نشكر Sankalpi Warnasooriya وايمي هومبولت لقراءة نقدية وتحرير المخطوطة. وأيد هذا العمل من المنح المقدمة من وزارة الطاقة (DE-SC0008769) والمؤسسة الوطنية للعلوم (IOS-1127017).

1. نمو S. VIRIDIS <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تهيئة الظروف غرفة النمو إلى 31 ° C/22 ° C (يوم / ليلة)، و 12 ساعة ساعة light/12 الظلام والرطوبة النسبية 50٪ مع العلاج ما قبل فجر 15 ° C 8:30 حتي 09:00 AM. (الشكل 1). في ظل هذه الظروف، S. VIRIDIS A10.1 يستغرق حوالي 21-22 يوما من بذر البذور إلى anthesis. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملء الشقق (4 × 9 خلايا) مع مترو ميكس 360 وإزالة خلية واحدة لسقي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضباب المياه برفق على سطح التربة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> زرع البذور على سطح التربة، وبذرة واحدة لكل خلية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغطية البذور بطبقة من التربة (حوالي 0.5 سم) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضباب سطح التربة والمياه الشقق من القاع. إبقاء سقي من أسفل بعد البذر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وسوف يكون لاستخدام كل عبر الذي سيتم تنفيذه على الأقل ثلاث محطات كآباء والإناث تسع محطات استخدامها كآباء الذكور. وينبغي ترنحت بذر البذور كما سوف جميع النباتات لا زهرة في نفس اليوم. sowi البذورينصح نانوغرام في كل يوم على مدى فترة ثلاثة ايام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ري النباتات 1-2 مرات في اليوم، والذي يعتمد على حجم النباتات وحالة التربة. المياه الزائدة في التربة ليست مواتية للنمو الأمثل للنباتات، وربما يؤدي إلى نمو الفطريات في التربة وتلف الأنسجة ورقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسميد النباتات مرتين في الأسبوع، وذلك باستخدام جاك 15-16-17 بتركيز 100 جزء في المليون. </li></ol> 2. التشذيب وصفها من قبل الإخصاء باقه ورد - يوم 1 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في فترة ما بعد الظهر أو في المساء قبل التلقيح، نقل النباتات من غرفة إلى مختبر النمو (درجة الحرارة (T): 24.06 درجة مئوية ± 0.13 درجة مئوية والرطوبة النسبية (RH) 21.79٪ ± 1.15٪). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حدد وجود عناقيد الابتدائية 1 زهرة إلى 1/3 من الزهور على الدالية التي أزهرت بالفعل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في هذه الدراسة يتم تحديد المجالات الأربعة ضمن باقه ورد على النحو التالي (الشكل 2A؛ طرف والمتوسطة البعيدة والمتوسطة والقريبة القاعدة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> من الناحية المثالية، تختارونهعصام باقه ورد مع 1-5 الزهور التي أزهرت، وقطع غيض من باقه ورد (النهاية البعيدة)، وإزالة كل الزهور في الأقسام الوسطى وقاعدة الداني باستخدام مقص الربيع أو ملقط غرامة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا كان لديه باقه ورد عن 1/10 الى 1/5 من الزهور التي أزهرت، وقطع طرف وتقليم الزهور من قاعدة باقه ورد والاحتفاظ بها فقط القسم السفلي من منتصف القاصي والقسم العلوي من منتصف الداني لمزيد من التشذيب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا كان لديه باقه ورد حوالي 1/4 الى 1/2 من الزهور التي أزهرت، وقطع الجزء الأوسط القاصي والإبقاء على الجزء الأوسط الداني لمزيد من التشذيب فقط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام مقص جراحي لتقليم شعيرات طفيفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة كل الزهور التي أزهرت وجميع الزهور غير الناضجة وترك ما يقرب من 20-30 الزهور / الدالية التي يتم توزيعها بالتساوي في المنطقة (الشكل 3). ممارسة الحرص على الإبقاء على شعيرات في المنطقة التي سيتم التلقيح من أجل حماية زهيرات من ضرر الحرارة ممكن.لكل السنيبلات، تحتفظ العلوي floret غاضب الأكثر نضجا. فإن معظم العلوي floret غاضب لديهم احتمال أعلى من anthesis في وقت التلقيح (الشكل 2B). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بمناسبة جانب واحد من كل زهرة مع علامة دائمة الحمراء وتسجيل عدد من زهيرات على باقه ورد (الشكل 2B). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> العلم باقه ورد مع المعلومات التالية: تاريخ خصاء، ومدة ودرجة الحرارة التي يتم تنفيذ خصاء بها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة يتم قطع باقه ورد، وإزالة جميع الفلاحين من كل مصنع لضمان إعادة تخصيص المزيد من الموارد لتطوير باقه ورد الرئيسي. </li></ol> 3. خصاء مع المياه الدافئة غمس - يوم 1 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعيين حمام مائي إلى 48 درجة مئوية ± 0.1 درجة مئوية لعلاج الحرارة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ينحني برفق عناقيد قلص وتوضع في الماء الدافئ عند 48 درجة مئوية لمدة 3-6 دقيقة. توخي الحذر عدم كسر ساق باقه ورد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حوالي 3-4 عناقيد يمكن أن تراجع توجيذر في وقت واحد، مع الحفاظ على مساحة كافية بين عناقيد لتوزيع موحد للحرارة. فمن الضروري أن يغرق باقه ورد كامل في الماء الدافئ خلال المعالجة الحرارية. ورقة العلم (ورقة subtending باقه ورد التي توفر المواد المغذية إلى باقه ورد) يجب أن لا تتلامس مع الماء الدافئ لمنع وقوع أضرار الحرارة إلى الأنسجة ورقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة يتم تنفيذ خصاء لمدة المرجوة، وإزالة عناقيد من حمام الماء وبلطف التخلص من المياه من باقه ورد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع كيس مخصصة الخبز الصغير مثقبة لتغطية كامل باقه ورد عاجزة وضمان الحصول عليها مع تطور التعادل. أكياس الخبز الصغيرة مثقوبة ويمكن تخصيصها وفقا لحجم باقه ورد (تدرج في الفيديو). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع النباتات مرة أخرى في غرفة النمو حتى اليوم التالي. </li></ol> 4. معبر / التلقيح بعد الإخصاء - يوم 2 ويوم 3 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في الساعة 9:00 صباحا في يوم 2 ويوم 3، نقل الإناث (عاجزة) والقانون النموذجي للتحكيمه الآباء من غرفة إلى مختبر النمو (T: 24.06 ± 0.13 ° C ° C، RH: 21.79٪ ± 1.15٪) لأداء الصلبان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مراقبة وإضافة نقطة حمراء أخرى إلى الزهور التي تتفتح أزهرت أو باستخدام علامة دائمة الحمراء. تسجيل عدد من الزهور أزهرت في الدالية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسجيل تاريخ التلقيح واسم الوالد الذكور على كلمة دلالية لتتبع ما يتم تنفيذها الصلبان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مراقبة وقت الذروة من anthesis في الآباء الذكور. في ظل ظروف لدينا غرفة (الشكل 1) الزهور على عناقيد من الوالد الذكور تبدأ افتتاح متزامن في جميع أنحاء 10:10. من وقت الافتتاح من الزهور، وسوف exsertion كاملة من المتك وإطلاق حبوب اللقاح تحدث بعد 20 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرحلة مثالية للتلقيح هي المرحلة التي يتم تحريرها حبوب اللقاح من الوالد الذكور. سوف الزهور يغلق بعد 20 دقيقة من إطلاق حبوب اللقاح. وبالتالي، فإن مدة لanthesis حوالي 40 دقيقة من وقت افتتاح تدفقالمتطلبات البيئية. لون التغييرات حبوب اللقاح من الأبيض المصفر إلى البني على مدى فترة من حوالي 30 دقيقة بعد إغلاق زهرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدء التلقيح فورا بمجرد المتك أبيض مصفر واضحة على الزهور من الوالد الذكور. يتم تنفيذ Pollinations في يوم 2 ويوم 3 باستخدام أحد الأساليب الثلاثة: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باقه ورد إلى باقه ورد التلقيح: باستخدام أحد باقه ورد منفصلة مثل الذكور، وفرك بلطف باقه ورد مع باقه ورد عاجزة لتسهيل التلقيح وتجاهل باقه ورد ذكر لتجنب التلوث. تكرار عملية التلقيح حتى يتم التلقيح كل باقه ورد عاجزة بنسبة 2-3 عناقيد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> العضو الذكري، إلى وصمة العار التلقيح: باستخدام ملقط اختيار زهرة تتفتح التي المتك مع الأبيض المصفر أو اختيار المتك وجسديا تلمس صمة زهرة على الوالد الإناث. استخدام زهرة واحدة من الوالد الذكور لتلقيح زهرة واحدة على باقه ورد عاجزة. تكرار التلقيح عrocess حتى كل وصمة عار على باقه ورد عاجزة تم التلقيح بواسطة عدد قليل (حوالي 2-3) الزهور / المتك. وسوف يرتدي قناع المكبرة تقديم رؤية أفضل لأداء التلقيح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بين pollinations من الآباء الذكور مختلفة، وتراجع ملقط في الايثانول 95٪ تليها المسح مع Kimwipes لتجنب التلوث بسبب المرحل من حبوب اللقاح بين الصلبان المختلفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باقه ورد ملزم: بعد خصاء، حدد 3-4 عناقيد على الأصل الذكور التي سوف تزدهر في اليوم التالي. ربط لهم مع باقه ورد عاجزة الوالد الإناث باستخدام تويست التعادل. وضع باقه ورد عاجزة أقل قليلا من باقه ورد من الأم الذكور. وضع كيس عازل على عناقيد وتأمين حقيبة في القاعدة مع مشبك الورق. هذا قد يكتمل في يوم 2 مرة واحدة في عناقيد من الوالد الذكور بدء anthesis. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلال الوقت تتفتح في الصباح من يوم 2 ويوم 3، ونفض الغبار أو يهز الكيس عازل للالتسهيلاتالتلقيح إيتات. الاستمرار في نفض الغبار أو يهز عناقيد كل 15 دقيقة طوال كامل مدة anthesis في الصباح (بين 9:00 صباحا 11: 00 AM). إزالة عناقيد الأم الذكر بعد التلقيح وتسمية الجانب الآخر من الزهور أزهرت على باقه ورد عاجزة. تسجيل عدد من الزهور أزهرت على باقه ورد من كل من الوالدين الإناث. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة تم إجراء التلقيح، ضع حقيبة مخصصة الخبز الصغير مثقبة لتغطية باقه ورد من الأم للإناث وتأمين في القاعدة باستخدام تطور التعادل بعد التلقيح حتى حصاد البذور. </li></ol> 5. حصاد البذور <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بذور الحصاد بعد 2 أسابيع (14-16 يوما) من يوم التلقيح. وضع علامة في نفس كيس من البذور. البذور التي تحمل علامات حمراء على كلا الجانبين تمثل البذور التي نتجت عن الصليب الوراثية للرقابة. ومن المتوقع أن تكون هذه السلاله هجين الأباعد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تجاهل أي البذور بدون علامات حمراء لأنها تمثلبذور الزهور التي تنتج عن ضعت حديثا بعد خصاء. سوف البذور مع علامات حمراء على جانب واحد فقط من المرجح تمثل البذور الناتجة من التلقيح الذاتي لأنها لم تزهر في الوقت الذي أجريت الصلبان التي تسيطر عليها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> البذور الجافة في 30 درجة مئوية لمدة 2 أيام في مجفف البذور. البذور المجففة مخزن في المختبر (T: 24.06 ± 0.13 ° C ° C، RH: 21.79٪ ± 1.15٪) أو في غرفة البذور (T: 4.0 ° C ± 1.0 درجة مئوية، RH: 20٪ ± 1٪). </li></ol>

