ويدعم البحوث في مختبري قبل وزارة WKU الأموال بدء التشغيل الأحياء، بحوث WKU مؤسسة RCAP-I منح # 11-8032 وبمنحة KBRIN-AREA تمويلها من خلال منحة الوالد من المعهد الوطني للعلوم الطبية العامة من المعاهد الوطنية الصحة تحت رقم الجائزة 5P20GM103436-13. وأود أيضا أن أنوه الدكتور تيان شو في التي تعرفت على هذه التقنية، والدكتور ريموند Pagliarini الذين أنشئت لأول مرة هذه التقنية في المختبر شو المختبر.

1. تحريض أورام حميدة غير الغازية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام الأسهم المدرجة في الجدول (2) لتحريض الأورام الحميدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد ثقافة بداية ل &quot;اختبار&quot; الأسهم من النمط الجيني التالية: ذ، ث، إرنست و يونغ-FLP1؛ حوض-Gal80، FRT40A؛ Act5C&gt; ذ +&gt; GAL4، UAS GFP- </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد ثقافة بداية ل &quot;اختبار&quot; الأسهم من النمط الجيني التالية: w؛ FRT40A، UAS الراس V12 / CYO </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع عشر عذارى الإناث من المخزون &quot;اختبار&quot; وعشرة من الذكور من المخزون &quot;اختبار&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عبور الذكور والإناث من &quot;اختبار&quot; والاسهم &quot;اختبار&quot; عن طريق وضعها في كل من قارورة مع ذبابة الغذاء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الصليب في حاضنة 25 درجة مئوية، والسماح للذكور والإناث للتزاوج ووضع البيض لمدة 24-48 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التحقق من قوارير لترسب البيض كافية لوجود يرقات العمر الأول والتأكد من أن الثقافة لا ينزح. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة بضع قطرات من تعقيمهاالماء المقطر لثقافة لإبقائها رطبة (إن الثقافة وتجفيف). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مواصلة رصد الثقافة وكرر الخطوة 1.7.1 حسب الحاجة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مراقبة تجول اليرقات طور مرحلي الثالثة تحت stereomicroscope مضان النحو المبين في الفرع 3. </li></ol> 2. تحريض الأورام الغازية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام الأسهم المدرجة في الجدول (2) لتحريض الأورام الغازية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام الثقافة بداية من الخطوة 1.2 أعلاه من النمط الجيني التالية: ذ، ث، إرنست و يونغ-FLP1؛ حوض-Gal80، FRT40A؛ Act5C&gt; ذ +&gt; GAL4، UAS GFP- </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد ثقافة بداية ل &quot;اختبار&quot; الأسهم من النمط الجيني التالية: w؛ LGL 4، FRT40A، UAS الراس V12 / CYO </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع عشر عذارى الإناث من المخزون &quot;اختبار&quot; وعشرة من الذكور من المخزون &quot;اختبار&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عبور الذكور والإناث من &quot;اختبار&quot; والاسهم &quot;اختبار&quot; عن طريق وضعها في كل من قارورة مع ذبابة والعود. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الصليب في حاضنة 25 درجة مئوية، والسماح للذكور والإناث للتزاوج ووضع البيض لمدة 24-48 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التحقق من قوارير لترسب البيض كافية لوجود يرقات العمر الأول والتأكد من أن الثقافة لا ينزح. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة بضع قطرات من الماء المقطر تعقيمها للثقافة لإبقائها رطبة (إن الثقافة وتجفيف). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مواصلة رصد الثقافة لجفاف وكرر الخطوة 2.7.1 حسب الحاجة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مراقبة يرقات العمر الثالث تحت stereomicroscope مضان النحو المبين في الفرع 3. </li></ol> 3. رصد أورام حميدة والغازية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام يرقات العمر الثالث للحميدة العزلة الورم والتصور. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الرطب فرشاة الطلاء في الماء المقطر، واستخدام هذه الفرشاة الطلاء كشط بضع يرقات العمر الثالث من جدار القارورة الثقافة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع اليرقات في شريحة الاكتئاب مع 1X PBS ثم باستخدام فرشاة مبللة الطلاء الخردةالبريد من أي المواد الغذائية من البشرة اليرقات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع اليرقات في طبق بتري ويترك في الثلاجة -20 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة لشل حركة اليرقة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> طريقة بديلة للشل حركة اليرقات باستخدام FLYNAP. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع عصا FLYNAP مغموسة في FLYNAP إلى قارورة من 3.1.3.2 وبعد توصيل دعونا القارورة تسد القارورة مع يرقات الوقوف لمدة 30 إلى 40 دقيقة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع اليرقة يجمد على شريحة زجاجية، إضافة قطرة من زيت الهالوكربون الضوء، وتغطي مع غطاء زجاجي ومراقبة تحت stereomicroscope مضان مع القدرة على تصور الفلورية الخضراء البروتين (GFP). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سوف ورم حميد تحمل اليرقات يتألق الخضراء في المنطقة الأمامية حيث مجمع الرأس موجودا. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حدد يوم 10 اليرقات (بعد الاستقراء) من الثقافة بتعيينها في الخطوة # 2 أعلاه لرصد الأورام الغازية. ويتم اختيار يوم 10 اليرقات بسبب تأثير الورم الغازية اليرقات لها ل موسعةالمرحلة ARVAL وعموما تفشل في pupariate. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اتبع الخطوات من 3.1.1 إلى 3.1.4 باستثناء بدلا من يوم الثالث الطور استخدام يرقات 10 اليرقات. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وسوف تحمل الورم الغازية اليرقات يوم 10 يتألق الخضراء في المنطقة الأمامية حيث مجمع الرأس موجودا. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا تم تجهيز المجهر الفلورسنت مع كاميرا رقمية ثم التقاط صور للالاستشعاع حميدة والغازية تحمل اليرقات الورم. </li></ol> 4. تشريح للمراقبة في مجمع وكذلك رأسي من الأورام الحميدة والغازية البشرة شفافة من اليرقة يجعل من الصعب مراقبة مدى غزو الأورام. وبالتالي مدى الغزو هو تصور أفضل عن طريق تشريح مجمع رأسي من اليرقة. وينبغي أن تستخدم الخطوات التالية لتشريح مجمع رأسي. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام فرشاة الطلاء الرطب حدد يرقات الطور الثالث (للأورام حميدة) ويوم 10 اليرقات (للأورام الغازية) وROM قارورة الثقافة المعنية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع اليرقات في بئر طبق تشريح تحتوي على 1X PBS الباردة. استخدام فرشاة الطلاء لكشط أي جزيئات الطعام من البشرة اليرقات. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل اليرقات نظيفة لبئر جديدة للطبق تشريح تحتوي على 1X PBS الباردة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحقق من وجود GFP مضان باستخدام stereomicroscope قادرة على الكشف عن مضان. تجاهل غير GFP اليرقات الحاملة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 1.0ml من 1X PBS الباردة إلى بئر جديدة على طبق تشريح وباستخدام زوج من ملقط نقل اليرقة تحمل إما أورام حميدة أو الغازية (يبقى بروتوكول تشريح نفسه لهذين النوعين من الأورام). