وأيد هذه الدراسة من قبل جزئيا NIH منحة RO1NS053407 لتشانغ JH. نود أن نشكر السيد دامون Klebe لمساهماته القيمة.

وأجريت كافة الإجراءات وفقا لدليل المعاهد الوطنية للصحة لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية والتي وافقت عليها اللجنة ورعاية الحيوان في الاستخدام لوما ليندا جامعة. 1. سابق للجراحة الاستعدادات ويوصى التقنيات العقيم لجميع العمليات الجراحية. تطهير جهاز المجسم وإعداد الأدوات الجراحية المعقمة قبل الجراحة. ارتداء معدات الوقاية الشخصية (PPE) خلال جميع التعامل مع الحيوانات. استخدام وسادة التدفئة أثناء الجراحة للحفاظ على درجة حرارة الجسم الحيوان الفسيولوجية. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وزن الماوس الأسبوع 8-12 القديمة باستخدام حيوان شعاع ثلاثية النطاق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شارك في حقن الكيتامين (100 ملغ / كغ) وزيلازين (10 ملغ / كغ) الغشاء البريتونى ثم السماح 7-10 دقيقة للتخدير نافذة المفعول (راصد لتخدير كاف). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع الماوس على بطانية الحرارية ويحلق فروة الرأس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق مرهم عيني لكلتا العينين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأمينالهوائية، وذلك بلطف تتحرك أفقيا اللسان، وتأمين بعناية رئيس الماوس، على جهاز المجسم. ملاحظة: يجب أن تكون آمنة وأفقيا لرئيس أساس الإطار المجسم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطهير المنطقة الجراحية مع Betadine، وشطف مع الايثانول 70٪. كرر بالتناوب تطبيقات Betadine والإيثانول 70٪ ليصبح المجموع ثلاث مرات. ويمكن استخدام القطن ذات الرؤوس تطبيقها لهذا الغرض. </li></ol> 2. حقن الدم الموديل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل شق خط الوسط 1 سم من فروة الرأس طويلة مع شفرة مشرط رقم 10. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام القطن ذات الرؤوس تطبيقها لمسح بعيدا الأنسجة الرخوة التي تغطي الجمجمة، من أجل فضح نقطة تقاطع عمودي من الدرز الإكليلي والسهمي (bregma). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحميل حقنة هاميلتون (250 ميكرولتر) على مضخة الحقن، وتوجيه الإبرة stereotaxically (26 مقياس) على bregma. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المقبل، وضبط الأسلحة تتلاعب المجسم لوضع إبرة 0.2 ملم الأمامي و 2مم أفقيا إلى اليمين. في هذه الإحداثيات جعل ثقب صغير في الجمجمة لدغ، وذلك باستخدام الحفر متغيرة السرعة مع مثقاب 1 مم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعليق ذيل الحيوان وتطهير السطح السفلي مع الايثانول 70٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثقب الشريان الذيل المركزية بإبرة معقمة (مثل قياس 26) وجمع الدم في الشرايين في أنبوب شعري وunheparinized. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الدم بسرعة من الأنبوب الشعري في برميل كوب من الحقنة هاميلتون، ثم إدراج المكبس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أعد الآن 30 ميكرولتر أو أكثر من الدم الشرياني يحتوي على حقنة هاميلتون في مضخة حقن ويدخل الإبرة (مع قدرتها مشطوف التي تواجه خياطة السهمي) من خلال ثقب فقط حتى لدغ شطبة لها لم يعد مرئيا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> من هذا التقدم نقطة الإبرة 3 مم بطنيا وحقن 5 ميكرولتر من الدم الذاتي بمعدل من 2 ميكرولتر / دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد الانتهاء من الحقن الأولى قبل الإبرة 0.7 مم كذلك في العمق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انتظر5 دقائق ثم 25 حقن ميكرولتر من الدم إلى الجسم المخطط الصحيح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وعند الانتهاء من الحقنة الثانية، وترك المنصب لمدة إبرة في 10 دقيقة إضافية، قبل سحبه بمعدل 1 ملم / دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ختم بالشمع لدغ حفرة العظم وخياطة الجلد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتسكين بعد العملية الجراحية لضخ 0.05 مغ / كغ من البوبرينورفين تحت الجلد في مرحلة ما قبل حرارة السوائل (ملحي). </li></ol> 3. كولاجيناز حقن الموديل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد التحضيرات سابق للجراحة، كرر الخطوات من 1-4 كما هو موضح لدماء نموذج الحقن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملء المحاقن هاميلتون (10 ميكرولتر) مع 0.075U من كولاجيناز (المطثية) البكتيرية VII-S حل في 0.5 ميكرولتر من المياه المالحة. تجنب تشكيل فقاعات الهواء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أعد حقنة هاميلتون على ضخ الحقن وإدخال إبرة (26 مقياس)، من خلال ثقب فقط حتى لدغ شطبة لها لم يعد مرئيا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دفع إبرة 3.7 ملم بطنيا وحقن 0.075U من كولاجيناز طn لفي المخطط حق بمعدل من 2 ميكرولتر / دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وعند الانتهاء من الحقن، وترك المنصب لمدة إبرة في 10 دقيقة إضافية، قبل سحبه بمعدل 1 ملم / دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ختم بالشمع لدغ حفرة العظم وخياطة