이 작품은 미국 심장 협회 상급 동남아 계열 (09GRNT2060421), 미국 의학 협회에서와 플로리다 임상 병진 과학 연구소의 대학에서 보조금에 의해 지원되었다. 아담 메카는 NIH / NINDS, NRSA predoctoral 동료 (F30 NS-060335)입니다. 로버트 Regenhardt은 고혈압의 플로리다 종합 교육 프로그램의 대학 (T32 HL-083810)에서 predoctoral 교제 지원을 받았습니다.

이 프로토콜은 플로리다 대학 기관 동물 케어 및 사용위원회 (IACUC)에 의해 승인되고 준수는 &quot;케어에 대한 가이드 및 실험실 동물의 사용&quot;(여덟째 판, 과학 국립 아카데미, 2011)되었다. 자료 <ol><li> 동물 : 수술시 250~300그램 무게 여덟 주 된, 남성, Sprague Dawley 쥐 (찰스 강 (Charles River)의 농장, 윌 밍턴, 미국 MA,). </li><li> 마취 <ol class="lalpha"><li> 흡입 마취 시스템 (VetEquip 주식회사, Pleasanton, CA, USA) </li><li> Isoflurane 마취 (박스터의 조제, 디어 필드, IL, USA) </li></ol></li><li> Stereotaxic 시스템 (데이비드 Kopf 기기, Tujunga, CA, USA) <ol class="lalpha"><li> 작은 동물 stereotaxic 시스템 </li><li> 쥐에 대한 비 파열 귀 바 </li><li> 쥐에 대한 가스 마취 헤드 홀더 </li></ol></li><li> 온도 조절 <ol class="lalpha"><li> BAT-12 microprobe 온도계 (세계정밀 기기 주식회사, 사라 소타, FL, USA) </li><li> T / PUMP, TP600 열 담요 (Gaymar 산업 주식회사, 오차드 파크, NY, USA) </li></ol></li><li> 수술기구 <ol class="lalpha"><li> Metzenbaum 가위, 아이리스 포셉, 겸자의 견인기, 26 게이지 beveled 바늘, Bovie 소작 키트 (세계 정밀 계측기, 주식회사, 사라 소타, FL, USA)을 갖춘 10 μl 주사기 </li><li> Micromotor 드릴 (Stoelting, 우드 데일, IL, USA) </li><li> 0.8 mm 원형 드릴 버 (Roboz 외과 인스트루먼트 (주), 주식회사, 게이스 버그, MD, USA) </li><li> STORZ 본 Suturing 집게 (Bausch Lomb과 주식회사, 로체스터, NY, USA) </li></ol></li><li> 외과 용품 <ol class="lalpha"><li> 3.0 나일론 봉합 (오아시스 (Oasis), Mettawa, IL, USA) </li><li> 면봉, Puralube 눈 연고 (피셔 과학, 피츠버그, PA, USA) </li><li> 외과 포인트와 스트립 (Medtronic Xomed 주식회사, 잭슨빌, FL, USA) </li><li> 전기 헤어 가위 (Oster, 섭리, RI, USA) </li></ol></lI&gt; <li> 화학 제품 <ol class="lalpha"><li> 엔도 테린-1 (미국 펩타이드, 서니 베일, CA, USA) </li><li> Chlorhexidine 2% (Agrilabs, 세인트 조셉, MO, USA) </li></ol></li><li> 시각화 장비 <ol class="lalpha"><li> 수술 현미경 (Seiler 악기 및 제조, 세인트 루이스, MO, USA) </li><li> 소니 Handycam HDR-SR12 (소니, 미나토, 도쿄, 일본) </li><li> 광섬유 조명기 (TechniQuip 공사, 리버모어, CA, USA) </li></ol></li><li> 선박 직경의 측정 <ol class="lalpha"><li> VLC 미디어 플레이어 (파리, 프랑스) </li><li> 이미지 J 소프트웨어 (ImageJ 1.42q 소프트웨어, 건강의 미국 국립 연구소, 베데스다, MA, USA) </li></ol></li></ol> 1. 사전 수술 단계 <ol><li> 수술에 앞서, 쥐가 물과 쥐 수유에 무료로 액세스 할 수있는 12시 12분 어두운 / 밝은주기에 따라 자리 잡고 있습니다. </li><li> 마취는 유도 챔버 100 % O 2 기체 혼합물에서 isoflurane 4%을 유도하고 있습니다. </li><li> 까마귀<html> 머리 N은 전기 헤어 가위로 면도 있습니다. </li><li> 쥐가 온도 조절 운영면 (열 담요)과 머리는 가스 마취 얼굴 마스크의 위치로 시작 stereotactic 장치에 배치됩니다에 누워 흡수 패드에 발생하기 쉬운 위치에 배치됩니다. </li><li> 다음으로 귀 바는 삽입 강화하고 있습니다. </li><li> 절차 마취 동안 백퍼센트 O 2 기체 혼합물에서 isoflurane 2퍼센트로 유지됩니다. </li><li> Opthalmic 윤활유 연고는 양쪽 눈에 적용되며, 눈꺼풀이 수술하는 동안 눈 건조를 방지하기 위해 폐쇄됩니다. </li><li> 직장 온도 프로브는 ± 0.5은 ° C. 37 일정한 동물 코어 온도를 유지하기 위해 삽입 </li><li> stereotaxic 장치에 단단히 개최 anesthetized 쥐의 머리와 외과 영역은 chlorhexidine과 염분을 세 번 교대로 세안합니다. </li></ol> 2. 