<ol>
	<li>Bennetzen, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reference+genome+sequence+of+the+model+plant+Setaria.">Reference genome sequence of the model plant Setaria.</a> Nat Biotechnol. 30, 555-561 (2012).</li><li>Zhang, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+sequence+of+foxtail+millet+(Setaria+italica)+provides+insights+into+grass+evolution+and+biofuel+potential.">Genome sequence of foxtail millet (Setaria italica) provides insights into grass evolution and biofuel potential.</a> Nat Biotechnol. 30, 549-554 (2012).</li><li>Li, P., Brutnell, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Setaria+viridis+and+Setaria+italica,+model+genetic+systems+for+the+Panicoid+grasses.">Setaria viridis and Setaria italica, model genetic systems for the Panicoid grasses.</a> J Exp Bot. 62, 3031-3037 (2011).</li><li>Brutnell, T. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Setaria+viridis:+a+model+for+C4+photosynthesis.">Setaria viridis: a model for C4 photosynthesis.</a> Plant Cell. 22, 2537-2544 (2010).</li><li>Doust, A. N., Kellogg, E. A., Devos, K. M., Bennetzen, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Foxtail+millet:+a+sequence-driven+grass+model+system.">Foxtail millet: a sequence-driven grass model system.</a> Plant Physiol. 149, 137-141 (2009).</li><li>Siles, M. M., Baltensperger, D. D., Nelson, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technique+for+artificial+hybridization+of+foxtail+millet+[Setaria+italica+(L.)+Beauv.].">Technique for artificial hybridization of foxtail millet [Setaria italica (L.) Beauv.].</a> Crop Sci. 41, 1408-1412 (2001).</li><li>Li, H. W., Meng, C. J., Liu, T. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Problems+in+the+Breeding+of+Millet+(Setaria+Italica+(L.)+Beauv.).">Problems in the Breeding of Millet (Setaria Italica (L.) Beauv.).</a> Agron. J. 27, 963-970 (1935).</li><li>Willweber-Kishimoto, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interspecific+relationships+in+the+genus+setaria.">Interspecific relationships in the genus setaria.</a> Contributions from the Biological Laboratory, Kyoto University. 14, 1-41 (1962).</li><li>Chang, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+flowering+and+hybridization+technique+in+Setaria.">Studies on flowering and hybridization technique in Setaria.</a> Nungyeh-hsueh Pao (Jour. Agric.) Act. Agric. Sin. 9, 68-76 (1958).</li><li>Darmency, H., Pernes, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+wild+Setaria+viridis+(L.)+Beauv.+to+improve+triazine+resistance+in+cultivated+S.+italica+(L.)+by+hybridization.">Use of wild Setaria viridis (L.) Beauv. to improve triazine resistance in cultivated S. italica (L.) by hybridization.</a> Weed Research. 25, 175-179 (1985).</li><li>Sakai, S., Shin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Artificial+hybridization+of+Setaria+italica+by+hot+water+treatment.">Artificial hybridization of Setaria italica by hot water treatment.</a> Bull. Fac. Agric. Kagoshima Univ. , 28-37 (1955).</li><li>Malm, N. R., Rachie, K. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Setaria millets: A review of the world literature S.B. , 513-529 (1971).</li><li>Miyaji, Y., Samura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+atmospheric+humidity+on+flowering+and+pollination+in+Setaria+italica.">The influence of atmospheric humidity on flowering and pollination in Setaria italica.</a> Bull. Fac. Agric. Kagoshima Univ. , 1-6 (1954).</li><li>Wang, Z. M., Devos, K. M., Liu, C. J., Wang, R. Q., Gale, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Construction+of+RFLP-based+maps+of+foxtail+millet,+Setaria+italica+(L.).">Construction of RFLP-based maps of foxtail millet, Setaria italica (L.).</a> P. Beauv. Theoret. Appl. Genetics. 96, 31-36 (1998).</li><li>RangaswamiAyyangar, G. N., Narayanan, T. R., Seshadri Sarma, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+in+Setaria+italica+(Beauv.),+the+Italian+millet.+Part+I.">Studies in Setaria italica (Beauv.), the Italian millet. Part I.</a> Indian J. Agr. Sci. , 561-571 (1933).</li><li>Heh, C. M., Mei, T. F., Yang, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anthesis+of+Millet,+Setaria+Italica+(L.)+Beauv.">Anthesis of Millet, Setaria Italica (L.) Beauv.</a> Agron. J. 29, 845-853 (1937).</li><li>Doust, A. N., Devos, K. M., Gadberry, M. D., Gale, M. D., Kellogg, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetic+basis+for+inflorescence+variation+between+foxtail+and+green+millet+(poaceae).">The genetic basis for inflorescence variation between foxtail and green millet (poaceae).</a> Genetics. 169, 1659-1672 (2005).</li></ol>

يعلن الكتاب أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.

