الكتاب أود أن أشكر Malinda شيق للحصول على المساعدة الفنية. علينا أيضا أن نعترف مصادر التمويل الحالية والسابقة: المعهد الوطني للسرطان (R01 CA131075، R01 CA131075-02S1)، وحالة صندوق أبحاث السرطان ويل ويندي، ومؤسسة ماركي السرطان، معجزة شبكة للطفولة وجنيفر وديفيد مؤسسة أبحاث الميلانوما ديكنز.

1. إعداد Forskolin للإدارة موضعي من استخراج الجذر الخام من Plectranthus barbatus (Cohleus فورسكوهلي) النباتية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتبع بروتوكولات للتجارب الفئران المبادئ التوجيهية للسلوك الأخلاقي في رعاية واستخدام الحيوانات وتمت الموافقة من قبل اللجنة المؤسسية رعاية الحيوان واستخدام في جامعة كنتاكي (بروتوكول 00768M2004 #). يتم استخراج الجذر حتى في الوزن 40٪ / وحدة التخزين في قاعدة جلدية قياسية من الايثانول 70٪، 30٪ بروبيلين غليكول. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تزن 200 غرام من forskolin الخام استخراج الجذر وتحويلها إلى دورق. لجعل 500 مل من 40٪ (ث / ت) الحل، في resuspend 200 غرام من forskolin الخام استخراج الجذر بإضافة معظم ولكن ليس كل من حجم السيارة (الايثانول 70٪، و 30٪ البروبيلين غليكول) وتقديم حل ل تقريبا 450 مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يحرك المزيج لمدة ساعة في درجة حرارة الغرفة. فإن الحل يكون لزج نوعا ما وربما تتطلب التحريض دليل على &quot;رفع&quot; استخراج إلى حل قبلشريط ضجة غير قادرة على تولي المسؤولية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد ساعة من التحريك، صب الخليط في الاسطوانة وتحقيق وحدة التخزين إلى 500 مل باستخدام السيارة التي استخدمت ل&quot;التشطيف&quot; الكأس التي تم استخدامها لتحريك الطين (لتحقيق أقصى قدر من الانتعاش forskolin من الدورق) . </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الطين إلى 50 مل أنابيب البولي بروبلين الطرد المركزي. الطرد المركزي (1،500 x ج، درجة حرارة الغرفة، 15 دقيقة) باستخدام جهاز للطرد المركزي فوق المنضدة. عند هذه النقطة، فإن المواد غير القابلة للذوبان يكون ضغط إلى حد ما، مما يسمح طاف أن سكب بسهولة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد الحل عبر غشاء خلات السليلوز 0.22 ميكرون لإزالة المواد غير القابلة للذوبان أي المتبقية من استخراج. ونحن نستخدم نظام زجاجة أعلى مصممة للثقافة الخلية، جنبا إلى جنب مع استخدام مرشحات قبل أن تأتي مع وحدة لمنع انسداد المبكر للغشاء من مكونات غير قابلة للذوبان من استخراج الجذر. عند اتخاذ كميات كبيرة من استخراج، تصفية ما يقرب من 100 مل في كل مرة، تغيير الرهان قبل التصفيةوين كل وحدة تخزين إضافية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عند تخزينها في درجة حرارة الغرفة، ويحافظ على استخراج نشاط بيولوجي يصل لمدة تصل إلى واحد. </li></ol> 2. إعداد C57BL / 6 K14-SCF الفئران لعلاج موضعي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الفراء الظهرية من الحيوانات عن طريق القص الكهربائية. لفترة وجيزة تخدير الحيوانات مع isoflurane والاستنشاق لتسهيل القص من الفراء الظهرية مع المقصات الكهربائية تجهيزه مع 0.25 مم رئيس التحضيرية الجراحية (فيشر العلمية). ويفضل استخدام نوع واحد فقط من التخدير (مثل الكيتامين / زيلازين) لتقليل خطر جرعة زائدة من مخدر. غرفة استنشاق المشبعة يحمل المخاطر المهنية عند استخدامها خارج غطاء الدخان ويسلم كميات غير معروفة من مخدر للحيوانات. من الناحية المثالية ينبغي أن تستخدم المرذاذ الدقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لإزالة المتبقي قصبة الشعر، وعلاج الحيوانات مع مزيل الشعر الكيميائية. إدارة التخدير للحيوان مع حقنة IP الكيتامين 40 ملغ / كغ وزيلازين 4 ملغ / كغ </li&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة يتم تخدير الحيوانات بشكل كاف (كما تقرره قرصة أخمص قدميه)، تنطبق على كمية