이 작품은 미국 심장 협회 상급 동남아 계열 (09GRNT2060421), 미국 의학 협회에서와 플로리다 임상 병진 과학 연구소의 대학에서 보조금에 의해 지원되었다. 아담 메카는 NIH / NINDS, NRSA predoctoral 동료 (F30 NS-060335)입니다. 로버트 Regenhardt은 고혈압의 플로리다 종합 교육 프로그램의 대학 (T32 HL-083810)에서 predoctoral 교제 지원을 받았습니다.

이 프로토콜은 플로리다 대학 기관 동물 케어 및 사용위원회 (IACUC)에 의해 승인되고 준수는 &quot;케어에 대한 가이드 및 실험실 동물의 사용&quot;(여덟째 판, 과학 국립 아카데미, 2011)되었다. 자료 <ol><li> 동물 : 수술시 250~300그램 무게 여덟 주 된, 남성, Sprague Dawley 쥐 (찰스 강 (Charles River)의 농장, 윌 밍턴, 미국 MA,). </li><li> 마취 <ol class="lalpha"><li> 흡입 마취 시스템 (VetEquip 주식회사, Pleasanton, CA, USA) </li><li> Isoflurane 마취 (박스터의 조제, 디어 필드, IL, USA) </li></ol></li><li> Stereotaxic 시스템 (데이비드 Kopf 기기, Tujunga, CA, USA) <ol class="lalpha"><li> 작은 동물 stereotaxic 시스템 </li><li> 쥐에 대한 비 파열 귀 바 </li><li> 쥐에 대한 가스 마취 헤드 홀더 </li></ol></li><li> 온도 조절 <ol class="lalpha"><li> BAT-12 microprobe 온도계 (세계정밀 기기 주식회사, 사라 소타, FL, USA) </li><li> T / PUMP, TP600 열 담요 (Gaymar 산업 주식회사, 오차드 파크, NY, USA) </li></ol></li><li> 수술기구 <ol class="lalpha"><li> Metzenbaum 가위, 아이리스 포셉, 겸자의 견인기, 26 게이지 beveled 바늘, Bovie 소작 키트 (세계 정밀 계측기, 주식회사, 사라 소타, FL, USA)을 갖춘 10 μl 주사기 </li><li> Micromotor 드릴 (Stoelting, 우드 데일, IL, USA) </li><li> 0.8 mm 원형 드릴 버 (Roboz 외과 인스트루먼트 (주), 주식회사, 게이스 버그, MD, USA) </li><li> STORZ 본 Suturing 집게 (Bausch Lomb과 주식회사, 로체스터, NY, USA) </li></ol></li><li> 외과 용품 <ol class="lalpha"><li> 3.0 나일론 봉합 (오아시스 (Oasis), Mettawa, IL, USA) </li><li> 면봉, Puralube 눈 연고 (피셔 과학, 피츠버그, PA, USA) </li><li> 외과 포인트와 스트립 (Medtronic Xomed 주식회사, 잭슨빌, FL, USA) </li><li> 전기 헤어 가위 (Oster, 섭리, RI, USA) </li></ol></lI&gt; <li> 화학 제품 <ol class="lalpha"><li> 엔도 테린-1 (미국 펩타이드, 서니 베일, CA, USA) </li><li> Chlorhexidine 2% (Agrilabs, 세인트 조셉, MO, USA) </li></ol></li><li> 시각화 장비 <ol class="lalpha"><li> 수술 현미경 (Seiler 악기 및 제조, 세인트 루이스, MO, USA) </li><li> 소니 Handycam HDR-SR12 (소니, 미나토, 도쿄, 일본) </li><li> 광섬유 조명기 (TechniQuip 공사, 리버모어, CA, USA) </li></ol></li><li> 선박 직경의 측정 <ol class="lalpha"><li> VLC 미디어 플레이어 (파리, 프랑스) </li><li> 이미지 J 소프트웨어 (ImageJ 1.42q 소프트웨어, 건강의 미국 국립 연구소, 베데스다, MA, USA) </li></ol></li></ol> 1. 사전 수술 단계 <ol><li> 수술에 앞서, 쥐가 물과 쥐 수유에 무료로 액세스 할 수있는 12시 12분 어두운 / 밝은주기에 따라 자리 잡고 있습니다. </li><li> 마취는 유도 챔버 100 % O 2 기체 혼합물에서 isoflurane 4%을 유도하고 있습니다. </li><li> 까마귀<html> 머리 N은 전기 헤어 가위로 면도 있습니다. </li><li> 쥐가 온도 조절 운영면 (열 담요)과 머리는 가스 마취 얼굴 마스크의 위치로 시작 stereotactic 장치에 배치됩니다에 누워 흡수 패드에 발생하기 쉬운 위치에 배치됩니다. </li><li> 다음으로 귀 바는 삽입 강화하고 있습니다. </li><li> 절차 마취 동안 백퍼센트 O 2 기체 혼합물에서 isoflurane 2퍼센트로 유지됩니다. </li><li> Opthalmic 윤활유 연고는 양쪽 눈에 적용되며, 눈꺼풀이 수술하는 동안 눈 건조를 방지하기 위해 폐쇄됩니다. </li><li> 직장 온도 프로브는 ± 0.5은 ° C. 37 일정한 동물 코어 온도를 유지하기 위해 삽입 </li><li> stereotaxic 장치에 단단히 개최 anesthetized 쥐의 머리와 외과 영역은 chlorhexidine과 염분을 세 번 교대로 세안합니다. </li></ol> 2. 