فإن المؤلف أن يشكر بيتر كاسترو وDinday ماثيو لجهودهم في وقت مبكر لإقامة الزرد في المختبر. وقد تم تمويل هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح EUREKA (# R01NS079214-01).

<html> 1. إنتاج البيض وكوكتيل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الزرد تربية يلي الإجراءات القياسية التي سبق وصفها 8. لفترة وجيزة، يتم تعيين الزرد الكبار حتى في تربية الدبابات مع فواصل في المكان. عندما الاضواء في غرفة تأتي في صباح اليوم التالي، تتم إزالة فواصل من تربية الحيوانات الأليفة والأسماك الدبابات ما بين 20 و 60 دقيقة من الوقت التزاوج دون عائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم جمع البيض من الدبابات في تربية مصفاة وتشطف بالماء البيض. ثم يتم نقل البيض إلى طبق بيتري مع الماء البيض. تتم إزالة الحطام وبويضة غير مخصبة باستخدام ماصة نقل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان طبق بتري تحتوي على البيض التي تم جمعها في حاضنة (28-32 ° C). يفقس البيض بعد نحو يومين بعد الإخصاب (DPF)، وإزالة أي المشيماء غيرها من الحطام مع ماصة نقل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> على اليوم المطلوب بعد الإخصاب (3-8 DPF) إزالة اليرقات طبق بتري تحتوي على السباحة بحرية ووضعت على مقاعد البدلاء المختبر في درجة حرارة الغرفة. </li></ol>SS = &quot;jove_title&quot;&gt; 2. مسرى مكروي سحب وإعداد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام مجتذب micropipette، سحب 1.2 مم OD البورسليكات الزجاج الشعرية إلى قسمين الإبر وتخزينها في طبق بتري 150 ملم مربع ماصة أو فارغة عن طريق وضع المعجون على سلالم سخيفة. يمكن سحب الإبر مسبقا. ويمكن استخدام مختلف OD الزجاج الشعيرات الدموية تبعا لنوع من مكبر للصوت headstage المتاحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Backload ومسرى مكروي مع حل خارج الخلية تسجيل (2 M كلوريد الصوديوم) باستخدام حقنة 1 مل مع فلتر حقنة Nalgene (4 ملم) وMicrofil خيوط (وارنر أدوات دقيقة) المرفقة. اهتزاز أو الاستفادة من البلعة نحو غيض إبرة حتى هناك فقاعات قليلة أو معدومة المتبقية. </li></ol> 3. الشلل في آجار <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد جديدة من حل 1.2٪ انخفاض ذوبان في الماء أجار نقطة البيض. مكان حل أجار في المياه مجموعة حمام في ~ 37 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد ساترة مع غرفة تسجيل ومكان في الفريزر (5-10 دقيقة). ينبغي لدائرة تسجيل MATCح التي كانت على منصة الكهربية. نستخدم الأضواء حمام غرفة مفتوحة الماس من أدوات التصوير وارنر (نموذج RC-26GLP). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام ماصة باستور أو نقل أو مكان واحد الزرد اليرقات في قطرات صغيرة من الماء البيض في طبق نظيف طبق بتري. لهذا الحبرية، إضافة قطرات من محلول يحتوي على مخدر (0.02٪ tricaine) وكيل شل (1 ملغ / مل α-بنغاروتوكسين). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رصد الزرد لفقدان الحركة (5 إلى 10 دقائق). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة ساترة / غرفة التسجيل من الفريزر. ضع دائرة على المسرح لstereomicroscope. باستخدام ماصة نقل، مزيج مل العديد من 1.2٪ منخفضة ذوبان نقطة مع قطرات الاغاروز حل ونقل (مع السمك) إلى الدائرة ساترة / التسجيل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تلميح باستخدام ماصة أو إبرة حادة غرامة، يرقات موقف تحت stereomicroscope بحيث يتعرض الجانب الظهري من الأسماك إلى السطح هلام الاغاروز. السماح لتتصلب الاغاروز (5-10 دقيقة)، ثم باستخدام ملعقة مسطحة لنقل ب أجارقفل إلى دائرة تسجيل وضعت على منصة الكهربية. </li></ol> 3. خارج الخلية الميدانية تسجيل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 2-5 مل من وسائط تسجيل الزرد إلى غرفة تسجيل. إذا كانت التغييرات ضرورية المخدرات، يروي غرفة مع حل التسجيل بمعدل حوالي 1 مل / دقيقة. لا من الحل الأوكسجين الضروري تسجيل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج مسرى مكروي (حوالي 1 ميكرون قطر تلميح، 2-7 MΩ) في مكبر للصوت headstage شنت على مياداة مجهرية ثلاثية الأبعاد. تأكد من أن مياداة مجهرية هي في موقف مناسب للسماح لمجموعة من الحركة والتكيف. جعل تلميح مسرى مكروي في الطائرة نظر المجهر، وارتفاع قبالة المرحلة، واستخدام التكيف الخشنة أقل إلى نقطة أعلاه فقط وقليلا أمام رئيس الزرد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مع مكبر للصوت في وضع &quot;الجاري المشبك&quot; صفر القطب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام التكيف الخشنة أقل غيض الكهربائي بحيث يمس فقط لياليurface من الزرد، قليلا أمام الدماغ الأمامي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام خطوات التكيف غرامة دفع غيض الكهربائي حتى ثقوب الجلد من الزرد. السماح لتسوية ودفع الكهربائي ثم ميكرون عدة في الدماغ الأمامي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسجيل النشاط الكهربائي في وضع المشبك الجاري باستخدام برنامج Axoscope. يتم الحصول على البيانات بمعدل 10 كيلو هرتز أخذ العينات من. </li></ol>