الإصبع الحجم من كريم مزيل الشعر لالمنفصمة الجلد الظهري باستخدام إصبع القفاز. فرك كريم في الجلد لمدة 30-60 ثانية أو حتى يمكن أن ينظر إليه بشكل واضح في الشعر كريم كما يتم نقله حولها. ترك الكريم على فقط لمبلغ الحد الأدنى من الوقت المطلوب لإزالة الشعر كما يؤدي التعرض لفترات طويلة لحرق الكيميائي للبشرة، البشرة انهيار وموت من فقدان النزاهة البشرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مسح الجلد الظهري مع قطع من الشاش غارقة في المياه بشكل متكرر حتى تمت إزالة كل كريم. الحيوانات الجافة باستخدام المناشف الورقية لينة، وتسمح لهم باسترداد في مكان منعزل الدافئة (مثل أقفاص نظيفة وضعها على وسادة الاحترار). يزيل الشعر الحيوانات احدة تلو الأخرى وترصد عن كثب في جميع أنحاء الداخلي. </li></ol> 3. إدارة موضعي من Forskolin أو التحكم في السيارة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحيوانات ينبغي أن يعامل في وقت واحد. تخدير لفترة وجيزة مع الشهيقوقد وضعت د isoflurane وعن طريق وضع الماوس على رأس من النايلون مرشح النموذج المجهزة نفاذية الهواء بموجبها على منشفة ورقية المشبعة في isoflurane وعاء زجاجي بغطاء واضح المشبعة في isoflurane وغطاء الدخان. فضح الماوس لisoflurane ولفترة كافية لقمع حركات العضلات الطوعية ولكن للحفاظ على التنفس العفوي (عادة 10-20 ثانية). وترك الحيوان في isoflurane وقتا طويلا يؤدي إلى قمع الجهاز التنفسي والموت. فمن الأفضل أن يخطئ على جانب من &quot;ضوء يذهب&quot; والحاجة إلى إعادة فضح-الماوس لفترة وجيزة إلى أكثر isoflurane وبدلا من الإفراط في تعريض الحيوان إلى وفاة المخدرات والمخاطر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الحيوان من غرفة وisoflurane ووضع على وسادة ماصة نظيفة مقاعد البدلاء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام micropipette 1،000 ميكرولتر تجهيزه مع طرف البولي بروبلين القابل للتصرف، ووضع 400 ميكرولتر من 40٪ استخراج forskolin الخام (لن الحيوانات السيطرة على السيارة تلقي الايثانول 70٪، 30٪ بروبيلين غليكول وحده). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل على استخراجالخلفي من الحيوان بواسطة نازف وضعها على الجلد ومن ثم، وذلك باستخدام الجانب من طرف ماصة، تشويه استخراج فوق الجلد الظهري حتى تمت تغطية كل الجلد. ليست هناك حاجة لطخة الجلد بعد التطبيق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> العودة الماوس لقفصه، ومراقبة بعناية حتى يتعافى من التخدير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> من أجل أن عدم الصباغ الآثار المخيم لا ينبغي أن نخلط الأشعة فوق البنفسجية التجارب حساسية، والتوقف عن العلاجات الموضعية 2 أيام قبل التعرض للأشعة فوق البنفسجية (تأثير الصباغ يستمر عدة أيام وراء مشاركة العلاج الموضعي). </li></ol> 4. لون البشرة بواسطة عاكس قياس قياس الألوان <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لفترة وجيزة تخدير الماوس مع isoflurane واستنشاق (انظر أعلاه). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> معايرة مقياس الألوان مينولتا عن طريق وضع الرأس المحمولة على السطح الأبيض موحدة المتوفرة مع مقياس الألوان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع رئيس القياس المحمولة من تدفق مقياس الألوان مع الجلد الظهري من الحيوان ضمان أن الجولة apertur 1 سم 2يتم الضغط ه تماما على الجلد. تأخذ على الأقل ثلاثة قياسات منفصلة في مناطق مختلفة من الجلد الظهرية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب متوسط ​​درجة L * ± SD لكل حيوان ولكل مجموعة العلاج. ويمكن أن يتم قياس الألوان العاكسة في أي نقطة في التجربة. </li></ol> 5. تقرير من الأشعة فوق البنفسجية الحساسية عن طريق حساب &quot;الحد الأدنى من الجرعة الحمامية&quot; (MED) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام الحيوانات التي تم علاجها قبل مع أي مركبة أو forskolin كما هو موضح أعلاه. تخدير الحيوانات مع حقن داخل الصفاق من خليط مستوى الكيتامين وزيلازين (انظر أعلاه). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد قطعة من الشريط للأشعة فوق البنفسجية الانسداد لاختبار MED. لتوليد ثقوب في الشريط، واستخدام لكمة ثقب الثقيلة مع 1 سم 2 انقطاع دائرية (أرقام 2A وباء). وجود ثقوب من حجم المعرفة وترتيب متماثل في الشريط يسهل الاعتراف التغيرات الجلدية بعد التشعيع. على كل حفرة في الشريط، وتطبيق قطعة صغيرة ولكن للانفصال بسهولة<html> من الشريط التي يمكن إزالتها في أوقات محددة أثناء التعرض للأشعة فوق البنفسجية للسماح إعطاء جرعات الأشعة فوق البنفسجية مختلفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بمجرد مخدرا الحيوانات على نحو كاف، ووضع الشريط على السطح الظهري. وينبغي دائما أن تستخدم مواد التشحيم العين تحت التخدير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدوره على مصدر للأشعة فوق البنفسجية التي تتكون من اثنين وستنجهاوس F15T8UV-B مصابيح مع ذروة الانتاج من 313 نانومتر وطائفة من 280-370 نانومتر. السماح للمصباح لكي تتوازن لإخراج الأشعة فوق البنفسجية مستمرة إذا ما قيست على مقياس ضوئي للأشعة فوق البنفسجية مع جهاز استشعار الأشعة فوق البنفسجية (يستغرق عادة بضع دقائق للمصابيح في عملية الاحماء). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استنادا إلى معدل انتقال الأشعة فوق البنفسجية مقاسا مضواء الأشعة فوق البنفسجية، الأشعة فوق البنفسجية حساب وقت التعرض لكل جرعة المرجوة. على سبيل المثال، UVB تدابير الانتاج مصباح لدينا 2.4 ميغاواط / سم 2. لذا، لإدارة 5 كج / م 2، ستحتاج الجلد أن تتعرض ل208 ثانية (والذي هو 3 دقائق و 28 ثانية) من الإشعاع فوق البنفسجية، كما يحسب أدناه: upload/50670/50670eq1.jpg &quot;/&gt; </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع مخدرا الحيوانات (كل مع الشريط في مكان الانسداد) بطني السطحية وصولا الى ضمان التعرض للأشعة فوق البنفسجية حتى. لإدارة جرعات اختيار من الأشعة فوق البنفسجية، وإزالة بالتتابع الأشرطة الانسداد صغيرة تغطي الثقوب لفضح 1 سم 2 من مناطق الجلد لجرعات صحيحة من الإشعاع. لذا، وذلك باستخدام المثال أعلاه، إذا 40 كج / م 2 هي أكبر جرعة في التجربة، ثم الحيوان سيكون تحت المصباح لمدة 27 دقيقة و 47 ثانية ومجموع الجلد في حالة 40 كج / م 2 لن يكون لها أي المغطي الشريط طوال الوقت. ومع ذلك، والشريط حالة تغمر 5 كج / م 2 سيتم إزالة عندما يكون هناك 208 ثانية المتبقية في التعرض. وينبغي أن يتم توقيت إزالة الشريط بحيث أن كل حالة ينتهي في وقت واحد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد التعرض للأشعة فوق البنفسجية، انزع الشريط من الجلد الظهري بعناية، مع الحرص على عدم تمزق الجلد مع الحركات المفاجئة أو مفرطة في قوة. وضع الحيوانات في مكان هادئ دافئ للسماحالتعافي من التخدير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مراقبة الفئران لمدة 24-48 ساعة للبحث عن مناطق سرية من حمامي (احمرار) أو وذمة (تورم) المقابلة لمواقع التشريحية تتعرض لجرعة محددة من الأشعة فوق البنفسجية. توثيق النتائج الجلد فوتوغرافيا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قيمة MED يتوافق مع الحد الأدنى للجرعة من الأشعة فوق البنفسجية التي تسبب التهاب كما هو محدد من قبل حمامي و / أو وذمة من دائرة يتعرض بأكمله من الجلد. نلاحظ أن تصبغ في الجلد يمكن أن تحد تحديد MED، ومع ذلك، حمامي ووذمة لا تزال عموما يتم تقييمها بدقة، ويرجع الفضل في ذلك جزئيا إلى شكل محدد من فتحات في الشريط أثناء التعرض للأشعة فوق البنفسجية. </li></ol> 6. التحليل الإحصائي تحليل البيانات بين الأفواج من الفئران عن طريق اتجاه واحد أنوفا مع Bonferroni آخر اختبار (الرسم البياني الوسادة PRISM). القيم ع &lt;0.05 تعتبر ذات دلالة إحصائية.

