עבודה זו נתמכה על ידי ננסי וריא מרקס הקרן. אנו מודים לד&quot;ר ננסי א &#39;קוהל לקריאה ביקורתית של כתב היד. אנו מודים Kin ק וונג לסיועו בהכנת דו&quot;ח בסרטון זה.

הערה: כל המחקרים בבעלי החיים בוצעו תחת פרוטוקולים שאושרו מוסדיים והנחיות טיפול בבעלי חיים. 1. ריאגנטים ופתרונות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתרון לPMA SC חיסון: הכן פתרון מניות של phorbol 12-13-Myristate אצטט (PMA) בשעה 5 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​ב DMSO. אחסן את פתרון המניות ב -20 ° C. לפני החיסון, להפשיר את פתרון המניות ולדלל את 1 מ&quot;ג / מיליליטר PMA ב-PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתרון לLPS SC חיסון: lipopolysaccharide ממיסים (LPS מסלמונלה enterica סרוטיפ enteritidis) בPBS סטרילי במ&quot;ג / מ&quot;ל 1 לפני SC החיסון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתרון לומינול הדמיה שלב אקוטי: להמס לומינול (,4-phthalazinedione, מלח נתרן של 5 אמינו-2 ,3-dihydro-1) במלח רגיל סטרילית (0.9% NaCl) בשעה 10 מ&quot;ג / מ&quot;ל. ניתן לאחסן ב -20 ° C הפתרון לפני השימוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתרון Lucigenin הדמיה שלב כרוני: ממיסים lucigenin (חנקת BIS-N-methylacridinium) במלח רגיל סטריליב2.5 מ&quot;ג / מ&quot;ל. ניתן לאחסן ב -20 ° C הפתרון לפני השימוש. </li></ol> 2. דגם PMA דלקת תת עורית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדימי עכברים בעירום NCR בחדר אינדוקציה עם 1-2% isoflurane. לאשר הרדמה כללית על ידי אובדן של תנועה וקצב נשימה קבועה. העבר את בעל חיים לחרטום מסופק עם גז isoflurane-מעורב ולשמור על בעלי החיים תחת הרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש באלכוהול רפואי לנגב לנקות ולחטא את אזור ההזרקה בכנף השמאל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות טכניקה סטרילית, להזריק 50 μl של פתרון חיסון PMA (המכיל 50 מיקרוגרם של PMA) לתוך החלל תת עורי בכנף השמאל. הסר את הנוזלים עודפים מאתר ההזרקה באמצעות כרית אלכוהול איזופרופיל. הימנע מהשימוש בשיכוך כאבים כפי שהוא עשוי להשפיע על תגובות דלקתיות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזז את בעלי החיים בחזרה לכלוב הדיור ולעקוב אחר התאוששותה מהרדמה בשיתוף פעולה הדוק. על מנת לסייע בהתאוששות, השתמש בכרית חימום כדי לשמור על בעלי החיים חמים.</li></ol> 3. דגם דלקת תת עורית LPS <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדימי עכברי C57BL/6J עם 1-2% isoflurane בתא אינדוקציה. לאחר הקמת הרדמה כללית, להעביר את בעל חיים לחרטום מסופק עם גז isoflurane ולשמור על בעלי החיים תחת הרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש באלכוהול רפואי לנגב כדי לנקות את אזור ההזרקה בשודד שמאל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות טכניקה סטרילית, להזריק 50 μl של פתרון LPS החיסון (המכיל 50 מיקרוגרם של LPS) לשודד שמאל. הסר את הנוזלים עודפים מאתר ההזרקה באמצעות כרית אלכוהול איזופרופיל. הימנע מהשימוש בשיכוך כאבים כפי שהוא עשוי להשפיע על תגובות דלקתיות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזז את בעלי החיים בחזרה לכלוב הדיור ולעקוב אחר התאוששותה מהרדמה בשיתוף פעולה הדוק. השתמש בכרית חימום כדי לשמור על חם בעלי החיים במהלך התאוששות. </li></ol> 4. הדמיה פליטת אור של דלקת <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את החיה בחדר אינדוקציה עם 1-2% גז isoflurane-מעורב. שיתוףnfirm הרדמה כללית על ידי אובדן של תנועה וקצב נשימה קבועה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעוד בעלי החיים עדיין בהרדמה, intraperitoneally (IP) להזריק את פתרון lucigenin (2.5 מ&quot;ג / מ&quot;ל) פתרון לומינול (10 מ&quot;ג / מ&quot;ל), או הדמיה דלקת אקוטית או כרונית, בהתאמה. המינון הסופי הוא 100 מ&quot;ג / ק&quot;ג ללומינול ו25 מ&quot;ג / ק&quot;ג לlucigenin. מינון נמוך יותר של lucigenin (10-15 מ&quot;ג / ק&quot;ג) יכול לשמש כדי למנוע רעילות אפשרית עבור כמה זני עכבר. סימני הרעילות כוללים קוצר נשימה ומצוקה נשימתית. יש המתח נמוכה C57BL/6J lucigenin סבילות מזן עירום NCR. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעבירים את החיה לחדר ההדמיה של מערכת הדמיה פליטת אור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע הדמיה פליטת אור רציפה במרווחים של 1 דקות. כל צעד הדמיה מורכב של זמן רכישת דקות 1, f / להפסיק = 1, binning = 16 ועיכוב שניות 0. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בתוך פנל רכישת התמונה, כדי לאפשר הדמיה רבת שלבים רציפים, לחץ על רצף הגדרת button. לספק צעדי הדמיה מספיקים בפרופיל הרכישה כדי לקבוע פלט הארה מקסימאלי (בדרך כלל 15 צעדים של דקה אחת יספיקו). סעיף 15 דקות ההדמיה מאפשר מספיק זמן לספיגת מצע ומחזור דם מערכתי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את החיה מחדר ההדמיה ולהעביר אותו בחזרה לכלוב הדיור. על מנת לסייע בהתאוששות, השתמש בכרית חימום כדי לשמור על בעלי החיים חמים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך ניתוח שלאחר הרכישה, להשתמש בחבילת תוכנת ההדמיה כדי לחשב אות bioluminescent כוללת שיא דרך אזורים סטנדרטיים של עניין (ROI). התמונות הן הווה כמו זוהר בפוטונים / שנייה / 2 ס&quot;מ / SR עם סף מינימאלי ומקסימאלי שצוין. נתונים כמותיים מוצגים כשטף הכולל בפוטונים לשניים לכל החזר על השקעה. </li></ol>