<ol>
	<li>Clark, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stressing+zebrafish+for+behavioral+genetics.">Stressing zebrafish for behavioral genetics.</a> Reviews in Neuroscience. 22 (1), 49 (2011).</li><li>Rinkwitz, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish:+an+integrative+system+for+neurogenomics+and+neurosciences.">Zebrafish: an integrative system for neurogenomics and neurosciences.</a> Progress in Neurobiology. 93 (2), 231 (2011).</li><li>Penberthy, W. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish+as+a+model+for+human+disease.">The zebrafish as a model for human disease.</a> Frontiers in Bioscience. 7, d1439 (2002).</li><li>Letamendia, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+validation+of+an+automated+high-throughput+system+for+zebrafish+in+vivo+screenings.">Development and validation of an automated high-throughput system for zebrafish in vivo screenings.</a> PLoS One. 7, e36690 (2012).</li><li>Nasevicius, A., Ekker, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effective+targeted+gene+'knockdown'+in+zebrafish.">Effective targeted gene 'knockdown' in zebrafish.</a> Nature Genetics. 26 (2), 216 (2000).</li><li>Haffter, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+affecting+development+of+the+zebrafish+inner+ear+and+lateral+line.">Mutations affecting development of the zebrafish inner ear and lateral line.</a> Development. 123, 1 (1996).</li><li>Suster, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenesis+in+zebrafish+with+the+tol2+transposon+system.">Transgenesis in zebrafish with the tol2 transposon system.</a> Methods Molecular Biology. 561, 41 (2009).</li><li>Rosen, J. N., Sweeney, M. F., Mably, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+Zebrafish+Embryos+to+Analyze+Gene+Function.">Microinjection of Zebrafish Embryos to Analyze Gene Function.</a> J. Vis. Exp. (25), e1115 (2009).</li><li>Baraban, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pentylenetetrazole+induced+changes+in+zebrafish+behavior,+neural+activity+and+c-fos+expression.">Pentylenetetrazole induced changes in zebrafish behavior, neural activity and c-fos expression.</a> Neuroscience. 131 (3), 759 (2005).</li><li>Baraban, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+large-scale+mutagenesis+screen+to+identify+seizure-resistant+zebrafish.">A large-scale mutagenesis screen to identify seizure-resistant zebrafish.</a> Epilepsia. 48 (6), 1151 (2007).</li><li>Williams, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+radiotelemetry+to+evaluate+electrographic+seizures+in+rats+with+kainate-induced+epilepsy.">The use of radiotelemetry to evaluate electrographic seizures in rats with kainate-induced epilepsy.</a> Journal of Neuroscience Methods. 155 (1), 39 (2006).</li><li>Marsh, E. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interictal+EEG+spikes+identify+the+region+of+electrographic+seizure+onset+in+some,+but+not+all,+pediatric+epilepsy+patients.">Interictal EEG spikes identify the region of electrographic seizure onset in some, but not all, pediatric epilepsy patients.</a> Epilepsia. 51 (4), 592 (2010).</li><li>Zhu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+and+application+of+modularly+assembled+zinc-finger+nucleases+in+zebrafish.">Evaluation and application of modularly assembled zinc-finger nucleases in zebrafish.</a> Development. 138 (20), 4555 (2011).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

