وأيد هذا العمل من قبل مؤسسة نانسي لوري ماركس. نشكر الدكتور نانسي E. كول لقراءة نقدية للمخطوطة. نشكر كين K. ونغ لمساعدته في إعداد هذا التقرير الفيديو.

ملاحظة: تم تنفيذ كافة الدراسات على الحيوانات تحت بروتوكولات المؤسسية المعتمدة والمبادئ التوجيهية رعاية الحيوان. 1. الكواشف وحلول <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حل سلطة النقد الفلسطينية لSC التلقيح: إعداد محلول المخزون من phorbol 12-13-ميريستات خلات (سلطة النقد الفلسطينية) في 5 ملغ / مل في DMSO. تخزين محلول المخزون في -20 درجة مئوية. قبل التلقيح، وذوبان الجليد الحل الأوراق المالية وتمييع إلى 1 ملغ / مل في برنامج تلفزيوني سلطة النقد الفلسطينية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حل LPS لSC التلقيح: ذوب عديد السكاريد الشحمي (LPS السالمونيلا الملهبة للمن النمط المصلي الملهبة) في برنامج تلفزيوني العقيمة في 1 ملغ / مل قبل SC التلقيح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حل كسيماترين للتصوير المرحلة الحادة: ذوب كسيماترين (5-الأمينية-2 ،3-ثنائي هيدرو-1 ،4-phthalazinedione، ملح الصوديوم) في محلول ملحي معقم (0.9٪ كلوريد الصوديوم) في 10 ملغ / مل. ويمكن تخزين الحل في -20 درجة مئوية قبل الاستخدام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حل Lucigenin للتصوير المرحلة المزمنة: ذوب lucigenin (مكرر-N-methylacridinium نترات) في محلول ملحي معقمفي 2.5 ملغ / مل. ويمكن تخزين الحل في -20 درجة مئوية قبل الاستخدام. </li></ol> 2. سلطة النقد الفلسطينية تحت الجلد التهاب الموديل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير المجلس الوطني للمقاومة الفئران عارية في غرفة الاستقراء مع 1-2٪ isoflurane و. تأكيد التخدير العام عن طريق فقدان الحركة ومعدل التنفس المستمر. نقل حيوان إلى مخروط الأنف توصيل الغاز isoflurane والمختلطة والحفاظ على الحيوان تحت التخدير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام الكحول الآيزوبروبيل مسح لتنظيف وتطهير مكان الحقن على الجناح الأيسر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام تقنية معقمة، وضخ 50 ميكرولتر من الحل التلقيح سلطة النقد الفلسطينية (التي تحتوي على 50 ميكروغرام من سلطة النقد الفلسطينية) في الفضاء تحت الجلد على الجناح الأيسر. إزالة السوائل الزائدة من موقع الحقن باستخدام وسادة ايزوبروبيل. تجنب استخدام التسكين لأنها قد تؤثر على الاستجابات الالتهابية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الحيوان إلى قفص الإسكان ويرصد عن كثب انتعاشها من التخدير. من أجل المساعدة في الانتعاش، واستخدام وسادة التدفئة للحفاظ على الحيوانات دافئة.</li></ol> 3. تحت الجلد LPS التهاب الموديل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الفئران C57BL/6J مع 1-2٪ isoflurane وفي غرفة الاستقراء. مرة واحدة إقامة التخدير العام، نقل حيوان إلى مخروط الأنف توصيل الغاز isoflurane ووالحفاظ على الحيوان تحت التخدير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام الكحول الآيزوبروبيل مسح لتنظيف موقع الحقن على قاطع الطريق الأيسر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام تقنية معقمة، وضخ 50 ميكرولتر من الحل التلقيح LPS (التي تحتوي على 50 ميكروغرام من LPS) في قاطع الطريق الأيسر. إزالة السوائل الزائدة من موقع الحقن باستخدام وسادة ايزوبروبيل. تجنب استخدام التسكين لأنها قد تؤثر على الاستجابات الالتهابية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الحيوان إلى قفص الإسكان ويرصد عن كثب انتعاشها من التخدير. استخدام وسادة التدفئة للحفاظ على الحارة الحيوان خلال فترة الانتعاش. </li></ol> 4. التصوير تلألؤ بيولوجي من التهاب <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الحيوان في دائرة الاستقراء مع 1-2٪ isoflurane والغاز المختلطة. بسnfirm التخدير العام عن طريق فقدان الحركة ومعدل التنفس المستمر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في حين أن الحيوان لا يزال تحت التخدير، والغشاء البريتونى (IP) حقن حل كسيماترين (10 ملغ / مل)، أو الحل lucigenin (2.5 ملغ / مل) للتصوير التهاب حاد أو مزمن، على التوالي. الجرعة النهائية هي 100 ملغ / كغ للكسيماترين و 25 ملغ / كغ للlucigenin. A أقل جرعة من lucigenin (10-15 ملغ / كلغ) يمكن استخدامها لتجنب السمية المحتملة لبعض سلالات الفئران. علامات السمية وتشمل ضيق في التنفس وضيق في التنفس. سلالة C57BL/6J ديه أدنى lucigenin التحمل من سلالة NCR عارية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الحيوانات الى غرفة التصوير من نظام التصوير تلألؤ بيولوجي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أداء التصوير تلألؤ بيولوجي على فترات متتابعة حد أدنى 1. وتتألف كل خطوة التصوير من 1 دقيقة اكتساب الوقت، F / توقف = 1، binning = 16 و 0 ثانية تأخير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في لوحة الحصول على الصور، لتمكين متتابعة التصوير متعددة الخطوات، انقر على تسلسل وضع بوtton. توفير الخطوات التصوير كافية في اقتناء الشخصي لتحديد الناتج التلألؤ القصوى (عادة 15 خطوات دقيقة واحدة تكفي). يسمح قسم التصوير 15 دقيقة وقتا كافيا لامتصاص الركيزة وجهاز الدورة الدموية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الحيوان من غرفة التصوير ونقله مرة أخرى إلى القفص الإسكان. من أجل المساعدة في الانتعاش، واستخدام وسادة التدفئة للحفاظ على الحيوانات دافئة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلال تحليل ما بعد الاستحواذ، استخدام حزمة برامج التصوير لحساب مجموع ذروة إشارة إضاءة الحيوية من خلال المناطق موحدة ذات الاهتمام (ROI). الصور موجودة كما الاشراق في الفوتونات / ثانية / سم 2 / ريال مع الحد الأدنى والحد الأقصى عتبة محدد. يتم عرض البيانات الكمية والجريان الكلي في الفوتونات في الثانية لكل ROI. </li></ol>