사전 두개골 창 준비 ontent &quot;&gt; 전에 두개골 창을 만들려면, 쥐은 다른 필요한 하드웨어 주입하여 실험을 준비해야하고 필요한 수술 절차를 받아야합니다.이 프로토콜의 경우, 우리는 이전에 엔도 테린-1 (동부 표준시 -에 대한 가이드 캐뉼라를 이식 한 1) 유도 MCAO는 제목 동반자 간행물에 표시되는 &quot;쥐의 레이저 도플러 Flowmetry 안내와 허혈성 뇌졸중에 대한 엔도 테린-1 유도 중간 뇌 동맥 폐색 모델.&quot; 3. 두개골 창 창조 가이드 캐뉼라 또는 실험에 필요한 장비의 배치 후, 두개골 창이 직접 행정 절차를 수행하는 동안 중간 대뇌 동맥의 근위 부분을 시각화 생성됩니다. <ol><li> 첫째, 가위는 medially 시작하여 측면 작업 temporalis 근육 위에 놓인 피부를 절개하는 데 사용됩니다. </li><li> temporalis 근육이 electrocautery를 사용하여 bisected하고 visua 3.0 나일론 봉합사를 사용하여 철회<html> 관자놀이 뼈의 편평 부분을 lize. </li><li> 이 관자놀이 뼈 오프 반영으로 약 3~4mm 광장은 궤도에 꼬리와 광대뼈 프로세스의베이스에 뛰어난 관자놀이 뼈의 편평 부분에 그려집니다. </li><li> 훈련은 점차적으로 관자놀이 뼈에서 무료로 뼈의 설명 부분을 잘라하는 데 사용됩니다. 주의가 경질 또는 대뇌 피질에 손상을 할수 있기 때문에 훈련에 너무 많은 압력을 적용하지 않도록주의해야한다. </li><li> 멸균 식염수에 자주 린스는 수술 분야의 시각화를 개선하고 두개골의 과열 방지하기 위해 수행됩니다. </li><li> 느슨한 구석에서 시작하여, temoporal 뼈 조각은주의 깊게 경질과 관련된 혈관을 찢어하지 않도록하는 동시에 미세 쥐 - 톱니 집게를 사용하여 제거됩니다. </li><li> 경질은 그대로 남아 있으며, 잔해가 멸균 생리를 사용하여 거리에 헹구어 있습니다. </li></ol> 4. 뇌 동맥 수축의 기록 실시간, 동부 표준시-1 유도 MCAO를 진행 쥐에서 이미지를 캡처하는 방법을 보여줍니다하려면 십t &quot;&gt;이 프로토콜에 사용됩니다. <ol><li> vasoactive 화합물의 응용 프로그램에 이전 기준 동영상은 최소한 1 분에 기록해야합니다. 바늘이 전에 동부 표준시-1 주입에 뇌 실질로 낮아 있지만 된 후에 동부 표준시-1 유도 MCAO를 들어, 기본 녹음이 이루어집니다. </li><li> 주사기 펌프는 주입을위한 시작 1 시간 또는 원하는 종점까지 기록됩니다. 바늘은 초점 비행기의 교란을 방지하기 위해 비디오 녹화 중에 장소에 남아 있습니다. </li><li> 쥐가이 절차에 따라 승인 된 프로토콜에 따라 깊이 anesthetized 및 euthanized해야합니다. </li></ol> 5. 이미지 분석 선박 직경은 시각화 MCA의 어떤 부분에 대해 결정 할 수 있습니다. 예를 들어, 우리는 동부 표준시-1 주입 전후의 시간이 지점에서 선박 직경을 측정 할 수있는 MCA 중 하나 지점을 사용합니다. STI동영상에서 붙인다 프레임은 VLC 미디어 플레이어 (VideoLAN)를 사용하여 1 분 간격으로 캡처됩니다. <ol><li> VLC 플레이어가 설치되어 열립니다. </li><li> 도구 및 다음 환경 설정을 선택하면 설정이 아래 &quot;전체&quot;로 변경되어 &quot;표시 설정.&quot; </li><li> &quot;비디오 메뉴는&quot;왼쪽 사이드 바에서 확장 및 &quot;출력 모듈은&quot;그때 확장됩니다. &quot;장면 필터는&quot;사고 현장 비디오 필터 메뉴를 표시하려면 선택됩니다. </li><li> &quot;장면&quot;는 파일 이름 접두사에 대한 상자에 입력합니다. </li><li> 디렉토리 경로 접두어가 정의됩니다. 여전히 프레임이 저장된 곳입니다. </li><li> 녹화 비율은 여전히​​ 프레임 캡쳐의 원하는 속도에 따라 선택됩니다. 동영상은 초 당 29 프레임, 다음 &quot;1749&quot;(29 프레임 / 초 X 60 초 / 분)에서 캡쳐 된 경우 하나는 여전히 매일 1 분 프레임 저장 상자에 입력해야합니다. 모든 변경 사항은 다음 저장됩니다. </li><li> 원하는 동영상을 자동으로 매일 1 분에 한 번 계속 프레임을 저장하는 VLC 플레이어에서 열립니다. </li><li> 선박 직경은 다음이를 사용하여 측정된다이미지. 첫째, ImageJ 소프트웨어 (NIH)이 열립니다. </li><li> 그럼 당신은 측정 될 수있는 여전히 프레임은 ImageJ에서 열립니다. </li><li> &quot;분석&quot;메뉴를 선택하면, &quot;측정 설정&quot;를 선택한 후 개설되어 있으며 모든 상자의 선택을 취소합니다. </li><li> 다음, 직선 도구가 선택됩니다. </li><li> 키보드 단축키는 &quot;Ctrl 키를 +는&quot;필요에 따라 확대하는 데 사용되며 라인은 혈관 직경을 측정 할 수있는 선박 경로에 수직 배치됩니다. </li><li> 마지막으로, 선박의 길이는 선박의 길이를 얻기 위해 &#39;측정&#39;(CTRL + M) 후 &quot;분석&quot;메뉴를 선택하고이 얻어진다. </li><li> 이 과정은 적어도 세 번 반복하고 각 여전히 프레임 단위로 측정 각 측정 용기에 대한 평균입니다. </li><li> 비교 여러 쥐를 사용하여 만들 수 있도록 각 시점에서 선박 지름이 기준 혈관 직경에 표준화되어 있습니다. 이 작업을 수행하려면 각 선박의 %의 기본 직경을 계산 × 100 %가 공식 현재 직경 / 기본 직경을 사용합니다. </li></ol>