사전 두개골 창 준비 ontent &quot;&gt; 전에 두개골 창을 만들려면, 쥐은 다른 필요한 하드웨어 주입하여 실험을 준비해야하고 필요한 수술 절차를 받아야합니다.이 프로토콜의 경우, 우리는 이전에 엔도 테린-1 (동부 표준시 -에 대한 가이드 캐뉼라를 이식 한 1) 유도 MCAO는 제목 동반자 간행물에 표시되는 &quot;쥐의 레이저 도플러 Flowmetry 안내와 허혈성 뇌졸중에 대한 엔도 테린-1 유도 중간 뇌 동맥 폐색 모델.&quot; 3. 두개골 창 창조 가이드 캐뉼라 또는 실험에 필요한 장비의 배치 후, 두개골 창이 직접 행정 절차를 수행하는 동안 중간 대뇌 동맥의 근위 부분을 시각화 생성됩니다. <ol><li> 첫째, 가위는 medially 시작하여 측면 작업 temporalis 근육 위에 놓인 피부를 절개하는 데 사용됩니다. </li><li> temporalis 근육이 electrocautery를 사용하여 bisected하고 visua 3.0 나일론 봉합사를 사용하여 철회<html> 관자놀이 뼈의 편평 부분을 lize. </li><li> 이 관자놀이 뼈 오프 반영으로 약 3~4mm 광장은 궤도에 꼬리와 광대뼈 프로세스의베이스에 뛰어난 관자놀이 뼈의 편평 부분에 그려집니다. </li><li> 훈련은 점차적으로 관자놀이 뼈에서 무료로 뼈의 설명 부분을 잘라하는 데 사용됩니다. 주의가 경질 또는 대뇌 피질에 손상을 할수 있기 때문에 훈련에 너무 많은 압력을 적용하지 않도록주의해야한다. </li><li> 멸균 식염수에 자주 린스는 수술 분야의 시각화를 개선하고 두개골의 과열 방지하기 위해 수행됩니다. </li><li> 느슨한 구석에서 시작하여, temoporal 뼈 조각은주의 깊게 경질과 관련된 혈관을 찢어하지 않도록하는 동시에 미세 쥐 - 톱니 집게를 사용하여 제거됩니다. </li><li> 경질은 그대로 남아 있으며, 잔해가 멸균 생리를 사용하여 거리에 헹구어 있습니다. </li></ol> 4. 뇌 동맥 수축의 기록 실시간, 동부 표준시-1 유도 MCAO를 진행 쥐에서 이미지를 캡처하는 방법을 보여줍니다하려면 십t &quot;&gt;이 프로토콜에 사용됩니다. <ol><li> vasoactive 화합물의 응용 프로그램에 이전 기준 동영상은 최소한 1 분에 기록해야합니다. 바늘이 전에 동부 표준시-1 주입에 뇌 실질로 낮아 있지만 된 후에 동부 표준시-1 유도 MCAO를 들어, 기본 녹음이 이루어집니다. </li><li> 주사기 펌프는 주입을위한 시작 1 시간 또는 원하는 종점까지 기록됩니다. 바늘은 초점 비행기의 교란을 방지하기 위해 비디오 녹화 중에 장소에 남아 있습니다. </li><li> 쥐가이 절차에 따라 승인 된 프로토콜에 따라 깊이 anesthetized 및 euthanized해야합니다. </li></ol> 5. 이미지 분석 선박 직경은 시각화 MCA의 어떤 부분에 대해 결정 할 수 있습니다. 예를 들어, 우리는 동부 표준시-1 주입 전후의 시간이 지점에서 선박 직경을 측정 할 수있는 MCA 중 하나 지점을 사용합니다. STI동영상에서 붙인다 프레임은 VLC 미디어 플레이어 (VideoLAN)를 사용하여 1 분 간격으로 캡처됩니다. <ol><li> VLC 플레이어가 설치되어 열립니다. </li><li> 도구 및 다음 환경 설정을 선택하면 설정이 아래 &quot;전체&quot;로 변경되어 &quot;표시 설정.&quot; </li><li> &quot;비디오 메뉴는&quot;왼쪽 사이드 바에서 확장 및 &quot;출력 모듈은&quot;그때 확장됩니다. &quot;장면 필터는&quot;사고 현장 비디오 필터 메뉴를 표시하려면 선택됩니다. </li><li> &quot;장면&quot;는 파일 이름 접두사에 대한 상자에 입력합니다. </li><li> 디렉토리 경로 접두어가 정의됩니다. 여전히 프레임이 저장된 곳입니다. </li><li> 녹화 비율은 여전히​​ 프레임 캡쳐의 원하는 속도에 따라 선택됩니다. 동영상은 초 당 29 프레임, 다음 &quot;1749&quot;(29 프레임 / 초 X 60 초 / 분)에서 캡쳐 된 경우 하나는 여전히 매일 1 분 프레임 저장 상자에 입력해야합니다. 모든 변경 사항은 다음 저장됩니다. </li><li> 원하는 동영상을 자동으로 매일 1 분에 한 번 계속 프레임을 저장하는 VLC 플레이어에서 열립니다. </li><li> 선박 직경은 다음이를 사용하여 측정된다이미지. 첫째, ImageJ 소프트웨어 (NIH)이 열립니다. </li><li> 그럼 당신은 측정 될 수있는 여전히 프레임은 ImageJ에서 열립니다. </li><li> &quot;분석&quot;메뉴를 선택하면, &quot;측정 설정&quot;를 선택한 후 개설되어 있으며 모든 상자의 선택을 취소합니다. </li><li> 다음, 직선 도구가 선택됩니다. </li><li> 키보드 단축키는 &quot;Ctrl 키를 +는&quot;필요에 따라 확대하는 데 사용되며 라인은 혈관 직경을 측정 할 수있는 선박 경로에 수직 배치됩니다. </li><li> 마지막으로, 선박의 길이는 선박의 길이를 얻기 위해 &#39;측정&#39;(CTRL + M) 후 &quot;분석&quot;메뉴를 선택하고이 얻어진다. </li><li> 이 과정은 적어도 세 번 반복하고 각 여전히 프레임 단위로 측정 각 측정 용기에 대한 평균입니다. </li><li> 비교 여러 쥐를 사용하여 만들 수 있도록 각 시점에서 선박 지름이 기준 혈관 직경에 표준화되어 있습니다. 이 작업을 수행하려면 각 선박의 %의 기본 직경을 계산 × 100 %가 공식 현재 직경 / 기본 직경을 사용합니다. </li></ol>