<ol>
	<li>Premack, B. A., Schall, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemokine+receptors:+gateways+to+inflammation+and+infection.">Chemokine receptors: gateways to inflammation and infection.</a> Nat. Med. 2, 1174-1178 (1996).</li><li>Singer, A. J., Clark, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cutaneous+wound+healing.">Cutaneous wound healing.</a> N. Engl. J. Med. 341, 738-746 (1999).</li><li>Wellen, K. E., Hotamisligil, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation,+stress,+and+diabetes.">Inflammation, stress, and diabetes.</a> J. Clin. Invest. 115, 1111-1119 (2005).</li><li>Weitzman, S. A., Gordon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+and+cancer:+role+of+phagocyte-generated+oxidants+in+carcinogenesis.">Inflammation and cancer: role of phagocyte-generated oxidants in carcinogenesis.</a> Blood. 76, 655-663 (1990).</li><li>Ridker, P. M., Cushman, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation,+aspirin,+and+the+risk+of+cardiovascular+disease+in+apparently+healthy+men.">Inflammation, aspirin, and the risk of cardiovascular disease in apparently healthy men.</a> N. Engl. J. Med. 336, 973-979 (1997).</li><li>Wyss-Coray, T., Mucke, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+in+neurodegenerative+disease--a+double-edged+sword.">Inflammation in neurodegenerative disease--a double-edged sword.</a> Neuron. 35, 419-432 (2002).</li><li>Hamilton, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colony-stimulating+factors+in+inflammation+and+autoimmunity.">Colony-stimulating factors in inflammation and autoimmunity.</a> Nat. Rev. Immunol. 8, 533-544 (2008).</li><li>Harlan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte-endothelial+interactions.">Leukocyte-endothelial interactions.</a> Blood. 65, 513-525 (1985).</li><li>Bedard, K., Krause, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+NOX+family+of+ROS-generating+NADPH+oxidases:+physiology+and+pathophysiology.">The NOX family of ROS-generating NADPH oxidases: physiology and pathophysiology.</a> Physiol. Rev. 87, 245-313 (2007).</li><li>Rest, R. F., Spitznagel, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subcellular+distribution+of+superoxide+dismutases+in+human+neutrophils.+Influence+of+myeloperoxidase+on+the+measurement+of+superoxide+dismutase+activity.">Subcellular distribution of superoxide dismutases in human neutrophils. Influence of myeloperoxidase on the measurement of superoxide dismutase activity.</a> Biochem. J. 166, 145-153 (1977).</li><li>Hampton, M. B., Kettle, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inside+the+neutrophil+phagosome:+oxidants,+myeloperoxidase,+and+bacterial+killing.">Inside the neutrophil phagosome: oxidants, myeloperoxidase, and bacterial killing.</a> Blood. 92, 3007-3017 (1998).</li><li>Serhan, C. N., Savill, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resolution+of+inflammation:+the+beginning+programs+the+end.">Resolution of inflammation: the beginning programs the end.</a> Nat. Immunol. 6, 1191-1197 (2005).</li><li>Jiang, F., Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NADPH+oxidase-mediated+redox+signaling:+roles+in+cellular+stress+response,+stress+tolerance,+and+tissue+repair.">NADPH oxidase-mediated redox signaling: roles in cellular stress response, stress tolerance, and tissue repair.</a> Pharmacol. Rev. 63, 218-242 (2011).</li><li>Calafat, J., Kuijpers, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+small+intracellular+vesicles+in+human+blood+phagocytes+containing+cytochrome+b558+and+the+adhesion+molecule+CD11b/CD18.">Evidence for small intracellular vesicles in human blood phagocytes containing cytochrome b558 and the adhesion molecule CD11b/CD18.</a> Blood. 81, 3122-3129 (1993).</li><li>Johansson, A., Jesaitis, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+subcellular+localization+of+cytochrome+b+and+the+dormant+NADPH-oxidase+in+neutrophils+and+macrophages:+effect+on+the+production+of+reactive+oxygen+species+during+phagocytosis.">Different subcellular localization of cytochrome b and the dormant NADPH-oxidase in neutrophils and macrophages: effect on the production of reactive oxygen species during phagocytosis.</a> Cell. Immunol. 161, 61-71 (1995).</li><li>Kumar, A. P., Piedrafita, F. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peroxisome+proliferator-activated+receptor+gamma+ligands+regulate+myeloperoxidase+expression+in+macrophages+by+an+estrogen-dependent+mechanism+involving+the+-463GA+promoter+polymorphism.">Peroxisome proliferator-activated receptor gamma ligands regulate myeloperoxidase expression in macrophages by an estrogen-dependent mechanism involving the -463GA promoter polymorphism.</a> J. Biol. Chem. 279, 8300-8315 (2004).