الجلد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن 0.05 مغ / كغ من البوبرينورفين تحت الجلد في السوائل بعد الجراحة قبل تحسنت. </li></ol> 4. عملية الشام <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد التحضيرات سابق للجراحة، كرر الخطوات من 1-4 كما هو موضح لدماء نموذج الحقن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أدخل الإبرة (26 مقياس) 3.7 مم بطنيا من خلال ثقب لدغ. ينبغي أن تظل في موقف إبرة لمدة 10 دقيقة قبل أن يتم سحب بمعدل 1 ملم / دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ختم بالشمع لدغ حفرة العظم وخياطة الجلد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن 0.05 مغ / كغ من البوبرينورفين تحت الجلد في السوائل بعد الجراحة قبل تحسنت. </li></ol> 5. ممثل النتائج نزف intrastriatal التجريبية تثير المورفولوجية كماكذلك التغيرات السلوكية في القوارض. ويمكن تقييم هذه التغييرات لضمان التنفيذ الملائم للإجراءات، أو للتحقيق في الآثار المترتبة على العلاجات المحتملة. توليد تنزف في منطقة الدماغ المستهدفة (مثل العقد القاعدية) هي الأكثر أهمية لنهج استنساخه، ويمكن التحقق من أقسام الدماغ على جسيم أو الملون تشريحيا (الشكل 1-2). إصابة لنتائج العقد القاعدية في العجز الحسية، والتي يمكن كميا عن طريق التقييمات السلوكية المختلفة. وأظهرت نتائج الاختبار الزاوية بدوره أنه بعد ICH في الجانب الأيمن التجريبية والفئران تحولت بشكل ملحوظ في كثير من الأحيان ipsilaterally وبعيدا عن الجانب (اليسار) ضعف المقابل، من يعمل الشام الحيوانات في 24 و 72 ساعة بعد الجراحة (الشكل 3 A). وعلاوة على ذلك، فإن القدرة على وضع وافية ضعف (إلى اليسار) على سطح forelimb، بعد التحفيز vibrissae، تم تقييم الاختبار عن طريق وضع forelimb. في 24 و 72 ساعة بعد الجراحة، دون الفئرانjected إلى الجانب الأيمن ICH أظهرت مواضع أقل بكثير من الحيوانات الشام تعمل. وكثيرا ما يستخدم قياس ذمة الدماغ لتحديد مدى إصابة الدماغ بعد ICH التجريبية. الحقن داخل المخ من الدم الذاتي (30 ميكرولتر) أو كولاجيناز البكتيرية (0.075 U) أدى إلى زيادة كبيرة في محتوى الماء في المخ في القشرة المماثل والعقد القاعدية في 24 (الشكل 4 أ) و 72 ساعة (الشكل 4 B) بعد الجراحة ( مقارنة الشام). وأظهرت نتائج الاختبارات السلوك (الشكل 3) ومدى وذمة الدماغ (الشكل 4) لا فرق بين الدم والحقن نماذج كولاجيناز في مجلدات معينة. <img alt="الشكل 1" src="/files/ftp_upload/4289/4289fig1.jpg" /> الشكل 1. ICH النمذجة في الفئران. (A) والتخطيطي مبسطة من الدماغ الاكليلية 0،2 مم الباب الأمامي للbregma يوضح العلاقات العامةoposed موقع أو حقن الدم الذاتي كولاجيناز. تم وضع علامة LV بطين الوحشي. وحدة المعالجة المركزية لتقف على المذنبة-putamen، وهي جزء من المخطط، وتحدد GP الشاحبة غلوبوس. على حد سواء، والجسم المخطط وكذلك الشاحبة غلوبوس تنتمي إلى مجموعة فرعية القشرية النوى، والمعروف أيضا باسم العقد القاعدية. (B) صورة مجهرية من الممثل الأمامي الدماغ الاكليلية 0.2mm قسم bregma، التي تم الحصول عليها في 24 ساعة بعد الحقن intrastriatal ذاتي من الدم الكامل. <img alt="الشكل 2" src="/files/ftp_upload/4289/4289fig2.jpg" /> الشكل 2. مظاهر نسيجية للورم دموي. الممثل hematoxylin و eosin (H &amp; E) cryosection الاكليلية الملون (10 ميكرون) من مخ الفأر، وهو ما يدل على حجم الورم الدموي 24 ساعة بعد الحقن intrastriatal من كولاجيناز البكتيرية (0.075 U). LH = اليسار نصف الكرة، RH = النصف الأيمن. &lt;<html> IMG ALT = &quot;الشكل 3&quot; SRC = &quot;/ files/ftp_upload/4289/4289fig3.jpg&quot; /&gt; الشكل 3. تقييم Neurofunctional بعد ICH التجريبية في الفئران. تسبب حقن الدم الذاتي Intrastriatal من (30 ميكرولتر) أو كولاجيناز البكتيرية (0.075 U) العجز neurofunctional استنساخه. (A) وأظهرت الفئران بعد ICH التجريبية يتحول بشكل ملحوظ أكثر من حق الحيوانات الشام تعمل في 24 و 72 ساعة بعد الجراحة. أضطرب (B) القدرة Forepaw وضع الطرف الأيسر من بعد ICH في 24 و 72 ساعة بعد الجراحة. وأعرب عن القيم يعني ± SEM كما وتحليلها مع كروسكال واليس تحليل طريقة، واحدة من الفرق على المراكز، تليها الطريقة على الطلاب نيومان Keuls. واعتبر AP قيمة &lt;0.05 ذات دلالة إحصائية، ن = 6-12 لكل مجموعة، * P &lt;0.05 مقارنة مع الشام. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/4289/4289fig3large.jpg" target="_blank">اضغط هنا لمشاهدتها بشكل اكبر شخصية</a> . igure 4 &quot;SRC =&quot; / files/ftp_upload/4289/4289fig4.jpg &quot;/&gt; الشكل 4. تقييم المحتوى المائي الدماغ بعد ICH التجريبية في الفئران. الدماغي الداخلي حقن الدم الذاتي (30 ميكرولتر) أو كولاجيناز البكتيرية (0.075 U) أدت إلى زيادة كبيرة في محتوى الماء في المخ في القشرة المماثل والعقد القاعدية في 24 (A) والموارد البشرية 72 (B) بعد ICH-التعريفي. وأعرب عن القيم يعني ± SEM كما وتحليلها مع تحليل طريقة واحدة من الفرق، تليها اختبار توكي مخصصة آخر. واعتبر AP قيمة &lt;0.05 ذات دلالة إحصائية، ن = 6-10 لكل مجموعة، * P &lt;0.05 مقارنة مع الشام. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/4289/4289fig4large.jpg" target="_blank">اضغط هنا لمشاهدتها بشكل اكبر شخصية</a> .

