وأيد هذا العمل من المنح المقدمة من أمريكا انضم جمعية القلب جنوب شرق الكبرى (09GRNT2060421)، الجمعية الطبية الأمريكية، ومن جامعة العلوم السريرية ومعهد فلوريدا بالحركة. آدم مكة هو زميل NRSA NIH / NINDS، predoctoral (NS-F30 060335). تلقى روبرت Regenhardt predoctoral الدعم زمالة من جامعة فلوريدا برنامج التدريب المتعدد التخصصات في ارتفاع ضغط الدم (HL-T32 083810).

وقد وافق هذا البروتوكول من قبل رعاية الحيوان واللجنة المؤسسية الاستخدام (IACUC) في جامعة ولاية فلوريدا ومتوافق مع &quot;دليل لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية&quot; (الطبعة الثامنة، والأكاديمية الوطنية للعلوم، 2011). المواد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحيوانات: ثمانية أسابيع من العمر، من الذكور، سبراغ داولي الفئران (تشارلز ريفر مزارع، ويلمنجتون، MA، الولايات المتحدة الأمريكية) وزنها 250-300 ز في وقت الجراحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خدر <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استنشاق التخدير نظام (VetEquip شركة، بليسانتون، CA، الولايات المتحدة الأمريكية) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Isoflurane مخدر (الصيدلانيات باكستر، ديرفيلد، IL، الولايات المتحدة الأمريكية) </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التجسيمي النظام (ديفيد KOPF الصكوك، Tujunga، CA، الولايات المتحدة الأمريكية) <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نظام الحيوانات الصغيرة التجسيمي </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غير تمزق الأذن القضبان لالفئران </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حامل الغاز رئيس التخدير بالنسبة للفئران </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> درجة الحرارة التنظيم <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> BAT-12 ميزان حرارة المسبار الميكروي (البنكأدوات دقيقة، وشركة، ساراسوتا، FL، الولايات المتحدة الأمريكية) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> T / PUMP، TP600 بطانية الحرارية (صناعات Gaymar، وشركة، بستان حديقة، NY، USA) </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الأدوات الجراحية <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Metzenbaum مقص، ملقط القزحية، الكامشات المشبك البلدغ، 10 ميكرولتر مع حقنة إبرة قياس 26 مشطوف، Bovie الكي عدة (البنك أدوات دقيقة، وشركة، ساراسوتا، FL، الولايات المتحدة الأمريكية) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> محرك صغروي الحفر (Stoelting، الخشب دايل، IL، الولايات المتحدة الأمريكية) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 0،8 مم بر حفر الجولة (Roboz الجراحية الصك المحدودة، وشركة، غايثرسبيرغ، MD، الولايات المتحدة الأمريكية) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> STORZ بون خياطة الملقط (باوش ومب و، وشركة، روتشستر، نيويورك، الولايات المتحدة الأمريكية) </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اللوازم الجراحية <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 3،0 النايلون خياطة (الواحة، Mettawa، IL، الولايات المتحدة الأمريكية) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مسحات القطن، Puralube مرهم العين (فيشر العلمية، بتسبرغ، PA، الولايات المتحدة الأمريكية) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقاط جراحية وشرائح (مدترونيك Xomed، وشركة، جاكسونفيل، FL، الولايات المتحدة الأمريكية) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كليبرز الشعر الكهربائية (اوستر، بروفيدانس، رود آيلند، الولايات المتحدة الأمريكية) </li></ol></lط&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> المواد الكيميائية <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Endothelin-1 (الأمريكية الببتيد، سانيفيل، CA، الولايات المتحدة الأمريكية) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الكلورهيكسيدين 2٪ (Agrilabs، وسانت جوزيف، MO، الولايات المتحدة الأمريكية) </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التصور معدات <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المجهر الجراحي (SEILER الصك وتصنيع؛ سانت لويس، MO، الولايات المتحدة الأمريكية) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سوني هاندي كام HDR-SR12 (سوني، ميناتو، طوكيو، اليابان) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضاءة الألياف البصرية (TechniQuip شركة، ليفرمور، CA، الولايات المتحدة الأمريكية) </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس قطر السفينة <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> VLC وسائل الاعلام لاعب (باريس، فرنسا) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الصورة J البرمجيات (يماغيج 1.42q البرامج والمعاهد الامريكية الوطنية للصحة في بيثيسدا، MA، الولايات المتحدة الأمريكية) </li></ol></li></ol> 1. خطوات ما قبل الجراحة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل الجراحة، ويعيش الفئران تحت دائرة الضوء / الظلام 12:12 مع حرية الوصول إلى المياه والقوارض تشاو. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> هو فعل التخدير مع 4٪ isoflurane في 100٪ خليط الغاز O 2 في دائرة التعريفي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الغراب<html> وحلق الرأس ن مع كليبرز الشعر الكهربائية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم وضع الفئران في وضعية الرقود على وسادة ماصة الكذب على سطح التشغيل التحكم في درجة حرارته (بطانية الحرارية) ويتم وضع الرأس في جهاز التجسيمي بدءا من وضع قناع الوجه الغاز مخدر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المقبل، يتم إدراج أشرطة الأذن وشددت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلال إجراء التخدير يتم الاحتفاظ بنسبة 2٪ isoflurane في 100٪ خليط الغاز O 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم تطبيق مرهم البصريات مواد التشحيم لكلتا العينين، والجفون مغلقة لمنع جفاف العين خلال العملية الجراحية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم إدراج التحقيق درجة حرارة الجسم الأساسية للحفاظ على درجة حرارة ثابتة الحيوانية من 37 ± 0.5 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مع رئيس الفئران تخدير عقد بحزم في الجهاز التجسيمي منطقة العمليات الجراحية هو تطهير بالتناوب مع الكلورهيكسيدين والمالحة ثلاث مرات. </li></ol> 2. قبل الجمجمة نافذة إعداد ontent &quot;&gt; قبل إنشاء نافذة الجمجمة، ينبغي إعداد الفئران عن أي تجارب من قبل غرس الأجهزة الأخرى المطلوبة ويجب أن يحصل أي إجراءات المطلوبة الجراحية. لهذا البروتوكول، لقد زرع في السابق قنية دليل لل1-endothelin (ET- 1) الناجم عن MCAO كما هو مبين في منشور بعنوان رفيق &quot;Endothelin-1 المستحثة انسداد الشريان الدماغي الأوسط نموذج للالسكتة الدماغية مع التوجيه بالليزر Flowmetry دوبلر في الفئران.