</li><li>Tseng, J. C., Kung, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+inflammatory+phagocytes.">In vivo imaging of inflammatory phagocytes.</a> Chem Biol. 19, 1199-1209 (2012).</li><li>Gross, S., Gammon, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioluminescence+imaging+of+myeloperoxidase+activity+in+vivo.">Bioluminescence imaging of myeloperoxidase activity in vivo.</a> Nat. Med. 15, 455-461 (2009).</li><li>Kielland, A., Blom, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+reactive+oxygen+and+nitrogen+species+in+inflammation+using+the+luminescent+probe+L-012.">In vivo imaging of reactive oxygen and nitrogen species in inflammation using the luminescent probe L-012.</a> Free Radic. Biol. Med. 47, 760-766 (2009).</li><li>Zhou, J., Tsai, Y. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+assessment+of+localized+inflammatory+responses.">Noninvasive assessment of localized inflammatory responses.</a> Free Radic. Biol. Med. 52, 218-226 (2012).</li><li>Karlsson, A., Nixon, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phorbol+myristate+acetate+induces+neutrophil+NADPH-oxidase+activity+by+two+separate+signal+transduction+pathways:+dependent+or+independent+of+phosphatidylinositol+3-kinase.">Phorbol myristate acetate induces neutrophil NADPH-oxidase activity by two separate signal transduction pathways: dependent or independent of phosphatidylinositol 3-kinase.</a> J. Leukoc. Biol. 67, 396-404 (2000).</li><li>Taylor, R. G., McCall, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histopathologic+features+of+phorbol+myristate+acetate-induced+lung+injury.">Histopathologic features of phorbol myristate acetate-induced lung injury.</a> Lab Invest. 52, 61-70 (1985).</li><li>Fukaya, S., Matsui, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overexpression+of+TNF-alpha-converting+enzyme+in+fibroblasts+augments+dermal+fibrosis+after+inflammation.">Overexpression of TNF-alpha-converting enzyme in fibroblasts augments dermal fibrosis after inflammation.</a> Lab Invest. 93, 72-80 (2013).</li><li>Lu, Y. C., Yeh, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LPS/TLR4+signal+transduction+pathway.">LPS/TLR4 signal transduction pathway.</a> Cytokine. 42, 145-151 (2008).</li><li>Aitken, R. J., Buckingham, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactive+oxygen+species+and+human+spermatozoa:+analysis+of+the+cellular+mechanisms+involved+in+luminol-+and+lucigenin-dependent+chemiluminescence.">Reactive oxygen species and human spermatozoa: analysis of the cellular mechanisms involved in luminol- and lucigenin-dependent chemiluminescence.</a> J. Cell. Physiol. 151, 466-477 (1992).</li><li>Allen, R. C., Loose, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phagocytic+activation+of+a+luminol-dependent+chemiluminescence+in+rabbit+alveolar+and+peritoneal+macrophages.">Phagocytic activation of a luminol-dependent chemiluminescence in rabbit alveolar and peritoneal macrophages.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 69, 245-252 (1976).</li><li>Caldefie-Chezet, F., Walrand, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+the+neutrophil+reactive+oxygen+species+production+measured+by+luminol+and+lucigenin+chemiluminescence+intra+or+extracellular?+Comparison+with+DCFH-DA+flow+cytometry+and+cytochrome+c+reduction.">Is the neutrophil reactive oxygen species production measured by luminol and lucigenin chemiluminescence intra or extracellular? Comparison with DCFH-DA flow cytometry and cytochrome c reduction.</a> Clin. Chim. Acta. 319, 9-17 (2002).</li><li>Dahlgren, C., Aniansson, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pattern+of+formylmethionyl-leucyl-phenylalanine-induced+luminol-+and+lucigenin-dependent+chemiluminescence+in+human+neutrophils.">Pattern of formylmethionyl-leucyl-phenylalanine-induced luminol- and lucigenin-dependent chemiluminescence in human neutrophils.</a> Infect. Immun. 47, 326-328 (1985).</li><li>Dahlgren, C., Karlsson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Respiratory+burst+in+human+neutrophils.">Respiratory burst in human neutrophils.</a> J. Immunol. Methods. 232, 3-14 (1999).</li><li>Aerts, C., Wallaert, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Release+of+superoxide+anion+by+alveolar+macrophages+in+pulmonary+sarcoidosis.">Release of superoxide anion by alveolar macrophages in pulmonary sarcoidosis.</a> Ann. N.Y. Acad. Sci. 465, 193-200 (1986).</li><li>Zhang, N., Francis, K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+detection+of+myeloperoxidase+activity+in+deep+tissues+through+luminescent+excitation+of+near-infrared+nanoparticles.">Enhanced detection of myeloperoxidase activity in deep tissues through luminescent excitation of near-infrared nanoparticles.</a> Nat Med. , (2013).</li></ol>