<ol>
	<li>Broderick, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+the+management+of+spontaneous+intracerebral+hemorrhage:+A+statement+for+healthcare+professionals+from+a+special+writing+group+of+the+Stroke+Council,+American+Heart+Association.">Guidelines for the management of spontaneous intracerebral hemorrhage: A statement for healthcare professionals from a special writing group of the Stroke Council, American Heart Association.</a> Stroke. 30, 905-915 (1999).</li><li>Qureshi, A. I., Mendelow, A. D., Hanley, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracerebral+haemorrhage.">Intracerebral haemorrhage.</a> Lancet. 373, 1632-1644 (2009).</li><li>MacLellan, C. L., Silasi, G., Auriat, A. M., Colbourne, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+intracerebral+hemorrhage.">Rodent models of intracerebral hemorrhage.</a> Stroke. 41, 95-98 (2010).</li><li>James, M. L., Warner, D. S., Laskowitz, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+models+of+intracerebral+hemorrhage:+a+translational+perspective.">Preclinical models of intracerebral hemorrhage: a translational perspective.</a> Neurocrit Care. 9, 139-152 (2008).</li><li>MacLellan, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracerebral+hemorrhage+models+in+rat:+comparing+collagenase+to+blood+infusion.">Intracerebral hemorrhage models in rat: comparing collagenase to blood infusion.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 28, 516-525 (2008).</li><li>Belayev, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+intracerebral+hemorrhage+in+the+mouse:+histological,+behavioral,+and+hemodynamic+characterization+of+a+double-injection+model.">Experimental intracerebral hemorrhage in the mouse: histological, behavioral, and hemodynamic characterization of a double-injection model.</a> Stroke. 34, 2221-2227 (2003).</li><li>Clark, W., Gunion-Rinker, L., Lessov, N., Hazel, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Citicoline+treatment+for+experimental+intracerebral+hemorrhage+in+mice.">Citicoline treatment for experimental intracerebral hemorrhage in mice.</a> Stroke. 29, 2136-2140 (1998).</li><li>Nakamura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracerebral+hemorrhage+in+mice:+model+characterization+and+application+for+genetically+modified+mice.">Intracerebral hemorrhage in mice: model characterization and application for genetically modified mice.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 24, 487-494 (2004).</li><li>Schallert, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+tests+for+preclinical+intervention+assessment.">Behavioral tests for preclinical intervention assessment.</a> NeuroRx. 3, 497-504 (2006).</li><li>Hartman, R., Lekic, T., Rojas, H., Tang, J., Zhang, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+functional+outcomes+following+intracerebral+hemorrhage+in+rats.">Assessing functional outcomes following intracerebral hemorrhage in rats.</a> Brain Res. 1280, 148-157 (2009).</li><li>Hua, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+tests+after+intracerebral+hemorrhage+in+the+rat.">Behavioral tests after intracerebral hemorrhage in the rat.</a> Stroke. 33, 2478-2484 (2002).</li><li>Tang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mmp-9+deficiency+enhances+collagenase-induced+intracerebral+hemorrhage+and+brain+injury+in+mutant+mice.">Mmp-9 deficiency enhances collagenase-induced intracerebral hemorrhage and brain injury in mutant mice.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 24, 1133-1145 (2004).</li><li>Ma, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+adhesion+protein-1+inhibition+provides+antiinflammatory+protection+after+an+intracerebral+hemorrhagic+stroke+in+mice.">Vascular adhesion protein-1 inhibition provides antiinflammatory protection after an intracerebral hemorrhagic stroke in mice.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. , (2010).</li><li>Bullock, R., Mendelow, A. D., Teasdale, G. M., Graham, D. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracranial+haemorrhage+induced+at+arterial+pressure+in+the+rat.+Part+1:+Description+of+technique,+ICP+changes+and+neuropathological+findings.">Intracranial haemorrhage induced at arterial pressure in the rat. Part 1: Description of technique, ICP changes and neuropathological findings.</a> Neurol Res. 6, 184-188 (1984).</li><li>Yang, G. Y., Betz, A. L., Chenevert, T. L., Brunberg, J. A., Hoff, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+intracerebral+hemorrhage:+relationship+between+brain+edema,+blood+flow,+and+blood-brain+barrier+permeability+in+rats.">Experimental intracerebral hemorrhage: relationship between brain edema, blood flow, and blood-brain barrier permeability in rats.</a> J. Neurosurg. 81, 93-102 (1994).</li><li>Rosenberg, G. A., Mun-Bryce, S., Wesley, M., Kornfeld, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collagenase-induced+intracerebral+hemorrhage+in+rats.">Collagenase-induced intracerebral hemorrhage in rats.</a> Stroke. 21, 801-807 (1990).</li><li>Alkayed, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gender-linked+brain+injury+in+experimental+stroke.">Gender-linked brain injury in experimental stroke.</a> Stroke. 29, 159-165 (1998).</li><li>Saha, J. K., Xia, J., Grondin, J. M., Engle, S. K., Jakubowski, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+hyperglycemia+induced+by+ketamine/xylazine+anesthesia+in+rats:+mechanisms+and+implications+for+preclinical+models.">Acute hyperglycemia induced by ketamine/xylazine anesthesia in rats: mechanisms and implications for preclinical models.</a> Exp Biol Med. (Maywood). 230, 777-784 (2005).</li><li>Fujiwara, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+normobaric+oxygen+therapy+in+a+rat+model+of+intracerebral+hemorrhage.">Effect of normobaric oxygen therapy in a rat model of intracerebral hemorrhage.</a> Stroke. 42, 1469-1472 (2011).</li><li>Khatibi, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isoflurane+posttreatment+reduces+brain+injury+after+an+intracerebral+hemorrhagic+stroke+in+mice.">Isoflurane posttreatment reduces brain injury after an intracerebral hemorrhagic stroke in mice.</a> Anesth Analg. 113, 343-348 (2011).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