يعلن الكتاب أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.

باستخدام نموذج حيواني من الإنسان ذوي البشرة البيضاء، نجد أن التطبيق الموضعي لاستخراج الجذر الخام forskolin الغني يظلم بقوة البشرة من خلال تحفيز إنتاج مادة الميلانين في الجلد. التصبغ البشرة يعتمد على التعبير عن عامل الخلايا الجذعية في البشرة القاعدية، كما يحدث في جلد ال?...

حدوث سرطان الجلد، الشكل الأكثر فتكا من سرطان الجلد، ازداد بشكل كبير خلال العقود القليلة الماضية في الولايات المتحدة، وخاصة بين الأفراد ذوي البشرة البيضاء. الأدلة الجزيئية وبائية قوية تورط الأشعة فوق البنفسجية كعامل البيئية المسببة الرئيسية 2-5. زيادة التعرض للأشعة فوق البنفسجية في شكل التعرض لأشعة الشمس واستخدام دباغة سرير من المرجح أن تكون مسؤولة عن جزء كبير من الزيادة في حالات سرطان الجلد 6-7. يبدو خطر سرطان الجلد مرتبط بشكل خاص مع حروق الشمس 8، وخاصة تلك في وقت مبكر من الحياة 9-10. ويرتبط خطر حروق الشمس، ليس فقط لجرعة وشدة التعرض للأشعة فوق البنفسجية، ولكن أيضا من العوامل الموروثة التي تؤثر على الاستجابة الجلدية للأشعة فوق البنفسجية. الجلد تصبغ هي واحدة من أهم العوامل المحددة للحساسية للأشعة فوق البنفسجية، خطر حروق الشمس ومخاطر الاصابة بالسرطان. يحدث سرطان الجلد حوالي عشرين مرة أكثر تواترا في الأشخاص ذوي البشرة الفاتحة مقارنة individua ذوي البشرة الداكنة11-13 ليرة سورية. الميلانين، وهي الصبغة التي تنتجها الخلايا الصباغية في البشرة، هو المحدد الرئيسي للبشرة الجلد. الميلانين يأتي في نوعين رئيسيين: (1) السوي (Eumelanin)، والبني / أسود الصبغة الداكنة فعالية في امتصاص الطاقة من الأشعة فوق البنفسجية، و (2) pheomelanin، المحمر / شقراء أقل فعالية في منع تغلغل الأشعة فوق البنفسجية الفوتونات داخل الجلد الصباغ. لون البشرة، والحساسية للأشعة فوق البنفسجية ومخاطر سرطان الجلد وتحدد إلى حد كبير من المحتوى البشرة السوي (Eumelanin) 14-15. أكثر السوي (Eumelanin) في البشرة، يمكن للفوتونات الأشعة فوق البنفسجية أقل تخترق الجلد. بسبب المستويات المنخفضة من السوي (Eumelanin) فطرية، والأفراد ذوي البشرة البيضاء هم أكثر عرضة لتأثيرات حادة ومزمنة من الأشعة فوق البنفسجية 16-18. تصبغ الجلد، وسرطان الجلد المخاطر والقدرة على &quot;تان&quot; بعد التعرض للأشعة فوق البنفسجية جميع ترتبط مع القدرة إشارة من مستقبلات ميلانوكورتين 1 (Mc1r)، وإلى جانب ق-G سبعة عبر الغشاء قurface مستقبلات الخلايا الصباغية على 19-22. عندما يربط Mc1r وما شابه ذلك يجند عالية تقارب المعقودة α الخلايا الصباغية هرمون تحفيز (α-MSH)، وهناك تفعيل محلقة أدينيليل وإنتاج رسول المعسكر الثاني 23. يتضمن الاستجابة الفسيولوجية الطبيعية من الجلد بعد التعرض للأشعة فوق البنفسجية إنتاج البشرة من α-MSH بواسطة الخلايا الكيراتينية 24-29. نحن وآخرون نفترض أن المستمدة القرنية α-MSH بربط Mc1r على الخلايا الصباغية البشروية، وبدء الإنتاج المصب من رسول الثانية المخيم من خلال تفعيل أدينيليل محلقة 30. مستويات المخيم السيطرة على العديد من جوانب التمايز للخلايا الصباغية، بما في ذلك مسارات البقاء على قيد الحياة، وإصلاح الحمض النووي والتوليف الصباغ. إشارات Mc1r ومخيم لحث بوضوح مستويات إنزيم الصباغ السوي (Eumelanin) والإنتاج. عندما Mc1r إشارات غير سليمة ومستويات المخيم الصباغية هي قوية، ويتم إنتاج السوي (Eumelanin) ويظلم الجلد. ومع ذلك، إذا Mc1r الإشارات المعيبة، ولا تزال مستويات منخفضة المخيم حشوية، ويتم إنتاج pheomelanin بدلا 1. التوليف السوي (Eumelanin) يمكن حفز عقاقيري بواسطة العوامل التي ترفع مستويات المخيم 1،14،31-35. منذ البروتين Mc1r هو منظم رئيسي من خطر سرطان الجلد لدى البشر 36-46، ونحن مهتمون في الآليات التي تحمي الخلايا الصباغية Mc1r ضد الأشعة فوق البنفسجية التي يسببها السرطان. كأساس لدراساتنا، ولدت لدينا Mc1r المتغير الفئران المعدلة وراثيا على نموذج محض C57BL / 6 الخلفية الوراثية 1. في هذا النموذج، وقف عامل الخلية (SCF) يتم التعبير جوهري في البشرة القاعدية ويتم الاحتفاظ البشرة الخلايا الصباغية في الجلد بين الجريبات في جميع مراحل الحياة 47، وعلى النقيض من الفئران غير المعدلة وراثيا في الخلايا الصباغية التي لتوطين الأدمة في بصيلات الشعر. مع التحوير K14-SCF مسجلة، البشرة تصبح مصطبغة مع بخاصة مميزة الميلانين أصباغ الصباغسلالة من الحيوانات 1. الفئران K14-SCF على خلفية الوراثية C57BL / 6 مع نوع البرية Mc1r إشارات والجلد أسود كالفحم تتميز بمستويات عالية جدا من السوي (Eumelanin) الصباغ. وليس من المستغرب، وهذه الحيوانات هي شديدة المقاومة للأشعة فوق البنفسجية. في المقابل، المتطابقة وراثيا K14-SCF C57BL / 6 الحيوانات التي تؤوي غير نشط Mc1r متحولة لديهم تقريبا أي السوي (Eumelanin) في البشرة. بدلا من ذلك، هذه الحيوانات &quot;التمديد&quot; (Mc1r ه / ه) لديهم بشرة الجلد العادلة الناجمة عن ترسب صبغة pheomelanin (الشكل 1A) وأكثر من ذلك بكثير هي حساسة للأشعة فوق البنفسجية 48-49. وقد ثبت أن مركبات دوائية مع الخصائص الكيميائية التي تسمح تغلغل داخل الجلد للحث على أكثر قدرة السوي (Eumelanin) في ملحق (Mc1r ه / ه) نموذج حيواني K14-SCF مباشرة عن طريق التلاعب مستويات المخيم في الخلايا الصباغية في الجلد البشرة. وقد upregulation الميلانين في هذا النموذج صeported عن طريق تفعيل أدينيليل محلقة 1 وكذلك تثبيط فسفودايستراز 4 35. في هذه المقالة، ونحن لشرح إعداد والتطبيق الموضعي للforskolin في ملحق (Mc1r ه / ه) الحيوانات K14-SCF النموذج الذي حساسة للأشعة فوق البنفسجية الإنسان ذوي البشرة البيضاء. وتبين لنا أن تطبيق مرتين يوميا من العقار يعزز تسارع التصبغ، هو أن سواد الجلد بسبب ترسب الميلانين صبغة البشرة والبشرة التي يسببها الميلانين يحمي من الأشعة فوق البنفسجية التي يسببها حروق الشمس من خلال قياس &quot;جرعة الحد الأدنى من حمامي&quot; (MED) 48.