الكتاب تعلن أي تضارب في المصالح في هذه الدراسة.

في هذا التقرير، ونحن يبرهن على وجود طريقة للتصوير تلألؤ بيولوجي غير الغازية من التهاب في الحيوانات الحية. الاستفادة من الانارة اثنين من ركائز، كسيماترين وlucigenin، لا يمكن للطريقة تمييز مراحل مختلفة من الالتهابات. ويرتبط تلألؤ بيولوجي كسيماترين مع العدلات في المرحلة ا...

الالتهاب هو استجابة بيولوجية درجة عالية من التنظيم تشارك في مجموعة متنوعة من الأمراض التي تصيب الإنسان، بما في ذلك العدوى الميكروبية 1، 2 التئام الجروح، ومرض السكري 3، 4 السرطان، القلب والأوعية الدموية 5، 6 الاعصاب، وأمراض المناعة الذاتية 7. يتطلب التهاب الأنسجة التنسيق السليم لمختلف الخلايا المناعية من أجل تحقيق إزالة العوامل المسببة للأمراض، وإصلاح الأنسجة، وقرار المرض. العدلات والضامة وسطاء المناعة مفتاح من التهاب الأنسجة. في المرحلة الحادة من الالتهاب، والعدلات هي أول المستجيبين لمختلف المنبهات الضارة وتلف الأنسجة 8. العدلات يتسرب بسرعة من التداول إلى موقع الإصابة، حيث إبطال نشاط الخلايا الغازية الميكروبات عن طريق الإفراج عن حبيبات مضادة للميكروبات والبلعمة. خلال البلعمة، العدلات تبتلع الميكروبات الغازية في phagosomes، ضمن الخلايا التي تنتج مستويات عالية من superoxIDE (O 2 · -). الفائق Phagosomal هو المصدر الأساسي للعديد من أنواع الاكسجين التفاعلية المصب (ROS). على سبيل المثال، يمكن dismutated الفائق لبيروكسيد الهيدروجين (H 2 O 2) بواسطة تطافر عفوية أو عن طريق ديسموتاز الفائق (الاحمق) 9، 10. في العدلات، الميلوبيروكسيديز (MPO) تحويل مزيد من بيروكسيد الهيدروجين إلى حمض تحت الكلور المضادة للميكروبات (HOCL) 11. كما تواصل الاستجابات الالتهابية، وحيدات تعميم تهاجر تدريجيا إلى موقع الإصابة وتفرق في الضامة ناضجة 2، التي تساعد على إزالة مسببات الأمراض المعطل والحطام الخلية وظيفة البلعمة. وبالإضافة إلى ذلك، كمنظم رئيسي في مرحلة لاحقة من الالتهاب، والبلاعم يعزز إصلاح الأنسجة من خلال إنتاج السيتوكينات المضادة للالتهابات 12 وعن طريق توليد ROS خارج الخلية في انخفاض مستوى 9. وROS ولدت في هذه المرحلة في وقت لاحق تنظيم إعادة عرض الأنسجة، وتشكيل سفينة جديدة، وreepithelialization 13. بلعمية أوكسيديز NADPH (Phox) هو المصدر الرئيسي للإنتاج الأكسيد في كل من العدلات والبلاعم 9. Phox عبارة عن مجمع متعدد الوحيدات الذي ينظم بإحكام 9 الجمعية. وعميم الإنزيم يحتوي على عدة مفارز التنظيمية عصاري خلوي (P67 phox، P47 phox، P40 phox، وRAC) وغشاء محدد مغاير السيتوكروم ب 558 (تتألف من الوحيدات صبا وCYBB). السيتوكروم ب 558 هو جوهر رد فعل من خلاله الوحيدات CYBB (المعروف أيضا باسم P91 phox وNOX2) ينفذ الأولية الأكسدة سلسلة من ردود الفعل 9. ومن المثير للاهتمام، مواقع التجميع تختلف بين العدلات والضامة. في العدلات يستريح، السيتوكروم ب 558 هي في معظمها موجودة في غشاء من حبيبات تخزين داخل الخلايا 14. خلال البلعمة، العدلات تجميع حoloenzymes في phagosomes 9، حيث مستويات عالية من النشاط MPO موجودة أيضا. والعدلة Phox يستهلك بسرعة الأكسجين وتمارس قوتها ميكروبات التي كتبها الإنتاج ROS، ووصف ظاهرة انفجار الجهاز التنفسي 11. في المقابل، الضامة لديها مستوى أدنى من التعبير MPO والسيتوكروم ب 558 تم العثور على معظمها في غشاء البلازما 15 و 16. وهكذا العدلات تنتج مستويات عالية من النشاط الفائق لمكافحة الجراثيم، في حين الضامة توليد أقل الفائق للوظائف التنظيمية 15. منذ التهاب هي معقدة في عملية الجسم الحي، وأساليب التصوير غير الغازية محددة لمراحل مختلفة من التهاب تسمح التقييم الكمي ونماذج طولية من المرض. باستخدام دراسات الآلي، وقد أثبتنا سابقا استخدام اثنين من وكلاء chemiluminescent، كسيماترين (5-الأمينية-2 ،3-ثنائي هيدرو-1 ،4-phthalazinedione) وlucigenin (مكرر-N-methylacridinium نترات)، للتصوير غير الغازية من المراحل الحادة والمتأخرة (المزمنة) من الالتهاب، على التوالي 17. كسيماترين يمكن تصور النشاط MPO العدلة في المرحلة الحادة من التهاب 18-20، في حين تلألؤ بيولوجي lucigenin يمكن استخدامها لتقييم نشاط البلاعم بالتعاون مع المرحلة في وقت متأخر أو الالتهابات المزمنة 17. في هذا المخطوط، استخدمنا نموذجين التهاب التجريبية (SC سلطة النقد الفلسطينية والشوري LPS) لإثبات هذه التقنيات التصوير.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of Reagent/Material</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO</td>
			<td>P8139</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipopolysaccharide from Salmonella enterica serotype enteritidis</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO</td>
			<td>L2012</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luminol (5-amino-2,3-dihydro-1,4-phthalazinedione, sodium salt)</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO</td>
			<td>A4685</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lucigenin (bis-N-methylacridinium nitrate)</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO</td>
			<td>M8010</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS Spectrum imaging system with Living Imaging 4.2 software package</td>
			<td>Caliper LS/Perkin Elmer, Hopkinton, MA</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo imaging method to distinguish acute and chronic inflammation