نماذج حيوانية من نزيف داخل المخ (ICH) يسهم إلى حد كبير في فهم الفيزيولوجيا المرضية متقدمة من المرض، وتستخدم عادة لتطوير وتقييم استراتيجيات علاجية جديدة في محيط قبل السريرية. حقن الدم الذاتي من Intraparenchymal أو البكتيرية هي كولاجيناز راسخة طرق لتوليد ICH في القوارض. وقد وضعت ?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> مادة </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td><td> تعليق </td></tr><tr><td> المجسم رئيس الإطار </td><td> شركة Stoelting </td><td> 51600 </td><td></td></tr><tr><td> Nanomite الحقنة مضخة </td><td> جهاز هارفارد </td><td> PY2 70-2217 </td><td></td></tr><tr><td> هاميلتون الحقنة </td><td> هاميلتون الشركة </td><td> 1725RN (250 ميكرولتر) RN 1701 (10 ميكرولتر) </td><td> إبرة قياس 26 ل 250 ميكرولتر و 10 ميكرولتر الحقن. </td></tr><tr><td> Microdrill </td><td> أدوات العلوم الجميلة </td><td> 18000-17 </td><td></td></tr><tr><td> Microdrill لدغ </td><td> أدوات العلوم الجميلة </td><td> 19007-09 </td><td> 0.9 مم قطر </td></tr><tr><td> كولاجيناز نوع VII-S </td><td> سيغما الدريخ </td><td> C2399 </td><td></td></tr><tr><td> مكداس مكروي أنابيب شعرية </td><td> فيشر العلمية </td><td> 22-362-574 </td><td> unheparinized </td></tr><tr><td> الشمع العظام </td><td> Ethicon </td><td> W31 </td><td></td></tr><tr><td> خاط </td><td> Ethicon </td><td> 1676G </td><td></td></tr><tr><td> الكيتامين </td><td> JHP الصيدلة </td><td> 42023-115-10 </td><td> Ketalar </td></tr><tr><td> زيلازين </td><td> LLOYD المختبرات </td><td> 139-236 </td><td> AnaSed </td></tr></tbody></table>

modeling intracerebral hemorrhage in mice: injection of autologous blood or bacterial collagenase