<ol>
	<li>Levasseur, J. E., Wei, E. P., Raper, A. J., Kontos, A. A., Patterson, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detailed+description+of+a+cranial+window+technique+for+acute+and+chronic+experiments.">Detailed description of a cranial window technique for acute and chronic experiments.</a> Stroke. 6, 308-317 (1975).</li><li>Baumbach, G. L., Dobrin, P. B., Hart, M. N., Heistad, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanics+of+cerebral+arterioles+in+hypertensive+rats.">Mechanics of cerebral arterioles in hypertensive rats.</a> Circ. Res. 62, 56-64 (1988).</li><li>Regrigny, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+melatonin+on+rat+pial+arteriolar+diameter+in+vivo.">Effects of melatonin on rat pial arteriolar diameter in vivo.</a> Br. J. Pharmacol. 127, 1666-1670 (1999).</li><li>Mecca, A. P., O'Connor, T. E., Katovich, M. J., Sumners, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candesartan+pretreatment+is+cerebroprotective+in+a+rat+model+of+endothelin-1-induced+middle+cerebral+artery+occlusion.">Candesartan pretreatment is cerebroprotective in a rat model of endothelin-1-induced middle cerebral artery occlusion.</a> Exp. Physiol. 94, 937-946 (2009).</li><li>Mecca, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebroprotection+by+angiotensin-(1-7)+in+endothelin-1-induced+ischaemic+stroke.">Cerebroprotection by angiotensin-(1-7) in endothelin-1-induced ischaemic stroke.</a> Exp. Physiol. 96, 1084-1096 (2011).</li></ol>

관심 없음 충돌이 선언 없습니다.