<ol>
	<li>Premack, B. A., Schall, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemokine+receptors:+gateways+to+inflammation+and+infection.">Chemokine receptors: gateways to inflammation and infection.</a> Nat. Med. 2, 1174-1178 (1996).</li><li>Singer, A. J., Clark, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cutaneous+wound+healing.">Cutaneous wound healing.</a> N. Engl. J. Med. 341, 738-746 (1999).</li><li>Wellen, K. E., Hotamisligil, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation,+stress,+and+diabetes.">Inflammation, stress, and diabetes.</a> J. Clin. Invest. 115, 1111-1119 (2005).</li><li>Weitzman, S. A., Gordon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+and+cancer:+role+of+phagocyte-generated+oxidants+in+carcinogenesis.">Inflammation and cancer: role of phagocyte-generated oxidants in carcinogenesis.</a> Blood. 76, 655-663 (1990).</li><li>Ridker, P. M., Cushman, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation,+aspirin,+and+the+risk+of+cardiovascular+disease+in+apparently+healthy+men.">Inflammation, aspirin, and the risk of cardiovascular disease in apparently healthy men.</a> N. Engl. J. Med. 336, 973-979 (1997).</li><li>Wyss-Coray, T., Mucke, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+in+neurodegenerative+disease--a+double-edged+sword.">Inflammation in neurodegenerative disease--a double-edged sword.</a> Neuron. 35, 419-432 (2002).</li><li>Hamilton, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colony-stimulating+factors+in+inflammation+and+autoimmunity.">Colony-stimulating factors in inflammation and autoimmunity.</a> Nat. Rev. Immunol. 8, 533-544 (2008).</li><li>Harlan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte-endothelial+interactions.">Leukocyte-endothelial interactions.</a> Blood. 65, 513-525 (1985).</li><li>Bedard, K., Krause, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+NOX+family+of+ROS-generating+NADPH+oxidases:+physiology+and+pathophysiology.">The NOX family of ROS-generating NADPH oxidases: physiology and pathophysiology.</a> Physiol. Rev. 87, 245-313 (2007).</li><li>Rest, R. F., Spitznagel, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subcellular+distribution+of+superoxide+dismutases+in+human+neutrophils.+Influence+of+myeloperoxidase+on+the+measurement+of+superoxide+dismutase+activity.">Subcellular distribution of superoxide dismutases in human neutrophils. Influence of myeloperoxidase on the measurement of superoxide dismutase activity.</a> Biochem. J. 166, 145-153 (1977).</li><li>Hampton, M. B., Kettle, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inside+the+neutrophil+phagosome:+oxidants,+myeloperoxidase,+and+bacterial+killing.">Inside the neutrophil phagosome: oxidants, myeloperoxidase, and bacterial killing.</a> Blood. 92, 3007-3017 (1998).</li><li>Serhan, C. N., Savill, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resolution+of+inflammation:+the+beginning+programs+the+end.">Resolution of inflammation: the beginning programs the end.</a> Nat. Immunol. 6, 1191-1197 (2005).</li><li>Jiang, F., Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NADPH+oxidase-mediated+redox+signaling:+roles+in+cellular+stress+response,+stress+tolerance,+and+tissue+repair.">NADPH oxidase-mediated redox signaling: roles in cellular stress response, stress tolerance, and tissue repair.</a> Pharmacol. Rev. 63, 218-242 (2011).</li><li>Calafat, J., Kuijpers, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+small+intracellular+vesicles+in+human+blood+phagocytes+containing+cytochrome+b558+and+the+adhesion+molecule+CD11b/CD18.">Evidence for small intracellular vesicles in human blood phagocytes containing cytochrome b558 and the adhesion molecule CD11b/CD18.</a> Blood. 81, 3122-3129 (1993).</li><li>Johansson, A., Jesaitis, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+subcellular+localization+of+cytochrome+b+and+the+dormant+NADPH-oxidase+in+neutrophils+and+macrophages:+effect+on+the+production+of+reactive+oxygen+species+during+phagocytosis.">Different subcellular localization of cytochrome b and the dormant NADPH-oxidase in neutrophils and macrophages: effect on the production of reactive oxygen species during phagocytosis.</a> Cell. Immunol. 161, 61-71 (1995).</li><li>Kumar, A. P., Piedrafita, F. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peroxisome+proliferator-activated+receptor+gamma+ligands+regulate+myeloperoxidase+expression+in+macrophages+by+an+estrogen-dependent+mechanism+involving+the+-463GA+promoter+polymorphism.">Peroxisome proliferator-activated receptor gamma ligands regulate myeloperoxidase expression in macrophages by an estrogen-dependent mechanism involving the -463GA promoter polymorphism.</a> J. Biol. Chem. 279, 8300-8315 (2004).