이 연구는 부분적으로 JH 장에 NIH 보조금 RO1NS053407에 의해 지원되었다. 우리는 그의 귀중한 공헌 씨 데이먼 Klebe 감사드립니다.

모든 절차는 실험실 동물의 관리 및 사용에 대한 NIH 가이드 준수 실시 Loma 린다 대학에서 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다. 1. Presurgical 준비 무균 기술은 모든 수술 절차를하는 것이 좋습니다. stereotactic 장치를 소독하고 수술하기 전에 멸균 수술 용 도구를 준비합니다. 모든 동물 취급시 개인 보호 장비 (PPE)를 착용하십시오. 동물의 physiologic 체온을 유지하기 위해 수술하는 동안 가열 패드를 사용합니다. <ol><li> 트리플 빔 동물 척도를 이용하여 8-12주 기존 마우스를 무게. </li><li> 공동 주입 케타민 (100 밀리그램 / kg)과 xylazine (10 MG / kg) intraperitoneally는 마취에 대한 7-10 분 (충분한 진정 작용에 대한 모니터)을 적용 할 수 있습니다. </li><li> 열 담요에 마우스를 놓고 두피를 면도. </li><li> 두 눈에 안과 연고를 적용합니다. </li><li> 확보기도는에 의해 부드럽게 측면 혀를 이동하고, 조심스럽게 stereotactic 장치에 마우스의 머리를 보호합니다. 참고 : 머리가 stereotactic 프레임의 기초에 수평으로 고정해야합니다. </li><li> Betadine으로 수술 영역을 소독하고, 70 % 에탄올로 세정. 세 번 총 Betadine 및 70 % 에탄올의 응용 프로그램을 번갈아 가며 반복합니다. 면과 스쳐 applicators이 목적을 위해 사용할 수 있습니다. </li></ol> 2. 혈액 주입 모델 <ol><li> # 10 메스 블레이드와 두피의 1cm 긴 중간 선 절개를합니다. </li><li> 코로나 및 시상 봉합 (bregma)의 수직 교차점을 표시하기 위해 두개골을 덮고있는 부드러운 조직을 모두 삭제하려면 솜 스쳐 applicators을 사용합니다. </li><li> 분사 펌프에 해밀턴 주사기 (250 μl)를 탑재하고, stereotaxically bregma를 통해 바늘 (26 게이지)을 직접. </li><li> 다음, 바늘 0.2 mm의 위치에 stereotactic 속이는 팔을 조정 앞쪽 2측면 오른쪽 mm. 에서이 좌표가 1mm 드릴 비트와 다양한 속도의 드릴을 사용하여 작은 두개골 버 구멍을합니다. </li><li> 동물의 꼬리를 일시 중지하고 70 %의 에탄올과의 낮은 표면을 소독. </li><li> 펑크 중앙 꼬리 멸균 바늘 (예 : 26 게이지)와 동맥과 unheparinized 모세관 튜브에 동맥 혈액을 수집합니다. </li><li> 해밀턴 주사기의 유리 통에 모세관에서 신속하게 혈액을 전송 한 후 플런저를 삽입합니다. </li><li> 분사 펌프에 해밀턴 주사기를 포함하는 동맥 혈액의 지금 30 μl 이상을 다시 연결하고 베벨가 더 이상 표시 만 될 때까지 버 구멍을 통해서 바늘을 (시상 봉합을 향해 그 beveled 가장자리 포함) 삽입합니다. </li><li> 이 점 사전에서 바늘 3 ventrally mm 2 μl / 분의 속도로 autologous 혈액의 5 μl를 삽입. </li><li> 첫 번째 주입 미리 깊이 더 바늘 0.7 mm 완료 후. </li><li> 기다립니다5 분 후 오른쪽 striatum에 혈액의 25 μl를 삽입. </li><li> 두 번째 주입이 완료되면, 1 ㎜ / 분의 속도에서이 박탈되기 전에 추가 10 분에 적당한 위치에 바늘을 두십시오. </li><li> 뼈 왁스와 버 구멍을 밀봉하고 피부를 봉합 해. </li><li> 수술 후 진통제를 들어 미리 예열 유체 (정상 생리)에 피하 buprenorphine의 0.05 밀리그램 / kg를 주입. </li></ol> 3. Collagenase 주입 모델 <ol><li> 혈액 주입 모델에 설명 된대로 presurgical 준비 후, 반복 1-4 단계를 반복합니다. </li><li> 생리의 0.5 μl에 용해 세균 (clostridial) collagenase VII-S의 0.075U과 해밀턴 주사기 (10 μl)을 입력합니다. 기포의 형성을 피하십시오. </li><li> 분사 펌프에 해밀턴 주사기를 다시 연결하고 베벨가 더 이상 표시 만 될 때까지 버 구멍을 통해 바늘 (26 게이지)를 삽입합니다. </li><li> ventrally 바늘 3.7 mm의 발전을하고 collagenase의 0.075U을 주입 전2 μl / 분의 속도로 n 인물은 바로 striatum. </li><li> 주입이 완료되면, 1 ㎜ / 분의 속도에서이 박탈되기 전에 추가 10 분에 적당한 위치에 바늘을 두십시오. </li><li> 뼈 왁스와 버 구멍을 밀봉하고 피부를 봉합 해. </li><li> 사전 예열 수술 유체의 피하 buprenorphine의 0.05 밀리그램 / kg를 주입. </li></ol> 4. 위장 운영 <ol><li> 혈액 주입 모델에 설명 된대로 presurgical 준비 후, 반복 1-4 단계를 반복합니다. </li><li> 버 구멍을 통해 ventrally 바늘 (26 게이지) 3.7 mm를 삽입합니다. 바늘은 1 ㎜ / 분의 속도로 인출되기 전에 10 분 동안 위치에 유지됩니다. </li><li> 뼈 왁스와 버 구멍을 밀봉하고 피부를 봉합 해. </li><li> 사전 예열 수술 유체의 피하 buprenorphine의 0.05 밀리그램 / kg를 주입. </li></ol> 5. 