طريقة تسجيل خارج الخلية المقدمة هنا يمكن تحليل حساسة جدا وسريعة من نشاط المخ. هذه التسجيلات هي مشابهة لرصد (EEG) تخطيط كهربية تستخدم عادة لتقييم وجود التفريغ الكهربائي غير طبيعي (أي الاستيلاء) في نماذج القوارض من الصرع 11 و 12 مريضا. ويمكن الجمع بين التسج?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td><td> التعليقات (اختياري) </td></tr><tr><td> الاغاروز انصهار منخفضة </td><td> فيشر العلمية </td><td> BP1360-100 </td><td> تذوب في وسائل الإعلام الجنين في 1.2٪ </td></tr><tr><td> تسجيل وسائل الإعلام </td><td> فيشر العلمية </td><td> BP3581، P330-3، BP410-1، BP214-500، D16-1، C77-500 </td><td> 1 ملم كلوريد الصوديوم، 2.9 ملي بوكل، HEPES 10 مللى، و 1.2 ملم MgCl 2 و 10 ملي سكر العنب، 2.1 مم CaCl 2 الرقم الهيدروجيني إلى 7.3 تقريبا مع هيدروكسيد الصوديوم N 1 </td></tr><tr><td> Tricaine </td><td> آرجنت مختبرات </td><td> MS-222 </td><td> 0.02٪ </td></tr><tr><td> α-بنغاروتوكسين </td><td> العلوم البيولوجية Tocris </td><td> 2133 </td><td> 1 ملغ / مل </td></tr><tr><td> الزجاج الشعرية أنابيب </td><td> وارنر الصكوك </td><td> G120TF-3 </td><td> سحب لمقاومة من 2 -7 MΩ </td></tr><tr><td> المشبك التصحيح مكبر للصوت </td><td> وارنر الصكوك </td><td> PC-505B </td><td> نستخدم مكبر للصوت وارنر في الوضع الحالي، المشبك؛ كسب تعيين في 2 بالسيارات / السلطة الفلسطينية وتصفية بسل وضعت في 2k. ويمكن استخدام نماذج مماثلة وفقا لتعليمات الشركة الصانعة. </td></tr><tr><td> مرشح / مكبر للصوت </td><td> الدجاجة التكنولوجيا </td><td> FLA-01 </td><td> نستخدم الدجاجة قبل مكبر للصوت؛ كسب تعيين في 10-20؛ قطع ضبط التردد في 2k-1؛ تصفية الشق في. ويمكن استخدام نماذج مماثلة وفقا لتعليمات الشركة الصانعة. </td></tr><tr><td> محور عصبي A / D والبرامج مجلس Axoscope </td><td> الجزيئية الأجهزة </td><td> محور عصبي Digidata 1320A؛ Axoscope 8،2 </td><td> ويتم جمع البيانات في Axoscope باستخدام فجوة خالية من وضع اقتنائها؛ أخذ العينات في 10 كيلوهرتز. ويمكن استخدام نماذج مماثلة والبرامج وفقا لتعليمات الشركة الصانعة. </td></tr><tr><td> البيض المياه </td><td&gt; الفوري المحيط </td><td></td><td> 3 غرام ملح البحر المحيط فورية، 2 مل زرقة الميثيلين 0.1٪ في الماء منزوع الأيونات 10 مل </td></tr></tbody></table>