&quot; 3. إنشاء نافذة القحف بعد وضع قنية دليل أو المعدات اللازمة لإجراء التجارب، وإنشاء إطار لتصور الجمجمة مباشرة القريب من أجزاء الشريان الدماغي الأوسط خلال إجراء السكتة الدماغية. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أولا، يتم استخدام مقص لشق الجلد المغطي العضلات الصدغي بدءا إعلامي والعمل أفقيا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> هو شطر العضلة الصدغية باستخدام كاو كهربي ثم تراجع استخدام النايلون لخياطة 3،0 visua<html> ليز الجزء الحرشفية من العظم الصدغي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويوجه ساحة حوالي 3-4 ملم على الجزء الحرشفية من العظم الصدغي الذيلية إلى المدار ومتفوقة على قاعدة من عملية الوجني كما أنه يعكس الخروج من العظم الصدغي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم استخدام الحفر لخفض تدريجيا قطعة المحددة من العظام خالية من العظم الصدغي. وينبغي الحرص على تجنب تطبيق الكثير من الضغط على الحفر لأنه من الممكن أن تضر أو ​​قشرة الدماغ الجافية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم تنفيذ يشطف متكررة مع ملحي معقم لتحسين التصور من مجال الجراحة ومنع ارتفاع درجة حرارة الجمجمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدءا من الزاوية الحرة، تتم إزالة بعناية قطعة من العظام باستخدام temoporal غرامة ملقط ذو أسنان الفئران في حين التأكد من عدم المسيل للدموع أي سفن المرتبطة الجافية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم ترك الجافية سليمة ويتم شطف بعيدا الحطام باستخدام ملحي معقم. </li></ol> 4. تسجيل انقباض الشريان الدماغي يستخدم خيمة &quot;&gt; لشرح كيفية التقاط الصور في الوقت الحقيقي، والفئران التي تمر ET-1 يسببها MCAO لهذا البروتوكول. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل تطبيق مركبات فعال في الأوعية، يجب تسجيل الفيديو الأساسية لما لا يقل عن 1 دقيقة. لET-1 MCAO يسببها، يتم تسجيل خط الأساس بمجرد خفض الإبرة في المخ ولكن لحمة قبل الحقن ET-1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدء تشغيل مضخة للحقن حقنة وسجلت لمدة 1 ساعة أو حتى نقطة النهاية المرجوة. تبقى الإبرة في مكانها أثناء تسجيل الفيديو من أجل منع الاضطرابات من المستوى البؤري. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يجب أن يكون الفأر تخدير عميق والموت الرحيم وفقا لبروتوكول افق بعد هذا الإجراء. </li></ol> 5. تحليل الصور يمكن تحديد القطر السفينة عن أي جزء من تصور MCA. وكمثال على ذلك، سوف نستخدم فرع واحد من MCA لقياس قطر السفينة على نقطة في الوقت قبل وبعد حقن ET-1. الأمراض المنقولة جنسيايتم التقاط إطارات ليرة لبنانية من الفيديو على فترات حد أدنى 1 باستخدام VLC media player ل(VideoLAN). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تم تثبيت VLC لاعب وفتح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> من خلال اختيار أدوات ثم تفضيلات، يتم تغيير الإعداد إلى &quot;جميع&quot; تحت &quot;إعدادات العرض.&quot; </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> &quot;قائمة الفيديو&quot; يتم توسيع في شريط الجانب الأيسر و&quot;وحدات الإخراج&quot; ثم يتم توسيع. &quot;فلاتر المشهد&quot; لتحديد إظهار قائمة الفيديو مشهد التصفية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم كتابتها &quot;المشهد&quot; في خانة اسم الملف لالبادئة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم تعريف بادئة مسار الدليل. هذا هو المكان الذي يتم حفظ الإطارات يزال. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم تحديد نسبة A التسجيل على أساس معدل المطلوب من إلتقاط يزال. وفي حال عدم القبض على الفيديو في 29 لقطة في الثانية، ثم &quot;1749&quot; (29 إطارات / ثانية × 60 ثانية / دقيقة) يمكن إدخالها في مربع لحفظ إطار واحد لا يزال كل دقيقة 1. ثم يتم حفظ جميع التغييرات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم يتم فتح شريط الفيديو المطلوب في مشغل VLC لانقاذ تلقائيا لا يزال الإطارات مرة كل دقيقة 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم يتم قياس القطر باستخدام هذه السفينةالصور. أولا، يتم فتح برنامج يماغيج (NIH). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم يتم فتح الأطر التي سوف تزال في قياس يماغيج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عن طريق اختيار &quot;تحليل&quot; القائمة، &quot;تعيين القياسات&quot; ثم يتم فتح جميع المربعات ودون رادع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المقبل، يتم تحديد أداة خط مستقيم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اختصار لوحة المفاتيح &quot;السيطرة +&quot; يستخدم لتكبير حسب الحاجة ويتم وضع خط عمودي على مسار السفينة لقياس قطر السفينة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وأخيرا، يتم الحصول على طول السفينة عن طريق اختيار &quot;تحليل&quot; القائمة ثم &quot;التدبير&quot; (CTRL + M) للحصول على طول السفينة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم تكرار هذه العملية على الأقل ثلاث مرات وبلغ متوسط ​​قياس لقياس كل سفينة في كل إطار يزال. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وتطبيع قطر السفينة في كل نقطة من الوقت لخط الأساس قطر السفينة حتى يمكن إجراء المقارنات باستخدام الفئران متعددة. للقيام بذلك، استخدم الصيغة الحالية قطر / قطر × خط الأساس 100٪ لحساب قطر خط الأساس٪ من كل سفينة. </li></ol>