<table border="1">
		<tbody>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Reagents</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Coleus Forskoli extract 20%</td>
			<td>Buckton Scott USA Inc. </td>
			<td>n/a</td>
			<td>Princeton, NJ</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Isothesia, Isoflurane , USP</td>
			<td>Butler Schein</td>
			<td>NCD 11695-6776-1</td>
			<td>Dublin, OH, USA</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Anased Injection</td>
			<td>LA04612</td>
			<td>Shenandoah, Iowa, USA</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Ketamine HCl, USP</td>
			<td>Putney</td>
			<td>NDC 26637-411-01</td>
			<td>St. Joseph, MO, USA</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Decon Labs.</td>
			<td>2705</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Propylene glycol</td>
			<td>Adesco</td>
			<td>05751L</td>
			<td>Solon, OH, USA</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Depilatory cream, Nair</td>
			<td>Church &amp; Dwight</td>
			<td>JF-11 4381322</td>
			<td>Priceton, NJ</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>EQUIPMENT</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Germicidal Hg Lamp UV-B</td>
			<td>Westinghouse</td>
			<td>F15T8UV-B</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Radiometer photometer</td>
			<td>International light</td>
			<td>1LT400A</td>
			<td>Peabody, MA,USA</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Chromameter</td>
			<td>Konica Minolta</td>
			<td>CR-400</td>
			<td>Ramsey, NJ, USA</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Data Processor for 	Chromameter CR-400</td>
			<td>Konica Monilta</td>
			<td>DR-400</td>
			<td>Ramsey, NJ, USA</td>
		 </tr>
		</tbody>
 </table>

pharmacologic induction of epidermal melanin and protection against sunburn in a humanized mouse model

عدالة الجلد والحساسية للأشعة فوق البنفسجية وخطر الاصابة بسرطان الجلد عن ربط مع وظيفة الفسيولوجية من مستقبلات ميلانوكورتين 1، وهو يشير البروتين يقترن G-ق وجدت على سطح الخلايا الصباغية. Mc1r يحفز محلقة أدينيليل والإنتاج المخيم والتي، بدورها، يصل ينظم إنتاج الصباغية الميلانين في الجلد. من أجل دراسة الآليات التي Mc1r إشارات يحمي البشرة من الأشعة فوق البنفسجية الإصابة، تعتمد هذه الدراسة على نموذج الفأر مع &quot;الجلد أنسنة&quot; بناء على البشرة التعبير عن الخلايا الجذعية عامل (SCF). K14-SCF الفئران المعدلة وراثيا تحتفظ الخلايا الصباغية في البشرة، وبالتالي لديها القدرة على أن تودع الميلانين في البشرة. في هذا النموذج الحيواني، النوع البري نتائج الوضع Mc1r في ترسب قوية من الأسود الصباغ السوي (Eumelanin) والنمط الظاهري محمية الأشعة فوق البنفسجية. في المقابل، الحيوانات K14-SCF مع معيبة Mc1r يشير قدرة المعرض على تصبغ أحمر / شقراء، السوي (Eumelanin) القليل جدا في الجلد والنمط الظاهري حساسة للأشعة فوق البنفسجية. المنطق الذي ترسب السوي (Eumelanin) قد يتعزز من خلال وكلاء الموضعية التي تحاكي Mc1r الإشارات، وجدنا أن التطبيق المباشر لاستخراج forskolin على الجلد من الفئران ذوي البشرة البيضاء Mc1r معيبة أدى إلى تحريض قوية السوي (Eumelanin) وحماية للأشعة فوق البنفسجية 1. نحن هنا تصف طريقة لإعداد وتطبيق استخراج الجذر الطبيعية التي تحتوي على forskolin إلى K14-SCF الفئران ذوي البشرة البيضاء وتقرير طريقة لقياس حساسية للأشعة فوق البنفسجية من خلال تحديد الحد الأدنى من الجرعة حمامية (MED). باستخدام هذا النموذج الحيواني، فمن الممكن لدراسة كيفية تحريض البشرة المخيم والتصبغ في الجلد تؤثر على الاستجابات الفسيولوجية للتعرض للأشعة فوق البنفسجية.

تم إنشاؤها C57BL / 6 الفئران على الخلفيات eumelanotic، pheomelanotic أو عديم الميلانين دمج التحوير K14-SCF كما هو موضح (الشكل 1A). أفواج من التمديد ذوي البشرة البيضاء (Mc1r ه / ه، صور + / +) عولجت فئران بجرعات موضعيا مرتين يوميا إما مركبة (70٪ من الإيثانول و 30٪ البروبيل?...

Watch this Scientific Journal Video about Pharmacologic Induction of Epidermal Melanin and Protection Against Sunburn in a Humanized Mouse Model at JoVE.com

Pharmacologic Induction of Epidermal Melanin and Protection Against Sunburn in a Humanized Mouse Model

هو فعل البشرة الميلانين عن طريق التطبيق الموضعي للforskolin في نموذج الفئران حساسة للأشعة فوق البنفسجية الإنسان ذوي البشرة البيضاء. التلاعب الدوائية من مستويات المخيم في الجلد والبشرة سواد حماية بقوة ضد بوساطة الأشعة فوق البنفسجية التهاب (حروق الشمس) مقاسا الحد الأدنى للجرعة حمامي (MED) مقايسة.

الحث الدوائية من الميلانين البشرة والحماية من حروق الشمس في نموذج انساني ماوس

Fairness of skin, UV sensitivity and skin cancer  risk all correlate with the physiologic function of the melanocortin 1  receptor, a Gs-coupled signaling ...

pharmacologic-induction-epidermal-melanin-protection-against-sunburn

Research

JoVE Journal

Medicine

18.0K Views.  University of Kentucky College of Medicine.  هو فعل البشرة الميلانين عن طريق التطبيق الموضعي للforskolin في نموذج الفئران حساسة للأشعة فوق البنفسجية الإنسان ذوي البشرة البيضاء. التلاعب الدوائية من مستويات المخيم في الجلد والبشرة سواد حماية بقوة ضد بوساطة الأشعة فوق البنفسجية التهاب (حر?...