대표 결과 실험 intrastriatal 출혈은 형태학 세상의 시작과 끝설치류에서뿐만 아니라 행동 변화합니다. 이러한 변경은 프로 시저의 적절한 실행을 보장하기 위해, 또는 잠재적 치료의 효과를 조사하기 위해 평가 될 수있다. 타겟팅 된 뇌 영역 (예 : 기저 신경절)에 블리드를 생성하면 재현 접근 방식에 가장 필수적이며, 총 또는 histologically 뇌 스테인드 섹션 (예제 1-2)에 확인할 수 있습니다. 다양한 행동 평가를 통해 정량화 할 수 sensorimotor의 적자에서 기저 신경절 결과로 상해. 코너 회전 시험의 결과는 실험 마우스 오른쪽 단추로 양면 ICH 후, 마우스는 (그림 3 A) 사기는 수술 후 24, 72 시간에서 동물을 운영하지 않고 장애인 contralateral (왼쪽) 편에서 ipsilaterally와 거리에 훨씬 더 자주 바뀌을 보여 주었다. 또한, 적절히 vibrissae 자극 따라 표면에 장애 (왼쪽) forelimb을 배치 할 수있는 능력은 forelimb 배치 테스트를 통해 평가되었습니다. 24 72 시간의 수술 후, 마우스의 하위마우스 오른쪽 단추로 양면 ICH에 jected하는 것은 사기 작동하는 동물보다 훨씬 적은 위치를 보여 주었다. 뇌 부종의 측정은 자주 실험 ICH 후 뇌 손상의 정도를 수량화하기 위해 사용된다. autologous 혈액 (30 μl) 또는 박테리아 collagenase의 Intracerebral 주사 (0.075 U)는 중요한 24에서 ipsilateral 피질과 기저 신경절의 뇌 수분 함량의 증가 (그림 4)와 수술 후 72 시간 (그림 4 B) (으로 이어 ) 체하다에 비해. 행동 검사 (그림 3)과 뇌 부종 (그림 4)의 범위의 결과는 주어진 볼륨에서 혈액과 collagenase 주입 모델 사이에 차이점을 보여 주었다 없습니다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/4289/4289fig1.jpg" /> 1 그림. 쥐 모델링 ICH. (A) bregma의 앞쪽 코로나 뇌 섹션 0.2 mm의 단순한 도식은 PR을 보여줍니다autologous 혈액 또는 collagenase 분사의 위치를​​ oposed. 측면 심실는 LV를 표시됩니다. CPU는 꼬리가있는-putamen, striatum의 일부를 의미하고, GP는 Globus는의 pallidus를 식별합니다. 모두 striatum뿐만 아니라 Globus는의 pallidus는 기저 신경절로 알려진 하위 대뇌 피질의 핵의 그룹에 속한다. autologous 전체 혈액의 intrastriatal 주입 후 24 시간에서 구할 bregma의 코로나 뇌 섹션 0.2mm의 앞의 (B) 대표 현미경 사진. <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/4289/4289fig2.jpg" /> 그림 2. 혈종의 조직 학적 강령. 대표 hematoxylin 및 eosin (H &amp; E) 마우스 뇌의 스테인드 코로나 cryosection는 (10 μm), 세균 collagenase의 intrastriatal 주입 (0.075 U) 후 24 시간에 혈종의 크기를 보여주는. LH = 왼쪽 반구, RH = 오른쪽 뇌. &lt;<html> IMG ALT = &quot;그림 3&quot;SRC = &quot;/ files/ftp_upload/4289/4289fig3.jpg&quot;/&gt; 그림 3. 쥐 실험 ICH에 따라 Neurofunctional 평가는. autologous 혈액 (30 μl) 또는 박테리아 collagenase의 Intrastriatal 주입 (0.075 U)는 재현 neurofunctional 적자를 일으켰습니다. (A) 실험의 ICH 후 마우스는 수술 후 24, 72 시간에서 사기 작동하는 동물보다 훨씬 더 오른쪽으로 보여 주었다. 왼쪽 다리의 (B) 앞발 배치 용량은 수술 후 24, 72 시간에서 ICH 후 장애인을했다. 값은 ± SEM을 의미로 표현하고 학생 뉴먼-Keuls 방법 다음 순위에 분산 Kruskal-월리스 편도 분석과 분석 하였다. &lt;0.05의 AP 값이 통계적으로 의미있는 것으로 간주되었다, N = 6-12 당 그룹, * P 사기에 비해 &lt;0.05. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/4289/4289fig3large.jpg" target="_blank">큰 그림을 보려면 여기를 클릭하십시오</a> . igure 4 &quot;SRC =&quot;/ files/ftp_upload/4289/4289fig4.jpg &quot;/&gt; 4 그림. 쥐 실험 ICH에 따라 뇌 물 내용의 평가. autologous의 피 Intracerebral 주입 (30 μl) 또는 중요한 24 (A)에서 ipsilateral 피질과 기저 신경절의 뇌 수분 함량의 증가, 72 시간으로 이어 세균 collagenase (0.075 U) (B) ICH 유도 후. 값은 의미 ± SEM을로 표현하고 Tukey 게시물 임시 테​​스트에 이어 분산하는 방법 중 하나 분석과 분석 하였다. &lt;0.05의 AP 값이 통계적으로 의미있는 것으로 간주되었다, N = 6-10 그룹 별, * P 사기에 비해 &lt;0.05. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/4289/4289fig4large.jpg" target="_blank">큰 그림을 보려면 여기를 클릭하십시오</a> .