نزف داخل المخ عفوية (ICH) يعرف العلة يحتمل أن تكون مهددة للحياة العصبية التي تشكل 10-15٪ من جميع المستشفيات السكتة الدماغية ذات الصلة والتي لا تتوفر علاجات فعالة حتى الآن 1،2. بسبب عدم تجانس ICH في البشر، وهناك حاجة إلى نماذج مختلفة قبل السريرية لاستكشاف الاستراتيجيات العلاجية بدقة المحتملين 3. هو فعل شائع التجريبية ICH في القوارض عن طريق الحقن إما intraparenchymal من الدم الذاتي أو البكتيرية كولاجيناز 4. يتم تحديد النموذج المناسب بناء على الفيزيولوجيا المرضية الحث نزف وتقدم الإصابة. نموذج حقن الدم يحاكي نزف بخطى حثيثة. بدلا من ذلك، كولاجيناز البكتيرية يعطل إنزيمي على الصفيحة القاعدية من المخ الشعيرات الدموية، مما تسبب في نزيف النشطة التي تتطور بشكل عام خلال عدة ساعات 5. يمكن كميا ذمة perihematomal والعجز الناتجة neurofunctional جيئة وذهابام كلا النموذجين. في هذه الدراسة، وصف لنا وتقييمها وتعديل نموذج حقن مزدوج من الدم الكامل ذاتي 6 وكذلك نموذج حقن ICH من كولاجيناز البكتيرية 7، وكلاهما هدف العقد القاعدية (الجسم المخطط) من الفئران الذكور CD-1. قمنا بتقييم العجز وذمة الدماغ neurofunctional في 24 و 72 ساعة بعد الاستقراء ICH. تسبب حقن الدم الذاتي Intrastriatal من (30 ميكرولتر) أو كولاجيناز البكتيرية (0.075U) العجز neurofunctional استنساخه في الفئران وذمة الدماغ زيادة كبيرة في الموارد البشرية 24 و 72 بعد الجراحة (ع &lt;0.05). في الختام، كلا النموذجين تسفر عوائق النزفية متسقة وتمثل الأساليب الأساسية للبحث ICH قبل السريرية.

Watch this Scientific Journal Video about Modeling Intracerebral Hemorrhage in Mice: Injection of Autologous Blood or Bacterial Collagenase at JoVE.com

Modeling Intracerebral Hemorrhage in Mice: Injection of Autologous Blood or Bacterial Collagenase

وهناك حاجة إلى نماذج حيوانية ذات الصلة سريريا من نزيف داخل المخ (ICH) لتوسيع نطاق معرفتنا السكتة النزفية ودراسة استراتيجيات علاجية جديدة. في هذه الدراسة، فإننا وصف وتقييم النماذج ICH اللذين تنفيذ حقن الدم إما من طرف واحد أو كلها ذاتي كولاجيناز البكتيرية في العقد القاعدية (الجسم المخطط) من الفئران.

نزف الدماغي الداخلي النمذجة في الفئران: حقن الدم الذاتي أو البكتيرية كولاجيناز

Spontaneous intracerebral hemorrhage (ICH) defines a potentially life-threatening neurological malady that accounts for 10-15% of all stroke-related ...

modeling-intracerebral-hemorrhage-mice-injection-autologous-blood-or

Research

JoVE Journal

Medicine

24.0K Views.  Loma Linda University School of Medicine. وهناك حاجة إلى نماذج حيوانية ذات الصلة سريريا من نزيف داخل المخ (ICH) لتوسيع نطاق معرفتنا السكتة النزفية ودراسة استراتيجيات علاجية جديدة. في هذه الدراسة، فإننا وصف وتقييم النماذج ICH اللذين تنفيذ حقن الدم إما من طرف واحد أو كلها ذاتي كولاجيناز البكتيرية في العقد ال...

Video: Modeling Intracerebral Hemorrhage in Mice: Injection of Autologous Blood or Bacterial Collagenase

Modeling Stroke in Mice - Middle Cerebral Artery Occlusion with the Filament Model

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are very limited. To meet the need for novel therapeutic approaches, experimental stroke research frequently employs rodent models of focal cerebral ischaemia. Most researchers use permanent or transient occlusion of the middle cerebral artery (MCA) in mice or rats.
Proximal occlusion of the middle cerebral artery (MCA) via the intraluminal suture technique (so called filament or suture model) is probably the most frequently used model in experimental stroke research. The intraluminal MCAO model offers the advantage of inducing reproducible transient or permanent ischaemia of the MCA territory in a relatively non-invasive manner. Intraluminal approaches interrupt the blood flow of the entire territory of this artery. Filament occlusion thus arrests flow proximal to the lenticulo-striate arteries, which supply the basal ganglia. Filament occlusion of the MCA results in reproducible lesions in the cortex and striatum and can be either permanent or transient. In contrast, models inducing distal (to the branching of the lenticulo-striate arteries) MCA occlusion typically spare the striatum and primarily involve the neocortex. In addition these models do require craniectomy. In the model demonstrated in this article, a silicon coated filament is introduced into the common carotid artery and advanced along the internal carotid artery into the Circle of Willis, where it blocks the origin of the middle cerebral artery. In patients, occlusions of the middle cerebral artery are among the most common causes of ischaemic stroke. Since varying ischemic intervals can be chosen freely in this model depending on the time point of reperfusion, ischaemic lesions with varying degrees of severity can be produced. Reperfusion by removal of the occluding filament at least partially models the restoration of blood flow after spontaneous or therapeutic (tPA) lysis of a thromboembolic clot in humans.
In this video we will present the basic technique as well as the major pitfalls and confounders which may limit the predictive value of this model.

Filamentous occlusion of the Middle cerebral artery is a common model for studying ischemic stroke in mice.