الالتهاب هو أحد الجوانب الأساسية لكثير من الأمراض التي تصيب الإنسان. في هذا التقرير الفيديو، ونحن لشرح تقنيات التصوير تلألؤ بيولوجي غير الغازية التي تميز الالتهاب الحاد والمزمن في نماذج الماوس. مع تلف الأنسجة أو غزو الممرض، العدلات هي خط الدفاع الأول، ولعب دورا رئيسيا في التوسط في الاستجابة الالتهابية الحادة. كما تقدم رد فعل للالتهابات، وحيدات تعميم تهاجر تدريجيا إلى موقع الإصابة وتفرق في الضامة ناضجة، الذي توسط الالتهابات المزمنة وتعزيز إصلاح الأنسجة عن طريق إزالة الحطام الأنسجة وإنتاج السيتوكينات المضادة للالتهابات. حقن داخل الصفاق من كسيماترين (5-الأمينية-2 ،3-ثنائي هيدرو-1 ،4-phthalazinedione، ملح الصوديوم) تمكن من الكشف عن التهاب حاد توسط إلى حد كبير من الأنسجة تسلل العدلات. كسيماترين يتفاعل على وجه التحديد مع الفائق المتولدة داخل phagosomes من العدلات منذ النتائج تلألؤ بيولوجي من الميلوبيروكسيديز (MPO) رد فعل بوساطة. Lucigenin (مكرر-N-methylacridinium نترات) يتفاعل أيضا مع الفائق من أجل توليد تلألؤ بيولوجي. ومع ذلك، lucigenin تلألؤ بيولوجي مستقل من الخطة الرئيسية للعمليات وأنها تعتمد فقط على أوكسيديز NADPH بلعمية (Phox) في الضامة أثناء الالتهابات المزمنة. معا، وكسيماترين وlucigenin سماح التصور غير الغازية وتقييم طولية من مجموعات سكانية مختلفة بلعمية عبر مراحل التهابات حادة ومزمنة. ونظرا للدور المهم من التهاب في مجموعة متنوعة من الأمراض التي تصيب الإنسان، ونحن نعتقد أن هذا الأسلوب التصوير غير الغازية يمكن أن تساعد في التحقيق في أدوار الفرق من العدلات والبلاعم في مجموعة متنوعة من الحالات المرضية.

أجرينا التصوير تلألؤ بيولوجي طولية لتقييم التهاب حاد ومزمن في النماذج التجريبية التهاب. Phorbol 12-13-ميريستات خلات (سلطة النقد الفلسطينية) هو بروتين كيناز C قوية (بي كي سي) ناهض الذي ينشط Phox لإنتاج أنيون الفائق ومشغلات الاستجابات الالتهابية الحادة الشديدة 21. تسبب SC ح...

Watch this Scientific Journal Video about In vivo Imaging Method to Distinguish Acute and Chronic Inflammation at JoVE.com

In vivo Imaging Method to Distinguish Acute and Chronic Inflammation

نحن تصف طريقة التصوير غير الغازية للتمييز مراحل التهابات. تسليم النظامية من كسيماترين يكشف مجالات التهاب حاد تعتمد على النشاط MPO في العدلات. في المقابل، حقن lucigenin يسمح التصور من التهاب مزمن تعتمد على النشاط Phox في الضامة.

في الجسم الحي أسلوب التصوير لتميز الالتهاب الحاد والمزمن

Inflammation is a fundamental aspect of many human diseases. In this video report, we demonstrate non-invasive bioluminescence imaging techniques that ...

in-vivo-imaging-method-to-distinguish-acute-and-chronic-inflammation

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

In vivo Imaging Method to Distinguish Acute and Chronic Inflammation

20.0K Views.  Harvard Medical School. نحن تصف طريقة التصوير غير الغازية للتمييز مراحل التهابات. تسليم النظامية من كسيماترين يكشف مجالات التهاب حاد تعتمد على النشاط MPO في العدلات. في المقابل، حقن lucigenin يسمح التصور من التهاب مزمن تعتمد على النشاط Phox في الضامة.

Video: In vivo Imaging Method to Distinguish Acute and Chronic Inflammation

Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo

Two-photon (2P) microscopy is a high resolution imaging technique that has been broadly adapted by biologists. The value of 2P microscopy is that it provides rich spatiotemporal information regarding cell behaviors within intact tissues and in live mice. Leukocyte recruitment plays a significant role in host defense against infection and when unchecked, can contribute to inflammatory and autoimmune diseases. Studying leukocyte recruitment in vivo is technically challenging since cells are moving rapidly within vessels located deep within light scattering tissues. To date, most intravital imaging studies require surgical preparation to expose the blood vessels and tissues. To avoid the tissue damage and inflammation induced by surgery itself, here, we describe a non-invasive single-cell imaging approach that can be used to study leukocyte trafficking in the mouse footpad and phalanges. We discuss the technical aspects of our 2P imaging preparation and walk the reader through a typical experiment from initial set up to execution and data collection.

Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo

Here, we describe a non-invasive two-photon (2P) microscopy approach to study leukocyte homing in the mouse footpad. We discuss the technical aspects of our tissue imaging preparation and walk the reader through a typical experiment from initial set up to execution and data collection.

غير الغازية تصوير الزاجل كريات بيضاء والهجرة في الجسم الحي</em

Two-photon (2P) microscopy is a high resolution imaging technique that has been broadly adapted by biologists.  The value of 2P microscopy is that it ...

Using Eggs from Schistosoma mansoni as an In vivo Model of Helminth-induced Lung Inflammation

Schistosoma parasites are blood flukes that infect an estimated 200 million people worldwide 1. In chronic infection with Schistosoma, the severe pathology, including liver fibrosis and splenomegaly, is caused by the immune response to the parasite eggs rather than the parasite itself 2. Parasite eggs induce a Th2 response characterized by the production of IL-4, IL-5 and IL-13, the alternative activation of macrophages and the recruitment of eosinophils. Here, we describe injection of Schistosoma mansoni eggs as a model to examine parasite-specific Th2 cytokine responses in the lung and draining lymph nodes, the formation of pulmonary granulomas surrounding the egg, and airway inflammation. 
Following intraperitoneal sensitization and intravenous challenge, S. mansoni eggs are transported to the lung via the pulmonary arteries where they are trapped within the lung parenchyma by granulomas composed of lymphocytes, eosinophils and alternatively activated macrophages 3-6. Associated with granuloma formation, inflammation in the broncho-alveolar spaces, expansion of the draining lymph nodes and CD4 T cell activation can be observed. Here we detail the protocol for isolating Schistosoma mansoni eggs from infected livers (modified from 7), sensitizing and challenging mice, and recovering the organs (broncho-alveolar lavage (BAL), lung and draining lymph nodes) for analysis. We also include representative histologic and immunologic data and suggestions for additional immunologic analysis. 
Overall, this method provides an in vivo model to investigate helminth-induced immunologic responses in the lung, which is broadly applicable to the study of Th2 inflammatory diseases including helminth infection, fibrotic diseases, allergic inflammation and asthma. Advantages of this model for the study of type 2 inflammation in the lung include the reproducibility of a potent Th2 inflammatory response in the lung and draining lymph nodes, the ease of assessment of inflammation by histologic examination of the granulomas surrounding the egg, and the potential for long-term storage of the parasite eggs.