<ol>
	<li>Levasseur, J. E., Wei, E. P., Raper, A. J., Kontos, A. A., Patterson, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detailed+description+of+a+cranial+window+technique+for+acute+and+chronic+experiments.">Detailed description of a cranial window technique for acute and chronic experiments.</a> Stroke. 6, 308-317 (1975).</li><li>Baumbach, G. L., Dobrin, P. B., Hart, M. N., Heistad, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanics+of+cerebral+arterioles+in+hypertensive+rats.">Mechanics of cerebral arterioles in hypertensive rats.</a> Circ. Res. 62, 56-64 (1988).</li><li>Regrigny, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+melatonin+on+rat+pial+arteriolar+diameter+in+vivo.">Effects of melatonin on rat pial arteriolar diameter in vivo.</a> Br. J. Pharmacol. 127, 1666-1670 (1999).</li><li>Mecca, A. P., O'Connor, T. E., Katovich, M. J., Sumners, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candesartan+pretreatment+is+cerebroprotective+in+a+rat+model+of+endothelin-1-induced+middle+cerebral+artery+occlusion.">Candesartan pretreatment is cerebroprotective in a rat model of endothelin-1-induced middle cerebral artery occlusion.</a> Exp. Physiol. 94, 937-946 (2009).</li><li>Mecca, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebroprotection+by+angiotensin-(1-7)+in+endothelin-1-induced+ischaemic+stroke.">Cerebroprotection by angiotensin-(1-7) in endothelin-1-induced ischaemic stroke.</a> Exp. Physiol. 96, 1084-1096 (2011).</li></ol>

관심 없음 충돌이 선언 없습니다.