<ol>
	<li>Levasseur, J. E., Wei, E. P., Raper, A. J., Kontos, A. A., Patterson, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detailed+description+of+a+cranial+window+technique+for+acute+and+chronic+experiments.">Detailed description of a cranial window technique for acute and chronic experiments.</a> Stroke. 6, 308-317 (1975).</li><li>Baumbach, G. L., Dobrin, P. B., Hart, M. N., Heistad, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanics+of+cerebral+arterioles+in+hypertensive+rats.">Mechanics of cerebral arterioles in hypertensive rats.</a> Circ. Res. 62, 56-64 (1988).</li><li>Regrigny, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+melatonin+on+rat+pial+arteriolar+diameter+in+vivo.">Effects of melatonin on rat pial arteriolar diameter in vivo.</a> Br. J. Pharmacol. 127, 1666-1670 (1999).</li><li>Mecca, A. P., O'Connor, T. E., Katovich, M. J., Sumners, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candesartan+pretreatment+is+cerebroprotective+in+a+rat+model+of+endothelin-1-induced+middle+cerebral+artery+occlusion.">Candesartan pretreatment is cerebroprotective in a rat model of endothelin-1-induced middle cerebral artery occlusion.</a> Exp. Physiol. 94, 937-946 (2009).</li><li>Mecca, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebroprotection+by+angiotensin-(1-7)+in+endothelin-1-induced+ischaemic+stroke.">Cerebroprotection by angiotensin-(1-7) in endothelin-1-induced ischaemic stroke.</a> Exp. Physiol. 96, 1084-1096 (2011).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

