancer scientists is to develop invasion assays that sufficiently resemble the in vivo situation to enable accurate disease modeling 6. Two-dimensional cell motility assays are only informative about one aspect of invasion and do not take into account extracellular matrix (ECM) protein remodeling which is also a critical element. Recently, research has refined our understanding of tumor cell invasion and revealed that individual cells may move by elongated or rounded modes 7. In addition, there has been greater appreciation of the contribution of collective invasion, in which cells invade in strands, sheets and clusters, particularly in highly differentiated tumors that maintain epithelial characteristics, to the spread of cancer 8.
We present a refined method 9 for examining the contributions of candidate proteins to collective invasion 10. In particular, by engineering separate pools of cells to express different fluorescent proteins, it is possible to molecularly dissect the activities and proteins required in leading cells versus those required in following cells. The use of RNAi provides the molecular tool to experimentally disassemble the processes involved in individual cell invasion as well as in different positions of collective invasion. In this procedure, mixtures of fluorescently-labeled cells are plated on the bottom of a Transwell insert previously filled with Matrigel ECM protein, then allowed to invade "upwards" through the filter and into the Matrigel. Reconstruction of z-series image stacks, obtained by confocal imaging, into three-dimensional representations allows for visualization of collectively invading strands and analysis of the representation of fluorescently-labeled cells in leading versus following positions.

Models of tumor cell invasion into three-dimensional extracellular matrix better reflect the in vivo situation than two-dimensional motility assays. Using matrix invasion assays combined with confocal imaging of fluorescently-labeled cells, detailed information on invasion modes and the distinct contributions of leading versus following cells can be obtained.

النمذجة والتصوير 3 الأبعاد غزو الخلية الجماعية

A defining characteristic of cancer malignancy is invasion and metastasis 1. In some cancers (e.g. glioma 2), local invasion into surrounding healthy ...

Bile Duct Ligation in Mice: Induction of Inflammatory Liver Injury and Fibrosis by Obstructive Cholestasis

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well as to excrete bilirubin and other metabolic products. In the liver, the experimental obstruction of the extrahepatic biliary system initiates a complex cascade of pathological events that leads to cholestasis and inflammation resulting in a strong fibrotic reaction originating from the periportal fields. Therefore, surgical ligation of the common bile duct has become the most commonly used model to induce obstructive cholestatic injury in rodents and to study the molecular and cellular events that underlie these pathophysiological mechanisms induced by inappropriate bile flow. In recent years, different surgical techniques have been described that either allow reconnection or reanastomosis after bile duct ligation (BDL), e.g., partial BDL, or other microsurgical methods for specific research questions. However, the most frequently used model is the complete obstruction of the common bile duct that induces a strong fibrotic response after 21 to 28 days. The mortality rate can be high due to infectious complications or technical inaccuracies. Here we provide a detailed surgical procedure for the BDL model in mice that induce a highly reproducible fibrotic response in accordance to the 3R rule for animal welfare postulated by Russel and Burch in 1959.

Disruption of bile flow results in severe inflammatory cholestatic liver injury with a characteristic time-dependent sequence of morphological alterations. Here we present a protocol for the surgical ligation of the common bile duct in mice that allows to induce a strong fibrotic response after 21 to 28 days.

القناة الصفراوية ربط في الفئران: تحريض التهاب الكبد والتليف الإصابات التي كتبها الانسدادي ركود صفراوي

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well ...

Using Multi-fluorinated Bile Acids and In Vivo Magnetic Resonance Imaging to Measure Bile Acid Transport

Along with their traditional role as detergents that facilitate fat absorption, emerging literature indicates that bile acids are potent signaling molecules that affect multiple organs; they modulate gut motility and hormone production, and alter vascular tone, glucose metabolism, lipid metabolism, and energy utilization. Changes in fecal bile acids may alter the gut microbiome and promote colon pathology including cholerrheic diarrhea and colon cancer. Key regulators of fecal bile acid composition are the small intestinal Apical Sodium-dependent Bile Acid Transporter (ASBT) and fibroblast growth factor-19 (FGF19). Reduced expression and function of ASBT decreases intestinal bile acid up-take. Moreover, in vitro data suggest that some FDA-approved drugs inhibit ASBT function. Deficient FGF19 release increases hepatic bile acid synthesis and release into the intestines to levels that overwhelm ASBT. Either ASBT dysfunction or FGF19 deficiency increases fecal bile acids and may cause chronic diarrhea and promote colon neoplasia. Regrettably, tools to measure bile acid malabsorption and the actions of drugs on bile acid transport in vivo are limited. To understand the complex actions of bile acids, techniques are required that permit simultaneous monitoring of bile acids in the gut and metabolic tissues. This led us to conceive an innovative method to measure bile acid transport in live animals using a combination of proton (1H) and fluorine (19F) magnetic resonance imaging (MRI). Novel tracers for fluorine (19F)-based live animal MRI were created and tested, both in vitro and in vivo. Strengths of this approach include the lack of exposure to ionizing radiation and translational potential for clinical research and practice.