السكتة الدماغية النمذجة في الفئران -- الشرق انسداد الشريان الدماغي مع نموذج الشعيرة

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are ...

Sequencing of Bacterial Microflora in Peripheral Blood: our Experience with HIV-infected Patients

The healthy gastrointestinal tract is physiologically colonized by a large variety of commensal microbes that influence the development 
	of the humoral and cellular mucosal immune system1,2. 
 Microbiota is shielded from the immune system via a strong mucosal barrier. Infections and antibiotics are known to alter both the normal 
	gastrointestinal tract barrier and the composition of resident bacteria, which may result in possible immune abnormalities3.
HIV causes a breach in the gastrointestinal barrier with progressive failure of mucosal immunity and leakage into the systemic circulation of bacterial bioproducts, such as lipopolysaccharide and 
	bacterial DNA fragments, which contribute to systemic immune activation4-7. Microbial translocation is implicated in HIV/AIDS immunopathogenesis and response to therapy 4,8.
We aimed to characterise the composition of bacteria translocating in peripheral blood of HIV-infected patients. To pursue our aim we set up a PCR reaction for the panbacteric 16S ribosomial gene 
	followed by a sequencing analysis.
Briefly, whole blood from both HIV-infected and healthy subjects is used. Given that healthy individuals present normal intestinal homeostasis no translocation of microflora is expected in 
	these patients. Following whole blood collection by venipuncture and plasma separation, DNA is extracted from plasma and used to perform a broad range PCR reaction for the panbacteric 
	16S ribosomial gene9. Following PCR product purification, cloning and sequencing analyses are performed.

Our experiment will show how to perform a sequencing analysis of bacterial species translocating in peripheral blood of HIV positive patients.

تسلسل الدقيقة البكتيرية في الدم المحيطي : لدينا تجربة مع المرضى المصابين بفيروس الإيدز

The healthy gastrointestinal tract is physiologically colonized by a large variety of commensal microbes that influence the development 
	of the humoral ...

Delivery of Therapeutic Agents Through Intracerebroventricular (ICV) and Intravenous (IV) Injection in Mice

Despite the protective role that blood brain barrier plays in shielding the brain, it limits the access to the central nervous system (CNS) which most often results in failure of potential therapeutics designed for neurodegenerative disorders 1,2. Neurodegenerative diseases such as Spinal Muscular Atrophy (SMA), in which the lower motor neurons are affected, can benefit greatly from introducing the therapeutic agents into the CNS. The purpose of this video is to demonstrate two different injection paradigms to deliver therapeutic materials into neonatal mice soon after birth. One of these methods is injecting directly into cerebral lateral ventricles (Intracerebroventricular) which results in delivery of materials into the CNS through the cerebrospinal fluid 3,4. The second method is a temporal vein injection (intravenous) that can introduce different therapeutics into the circulatory system, leading to systemic delivery including the CNS 5. Widespread transduction of the CNS is achievable if an appropriate viral vector and viral serotype is utilized. Visualization and utilization of the temporal vein for injection is feasible up to postnatal day 6. However, if the delivered material is intended to reach the CNS, these injections should take place while the blood brain barrier is more permeable due to its immature status, preferably prior to postnatal day 2. The fully developed blood brain barrier greatly limits the effectiveness of intravenous delivery. Both delivery systems are simple and effective once the surgical aptitude is achieved. They do not require any extensive surgical devices and can be performed by a single person. However, these techniques are not without challenges. The small size of postnatal day 2 pups and the subsequent small target areas can make the injections difficult to perform and initially challenging to replicate.

Delivery of Therapeutic Agents Through Intracerebroventricular ICV and Intravenous IV Injection in Mice

This article demonstrates two very different methods of injection: 1) into the brain (intracerebroventricular) and 2) systemic (intravenous) to introduce the therapeutic agents into the central nervous system of neonatal mice.

تقديم وكلاء العلاجية من خلال Intracerebroventricular (ICV) ، وحقن في الوريد (رابعا) في الفئران

Despite the protective role that blood brain barrier plays in shielding the brain, it limits the access to the central nervous system (CNS) which most ...

Assessing Changes in Volatile General Anesthetic Sensitivity of Mice after Local or Systemic Pharmacological Intervention

One desirable endpoint of general anesthesia is the state of unconsciousness, also known as hypnosis. Defining the hypnotic state in animals is less straightforward than it is in human patients. A widely used behavioral surrogate for hypnosis in rodents is the loss of righting reflex (LORR), or the point at which the animal no longer responds to their innate instinct to avoid the vulnerability of dorsal recumbency. We have developed a system to assess LORR in 24 mice simultaneously while carefully controlling for potential confounds, including temperature fluctuations and varying gas flows. These chambers permit reliable assessment of anesthetic sensitivity as measured by latency to return of the righting reflex (RORR) following a fixed anesthetic exposure. Alternatively, using stepwise increases (or decreases) in anesthetic concentration, the chambers also enable determination of a population's sensitivity to induction (or emergence) as measured by EC50 and Hill slope. Finally, the controlled environmental chambers described here can be adapted for a variety of alternative uses, including inhaled delivery of other drugs, toxicology studies, and simultaneous real-time monitoring of vital signs.