</li><li>Tseng, J. C., Kung, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+inflammatory+phagocytes.">In vivo imaging of inflammatory phagocytes.</a> Chem Biol. 19, 1199-1209 (2012).</li><li>Gross, S., Gammon, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioluminescence+imaging+of+myeloperoxidase+activity+in+vivo.">Bioluminescence imaging of myeloperoxidase activity in vivo.</a> Nat. Med. 15, 455-461 (2009).</li><li>Kielland, A., Blom, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+reactive+oxygen+and+nitrogen+species+in+inflammation+using+the+luminescent+probe+L-012.">In vivo imaging of reactive oxygen and nitrogen species in inflammation using the luminescent probe L-012.</a> Free Radic. Biol. Med. 47, 760-766 (2009).</li><li>Zhou, J., Tsai, Y. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+assessment+of+localized+inflammatory+responses.">Noninvasive assessment of localized inflammatory responses.</a> Free Radic. Biol. Med. 52, 218-226 (2012).</li><li>Karlsson, A., Nixon, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phorbol+myristate+acetate+induces+neutrophil+NADPH-oxidase+activity+by+two+separate+signal+transduction+pathways:+dependent+or+independent+of+phosphatidylinositol+3-kinase.">Phorbol myristate acetate induces neutrophil NADPH-oxidase activity by two separate signal transduction pathways: dependent or independent of phosphatidylinositol 3-kinase.</a> J. Leukoc. Biol. 67, 396-404 (2000).</li><li>Taylor, R. G., McCall, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histopathologic+features+of+phorbol+myristate+acetate-induced+lung+injury.">Histopathologic features of phorbol myristate acetate-induced lung injury.</a> Lab Invest. 52, 61-70 (1985).</li><li>Fukaya, S., Matsui, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overexpression+of+TNF-alpha-converting+enzyme+in+fibroblasts+augments+dermal+fibrosis+after+inflammation.">Overexpression of TNF-alpha-converting enzyme in fibroblasts augments dermal fibrosis after inflammation.</a> Lab Invest. 93, 72-80 (2013).</li><li>Lu, Y. C., Yeh, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LPS/TLR4+signal+transduction+pathway.">LPS/TLR4 signal transduction pathway.</a> Cytokine. 42, 145-151 (2008).</li><li>Aitken, R. J., Buckingham, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactive+oxygen+species+and+human+spermatozoa:+analysis+of+the+cellular+mechanisms+involved+in+luminol-+and+lucigenin-dependent+chemiluminescence.">Reactive oxygen species and human spermatozoa: analysis of the cellular mechanisms involved in luminol- and lucigenin-dependent chemiluminescence.</a> J. Cell. Physiol. 151, 466-477 (1992).</li><li>Allen, R. C., Loose, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phagocytic+activation+of+a+luminol-dependent+chemiluminescence+in+rabbit+alveolar+and+peritoneal+macrophages.">Phagocytic activation of a luminol-dependent chemiluminescence in rabbit alveolar and peritoneal macrophages.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 69, 245-252 (1976).</li><li>Caldefie-Chezet, F., Walrand, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+the+neutrophil+reactive+oxygen+species+production+measured+by+luminol+and+lucigenin+chemiluminescence+intra+or+extracellular?+Comparison+with+DCFH-DA+flow+cytometry+and+cytochrome+c+reduction.">Is the neutrophil reactive oxygen species production measured by luminol and lucigenin chemiluminescence intra or extracellular? Comparison with DCFH-DA flow cytometry and cytochrome c reduction.</a> Clin. Chim. Acta. 319, 9-17 (2002).</li><li>Dahlgren, C., Aniansson, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pattern+of+formylmethionyl-leucyl-phenylalanine-induced+luminol-+and+lucigenin-dependent+chemiluminescence+in+human+neutrophils.">Pattern of formylmethionyl-leucyl-phenylalanine-induced luminol- and lucigenin-dependent chemiluminescence in human neutrophils.</a> Infect. Immun. 47, 326-328 (1985).</li><li>Dahlgren, C., Karlsson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Respiratory+burst+in+human+neutrophils.">Respiratory burst in human neutrophils.</a> J. Immunol. Methods. 232, 3-14 (1999).</li><li>Aerts, C., Wallaert, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Release+of+superoxide+anion+by+alveolar+macrophages+in+pulmonary+sarcoidosis.">Release of superoxide anion by alveolar macrophages in pulmonary sarcoidosis.</a> Ann. N.Y. Acad. Sci. 465, 193-200 (1986).</li><li>Zhang, N., Francis, K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+detection+of+myeloperoxidase+activity+in+deep+tissues+through+luminescent+excitation+of+near-infrared+nanoparticles.">Enhanced detection of myeloperoxidase activity in deep tissues through luminescent excitation of near-infrared nanoparticles.</a> Nat Med. , (2013).</li></ol>