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Cereb. Blood Flow Metab. 24, 1133-1145 (2004).</li><li>Ma, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+adhesion+protein-1+inhibition+provides+antiinflammatory+protection+after+an+intracerebral+hemorrhagic+stroke+in+mice.">Vascular adhesion protein-1 inhibition provides antiinflammatory protection after an intracerebral hemorrhagic stroke in mice.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. , (2010).</li><li>Bullock, R., Mendelow, A. D., Teasdale, G. M., Graham, D. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracranial+haemorrhage+induced+at+arterial+pressure+in+the+rat.+Part+1:+Description+of+technique,+ICP+changes+and+neuropathological+findings.">Intracranial haemorrhage induced at arterial pressure in the rat. Part 1: Description of technique, ICP changes and neuropathological findings.</a> Neurol Res. 6, 184-188 (1984).</li><li>Yang, G. Y., Betz, A. L., Chenevert, T. L., Brunberg, J. A., Hoff, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+intracerebral+hemorrhage:+relationship+between+brain+edema,+blood+flow,+and+blood-brain+barrier+permeability+in+rats.">Experimental intracerebral hemorrhage: relationship between brain edema, blood flow, and blood-brain barrier permeability in rats.</a> J. Neurosurg. 81, 93-102 (1994).</li><li>Rosenberg, G. A., Mun-Bryce, S., Wesley, M., Kornfeld, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collagenase-induced+intracerebral+hemorrhage+in+rats.">Collagenase-induced intracerebral hemorrhage in rats.</a> Stroke. 21, 801-807 (1990).</li><li>Alkayed, N. 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intracerebral 출혈 (ICH)의 동물 모델은 질병의 pathophysiology의 고급 이해에 크게 기여하고, 일반적으로 잠복기 분위기의 소설 치료 전략을 개발하고 평가하는 데 사용됩니다. autologous 혈액이나 세균 collagenase의 Intraparenchymal 주사는 설치류에서 ICH를 생성하는 잘 알려진 방법입니다. 두 방법은 처음 쥐에서 개발하지만, 유전자 변형과 한방 긴장의 급속하게 증가 가용성으로 인해, 쥐 더 출혈성 뇌 손상 <su...