Loss of the righting reflex has long served as a standard behavioral surrogate for unconsciousness, also called hypnosis, in laboratory animals. Alterations in volatile anesthetic sensitivity caused by pharmacological interventions can be detected with a carefully controlled high-throughput assessment system, which may be adapted for delivery of any inhaled therapeutic.

تقييم التغيرات في المتطايرة العام التخدير حساسية من الفئران بعد التدخل الدوائي المحلي أو الجهازية

One desirable endpoint of general anesthesia is  the state of unconsciousness, also known as hypnosis. Defining the hypnotic state in animals is  less ...

Intravital Video Microscopy Measurements of Retinal Blood Flow in Mice

Alterations in retinal blood flow can contribute to, or be a consequence of, ocular disease and visual dysfunction. Therefore, quantitation of altered perfusion can aid research into the mechanisms of retinal pathologies. Intravital video microscopy of fluorescent tracers can be used to measure vascular diameters and bloodstream velocities of the retinal vasculature, specifically the arterioles branching from the central retinal artery and of the venules leading into the central retinal vein. Blood flow rates can be calculated from the diameters and velocities, with the summation of arteriolar flow, and separately venular flow, providing values of total retinal blood flow. This paper and associated video describe the methods for applying this technique to mice, which includes 1) the preparation of the eye for intravital microscopy of the anesthetized animal, 2) the intravenous infusion of fluorescent microspheres to measure bloodstream velocity, 3) the intravenous infusion of a high molecular weight fluorescent dextran, to aid the microscopic visualization of the retinal microvasculature, 4) the use of a digital microscope camera to obtain videos of the perfused retina, and 5) the use of image processing software to analyze the video. The same techniques can be used for measuring retinal blood flow rates in rats.

Intravital microscopy can be used in animals to visualize and measure retinal vascular diameters, bloodstream velocities, and total retinal blood flow.

Alterations in retinal blood flow can contribute to, or be a consequence of, ocular disease and visual dysfunction. Therefore, quantitation of altered ...

Intrastriatal Injection of Autologous Blood or Clostridial Collagenase as Murine Models of Intracerebral Hemorrhage

Intracerebral hemorrhage (ICH) is a common form of cerebrovascular disease and is associated with significant morbidity and mortality. Lack of effective treatment and failure of large clinical trials aimed at hemostasis and clot removal demonstrate the need for further mechanism-driven investigation of ICH. This research may be performed through the framework provided by preclinical models. Two murine models in popular use include intrastriatal (basal ganglia) injection of either autologous whole blood or clostridial collagenase. Since, each model represents distinctly different pathophysiological features related to ICH, use of a particular model may be selected based on what aspect of the disease is to be studied. For example, autologous blood injection most accurately represents the brain&#39;s response to the presence of intraparenchymal blood, and may most closely replicate lobar hemorrhage. Clostridial collagenase injection most accurately represents the small vessel rupture and hematoma evolution characteristic of deep hemorrhages. Thus, each model results in different hematoma formation, neuroinflammatory response, cerebral edema development, and neurobehavioral outcomes. Robustness of a purported therapeutic intervention can be best assessed using both models. In this protocol, induction of ICH using both models, immediate post-operative demonstration of injury, and early post-operative care techniques are demonstrated. Both models result in reproducible injuries, hematoma volumes, and neurobehavioral deficits. Because of the heterogeneity of human ICH, multiple preclinical models are needed to thoroughly explore pathophysiologic mechanisms and test potential therapeutic strategies.

Preclinical models of intracerebral hemorrhage are utilized to mimic certain aspects of clinical disease. Thus, mechanisms of injury and potential therapeutic strategies may be explored. In this protocol, two models of intracerebral hemorrhage are described, intrastriatal (basal ganglia) injections of autologous blood or collagenase.

حقن Intrastriatal من ذاتي الدم أو اللاهوائية كولاجيناز كنماذج الفئران من نزف الدماغي الداخلي

Intracerebral hemorrhage (ICH) is a common form of cerebrovascular disease and is associated with significant morbidity and mortality. Lack of effective ...

Modeling Spontaneous Metastatic Renal Cell Carcinoma (mRCC) in Mice Following Nephrectomy

One of the key challenges to improved testing of new experimental therapeutics in renal cell carcinoma (RCC) is the development of models that faithfully recapitulate early- and late-stage metastatic disease progression. Typical tumor implantation models utilize ectopic or orthotopic primary tumor implantation, but few include systemic spontaneous metastatic disease that mimics the clinical setting. This protocol describes the key steps to develop RCC disease progression stages similar to patients. First, it uses a highly metastatic mouse tumor cell line in a syngeneic model to show orthotopic tumor cell implantation. Methods include superficial and internal implantation into the sub-capsular space with cells combined with matrigel to prevent leakage and early spread. Next it describes the procedures for excision of tumor-bearing kidney (nephrectomy), with critical pre- and post- surgical mouse care. Finally, it outlines the steps necessary to monitor and assess micro-and macro-metastatic disease progression, including bioluminescent imaging as well provides a detailed visual necropsy guide to score systemic disease distribution. The goal of this protocol description is to facilitate the widespread use of clinically relevant metastatic RCC models to improve the predictive value of future therapeutic testing.&#160;

Modeling Spontaneous Metastatic Renal Cell Carcinoma mRCC in Mice Following Nephrectomy

Models of spontaneous metastatic renal cell carcinoma (RCC) disease progression can be used for evaluating treatments in a clinically relevant setting. This protocol demonstrates different procedures for orthotopic kidney tumor cell implantation, proper nephrectomy, and finally outlines a necropsy guide for visual and bioluminescent scoring of metastatic burden and localization.