أهمية العلاج قبل الفجر للحصول على وتيرة عالية من ذرية هجين الأباعد فمن الضروري أن يكون anthesis متزامن للغاية من الآباء الذكور والإناث. في البداية، ونحن تدوير الأنظمة درجة الحرارة والضوء (31 ° C/22 ° C، اليوم / ليلة) واستخدمت S. VIRIDIS الانضمام A10.1 لجميع pollinations. في ظل هذه الظروف، فإن معظم الزهور فتح في الصباح الباكر قبل ارتفاع درجات الحرارة إلى 31 درجة مئوية، على الرغم من بعض الزهور مفتوحة بشكل عشوائي بين الساعة 8:00 AM-8: 00 AM. دراسات سابقة في S. ITALICA تشير إلى أن الوقت من اليوم، والموقع والموسم تسهم في الاختلاف في anthesis 7،15،16. سيليس وآخرون. احظت أن 6 anthesis كان مرتبطا مع التغيرات السريعة في درجات الحرارة والرطوبة، ولكن ليس مع انخفاض درجة الحرارة والرطوبة العالية، في حد ذاته، كما اختتمت في الدراسات السابقة 7،15. لذلك، قمنا بتوظيف قبل الفجر علاج البرد من 15 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة (من الساعة 8:30 AM-9: 00 ص) إلى تقليدالشرط قبل الفجر الطبيعية. هذا العلاج البارد قبل الفجر ساعد في مزامنة anthesis في الوالدين. لاحظنا أنه على الرغم من تحديد غرفة لمستويات الرطوبة النسبية 50٪، وزيادة الرطوبة النسبية داخل الغرفة إلى مستوى فوق 70٪ كما انخفضت درجة الحرارة من 22 درجة مئوية إلى 15 درجة مئوية، واستمرت في البقاء فوق 70٪ حتى درجة حرارة وارتفعت تدريجيا إلى 31 درجة مئوية بعد 9:30 صباحا. في الساعة 9:00 صباحا، عاجزة الآباء الإناث ويتم جلب النباتات من الأم الذكور إلى المختبر (T: 24.06 ± 0.13 ° C ° C، RH: 21.79٪ ± 1.15٪). الزهور من الآباء الذكور بدء الافتتاح حوالي 10:10، ويمكن إجراء التلقيح الساعة 10:30 AM-11: 00 PM. وترد قائمة مفصلة لجميع الكواشف والمعدات في الجدول 2. أهمية إعداد باقه ورد لخصاء في ظل الظروف الغرفة في هذه الدراسة (الشكل 1)، ومدة تتفتح باقه ورد الأولية تراوحت2-3 أيام. عادة، والزهور التي تقع في منتصف البعيدة من الإزهار (الشكل 2A) أولا فتح وفتح قريب وبشكل أقصى يسبق. العدد المثالي من الزهور إلى الإبقاء على باقه ورد هو 20-30. وينبغي اتخاذ الحذر أثناء إزالة الزهور غير ناضجة بحيث يتم الاحتفاظ فقط الزهور متطورة (في أعلى زهرة أو أكبر على السنيبلات 17). وضع العلامات مع علامة حمراء على كلا الجانبين من الزهور يساعد على تمييز كفاءة ذرية هجين الأباعد المفترضة من البذور من الزهور وضعت حديثا بعد خصاء. بالإضافة إلى ذلك، فمن المهم أن يترك شعيرات على عناقيد قبل خصاء لحماية زهيرات من ضرر الحرارة واسعة، ولكن كخيار، ويمكن إزالتها بعد خصاء باستخدام مقص الربيع من أجل تسهيل عملية التلقيح، وخصوصا عندما ملزمة لباقه ورد ويستخدم تقنية (أرقام 2C و 2D). الأمثل لدرجة الحرارةمدة العلاج د لمعالجة المياه الدافئة الأساس لخصاء من خلال غمس الماء الدافئ هو أن حبوب اللقاح هو أكثر حساسية للحرارة من سطح بغيض. ومع ذلك، فإن مدة ودرجة حرارة المعالجة الحرارية قد تختلف بين الأنواع الهلبانة والانضمام. بشكل عام، فإن درجة حرارة أعلى مع وقت العلاج أقصر أو انخفاض درجة الحرارة مع الوقت العلاج يعد لها نفس التأثير على خصاء. وقد أفيد أن المعالجة الحرارية من 42 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة أو 10 47 درجة مئوية لمدة 10 دقيقة 14 المقدمة S. لم يحدد ITALICA حبوب اللقاح غير قابلة للحياة، ولكن كفاءة هذه العلاجات. وقد وضعنا لدينا بروتوكول التالية فرضية أنه في ظل درجة حرارة الوجه الأمثل، ومدة العلاج، وحبوب اللقاح من كل الزهور على الاحتفاظ سوف الوالد الإناث تكون غير قابلة للحياة في حين الوصمات ستبقى تقبلا. ومع ذلك، بعد مقارنة وتحليل آثار العديد من درجات الحرارة وفترات العلاج (الجدول 1)، وجدنا أن حساسية إلى المعالجة الحرارية تختلف بين الزهور الإبقاء على كل الدالية، وبالتالي فإنه من الصعب للقضاء على البذور الناتجة من التلقيح الذاتي تماما. نستنتج أن كفاءة إنتاج ذرية هجين الأباعد هو أعظم عندما يتم تنفيذ العلاجات في 48 درجة مئوية لمدة 3-6 دقيقة في S. VIRIDIS الانضمام A10.1. وقت الذروة من anthesis وتلاقح عندما تصل إلى النضج والزهور على وشك فتح، المتك هي بيضاء صفراء اللون ويسفك حبوب اللقاح في أقرب وقت exsert المتك من الزهور 8. المتك تتحول تدريجيا البني بعد إلقاء حبوب اللقاح حيث تبدأ الزهور إغلاقه. بمجرد الافراج عنهم، والجدوى من حبوب اللقاح غير معروف. لذا، فمن الأهمية بمكان أن استخدام حبوب اللقاح من الزهور فتح أو فتح حديثا على الأصل الذكور في أقرب وقت ممكن. في ظل ظروف لدينا غرفة (الشكل 1)، فإن غالبية ابحث عن المزيدالتمرير من الآباء الذكور تبدأ في فتح الساعة 10:10 صباحا والزهور فتحت تسليط حبوب اللقاح الساعة 10:30 PM. وبالتالي، فإن من المرغوب فيه نافذة لأداء التلقيح هو 10:30 حتي 11:00. تبقى الوصمات خارج glumes بعد الزهور وثيقة وتقبلا قد يكون لحبوب اللقاح. وقد لوحظ هذا في السابق، وأكد في S. ITALICA أن الوصمات هي تقبلا لمدة 48 ساعة بعد الافتتاح سيليس زهرة وآخرون. 6، ولذلك فمن المهم أن حقيبة عناقيد التالية المعالجة الحرارية وبعد أداء الصلبان التي تسيطر عليها. كما نوقش أعلاه، نوصي pollinations الأداء على حد سواء يوم 2 ويوم 3 بعد خصاء. طرق للتلقيح قارنا كفاءة ثلاث تقنيات التلقيح. إذا تتفتح الزهور لا يحد، باقه ورد إلى باقه ورد التلقيح هو الأسلوب الأكثر فعالية وسوف تسفر عن عدد أكبر من ذرية هجين الأباعد. إذا عناقيد تتفتح تحد، تردد أعلى من سوسيتم إنتاج ذرية utcross عندما يتم استخدام الأسلوب العضو الذكري إلى وصمة العار. لقد حصلنا على ذرية هجين الأباعد من الطريقتين بنجاح. وقد استخدم أسلوب &quot;عناقيد ملزمة&quot; في عبور S. ITALICA 6 لكننا وجدنا هذا الأسلوب ليكون الأسلوب الأقل كفاءة باعتبارها نافذة الوقت لحبوب اللقاح سفك الوالد الذكور قصيرة. علاوة على ذلك، هناك أقل من السيطرة على التلقيح وشعيرات على S. قد عناقيد VIRIDIS أيضا تعيق حركة حبوب اللقاح على سطح بغيض. حصاد البذور، والتجفيف والتخزين بعد الحصاد، وينبغي أن يجفف في البذور 30-33 درجة مئوية لمدة 2 ايام. Anthecium يجب إزالة لتلطيخ المكتب المركزي للاحصاءات، إذا لزم الأمر. يجب أن يتم تخزين البذور في مكان بارد وجاف (T: 24.06 ± 0.13 ° C ° C، RH: 21.79٪ ± 1.15٪) للتخزين على المدى القصير (أقل من سنتين) أو في غرفة البذور (T: 4.0 10 ° C ± 1.0 درجة مئوية، RH: 20٪ ± 1٪) للتخزين على المدى الطويل.ظروف التخزين السيئة قد تؤدي إلى انخفاض معدلات بقاء 8. وقد لاحظنا أن معدل إنبات S. VIRIDIS A10.1 ما يقرب من 5٪ عندما زرعت بعد 4 أيام الحصاد، ولكن يمكن زيادتها إلى 90-96٪ بعد التخزين في المختبر (T: 24.06 ± 0.13 ° C ° C، RH: 21.79٪ ± 1.15٪) ل110 يتبع أيام ما بعد الحصاد من قبل الطبقات لمدة ثلاثة أيام في -80 درجة مئوية إلى كسر سكون البذور. لالطبقية في -80 درجة مئوية، والبذور الجافة يمكن وضعها في وعاء محكم (مثل أنبوب الطرد المركزي الصغيرة أو مغلف عملة في كيس من البلاستيك مختوم) والاحتفاظ بها في -80 درجة مئوية لمدة 3 أيام قبل الزراعة. بعد 16 شهرا من التخزين في المختبر (T: 24.06 ± 0.13 ° C ° C، RH: 21.79٪ ± 1.15٪)، لا يزال من الممكن الحصول على نسبة الإنبات من 90-95٪. بالإضافة إلى ذلك، لكسر السكون، والبذور يمكن أن تجفف في 30-33 درجة مئوية لمدة 2 أيام بعد الحصاد، وقدمت بعد ذلك التقسيم الطبقي لمدة ثلاثة أيام في -80 درجة مئوية تليها إزالةanthecium قبل الزراعة. بعد هذه العلاجات، ويمكن تحقيق معدلات إنبات البذور لمدة تصل إلى 33٪. المزايا والقيود والتعديلات الممكنة هنا نقدم البروتوكول القياسي الأول لأداء الصلبان في S. VIRIDIS A10.1 باستخدام المعالجة الحرارية للخصاء. وعلى النقيض من خصاء المادية، وهذا البروتوكول هو أقل الغازية وسهلة نسبيا للوضع في المختبر. وعادة ما يستغرق حوالي 15 دقيقة لتقليم باقه ورد واحد وحوالي 15 عناقيد ويمكن خفض وعبرت / شخص / يوم. على افتراض ما معدله 3-5 هجين الأباعد ذرية / الدالية يمكن استردادها في ظل ظروف الأمثل، ما مجموعه 45-75 ذرية هجين الأباعد يمكن أن تنتج من قبل شخص واحد في يوم واحد. علاوة على ذلك، هذه التقنية يمكن تطبيقها على الصلبان في الأنواع الأخرى الهلبانة، على الرغم من التحسينات الإضافية سوف تكون على الأرجح. إذا كان مساحة محدودة غرفة النمو، والنباتات يمكن زراعتها في البيت الأخضر أو ​​دوائر النمو دون trea قبل الفجرtment حتى يخرج باقه ورد قبل أن يتم نقلها إلى غرفة الظروف الأمثل.