forebrain electrophysiological recording in larval zebrafish

الصرع يؤثر على ما يقرب من 3 ملايين شخص في الولايات المتحدة ويصل إلى 50 مليون شخص في جميع أنحاء العالم. يعرف بأنه حدوث النوبات دون سابق استفزاز عفوية، يمكن الحصول على الصرع نتيجة لإهانة إلى الدماغ أو طفرة جينية. الجهود المبذولة لضبط النموذج في المقام الأول تستخدم الحيوانات والشتائم المكتسبة (المخدرات الاختلاج، أو إصابات الدماغ التحفيز) والتلاعب الجيني (ضربة قاضية العقاقير، إعادة التركيب مثلي أو transgenesis) في القوارض. الزرد هي نظام نموذجي الفقاريات 1-3 التي يمكن أن توفر بديلا قيما للابحاث ومقره القوارض الصرع. وتستخدم على نطاق واسع الزرد في دراسة علم الوراثة الفقاريات أو التنمية، يحمل درجة عالية من التشابه الجيني للثدييات والتعبير عن homologs ل85٪ ~ من الطفرات المعروفة الإنسان بالصرع واحد الجينات. بسبب صغر حجمها (4-6 ملم في الطول)، يمكن الحفاظ على الزرد اليرقات في حجم السائل منخفضة تصل إلى 100 ميكرولتر خلال التنمية في وقت مبكر والأذربيجانيةYED في موضوع لوحات جيدة. يمكن إضافة الكواشف مباشرة إلى الحل الذي الأجنة تطوير وتبسيط إدارة المخدرات وتمكين الفحص السريع في الجسم الحي من المركبات اختبار 4. ويمكن استخدام أليغنوكليوتيد] الاصطناعية (morpholinos)، الطفرات والزنك الاصبع نوكلياز والنهج المعدلة وراثيا لتوليد بسرعة ضربة قاضية أو طفرة في الجين الزرد 5-7. تحمل هذه الخصائص الدراسات الزرد لم يسبق له مثيل تحليل القوة الإحصائية ميزة على القوارض في دراسة الاضطرابات العصبية مثل الصرع. لأن &quot;معيار الذهب&quot; للأبحاث الصرع هو رصد وتحليل غير طبيعية الإفرازات الكهربائية التي تنشأ في بنية الدماغ المركزية (أي، نوبات)، وهي طريقة لتسجيل نشاط المخ بكفاءة في الزرد اليرقات يوصف هنا. هذا الأسلوب هو التكيف من تقنيات التسجيل التقليدية خارج الخلية ويسمح لرصد طويل الأجل مستقرة من نشاط المخ في يرقات اسماك الزرد سليمة. Sوتظهر التسجيلات وافرة للمضبوطات الحادة التي تنتج عن تطبيق حمام المخدرات الاختلاج ونوبات عفوية سجلت في الأسماك المعدلة وراثيا.

وترد أمثلة على تصريف الاستيلاء مثل electrographic سجلت في الدماغ المقدم من أجار جزءا لا يتجزأ من يرقات اسماك الزرد في الشكل 1. وقد أثار واسعة سعة التصريف انفجار متعددة في ارتفاع هذه العينات من خلال تطبيق حمام من المخدرات الاختلاج، و 40 ملي بيلوكاربين (في، 6 DPF) أو 1 ملي ...

Watch this Scientific Journal Video about Forebrain Electrophysiological Recording in Larval Zebrafish at JoVE.com

Forebrain Electrophysiological Recording in Larval Zebrafish

ووصف طريقة بسيطة لتسجيل إمكانات حقل خارج الخلية في الدماغ الأمامي الزرد اليرقات. الأسلوب يوفر قوية<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; قراءة من الاستيلاء على غرار النشاط. ويمكن استخدام هذه التقنية مع يرقات اسماك الزرد المعدلة وراثيا تحمل جينات الصرع ذات الصلة أو المضبوطات أثار من قبل إدارة الأدوية الاختلاج.

الدماغ الأمامي تسجيل الكهربية في الزرد اليرقات

Epilepsy affects nearly 3 million people in the United States and up to 50 million people worldwide. Defined as the occurrence of spontaneous unprovoked ...

forebrain-electrophysiological-recording-in-larval-zebrafish

Research

JoVE Journal

Neuroscience

17.0K Views.  University of California, San Francisco. ووصف طريقة بسيطة لتسجيل إمكانات حقل خارج الخلية في الدماغ الأمامي الزرد اليرقات. الأسلوب يوفر قوية في الجسم الحي قراءة من الاستيلاء على غرار النشاط. ويمكن استخدام هذه التقنية مع يرقات اسماك الزرد المعدلة وراثيا تحمل جينات الصرع ذات الصلة أو المضبوطات أ?...

