يعطي هذا البروتوكول إرشادات دقيقة خطوة بخطوة لصب الأوعية الدموية الشريانية الرئوية في كل من فئران البالغين وفيما بعد الولادة المبكرة. هذه التقنية تمكن المستخدمين من إلقاء كامل شبكة الأوعية الدموية للتصور من خلال مجموعة متنوعة من الأساليب، بما في ذلك الأشعة المقطعية الدقيقة، مع الحفاظ على سلامة الأنسجة الرخوة. هذه التقنية مفيدة بشكل خاص للنظر في مورفولوجيا الأوعية الدموية الرئوية والهندسة المعمارية ، ولكن يمكن تكييفها بسهولة لاستهداف الأسرة الوعائية الأخرى.
مثل العديد من العمليات الجراحية والتشريح ، لا يوجد بديل عن تصور الإجراء في الواقع ، وقد يستفيد المشاهدون من رؤية بعض المناورات الأكثر تحديًا التي يتم تنفيذها. مرة واحدة في عملية xiphoid هو مكشوف، فهم بلطف ورفع القفص الصدري. جعل بعناية شق في الآن المكشوفة، والحجاب شبه شفافة.
سوف تنهار الرئة بشكل واضح، وتتراجع عن الحجاب الحاجز. بعد تعريض الرئة والقصبة الهوائية، خيط 15 سم من أنابيب PE10 على محور إبرة قياس 30. واربط هذه الوحدة بحقنة مليلتر واحدة تحتوي على 10 إلى 4 قنينة الصوديوم في برنامج تلفزيوني
تقدم المكبس إلى رئيس الأنابيب حتى تم تطهير كل من الهواء. كبديل فعال للنص، اختراق قمة القلب على جانب واحد، وتمرير نصائح من ملقط منحنية من خلال العضلات، والخروج من الجانب الآخر من الأنسجة. استوعب أحد طرفي طول 10 سنتيمترات من 7-0 حرير، واسحب ما يقرب من سنتيمترين من خلال الأنسجة.
بعد سحب قبالة خياطة، واستخدام ثمانية سنتيمترات المتبقية من خياطة لسحب القلب caudally. وشرّف نهاية الغرزة إلى اللوحة الجراحية ربط نصائح من ملقط منحنية تحت كل من الشريان الأورطي التصاعدي وجذع الشريان الرئوي.
وسحب طول ثلاثة سنتيمترات من 7-0 الحرير مرة أخرى من خلال فتح لخلق خياطة فضفاضة رمية واحدة. استخدم المقص لإجراء شق من ملليمتر إلى ملليمترين باتجاه قمة القلب، واختراق البطين الأيمن ذو الجدران الرقيقة. وإدخال الأنابيب المُعَدّة في البطين الأيمن، والنهوض بالقسطرة برفق إلى جذع الشريان الرئوي شبه الشفاف، ورقي الجدران.
تحقق بصرياً من أن القسطرة لم تتقدم في الفروع الرئوية اليسرى أو اليمنى، ولا تُثبِت نقطة فرع الشريان الرئوي. الشريط الجزء من أنابيب اشرطة إلى المجلس الجراحي، وتشديد بلطف خياطة فضفاضة حول كل من السفن كبيرة. قطع قطعة من خياطة ثمانية سنتيمترات لإعادة القلب إلى وضعية الراحة الطبيعية.
وقصة أوراكل اليسار من القلب للسماح للثقب للخروج من الأوعية الدموية. ثم، استخدام مضخة حقنة، لبث نيتروبيوسسايد الصوديوم في معدل تدفق 0.5 مل/دقيقة إلى كل من تدفق الدم، وإلى أقصى حد تمدد الأوعية الدموية، حتى perfusate يعمل واضحة. لبناء وحدة تضخم الرئة، وقطع البلاستيك مرنة 24 قياس القسطرة الوريدية من الحوض والاتصال بإبرة مجموعة ضخ فراشة.
أرفق هذه الوحدة بالـ(ستوكوك) وأرفق الـ(ستوكوك) بحقنة مفتوحة بـ50 ملليلتر بعد تحميل الحقنة مع formalin و فتيلة القسطرة ، مع stopcock مغلقة ، ضع الحقنة في موقف حلقة ، إلى النقطة التي يكون فيها الغضروف المفصلي 20 سنتيمترًا فوق القصبة الهوائية. ضع خياطة فضفاضتين ، وبصرف النظر عن اثنين إلى أربعة ملليمترات ، أقل شأنًا من الغضروف المكروق ، واستخدم المقص لإجراء شق صغير في الرباط الزدري ، متفوقًا على الغرز.
أدخل القسطرة في الفتحة، وتقدم الطرف إلى ما وراء الغرزين الفضفاضين. تشديد الغرز حول القصبة الهوائية، وفتح stopcock للسماح للفورمين لدخول الرئتين عن طريق الجاذبية. انتظر خمس دقائق حتى تنتفخ الرئتين بشكل كامل.