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عقد اليرقة أسفل باستخدام زوج من ملقط حول 2/3rds من نهاية الأمامي. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام زوج آخر من ملقط وفصل بذكاء وعليها 1/3rd الخلفي لليرقة وتخلص منه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ترك من 2/3rds الأمامي من اليرقة. كما يتم تحرير الضغط داخل يرقة محتوياتسوف يرقة طين من تجويف الجسم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام زوج من ملقط لإزالة الأمعاء، والدهون في الجسم الداخلية محتويات أخرى من اليرقة التي يرشحان من تجويف الجسم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام زوج من ملقط لعقد ربط فم اليرقة ودفعها إلى البشرة اليرقات واستخدام زوج آخر من ملقط عكس اليرقة تماما. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ملقط بلطف وعناية لإزالة الدهون في الجسم والغدد اللعابية، امعاء، مجمع القرص الجناح وأنابيب القصبة الهوائية أي. يجب أن تكون معقدة رأسي الآن مرئية تعلق على ربط فم اليرقة مقلوب. سيظل متصلا نصفي الدماغ والحبل البطني العصب (VNC) للبشرة اليرقات من خلال الأعصاب المنبثقة من فنك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام زوج من ملقط لكسر بلطف الاتصالات بين الأعصاب الرأس والبشرة اليرقات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كما يتم تقسيم الاتصالات العصبية بين فنك والبشرة اليرقات والجسم الدهون الزائدة والأنسجة الأخرى إزالتها، وشارك في رأسيmplex سوف تصبح واضحة للعيان وسوف تعلق على البشرة اليرقات فقط في السنانير الفم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يمكن ترك المجمع رأسي تعلق على البشرة اليرقات إذا يحتاج المجمع إلى أن تكون ثابتة للتطبيقات المصب مثل تلوين الأجسام المضادة أو التصور في وقت لاحق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا كان سيتم تنفيذ أي طلبات المصب مزيد من ثم مجمع رأسي يمكن فصل اليرقات من البشرة وضعها في قطرة من الجلسرين سائل الاعلام القائمة المتزايدة لمزيد من المراقبة والتحليل. استخدام VECTASHIELD وسائل الإعلام في تصاعد مستمر. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Bale, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hedgehog+signaling+and+human+disease.">Hedgehog signaling and human disease.</a> Annu Rev Genomics Hum Genet. 3, 47-65 (2002).</li><li>Bier, E., Bodmer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila,+an+emerging+model+for+cardiac+disease.">Drosophila, an emerging model for cardiac disease.</a> Gene. 342, 1-11 (2004).</li><li>Coombs, G. S., Covey, T. M., Virshup, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wnt+signaling+in+development,+disease+and+translational+medicine.">Wnt signaling in development, disease and translational medicine.</a> Curr Drug Targets. 9, 513-531 (2008).</li><li>Gistelinck, M., Lambert, J. C., Callaerts, P., Dermaut, B., Dourlen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+models+of+tauopathies:+what+have+we+learned.">Drosophila models of tauopathies: what have we learned.</a> Int J Alzheimers Dis. 2012, 970980 (2012).</li><li>Marsh, J. L., Thompson, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+in+the+study+of+neurodegenerative+disease.">Drosophila in the study of neurodegenerative disease.</a> Neuron. 52, 169-178 (2006).</li><li>Reiter, L. T., Bier, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+Drosophila+melanogaster+to+uncover+human+disease+gene+function+and+potential+drug+target+proteins.">Using Drosophila melanogaster to uncover human disease gene function and potential drug target proteins.</a> Expert Opin Ther Targets. 6, 387-399 (2002).</li><li>Valenta, T., Hausmann, G., Basler, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+many+faces+and+functions+of+beta-catenin.">The many faces and functions of beta-catenin.</a> EMBO J. 31, 2714-2736 (2012).</li><li>Hanahan, D., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hallmarks+of+cancer:+the+next+generation.">Hallmarks of cancer: the next generation.</a> Cell. 144, 646-674 (2011).</li><li>Pagliarini, R. A., Xu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genetic+screen+in+Drosophila+for+metastatic+behavior.">A genetic screen in Drosophila for metastatic behavior.</a> Science. 302, 1227-1231 (2003).</li><li>Wu, J. S., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+protocol+for+mosaic+analysis+with+a+repressible+cell+marker+(MARCM)+in+Drosophila.">A protocol for mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) in Drosophila.</a> Nat Protoc. 1, 2583-2589 (2006).</li><li>Boccaccio, C., Comoglio, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invasive+growth:+a+MET-driven+genetic+programme+for+cancer+and+stem+cells.">Invasive growth: a MET-driven genetic programme for cancer and stem cells.</a> Nat Rev Cancer. 6, 637-645 (2006).</li><li>Srivastava, A., Pastor-Pareja, J. C., Igaki, T., Pagliarini, R., Xu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basement+membrane+remodeling+is+essential+for+Drosophila+disc+eversion+and+tumor+invasion.">Basement membrane remodeling is essential for Drosophila disc eversion and tumor invasion.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 104, 2721-2726 (2007).</li><li>Wang, W., Eddy, R., Condeelis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cofilin+pathway+in+breast+cancer+invasion+and+metastasis.">The cofilin pathway in breast cancer invasion and metastasis.</a> Nat Rev Cancer. 7, 429-440 (2007).</li><li>Brand, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GFP+as+a+cell+and+developmental+marker+in+the+Drosophila+nervous+system.">GFP as a cell and developmental marker in the Drosophila nervous system.</a> Methods Cell Biol. 58, 165-181 (1999).</li><li>Brand, A. H., Dormand, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+GAL4+system+as+a+tool+for+unravelling+the+mysteries+of+the+Drosophila+nervous+system.">The GAL4 system as a tool for unravelling the mysteries of the Drosophila nervous system.</a> Curr Opin Neurobiol. 5, 572-578 (1995).</li><li>Vidal, M., Cagan, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+models+for+cancer+research.">Drosophila models for cancer research.</a> Curr Opin Genet Dev. 16, 10-16 (2006).</li><li>Parks, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+generation+of+high-resolution+deletion+coverage+of+the+Drosophila+melanogaster+genome.">Systematic generation of high-resolution deletion coverage of the Drosophila melanogaster genome.</a> Nat Genet. 36, 288-292 (2004).