وباختصار، هذه النافذة إعداد الجمجمة تقنية متعددة جدا ويمكن تغييره لتلبية احتياجات العديد من التجارب مع تعديلات طفيفة 4، 5. على سبيل المثال، رصد نجحنا تدفق الدم الدماغي في فروع محددة باستخدام الليزر MCA دوبلر flowmetry التركيز مباشرة على الشريان الدماغي تصور من خلال ?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td><td> التعليقات (اختياري) </td></tr><tr><td> استنشاق التخدير النظام </td><td> VetEquip شركة، بليسانتون، CA، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td> 901806 </td><td></td></tr><tr><td> Isoflurane مخدر </td><td> الصيدلانيات باكستر، ديرفيلد، IL، USA </td><td> 1001936060 </td><td></td></tr><tr><td> نظام الحيوانات الصغيرة التجسيمي </td><td> ديفيد KOPF الصكوك، Tujunga، CA، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td> 900 </td><td></td></tr><tr><td> غير تمزق القضبان الأذن، الجرذ </td><td> ديفيد KOPF الصكوك، Tujunga، CA، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td> 957 </td><td></td></tr><tr><td> الفئران رئيس التخدير الغاز حامل </td><td> ديفيد KOPF الصكوك، Tujunga، CA، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td> 1929 </td><td></td></tr><tr><td> BAT-12 ميزان حرارة مسبار مجهري </td><td> العالم آلات دقيقة، وشركة، ساراسوتا، FL، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td> BAT-12 </td><tد&gt; </td></tr><tr><td> T / PUMP، غطاء حراري </td><td> صناعات Gaymar، وشركة، بستان حديقة، NY، USA </td><td> T / PUMP، TP600 </td><td></td></tr><tr><td> Metzenbaum مقص </td><td> العالم آلات دقيقة، وشركة، ساراسوتا، FL، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td> 501254 </td><td></td></tr><tr><td> ملقط القزحية </td><td> العالم آلات دقيقة، وشركة، ساراسوتا، FL، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td> 15915 </td><td></td></tr><tr><td> البلدغ الكامشات المشبك </td><td> العالم آلات دقيقة، وشركة، ساراسوتا، FL، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td> 14119-G </td><td></td></tr><tr><td> 10 حقنة ميكرولتر 26-gaugue </td><td> العالم آلات دقيقة، وشركة، ساراسوتا، FL، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td> SGE010RNS </td><td></td></tr><tr><td> Bovie، الكي درجة حرارة عالية طقم </td><td> العالم آلات دقيقة، وشركة، ساراسوتا، FL، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td> 500392 </td><td></td></tr><tr><td> ملقط الأسنان الفئران 0،12 </td><td> Stotz </td><td> E1811 </td><td></td></tr><tr><td> محرك صغروي الحفر </td><td> Stoelting،الخشب دايل، IL، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td> 51449 </td><td></td></tr><tr><td> 0.8 مم بر حفر الجولة </td><td> Roboz الجراحية الصك المحدودة، وشركة، غايثرسبيرغ، MD، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td> RS-6280C-1 </td><td></td></tr><tr><td> STORZ بون خياطة ملقط </td><td> باوش ومب و، وشركة، روتشستر، نيويورك، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td></td><td></td></tr><tr><td> النايلون خياطة، حجم 3،0 </td><td> احة، Mettawa، IL، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td> MV-663 </td><td></td></tr><tr><td> القطن مسحات </td><td> فيشر العلمية، بتسبرغ، PA، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td> 22-029-488 </td><td></td></tr><tr><td> Puralube العين مرهم </td><td> فيشر العلمية، بتسبرغ، PA، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td> NC0138063 </td><td></td></tr><tr><td> كليبرز الشعر الكهربائية </td><td> اوستر، بروفيدانس، رود آيلند، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td> 78005-301 </td><td></td></tr><tr><td> ET-1 مخففة إلى 80 μ M تركيز في برنامج تلفزيوني </td><td> الببتيد الأمريكية، سانيفيل، CA، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td> 88-1-10A </td><td></td></tr><tr><td> الكلورهيكسيدين، 2٪ </td&gt; <td> Agrilabs، وسانت جوزيف، MO، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td> 1040، القس 6-06، NAC رقم: 10580322 </td><td></td></tr><tr><td> المجهر الجراحي </td><td> SEILER الصك والتصنيع، وسانت لويس، MO، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td> تطور xR6 </td><td></td></tr><tr><td> سوني هاندي كام </td><td> سوني، ميناتو، طوكيو، اليابان </td><td> HDR-SR12 </td><td></td></tr><tr><td> إضاءة الألياف البصرية </td><td> TechniQuip شركة، ليفرمور، CA، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td> FO1-150 </td><td></td></tr><tr><td> VLC وسائل الاعلام لاعب </td><td> (باريس، فرنسا) </td><td></td><td></td></tr><tr><td> الصورة J البرمجيات </td><td> الولايات المتحدة المعاهد الوطنية للصحة في بيثيسدا، MA، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

utilizing a cranial window to visualize the middle cerebral artery during endothelin-1 induced middle cerebral artery occlusion

إنشاء نافذة الجمجمة هو الأسلوب الذي يسمح التصور المباشر الهياكل على سطح القشرية من الدماغ 1-3. لا يمكن أن يؤديها هذه التقنية في العديد من المواقع التي تغمر المخ الفئران، ولكن هو الأكثر بسهولة نفذت من خلال خلق قطع القحف على العظام يمكن الوصول إليها بسهولة أو الجبهي الجداري. في معظم الأحيان، وقد استخدمنا هذه التقنية بالاشتراك مع endothelin-1 الشريان المخي الأوسط نموذج انسداد السكتة الدماغية لتحديد التغيرات في الشريان المخي الأوسط قطر السفينة التي تحدث مع الحقن من 1-endothelin في لحمة الدماغ المتاخمة للMCA القريبة 4، 5. من أجل تصور الجزء القريب من خلال MCA يسببها endothelin MCAO -1، نستخدم تقنية لإنشاء إطار الجمجمة عن طريق العظم الصدغي على الجانب الوحشي من الجمجمة الفئران (الشكل 1). يمكن تصور الشرايين الدماغية إما مع أو الجافية سليمة مع قطعي الجافية وretraالمديرية. الأكثر شيوعا، نترك سليمة الجافية خلال التصور منذ endothelin-1 MCAO بفعل ينطوي على تسليم الببتيد vasoconstricting في لحمة الدماغ. هذا يتجاوز الحاجة إلى شق الجافية مباشرة عبر السفن تصور لتسليم المخدرات. وهذا البروتوكول تصف كيفية إنشاء إطار لتصور الشرايين القحفية الدماغية على نحو تدريجي، وكذلك كيفية تجنب الكثير من المزالق المحتملة المتصلة بهذا الأسلوب.