S. VIRIDIS هو NADP-ME النوع الفرعي C 4 العشب ترتبط ارتباطا وثيقا تغذية الطاقة الحيوية التبن الأسهم (NAD-ME النوع الفرعي)، محصول الحبوب ذيل الثعلب الدخن، والحشائش الزراعية غينيا العشب 5. الجينوم 510 ميغابايت من شكل المزروعة الهلبانة، S. ITALICA، وقد تم مؤخرا التسلسل 1،2 و25X تغطية تسلسل الجينوم من النسبية الأعشاب الضارة، S. VIRIDIS، هو في التقدم (غير منشورة). S. VIRIDIS لديها عدد من الخصائص التي تجعل من نموذج نظام الوراثية يحتمل ممتازة بما في ذلك الوقت جيل السريع، مكانة صغيرة، ومتطلبات النمو بسيطة، وإنتاج البذور وافرة 3. الأهم من ذلك، وقد تم مؤخرا تطوير أساليب لكلا التحول عابرة ومستقرة من S. VIRIDIS التي توفر الفرصة لخلق النباتات المعدلة وراثيا 4. ومع ذلك، عقبة رئيسية في تطوير الأدوات الوراثية للS. VIRIDIS هو recalc لهاitrance إلى التهجين. حتى الآن، وقد تم نشر أي بروتوكول قياسي من شأنها أن تسمح الإنتاج السريع للبذور من الصلبان التي تسيطر عليها. الصلبان الجينية في S. عادة ما يتم تنفيذها من قبل ITALICA خصاء من خلال إزالة المتك من الزهور 6،7،8 أو من خلال المعالجة الحرارية من الزهور من الآباء والأمهات الإناث 9-11. بعد هذه العلاجات، المتك أو عناقيد من الأزهار غير المعالجة / الآباء الذكور ومتآكل بلطف الوصمات ضد الإفراج عن حبوب اللقاح. في خصاء، تتم إزالة المتك باستخدام ملقط غرامة على الفور بعد فتح floret غاضب والعضو الذكري هو بداية لexsert، ولكن لم تسلط بعد اللقاح 6-8. من بين التحديات التي تواجه هذا الأسلوب الأخير هو صعوبة في أداء خصاء في فترة زمنية ضيقة بين فتح وتسليط حبوب اللقاح من زهرة. ومدة فتح وإغلاق زهرة واحدة تختلف تبعا لحالة الانضمام والبيئية، ويمكن أن تتراوح بين 7 دقائق &lt;سوب&gt; 6-2،5 ساعة في 12 S. ITALICA. منذ سفك حبوب اللقاح كما يحدث exsert المتك من floret غاضب، تحتاج المتك إلى إزالتها بعناية وبسرعة، وبالتالي، فمن الصعب تجنب التلوث بسبب التلقيح الذاتي. بالإضافة إلى ذلك، كما يتم تنفيذ pollinations مباشرة بعد خصاء، وعدد من الصلبان التي يمكن القيام بها للشخص الواحد / في اليوم الواحد محدودة. كطريقة بديلة، عناقيد ناضجة يمكن مغموسة في الماء الدافئ لتسخين القتل تطوير حبوب اللقاح 9،10،13،14 مع الاستفادة من أداء الصلبان على عدد كبير من عناقيد. ومع ذلك، فإن درجة الحرارة ومدة المعالجة الحرارية تختلف على نطاق واسع من التجارب المختلفة (على سبيل المثال 47 درجة مئوية لمدة 10 دقيقة 14 و 42 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة 10). علاوة على ذلك، لم تنشر تحليلات منهجية على فعالية الإخصاء بوساطة الحرارة. وبالتالي، وهو معيار وطريقة بسيطة لأداء الصلبان الجينية في S. الخامسالقزحية من شأنه أن يعجل بشكل كبير تنمية الموارد الوراثية وإنشاء S. VIRIDIS كنظام نموذج داخل المجتمع البحثي. نفيدكم تطوير وتعظيم الاستفادة من بروتوكول قياسي لأداء الصلبان الجينية في S. VIRIDIS. تزرع النباتات في بيئات تسيطر عليها لمزامنة تنمية زهرة وزيادة استنساخ الإجراء. يتم تنفيذ الصلبان باستخدام S. المعدلة وراثيا خط VIRIDIS كما ذكر الوالد الذي يحتوي على الجين مراسل المكتب المركزي للاحصاءات 4 لتسهيل التعرف على الصلبان ناجحة الجينية التي تسيطر عليها. هو الدافع وراء التحوير من قبل المكتب المركزي للاحصاءات اليوبيكويتين المروج الأرز والتي تمكن من التهديف بذور F1 فورا بعد الحصاد، وبالتالي يوفر الفحص النوعي من السهل تحديد كفاءة خصاء والتلقيح. لقد استخدمنا المعالجة الحرارية بسيطة مع الماء الدافئ لخصاء يرافقه وضع العلامات من الزهور التي كانت emasculaتيد للقضاء على البذور الناتجة من الزهور وضعت حديثا بعد خصاء. بعد اختبار سلسلة من المعالجات الحرارية في درجات حرارة متفاوتة ومتساهلة مدة غمس في الماء الدافئ، وأنشأنا درجة الحرارة والوقت الأمثل فترات من 48 درجة مئوية 3-6 دقيقة. تم العثور على علاج البرد قبل الفجر لتعزيز anthesis متزامن في كل من الآباء والأمهات من أجل تسهيل عبر التلقيح. ناقشنا أيضا الخطوات الرئيسية في البروتوكول وتطبيقها في المستقبل من هذا الأسلوب لانضمام الهلبانة الأخرى.