Video: Forebrain Electrophysiological Recording in Larval Zebrafish

Time-lapse Live Imaging of Clonally Related Neural Progenitor Cells in the Developing Zebrafish Forebrain

Precise patterns of division, migration and differentiation of neural progenitor cells are crucial for proper brain development and function1,2. To understand the behavior of neural progenitor cells in the complex in vivo environment, time-lapse live imaging of neural progenitor cells in an intact brain is critically required. In this video, we exploit the unique features of zebrafish embryos to visualize the development of forebrain neural progenitor cells in vivo. We use electroporation to genetically and sparsely label individual neural progenitor cells. Briefly, DNA constructs coding for fluorescent markers were injected into the forebrain ventricle of 22 hours post fertilization (hpf) zebrafish embryos and electric pulses were delivered immediately. Six hours later, the electroporated zebrafish embryos were mounted with low melting point agarose in glass bottom culture dishes. Fluorescently labeled neural progenitor cells were then imaged for 36hours with fixed intervals under a confocal microscope using water dipping objective lens. The present method provides a way to gain insights into the in vivo development of forebrain neural progenitor cells and can be applied to other parts of the central nervous system of the zebrafish embryo.

The present video demonstrates a method which takes advantage of the combination of electroporation and confocal microscopy to perform live imaging on individual neural progenitor cells in the developing zebrafish forebrain. In vivo analysis of the development of forebrain neural progenitor cells at a clonal level can be achieved in this way.

الوقت الفاصل بين التصوير حية من خلايا ذات صلة Clonally السلف العصبية في الدماغ المقدم اسماك الزرد النامية

Precise patterns of division, migration and differentiation of neural progenitor cells are crucial for proper brain development and function1,2. To ...

Simultaneous Electrophysiological Recording and Calcium Imaging of Suprachiasmatic Nucleus Neurons

Simultaneous electrophysiological and fluorescent imaging recording methods were used to study the role of changes of membrane potential or current in regulating the intracellular calcium concentration. Changing environmental conditions, such as the light-dark cycle, can modify neuronal and neural network activity and the expression of a family of circadian clock genes within the suprachiasmatic nucleus (SCN), the location of the master circadian clock in the mammalian brain. Excitatory synaptic transmission leads to an increase in the postsynaptic Ca2+ concentration that is believed to activate the signaling pathways that shifts the rhythmic expression of circadian clock genes. Hypothalamic slices containing the SCN were patch clamped using microelectrodes filled with an internal solution containing the calcium indicator bis-fura-2. After a seal was formed between the microelectrode and the SCN neuronal membrane, the membrane was ruptured using gentle suction and the calcium probe diffused into the neuron filling both the soma and dendrites. Quantitative ratiometric measurements of the intracellular calcium concentration were recorded simultaneously with membrane potential or current. Using these methods it is possible to study the role of changes of the intracellular calcium concentration produced by synaptic activity and action potential firing of individual neurons. In this presentation we demonstrate the methods to simultaneously record electrophysiological activity along with intracellular calcium from individual SCN neurons maintained in brain slices.

Procedures are described to perform simultaneous recordings of membrane potential or current and changes of intracellular calcium concentration. Suprachiasmatic nucleus neurons are filled with the calcium indicator bis-fura-2 using a patch clamp electrode in the whole cell patch clamp configuration.

Simultaneous electrophysiological and fluorescent imaging recording methods were used to study the role of changes of membrane potential or current in ...