이 사소한 수정 4, 5 많은 실험의 요구를 충족하기 위해 변경 될 수 있으므로 요약에서이 두개의 창을 준비 기술은 매우 다양한입니다. 예를 들어, 우리는 성공적으로 두개의 창 (메카 AP 2009 2011)을 통해 시각화 뇌동맥에 직접 초점을 레이저 도플러 flowmetry를 사용하여 특정 MCA 지점에서 뇌성 혈액의 흐름을 모니터링하고 있습니다. 또한, 경질 칼에 베인과 유사한 준비는 생체 혈관 반?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 코멘트 (선택 사항) </td></tr><tr><td> 흡입 마취 시스템 </td><td> VetEquip 주식회사, Pleasanton, CA, USA </td><td> 901806 </td><td></td></tr><tr><td> Isoflurane 마취 </td><td> 박스터의 조제, 디어 필드, IL, USA </td><td> 1001936060 </td><td></td></tr><tr><td> 작은 동물 stereotaxic 시스템 </td><td> 데이비드 Kopf 악기, Tujunga, CA, USA </td><td> 900 </td><td></td></tr><tr><td> 비 파열 귀 바, 쥐 </td><td> 데이비드 Kopf 악기, Tujunga, CA, USA </td><td> 957 </td><td></td></tr><tr><td> 쥐 가스 마취 헤드 홀더 </td><td> 데이비드 Kopf 악기, Tujunga, CA, USA </td><td> 1929 </td><td></td></tr><tr><td> BAT-12 microprobe 온도계 </td><td> 세계 정밀 계측기, 주식회사, 사라 소타, FL, 미국 </td><td> BAT-12 </td><tD&gt; </td></tr><tr><td> T / PUMP, 열 담요 </td><td> Gaymar 산업 주식회사, 오차드 파크, NY, USA </td><td> T / PUMP, TP600 </td><td></td></tr><tr><td> Metzenbaum 가위 </td><td> 세계 정밀 계측기, 주식회사, 사라 소타, FL, 미국 </td><td> 501254 </td><td></td></tr><tr><td> 아이리스 포셉 </td><td> 세계 정밀 계측기, 주식회사, 사라 소타, FL, 미국 </td><td> 15,915 </td><td></td></tr><tr><td> 불독 클램프 견인기 </td><td> 세계 정밀 계측기, 주식회사, 사라 소타, FL, 미국 </td><td> 14119-G </td><td></td></tr><tr><td> 10 μl 주사기 26 gaugue </td><td> 세계 정밀 계측기, 주식회사, 사라 소타, FL, 미국 </td><td> SGE010RNS </td><td></td></tr><tr><td> Bovie, 높은 온도 소작 키트 </td><td> 세계 정밀 계측기, 주식회사, 사라 소타, FL, 미국 </td><td> 500392 </td><td></td></tr><tr><td> 쥐의 이빨은 0.12를 포셉 </td><td> Stotz </td><td> E1811 </td><td></td></tr><tr><td> Micromotor 훈련 </td><td> Stoelting,우드 데일, IL, USA </td><td> 51,449 </td><td></td></tr><tr><td> 0.8 mm 원형 드릴 버 </td><td> Roboz 외과 인스트루먼트 (주), 주식회사, 게이스 버그, MD, USA </td><td> RS-6280C-1 </td><td></td></tr><tr><td> STORZ 본 suturing 포셉 </td><td> Bausch Lomb과 주식회사, 로체스터, NY, USA </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 나일론 봉합사, 크기 3.0 </td><td> 오아시스 (Oasis), Mettawa, IL, USA </td><td> MV-663 </td><td></td></tr><tr><td> 면봉 </td><td> 피셔 과학, 피츠버그, PA, 미국 </td><td> 22-029-488 </td><td></td></tr><tr><td> Puralube 눈 연고 </td><td> 피셔 과학, 피츠버그, PA, 미국 </td><td> NC0138063 </td><td></td></tr><tr><td> 전기 헤어 가위 </td><td> Oster, 섭리, RI, USA </td><td> 78005-301 </td><td></td></tr><tr><td> 동부 표준시 - 1 PBS 80 μ의 M 농도로 희석 </td><td> 미국의 펩타이드, 서니 베일, CA, USA </td><td> 88-1 - 10A </td><td></td></tr><tr><td> Chlorhexidine, 2% </td&gt; <td> Agrilabs, 세인트 조셉, MO, USA </td><td> 1040, 목사 6-06, NAC 번호 : 10580322 </td><td></td></tr><tr><td> 외과 현미경 </td><td> Seiler 악기 및 제조, 세인트 루이스, MO, USA </td><td> 진화 xR6 </td><td></td></tr><tr><td> 소니 Handycam </td><td> 소니, 미나토, 도쿄, 일본 </td><td> HDR-SR12 </td><td></td></tr><tr><td> 광섬유 조명기 </td><td> TechniQuip 공사, 리버모어, CA, USA </td><td> FO1-150 </td><td></td></tr><tr><td> VLC 미디어 플레이어 </td><td> (파리, 프랑스) </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 이미지 J 소프트웨어 </td><td> 미국 건강, 베데스다의 국립 연구소 MA, USA </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