</li><li>Blair, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+mosaic+techniques+for+studying+Drosophila+development.">Genetic mosaic techniques for studying Drosophila development.</a> Development. 130, 5065-5072 (2003).</li><li>Xu, T., Rubin, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+genetic+mosaics+in+developing+and+adult+Drosophila+tissues.">Analysis of genetic mosaics in developing and adult Drosophila tissues.</a> Development. 117, 1223-1237 (1993).</li><li>Xu, T., Wang, W., Zhang, S., Stewart, R. A., Yu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identifying+tumor+suppressors+in+genetic+mosaics:+the+Drosophila+lats+gene+encodes+a+putative+protein+kinase.">Identifying tumor suppressors in genetic mosaics: the Drosophila lats gene encodes a putative protein kinase.</a> Development. 121, 1053-1063 (1995).</li><li>Rebay, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genetic+screen+for+novel+components+of+the+Ras/Mitogen-activated+protein+kinase+signaling+pathway+that+interact+with+the+yan+gene+of+Drosophila+identifies+split+ends,+a+new+RNA+recognition+motif-containing+protein.">A genetic screen for novel components of the Ras/Mitogen-activated protein kinase signaling pathway that interact with the yan gene of Drosophila identifies split ends, a new RNA recognition motif-containing protein.</a> Genetics. 154, 695-712 (2000).</li><li>Therrien, M., Morrison, D. K., Wong, A. M., Rubin, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genetic+screen+for+modifiers+of+a+kinase+suppressor+of+Ras-dependent+rough+eye+phenotype+in+Drosophila.">A genetic screen for modifiers of a kinase suppressor of Ras-dependent rough eye phenotype in Drosophila.</a> Genetics. 156, 1231-1242 (2000).</li><li>Albini, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rapid+in+vitro+assay+for+quantitating+the+invasive+potential+of+tumor+cells.">A rapid in vitro assay for quantitating the invasive potential of tumor cells.</a> Cancer Res. 47, 3239-3245 (1987).</li><li>Zicha, D., Dunn, G. A., Brown, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+direct-viewing+chemotaxis+chamber.">A new direct-viewing chemotaxis chamber.</a> J Cell Sci. 99 (Pt 4), 769-775 (1991).</li><li>Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+developments+in+in+vivo+models+of+neoplasia.">New developments in in vivo models of neoplasia.</a> Cancer Metastasis Rev. 10, 191-192 (1991).</li><li>Mueller, B. M., Romerdahl, C. A., Trent, J. M., Reisfeld, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+spontaneous+melanoma+metastasis+in+scid+mice+with+an+antibody+to+the+epidermal+growth+factor+receptor.">Suppression of spontaneous melanoma metastasis in scid mice with an antibody to the epidermal growth factor receptor.</a> Cancer Res. 51, 2193-2198 (1991).</li><li>Konantz, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+xenografts+as+a+tool+for+in+vivo+studies+on+human+cancer.">Zebrafish xenografts as a tool for in vivo studies on human cancer.</a> Ann N Y Acad Sci. 1266, 124-137 (2012).</li><li>McIntyre, R. E., vander Weyden, L., Adams, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+gene+discovery+in+the+mouse.">Cancer gene discovery in the mouse.</a> Curr Opin Genet Dev. 22, 14-20 (2012).</li><li>Mattison, J., vander Weyden, L., Hubbard, T., Adams, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+gene+discovery+in+mouse+and+man.">Cancer gene discovery in mouse and man.</a> Biochim Biophys Acta. 1796, 140-161 (2009).</li><li>Miles, W. O., Dyson, N. J., Walker, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+tumor+invasion+and+metastasis+in+Drosophila.">Modeling tumor invasion and metastasis in Drosophila.</a> Dis Model Mech. 4, 753-761 (2011).</li><li>Stefanatos, R. K., Vidal, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+invasion+and+metastasis+in+Drosophila:+a+bold+past,+a+bright+future.">Tumor invasion and metastasis in Drosophila: a bold past, a bright future.</a> J Genet Genomics. 38, 431-438 (2011).</li><li>Beaucher, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+brain+tumor+metastases+express+both+neuronal+and+glial+cell+type+markers.">Drosophila brain tumor metastases express both neuronal and glial cell type markers.</a> Dev Biol. 301, 287-297 (2007).</li><li>Beaucher, M., Hersperger, E., Page-McCaw, A., Shearn, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metastatic+ability+of+Drosophila+tumors+depends+on+MMP+activity.">Metastatic ability of Drosophila tumors depends on MMP activity.</a> Dev Biol. 303, 625-634 (2007).</li><li>Joyce, J. A., Pollard, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microenvironmental+regulation+of+metastasis.">Microenvironmental regulation of metastasis.</a> Nat Rev Cancer. 9, 239-252 (2009).</li><li>Igaki, T., Pagliarini, R. A., Xu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+cell+polarity+drives+tumor+growth+and+invasion+through+JNK+activation+in+Drosophila.">Loss of cell polarity drives tumor growth and invasion through JNK activation in Drosophila.</a> Curr Biol. 16, 1139-1146 (2006).</li><li>Uhlirova, M., Jasper, H., Bohmann, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-cell-autonomous+induction+of+tissue+overgrowth+by+JNK/Ras+cooperation+in+a+Drosophila+tumor+model.">Non-cell-autonomous induction of tissue overgrowth by JNK/Ras cooperation in a Drosophila tumor model.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 102, 13123-13128 (2005).</li><li>Uhlirova, M., Bohmann, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=JNK-+and+Fos-regulated+Mmp1+expression+cooperates+with+Ras+to+induce+invasive+tumors+in+Drosophila.">JNK- and Fos-regulated Mmp1 expression cooperates with Ras to induce invasive tumors in Drosophila.</a> EMBO J. 25, 5294-5304 (2006).</li><li>Menut, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mosaic+genetic+screen+for+Drosophila+neoplastic+tumor+suppressor+genes+based+on+defective+pupation.">A mosaic genetic screen for Drosophila neoplastic tumor suppressor genes based on defective pupation.</a> Genetics. 177, 1667-1677 (2007).</li><li>Wu, M., Pastor-Pareja, J. C., Xu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+between+Ras(V12)+and+scribbled+clones+induces+tumour+growth+and+invasion.">Interaction between Ras(V12) and scribbled clones induces tumour growth and invasion.</a> Nature. 463, 545-548 (2010).</li></ol>