המחברים מצהירים שאין ניגוד העניינים במחקר זה.

בדו&quot;ח זה, אנו מדגימים שיטת פליטת אור הדמיה לא פולשנית של דלקת ביצורי חיים. ניצול של שני מצעים זורח, לומינול וlucigenin, השיטה יכולה להבדיל בין שלבים שונים של דלקת. פליטת אור לומינול קשורה נויטרופילים בשלב החריף של דלקת, ואילו פליטת אור lucigenin מתווכת על ידי מקרופאגים בשלב ה...

דלקת היא תגובה ביולוגית מוסדרת מאוד מעורבת במגוון רחב של מחלות בבני אדם, ובכלל זה זיהום מיקרוביאלי 1, ריפוי פצעים 2, 3 סוכרת, סרטן 4, 5 לב וכלי דם, ניוון עצב 6, ומחלות אוטואימוניות 7. דלקת רקמות דורשת תיאום נכון של תאי מערכת חיסון שונים על מנת להשיג אישור הפתוגן, תיקון רקמות, ורזולוציה מחלה. נויטרופילים ומקרופאגים הם מתווכים חיסוניים מרכזיים של דלקת ברקמה. בשלב החריף של דלקת, הנויטרופילים הם מגישי העזרה הראשונות לגירויים מזיקים שונים ונזק לרקמות 8. את הנויטרופילים extravasate במהירות ממחזור לאתר של פציעה, שבו התאים להשבית פולשים חיידקים על ידי שחרור גרגרים ופאגוציטוזיס אנטי מיקרוביאליים. במהלך phagocytosis, נויטרופילים לבלוע את חיידקים פולשים לphagosomes, שבמהלכה התאים לייצר רמות גבוהות של superoxIDE (O 2 · -). סופראוקסיד Phagosomal הוא המקור העיקרי של מיני חמצן תגובתי רבים במורד הזרם (ROS). לדוגמה, ניתן סופראוקסיד dismutated למי חמצן (H 2 O 2) על ידי dismutation הספונטני או על ידי סופראוקסיד דיסמוטאז (SOD) 9, 10. בנויטרופילים, myeloperoxidase (MPO) עוד יותר ממיר מי חמצן לחומצת hypochlorous אנטי מיקרוביאליים (HOCl) 11. ככל שתגובות דלקתיות להמשיך, מונוציטים במחזור להעביר בהדרגה לאתר של פציעה ולהתמיין למקרופאגים בוגרים 2, שphagocytic פונקציה לסייע להסיר פתוגנים מומתים ותא פסולת. בנוסף לכך, כרגולטור מרכזי בשלב מאוחר יותר של דלקת, מקרופאג מקדם תיקון רקמות על ידי ייצור ציטוקינים נוגד דלקת 12 ועל ידי יצירת ROS תאי ברמה נמוכה 9. ROS שנוצר בשלב מאוחר יותר לווסת את שיפוץ רקמות, היווצרות כלי חדשה, וreepithelialization 13. מונואמין NADPH תא בלען (phox) הוא המקור העיקרי לייצור סופראוקסיד בשני נויטרופילים ומקרופאגים 9. Phox הנו קומפלקס רב למקטע הייצור שמוסדר בחוזקה 9. Holoenzyme מכיל כמה יחידות משנה רגולטוריים cytosolic (P67 phox, p47 phox, P40 phox, וRAC) וheterodimer קרום הנכנס ציטוכרום b 558 (מורכב מהמקטע CYBA וCYBB). ציטוכרום ב 558 היא תגובת הליבה שבתוכו מקטע CYBB (הידוע גם בP91 phox וNOX2) מבצע תגובת שרשרת חיזור העיקרית 9. מעניין לציין, כי אתרי הייצור שלה הם שונים בין נויטרופילים ומקרופאגים. בנויטרופילים מנוחה, ציטוכרום ב 558 הוא בעיקר בהווה בקרום של גרגרי אחסון תאיים 14. במהלך phagocytosis, נויטרופילים להרכיב את שעותoloenzymes ב9 phagosomes, שבו רמות גבוהות של פעילות MPO גם בהווה. נויטרופילים phox מהירות צורך חמצן ומפעיל כוח microbicidal על ידי ייצור ROS, תופעה שמכונה הנשימה פרץ 11. בניגוד לכך, יש לי מקרופאגים רמה נמוכה יותר של ביטוי MPO וציטוכרום ב 558 נמצא בעיקר בקרום הפלזמה 15, 16. לפיכך נויטרופילים לייצר רמות גבוהות של סופראוקסיד לפעילות אנטי מיקרוביאלית, בעוד מקרופאגים לייצר פחות סופראוקסיד עבור פונקציות רגולטוריות 15. מאז דלקת היא תהליך מורכב בvivo, שיטות הדמיה בלתי פולשניות ספציפיות לשלבים שונים של דלקת תאפשר הערכה כמותית ואורך של מודלים מחלה. באמצעות מחקרים מכניסטית, יש לנו הוכיחו את השימוש של שני סוכני chemiluminescent, לומינול (5-אמינו-2 ,3-dihydro-1 ,4-phthalazinedione) וlucigenin (חנקת BIS-N-methylacridinium) בעבר, עבור הדמיה בלתי פולשנית של (כרוני) שלבים חריפים והמאוחרים של דלקת, בהתאמה 17. לומינול מאפשר הדמיה של פעילות MPO נויטרופילים בשלב האקוטי של דלקת 18-20, בעוד שניתן להשתמש בו כדי להעריך את פליטת אור lucigenin פעילות מקרופאג בשיתוף עם השלב המאוחר או דלקת כרונית 17. בכתב היד הזה, השתמשנו בשני מודלים דלקת ניסיוניים (SC PMA וSC LPS) כדי להדגים שיטות הדמיה אלה.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of Reagent/Material</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO</td>
			<td>P8139</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipopolysaccharide from Salmonella enterica serotype enteritidis</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO</td>
			<td>L2012</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luminol (5-amino-2,3-dihydro-1,4-phthalazinedione, sodium salt)</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO</td>
			<td>A4685</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lucigenin (bis-N-methylacridinium nitrate)</td>
			<td>Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO</td>
			<td>M8010</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS Spectrum imaging system with Living Imaging 4.2 software package</td>
			<td>Caliper LS/Perkin Elmer, Hopkinton, MA</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo imaging method to distinguish acute and chronic inflammation