صور ثابتة مأخوذة من عرض الفيديو الملتقط أن التغيير في القطر الشريان الدماغي بعد ET-1 يمكن حقن تقديره بسهولة باستخدام هذه التقنية نافذة الجمجمة (الشكل 2). في غضون دقائق من حقن ET-1، سوف تبدأ في السفينة انقباض. في نهاية المطاف سوف تكون الأوعية الصعب تصور وأنسجة الم?...

Watch this Scientific Journal Video about Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion at JoVE.com

Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion

هذه المقالة طريقة لتصور الشرايين الدماغية الفئران من خلال نافذة الجمجمة باستخدام قطع القحف الزمنية لعرض أجزاء القريبة من الشريان الدماغي الأوسط (<strong&gt; الشكل 1</strong&gt;). ويمكن الجمع بين هذه الطريقة تنوعا مع تقنيات مختلفة لاستخدام العقاقير لقياس التفاعل الدماغي الشريان<em&gt; في الجسم الحي</em&gt;.

الاستفادة من وجود نافذة القحف لتصور الشريان الدماغي الأوسط خلال Endothelin-1 انسداد الشريان الدماغي الأوسط المستحثة

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be ...

utilizing-cranial-window-to-visualize-middle-cerebral-artery-during

Research

JoVE Journal

Medicine

14.8K Views.  University of Florida. هذه المقالة طريقة لتصور الشرايين الدماغية الفئران من خلال نافذة الجمجمة باستخدام قطع القحف الزمنية لعرض أجزاء القريبة من الشريان الدماغي الأوسط ( الشكل 1). ويمكن الجمع بين هذه الطريقة تنوعا مع تقنيات مختلفة لاستخدام العقاقير لقياس التفاعل الدماغي ا...

Video: Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion

Modeling Stroke in Mice - Middle Cerebral Artery Occlusion with the Filament Model

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are very limited. To meet the need for novel therapeutic approaches, experimental stroke research frequently employs rodent models of focal cerebral ischaemia. Most researchers use permanent or transient occlusion of the middle cerebral artery (MCA) in mice or rats.
Proximal occlusion of the middle cerebral artery (MCA) via the intraluminal suture technique (so called filament or suture model) is probably the most frequently used model in experimental stroke research. The intraluminal MCAO model offers the advantage of inducing reproducible transient or permanent ischaemia of the MCA territory in a relatively non-invasive manner. Intraluminal approaches interrupt the blood flow of the entire territory of this artery. Filament occlusion thus arrests flow proximal to the lenticulo-striate arteries, which supply the basal ganglia. Filament occlusion of the MCA results in reproducible lesions in the cortex and striatum and can be either permanent or transient. In contrast, models inducing distal (to the branching of the lenticulo-striate arteries) MCA occlusion typically spare the striatum and primarily involve the neocortex. In addition these models do require craniectomy. In the model demonstrated in this article, a silicon coated filament is introduced into the common carotid artery and advanced along the internal carotid artery into the Circle of Willis, where it blocks the origin of the middle cerebral artery. In patients, occlusions of the middle cerebral artery are among the most common causes of ischaemic stroke. Since varying ischemic intervals can be chosen freely in this model depending on the time point of reperfusion, ischaemic lesions with varying degrees of severity can be produced. Reperfusion by removal of the occluding filament at least partially models the restoration of blood flow after spontaneous or therapeutic (tPA) lysis of a thromboembolic clot in humans.
In this video we will present the basic technique as well as the major pitfalls and confounders which may limit the predictive value of this model.

Filamentous occlusion of the Middle cerebral artery is a common model for studying ischemic stroke in mice.

السكتة الدماغية النمذجة في الفئران -- الشرق انسداد الشريان الدماغي مع نموذج الشعيرة

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are ...

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the brain (ischemic stroke) 2. Since most ischemic strokes (~80%) occur in the territory of middle cerebral artery (MCA) 3, many animal stroke models that have been developed have focused on this artery. The intraluminal monofilament model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) involves the insertion of a surgical filament into the external carotid artery and threading it forward into the internal carotid artery (ICA) until the tip occludes the origin of the MCA, resulting in a cessation of blood flow and subsequent brain infarction in the MCA territory 4. The technique can be used to model permanent or transient occlusion 5. If the suture is removed after a certain interval (30 min, 1 h, or 2 h), reperfusion is achieved (transient MCAO); if the filament is left in place (24 h) the procedure is suitable as a model of permanent MCAO. This technique does not require craniectomy, a neurosurgical procedure to remove a portion of skull, which may affect intracranial pressure and temperature 6. It has become the most frequently used method to mimic permanent and transient focal cerebral ischemia in rats and mice 7,8. To evaluate the extent of cerebral infarction, we stain brain slices with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to identify ischemic brain tissue 9. In this video, we demonstrate the MCAO method and the determination of infarct size by TTC staining.