ليس لدي أي شيء في الكشف عنها.

السرطان هو مرض معقد مع فهم أفضل بكثير اليوم مما كانت عليه في الماضي. ومع ذلك، لا يزال هناك الكثير الذي يمكن تعلمه يحتاج وأوضح من قبل لدينا صورة كاملة عن الآليات الكامنة. بروتوكول المعروضة هنا بسيطة يجعل من الممكن للحث على راثيا الأورام الحميدة والغازية في الحي كله ومن...

تطور أورام حميدة من إلى حالة النقيلي هو عملية خطوة حكيمة التي تتميز التهرب من آليات الحماية الموجودة في الجسم 8. على سبيل المثال الخلايا السرطانية في الجسم يجب أن تكون قادرة على التهرب من موت الخلايا المبرمج وجهاز المناعة، واختراق المصفوفة خارج الخلية المتخصصة (ECM) يسمى الغشاء القاعدي، والتغلب على أي الضوابط الاجتماعية التي تفرضها الخلايا المحيطة 8. فمن خلال التقدم خطوة حكيمة أن الخلايا السرطانية اكتساب القدرة على ترحيل مواقع بعيدة في عملية تسمى الانبثاث واستعمار. فهمنا لكيفية يتغلب على الخلايا السرطانية الحواجز المفروضة من قبل الهيئة لا تزال في مهدها، ومع ذلك، فإن الصورة الناشئة من الأبحاث التي أجريت حتى الآن نقطة إلى الاستخدام المتكرر للعمليات التنموية العادية ومسارات الإشارات من الخلايا السرطانية 11-13. ذبابة الفاكهة قد ساهم الى حد كبير في ذبابة الفاكهة السوداء البطن اوند لديناerstanding من التطور الطبيعي والمرض من خلال استخدام تقنيات وراثية متطورة وضعت على مدى العقود العديدة الماضية 14-17. باستخدام الطفرات وأدوات من overexpression اننا وصلنا الى فهم أفضل لمختلف الجينات المسرطنة والجينات الكابتة ورم 18-22. ومع ذلك، الورم ورم خبيث هو نتيجة للتعاون بين العديد من الآفات الجينية التي تمت دراستها في المقام الأول في نماذج الثقافة الخلية 23،24 فضلا عن مختلف نماذج طعم أجنبي 25-27. على الرغم من هذه النماذج قوية لديها قيود لأنها لا تحاكي تماما الظروف الموجودة في الكائن الحي. وعلاوة على ذلك، والنماذج المعدلة وراثيا المتوفرة في الفئران هي مرهقة ولا يفضي إلى التحليل الجيني للسلوك الغازية 28،29. وقد حاولت العديد من الدراسات لفهم غزو الخلايا السرطانية في ذبابة الفاكهة 30،31. هذه التقنيات تستخدم في المقام الأول زرع الأورام الأولية إلى المضيفين ومن ثم الاعتماد على تتبع هيئة تنظيم الاتصالاتnsplanted أورام لغزو الأنسجة المجاورة 32،33. تم تكييفها وهناك تقنية قوية تسمى MARCM 10 بواسطة Pagliarini وشو لنموذج غزو الورم في ذبابة الفاكهة 9. هذه النمذجة الوراثية أنيقة من غزو الورم استغلت التعاون بين الجين الورمي تنشيط وفقدان قطبية الخلية. قوة هذه النمذجة يكمن في حقيقة أن الأورام الغازية تم إنشاؤها في كائن حي سليمة وبالتالي الالتفاف على الحاجة لزرع الأنسجة. لتحقيق التعاون أنكجنيك، يتم التعبير عن الجين الورمي تفعيلها مثل رأس V12 في استنساخ الخلايا في العين antennal القرص اليرقات. نتيجة لهذه التقنية MARCM وتتميز هذه الحيوانات المستنسخة أيضا مع بروتين الفلورية الخضراء (GFP) لسهولة التصور ومصنوعة متماثلة اللواقح بالنسبة المسوخ قطبية الخلية مثل يرقات القاتلة العملاقة، خربش، والأقراص الكبيرة. والنتيجة هي GFP الموسومة الأورام الغازية في مجمع رأسي. في هذا التقرير الأولشرح كيفية حمل، ووضع تصور لهذه الأورام الغازية سواء في سياق يرقات سليمة وتشريح خارج مجمع رأسي. تحريض الورم المقدمة هنا تستخدم الكواشف على كروموسوم الثاني من ذبابة الفاكهة. في الجدول 2، وتقديم قائمة من الأسهم على X و 3 الثالثة الكروموسومات التي يمكن استخدامها لنفس الغرض. وأعتقد أن هذا البروتوكول المبسط سوف تجعل هذه التقنية في متناول الجميع للباحثين المهتمين في فهم الأساس الجزيئي لتطور الورم.