דלקת היא היבט בסיסי של מחלות בבני אדם רבים. בדו&quot;ח הסרטון הזה, אנחנו מדגימים טכניקות פליטת אור הדמיה בלתי פולשנית המבדילות דלקת אקוטית וכרונית בעכברי מודל. עם נזק לרקמות או פלישת הפתוגן, נויטרופילים הם קו הגנה הראשון, ששיחק תפקיד מרכזי בתיווך התגובה הדלקתית חריפה. עם התקדמות התגובה הדלקתית, מונוציטים במחזור להעביר בהדרגה לאתר של פציעה ולהתמיין למקרופאגים בוגרים, אשר מתווכים דלקת כרונית ולקדם תיקון רקמות על ידי הסרת פסולת רקמה וייצור ציטוקינים נוגדות דלקת. זריקת intraperitoneal של לומינול (,4-phthalazinedione, מלח נתרן ,3-dihydro-1-5-2 אמינו) מאפשרת זיהוי של דלקת חריפה בתיווך במידה רבה על ידי נויטרופילים רקמות הסתננות. לומינול במיוחד מגיב עם סופראוקסיד נוצר בתוך phagosomes של נויטרופילים מאז תוצאות פליטת אור מmyeloperoxidase (MPO) תגובת תיווך. Lucigenin (חנקה BIS-N-methylacridinium) גם מגיב עם סופראוקסיד על מנת ליצור פליטת אור. עם זאת, פליטת אור lucigenin הוא עצמאית של MPO וזה אך ורק מסתמך על מונואמין NADPH תא בלען (phox) במקרופאגים בדלקת כרונית. יחד, לומינול וlucigenin לאפשר להדמיה לא פולשנית והערכת אורך של תא בלען אוכלוסיות שונות ברחבי שלבים דלקתיים הן כרוניים וחמורים. בהתחשב בתפקיד החשוב של דלקת במגוון רחב של מחלות בבני אדם, אנחנו מאמינים ששיטת ההדמיה לא פולשנית זו יכולה לעזור לחקור את התפקידים דיפרנציאליים של נויטרופילים ומקרופאגים במגוון רחב של מצבים פתולוגיים.

בצענו הדמיה פליטת אור אורך להעריך דלקת אקוטית וכרונית במודלים של דלקת ניסיונית. Phorbol 13-12-Myristate אצטט (PMA) הוא חלבון קינאז אגוניסט חזק C (PKC) שמפעיל phox לייצור אניון סופראוקסיד ומעורר תגובות דלקתיות חריפות עזות 21. הזרקת SC של 50 מ&quot;ג של PMA בעכברים בעירום NCR גרמה לגירוי עו...

Watch this Scientific Journal Video about In vivo Imaging Method to Distinguish Acute and Chronic Inflammation at JoVE.com

In vivo Imaging Method to Distinguish Acute and Chronic Inflammation

אנו מתארים שיטת הדמיה לא פולשנית להבחנה שלבים דלקתיים. משלוח מערכתי של לומינול מגלה תחומים של דלקת חריפה תלויות על פעילות MPO בנויטרופילים. לעומת זאת, הזרקה של lucigenin מאפשרת הדמיה של דלקת כרונית תלויה בפעילות phox במקרופאגים.