이 사소한 수정 4, 5 많은 실험의 요구를 충족하기 위해 변경 될 수 있으므로 요약에서이 두개의 창을 준비 기술은 매우 다양한입니다. 예를 들어, 우리는 성공적으로 두개의 창 (메카 AP 2009 2011)을 통해 시각화 뇌동맥에 직접 초점을 레이저 도플러 flowmetry를 사용하여 특정 MCA 지점에서 뇌성 혈액의 흐름을 모니터링하고 있습니다. 또한, 경질 칼에 베인과 유사한 준비는 생체 혈관 반?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 코멘트 (선택 사항) </td></tr><tr><td> 흡입 마취 시스템 </td><td> VetEquip 주식회사, Pleasanton, CA, USA </td><td> 901806 </td><td></td></tr><tr><td> Isoflurane 마취 </td><td> 박스터의 조제, 디어 필드, IL, USA </td><td> 1001936060 </td><td></td></tr><tr><td> 작은 동물 stereotaxic 시스템 </td><td> 데이비드 Kopf 악기, Tujunga, CA, USA </td><td> 900 </td><td></td></tr><tr><td> 비 파열 귀 바, 쥐 </td><td> 데이비드 Kopf 악기, Tujunga, CA, USA </td><td> 957 </td><td></td></tr><tr><td> 쥐 가스 마취 헤드 홀더 </td><td> 데이비드 Kopf 악기, Tujunga, CA, USA </td><td> 1929 </td><td></td></tr><tr><td> BAT-12 microprobe 온도계 </td><td> 세계 정밀 계측기, 주식회사, 사라 소타, FL, 미국 </td><td> BAT-12 </td><tD&gt; </td></tr><tr><td> T / PUMP, 열 담요 </td><td> Gaymar 산업 주식회사, 오차드 파크, NY, USA </td><td> T / PUMP, TP600 </td><td></td></tr><tr><td> Metzenbaum 가위 </td><td> 세계 정밀 계측기, 주식회사, 사라 소타, FL, 미국 </td><td> 501254 </td><td></td></tr><tr><td> 아이리스 포셉 </td><td> 세계 정밀 계측기, 주식회사, 사라 소타, FL, 미국 </td><td> 15,915 </td><td></td></tr><tr><td> 불독 클램프 견인기 </td><td> 세계 정밀 계측기, 주식회사, 사라 소타, FL, 미국 </td><td> 14119-G </td><td></td></tr><tr><td> 10 μl 주사기 26 gaugue </td><td> 세계 정밀 계측기, 주식회사, 사라 소타, FL, 미국 </td><td> SGE010RNS </td><td></td></tr><tr><td> Bovie, 높은 온도 소작 키트 </td><td> 세계 정밀 계측기, 주식회사, 사라 소타, FL, 미국 </td><td> 500392 </td><td></td></tr><tr><td> 쥐의 이빨은 0.12를 포셉 </td><td> Stotz </td><td> E1811 </td><td></td></tr><tr><td> Micromotor 훈련 </td><td> Stoelting,우드 데일, IL, USA </td><td> 51,449 </td><td></td></tr><tr><td> 0.8 mm 원형 드릴 버 </td><td> Roboz 외과 인스트루먼트 (주), 주식회사, 게이스 버그, MD, USA </td><td> RS-6280C-1 </td><td></td></tr><tr><td> STORZ 본 suturing 포셉 </td><td> Bausch Lomb과 주식회사, 로체스터, NY, USA </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 나일론 봉합사, 크기 3.0 </td><td> 오아시스 (Oasis), Mettawa, IL, USA </td><td> MV-663 </td><td></td></tr><tr><td> 면봉 </td><td> 피셔 과학, 피츠버그, PA, 미국 </td><td> 22-029-488 </td><td></td></tr><tr><td> Puralube 눈 연고 </td><td> 피셔 과학, 피츠버그, PA, 미국 </td><td> NC0138063 </td><td></td></tr><tr><td> 전기 헤어 가위 </td><td> Oster, 섭리, RI, USA </td><td> 78005-301 </td><td></td></tr><tr><td> 동부 표준시 - 1 PBS 80 μ의 M 농도로 희석 </td><td> 미국의 펩타이드, 서니 베일, CA, USA </td><td> 88-1 - 10A </td><td></td></tr><tr><td> Chlorhexidine, 2% </td&gt; <td> Agrilabs, 세인트 조셉, MO, USA </td><td> 1040, 목사 6-06, NAC 번호 : 10580322 </td><td></td></tr><tr><td> 외과 현미경 </td><td> Seiler 악기 및 제조, 세인트 루이스, MO, USA </td><td> 진화 xR6 </td><td></td></tr><tr><td> 소니 Handycam </td><td> 소니, 미나토, 도쿄, 일본 </td><td> HDR-SR12 </td><td></td></tr><tr><td> 광섬유 조명기 </td><td> TechniQuip 공사, 리버모어, CA, USA </td><td> FO1-150 </td><td></td></tr><tr><td> VLC 미디어 플레이어 </td><td> (파리, 프랑스) </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 이미지 J 소프트웨어 </td><td> 미국 건강, 베데스다의 국립 연구소 MA, USA </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

utilizing a cranial window to visualize the middle cerebral artery during endothelin-1 induced middle cerebral artery occlusion