<table border="1">
	<tbody>
 <tr>
 <td>10X PBS (phosphate buffered saline) pH 7.2 stock solution</td>
 <td>Invitrogen, Sigma Aldrich</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Chilled 1X PBS pH7.2 working solution</td>
 <td>Invitrogen, Sigma Aldrich</td>
 <td></td>
 <td>Make fresh and refrigerate, can be used up to a week</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Flynap</td>
 <td>Carolina Biologicals</td>
 <td></td>
 <td>Fly anesthesia needed to anesthetize larvae</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Fixative</td>
 <td>0.1M PIPES, pH 7.2, 4% Paraformaldehyde</td>
 <td></td>
 <td>Needed to fix the dissected cephalic complex</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ice Bucket</td>
 <td>Several</td>
 <td></td>
 <td>Maintain solutions on ice. Also, dissect cephalic complex in chilled 1X PBS and then place on ice in an Eppendorf tube</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>1.7ml Eppendorf tube</td>
 <td>Various</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Glass slides, cover glass</td>
 <td>Fisher Scientific</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Vectashield Mounting Media or any other mounting media</td>
 <td>Vector Laboratories</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Halocarbon 200 or 700 Oil</td>
 <td>Polysciences Inc. or Halocarbon.com</td>
 <td></td>
 <td>Halocarbon 200 is used to mount the larvae for visualization on a fluorescence stereoscope</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Sally Hansen "Hard as Nails" nail polish</td>
 <td>Can be found at any general merchandise store</td>
 <td></td>
 <td>Needed to seal the edges of Coverslip</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>A Leica MZ16.5 fluorescence stereomicroscope or any other fluorescence stereomicroscope</td>
 <td>Leica and others</td>
 <td></td>
 <td>Needed to observe the GFP fluorescence in larvae</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Dumont #5 forceps</td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Pyrex 9 well spot plate or any other dissection dish</td>
 <td>Sigma Aldrich</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Paint Brush</td>
 <td>Can be found at any general merchandise store</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>Table 1. Materials needed to perform the experimental protocol presented in this article.</td>
 </tr>
 </tbody>
 </table>

a protocol for genetic induction and visualization of benign and invasive tumors in cephalic complexes of drosophila melanogaster

وقد مضيئة ذبابة الفاكهة فهمنا للأساس الجيني للتطور الطبيعي والمرض على مدى العقود القليلة الماضية، واليوم لا تزال تساهم بشكل كبير في فهمنا للأمراض المعقدة 1-7. تطور أورام حميدة من إلى حالة النقيلي هو حدث معقد 8 و تم غرار ذبابة الفاكهة في لتساعدنا على فهم أفضل الأسس الجينية لهذا المرض 9. أنا هنا تقديم بروتوكول بسيط للحث وراثيا، ومراقبة وتحليل ثم تطور الأورام في يرقات ذبابة الفاكهة. ويستند أسلوب الحث الورم على النظام MARCM 10 ويستغل التعاون بين الجين الورمي تفعيلها، رأس V12 وفقدان الجينات قطبية الخلية (خربش، وأقراص كبيرة وقاتلة اليرقات العملاقة) لتوليد الأورام الغازية 9. أنا شرح كيفية يمكن تصور هذه الأورام في يرقات سليمة وثم كيف يمكن تشريح هذه خارج لمزيد من التحليل. بروتوكول مبسطة المقدمة هنا ينبغي أن تجعل من الممكن لهذه التقنية لاستخدامها من قبل المحققين المهتمين في فهم دور الجينات في غزو الورم.

كما قدمت نتيجة للبروتوكول المستخدم هنا سوف تكون قادرة على إحداث أورام حميدة من قبل overexpressing الجين الورمي تفعيلها في العين قرص تخيلي antennal اليرقات. وسيكون المستخدم قادرا على حمل الأورام الغازية في القرص antennal العين عن طريق overexpressing الجين الورمي في تنشيط الحيوانات المستن...

Watch this Scientific Journal Video about A Protocol for Genetic Induction and Visualization of Benign and Invasive Tumors in Cephalic Complexes of Drosophila melanogaster at JoVE.com

A Protocol for Genetic Induction and Visualization of Benign and Invasive Tumors in Cephalic Complexes of Drosophila melanogaster

التعاون بين الجين الورمي تفعيلها مثل RAS V12 والطفرات في جينات الخلية القطبية مثل خربش، يؤدي إلى نمو الأورام في ذبابة الفاكهة حيث عرض الخلايا السرطانية أيضا السلوكيات الغازية. هنا يتم تقديم بروتوكول بسيط للتحريض والمراقبة من الأورام الحميدة والغازية.

بروتوكول لالتعريفي الجيني والتخيل من أورام حميدة والغازية في رأسي مجامع<em&gt; ذبابة الفاكهة السوداء البطن</em

Drosophila has illuminated our  understanding of the genetic basis of normal development and disease for the  past several decades and today it continues ...

a-protocol-for-genetic-induction-visualization-benign-invasive-tumors

Research

JoVE Journal

Medicine

A Protocol for Genetic Induction and Visualization of Benign and Invasive Tumors in Cephalic Complexes of Drosophila melanogaster

9.4K Views.  Western Kentucky University.  التعاون بين الجين الورمي تفعيلها مثل RAS V12 والطفرات في جينات الخلية القطبية مثل خربش، يؤدي إلى نمو الأورام في ذبابة الفاكهة حيث عرض الخلايا السرطانية أيضا السلوكيات الغازية. هنا يتم تقديم بروتوكول بسيط للتحريض والمراقبة من ...