Video: Pharmacologic Induction of Epidermal Melanin and Protection Against Sunburn in a Humanized Mouse Model

A Mouse Model of in Utero Transplantation

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus. For example, in utero transplantation (IUT) of hematopoietic stem cells has been used to successfully treat patients with severe combined immunodeficiency.1,2 In several other conditions, however, IUT has been attempted without success.3 Given these mixed results, the availability of an efficient non-human model to study the biological sequelae of stem cell transplantation and gene therapy is critical to advance this field. We and others have used the mouse model of IUT to study factors affecting successful engraftment of in utero transplanted hematopoietic stem cells in both wild-type mice4-7 and those with genetic diseases.8,9 The fetal environment also offers considerable advantages for the success of in utero gene therapy. For example, the delivery of adenoviral10, adeno-associated viral10, retroviral11, and lentiviral vectors12,13 into the fetus has resulted in the transduction of multiple organs distant from the site of injection with long-term gene expression. in utero gene therapy may therefore be considered as a possible treatment strategy for single gene disorders such as muscular dystrophy or cystic fibrosis. Another potential advantage of IUT is the ability to induce immune tolerance to a specific antigen. As seen in mice with hemophilia, the introduction of Factor IX early in development results in tolerance to this protein.14 
In addition to its use in investigating potential human therapies, the mouse model of IUT can be a powerful tool to study basic questions in developmental and stem cell biology. For example, one can deliver various small molecules to induce or inhibit specific gene expression at defined gestational stages and manipulate developmental pathways. The impact of these alterations can be assessed at various timepoints after the initial transplantation. Furthermore, one can transplant pluripotent or lineage specific progenitor cells into the fetal environment to study stem cell differentiation in a non-irradiated and unperturbed host environment.
The mouse model of IUT has already provided numerous insights within the fields of immunology, and developmental and stem cell biology. In this video-based protocol, we describe a step-by-step approach to performing IUT in mouse fetuses and outline the critical steps and potential pitfalls of this technique.

A Mouse Model of in Utero Transplantation

The mouse model of in utero transplantation is a versatile tool that can be used to study the potential clinical applications of stem cell transplantation and gene therapy in the fetus. In this protocol, we present a general approach to performing this technique

نموذج الفأر من في الرحم زراعة

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus.  For example, in ...

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient management strategies. Orthotopic mouse models of oral cancer have been developed to facilitate the study of factors that impact invasion and serve as model system for evaluating anti-tumor therapeutics. In these systems, visualization of disseminated tumor cells within oral cavity tissues has typically been conducted by either conventional histology or with in vivo bioluminescent methods. A primary drawback of these techniques is the inherent inability to accurately visualize and quantify early tumor cell invasion arising from the primary site in three dimensions. Here we describe a protocol that combines an established model for squamous cell carcinoma of the tongue (SCOT) with two-photon imaging to allow multi-vectorial visualization of lingual tumor spread. The OSC-19 head and neck tumor cell line was stably engineered to express the F-actin binding peptide LifeAct fused to the mCherry fluorescent protein (LifeAct-mCherry). Fox1nu/nu mice injected with these cells reliably form tumors that allow the tongue to be visualized by ex-vivo application of two-photon microscopy. This technique allows for the orthotopic visualization of the tumor mass and locally invading cells in excised tongues without disruption of the regional tumor microenvironment. In addition, this system allows for the quantification of tumor cell invasion by calculating distances that invaded cells move from the primary tumor site. Overall this procedure provides an enhanced model system for analyzing factors that contribute to SCOT invasion and therapeutic treatments tailored to prevent local invasion and distant metastatic spread. This method also has the potential to be ultimately combined with other imaging modalities in an in vivo setting.

A comprehensive overview of the techniques involved in generating a mouse model of oral cancer and quantitative monitoring of tumor invasion within the tongue through multi-photon microscopy of labeled cells is presented. This system can serve as a useful platform for the molecular assessment and drug efficacy of anti-invasive compounds.

متعدد الفوتون التصوير من غزو خلايا الورم في الفأر نموذج مثلي الفم سرطان الخلايا الحرشفية

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

Sublingual Immunotherapy as an Alternative to Induce Protection Against Acute Respiratory Infections

Sublingual route has been widely used to deliver small molecules into the bloodstream and to modulate the immune response at different sites. It has been shown to effectively induce humoral and cellular responses at systemic and mucosal sites, namely the lungs and urogenital tract. Sublingual vaccination can promote protection against infections at the lower and upper respiratory tract; it can also promote tolerance to allergens and ameliorate asthma symptoms. Modulation of lung&#8217;s immune response by sublingual immunotherapy (SLIT) is safer than direct administration of formulations by intranasal route because it does not require delivery of potentially harmful molecules directly into the airways. In contrast to intranasal delivery, side effects involving brain toxicity or facial paralysis are not promoted by SLIT. The immune mechanisms underlying SLIT remain elusive and its use for the treatment of acute lung infections has not yet been explored. Thus, development of appropriate animal models of SLIT is needed to further explore its potential advantages. 
This work shows how to perform sublingual administration of therapeutic agents in mice to evaluate their ability to protect against acute pneumococcal pneumonia. Technical aspects of mouse handling during sublingual inoculation, precise identification of sublingual mucosa, draining lymph nodes and isolation of tissues, bronchoalveolar lavage and lungs are illustrated. Protocols for single cell suspension preparation for FACS analysis are described in detail. Other downstream applications for the analysis of the immune response are discussed. Technical aspects of the preparation of Streptococcus pneumoniae inoculum and intranasal challenge of mice are also explained.
SLIT is a simple technique that allows screening of candidate molecules to modulate lungs&#8217; immune response. Parameters affecting the success of SLIT are related to molecular size, susceptibility to degradation and stability of highly concentrated formulations.