We demonstrate in the video a method for producing a middle cerebral artery occlusion in adult mice using an intraluminal monofilament. We also show how to evaluate the extent of cerebral infarction by 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining.

نموذج الفأر من انسداد الشريان الدماغي الأوسط

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

The Application Of Permanent Middle Cerebral Artery Ligation in the Mouse

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to develop suitable animal models to study the events that unfold during ischemic insult. These techniques include transient or permanent, focal or global ischemia models using many different animal models, with the most common being rodents.
The permanent MCA ligation method which is also referred as pMCAo in the literature is used extensively as a focal ischemia model in rodents 1-6. This method was originally described for rats by Tamura et al. in 1981 7. In this protocol a craniotomy was used to access the MCA and the proximal regions were occluded by electrocoagulation. The infarcts involve mostly cortical and sometimes striatal regions depending on the location of the occlusion. This technique is now well established and used in many laboratories 8-13. Early use of this technique led to the definition and description of &#x201C;infarct core&#x201D; and &#x201C;penumbra&#x201D; 14-16, and it is often used to evaluate potential neuroprotective compounds 10, 12, 13, 17. Although the initial studies were performed in rats, permanent MCA ligation has been used successfully in mice with slight modifications 18-20 .
This model yields reproducible infarcts and increased post-survival rates. Approximately 80% of the ischemic strokes in humans happen in the MCA area 21 and thus this is a very relevant model for stroke studies. Currently, there is a paucity of effective treatments available to stroke patients, and thus there is a need for good models to test potential pharmacological compounds and evaluate physiological outcomes. This method can also be used for studying intracellular hypoxia response mechanisms in vivo. 
Here, we present the MCA ligation surgery in a C57/BL6 mouse. We describe the pre-surgical preparation, MCA ligation surgery and 2,3,5 Triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining for quantification of infarct volumes.

Middle cerebral artery (MCA) ligation is a technique to study focal cerebral ischemia in animal models. In this method, the middle cerebral artery is exposed by craniotomy and ligated by cauterization. This method gives highly reproducible infarct volumes and increased post-operative survival rates compared to other methods available.

تطبيق الربط الدائم الشريان المخي الأوسط في الماوس

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to ...

Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in 20091, 2. Several models of cerebral ischemia have been developed to mimic the human condition of stroke. It has been suggested that up to 80% of all strokes result from ischemic damage in the middle cerebral artery (MCA) area3. In the early 1990s, endothelin-1 (ET-1) 4 was used to induce ischemia by applying it directly adjacent to the surface of the MCA after craniotomy. Later, this model was modified 5 by using a stereotaxic injection of ET-1 adjacent to the MCA to produce focal cerebral ischemia. The main advantages of this model include the ability to perform the procedure quickly, the ability to control artery constriction by altering the dose of ET-1 delivered, no need to manipulate the extracranial vessels supplying blood to the brain as well as gradual reperfusion rates that more closely mimics the reperfusion in humans5-7. On the other hand, the ET-1 model has disadvantages that include the need for a craniotomy, as well as higher variability in stroke volume8. This variability can be reduced with the use of laser Doppler flowmetry (LDF) to verify cerebral ischemia during ET-1 infusion. Factors that affect stroke variability include precision of infusion and the batch of the ET-1 used6. Another important consideration is that although reperfusion is a common occurrence in human stroke, the duration of occlusion for ET-1 induced MCAO may not closely mimic that of human stroke where many patients have partial reperfusion over a period of hours to days following occlusion9, 10. This protocol will describe in detail the ET-1 induced MCAO model for ischemic stroke in rats. It will also draw attention to special considerations and potential drawbacks throughout the procedure.

Several animal models of cerebral ischemia have been developed to simulate the human condition of stroke. This protocol describes the endothelin-1 (ET-1) induced middle cerebral artery occlusion (MCAO) model for ischemic stroke in rats. In addition, important considerations, advantages, and shortcomings of this model are discussed.

Endothelin-1 المستحثة انسداد الشريان الدماغي الأوسط نموذج للالسكتة الدماغية مع التوجيه بالليزر Flowmetry دوبلر في الجرذ

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in ...

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal models of acute ischemic stroke allows to confirm successful arterial occlusion and exclude subarachnoid hemorrhage. Cerebral perfusion monitoring can also be used to study intracranial collateral circulation, which is emerging as a powerful determinant of stroke outcome and a possible therapeutic target. Despite a recognized role of Laser Doppler perfusion monitoring as part of the current guidelines for experimental cerebral ischemia, a number of technical difficulties exist that limit its widespread use. One of the major issues is obtaining a secure and prolonged attachment of a deep-penetration Laser Doppler probe to the animal skull. In this video, we show our optimized system for cerebral perfusion monitoring during transient middle cerebral artery occlusion by intraluminal filament in the rat. We developed in-house a simple method to obtain a custom made holder for twin-fibre (deep-penetration) Laser Doppler probes, which allow multi-site monitoring if needed. A continuous and prolonged monitoring of cerebral perfusion could easily be obtained over the intact skull.