<table border="1">
		<tbody>
		 <tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Cat. Number</td>
 <td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Scissors, spring</td>
			<td>World Precision Instruments, Inc</td>
			<td>14126</td>
		<td></td>	
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Forceps, Dumostar Biology Polished</td>
			<td>SPI Supplies</td>
			<td>TD5BP-XD</td>
		<td></td>	
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Surgical Scissors</td>
			<td>F.S.T (Fine Science Tools)</td>
			<td>14005-12</td>
		<td></td>	
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Europack Clear Polypropylene Micro-Perforated Crusty Bread Bags 6"x28"</td>
			<td><a href="http://www.pjpmarketplace.com" target="_blank">http://www.pjpmarketplace.com</a></td>
			<td>361001</td>
 <td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Flats</td>
			<td>T.O. Plastics</td>
			<td>715401C </td>
			<td></td>	
		 </tr>
		 <tr>
			<td>metro mix 360</td>
			<td>Hommert International</td>
			<td>10-0356-1</td>
			<td></td>	
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Jack's 15-16-17</td>
			<td>Hommert International</td>
			<td>07-5925-1</td>
			<td></td>	
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Kimwipes</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>34120</td>
			<td></td>	
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sharpie Ultra Fine Point Permanent Markers, Red</td>
			<td>Staples</td>
			<td>37002</td>
 <td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Donegan DA-10 OptiVisor Headband Magnifier, 3.5x Magnification, 4" Focal Length</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>DA-10, B0015IP380</td>
 <td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>12"24/7 Packaging Hand Impulse Sealer Heat Seal Machine Poly Sealing Free Element Grip </td>
			<td>Amazon</td>
			<td>N/A</td>
 <td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>water bath</td>
			<td>VWR scientific</td>
			<td>Model: 1166</td>
			<td></td>	
		 </tr>
		 <tr>
			<td>BDW walk in plant growth chamber</td>
			<td>Conviron</td>
			<td>BDW 40</td>
 <td></td>
		 </tr>
		</tbody>
 </table>

methods for performing crosses in setaria viridis, a new model system for the grasses

الهلبانة البلدي هو نظام نموذجي الناشئة لC 4 الأعشاب. يرتبط ارتباطا وثيقا إلى تغذية الطاقة الحيوية التبن الأسهم ومحصول الحبوب ذيل الثعلب الدخن. في الآونة الأخيرة، الجينوم 510 ميغابايت من الدخن ذيل الثعلب، S. ITALICA، وقد التسلسل 1،2 و25X تغطية تسلسل الجينوم للS. النسبية الأعشاب الضارة VIRIDIS قيد التقدم. S. VIRIDIS لديها عدد من الخصائص التي تجعل من نموذج نظام الوراثية يحتمل ممتازة بما في ذلك الوقت جيل السريع، مكانة صغيرة، ومتطلبات النمو بسيطة، وإنتاج البذور وافرة 3 والنظم التي وضعت لكلا عابرة ومستقرة التحول 4. ومع ذلك، فإن علم الوراثة من S. VIRIDIS هو غير مستكشفة إلى حد كبير، في جزء منه، وذلك بسبب عدم وجود طرق مفصلة لأداء الصلبان. حتى الآن، لم يتخذ بروتوكول قياسي من شأنها أن تسمح الإنتاج السريع للبذور من الصلبان التي تسيطر عليها. وبريه بروتوكولented هنا هو الأمثل لأداء الصلبان الجينية في S. VIRIDIS، الانضمام A10.1. لقد استخدمنا المعالجة الحرارية بسيطة مع الماء الدافئ لخصاء بعد تشذيب باقه ورد للاحتفاظ 20-30 زهيرات ووضع العلامات من الزهور للقضاء على البذور الناتجة من الزهور وضعت حديثا بعد خصاء. بعد اختبار سلسلة من المعالجات الحرارية في درجات حرارة متفاوتة ومتساهلة مدة غمس، أنشأنا درجة الحرارة المثلى والنطاق الزمني من 48 درجة مئوية لمدة 3-6 دقيقة. باستخدام هذا الأسلوب، ما لا يقل عن 15 الصلبان يمكن أن يقوم بها عامل واحد في اليوم وبمتوسط ​​3-5 ذرية هجين الأباعد في الدالية يمكن استردادها. لذلك، في المتوسط ​​45-75 ذرية هجين الأباعد يمكن أن تنتج من قبل شخص واحد في يوم واحد. وتنفيذ واسعة من هذه التقنية تسهيل وضع السكان السلالة النقية المؤتلف من S. VIRIDIS X S. VIRIDIS أو S. VIRIDIS X S. ITALICA، تعيين الطفرات من خلال الجزء الأكبر ذاتهاتحليل gregant وخلق المسوخ العليا للتحليل الجيني.