Using Multi-fluorinated Bile Acids and In Vivo Magnetic Resonance Imaging to Measure Bile Acid Transport

Tools to diagnose bile acid malabsorption and measure bile acid transport in vivo are limited. An innovative approach in live animals is described that utilizes combined proton (1H) plus fluorine (19F) magnetic resonance imaging; this novel methodology has translational potential to screen for bile acid malabsorption in clinical practice.

استخدام متعدد المفلورة الأحماض الصفراوية و<em&gt; في فيفو</em&gt; التصوير بالرنين المغناطيسي لقياس الصفراء النقل حمض

Along with their traditional role as detergents that facilitate fat absorption, emerging literature indicates that bile acids are potent signaling ...

Ileectomy-induced Bile Overaccumulation in Mouse Intestine

Intestinal resection is a common therapeutic approach for human diseases such as obesity, inflammatory bowel disease, Crohn's disease, and colon cancer that often results in severe short bowel syndrome-like adverse effects including bile acid diarrhea, dehydration, electrolyte disturbances, and nutrient malabsorption. Here we introduce a murine ileal resection model, termed ileectomy, to evaluate tissue communication and the maintenance of systemic homeostasis. After ileal resection, circulating blood is permanently devoid of the ileum-specific endocrine hormone fibroblast growth factor 15 (FGF15), which releases its endocrinal inhibition of bile acid synthesis in the liver. In combination with the increased production and abolished reabsorption of bile acids after removing the ileum, mice that underwent surgery suffer from bile salt overaccumulation in the intestine and associated diarrhea, morbidity, and mortality. Novel usage of the surgery model introduced in this study may provide mechanistic and functional insights into ileal control of systemic metabolic regulation in physiology and disease.

Small intestine-dependent bile acid reabsorption and feedback inhibition of hepatic bile acid synthesis is important for systemic homeostasis and health. In this study, we describe a mouse model for ileal resection to evaluate ileectomy-induced bile malabsorption, overaccumulation, and toxicity in mouse intestine.

أوفيراككوموليشن الناجمة عن إيليكتومي الصفراوية في الأمعاء الماوس

Intestinal resection is a common therapeutic approach for human diseases such as obesity, inflammatory bowel disease, Crohn's disease, and colon cancer ...

Ablation of Ischemic Ventricular Tachycardia Using a Multipolar Catheter and 3-dimensional Mapping System for High-density Electro-anatomical Reconstruction

Ventricular tachycardia (VT) in patients with ischemic cardiomyopathy mainly results from endocardial scars after myocardial infarction; those scars represent zones of slow conduction that allow the occurrence and maintenance of reentrant circuits. Catheter ablation enables substrate modification of those low voltage areas and thus can help to alter the scar tissue in such a way that arrhythmias cannot appear anymore. Hospitalizations of concerned patients decrease, quality of life and outcome rise. Consequently, VT ablation represents a growing field in electrophysiology, especially for patients with endocardial scars in ischemic heart disease after myocardial infarction. However, ablation of ventricular tachycardia remains one of the most challenging procedures in the electrophysiology lab. Precise scar definition and localization of abnormal potentials are critical for ablation success. The following manuscript describes the use of a multipolar mapping catheter and 3-dimensional (3D) mapping system to create a high density electro-anatomical map of the left ventricle including a precise scar representation as well as mapping of fractionated and late potentials in order to allow a highly accurate substrate modification.

With the following protocol, we provide an approach to Ventricular Tachycardia (VT) ablation using high density mapping with a multipolar catheter and 3D mapping system enhancing the success of the procedure.