Electrophysiological Recording in the Brain of Intact Adult Zebrafish

Previously, electrophysiological studies in adult zebrafish have been limited to slice preparations or to eye cup preparations and electrorentinogram recordings. This paper describes how an adult zebrafish can be immobilized, intubated, and used for in vivo electrophysiological experiments, allowing recording of neural activity. Immobilization of the adult requires a mechanism to deliver dissolved oxygen to the gills in lieu of buccal and opercular movement. With our technique, animals are immobilized and perfused with habitat water to fulfill this requirement. A craniotomy is performed under tricaine methanesulfonate (MS-222; tricaine) anesthesia to provide access to the brain. The primary electrode is then positioned within the craniotomy window to record extracellular brain activity. Through the use of a multitube perfusion system, a variety of pharmacological compounds can be administered to the adult fish and any alterations in the neural activity can be observed. The methodology not only allows for observations to be made regarding changes in neurological activity, but it also allows for comparisons to be made between larval and adult zebrafish. This gives researchers the ability to identify the alterations in neurological activity due to the introduction of various compounds at different life stages.

This paper describes how an adult zebrafish can be immobilized, intubated, and used for in vivo electrophysiological experiments to allow recordings and manipulation of neural activity in an intact animal.

تسجيل الكهربية في الدماغ سليمة من اسماك الزرد الكبار

Previously, electrophysiological studies in adult zebrafish have been limited to slice preparations or to eye cup preparations and electrorentinogram ...

Electrophysiological Recording From Drosophila Labellar Taste Sensilla

The peripheral taste response of insects can be powerfully investigated with electrophysiological techniques. The method described here allows the researcher to measure gustatory responses directly and quantitatively, reflecting the sensory input that the insect nervous system receives from taste stimuli in its environment. This protocol outlines all key steps in performing this technique. The critical steps in assembling an electrophysiology rig, such as selection of necessary equipment and a suitable environment for recording, are delineated. We also describe how to prepare for recording by making appropriate reference and recording electrodes, and tastant solutions. We describe in detail the method used for preparing the insect by insertion of a glass reference electrode into the fly in order to immobilize the proboscis. We show traces of the electrical impulses fired by taste neurons in response to a sugar and a bitter compound. Aspects of the protocol are technically challenging and we include an extensive description of some common technical challenges that may be encountered, such as lack of signal or excessive noise in the system, and potential solutions. The technique has limitations, such as the inability to deliver temporally complex stimuli, observe background firing immediately prior to stimulus delivery, or use water-insoluble taste compounds conveniently. Despite these limitations, this technique (including minor variations referenced in the protocol) is a standard, broadly accepted procedure for recording Drosophila neuronal responses to taste compounds.

Electrophysiological Recording From Drosophila Labellar Taste Sensilla

This protocol describes extracellular recording of the action potential responses fired by labellar taste neurons in Drosophila.

تسجيل الكهربية من<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; Labellar طعم الشعيرات

The peripheral taste response of insects can be powerfully investigated with electrophysiological techniques. The method described here allows the ...

Spinal Cord Transection in the Larval Zebrafish

Mammals fail in sensory and motor recovery following spinal cord injury due to lack of axonal regrowth below the level of injury as well as an inability to reinitiate spinal neurogenesis. However, some anamniotes including the zebrafish Danio rerio exhibit both sensory and functional recovery even after complete transection of the spinal cord. The adult zebrafish is an established model organism for studying regeneration following spinal cord injury, with sensory and motor recovery by 6&#160;weeks post-injury. To take advantage of in vivo analysis of the regenerative process available in the transparent larval zebrafish as well as genetic tools not accessible in the adult, we use the larval zebrafish to study regeneration after spinal cord transection. Here we demonstrate a method for reproducibly and verifiably transecting the larval spinal cord. After transection, our data shows sensory recovery beginning at 2&#160;days post-injury (dpi), with the C-bend movement detectable by 3 dpi and resumption of free swimming by 5 dpi. Thus we propose the larval zebrafish as a companion tool to the adult zebrafish for the study of recovery after spinal cord injury.

After spinal transection, adult zebrafish have functional recovery by six weeks post-injury. To take advantage of larval transparency and faster recovery, we present a method for transecting the larval spinal cord. After transection, we observe sensory recovery beginning at 2&#160;days post-injury, and C-bend movement by 3 days post-injury.

Transection الحبل الشوكي في اليرقات الزرد

Mammals fail in sensory and motor recovery following spinal cord injury due to lack of axonal regrowth below the level of injury as well as an inability ...