utilizing a cranial window to visualize the middle cerebral artery during endothelin-1 induced middle cerebral artery occlusion

두개골 창 창조 1-3 뇌의 대뇌 피질의 표면에 구조를 직접 시각화 할 수있는 방법입니다. 이 기술은 쥐의 뇌를 놓인 여러 지역에서 수행 할 수 있지만, 대부분의 쉽게 쉽게 접근 정면 또는 정수리 뼈를 통해 craniectomy을 생성하여 수행됩니다. 대부분의 자주, 우리는 근위 MCA에 인접한 뇌 실질에 엔도 테린-1의 주입 발생할 중간 대뇌 동맥 혈관 직경의 변화를 정할 허혈성 뇌졸중의 엔도 테린-1 중간 대뇌 동맥 폐색 모델과 함께이 기술을 사용한 4, 5. 엔도 텔린 -1 유도 MCAO 동안 MCA의 가까운 부분을 시각화하기 위해, 우리는 쥐 두개골 (그림 1)의 측면 측면에서 관자놀이 뼈를 두개골 창을 만들 수있는 기술을 사용합니다. 뇌동맥은 경질 그대로 사용하거나 경질 칼에 베인과 retra있는 중 시각화 할 수 있습니다cted. 가장 일반적으로, 우리는 뇌 실질에 vasoconstricting 펩타이드의 전달을 포함 엔도 테린-1 유도 MCAO 이후 시각화 동안 경질 그대로 둡니다. 이 약물 투여에 대한 시각화 혈관을 통해 직접 경질를 절개 할 필요가 우회한다. 이 프로토콜은 물론이 방법에 관한 잠재적 인 함정의 많은 부분을 방지하는 방법으로, 단계 - 현명한 방식으로 뇌성 동맥을 시각화 할 수있는 두개의 창을 만드는 방법을 설명합니다.

아직 캡처 된 비디오 쇼에서 찍힌 사진 그 후 뇌동맥 직경의 변화 동부 표준시-1 주입은 즉시이 두개의 창 기술을 (그림 2)를 사용하여 평가 할 수 있습니다. 동부 표준시-1 분사의 분 이내에 혈관이 수축되기 시작합니다. 결국 혈관 시각화하기 어려울되며 뇌 조직은 창백 될 것입니다. 20 분 후 동부 표준시-1의 효과가 감소하고 혈관은 점차 약 45 분 후 기본 직경로 돌아, 팽창되기 시작?...

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Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion

이 문서는 중간 대뇌 동맥의 근위 부분을보기 위해 시간적 craniectomy를 사용하여 두개의 창문을 통해 쥐 대뇌 동맥을 시각화하는 방법을 설명합니다 (<strong&gt; 그림 1</strong&gt;). 이 다양한 방법 뇌동맥의 반응성을 측정하기 위해 약물 투여의 다양한 기술과 결합 할 수 있습니다<em&gt; 생체 내</em&gt;.

엔도 테린-1 유도 중간 뇌 동맥 폐색 동안 중동 뇌동맥을 시각화하기 위해 두개골 창 활용

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be ...

utilizing-cranial-window-to-visualize-middle-cerebral-artery-during

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14.8K 조회수.  University of Florida. 이 문서는 중간 대뇌 동맥의 근위 부분을보기 위해 시간적 craniectomy를 사용하여 두개의 창문을 통해 쥐 대뇌 동맥을 시각화하는 방법을 설명합니다 ( 그림 1). 이 다양한 방법 뇌동맥의 반응성을 측정하기 위해 약물 투여의 다양한 기술과 결합 할 수 있습니다 생체 내.