في هذه الدراسة، استخدمنا S. التسلسل VIRIDIS الانضمام A10.1 كأصل الإناث، وS. المعدلة وراثيا خط VIRIDIS (أيضا A10.1) التي تحتوي على الجين مراسل المكتب المركزي للاحصاءات 4 كما ذكر الوالد لجميع pollinations. تم استخدام النظام النمو الأمثل لمزامنة المزهرة كما هو مبين في الشكل 1. اختبرناها عدة مجموعات من درجة حرارة ووقت المعالجة الحرارية للخصي وأشار إلى أن حوالي 40-80٪ من الزهور على الاحتفاظ باقه ورد عاجزة أزهرت في الثاني يوم 2 بينما أزهرت الباقي في اليوم الثالث 3 (الشكل 2). ومع ذلك، إذا كانت المعالجة الحرارية شديدة جدا، للحصول على مثال، 49 درجة مئوية لمدة 4 دقائق، وعدد قليل جدا أو معدومة الزهور أزهرت في الثاني يوم 2. تم إجراء تلاقح في الثاني و2 أو 3 يوم الثالث بعد خصاء، والتي كانت تعتمد على وقت الذروة من anthesis من الآباء الذكور. كان observإد أن الزهور الشباب استمر لتطوير بعد خصاء، ونضجت والتلقيح الذاتي pollinations بعد 3-6 أيام للرقابة. بعد 7-10 أيام آخر التلقيح، والزهور التي هي بيضاء اللون واضحة على باقه ورد. وغير مخصبة هذه الزهور البيضاء إما بسبب ضرر الحرارة أو ضعف التلقيح. في نفس الوقت، والزهور التي تم التلقيح بنجاح البدء في تحمل بذور الظلام وبدء تحطيم بعد 14 يوما. بذور الظلام مع علامات حمراء المقطوع بتاريخ اليوم 14 بعد التلقيح يمكن تمييزها بوضوح من البذور بدون علامات الحمراء التي كانت لا تزال خضراء، ولم تتحطم. إذا تأخر الحصاد، وanthecium من البذور مع وبدون علامات حمراء على حد سواء بدوره الظلام، مما يجعل من الصعب التمييز بسرعة البذور مع علامات حمراء في برك المقطوع. لتحسين أجريت بروتوكول المعبر عدة تجارب المعالجة الحرارية على النحو الموجز في الجدول 1. في المتوسطتم انتشال 0-10 بذور / باقه ورد من مختلف التجارب المعالجة الحرارية. بعد الحصاد، والبذور المجففة في 30 درجة مئوية لمدة 2 أيام في مجفف البذور تليها إزالة anthecium باستخدام مزيل anthecium. بعد إزالة anthecium، كانت ملطخة بذور F1 المفترضة مع المكتب المركزي للاحصاءات حل تلطيخ، وآله هجين الأباعد ملطخة اللون الأزرق في 1-2 ساعة (الشكل 2F). بناء على هذه النتائج، فإننا نوصي المعالجة الحرارية من 48 درجة مئوية لمدة 3-6 دقيقة. وعلاوة على ذلك، فإننا نوصي بأن الصلبان أن يؤديها على حد سواء يوم 2 ويوم 3 التالية خصاء. لدراسة فعالية هذه التقنية في أداء الصلبان مع الانضمام الهلبانة الأخرى أو الأنواع، والصلبان بين S. VIRIDIS A10.1 وثمانية متنوعة S. الانضمام VIRIDIS واحدة S. أجريت pumila الانضمام. على الرغم يوما لالمزهرة المتنوعة بين الانضمام وجدنا أن الزهور من كل ثمانية S. الانضمام VIRIDIS واحدة S.pumila الانضمام يبدأ الافتتاح بين 10:00 حتي 11:00 مع وقت الذروة الافتتاح في 10:20 حتي 11:00 بعد العلاج البارد قبل الفجر. هذا يشير إلى أن علاج البرد قبل الفجر يمكن تطبيقها على الانضمام الهلبانة متنوعة. تم استخدام المعالجة الحرارية من 48 درجة مئوية لمدة 5-6 دقيقة إلى إضعاف S. VIRIDIS A10.1 الذي كان يستخدم كأصل الإناث لجميع الصلبان التي يؤدونها. نحن تعافى من واحد إلى 12 البذور من الصلبان بين A10.1 وثلاثة من S. متنوعة الانضمام البلدي وستة البذور من كرة عرضية واحدة بين S. VIRIDIS A10.1 واحد S. pumila الانضمام. ومع ذلك، في هذا الوقت أننا لم تحدد إذا أدت هذه البذور من testcross ناجحة أو كانت نتيجة لتلوث الذاتي. بغض النظر، وتشير هذه النتائج الأولية أن ظروف النمو تستخدم لS. VIRIDIS A10.1 يمكن استخدامها لتوليد الصلبان مع متنوعة S. الانضمام البلدي وربما أنواع أخرى من الهلبانة. <tablالبريد الحدود = &quot;1&quot;&gt; <tbody><tr><td> درجة الحرارة الحرارة علاج (° C) </td><td> الوقت الحرارة علاج (دقيقة) </td><td> # الصلبان </td><td> ج. # من الزهور بعد تقليم </td><td> يوم من التلقيح (بعد يوم emasc) </td><td> ج. # بذور (الأحمر) / باقه ورد (يعني) </td><td> ج. جوس٪ (+) / بذور (الأحمر) </td><td> ج. بذور # HYB (جوس +) </td><td> دقيقة # HYB البذور </td><td> بذور HYB ماكس # </td></tr><tr><td> 47 </td><td> 10 </td><td> 2 </td><td> 27 </td><td> 2nd اليوم </td><td> 0 </td><td> 0 </td><td> 0 </td><td> 0 </td><td> 0 </td></tr><tr><td> 48 </td><td> 3 </td><td> 3 </td><td> 36 </td><td> 2nd اليوم </td><td> 5 </td><td> 60 </td><td> 3 </td><td> 1 </td><td> 5 </td></tr><tr><td></td><td> 4</td><td> 3 </td><td> 25 </td><td> يوم 3 </td><td> 10 </td><td> 50 </td><td> 5 </td><td> 3 </td><td> 7 </td></tr><tr><td></td><td> 5 </td><td> 8 </td><td> 25 </td><td> 2nd اليوم </td><td> 5 </td><td> 60 </td><td> 3 </td><td> 1 </td><td> 6 </td></tr><tr><td></td><td> 6 </td><td> 3 </td><td> 25 </td><td> 2nd اليوم </td><td> 4 </td><td> 75 </td><td> 3 </td><td> 0 </td><td> 4 </td></tr><tr><td></td><td> 7 </td><td> 4 </td><td> 24 </td><td> 2nd اليوم </td><td> 3 </td><td> 33 </td><td> 1 </td><td> 0 </td><td> 4 </td></tr><tr><td></td><td> 7 </td><td> 1 </td><td> 25 </td><td> يوم 3 </td><td> 4 </td><td> 75 </td><td> 3 </td><td> N / A </td><td> N /A </td></tr><tr><td> 49 </td><td> 1 </td><td> 3 </td><td> 23 </td><td> 2nd اليوم </td><td> 5 </td><td> 25 </td><td> 1 </td><td> 0 </td><td> 2 </td></tr><tr><td></td><td> 2 </td><td> 7 </td><td> 26 </td><td> 2nd اليوم </td><td> 8 </td><td> 25 </td><td> 2 </td><td> 0 </td><td> 4 </td></tr><tr><td></td><td> 3 </td><td> 5 </td><td> 22 </td><td> 2nd اليوم </td><td> 0 </td><td> 0 </td><td> 0 </td><td> 0 </td><td> 1 </td></tr><tr><td></td><td> 4 </td><td> 4 </td><td> 25 </td><td> 2nd اليوم </td><td> 0 </td><td> 0 </td><td> 0 </td><td> 0 </td><td> 0 </td></tr></tbody></table> الجدول 1. تعظيم الاستفادة من المعالجة الحرارية للخصاء. نتائج تغيير كل من درجة الحرارة والوقت من المعالجة الحرارية. أجريت Pollinations واحد (2 الثانية يوم) أو يومين (3 اليوم الثالث) التالية خصاء وoutcrosses ناجحة لياليمحفور مع المكتب المركزي للاحصاءات تلطيخ <img alt="الشكل 1" fo:content-src="/files/ftp_upload/50527/50527fig1highres.jpg" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/50527/50527fig1.jpg" /> الشكل 1. وتظهر الأمثل ظروف النمو مع غرفة قبل الفجر علاج البرد. درجة الحرارة وفترات زمنية للنمو الأمثل والتزامن من إنتاج الزهور. تظهر الأسهم الخضراء والحمراء النافذة الأمثل لأداء الصلبان وخصاء، على التوالي. <img alt="الرقم 2" src="/files/ftp_upload/50527/50527fig2.jpg" /> الشكل 2. إعداد باقه ورد لمعبر والمكتب المركزي للاحصاءات تلطيخ من ذرية هجين الأباعد. (A) A باقه ورد من الهلبانة البلدي A10.1 قبل التشذيب، والتي تبين ما يقرب من 1/10 من الزهور فتح. ويرد الأقسام الأربعة والاتجاهية في تطور anthesis على طول الدالية. <strongباقه ورد&gt; (B) A قلص قبل خصاء مع شعيرات الاحتفاظ بها. (ج) باقه ورد عاجزة بعد إزالة شعيرات. (د) باقه ورد عاجزة في يوم 2 بعد خصاء، والتي تبين الزهور التي تتفتح (صورة التي مأخوذة في الساعة 10:30 ص). (E) وباقه ورد من الأم الذكور (المعدلة وراثيا الهلبانة البلدي خط A10.1 يحمل β غلوكورونيداز (المكتب المركزي للاحصاءات) مراسل الجينات) التي تتفتح بعد العلاج قبل الفجر (صورة التي مأخوذة في الساعة 10:30 ص). A من خلال البريد، والحانات نطاق = 1 مم. (F) المزعومين ذرية هجين الأباعد بعد تلطيخ المكتب المركزي للاحصاءات لمدة 2 ساعة تليها distaining في 70٪ (V / V) الايثانول. بذور اثنين من الناحية اليمنى هي الضوابط السلبية والإيجابية، على التوالي. <img alt="الرقم 3" src="/files/ftp_upload/50527/50527fig3.jpg" /> الرقم 3. تدفق الرسم البياني للبروتوكول تمثيل التخطيطي من مالخطوات ajor المشاركة في أداء S. VIRIDIS الصلبان.

Watch this Scientific Journal Video about Methods for Performing Crosses in Setaria viridis, a New Model System for the Grasses at JoVE.com

Methods for Performing Crosses in Setaria viridis, a New Model System for the Grasses

قمنا بتطوير منهجية لأداء الصلبان في VIRIDIS الهلبانة (S. البلدي). ينطوي على طريقة التقليم باقه ورد قبل العلاج الماء الساخن لقتل حبوب اللقاح قابلة للحياة. يتم تنفيذ الصلبان التالية نظام النمو تسيطر عليها بشكل جيد، ويؤدي عادة في الانتعاش من 1-7 عبر التلقيح بذرة / ثانية لكل باقه ورد.

طرق لإجراء الصلبان في<em&gt; الهلبانة البلدي</em&gt;، نظام نموذج جديد للأعشاب

Setaria viridis is an emerging model system for C4 grasses. It is closely related to the bioenergy feed stock switchgrass and the grain crop foxtail ...

methods-for-performing-crosses-setaria-viridis-new-model-system-for

Research

JoVE Journal

Environment

Methods for Performing Crosses in Setaria viridis, a New Model System for the Grasses

21.5K Views.  Donald Danforth Plant Science Center.  قمنا بتطوير منهجية لأداء الصلبان في VIRIDIS الهلبانة (S. البلدي). ينطوي على طريقة التقليم باقه ورد قبل العلاج الماء الساخن لقتل حبوب اللقاح قابلة للحياة. يتم تنفيذ الصلبان التالية نظام النمو تسيطر عليها بشكل جيد، ويؤدي عادة في الانتعاش من 1...

Video: Methods for Performing Crosses in Setaria viridis, a New Model System for the Grasses

Multimodal Optical Microscopy Methods Reveal Polyp Tissue Morphology and Structure in Caribbean Reef Building Corals

An integrated suite of imaging techniques has been applied to determine the three-dimensional (3D) morphology and cellular structure of polyp tissues comprising the Caribbean reef building corals Montastraeaannularis and M. faveolata. These approaches include fluorescence microscopy (FM), serial block face imaging (SBFI), and two-photon confocal laser scanning microscopy (TPLSM). SBFI provides deep tissue imaging after physical sectioning; it details the tissue surface texture and 3D visualization to tissue depths of more than 2 mm. Complementary FM and TPLSM yield ultra-high resolution images of tissue cellular structure. Results have: (1) identified previously unreported lobate tissue morphologies on the outer wall of individual coral polyps&#160;and (2) created the first surface maps of the 3D distribution and tissue density of chromatophores and algae-like dinoflagellate zooxanthellae endosymbionts. Spectral absorption peaks of 500 nm and 675 nm, respectively, suggest that M. annularis and M. faveolata contain similar types of chlorophyll and chromatophores. However, M. annularis and M. faveolata exhibit significant differences in the tissue density and 3D distribution of these key cellular components. This study focusing on imaging methods indicates that SBFI is extremely useful for analysis of large mm-scale samples of decalcified coral tissues. Complimentary FM and TPLSM reveal subtle submillimeter&#160;scale changes in cellular distribution and density in nondecalcified coral tissue samples. The TPLSM technique affords: (1) minimally invasive sample preparation,&#160;(2) superior optical sectioning ability,&#160;and (3) minimal light absorption and scattering, while still permitting deep tissue imaging.