الاجتثاث خفقان البطين الدماغية باستخدام القسطرة متعدد الأقطاب ونظام رسم خرائط ثلاثية الأبعاد للتعمير الكهربائية التشريحية عالي الكثافة

Ventricular tachycardia (VT) in patients with ischemic cardiomyopathy mainly results from endocardial scars after myocardial infarction; those scars ...

Laser Doppler Perfusion Imaging in the Mouse Hindlimb

Blood flow recovery is a critical outcome measure after experimental hindlimb ischemia or ischemia-reperfusion. Laser Doppler perfusion imaging (LDPI) is a common, noninvasive, repeatable method for assessing blood flow recovery. The technique calculates overall blood flow in the sampled tissue from the Doppler shift in frequency caused when a laser hits moving red blood cells. Measurements are expressed in arbitrary perfusion units, so the contralateral non-intervened upon leg is usually used to help control measurements. Measurement depth is in the range of 0.3-1 mm; for hindlimb ischemia, this means that dermal perfusion is assessed. Dermal perfusion is dependent on several factors&#8212;most importantly skin temperature and anesthetic agent, which must be carefully controlled to result in reliable readings. Furthermore, hair and skin pigmentation can alter the ability of the laser to either reach or penetrate to the dermis. This article demonstrates the technique of LDPI in the mouse hindlimb.

Here, we present a protocol that demonstrates the technique and necessary controls for Laser Doppler perfusion imaging to measure blood flow in the mouse hindlimb.

الليزر دوبلر Perfusion التصوير في هندليمب الماوس

Blood flow recovery is a critical outcome measure after experimental hindlimb ischemia or ischemia-reperfusion. Laser Doppler perfusion imaging (LDPI) is ...

A Mouse Model for Chronic Pancreatitis via Bile Duct TNBS Infusion

Chronic pancreatitis (CP) is a complex disease involving pancreatic inflammation and fibrosis, glandular atrophy, abdominal pain and other symptoms. Several rodent models have been developed to study CP, of which the bile duct 2,4,6 -trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS) infusion model replicates the features of neuropathic pain seen in CP. However, bile duct drug infusion in mice is technically challenging. This protocol demonstrates the procedure of bile duct TNBS infusion for generation of a CP mouse model. TNBS was infused into the pancreas through the ampulla of Vater in the duodenum. This protocol optimized drug volume, surgical techniques, and drug handling during the procedure. TNBS-treated mice showed features of CP as reflected by bodyweight and pancreas weight reductions, changes in pain-associated behaviors, and abnormal pancreatic morphology. With these improvements, mortality associated with TNBS injection was minimal. This procedure is not only critical in generating pancreatic disease models but is also useful in local pancreatic drug delivery.

Chronic pancreatitis (CP) is a disease characterized by inflammation and fibrosis of the pancreas, often associated with intractable abdominal pain. This article focuses on refining the technique to generate a mouse model of CP via bile duct infusion with 2,4,6 -trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS).

نموذج الماوس لالتهاب البنكرياس المزمن عن طريق ضخ القناة الصفراوية TNBS

Chronic pancreatitis (CP) is a complex disease involving pancreatic inflammation and fibrosis, glandular atrophy, abdominal pain and other symptoms. ...

Minimizing Post-Infusion Portal Vein Bleeding during Intrahepatic Islet Transplantation in Mice

Although the liver is currently accepted as the primary transplantation site for human islets in clinical settings, islets are transplanted under the kidney capsule in most rodent preclinical islet transplantation studies. This model is commonly used because murine intrahepatic islet transplantation is technically challenging, and a high percentage of mice could die from surgical complications, especially bleeding from the injection site post-transplantation. In this study, two procedures that can minimize the incidence of post-infusion portal vein bleeding are demonstrated. The first method applies an absorbable hemostatic gelatin sponge to the injection site, and the second method involves penetrating the islet injection needle through the fat tissue first and then into the portal vein by using the fat tissue as a physical barrier to stop bleeding. Both methods could effectively prevent bleeding-induced mouse death. The whole liver section showing islet distribution and evidence of islet thrombosis post-transplantation, a typical feature for intrahepatic islet transplantation, were presented. These improved protocols refine the intrahepatic islet transplantation procedures and may help laboratories set up the procedure to study islet survival and function in pre-clinical settings.