النمذجة العفوي النقيلي سرطان الخلايا الكلوية (مركز تنسيق الانقاذ البحري) في الفئران بعد استئصال الكلية

One of the key challenges to improved testing of new experimental therapeutics in renal cell carcinoma (RCC) is the development of models that faithfully ...

Ultrasound-guided Transthoracic Intramyocardial Injection in Mice

Murine models of cardiovascular disease are important for investigating pathophysiological mechanisms and exploring potential regenerative therapies. Experiments involving myocardial injection are currently performed by direct surgical access through a thoracotomy. While convenient when performed at the time of another experimental manipulation such as coronary artery ligation, the need for an invasive procedure for intramyocardial delivery limits potential experimental designs. With ever improving ultrasound resolution and advanced noninvasive imaging modalities, it is now feasible to routinely perform ultrasound-guided, percutaneous intramyocardial injection. This modality efficiently and reliably delivers agents to a targeted region of myocardium. Advantages of this technique include the avoidance of surgical morbidity, the facility to target regions of myocardium selectively under ultrasound guidance, and the opportunity to deliver injectate to the myocardium at multiple, predetermined time intervals. With practiced technique, complications from intramyocardial injection are rare, and mice quickly return to normal activity on recovery from anesthetic. Following the steps outlined in this protocol, the operator with basic echocardiography experience can quickly become competent in this versatile, minimally invasive technique.

Echocardiography-guided percutaneous intramyocardial injection represents an efficient, reliable, and targetable modality for the delivery of gene transfer agents or cells into the murine heart. Following the steps outlined in this protocol, the operator can quickly become competent in this versatile, minimally invasive technique.

الموجهة بالأمواج فوق الصوتية عبر الصدر حقن داخل عضلة القلب في الفئران

Murine models of cardiovascular disease are important for investigating pathophysiological mechanisms and exploring potential regenerative therapies. ...

Modeling Stroke in Mice: Permanent Coagulation of the Distal Middle Cerebral Artery

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical options are available for a small proportion of stroke patients in the acute phase. Current research is intensively searching for novel therapeutic strategies and is increasingly focusing on the sub-acute and chronic phase after stroke because more patients might be eligible for therapeutic interventions in a prolonged time window. These delayed mechanisms include important pathophysiological pathways such as post-stroke inflammation, angiogenesis, neuronal plasticity and regeneration. In order to analyze these mechanisms and to subsequently evaluate novel drug targets, experimental stroke models with clinical relevance, low mortality and high reproducibility are sought after. Moreover, mice are the smallest mammals in which a focal stroke lesion can be induced and for which a broad spectrum of transgenic models are available. Therefore, we describe here the mouse model of transcranial, permanent coagulation of the middle cerebral artery via electrocoagulation distal of the lenticulostriatal arteries, the so-called &#8220;coagulation model&#8221;. The resulting infarct in this model is located mainly in the cortex; the relative infarct volume in relation to brain size corresponds to the majority of human strokes. Moreover, the model fulfills the above-mentioned criteria of reproducibility and low mortality. In this video we demonstrate the surgical methods of stroke induction in the &#8220;coagulation model&#8221; and report histological and functional analysis tools.

Various murine models of middle cerebral artery occlusion (MCAO) are widely used in experimental brain research. Here, we demonstrate the model of transcranial permanent distal MCAO which produces consistent cortical infarction of a size corresponding to damage imposed by the majority of human ischemic strokes.

السكتة الدماغية النمذجة في الفئران: التخثر الدائم من الشريان الدماغي الأوسط القاصي

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical ...

The Rabbit Blood-shunt Model for the Study of Acute and Late Sequelae of Subarachnoid Hemorrhage: Technical Aspects

Early brain injury and delayed cerebral vasospasm both contribute to unfavorable outcomes after subarachnoid hemorrhage (SAH). Reproducible and controllable animal models that simulate both conditions are presently uncommon. Therefore, new models are needed in order to mimic human pathophysiological conditions resulting from SAH.
This report describes the technical nuances of a rabbit blood-shunt SAH model that enables control of intracerebral pressure (ICP). An extracorporeal shunt is placed between the arterial system and the subarachnoid space, which enables examiner-independent SAH in a closed cranium. Step-by-step procedural instructions and necessary equipment are described, as well as technical considerations to produce the model with minimal mortality and morbidity. Important details required for successful surgical creation of this robust, simple and consistent ICP-controlled SAH rabbit model are described.

The experimental intracranial pressure-controlled blood shunt subarachnoid hemorrhage (SAH) model in the rabbit combines the standard procedures &#8212; subclavian artery cannulation and transcutaneous cisterna magna puncture, which enables close mimicking of human pathophysiological conditions after SAH. We present step-by-step instructions and discuss key surgical points for successful experimental SAH creation.