בשיטת ההדמיה vivo להבחין דלקת אקוטית וכרונית

Inflammation is a fundamental aspect of many human diseases. In this video report, we demonstrate non-invasive bioluminescence imaging techniques that ...

in-vivo-imaging-method-to-distinguish-acute-and-chronic-inflammation

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

In vivo Imaging Method to Distinguish Acute and Chronic Inflammation

20.1K Views.  Harvard Medical School. אנו מתארים שיטת הדמיה לא פולשנית להבחנה שלבים דלקתיים. משלוח מערכתי של לומינול מגלה תחומים של דלקת חריפה תלויות על פעילות MPO בנויטרופילים. לעומת זאת, הזרקה של lucigenin מאפשרת הדמיה של דלקת כרונית תלויה בפעילות phox במקרופאגים.

Video: In vivo Imaging Method to Distinguish Acute and Chronic Inflammation

Using Eggs from Schistosoma mansoni as an In vivo Model of Helminth-induced Lung Inflammation

Schistosoma parasites are blood flukes that infect an estimated 200 million people worldwide 1. In chronic infection with Schistosoma, the severe pathology, including liver fibrosis and splenomegaly, is caused by the immune response to the parasite eggs rather than the parasite itself 2. Parasite eggs induce a Th2 response characterized by the production of IL-4, IL-5 and IL-13, the alternative activation of macrophages and the recruitment of eosinophils. Here, we describe injection of Schistosoma mansoni eggs as a model to examine parasite-specific Th2 cytokine responses in the lung and draining lymph nodes, the formation of pulmonary granulomas surrounding the egg, and airway inflammation. 
Following intraperitoneal sensitization and intravenous challenge, S. mansoni eggs are transported to the lung via the pulmonary arteries where they are trapped within the lung parenchyma by granulomas composed of lymphocytes, eosinophils and alternatively activated macrophages 3-6. Associated with granuloma formation, inflammation in the broncho-alveolar spaces, expansion of the draining lymph nodes and CD4 T cell activation can be observed. Here we detail the protocol for isolating Schistosoma mansoni eggs from infected livers (modified from 7), sensitizing and challenging mice, and recovering the organs (broncho-alveolar lavage (BAL), lung and draining lymph nodes) for analysis. We also include representative histologic and immunologic data and suggestions for additional immunologic analysis. 
Overall, this method provides an in vivo model to investigate helminth-induced immunologic responses in the lung, which is broadly applicable to the study of Th2 inflammatory diseases including helminth infection, fibrotic diseases, allergic inflammation and asthma. Advantages of this model for the study of type 2 inflammation in the lung include the reproducibility of a potent Th2 inflammatory response in the lung and draining lymph nodes, the ease of assessment of inflammation by histologic examination of the granulomas surrounding the egg, and the potential for long-term storage of the parasite eggs.

Using Eggs from Schistosoma mansoni as an In vivo Model of Helminth-induced Lung Inflammation

Schistosoma mansoni eggs are potent stimulators of the T helper type 2 (Th2) immune response, characteristic of parasite infection, asthma and allergic inflammation. This protocol utilizes S. mansoni egg injection to generate a CD4 Th2 cytokine-induced inflammatory response in the lung, characterized by lung granuloma formation around the egg, eosinophilia and macrophage alternative activation.

שימוש ביצים מ<em&gt; Schistosoma mansoni</em&gt; כמו<em&gt; ב-vivo</em&gt; דגם של דלקת ריאות הנגרמת helminth

Schistosoma parasites are blood flukes that infect an estimated 200 million people worldwide 1. In chronic infection with Schistosoma, the severe ...

Bioluminescent Bacterial Imaging In Vivo

This video describes the use of whole body bioluminesce imaging (BLI) for the study of bacterial trafficking in live mice, with an emphasis on the use of bacteria in gene and cell therapy for cancer. Bacteria present an attractive class of vector for cancer therapy, possessing a natural ability to grow preferentially within tumors following systemic administration. Bacteria engineered to express the lux gene cassette permit BLI detection of the bacteria and concurrently tumor sites. The location and levels of bacteria within tumors over time can be readily examined, visualized in two or three dimensions. The method is applicable to a wide range of bacterial species and tumor xenograft types. This article describes the protocol for analysis of bioluminescent bacteria within subcutaneous tumor bearing mice. Visualization of commensal bacteria in the Gastrointestinal tract (GIT) by BLI is also described. This powerful, and cheap, real-time imaging strategy represents an ideal method for the study of bacteria in vivo in the context of cancer research, in particular gene therapy, and infectious disease. This video outlines the procedure for studying lux-tagged E. coli in live mice, demonstrating the spatial and temporal readout achievable utilizing BLI with the IVIS system.

Bioluminescent Bacterial Imaging In Vivo

This article describes the administration of lux-tagged bacteria to mice and subsequent in vivo analysis using IVIS bioluminescence imaging.

הדמיה בקטריאלי bioluminescent<em&gt; In Vivo</em

This video describes the use of whole body bioluminesce imaging (BLI) for the study of bacterial trafficking in live mice, with an emphasis on the use of ...