Using Eggs from Schistosoma mansoni as an In vivo Model of Helminth-induced Lung Inflammation

Schistosoma mansoni eggs are potent stimulators of the T helper type 2 (Th2) immune response, characteristic of parasite infection, asthma and allergic inflammation. This protocol utilizes S. mansoni egg injection to generate a CD4 Th2 cytokine-induced inflammatory response in the lung, characterized by lung granuloma formation around the egg, eosinophilia and macrophage alternative activation.

باستخدام بويضات من<em&gt; البلهارسيا المنسونية</em&gt; ك<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; نموذج من التهاب الرئة الناجم عن الديدان الطفيلية

Schistosoma parasites are blood flukes that infect an estimated 200 million people worldwide 1. In chronic infection with Schistosoma, the severe ...

Bioluminescent Bacterial Imaging In Vivo

This video describes the use of whole body bioluminesce imaging (BLI) for the study of bacterial trafficking in live mice, with an emphasis on the use of bacteria in gene and cell therapy for cancer. Bacteria present an attractive class of vector for cancer therapy, possessing a natural ability to grow preferentially within tumors following systemic administration. Bacteria engineered to express the lux gene cassette permit BLI detection of the bacteria and concurrently tumor sites. The location and levels of bacteria within tumors over time can be readily examined, visualized in two or three dimensions. The method is applicable to a wide range of bacterial species and tumor xenograft types. This article describes the protocol for analysis of bioluminescent bacteria within subcutaneous tumor bearing mice. Visualization of commensal bacteria in the Gastrointestinal tract (GIT) by BLI is also described. This powerful, and cheap, real-time imaging strategy represents an ideal method for the study of bacteria in vivo in the context of cancer research, in particular gene therapy, and infectious disease. This video outlines the procedure for studying lux-tagged E. coli in live mice, demonstrating the spatial and temporal readout achievable utilizing BLI with the IVIS system.

Bioluminescent Bacterial Imaging In Vivo

This article describes the administration of lux-tagged bacteria to mice and subsequent in vivo analysis using IVIS bioluminescence imaging.

البكتيرية التصوير Bioluminescent<em&gt; في الجسم الحي</em

This video describes the use of whole body bioluminesce imaging (BLI) for the study of bacterial trafficking in live mice, with an emphasis on the use of ...

A Mouse Model for Pathogen-induced Chronic Inflammation at Local and Systemic Sites

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including neoplastic, autoimmune, and chronic inflammatory diseases. Emerging evidence implicates pathogen-induced chronic inflammation in the development and progression of chronic diseases with a wide variety of clinical manifestations. Due to the complex and multifactorial etiology of chronic disease, designing experiments for proof of causality and the establishment of mechanistic links is nearly impossible in humans. An advantage of using animal models is that both genetic and environmental factors that may influence the course of a particular disease can be controlled. Thus, designing relevant animal models of infection represents a key step in identifying host and pathogen specific mechanisms that contribute to chronic inflammation.
Here we describe a mouse model of pathogen-induced chronic inflammation at local and systemic sites following infection with the oral pathogen Porphyromonas gingivalis, a bacterium closely associated with human periodontal disease. Oral infection of specific-pathogen free mice induces a local inflammatory response resulting in destruction of tooth supporting alveolar bone, a hallmark of periodontal disease. In an established mouse model of atherosclerosis, infection with P. gingivalis accelerates inflammatory plaque deposition within the aortic sinus and innominate artery, accompanied by activation of the vascular endothelium, an increased immune cell infiltrate, and elevated expression of inflammatory mediators within lesions. We detail methodologies for the assessment of inflammation at local and systemic sites. The use of transgenic mice and defined bacterial mutants makes this model particularly suitable for identifying both host and microbial factors involved in the initiation, progression, and outcome of disease. Additionally, the model can be used to screen for novel therapeutic strategies, including vaccination and pharmacological intervention.

Animal models have proven to be invaluable tools in defining host and pathogen specific mechanisms that contribute to the development of chronic inflammation. Here we describe a mouse model of oral infection with the human pathogen Porphyromonas gingivalis and detail methodologies to assess the progression of inflammation at local and systemic sites.

نموذج الفأر لالتهاب الناجم عن مسببات الأمراض المزمنة في مواقع المحلية والجهازية

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including ...

An Optimized Method for Isolating and Expanding Invariant Natural Killer T Cells from Mouse Spleen

The ability to rapidly secrete cytokines upon stimulation is a functional characteristic of the invariant natural killer T (iNKT) cell lineage. iNKT cells are therefore characterized as an innate T cell population capable of activating and steering adaptive immune responses. The development of improved techniques for the culture and expansion of murine iNKT cells facilitates the study of iNKT cell biology in in vitro and in vivo model systems. Here we describe an optimized procedure for the isolation and expansion of murine splenic iNKT cells.
Spleens from C57Bl/6 mice are removed, dissected and strained and the resulting cellular suspension is layered over density gradient media. Following centrifugation, splenic mononuclear cells (MNCs) are collected and CD5-positive (CD5+) lymphocytes are enriched for using magnetic beads. iNKT cells within the CD5+ fraction are subsequently stained with &#945;GalCer-loaded CD1d tetramer and purified by fluorescence activated cell sorting (FACS). FACS sorted iNKT cells are then initially cultured in vitro using a combination of recombinant murine cytokines and plate-bound T cell receptor (TCR) stimuli before being expanded in the presence of murine recombinant IL-7. Using this technique, approximately 108 iNKT cells can be generated within 18-20 days of culture, after which they can be used for functional assays in vitro, or for in vivo transfer experiments in mice.