두개골 창 창조 1-3 뇌의 대뇌 피질의 표면에 구조를 직접 시각화 할 수있는 방법입니다. 이 기술은 쥐의 뇌를 놓인 여러 지역에서 수행 할 수 있지만, 대부분의 쉽게 쉽게 접근 정면 또는 정수리 뼈를 통해 craniectomy을 생성하여 수행됩니다. 대부분의 자주, 우리는 근위 MCA에 인접한 뇌 실질에 엔도 테린-1의 주입 발생할 중간 대뇌 동맥 혈관 직경의 변화를 정할 허혈성 뇌졸중의 엔도 테린-1 중간 대뇌 동맥 폐색 모델과 함께이 기술을 사용한 4, 5. 엔도 텔린 -1 유도 MCAO 동안 MCA의 가까운 부분을 시각화하기 위해, 우리는 쥐 두개골 (그림 1)의 측면 측면에서 관자놀이 뼈를 두개골 창을 만들 수있는 기술을 사용합니다. 뇌동맥은 경질 그대로 사용하거나 경질 칼에 베인과 retra있는 중 시각화 할 수 있습니다cted. 가장 일반적으로, 우리는 뇌 실질에 vasoconstricting 펩타이드의 전달을 포함 엔도 테린-1 유도 MCAO 이후 시각화 동안 경질 그대로 둡니다. 이 약물 투여에 대한 시각화 혈관을 통해 직접 경질를 절개 할 필요가 우회한다. 이 프로토콜은 물론이 방법에 관한 잠재적 인 함정의 많은 부분을 방지하는 방법으로, 단계 - 현명한 방식으로 뇌성 동맥을 시각화 할 수있는 두개의 창을 만드는 방법을 설명합니다.

아직 캡처 된 비디오 쇼에서 찍힌 사진 그 후 뇌동맥 직경의 변화 동부 표준시-1 주입은 즉시이 두개의 창 기술을 (그림 2)를 사용하여 평가 할 수 있습니다. 동부 표준시-1 분사의 분 이내에 혈관이 수축되기 시작합니다. 결국 혈관 시각화하기 어려울되며 뇌 조직은 창백 될 것입니다. 20 분 후 동부 표준시-1의 효과가 감소하고 혈관은 점차 약 45 분 후 기본 직경로 돌아, 팽창되기 시작?...

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Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion

이 문서는 중간 대뇌 동맥의 근위 부분을보기 위해 시간적 craniectomy를 사용하여 두개의 창문을 통해 쥐 대뇌 동맥을 시각화하는 방법을 설명합니다 (<strong&gt; 그림 1</strong&gt;). 이 다양한 방법 뇌동맥의 반응성을 측정하기 위해 약물 투여의 다양한 기술과 결합 할 수 있습니다<em&gt; 생체 내</em&gt;.

엔도 테린-1 유도 중간 뇌 동맥 폐색 동안 중동 뇌동맥을 시각화하기 위해 두개골 창 활용

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be ...

utilizing-cranial-window-to-visualize-middle-cerebral-artery-during

Research

JoVE Journal

Medicine

14.9K 조회수.  University of Florida. 이 문서는 중간 대뇌 동맥의 근위 부분을보기 위해 시간적 craniectomy를 사용하여 두개의 창문을 통해 쥐 대뇌 동맥을 시각화하는 방법을 설명합니다 ( 그림 1). 이 다양한 방법 뇌동맥의 반응성을 측정하기 위해 약물 투여의 다양한 기술과 결합 할 수 있습니다 생체 내.

비디오: Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the brain (ischemic stroke) 2. Since most ischemic strokes (~80%) occur in the territory of middle cerebral artery (MCA) 3, many animal stroke models that have been developed have focused on this artery. The intraluminal monofilament model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) involves the insertion of a surgical filament into the external carotid artery and threading it forward into the internal carotid artery (ICA) until the tip occludes the origin of the MCA, resulting in a cessation of blood flow and subsequent brain infarction in the MCA territory 4. The technique can be used to model permanent or transient occlusion 5. If the suture is removed after a certain interval (30 min, 1 h, or 2 h), reperfusion is achieved (transient MCAO); if the filament is left in place (24 h) the procedure is suitable as a model of permanent MCAO. This technique does not require craniectomy, a neurosurgical procedure to remove a portion of skull, which may affect intracranial pressure and temperature 6. It has become the most frequently used method to mimic permanent and transient focal cerebral ischemia in rats and mice 7,8. To evaluate the extent of cerebral infarction, we stain brain slices with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to identify ischemic brain tissue 9. In this video, we demonstrate the MCAO method and the determination of infarct size by TTC staining.

We demonstrate in the video a method for producing a middle cerebral artery occlusion in adult mice using an intraluminal monofilament. We also show how to evaluate the extent of cerebral infarction by 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining.