An integrated suite of imaging techniques has been applied to determine polyp morphology and tissue structure in the Caribbean corals Montastraeaannularis and M. faveolata. Fluorescence, serial block face,&#160;and two-photon confocal laser scanning microscopy have identified lobate structure, polyp walls, and estimated chromatophore and zooxanthellae densities and distributions.

المتعدد الوسائط البصرية الميكروسكوب طرق كشف ورم الأنسجة الصرف والبنية في منطقة البحر الكاريبي المرجانية بناء المرجان

An integrated suite of imaging techniques has been applied to determine the three-dimensional (3D) morphology and cellular structure of polyp tissues ...

A New Application of the Electrical Penetration Graph (EPG) for Acquiring and Measuring Electrical Signals in Phloem Sieve Elements

Electrophysiological properties of cells are often studied in vitro, after dissociating them from their native environments. However, the study of electrical transmission between distant cells in an organism requires in vivo, artifact-free recordings of cells embedded within their native environment. The transmission of electrical signals from wounded to unwounded areas in a plant has since long piqued the interest of botanists. The phloem, the living part of the plant vasculature that is spread throughout the plant, has been postulated as a major tissue in electrical transmission in plants. The lack of suitable electrophysiological methods poses many challenges for the study of the electrical properties of the phloem cells in vivo. Here we present a novel approach for intracellular electrophysiology of sieve elements (SEs) that uses living aphids, or other phloem-feeding hemipteran insects, integrated in the electrical penetration graph (EPG) circuit. The versatility, robustness, and accuracy of this method made it possible to record and study in detail the wound-induced electrical signals in SEs of central veins of the model plant Arabidopsis thaliana1. Here we show that EPG-electrodes can be easily implemented for intracellular electrophysiological recordings of SEs in marginal veins, as well as to study the capacity of SEs to respond with electrical signals to several external stimuli. The EPG approach applied to intracellular electrophysiology of SEs can be implemented to a wide variety of plant species, in a large number of plant/insect combinations, and for many research aims.

A New Application of the Electrical Penetration Graph EPG for Acquiring and Measuring Electrical Signals in Phloem Sieve Elements

Electrical Penetration Graph (EPG) is a well-established technique for studying the feeding behavior of stylet-bearing insects. Here we show a new application of EPG as a non-invasive tool for the acquisition of intracellular electrophysiology recordings of sieve elements (SEs), the cells that form the phloem vasculature in plants.

تطبيق جديد من الاختراق الرسم البياني الكهربائية (EPG) للحصول على وقياس الإشارات الكهربائية في اللحاء المنخل عناصر

Electrophysiological properties of cells are often studied in vitro, after dissociating them from their native environments. However, the study of ...

Methods of Soil Resampling to Monitor Changes in the Chemical Concentrations of Forest Soils

Recent soils research has shown that important chemical soil characteristics can change in less than a decade, often the result of broad environmental changes. Repeated sampling to monitor these changes in forest soils is a relatively new practice that is not well documented in the literature and has only recently been broadly embraced by the scientific community. The objective of this protocol is therefore to synthesize the latest information on methods of soil resampling in a format that can be used to design and implement a soil monitoring program. Successful monitoring of forest soils requires that a study unit be defined within an area of forested land that can be characterized with replicate sampling locations. A resampling interval of 5 years is recommended, but if monitoring is done to evaluate a specific environmental driver, the rate of change expected in that driver should be taken into consideration. Here, we show that the sampling of the profile can be done by horizon where boundaries can be clearly identified and horizons are sufficiently thick to remove soil without contamination from horizons above or below. Otherwise, sampling can be done by depth interval. Archiving of sample for future reanalysis is a key step in avoiding analytical bias and providing the opportunity for additional analyses as new questions arise.

Repeated soil sampling has recently been shown to be an effective way to monitor forest soil change over years and decades. To support its use, a protocol is presented that synthesizes the latest information on soil resampling methods to aid in the design and implementation of successful soil monitoring programs.

طرق اختزال التربة لرصد التغيرات في تركيزات الكيميائية للتربة الغابات

Recent soils research has shown that important chemical soil characteristics can change in less than a decade, often the result of broad environmental ...

Measuring and Mapping Patterns of Soil Erosion and Deposition Related to Soil Carbonate Concentrations Under Agricultural Management

Spatial patterns of soil erosion and deposition can be inferred from differences in ground elevation mapped at appropriate time increments. Such changes in elevation are related to changes in near-surface soil carbonate (CaCO3) profiles. The objective is to describe a simple conceptual model and detailed protocol for repeatable field and laboratory measurements of these quantities. Here, accurate elevation is measured using a ground-based differential global positioning system (GPS); other data acquisition methods could be applied to the same basic method. Soil samples are collected from prescribed depth intervals and analyzed in the lab using an efficient and precise modified pressure-calcimeter method for quantitative analysis of inorganic carbon concentration. Standard statistical methods are applied to point data, and representative results show significant correlations between changes in soil surface layer CaCO3 and changes in elevation consistent with the conceptual model; CaCO3 generally decreased in depositional areas and increased in erosional areas. Maps are derived from point measurements of elevation and soil CaCO3 to aid analyses. A map of erosional and depositional patterns at the study site, a rain-fed winter wheat field cropped in alternating wheat-fallow strips, shows the interacting effects of water and wind erosion affected by management and topography. Alternative sampling methods and depth intervals are discussed and recommended for future work relating soil erosion and deposition to soil CaCO3.

Spatial patterns of soil erosion and deposition can be inferred from differences in ground elevation mapped at appropriate time increments. Such changes in elevation are related to changes in near-surface soil carbonates. Repeatable methods for field and laboratory measurements of these quantities and data analysis methods are described here.

قياس وتحديد أنماط من تآكل التربة وترسب المتصلة بتركيزات كربونات التربة تحت الإدارة الزراعية

Spatial patterns of soil erosion and deposition can be inferred from differences in ground elevation mapped at appropriate time increments. Such changes ...

Methodology for Developing Life Tables for Sessile Insects in the Field Using the Whitefly, Bemisia tabaci, in Cotton As a Model System

Life tables provide a means of measuring the schedules of birth and death from populations over time. They also can be used to quantify the sources and rates of mortality in populations, which has a variety of applications in ecology, including agricultural ecosystems. Horizontal, or cohort-based, life tables provide for the most direct and accurate method of quantifying vital population rates because they follow a group of individuals in a population from birth to death. Here, protocols are presented for conducting and analyzing cohort-based life tables in the field that takes advantage of the sessile nature of the immature life stages of a global insect pest, Bemisia tabaci. Individual insects are located on the underside of cotton leaves and are marked by drawing a small circle around the insect with a non-toxic pen. This insect can then be observed repeatedly over time with the aid of hand lenses to measure development from one stage to the next and to identify stage-specific causes of death associated with natural and introduced mortality forces. Analyses explain how to correctly measure multiple mortality forces that act contemporaneously within each stage and how to use such data to provide meaningful population dynamic metrics. The method does not directly account for adult survival and reproduction, which limits inference to dynamics of immature stages. An example is presented that focused on measuring the impact of bottom-up (plant quality) and top-down (natural enemies) effects on the mortality dynamics of B. tabaci in the cotton system.

Methodology for Developing Life Tables for Sessile Insects in the Field Using the Whitefly, Bemisia tabaci, in Cotton As a Model System

Life tables allow quantification of the sources and rates of mortality in insect populations and contribute to understanding, predicting and manipulating population dynamics in agroecosystems. Methods for conducting and analyzing cohort-based life tables in the field for an insect with sessile immature life stages are presented.

منهجية "وضع جداول الحياة" "الحشرات لاطئة" في "الحقل باستخدام" الذبابة،، حيث دراسةفي "القطن كنموذج النظام"

Life tables provide a means of measuring the schedules of birth and death from populations over time. They also can be used to quantify the sources and ...