Simultaneous Electrophysiological Recording and Micro-injections of Inhibitory Agents in the Rodent Brain

Here we describe a method for the construction of a single-use &#8220;injectrode&#8221; using commercially accessible and affordable parts. A probing system was developed that allows for the injection of a drug while recording electrophysiological signals from the affected neuronal population. This method provides a simple and economical alternative to commercial solutions. A glass pipette was modified by combining it with a hypodermic needle and a silver filament. The injectrode is attached to commercial microsyringe pump for drug delivery. This results in a technique that provides real-time pharmacodynamics feedback through multi-unit extracellular signals originating from the site of drug delivery. As a proof of concept, we recorded neuronal activity from the superior colliculus elicited by flashes of light in rats, concomitantly with delivery of drugs through the injectrode. The injectrode recording capacity permits the functional characterization of the injection site favoring precise control over the localization of drug delivery. Application of this method also extends far beyond what is demonstrated here, as the choice of chemical substance loaded into the injectrode is vast, including tracing markers for anatomic experiments.

Here, we craft a glass pipette with dual functions: inhibition of deep brain structures by microinjections of drugs and real-time monitoring of their effects through simultaneous electrophysiological recordings.

في وقت واحد تسجيل الكهربية والصغرى، والحقن وكلاء المثبطة في الدماغ القوارض

Here we describe a method for the construction of a single-use &#8220;injectrode&#8221; using commercially accessible and affordable parts. A probing ...

Electrophysiological Recording from Drosophila Trichoid Sensilla in Response to Odorants of Low Volatility

Insects rely on their sense of smell to guide a wide range of behaviors that are critical for their survival, such as food-seeking, predator avoidance, oviposition, and mating. Myriad chemicals of varying volatilities have been identified as natural odorants that activate insect Olfactory Receptor Neurons (ORNs). However, studying the olfactory responses to low-volatility odorants has been hampered by an inability to effectively present such stimuli using conventional odor-delivery methods. Here, we describe a procedure that permits the effective presentation of low-volatility odorants for in vivo Single-Sensillum Recording (SSR). By minimizing the distance between the odor source and the target tissue, this method allows for the application of biologically salient but hitherto inaccessible odorants, including palmitoleic acid, a stimulatory pheromone with a demonstrated effect on ORNs involved in courtship and mating behavior1. Our procedure thus affords a new avenue to assay a host of low-volatility odorants for the study of insect olfaction and pheromone communication.

Electrophysiological Recording from Drosophila Trichoid Sensilla in Response to Odorants of Low Volatility

The overall goal of this protocol is to demonstrate how to present odorants of low volatility for single-sensillum recording from Drosophila olfactory receptor neurons that respond to long-chain cuticular pheromones.

تسجيل الكهربية من<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; تريتشويد سنسيلا في الاستجابة ل أودورانتس من التقلب المنخفض

Insects rely on their sense of smell to guide a wide range of behaviors that are critical for their survival, such as food-seeking, predator avoidance, ...

In Vivo Calcium Imaging of Lateral-line Hair Cells in Larval Zebrafish

Sensory hair cells are mechanoreceptors found in the inner ear that are required for hearing and balance. Hair cells are activated in response to sensory stimuli that mechanically deflect apical protrusions called hair bundles. Deflection opens mechanotransduction (MET) channels in hair bundles, leading to an influx of cations, including calcium. This cation influx depolarizes the cell and opens voltage-gated calcium channels located basally at the hair-cell presynapse. In mammals, hair cells are encased in bone, and it is challenging to functionally assess these activities in vivo. In contrast, larval zebrafish are transparent and possess an externally located lateral-line organ that contains hair cells. These hair cells are functionally and structurally similar to mammalian hair cells and can be functionally assessed in vivo. This article outlines a technique that utilizes a genetically encoded calcium indicator (GECI), GCaMP6s, to measure stimulus-evoked calcium signals in zebrafish lateral-line hair cells. GCaMP6s can be used, along with confocal imaging, to measure in vivo calcium signals at the apex and base of lateral-line hair cells. These signals provide a real-time, quantifiable readout of both mechanosensation- and presynapse-dependent calcium activities within these hair cells. These calcium signals also provide important functional information regarding how hair cells detect and transmit sensory stimuli. Overall, this technique generates useful data about relative changes in calcium activity in vivo. It is less well-suited for quantification of the absolute magnitude of calcium changes. This in vivo technique is sensitive to motion artifacts. A reasonable amount of practice and skill are required for proper positioning, immobilization, and stimulation of larvae. Ultimately, when properly executed, the protocol outlined in this article provides a powerful way to collect valuable information about the activity of hair-cells in their natural, fully integrated states within a live animal.