중간 대뇌 동맥 폐색의 마우스 모델

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

연구

의학

Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in 20091, 2. Several models of cerebral ischemia have been developed to mimic the human condition of stroke. It has been suggested that up to 80% of all strokes result from ischemic damage in the middle cerebral artery (MCA) area3. In the early 1990s, endothelin-1 (ET-1) 4 was used to induce ischemia by applying it directly adjacent to the surface of the MCA after craniotomy. Later, this model was modified 5 by using a stereotaxic injection of ET-1 adjacent to the MCA to produce focal cerebral ischemia. The main advantages of this model include the ability to perform the procedure quickly, the ability to control artery constriction by altering the dose of ET-1 delivered, no need to manipulate the extracranial vessels supplying blood to the brain as well as gradual reperfusion rates that more closely mimics the reperfusion in humans5-7. On the other hand, the ET-1 model has disadvantages that include the need for a craniotomy, as well as higher variability in stroke volume8. This variability can be reduced with the use of laser Doppler flowmetry (LDF) to verify cerebral ischemia during ET-1 infusion. Factors that affect stroke variability include precision of infusion and the batch of the ET-1 used6. Another important consideration is that although reperfusion is a common occurrence in human stroke, the duration of occlusion for ET-1 induced MCAO may not closely mimic that of human stroke where many patients have partial reperfusion over a period of hours to days following occlusion9, 10. This protocol will describe in detail the ET-1 induced MCAO model for ischemic stroke in rats. It will also draw attention to special considerations and potential drawbacks throughout the procedure.

Several animal models of cerebral ischemia have been developed to simulate the human condition of stroke. This protocol describes the endothelin-1 (ET-1) induced middle cerebral artery occlusion (MCAO) model for ischemic stroke in rats. In addition, important considerations, advantages, and shortcomings of this model are discussed.

쥐의 레이저 도플러 Flowmetry 안내와 허혈성 뇌졸중에 대한 엔도 테린-1 유도 중간 뇌 동맥 폐색 모델

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in ...

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal models of acute ischemic stroke allows to confirm successful arterial occlusion and exclude subarachnoid hemorrhage. Cerebral perfusion monitoring can also be used to study intracranial collateral circulation, which is emerging as a powerful determinant of stroke outcome and a possible therapeutic target. Despite a recognized role of Laser Doppler perfusion monitoring as part of the current guidelines for experimental cerebral ischemia, a number of technical difficulties exist that limit its widespread use. One of the major issues is obtaining a secure and prolonged attachment of a deep-penetration Laser Doppler probe to the animal skull. In this video, we show our optimized system for cerebral perfusion monitoring during transient middle cerebral artery occlusion by intraluminal filament in the rat. We developed in-house a simple method to obtain a custom made holder for twin-fibre (deep-penetration) Laser Doppler probes, which allow multi-site monitoring if needed. A continuous and prolonged monitoring of cerebral perfusion could easily be obtained over the intact skull.

Cerebral perfusion monitoring has been demonstrated to improve accuracy in ischemic stroke models. Technical difficulties often limit the use of this essential tool for cerebrovascular research. In this video, an optimized system is shown to obtain a single or multi-site hemodynamic monitoring during intraluminal middle cerebral artery occlusion in rats.

Intraluminal 중간 대뇌 동맥 폐색의 쥐 뇌졸중 모델에서 뇌 관류 모니터링에 최적화 된 시스템

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

Permanent Cerebral Vessel Occlusion via Double Ligature and Transection

Stroke is a leading cause of death, disability, and socioeconomic loss worldwide. The majority of all strokes result from an interruption in blood flow (ischemia) 1. Middle cerebral artery (MCA) delivers a great majority of blood to the lateral surface of the cortex 2, is the most common site of human stroke 3, and ischemia within its territory can result in extensive dysfunction or death 1,4,5. Survivors of ischemic stroke often suffer loss or disruption of motor capabilities, sensory deficits, and infarct. In an effort to capture these key characteristics of stroke, and thereby develop effective treatment, a great deal of emphasis is placed upon animal models of ischemia in MCA.
Here we present a method of permanently occluding a cortical surface blood vessel. We will present this method using an example of a relevant vessel occlusion that models the most common type, location, and outcome of human stroke, permanent middle cerebral artery occlusion (pMCAO). In this model, we surgically expose MCA in the adult rat and subsequently occlude via double ligature and transection of the vessel. This pMCAO blocks the proximal cortical branch of MCA, causing ischemia in all of MCA cortical territory, a large portion of the cortex. This method of occlusion can also be used to occlude more distal portions of cortical vessels in order to achieve more focal ischemia targeting a smaller region of cortex. The primary disadvantages of pMCAO are that the surgical procedure is somewhat invasive as a small craniotomy is required to access MCA, though this results in minimal tissue damage. The primary advantages of this model, however, are: the site of occlusion is well defined, the degree of blood flow reduction is consistent, functional and neurological impairment occurs rapidly, infarct size is consistent, and the high rate of survival allows for long-term chronic assessment.