Here we present refined surgical procedures on successfully performing intraportal islet transplantation, a clinically relevant but technically challenging surgical procedure, in mice.

تقليل نزيف الوريد البابي بعد التسريب أثناء زراعة الجزر داخل الكبد في الفئران

Although the liver is currently accepted as the primary transplantation site for human islets in clinical settings, islets are transplanted under the ...

DUCT: Double Resin Casting followed by Micro-Computed Tomography for 3D Liver Analysis

The liver is the biggest internal organ in humans and mice, and high auto-fluorescence presents a significant challenge for assessing the three-dimensional (3D) architecture of the organ at the whole-organ level. Liver architecture is characterized by multiple branching lumenized structures, which can be filled with resin, including vascular and biliary trees, establishing a highly stereotyped pattern in the otherwise hepatocyte-rich parenchyma. This protocol describes the pipeline for performing double resin casting micro-computed tomography, or &#34;DUCT&#34;. DUCT entails injecting the portal vein and common bile duct with two different radiopaque synthetic resins, followed by tissue fixation. Quality control by clearing one lobe, or the entire liver, with an optical clearing agent, allows for pre-screening of suitably injected samples. In the second part of the DUCT pipeline, a lobe or the whole liver can be used for micro-computed tomography (microCT) scanning, (semi-)automated segmentation, and 3D rendering of the portal venous and biliary networks. MicroCT results in 3D coordinate data for the two resins allowing for qualitative as well as quantitative analysis of the two systems and their spatial relationship. DUCT can be applied to postnatal and adult mouse liver and can be further extended to other tubular networks, for example, vascular networks and airways in the lungs.

Double resin casting micro-computed tomography, or DUCT, enables visualization, digitalization, and segmentation of two tubular systems simultaneously to facilitate 3D analysis of organ architecture. DUCT combines ex vivo injection of two radiopaque resins followed by micro-computed tomography scanning and segmentation of the tomographic data.

DUCT: الصب الراتنج المزدوج تليها التصوير المقطعي المحوسبة الدقيقة لتحليل الكبد 3D

The liver is the biggest internal organ in humans and mice, and high auto-fluorescence presents a significant challenge for assessing the ...

Extrahepatic Bile Duct and Gall Bladder Dissection in Nine-Day-Old Mouse Neonates

The dissection of murine neonatal bile ducts has been described as difficult. The main aim of the described standard operating procedure is the isolation of the extrahepatic bile duct (EBD) in mouse neonates without damaging the bile duct during preparation. Because of its exceptionally close preparation compared to the cholangiocytes cell line and harvesting of the entire extrahepatic bile duct system (EBDS), the described approach is extremely useful in researching animal models of newborn bile duct disorders, such as biliary atresia. After euthanasia, the peritoneal cavity was accessed, and the bile duct system, duodenum, and liver were extracted with the unique En-bloc-Resection (EbR). The extracted sample is placed on a foam mat, and the EBD is dissected from contaminating cells atraumatically without necessary touch. The dissection of the entire EBDS is a significant advantage of this method. Caution must be taken due to the small size and amount of bile duct tissue. Using the described technique, there is no damage to the cholangiocytes. Further, the purity of the technique is reproducible (n = 10). Therefore, optimally comparable samples can be harvested. Furthermore, no bile duct tissue is harmed, because any contact with the bile duct system can be avoided during preparation, leaving the bile fluid inside the gall bladder. Most importantly, while performing the final gall bladder and bile duct dissection, atraumatic microinstruments were used only slightly lateral of the bile duct without squeezing it. This is the key to a clean and intact sample, and essential for further histological investigation or the isolation of cholangiocytes. To summarize, the described innovative dissection technique enables especially inexperienced operators with the necessary equipment to isolate the EBDS as cleanly as possible.

For the observation of murine neonatal bile duct disorders, an intact bile duct and efficient preparation are required. Therefore, a new approach for isolating the entire extrahepatic bile duct system in murine neonates was successfully developed while maintaining the integrity of the bile duct.

القناة الصفراوية خارج الكبد وتسلخ المرارة في حديثي الولادة في الفأر البالغ من العمر تسعة أيام

The dissection of murine neonatal bile ducts has been described as difficult. The main aim of the described standard operating procedure is the isolation ...