The present work illustrates the convenience of using sublingual immunotherapy to boost the innate immune response in the lungs and confer protection against acute pneumococcal pneumonia in mouse.

العلاج المناعي تحت اللسان باعتباره البديل للحث على الحماية من التهابات الجهاز التنفسي الحادة

Sublingual route has been widely used to deliver small molecules into the bloodstream and to modulate the immune response at different sites. It has been ...

Establishment and Characterization of UTI and CAUTI in a Mouse Model

Urinary tract infections (UTI) are highly prevalent, a significant cause of morbidity and are increasingly resistant to treatment with antibiotics. Females are disproportionately afflicted by UTI: 50% of all women will have a UTI in their lifetime. Additionally, 20-40% of these women who have an initial UTI will suffer a recurrence with some suffering frequent recurrences with serious deterioration in the quality of life, pain and discomfort, disruption of daily activities, increased healthcare costs, and few treatment options other than long-term antibiotic prophylaxis. Uropathogenic Escherichia coli (UPEC) is the primary causative agent of community acquired UTI. Catheter-associated UTI (CAUTI) is the most common hospital acquired infection accounting for a million occurrences in the US annually and dramatic healthcare costs. While UPEC is also the primary cause of CAUTI, other causative agents are of increased significance including Enterococcus faecalis. Here we utilize two well-established mouse models that recapitulate many of the clinical characteristics of these human diseases. For UTI, a C3H/HeN model recapitulates many of the features of UPEC virulence observed in humans including host responses, IBC formation and filamentation. For CAUTI, a model using C57BL/6 mice, which retain catheter bladder implants, has been shown to be susceptible to E. faecalis bladder infection. These representative models are being used to gain striking new insights into the pathogenesis of UTI disease, which is leading to the development of novel therapeutics and management or prevention strategies.

The ability to model urinary tract infections (UTI) is crucial in order to be able to understand bacterial pathogenesis and spawn the development of novel therapeutics. This work&#8217;s goal is to demonstrate mouse models of experimental UTI and catheter associated UTI that recapitulate and predict findings seen in humans.

إنشاء وتوصيف UTI وCAUTI في نموذج الفأر

Urinary tract infections (UTI) are highly prevalent, a significant cause of morbidity and are increasingly resistant to treatment with antibiotics. ...

Stem-cell Based Engineered Immunity Against HIV Infection in the Humanized Mouse Model

With the rapid development of stem cell-based gene therapies against HIV, there is pressing requirement for an animal model to study the hematopoietic differentiation and immune function of the genetically modified cells. The humanized Bone-marrow/Liver/Thymus (BLT) mouse model allows for full reconstitution of a human immune system in the periphery, which includes T cells, B cells, NK cells and monocytes. The human thymic implant also allows for thymic selection of T cells in autologous thymic tissue. In addition to the study of HIV infection, the model stands as a powerful tool to study differentiation, development and functionality of cells derived from hematopoietic stem cells (HSCs). Here we outline the construction of humanized non-obese diabetic (NOD)-severe combined immunodeficient (SCID)-common gamma chain knockout (c&#947;-/-)-Bone-marrow/Liver/Thymus (NSG-BLT) mice with HSCs transduced with CD4 chimeric antigen receptor (CD4CAR) lentivirus vector. We show that the CD4CAR HSCs can successfully differentiate into multiple lineages and have anti-HIV activity. The goal of the study is to demonstrate the use of NSG-BLT mouse model as an in vivo model for engineered immunity against HIV. It is worth noting that, because lentivirus and human tissue is used, experiments and surgeries should be performed in a Class II biosafety cabinet in a Biosafety Level 2 (BSL2) with special precautions (BSL2+) facility.

This protocol describes the methods in constructing a humanized bone-marrow/liver/thymus mouse model with stem cell-based engineered immunity against HIV infection.

الخلايا الجذعية وبناء الحصانة المهندسة ضد العدوى بفيروس نقص المناعة البشرية في نموذج إنساني ماوس

With the rapid development of stem cell-based gene therapies against HIV, there is pressing requirement for an animal model to study the hematopoietic ...

Generation of a Humanized Mouse Liver Using Human Hepatic Stem Cells

A novel animal model involving chimeric mice with humanized livers established via human hepatocyte transplantation has been developed. These mice, in which the liver has been repopulated with functional human hepatocytes, could serve as a useful tool for investigating human hepatic cell biology, drug metabolism, and other preclinical applications. One of the key factors required for successful transplantation of human hepatocytes into mice is the elimination of the endogenous hepatocytes to prevent competition with the human cells and provide a suitable space and microenvironment for promoting human donor cell expansion and differentiation. To date, two major liver injury mouse models utilizing fumarylacetoacetate hydrolase (Fah) and uroplasminogen activator (uPA) mice have been established. However, Fah mice are used mainly with mature hepatocytes and the application of the uPA model is limited by decreased breeding. To overcome these limitations, Alb-toxin receptor mediated cell knockout (TRECK)/SCID mice were used for in vivo differentiation of immature human hepatocytes and humanized liver generation. Human hepatic stem cells (HpSCs) successfully repopulated the livers of Alb-TRECK/SCID mice that had developed lethal fulminant hepatic failure following diphtheria toxin (DT) treatment. This model of a humanized liver in Alb-TRECK/SCID mice will have functional applications in studies involving drug metabolism and drug-drug interactions and will promote other in vivo and in vitro studies.