Permanent Cerebral Vessel Occlusion via Double Ligature and Transection

We describe a highly reproducible method for the permanent occlusion of a rodent major cerebral blood vessel. This technique can be accomplished with very little peripheral damage, minimal blood loss, a high rate of long-term survival, and consistent infarct volume commensurate with the human clinical population.

영구적 인 뇌 혈관 폐색<em&gt;를 통해</em&gt; 더블 합자 및 절개

Stroke is a leading cause of death, disability, and socioeconomic loss worldwide. The majority of all strokes result from an interruption in blood flow ...

Lateral Chronic Cranial Window Preparation Enables In Vivo Observation Following Distal Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

Focal cerebral ischemia (i.e., ischemic stroke) may cause major brain injury, leading to a severe loss of neuronal function and consequently to a host of motor and cognitive disabilities. Its high prevalence poses a serious health burden, as stroke is among the principal causes of long-term disability and death worldwide1. Recovery of neuronal function is, in most cases, only partial. So far, treatment options are very limited, in particular due to the narrow time window for thrombolysis2,3. Determining methods to accelerate recovery from stroke remains a prime medical goal; however, this has been hampered by insufficient mechanistic insights into the recovery process. Experimental stroke researchers frequently employ rodent models of focal cerebral ischemia. Beyond the acute phase, stroke research is increasingly focused on the sub-acute and chronic phase following cerebral ischemia. Most stroke researchers apply permanent or transient occlusion of the MCA in mice or rats. In patients, occlusions of the MCA are among the most frequent causes of ischemic stroke4. Besides proximal occlusion of the MCA using the filament model, surgical occlusion of the distal MCA is probably the most frequently used model in experimental stroke research5. Occlusion of a distal (to the branching of the lenticulo-striate arteries) MCA branch typically spares the striatum and primarily affects the neocortex. Vessel occlusion can be permanent or transient. High reproducibility of lesion volume and very low mortality rates with respect to the long-term outcome are the main advantages of this model. Here, we demonstrate how to perform a chronic cranial window (CW) preparation lateral to the sagittal sinus, and afterwards how to surgically induce a distal stroke underneath the window using a craniotomy approach. This approach can be applied for sequential imaging of acute and chronic changes following ischemia via epi-illuminating, confocal laser scanning, and two-photon intravital microscopy.

Lateral Chronic Cranial Window Preparation Enables In Vivo Observation Following Distal Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

Surgical occlusion of a distal middle cerebral artery branch (MCAo) is a frequently used model in experimental stroke research. This manuscript describes the basic technique of permanent MCAo, combined with the insertion of a lateral cranial window, which offers the opportunity for longitudinal intravital microscopy in mice.

측면 만성 두개골 창 준비 활성화<em&gt; 생체</em&gt; 마우스의 말초 중간 대뇌 동맥 폐색에 따라 관측

Focal cerebral ischemia (i.e., ischemic stroke) may cause major brain injury, leading to a severe loss of neuronal function and consequently to a host of ...

신경과학

Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Model of Neonatal Stroke in P10 Rats

A number of animal models have been used to study hypoxic-ischemic injury, traumatic injury, global hypoxia, or permanent ischemia in both the immature and mature brain. Stroke occurs commonly in the perinatal period in humans, and transient ischemia-reperfusion is the most common form of stroke in neonates. The reperfusion phase is a critical component of injury progression, which occurs over a period of days to weeks, and of the endogenous response to injury. This postnatal day 10 (p10) rat model of transient middle cerebral artery occlusion (tMCAO) creates a unilateral, non-hemorrhagic focal ischemia-reperfusion injury that can be utilized to study the mechanisms of focal injury and repair in the full-term-equivalent brain. The injury pattern that is produced by tMCAO is consistent and highly reproducible and can be confirmed with MRI or histological analyses. The severity of injury can be manipulated through changes in occlusion time and other methods that will be discussed.

Neonatal stroke is a significant cause of early brain injury requiring a translational model with consistent focal injury patterns and high reproducibility in order to enable study. This study describes the detailed surgical procedure for creating a non-hemorrhagic, unilateral focal ischemia-reperfusion injury in full-term-equivalent rodents.

P10 쥐에서 신생아 뇌졸중의 과도 중간 대뇌 동맥 폐색 모델

A number of animal models have been used to study hypoxic-ischemic injury, traumatic injury, global hypoxia, or permanent ischemia in both the immature ...