Cerebral perfusion monitoring has been demonstrated to improve accuracy in ischemic stroke models. Technical difficulties often limit the use of this essential tool for cerebrovascular research. In this video, an optimized system is shown to obtain a single or multi-site hemodynamic monitoring during intraluminal middle cerebral artery occlusion in rats.

الأمثل نظام لرصد الإرواء الدماغي في نموذج الفئران من السكتة الدماغية داخل اللمعة انسداد الشريان الدماغي الأوسط

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic stroke. However, the use of tPA is limited by its narrow therapeutic window and by increased risk of hemorrhagic transformation. There is an urgent need to develop suitable stroke models to study new thrombolytic agents and strategies for treatment of ischemic stroke. At present, two major types of ischemic stroke models have been developed in rats and mice: intraluminal suture MCAO and embolic MCAO. Although MCAO models via the intraluminal suture technique have been widely used in mechanism-driven stroke research, these suture models do not mimic the clinical situation and are not suitable for thrombolytic studies. Among these models, the embolic MCAO model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical investigation of thrombolytic therapy. This embolic model was first developed in rats by Overgaard et al.1 in 1992 and further characterized by Zhang et al. in 19972. Although embolic MCAO has gained increasing attention, there are technical problems faced by many laboratories. To meet increasing needs for thrombolytic research, we present a highly reproducible model of embolic MCAO in the rat, which can develop a predictable infarct volume within the MCA territory. In brief, a modified PE-50 tube is gently advanced from the external carotid artery (ECA) into the lumen of the internal carotid artery (ICA) until the tip of the catheter reaches the origin of the MCA. Through the catheter, a single homologous blood clot is placed at the origin of the MCA. To identify the success of MCA occlusion, regional cerebral blood flow was monitored, neurological deficits and infarct volumes were measured. The techniques presented in this paper should help investigators to overcome technical problems for establishing this model for stroke research.

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

In this paper, we demonstrate a standard method for producing an embolic middle cerebral artery occlusion with homologous blood clots (fibrin-rich) in adult rat. This model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical study of thrombolytic therapy for ischemic stroke.

صمي الأوسط انسداد الشريان الدماغي (MCAO) لالدماغية السكتة الدماغية مع مثلي تجلط الدم في الجرذان

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic ...

Quantification of Neurovascular Protection Following Repetitive Hypoxic Preconditioning and Transient Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

Experimental animal models of stroke are invaluable tools for understanding stroke pathology and developing more effective treatment strategies. A 2 week protocol for repetitive hypoxic preconditioning (RHP) induces long-term protection against central nervous system (CNS) injury in a mouse model of focal ischemic stroke. RHP consists of 9 stochastic exposures to hypoxia that vary in both duration (2 or 4 hr) and intensity (8% and 11% O2). RHP reduces infarct volumes, blood-brain barrier (BBB) disruption, and the post-stroke inflammatory response for weeks following the last exposure to hypoxia, suggesting a long-term induction of an endogenous CNS-protective phenotype. The methodology for the dual quantification of infarct volume and BBB disruption is effective in assessing neurovascular protection in mice with RHP or other putative neuroprotectants. Adult male Swiss Webster mice were preconditioned by RHP or duration-equivalent exposures to 21% O2 (i.e. room air). A 60 min transient middle cerebral artery occlusion (tMCAo) was induced 2 weeks following the last hypoxic exposure. Both the occlusion and reperfusion were confirmed by transcranial laser Doppler flowmetry. Twenty-two hr after reperfusion, Evans Blue (EB) was intravenously administered through a tail vein injection. 2 hr later, animals were sacrificed by isoflurane overdose and brain sections were stained with 2,3,5- triphenyltetrazolium chloride (TTC). Infarcts volumes were then quantified. Next, EB was extracted from the tissue over 48 hr to determine BBB disruption after tMCAo. In summary, RHP is a simple protocol that can be replicated, with minimal cost, to induce long-term endogenous neurovascular protection from stroke injury in mice, with the translational potential for other CNS-based and systemic pro-inflammatory disease states.

This protocol describes repetitive hypoxic preconditioning, or brief exposures to systemic hypoxia that reduce infarct volumes and blood-brain barrier disruption following transient middle cerebral artery occlusion in mice. It also details dual quantification of infarct volume and blood-brain barrier disruption after stroke to assess the efficacy of neurovascular protection.

الكمي لحماية عائية عصبية بعد المتكرر نقص الأوكسجين شروط مسبقة وعابر الأوسط الشريان الدماغي انسداد في الفئران

Experimental animal models of stroke are invaluable tools for understanding stroke pathology and developing more effective treatment strategies. A 2 week ...