The zebrafish is a model system that has many valuable features including optical clarity, rapid external development, and, of particular importance to the field of hearing and balance, externally located sensory hair cells. This article outlines how transgenic zebrafish can be used to assay both hair-cell mechanosensation and presynaptic function in toto.

في تصوير الكالسيوم فيفو خلايا الشعر الخط الجانبي في الزرد اليرقات

Sensory hair cells are mechanoreceptors found in the inner ear that are required for hearing and balance. Hair cells are activated in response to sensory ...

Investigating Long-term Synaptic Plasticity in Interlamellar Hippocampus CA1 by Electrophysiological Field Recording

The study of synaptic plasticity in the hippocampus has focused on the use of the CA3-CA1 lamellar network. Less attention has been given to the longitudinal interlamellar CA1-CA1 network. Recently however, an associational connection between CA1-CA1 pyramidal neurons has been shown. Therefore, there is the need to investigate whether the longitudinal interlamellar CA1-CA1 network of the hippocampus supports synaptic plasticity.
We designed a protocol to investigate the presence or absence of long-term synaptic plasticity in the interlamellar hippocampal CA1 network using electrophysiological field recordings both in vivo and in vitro. For in vivo extracellular field recordings, the recording and stimulation electrodes were placed in a septal-temporal axis of the dorsal hippocampus at a longitudinal angle, to evoke field excitatory postsynaptic potentials. For in vitro extracellular field recordings, hippocampal longitudinal slices were cut parallel to the septal-temporal plane. Recording and stimulation electrodes were placed in the stratum oriens (S.O) and the stratum radiatum (S.R) of the hippocampus along the longitudinal axis. This enabled us to investigate the directional and layer specificity of evoked excitatory postsynaptic potentials. Already established protocols were used to induce long-term potentiation (LTP) and long-term depression (LTD) both in vivo and in vitro. Our results demonstrated that the longitudinal interlamellar CA1 network supports N-methyl-D-aspartate (NMDA) receptor-dependent long-term potentiation (LTP) with no directional or layer specificity. The interlamellar network, however, in contrast to the transverse lamellar network, did not present with any significant long-term depression (LTD).

We used recording and stimulation electrodes in longitudinal hippocampal brain slices and longitudinally positioned recording and stimulation electrodes in the dorsal hippocampus in vivo to evoke extracellular postsynaptic potentials and demonstrate long-term synaptic plasticity along the longitudinal interlamellar CA1.

التحقيق في اللدونة متشابك على المدى الطويل في Interlamellar Hippocampus CA1 عن طريق تسجيل المجال الكهرولوجيسي

The study of synaptic plasticity in the hippocampus has focused on the use of the CA3-CA1 lamellar network. Less attention has been given to the ...

Wireless Electrophysiological Recording of Neurons by Movable Tetrodes in Freely Swimming Fish

The neural mechanisms governing fish behavior remain mostly unknown, although fish constitute the majority of all vertebrates. The ability to record brain activity from freely moving fish would advance research on the neural basis of fish behavior considerably. Moreover, precise control of the recording location in the brain is critical to studying coordinated neural activity across regions in fish brain. Here, we present a technique that records wirelessly from the brain of freely swimming fish while controlling for the depth of the recording location. The system is based on a neural logger associated with a novel water-compatible implant that can adjust the recording location by microdrive-controlled tetrodes. The capabilities of the system are illustrated through recordings from the telencephalon of goldfish.

A novel wireless technique for recording extracellular neural signals from the brain of freely swimming goldfish is presented. The recording device is composed of two tetrodes, a microdrive, a neural data logger, and a waterproof case. All parts are custom-made except for the data logger and its connector.

لاسلكيه الكهربائية تسجيل الخلايا العصبية من قبل Tetrodes المنقولة في بحريه السباحة الأسماك

The neural mechanisms governing fish behavior remain mostly unknown, although fish constitute the majority of all vertebrates. The ability to record brain ...