Techniques for Investigating the Anatomy of the Ant Visual System

This article outlines a suite of techniques in light microscopy (LM) and electron microscopy (EM) which can be used to study the internal and external eye anatomy of insects. These include traditional histological techniques optimized for work on ant eyes and adapted to work in concert with other techniques such as transmission electron microscopy (TEM) and scanning electron microscopy (SEM). These techniques, although vastly useful, can be difficult for the novice microscopist, so great emphasis has been placed in this article on troubleshooting and optimization for different specimens. We provide information on imaging techniques for the entire specimen (photo-microscopy and SEM) and discuss their advantages and disadvantages. We highlight the technique used in determining lens diameters for the entire eye and discuss new techniques for improvement. Lastly, we discuss techniques involved in preparing samples for LM and TEM, sectioning, staining, and imaging these samples. We discuss the hurdles that one might come across when preparing samples and how best to navigate around them.

This article outlines a suite of techniques in light and electron microscopy to study the internal and external eye anatomy of insects. These include several traditional techniques optimized for work on ant eyes, detailed troubleshooting, and suggestions for optimization for different specimens and regions of interest.

تقنيات التحقيق تشريح النظام المرئي النمل

This article outlines a suite of techniques in light microscopy (LM) and electron microscopy (EM) which can be used to study the internal and external eye ...

Development of New Methods for Quantifying Fish Density Using Underwater Stereo-video Tools

The use of video camera systems in ecological studies of fish continues to gain traction as a viable, non-extractive method of measuring fish lengths and estimating fish abundance. We developed and implemented a rotating stereo-video camera tool that covers a full 360 degrees of sampling, which maximizes sampling effort compared to stationary camera tools. A variety of studies have detailed the ability of static, stereo-camera systems to obtain highly accurate and precise measurements of fish; the focus here was on the development of methodological approaches to quantify fish density using rotating camera systems. The first approach was to develop a modification of the metric MaxN, which typically is a conservative count of the minimum number of fish observed on a given camera survey. We redefine MaxN to be the maximum number of fish observed in any given rotation of the camera system. When precautions are taken to avoid double counting, this method for MaxN may more accurately reflect true abundance than that obtained from a fixed camera. Secondly, because stereo-video allows fish to be mapped in three-dimensional space, precise estimates of the distance-from-camera can be obtained for each fish. By using the 95% percentile of the observed distance from camera to establish species-specific areas surveyed, we account for differences in detectability among species while avoiding diluting density estimates by using the maximum distance a species was observed. Accounting for this range of detectability is critical to accurately estimate fish abundances. This methodology will facilitate the integration of rotating stereo-video tools in both applied science and management contexts.

We describe a new method for counting fishes, and estimating relative abundance (MaxN) and fish density using rotating stereo-video camera systems. We also demonstrate how to use distance from camera (Z distance) to estimate species-specific detectability.

استحداث أساليب جديدة لقياس كثافة الأسماك باستخدام أدوات ستيريو-فيديو تحت الماء

The use of video camera systems in ecological studies of fish continues to gain traction as a viable, non-extractive method of measuring fish lengths and ...

A Novel Method for the Pentosan Analysis Present in Jute Biomass and Its Conversion into Sugar Monomers Using Acidic Ionic Liquid

Recently, ionic liquids (ILs) are used for biomass valorization into valuable chemicals because of their remarkable properties such as thermal stability, lower vapor pressure, non-flammability, higher heat capacity, and tunable solubility and acidity. Here, we demonstrate a method for the synthesis of C5 sugars (xylose and arabinose) from the pentosan present in jute biomass in a one-pot process by utilizing a catalytic amount of Br&#248;nsted acidic 1-methyl-3-(3-sulfopropyl)-imidazolium hydrogen sulfate IL. The acidic IL is synthesized in the lab and characterized using NMR spectroscopic techniques for understanding its purity. The various properties of BAIL are measured such as acid strength, thermal and hydrothermal stability, which showed that the catalyst is stable at a higher temperature (250 &#176;C) and possesses very high acid strength (Ho 1.57). The acidic IL converts over 90% of pentosan into sugars and furfural. Hence, the presenting method in this study can also be employed for the evaluation of pentosan concentration in other kinds of lignocellulosic biomass.

We present a protocol for the synthesis of C5 sugars (xylose and arabinose) from a renewable non-edible lignocellulosic biomass (i.e., jute) with the presence of Br&#248;nsted acidic ionic liquids (BAILs) as the catalyst in water. The BAILs catalyst exhibited better catalytic performance than conventional mineral acid catalysts (H2SO4 and HCl).

طريقة جديدة لتحليل بينتوسان الموجودة في الكتلة الأحيائية الجوت وتحويلها إلى أحادية السكر باستخدام السوائل الأيونية الحمضية

Recently, ionic liquids (ILs) are used for biomass valorization into valuable chemicals because of their remarkable properties such as thermal stability, ...

A New Portable In Vitro Exposure Cassette for Aerosol Sampling

This protocol introduces a new in vitro exposure system, capable of being worn, including its characterization and performance. Air-liquid interface (ALI) in vitro exposure systems are often large and bulky, making transport to the field and operation at the source of emission or within the breathing zone difficult. Through miniaturization of these systems, the lab can be brought to the field, expediting processing time and providing a more appropriate exposure method that does not alter the aerosol prior to contacting the cells. The Portable In vitro Exposure Cassette (PIVEC) adapts a 37 mm filter cassette to allow for in vitro toxicity testing outside of a traditional laboratory setting. The PIVEC was characterized using three sizes of copper nanoparticles to determine deposition efficiency based on gravimetric and particle number concentration analysis. Initial cytotoxicity experiments were performed with exposed lung cells to determine the ability of the system to deposit particles while maintaining cell viability. The PIVEC provides a similar or increased deposition efficiency when comparing to available perpendicular flow in vitro exposure devices. Despite the lower sample throughput, the small size gives some advantages to the current in vitro ALI exposure systems. These include the ability to be worn for personal monitoring, mobility from the laboratory to the source of emission, and the option to set-up multiple systems for spatial resolution while maintaining a lower user cost. The PIVEC is a system capable of collecting aerosols in the field and within the breathing zone onto an air-interfaced, in vitro model.

A New Portable In Vitro Exposure Cassette for Aerosol Sampling

Here, we present a protocol to perform portable cellular aerosol exposures and measure cellular response. The method uses cells, grown at the air-liquid interface, mimicking in vivo physiology. Cellular response to copper nanoparticle aerosols was observed as oxidative stress through reactive oxygen species generation and cytotoxicity as lactate dehydrogenase release.

جديدة محمولة في المختبر تعرض كاسيت لأخذ العينات الهباء الجوي

This protocol introduces a new in vitro exposure system, capable of being worn, including its characterization and performance. Air-liquid interface (ALI) ...

An Induction System for Clustered Stomata by Sugar Solution Immersion Treatment in Arabidopsis thaliana Seedlings

Stomatal movement mediates plant gas exchange, which is essential for photosynthesis and transpiration. Stomatal opening and closing are accomplished by a significant increase and decrease in guard cell volume, respectively. Because shuttle transport of ions and water occurs between guard cells and larger neighboring epidermal cells during stomatal movement, the spaced distribution of plant stomata is considered an optimal distribution for stomatal movement. Experimental systems for perturbing the spaced pattern of stomata are useful to examine the spacing pattern's significance. Several key genes associated with the spaced stomatal distribution have been identified, and clustered stomata can be experimentally induced by altering these genes. Alternatively, clustered stomata can be also induced by exogenous treatments without genetic modification. In this article, we describe a simple induction system for clustered stomata in Arabidopsis thaliana seedlings by immersion treatment with a sucrose-containing medium solution. Our method is easy and directly applicable to transgenic or mutant lines. Larger chloroplasts are presented as a cell biological hallmark of sucrose-induced clustered guard cells. In addition, a representative confocal microscopic image of cortical microtubules is shown as an example of intracellular observation of clustered guard cells. The radial orientation of cortical microtubules is maintained in clustered guard cells as in spaced guard cells in control conditions.

An Induction System for Clustered Stomata by Sugar Solution Immersion Treatment in Arabidopsis thaliana Seedlings

The goal of this protocol is to demonstrate how to induce clustered stomata in cotyledons of Arabidopsis thaliana seedlings by immersion treatment with a sugar-containing medium solution and how to observe intracellular structures such as chloroplasts and microtubules in the clustered guard cells using confocal laser microscopy.

نظام التوجيهي "الثغور متفاوت" "السكر الحل العلاج الغمر" في شتلات نبات التمويل

Stomatal movement mediates plant gas exchange, which is essential for photosynthesis and transpiration. Stomatal opening and closing are accomplished by a ...