Video: A Protocol for Genetic Induction and Visualization of Benign and Invasive Tumors in Cephalic Complexes of Drosophila melanogaster

Establishment and Propagation of Human Retinoblastoma Tumors in Immune Deficient Mice

Culturing retinoblastoma tumor cells in defined stem cell media gives rise to primary tumorspheres that can be grown and maintained for only a limited time. These cultured tumorspheres may exhibit markedly different cellular phenotypes when compared to the original tumors. Demonstration that cultured cells have the capability of forming new tumors is important to ensure that cultured cells model the biology of the original tumor. 
Here we present a protocol for propagating human retinoblastoma tumors in vivo using Rag2-/- immune deficient mice. Cultured human retinoblastoma tumorspheres of low passage or cells obtained from freshly harvested human retinoblastoma tumors injected directly into the vitreous cavity of murine eyes form tumors within 2-4 weeks. These tumors can be harvested and either further passaged into murine eyes in vivo or grown as tumorspheres in vitro. Propagation has been successfully carried out for at least three passages thus establishing a continuing source of human retinoblastoma tissue for further experimentation. 
Wesley S. Bond and Lalita Wadhwa are co-first authors.

A method is described to propagate human retinoblastoma tumors in mice. Tumor cells are directly injected into the eyes of immune deficient mice. Secondary tumors have been successfully established using both cells directly harvested from human tumors and cultured tumorspheres.

إنشاء والدعوة للأورام الشبكية الإنسان في الفئران أن نقص المناعة

Culturing retinoblastoma tumor cells in defined stem cell media gives rise to primary tumorspheres that can be grown and maintained for only a limited ...

Non-invasive Optical Measurement of Cerebral Metabolism and Hemodynamics in Infants

Perinatal brain injury remains a significant cause of infant mortality and morbidity, but there is not yet an effective bedside tool that can accurately screen for brain injury, monitor injury evolution, or assess response to therapy. The energy used by neurons is derived largely from tissue oxidative metabolism, and neural hyperactivity and cell death are reflected by corresponding changes in cerebral oxygen metabolism (CMRO2). Thus, measures of CMRO2 are reflective of neuronal viability and provide critical diagnostic information, making CMRO2 an ideal target for bedside measurement of brain health.
Brain-imaging techniques such as positron emission tomography (PET) and single-photon emission computed tomography (SPECT) yield measures of cerebral glucose and oxygen metabolism, but these techniques require the administration of radionucleotides, so they are used in only the most acute cases.
Continuous-wave near-infrared spectroscopy (CWNIRS) provides non-invasive and non-ionizing radiation measures of hemoglobin oxygen saturation (SO2) as a surrogate for cerebral oxygen consumption. However, SO2 is less than ideal as a surrogate for cerebral oxygen metabolism as it is influenced by both oxygen delivery and consumption. Furthermore, measurements of SO2 are not sensitive enough to detect brain injury hours after the insult 1,2, because oxygen consumption and delivery reach equilibrium after acute transients 3. We investigated the possibility of using more sophisticated NIRS optical methods to quantify cerebral oxygen metabolism at the bedside in healthy and brain-injured newborns. More specifically, we combined the frequency-domain NIRS (FDNIRS) measure of SO2 with the diffuse correlation spectroscopy (DCS) measure of blood flow index (CBFi) to yield an index of CMRO2 (CMRO2i) 4,5.
With the combined FDNIRS/DCS system we are able to quantify cerebral metabolism and hemodynamics. This represents an improvement over CWNIRS for detecting brain health, brain development, and response to therapy in neonates. Moreover, this method adheres to all neonatal intensive care unit (NICU) policies on infection control and institutional policies on laser safety. Future work will seek to integrate the two instruments to reduce acquisition time at the bedside and to implement real-time feedback on data quality to reduce the rate of data rejection.

We combined frequency-domain near-infrared spectroscopy measures of cerebral hemoglobin oxygenation with diffuse correlation spectroscopy measures of cerebral blood flow index to estimate an index of oxygen metabolism. We tested the utility of this measure as a bedside screening tool to evaluate the health and development of the newborn brain.

غير الغازية قياس بصري من الأيض الدماغي وديناميكا الدم في الأطفال الرضع

Perinatal brain injury remains a significant cause of infant mortality  and morbidity, but there is not yet an effective bedside tool that can  accurately ...

Renal Capsule Xenografting and Subcutaneous Pellet Implantation for the Evaluation of Prostate Carcinogenesis and Benign Prostatic Hyperplasia

New therapies for two common prostate diseases, prostate cancer (PrCa) and benign prostatic hyperplasia (BPH), depend critically on experiments evaluating their hormonal regulation. Sex steroid hormones (notably androgens and estrogens) are important in PrCa and BPH; we probe their respective roles in inducing prostate growth and carcinogenesis in mice with experiments using compressed hormone pellets. Hormone and/or drug pellets are easily manufactured with a pellet press, and surgically implanted into the subcutaneous tissue of the male mouse host. We also describe a protocol for the evaluation of hormonal carcinogenesis by combining subcutaneous hormone pellet implantation with xenografting of prostate cell recombinants under the renal capsule of immunocompromised mice. Moreover, subcutaneous hormone pellet implantation, in combination with renal capsule xenografting of BPH tissue, is useful to better understand hormonal regulation of benign prostate growth, and to test new therapies targeting sex steroid hormone pathways.

We describe the manufacture of compressed hormone pellets, as well as subcutaneous surgical implantation into mice. This strategy can be combined with the growth of cell and tissue xenografts under the renal capsule of athymic nude mice to evaluate hormonal carcinogenesis and regulation of benign prostate growth.

كبسولة الكلوي Xenografting وتحت الجلد بيليه الزرع لتقييم البروستات التسرطن وتضخم البروستاتا الحميد

New therapies for two common prostate diseases,  prostate cancer (PrCa) and benign prostatic hyperplasia (BPH), depend  critically on experiments ...