Here we present an adapted protocol that can be used to generate a large number of murine invariant natural killer T cells from mouse spleen. The protocol outlines an approach by which splenic iNKT cells can be enriched for, isolated and expanded in vitro using a limited number of animals and reagents.

والطريقة الأمثل لعزل وتوسيع قسما ثابتا الطبيعية الخلايا التائية القاتلة من الماوس الطحال

The ability to rapidly secrete cytokines upon stimulation is a functional characteristic of the invariant natural killer T (iNKT) cell lineage. iNKT cells ...

A Non-invasive and Technically Non-intensive Method for Induction and Phenotyping of Experimental Bacterial Pneumonia in Mice

Although community-acquired pneumonia remains a major public health problem, murine models of bacterial pneumonia have recently facilitated significant preclinical advances in our understanding of the underlying cellular and molecular pathogenesis. In vivo mouse models capture the integrated physiology and resilience of the host defense response in a manner not revealed by alternative, simplified ex vivo approaches. Several methods have been described in the literature for intrapulmonary inoculation of bacteria in mice, including aerosolization, intranasal delivery, peroral endotracheal cannulation under &#39;blind&#39; and visualized conditions, and transcutaneous endotracheal cannulation. All methods have relative merits and limitations. Herein, we describe in detail a non-invasive, technically non-intensive, inexpensive, and rapid method for intratracheal delivery of bacteria that involves aspiration (i.e., inhalation) by the mouse of an infectious inoculum pipetted into the oropharynx while under general anesthesia. This method can be used for pulmonary delivery of a wide variety of non-caustic biological and chemical agents, and is relatively easy to learn, even for laboratories with minimal prior experience with pulmonary procedures. In addition to describing the aspiration pneumonia method, we also provide step-by-step procedures for assaying the subsequent in vivo pulmonary innate immune response of the mouse, in particular, methods for quantifying bacterial clearance and the cellular immune response of the infected airway. This integrated and simple approach to pneumonia assessment allows for rapid and robust evaluation of the effect of genetic and environmental manipulations upon pulmonary innate immunity.

Several methods have been described in the literature for modeling bacterial pneumonia in mice. Herein, we describe a non-invasive, inexpensive, rapid method for inducing pneumonia via aspiration (i.e., inhalation) of a bacterial inoculum pipetted into the oropharynx. Downstream methods for assessment of the pulmonary innate immune response are also detailed.

والطريقة غير الغازية ومن الناحية الفنية غير كثيفة للتحريض وPhenotyping التجريبية البكتيرية والالتهاب الرئوي في الفئران

Although community-acquired pneumonia remains a major public health problem, murine models of bacterial pneumonia have recently facilitated significant ...

Non-invasive In Vivo Fluorescence Optical Imaging of Inflammatory MMP Activity Using an Activatable Fluorescent Imaging Agent

This paper describes a non-invasive method for imaging matrix metalloproteinases (MMP)-activity by an activatable fluorescent probe, via in vivo fluorescence optical imaging (OI), in two different mouse models of inflammation: a rheumatoid arthritis (RA) and a contact hypersensitivity reaction (CHR) model. Light with a wavelength in the near infrared (NIR) window (650 - 950 nm) allows a deeper tissue penetration and minimal signal absorption compared to wavelengths below 650 nm. The major advantages using fluorescence OI is that it is cheap, fast and easy to implement in different animal models.
Activatable fluorescent probes are optically silent in their inactivated states, but become highly fluorescent when activated by a protease. Activated MMPs lead to tissue destruction and play an important role for disease progression in delayed-type hypersensitivity reactions (DTHRs) such as RA and CHR. Furthermore, MMPs are the key proteases for cartilage and bone degradation and are induced by macrophages, fibroblasts and chondrocytes in response to pro-inflammatory cytokines. Here we use a probe that is activated by the key MMPs like MMP-2, -3, -9 and -13 and describe an imaging protocol for near infrared fluorescence OI of MMP activity in RA and control mice 6 days after disease induction as well as in mice with acute (1x challenge) and chronic (5x challenge) CHR on the right ear compared to healthy ears.

Non-invasive In Vivo Fluorescence Optical Imaging of Inflammatory MMP Activity Using an Activatable Fluorescent Imaging Agent

This paper explains the application of fluorescent imaging using an activatable optical imaging probe to visualize the in vivo activity of key matrix metalloproteinases in two different experimental models of inflammation.

غير الغازية<em&gt; في فيفو</em&gt; الإسفار التصوير البصري من مب النشاط التهابات باستخدام عامل التصوير الفلورسنت أكتيفاتابل

This paper describes a non-invasive method for imaging matrix metalloproteinases (MMP)-activity by an activatable fluorescent probe, via in vivo ...