Modeling Stroke in Mice: Transient Middle Cerebral Artery Occlusion via the External Carotid Artery

Stroke is the third most common cause of mortality and the leading cause of acquired adult disability in developed countries. To date, therapeutic options are limited to a small proportion of stroke patients within the first hours after stroke. Novel therapeutic strategies are being extensively investigated, especially to prolong the therapeutic time window. These current investigations include the study of important pathophysiological pathways after stroke, such as post-stroke inflammation, angiogenesis, neuronal plasticity, and regeneration. Over the last decade, there has been increasing concern about the poor reproducibility of experimental results and scientific findings among independent research groups. To overcome the so-called &#8220;replication crisis&#8221;, detailed standardized models for all procedures are urgently needed. As an effort within the &#8220;ImmunoStroke&#8221; research consortium (https://immunostroke.de/), a standardized mouse model of transient middle cerebral artery occlusion (MCAo) is proposed. This model allows the complete restoration of the blood flow upon removal of the filament, simulating the therapeutic or spontaneous clot lysis that occurs in a large proportion of human strokes. The surgical procedure of this &#8220;filament&#8221; stroke model and tools for its functional analysis are demonstrated in the accompanying video.

Different models of middle cerebral artery occlusion (MCAo) are used in experimental stroke research. Here, an experimental stroke model of transient MCAo via the external carotid artery (ECA) is described, which aims to mimic human stroke, in which the cerebrovascular thrombus is removed due to spontaneous clot lysis or therapy.

마우스에서 뇌졸중 모델링: 외부 경동맥을 통한 일시적인 중간 뇌동맥 폐색

Stroke is the third most common cause of mortality and the leading cause of acquired adult disability in developed countries. To date, therapeutic options ...

경두개 중뇌동맥 폐색 마우스 모델 구축

A Modified Transcranial Middle Cerebral Artery Occlusion Model to Study Stroke Outcomes in Aged Mice

In experimental stroke research, middle cerebral artery occlusion (MCAO) with an intraluminal filament is widely used to model ischemic stroke in mice. The filament MCAO model typically exhibits a massive cerebral infarction in C57Bl/6 mice that sometimes includes brain tissue in the territory supplied by the posterior cerebral artery, which is largely due to a high incidence of posterior communicating artery atresia. This phenomenon is considered a major contributor to the high mortality rate observed in C57Bl/6 mice during long-term stroke recovery after filament MCAO. Thus, many chronic stroke studies exploit distal MCAO models. However, these models usually produce infarction only in the cortex area, and consequently, the assessment of post-stroke neurologic deficits could be a challenge. This study has established a modified transcranial MCAO model in which the MCA at the trunk is partially occluded either permanently or transiently via a small cranial window. Since the occlusion location is relatively proximal to the origin of the MCA, this model generates brain damage in both the cortex and striatum. Extensive characterization of this model has demonstrated an excellent long-term survival rate, even in aged mice, as well as readily detectable neurologic deficits. Therefore, the MCAO mouse model described here represents a valuable tool for experimental stroke research.

저자 스포트라이트: 뇌졸중 연구의 혁신적인 기법과 미래 방향 

This protocol demonstrates a unique mouse stroke model with a medium-sized infarct and an excellent survival rate. This model allows preclinical stroke researchers to extend the ischemia duration, use aged mice, and assess long-term functional outcomes.

늙은 쥐의 뇌졸중 결과를 연구하기 위해 수정된 경두개 중뇌동맥 폐색 모델

In experimental stroke research, middle cerebral artery occlusion (MCAO) with an intraluminal filament is widely used to model ischemic stroke in mice. ...

엔도 테린-1 유도 중간 뇌 동맥 폐색 동안 중동 뇌동맥을 시각화하기 위해 두개골 창 활용

요약

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이 비디오의 챕터

중간 대뇌 동맥 폐색의 마우스 모델

쥐의 레이저 도플러 Flowmetry 안내와 허혈성 뇌졸중에 대한 엔도 테린-1 유도 중간 뇌 동맥 폐색 모델

Intraluminal 중간 대뇌 동맥 폐색의 쥐 뇌졸중 모델에서 뇌 관류 모니터링에 최적화 된 시스템

영구적 인 뇌 혈관 폐색

측면 만성 두개골 창 준비 활성화

P10 쥐에서 신생아 뇌졸중의 과도 중간 대뇌 동맥 폐색 모델

마우스에서 뇌졸중 모델링: 외부 경동맥을 통한 일시적인 중간 뇌동맥 폐색

늙은 쥐의 뇌졸중 결과를 연구하기 위해 수정된 경두개 중뇌동맥 폐색 모델

늙은 쥐의 뇌졸중 결과를 연구하기 위해 수정된 경두개 중뇌동맥 폐색 모델

늙은 쥐의 뇌졸중 결과를 연구하기 위해 수정된 경두개 중뇌동맥 폐색 모델