<table border="1"><tbody><tr><td> 자료 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 논평 </td></tr><tr><td> Stereotactic 헤드 프레임 </td><td> Stoelting (주) </td><td> 51,600 </td><td></td></tr><tr><td> Nanomite의 주사기 펌프 </td><td> 하버드 장치 </td><td> PY2 70-2217 </td><td></td></tr><tr><td> 해밀턴 주사기 </td><td> 해밀턴 회사 </td><td> 1725RN (250 μl) 1701 RN (10 μl) </td><td> 250 μl 10 μl 주사기에 26 게이지 바늘. </td></tr><tr><td> Microdrill </td><td> 정밀 과학 도구 </td><td> 18000-17 </td><td></td></tr><tr><td> Microdrill 버 </td><td> 정밀 과학 도구 </td><td> 19007-09 </td><td> 0.9 mm 직경 </td></tr><tr><td> Collagenase 유형 VII-S </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> C2399 </td><td></td></tr><tr><td> 모세관 튜브를 Microhematocrit </td><td> 피셔 과학 </td><td> 22-362-574 </td><td> unheparinized </td></tr><tr><td> 뼈 왁스 </td><td> Ethicon </td><td> W31 </td><td></td></tr><tr><td> 상처의 봉합 </td><td> Ethicon </td><td> 1676G </td><td></td></tr><tr><td> 케타민 </td><td> JHP 제약 </td><td> 42023-115-10 </td><td> Ketalar </td></tr><tr><td> Xylazine </td><td> 로이드 연구소 </td><td> 139-236 </td><td> AnaSed </td></tr></tbody></table>

modeling intracerebral hemorrhage in mice: injection of autologous blood or bacterial collagenase

자연 intracerebral 출혈 (ICH)는 모든 뇌졸중 관련 입원의 10-15%와 더 효과적인 치료법은 1,2 데이트를 할 수 없습니다있는 계정 잠재적으로 생명을 위협하는 신경 질병을 정의합니다. 때문에 인간의 ICH의 이질성의 다양한 잠복기 모델은 철저하게 3 예비 치료 전략을 탐색 할 필요합니다. 실험의 ICH는 일반적으로 autologous 혈액이나 세균 collagenase 4 중의 intraparenchymal 주입에 의해 동물에서 유도됩니다. 해당 모델은 출혈 유도와 부상의 진행의 pathophysiology에 따라 선택됩니다. 혈액 주입 모델은 빠른 속도로 진행 출혈을 모방 한 것이 었지요. 또한, 세균 collagenase는 효소 일반적으로 몇 시간 동안 5 발전 적극적으로 출혈의 원인, 뇌 모세 혈관의 기저 얇은 판을 방해. 결과 perihematomal 부종과 neurofunctional 적자는 이리저리 정량화 할 수m 모델 모두. 본 연구에서는, 우리는 설명과 autologous 전체 혈액 6 수정 이중 사출 모델뿐만 아니라 세균 collagenase 7 ICH 분사 모델, 둘 다 대상의 남성 CD-1 마우스의 기저 신경절 (코퍼스 striatum).을 평가 우리는 ICH 유도 한 후 neurofunctional 결손과 24에서 뇌 부종과 72 시간을 평가합니다. autologous 혈액 (30 μl) 또는 박테리아 collagenase (0.075U)의 Intrastriatal 주입 쥐 재현 neurofunctional 결손 및 수술 후 크게 증가 뇌 24의 부종과 72 시간 (P &lt;0.05)을 일으켰습니다. 결론적으로 두 모델은 일관성 출혈성 infarcts를 얻을 수 있으며 잠복기 ICH 연구에 대한 기본적인 방법을 나타냅니다.

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Modeling Intracerebral Hemorrhage in Mice: Injection of Autologous Blood or Bacterial Collagenase

intracerebral 출혈 (ICH)의 임상 관련 동물 모델은 출혈성 뇌졸중에 대한 지식을 확장하고 새로운 치료 전략을 검토 필요합니다. 본 연구에서는, 우리는 설명과 쥐의 기저 신경절 (코퍼스 striatum)에 autologous 전체 혈액이나 세균 collagenase 하나의 일방적 주사를 구현하는 두 ICH 모델을 평가합니다.

마우스의 모델링 Intracerebral 출혈 : Autologous 혈액이나 세균 Collagenase의 주입

Spontaneous intracerebral hemorrhage (ICH) defines a potentially life-threatening neurological malady that accounts for 10-15% of all stroke-related ...

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Medicine

24.0K 조회수.  Loma Linda University School of Medicine. intracerebral 출혈 (ICH)의 임상 관련 동물 모델은 출혈성 뇌졸중에 대한 지식을 확장하고 새로운 치료 전략을 검토 필요합니다. 본 연구에서는, 우리는 설명과 쥐의 기저 신경절 (코퍼스 striatum)에 autologous 전체 혈액이나 세균 collagenase 하나의 일방적 주사를 구현하는 두 ICH 모델을 평가합니다.