Induction of Invasive Transitional Cell Bladder Carcinoma in Immune Intact Human MUC1 Transgenic Mice:  A Model for Immunotherapy Development

A preclinical model of invasive bladder cancer was developed in human mucin 1 (MUC1) transgenic (MUC1.Tg) mice for the purpose of evaluating immunotherapy and/or cytotoxic chemotherapy. To induce bladder cancer, C57BL/6 mice (MUC1.Tg and wild type) were treated orally with the carcinogen N-butyl-N-(4-hydroxybutyl)nitrosamine (OH-BBN) at 3.0 mg/day, 5 days/week for 12 weeks. To assess the effects of OH-BBN on serum cytokine profile during tumor development, whole blood was collected via submandibular bleeds prior to treatment and every four weeks. In addition, a MUC1-targeted peptide vaccine and placebo were administered to groups of mice weekly for eight weeks. Multiplex fluorometric microbead immunoanalyses of serum cytokines during tumor development and following vaccination were performed. At termination, interferon gamma (IFN-&#947;)/interleukin-4 (IL-4) ELISpot analysis for MUC1 specific T-cell immune response and histopathological evaluations of tumor type and grade were performed. The results showed that: (1) the incidence of bladder cancer in both MUC1.Tg and wild type mice was 67%; (2) transitional cell carcinomas (TCC) developed at a 2:1 ratio compared to squamous cell carcinomas (SCC); (3) inflammatory cytokines increased with time during tumor development; and (4) administration of the peptide vaccine induces a Th1-polarized serum cytokine profile and a MUC1 specific T-cell response. All tumors in MUC1.Tg mice were positive for MUC1 expression, and half of all tumors in MUC1.Tg and wild type mice were invasive. In conclusion, using a team approach through the coordination of the efforts of pharmacologists, immunologists, pathologists and molecular biologists, we have developed an immune intact transgenic mouse model of bladder cancer that expresses hMUC1.

An N-butyl-N-(4-hydroxybutyl)nitrosamine-induced bladder cancer model was developed in human mucin 1 (MUC1) transgenic mice for the purpose of testing MUC1-directed immunotherapy. After administering a MUC1-targeted peptide vaccine, a cytotoxic T lymphocyte response to MUC1 was confirmed by measuring serum cytokine levels and T-cell specific activity.

تحريض الغازية سرطان المثانة الانتقالية الخليوي في المناعة السليمة الإنسان MUC1 الفئران المعدلة وراثيا: نموذج للتنمية الخلايا الجذعية

A preclinical model of invasive bladder cancer was developed in human mucin 1 (MUC1) transgenic (MUC1.Tg) mice for the purpose of evaluating immunotherapy ...

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The "Wire-Injury" Model

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. Moreover, by rupture of the defective vascular wall, atherosclerosis induces occlusive thrombus formation, which represents the main cause of myocardial infarction or stroke and the most frequent cause of death. Despite the advances in the cardiovascular field, many questions remain unanswered, and additional basic research is essential to improve our understanding of the molecular mechanisms during atherosclerosis and its effects. Due to limited clinical studies, there is a need for representative animal models recreating atherosclerotic conditions such as neointima formation after stent implantation, balloon angioplasty, or endarterectomy. Since the mouse presents many advantages and is the most frequently used model for studying molecular processes, the current study proposes an invasive procedure of endothelial denudation, also known as the wire-injury model, which is representative of the human condition of neointima formation in arteries after revascularization procedures.

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The &quot;Wire-Injury&quot; Model

This study describes an invasive procedure for the induction of accelerated atherosclerosis in mice. In comparison to other methods using electric- or cryo-induced injury, mechanical-induced injury mimics the human condition of restenosis after revascularization therapies and is ideal for the study of the molecular mechanisms involved.

تحريض تصلب الشرايين المتسارع في الفئران: نموذج "الأسلاك- إصابة"

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. ...

Intravital Microscopy and Thrombus Induction in the Earlobe of a Hairless Mouse

Thrombotic complications of vascular diseases are one leading cause of morbidity and mortality in industrial nations. Due to the complex interactions between cellular and non-cellular blood components during thrombus formation, reliable studies of the physiology and pathophysiology of thrombosis can only be performed in vivo. Therefore, this article presents an ear model in hairless mice and focuses on the in vivo analysis of microcirculation, thrombus formation, and thrombus evolution. By using intravital fluorescence microscopy and the intravenous (iv) application of the respective fluorescent dyes, a repetitive analysis of microcirculation in the auricle can easily be performed, without the need for surgical preparation. Furthermore, this model can be adapted for in vivo studies of different issues, including wound healing, reperfusion injury, or angiogenesis. In summary, the ear of hairless mice is an ideal model for the in vivo study of skin microcirculation in physiological or pathophysiological conditions and for the evaluation of its reaction to different systemic or topical treatments.

The ear model of the hairless SKH1-Hrhr mouse enables intravital fluorescence microscopy of microcirculation and phototoxic thrombus induction without prior surgical preparation in the examined microvascular bed. Therefore, the ear of the hairless mouse is an excellent in vivo model to study the complex interactions during microvascular thrombus formation, thrombus evolution, and thrombolysis.

حيوي داخلي المجهري والجلطة التعريفي في شحمة الأذن ماوس بلا شعر

Thrombotic complications of vascular diseases are one leading cause of morbidity and mortality in industrial nations. Due to the complex interactions ...