A Mouse Model for Pathogen-induced Chronic Inflammation at Local and Systemic Sites

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including neoplastic, autoimmune, and chronic inflammatory diseases. Emerging evidence implicates pathogen-induced chronic inflammation in the development and progression of chronic diseases with a wide variety of clinical manifestations. Due to the complex and multifactorial etiology of chronic disease, designing experiments for proof of causality and the establishment of mechanistic links is nearly impossible in humans. An advantage of using animal models is that both genetic and environmental factors that may influence the course of a particular disease can be controlled. Thus, designing relevant animal models of infection represents a key step in identifying host and pathogen specific mechanisms that contribute to chronic inflammation.
Here we describe a mouse model of pathogen-induced chronic inflammation at local and systemic sites following infection with the oral pathogen Porphyromonas gingivalis, a bacterium closely associated with human periodontal disease. Oral infection of specific-pathogen free mice induces a local inflammatory response resulting in destruction of tooth supporting alveolar bone, a hallmark of periodontal disease. In an established mouse model of atherosclerosis, infection with P. gingivalis accelerates inflammatory plaque deposition within the aortic sinus and innominate artery, accompanied by activation of the vascular endothelium, an increased immune cell infiltrate, and elevated expression of inflammatory mediators within lesions. We detail methodologies for the assessment of inflammation at local and systemic sites. The use of transgenic mice and defined bacterial mutants makes this model particularly suitable for identifying both host and microbial factors involved in the initiation, progression, and outcome of disease. Additionally, the model can be used to screen for novel therapeutic strategies, including vaccination and pharmacological intervention.

Animal models have proven to be invaluable tools in defining host and pathogen specific mechanisms that contribute to the development of chronic inflammation. Here we describe a mouse model of oral infection with the human pathogen Porphyromonas gingivalis and detail methodologies to assess the progression of inflammation at local and systemic sites.

מודל של עכברים של דלקת כרונית הנגרם על ידי פתוגן באתרים מקומיים ומערכתיים

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including ...

An Optimized Method for Isolating and Expanding Invariant Natural Killer T Cells from Mouse Spleen

The ability to rapidly secrete cytokines upon stimulation is a functional characteristic of the invariant natural killer T (iNKT) cell lineage. iNKT cells are therefore characterized as an innate T cell population capable of activating and steering adaptive immune responses. The development of improved techniques for the culture and expansion of murine iNKT cells facilitates the study of iNKT cell biology in in vitro and in vivo model systems. Here we describe an optimized procedure for the isolation and expansion of murine splenic iNKT cells.
Spleens from C57Bl/6 mice are removed, dissected and strained and the resulting cellular suspension is layered over density gradient media. Following centrifugation, splenic mononuclear cells (MNCs) are collected and CD5-positive (CD5+) lymphocytes are enriched for using magnetic beads. iNKT cells within the CD5+ fraction are subsequently stained with &#945;GalCer-loaded CD1d tetramer and purified by fluorescence activated cell sorting (FACS). FACS sorted iNKT cells are then initially cultured in vitro using a combination of recombinant murine cytokines and plate-bound T cell receptor (TCR) stimuli before being expanded in the presence of murine recombinant IL-7. Using this technique, approximately 108 iNKT cells can be generated within 18-20 days of culture, after which they can be used for functional assays in vitro, or for in vivo transfer experiments in mice.

Here we present an adapted protocol that can be used to generate a large number of murine invariant natural killer T cells from mouse spleen. The protocol outlines an approach by which splenic iNKT cells can be enriched for, isolated and expanded in vitro using a limited number of animals and reagents.

שיטה אופטימלית עבור בידוד והרחבת תאי Invariant הטבעי רוצח T מטחול העכבר

The ability to rapidly secrete cytokines upon stimulation is a functional characteristic of the invariant natural killer T (iNKT) cell lineage. iNKT cells ...

A Non-invasive and Technically Non-intensive Method for Induction and Phenotyping of Experimental Bacterial Pneumonia in Mice

Although community-acquired pneumonia remains a major public health problem, murine models of bacterial pneumonia have recently facilitated significant preclinical advances in our understanding of the underlying cellular and molecular pathogenesis. In vivo mouse models capture the integrated physiology and resilience of the host defense response in a manner not revealed by alternative, simplified ex vivo approaches. Several methods have been described in the literature for intrapulmonary inoculation of bacteria in mice, including aerosolization, intranasal delivery, peroral endotracheal cannulation under &#39;blind&#39; and visualized conditions, and transcutaneous endotracheal cannulation. All methods have relative merits and limitations. Herein, we describe in detail a non-invasive, technically non-intensive, inexpensive, and rapid method for intratracheal delivery of bacteria that involves aspiration (i.e., inhalation) by the mouse of an infectious inoculum pipetted into the oropharynx while under general anesthesia. This method can be used for pulmonary delivery of a wide variety of non-caustic biological and chemical agents, and is relatively easy to learn, even for laboratories with minimal prior experience with pulmonary procedures. In addition to describing the aspiration pneumonia method, we also provide step-by-step procedures for assaying the subsequent in vivo pulmonary innate immune response of the mouse, in particular, methods for quantifying bacterial clearance and the cellular immune response of the infected airway. This integrated and simple approach to pneumonia assessment allows for rapid and robust evaluation of the effect of genetic and environmental manipulations upon pulmonary innate immunity.