إذا كانت الرئتين تلتصق القفص الصدري أثناء التضخم، استخدم ملقطًا غير مُبَرَّحًا لفهم الجزء الخارجي من القفص الصدري، وتحريك الأضلاع في جميع الاتجاهات للمساعدة في تحرير الفصوص دون إجراء اتصال مباشر مع الرئتين. بعد خمس دقائق، تراجع القسطرة وراء أول خياطة وligate. ثم تراجع القسطرة وراء خياطة الثانية وligate.
يجب أن تكون الرئتين الآن مضخمة في حالة مغلقة مضغوطة. لإلقاء الأوعية الدموية، تحميل ملليلتر واحد من محلول 8-1-1 من البوليمر وكيل علاج في حقنة ملليلتر واحد. وأدخل بعناية المكبس.
مع حقنة مقلوب، والاكتئاب المكبس لإزالة الهواء، والسماح لتشكيل الغضروف المفصلي في غيض من الحقنة. إزالة حقنة nitroprusside الصوديوم من محور الإبرة، والتنقيط برنامج تلفزيوني إضافة في المحور، لإنشاء الغضروف المفصلي. انضم إلى حقنة مركب البوليمر إلى المحور، وابدأ ضخ في 0.02 ملليمتر في الدقيقة.
مراقبة المجمع كما يتحرك بحرية من خلال الأنابيب، مشيرا إلى حجم الحقنة كما يدخل جذع الشريان الرئوي. مواصلة الإسراف حتى يتم ملء جميع الفصوص تماما، وصولا الى أصغر وعاء. وقف المضخة، ومرة أخرى، لاحظ حجم الحقنة.
تغطية الرئتين مع مسح تنظيف الألياف البصرية، وتطبيق برنامج تلفزيوني بتحرر. السماح للعينة للجلوس دون عائق لمدة 30 إلى 40 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. مرة واحدة يتم الشفاء من مركب البوليمر وتصلب، وقطع الأطراف ونصف أقل من الماوس.
ووضع الرأس والصدر في 50 ملليلتر مخروطي شغلها 10٪ buffered formalin، بين عشية وضحاها. في صباح اليوم التالي، فهم القصبة الهوائية لفصل بلطف وحدة القلب والرئة من القفص الصدري المتبقية والصدر. ضع كتلة الأنسجة المحصودة في قارورة متألقة مملوءة بالفورمينين.
سوف يؤدي نجاح المدلى بها في ملء موحدة من شبكة الشرايين الرئوية بأكملها. إذا كان هناك تلف في الرئة أو الرئة المسالك الهوائية، فإن التسريبات الصغيرة تمنع الرئتين من الضغط. يمكن أن تنشأ الحشوة غير المكتملة أو غير المكتملة من قفل هوائي نتيجة إدخال الهواء إلى نظام الأوعية الدموية عن طريق القسطرة ، مما يمنع تدفق المصب للمجمع.
يحدث Underfilling عندما يتم إدخال مركب صغير جدا في الأوعية الدموية. بدلا من ذلك، الملء الزائد، أو إدخال الكثير من مركب البوليمر بسرعة كبيرة جدا، يمكن أن يسبب تمزق الشرايين، أو، أكثر شيوعا، العبور الوريدي. يمكن أن يؤدي تقدم القسطرة إلى أسفل الجذع الرئوي إلى حدوث إسفين في أحد فروع الشريان الرئوي، مما يخلق خللًا في التدفق، ويتسبب في تعبئة أحد الجانبين أسرع من الآخر.
أداء دقيق لهذه التقنية كما هو موضح، وذلك باستخدام الرصد المباشر المناسب لنقاط نهاية الأوعية الدموية، ومعدلات التسريب القياسية يمكن أن يؤدي إلى ملء الأمثل من الأوعية الدموية الرئوية. وعلاوة على ذلك، يمكن تكييف هذه التقنية مع الأوعية الدموية النظامية تسفر عن نتائج مواتية على قدم المساواة في الأسرة الوعائية الأخرى. بعد الصب، يمكن معالجة العينات لمسح التصوير المقطعي المحوسبة الدقيقة.
بالنسبة للمعالجة اللاحقة، يمكن استخدام حزمة برامج تجارية لإنشاء حجم ثلاثي الأبعاد لشجرة الأوعية الدموية الرئوية. عند محاولة هذه التقنية للمرة الأولى، كن حذراً بشكل خاص حول الرئتين الهشة والشريان الرئوي. الأهم من ذلك، تجنب إدخال الهواء في الدائرة الوعائية.
بعد نجاح المدلى بها، يمكن مسح عينة بواسطة الأشعة المقطعية الدقيقة، ويمكن استكشاف الأسئلة التي تنطوي على morphometry الأوعية الدموية والهندسة المعمارية.