Performing Permanent Distal Middle Cerebral with Common Carotid Artery Occlusion in Aged Rats to Study Cortical Ischemia with Sustained Disability

Stroke typically occurs in elderly people with a range of comorbidities including carotid (or other arterial) atherosclerosis, high blood pressure, obesity and diabetes. Accordingly, when evaluating therapies for stroke in animals, it is important to select a model with excellent face validity. Ischemic stroke accounts for 80% of all strokes, and the majority of these occur in the territory of the middle cerebral artery (MCA), often inducing infarcts that affect the sensorimotor cortex, causing persistent plegia or paresis on the contralateral side of the body. We demonstrate in this video a method for producing ischemic stroke in elderly rats, which causes sustained sensorimotor disability and substantial cortical infarcts. Specifically, we induce permanent distal middle cerebral artery occlusion (MCAO) in elderly female rats by using diathermy forceps to occlude a short segment of this artery. The carotid artery on the ipsilateral side to the lesion was then permanently occluded and the contralateral carotid artery was transiently occluded for 60 min. We measure the infarct size using structural T2-weighted magnetic resonance imaging (MRI) at 24 hr and 8 weeks after stroke. In this study, the mean infarct volume was 4.5% &#177; 2.0% (standard deviation) of the ipsilateral hemisphere at 24 hr (corrected for brain swelling using Gerriet&#8217;s equation, n = 5). This model is feasible and clinically relevant as it permits the induction of sustained sensorimotor deficits, which is important for the elucidation of pathophysiological mechanisms and novel treatments.

Here we present a protocol to produce permanent distal middle cerebral artery occlusion in elderly female rats with simultaneous occlusion of the carotid arteries to generate large cortical infarcts and sustained deficits. We show confirmation of the lesion size using structural MRI at 24 hr and 8 weeks after stroke.

أداء الدائم القاصي الأوسط الدماغي مع السباتي المشترك انسداد الشريان في الجرذان المسنين لدراسة القشرية نقص التروية ذوي الإعاقة المستديمة

Stroke typically occurs in elderly people with a range of comorbidities including carotid (or other arterial) atherosclerosis, high blood pressure, ...

Surgical Approach for Middle Cerebral Artery Occlusion and Reperfusion Induced Stroke in Mice

Stroke is a leading cause of death worldwide and continues to be one of the major causes of long-term adult disabilities. About 87% of strokes are ischemic in origin and occur in the territory of the middle cerebral artery (MCA). Currently the only Food and Drug Administration (FDA) approved drug for the treatment of this devastating disease is tissue plasminogen activator (tPA). However, tPA has a small therapeutic window for administration (3 - 6 hr), and is only effective in 4% of the patients who actually receive it. Current research focuses on understanding the pathophysiology of stroke in order to find potential therapeutic targets. Thus, reliable models are crucial, and the MCA occlusion (MCAo) model (also termed the intraluminal filament or suture model) is deemed to be the most clinically relevant surgical model of ischemic stroke, and is fairly non-invasive and easily reproducible. Typically the MCAo model is used with rodents, especially with mice due to all the genetic variations available for this species. Here we describe (and present in the video) how to successfully perform the MCAo model (with reperfusion) in mice to generate reliable and reproducible data.

In order to understand the pathophysiology of stroke, it is important to use reliable models. This paper will describe one of the most frequently used stroke models in mice, termed the middle cerebral artery occlusion (MCAo) model (also termed the intraluminal filament or suture model) with reperfusion.

نهج الجراحي لانسداد الشريان الدماغي الأوسط وضخه المستحثة السكتة الدماغية في الفئران

Stroke is a leading cause of death worldwide and continues to be one of the major causes of long-term adult disabilities. About 87% of strokes are ...

Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Model of Neonatal Stroke in P10 Rats

A number of animal models have been used to study hypoxic-ischemic injury, traumatic injury, global hypoxia, or permanent ischemia in both the immature and mature brain. Stroke occurs commonly in the perinatal period in humans, and transient ischemia-reperfusion is the most common form of stroke in neonates. The reperfusion phase is a critical component of injury progression, which occurs over a period of days to weeks, and of the endogenous response to injury. This postnatal day 10 (p10) rat model of transient middle cerebral artery occlusion (tMCAO) creates a unilateral, non-hemorrhagic focal ischemia-reperfusion injury that can be utilized to study the mechanisms of focal injury and repair in the full-term-equivalent brain. The injury pattern that is produced by tMCAO is consistent and highly reproducible and can be confirmed with MRI or histological analyses. The severity of injury can be manipulated through changes in occlusion time and other methods that will be discussed.

Neonatal stroke is a significant cause of early brain injury requiring a translational model with consistent focal injury patterns and high reproducibility in order to enable study. This study describes the detailed surgical procedure for creating a non-hemorrhagic, unilateral focal ischemia-reperfusion injury in full-term-equivalent rodents.

عابر الدماغي الأوسط الشريان انسداد نموذج من السكتة الدماغية حديثي الولادة في الفئران P10

A number of animal models have been used to study hypoxic-ischemic injury, traumatic injury, global hypoxia, or permanent ischemia in both the immature ...