Here, we present a novel humanized mouse liver model generated in Alb-toxin receptor mediated cell knockout (TRECK)/SCID mice following the transplantation of immature and expandable human hepatic stem cells.

جيل من كبد الفأر أنسنة طريق كبد الإنسان خلايا الجذعية

A novel animal model involving chimeric mice with humanized livers established via human hepatocyte transplantation has been developed. These mice, in ...

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The "Wire-Injury" Model

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. Moreover, by rupture of the defective vascular wall, atherosclerosis induces occlusive thrombus formation, which represents the main cause of myocardial infarction or stroke and the most frequent cause of death. Despite the advances in the cardiovascular field, many questions remain unanswered, and additional basic research is essential to improve our understanding of the molecular mechanisms during atherosclerosis and its effects. Due to limited clinical studies, there is a need for representative animal models recreating atherosclerotic conditions such as neointima formation after stent implantation, balloon angioplasty, or endarterectomy. Since the mouse presents many advantages and is the most frequently used model for studying molecular processes, the current study proposes an invasive procedure of endothelial denudation, also known as the wire-injury model, which is representative of the human condition of neointima formation in arteries after revascularization procedures.

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The &quot;Wire-Injury&quot; Model

This study describes an invasive procedure for the induction of accelerated atherosclerosis in mice. In comparison to other methods using electric- or cryo-induced injury, mechanical-induced injury mimics the human condition of restenosis after revascularization therapies and is ideal for the study of the molecular mechanisms involved.

تحريض تصلب الشرايين المتسارع في الفئران: نموذج "الأسلاك- إصابة"

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. ...

Intravital Microscopy and Thrombus Induction in the Earlobe of a Hairless Mouse

Thrombotic complications of vascular diseases are one leading cause of morbidity and mortality in industrial nations. Due to the complex interactions between cellular and non-cellular blood components during thrombus formation, reliable studies of the physiology and pathophysiology of thrombosis can only be performed in vivo. Therefore, this article presents an ear model in hairless mice and focuses on the in vivo analysis of microcirculation, thrombus formation, and thrombus evolution. By using intravital fluorescence microscopy and the intravenous (iv) application of the respective fluorescent dyes, a repetitive analysis of microcirculation in the auricle can easily be performed, without the need for surgical preparation. Furthermore, this model can be adapted for in vivo studies of different issues, including wound healing, reperfusion injury, or angiogenesis. In summary, the ear of hairless mice is an ideal model for the in vivo study of skin microcirculation in physiological or pathophysiological conditions and for the evaluation of its reaction to different systemic or topical treatments.

The ear model of the hairless SKH1-Hrhr mouse enables intravital fluorescence microscopy of microcirculation and phototoxic thrombus induction without prior surgical preparation in the examined microvascular bed. Therefore, the ear of the hairless mouse is an excellent in vivo model to study the complex interactions during microvascular thrombus formation, thrombus evolution, and thrombolysis.

حيوي داخلي المجهري والجلطة التعريفي في شحمة الأذن ماوس بلا شعر

Thrombotic complications of vascular diseases are one leading cause of morbidity and mortality in industrial nations. Due to the complex interactions ...

Induction and Micro-CT Imaging of Cerebral Cavernous Malformations in Mouse Model

Mutations in the CCM1 (aka KRIT1), CCM2, or CCM3 (aka PDCD10) gene cause cerebral cavernous malformation (CCM) in humans. Mouse models of CCM disease have been established by tamoxifen induced deletion of Ccm genes in postnatal animals. These mouse models provide invaluable tools to investigate molecular mechanism and therapeutic approaches for CCM disease. An accurate and quantitative method to assess lesion burden and progression is essential to harness the full value of these animal models. Here, we demonstrate the induction of CCM disease in a mouse model and the use of the contrast enhanced X-ray micro computed tomography (micro-CT) method to measure CCM lesion burden in mouse brains. At postnatal day 1 (P1), we used 4-hydroxytamoxifen (4HT) to activate Cre recombinase activity from the Cdh5-CreErt2 transgene to cleave the floxed allele of Ccm2. CCM lesions in mouse brains were analyzed at P8. For micro-CT, iodine based Lugol&#39;s solution was used to enhance contrast in brain tissue. We have optimized the scan parameters and utilized a voxel dimension of 9.5 &#181;m, which lead to a minimum feature size of approximately 25 &#181;m. This resolution is sufficient to measure CCM lesion volume and number globally and accurately, and provide high-quality 3-D mapping of CCM lesions in mouse brains. This method enhances the value of the established mouse models to study the molecular basis and potential therapies for CCM and other cerebrovascular diseases.

This protocol demonstrates the induction of cerebral cavernous malformation disease in a mouse model and uses contrast enhanced micro computed tomography to measure lesion burden. This method enhances the value of established mouse models to study the molecular basis and potential therapies for cerebral cavernous malformation and other cerebrovascular diseases.

التعريفي والصغرى-CT تصوير التشوهات مجوف الدماغي في طراز الماوس

Mutations in the CCM1 (aka KRIT1), CCM2, or CCM3 (aka PDCD10) gene cause cerebral cavernous malformation (CCM) in humans. Mouse models of CCM disease have ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

متساوي القياس كونتراكتيليتي القياس الشريان المساريقي العلوي الماوس باستخدام أسلاك ميوجرافي

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...