Murine Lymphocyte Labeling by 64Cu-Antibody Receptor Targeting for In Vivo Cell Trafficking by PET/CT

This protocol illustrates the production of 64Cu and the chelator conjugation/radiolabeling of a monoclonal antibody (mAb) followed by murine lymphocyte cell culture and 64Cu-antibody receptor targeting of the cells. In vitro evaluation of the radiolabel and non-invasive in vivo cell tracking in an animal model of an airway delayed-type hypersensitivity reaction (DTHR) by PET/CT are described.
In detail, the conjugation of a mAb with the chelator 1,4,7,10-tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetraacetic acid (DOTA) is shown. Following the production of radioactive 64Cu, radiolabeling of the DOTA-conjugated mAb is described. Next, the expansion of chicken ovalbumin (cOVA)-specific CD4+ interferon (IFN)-&#947;-producing T helper cells (cOVA-TH1) and the subsequent radiolabeling of the cOVA-TH1 cells are depicted. Various in vitro techniques are presented to evaluate the effects of 64Cu-radiolabeling on the cells, such as the determination of cell viability by trypan blue exclusion, the staining for apoptosis with Annexin V for flow cytometry, and the assessment of functionality by IFN-&#947; enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Furthermore, the determination of the radioactive uptake into the cells and the labeling stability are described in detail. This protocol further describes how to perform cell tracking studies in an animal model for an airway DTHR and, therefore, the induction of cOVA-induced acute airway DHTR in BALB/c mice is included. Finally, a robust PET/CT workflow including image acquisition, reconstruction, and analysis is presented.
The 64Cu-antibody receptor targeting approach with subsequent receptor internalization provides high specificity and stability, reduced cellular toxicity, and low efflux rates compared to common PET-tracers for cell labeling, e.g.64Cu-pyruvaldehyde bis(N4-methylthiosemicarbazone) (64Cu-PTSM). Finally, our approach enables non-invasive in vivo cell tracking by PET/CT with an optimal signal-to-background ratio for 48 h. This experimental approach can be transferred to different animal models and cell types with membrane-bound receptors that are internalized.

Murine Lymphocyte Labeling by 64Cu-Antibody Receptor Targeting for In Vivo  Cell Trafficking by PET/CT

Following the preparation of a 64Cu-modified monoclonal antibody binding to a transgenic murine T cell receptor, T cells are radiolabeled in vivo, analyzed for viability, functionality, labeling stability and apoptosis, and adoptively transferred into mice with an airway delayed-type hypersensitivity reaction for non-invasive imaging by positron emission tomography/computed tomography (PET/CT).

الفئران اللمفاويات وسمها من قبل<sup&gt; 64</sup&gt; النحاس والأجسام المضادة مستقبلات استهداف ل<em&gt; في فيفو</em&gt; الاتجار خلية بواسطة PET / ط م

This protocol illustrates the production of 64Cu and the chelator conjugation/radiolabeling of a monoclonal antibody (mAb) followed by murine lymphocyte ...

An Efficient and Simple Method to Establish NK and T Cell Lines from Patients with Chronic Active Epstein-Barr Virus Infection

A number of methods have been described to establish NK/T cell lines from patients with lymphoma or lymphoproliferative syndrome. These methods employed feeder cells, purified NK or T cells with as much as 10 mL of blood, or a high-dose of IL-2. This study presents a new method with a powerful and simple strategy to establish NK and T cell lines by culturing the peripheral blood mononuclear cells (PBMC) with the addition of recombinant human IL-2 (rhIL-2), and uses as little as 2 mL of whole blood. The cells can proliferate quickly in two weeks and be maintained for more than 3 months. With this method, 7 NK or T cell lines have been established with a high success rate. This method is simple, reliable, and applicable to establishing cell lines from more cases of CAEBV or NK/T cell lymphoma.

A simple method for obtaining NK and T cell clones from CAEBV patients was developed with high efficiency, a small amount of peripheral blood, and a low-dose of IL-2.

طريقة فعالة وبسيطة وضع ناغورني كاراباخ وخطوط الخلايا T من المرضى المصابين بالعدوى المزمنة النشطة فيروس ابشتاين-بار

A number of methods have been described to establish NK/T cell lines from patients with lymphoma or lymphoproliferative syndrome. These methods employed ...

Long-term In Vivo Tracking of Inflammatory Cell Dynamics Within Drosophila Pupae

During the rapid inflammatory response to tissue damage, cells of the innate immune system are quickly recruited to the injury site. Once at the wound, innate immune cells perform a number of essential functions, such as fighting infection, clearing necrotic debris, and stimulating matrix deposition. In order to fully understand the diverse signaling events that regulate this immune response, it is crucial to observe the complex behaviors of (and interactions that occur between) multiple cell lineages in vivo, and in real-time, with the high spatio-temporal resolution. The optical translucency and the genetic tractability of Drosophila embryos have established Drosophila as an invaluable model to live-image and dissect fundamental aspects of inflammatory cell behavior, including mechanisms of developmental dispersal, clearance of apoptotic corpses&#160;and/or microbial pathogens, and recruitment to wounds. However, more recent work has now demonstrated that employing a much later stage in the Drosophila lifecycle &#8211; the Drosophila pupa &#8211; offers a number of distinct advantages, including improved RNAi efficiency, longer imaging periods, and significantly greater immune cell numbers. Here we describe a protocol for imaging wound repair and the associated inflammatory response at the high spatio-temporal resolution in live Drosophila pupae. To follow the dynamics of both re-epithelialization and inflammation, we use a number of specific in vivo fluorescent markers for both the epithelium and innate immune cells. We also demonstrate the effectiveness of photo-convertible fluorophores, such as Kaede, for following the specific immune cell subsets, to track their behavior as they migrate to, and resolve from, the injury site.

Long-term In Vivo Tracking of Inflammatory Cell Dynamics Within Drosophila Pupae

Here we present a protocol for live-imaging wound repair and the associated inflammatory response at high spatio-temporal resolution in vivo. This method utilizes the pupal stage of Drosophila development to enable long-term imaging and tracking of specific cell populations over time and is compatible with efficient RNAi-mediated gene inactivation.

طويلة الأمد في فيفو تتبع ديناميات الخلايا التحريضية داخل الخوادر المورفولوجية

During the rapid inflammatory response to tissue damage, cells of the innate immune system are quickly recruited to the injury site. Once at the wound, ...