Technique of Minimally Invasive Transverse Aortic Constriction in Mice for Induction of Left Ventricular Hypertrophy

Transverse aortic constriction (TAC) in mice is one of the most commonly used surgical techniques for experimental investigation of pressure overload-induced left ventricular hypertrophy (LVH) and its progression to heart failure. In the majority of the reported investigations, this procedure is performed with intubation and ventilation of the animal which renders it demanding and time-consuming and adds to the surgical burden to the animal. The aim of this protocol is to describe a simplified technique of minimally invasive TAC without intubation and ventilation of mice. Critical steps of the technique are emphasized in order to achieve low mortality and high efficiency in inducing LVH.
Male C57BL/6 mice (10-week-old, 25-30 g, n=60) were anesthetized with a single intraperitoneal injection of a mixture of ketamine and xylazine. In a spontaneously breathing animal following a 3-4 mm upper partial sternotomy, a segment of 6/0 silk suture threaded through the eye of a ligation aid was passed under the aortic arch and tied over a blunted 27-gauge needle. Sham-operated animals underwent the same surgical preparation but without aortic constriction. The efficacy of the procedure in inducing LVH is attested by a significant increase in the heart/body weight ratio. This ratio is obtained at days 3, 7, 14 and 28 after surgery (n = 6 - 10 in each group and each time point). Using our technique, LVH is observed in TAC compared to sham animals from day 7 through day 28. Operative and late (over 28 days) mortalities are both very low at 1.7%.
In conclusion, our cost-effective technique of minimally invasive TAC in mice carries very low operative and post-operative mortalities and is highly efficient in inducing LVH. It simplifies the operative procedure and reduces the strain put on the animal. It can be easily performed by following the critical steps described in this protocol.

The aim of this protocol is to describe step-by-step the technique of minimally invasive transverse aortic constriction (TAC) in mice. By elimination of intubation and ventilation which are mandatory for the commonly used standard procedure, minimally invasive TAC simplifies the operative procedure and reduces the strain put on the animal.

تقنية من كسبها انقباض الابهري عرضية في الفئران لتحريض تضخم البطين الأيسر

Transverse aortic constriction (TAC) in mice is one of the most commonly used surgical techniques for experimental investigation of pressure ...

Non-invasive Assessment of Dorsiflexor Muscle Function in Mice

Assessment of skeletal muscle contractile function is an important measurement for both clinical and research purposes. Numerous conditions can negatively affect skeletal muscle. This can result in a loss of muscle mass (atrophy) and/or loss of muscle quality (reduced force per unit of muscle mass), both of which are prevalent in chronic disease, muscle-specific disease, immobilization, and aging (sarcopenia). Skeletal muscle function in animals can be evaluated by a range of different tests. All tests have limitations related to the physiological testing environment, and the selection of a specific test often depends on the nature of the experiments. Here, we describe an in vivo, non-invasive technique involving a helpful and easy assessment of force frequency-curve (FFC) in mice that can be performed on the same animal over time. This permits monitoring of disease progression and/or efficacy&#160;of a potential therapeutic treatment.

Measurement of rodent skeletal muscle contractile function is a useful tool that can be used to track disease progression as well as efficacy of therapeutic intervention. We describe here the non-invasive, in vivo assessment of the dorsiflexor muscles that can be repeated over time in the same mouse.

تقييم غير الغازية لوظيفة العضلات دورسيفليكسور في الفئران

Assessment of skeletal muscle contractile function is an important measurement for both clinical and research purposes. Numerous conditions can negatively ...

Visualization of Endogenous Mitophagy Complexes In Situ in Human Pancreatic Beta Cells Utilizing Proximity Ligation Assay

Mitophagy is an essential mitochondrial quality control pathway, which is crucial for pancreatic islet beta cell bioenergetics to fuel glucose-stimulated insulin release. Assessment of mitophagy is challenging and often requires genetic reporters or multiple complementary techniques not easily utilized in tissue samples, such as primary human pancreatic islets. Here we demonstrate a robust approach to visualize and quantify formation of key endogenous mitophagy complexes in primary human pancreatic islets. Utilizing the sensitive proximity ligation assay technique to detect interaction of the mitophagy regulators NRDP1 and USP8, we are able to specifically quantify formation of essential mitophagy complexes in situ. By coupling this approach to counterstaining for the transcription factor PDX1, we can quantify mitophagy complexes, and the factors that can impair mitophagy, specifically within beta cells. The methodology we describe overcomes the need for large quantities of cellular extracts required for other protein-protein interaction studies, such as immunoprecipitation (IP) or mass spectrometry, and is ideal for precious human islet&#160;samples generally not available in sufficient quantities for these approaches. Further, this methodology obviates the need for flow sorting techniques to purify beta cells from a heterogeneous islet population for downstream protein applications. Thus, we describe a valuable protocol for visualization of mitophagy highly compatible for use in heterogeneous and limited cell populations.

This protocol outlines a method for quantitative analysis of mitophagy protein complex formation specifically in beta cells from primary human islet samples. This technique thus allows analysis of mitophagy from limited biological material, which are crucial in precious human pancreatic beta cell samples.

التصور من المجمعات Mitophagy الذاتية في الموقع في خلايا بيتا البنكرياس البشرية باستخدام القرب الربط اختبار

Mitophagy is an essential mitochondrial quality control pathway, which is crucial for pancreatic islet beta cell bioenergetics to fuel glucose-stimulated ...

A Pre-clinical Rat Model for the Study of Ischemia-reperfusion Injury in Reconstructive Microsurgery

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many areas of biomedical research due to its cost-effectiveness and its translation to humans. This protocol describes a method to create a preclinical free skin flap model in rats with ischemia-reperfusion injury. The described 3 cm x 6 cm rat free skin flap model is easily obtained after the placement of several vascular ligatures and the section of the vascular pedicle. Then, 8 h after the ischemic insult and completion of the microsurgical anastomosis, the free skin flap develops the tissue damage. These ischemia-reperfusion injury-related damages can be studied in this model, making it a suitable model for evaluating therapeutic agents to address this pathophysiological process. Furthermore, two main monitoring techniques are described in the protocol for the assessment of this animal model: transit-time ultrasound technology and laser speckle contrast analysis.

Here, we describe a pre-clinical animal model for studying the pathophysiology of ischemia-reperfusion injury in reconstructive microsurgery. This free skin flap model based on the superficial caudal epigastric vessels in the rat may also allow for the evaluation of different therapies and compounds to counteract ischemia-reperfusion injury-related damage.

نموذج الفئران قبل السريرية لدراسة نقص التروية-ضخ الاصابه في جراحه المجهرية الترميمية

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many ...