Several methods have been described in the literature for modeling bacterial pneumonia in mice. Herein, we describe a non-invasive, inexpensive, rapid method for inducing pneumonia via aspiration (i.e., inhalation) of a bacterial inoculum pipetted into the oropharynx. Downstream methods for assessment of the pulmonary innate immune response are also detailed.

שיטה לא פולשנית הטכנית ללא עתירי עבור אינדוקצית phenotyping של דלקת ריאות חיידקית הניסויית עכברים

Although community-acquired pneumonia remains a major public health problem, murine models of bacterial pneumonia have recently facilitated significant ...

Murine Lymphocyte Labeling by 64Cu-Antibody Receptor Targeting for In Vivo Cell Trafficking by PET/CT

This protocol illustrates the production of 64Cu and the chelator conjugation/radiolabeling of a monoclonal antibody (mAb) followed by murine lymphocyte cell culture and 64Cu-antibody receptor targeting of the cells. In vitro evaluation of the radiolabel and non-invasive in vivo cell tracking in an animal model of an airway delayed-type hypersensitivity reaction (DTHR) by PET/CT are described.
In detail, the conjugation of a mAb with the chelator 1,4,7,10-tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetraacetic acid (DOTA) is shown. Following the production of radioactive 64Cu, radiolabeling of the DOTA-conjugated mAb is described. Next, the expansion of chicken ovalbumin (cOVA)-specific CD4+ interferon (IFN)-&#947;-producing T helper cells (cOVA-TH1) and the subsequent radiolabeling of the cOVA-TH1 cells are depicted. Various in vitro techniques are presented to evaluate the effects of 64Cu-radiolabeling on the cells, such as the determination of cell viability by trypan blue exclusion, the staining for apoptosis with Annexin V for flow cytometry, and the assessment of functionality by IFN-&#947; enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Furthermore, the determination of the radioactive uptake into the cells and the labeling stability are described in detail. This protocol further describes how to perform cell tracking studies in an animal model for an airway DTHR and, therefore, the induction of cOVA-induced acute airway DHTR in BALB/c mice is included. Finally, a robust PET/CT workflow including image acquisition, reconstruction, and analysis is presented.
The 64Cu-antibody receptor targeting approach with subsequent receptor internalization provides high specificity and stability, reduced cellular toxicity, and low efflux rates compared to common PET-tracers for cell labeling, e.g.64Cu-pyruvaldehyde bis(N4-methylthiosemicarbazone) (64Cu-PTSM). Finally, our approach enables non-invasive in vivo cell tracking by PET/CT with an optimal signal-to-background ratio for 48 h. This experimental approach can be transferred to different animal models and cell types with membrane-bound receptors that are internalized.

Murine Lymphocyte Labeling by 64Cu-Antibody Receptor Targeting for In Vivo  Cell Trafficking by PET/CT

Following the preparation of a 64Cu-modified monoclonal antibody binding to a transgenic murine T cell receptor, T cells are radiolabeled in vivo, analyzed for viability, functionality, labeling stability and apoptosis, and adoptively transferred into mice with an airway delayed-type hypersensitivity reaction for non-invasive imaging by positron emission tomography/computed tomography (PET/CT).

Murine לימפוציטים תיוג ידי<sup&gt; 64</sup&gt; Cu-נוגדן קולטן מיקוד עבור<em&gt; In vivo</em&gt; סחר Cell על ידי PET / CT

This protocol illustrates the production of 64Cu and the chelator conjugation/radiolabeling of a monoclonal antibody (mAb) followed by murine lymphocyte ...

Come to the Light Side: In Vivo Monitoring of Pseudomonas aeruginosa Biofilm Infections in Chronic Wounds in a Diabetic Hairless Murine Model

The presence of bacteria as structured biofilms in chronic wounds, especially in diabetic patients, is thought to prevent wound healing and resolution. Chronic mouse wounds models have been used to understand the underlying interactions between the microorganisms and the host. The models developed to date rely on the use of haired animals and terminal collection of wound tissue for determination of viable bacteria. While significant insight has been gained with these models, this experimental procedure requires a large number of animals and sampling is time consuming. We have developed a novel murine model that incorporates several optimal innovations to evaluate biofilm progression in chronic wounds: a) it utilizes hairless mice, eliminating the need for hair removal; b) applies pre-formed biofilms to the wounds allowing for the immediate evaluation of persistence and effect of these communities on host; c) monitors biofilm progression by quantifying light production by a genetically engineered bioluminescent strain of Pseudomonas aeruginosa, allowing real-time monitoring of the infection thus reducing the number of animals required per study. In this model, a single full-depth wound is produced on the back of STZ-induced diabetic hairless mice and inoculated with biofilms of the P. aeruginosa bioluminescent strain Xen 41. Light output from the wounds is recorded daily in an in vivo imaging system, allowing for in vivo and in situ rapid biofilm visualization and localization of biofilm bacteria within the wounds. This novel method is flexible as it can be used to study other microorganisms, including genetically engineered species and multi-species biofilms, and may be of special value in testing anti-biofilm strategies including antimicrobial occlusive dressings.

Come to the Light Side: In Vivo Monitoring of Pseudomonas aeruginosa Biofilm Infections in Chronic Wounds in a Diabetic Hairless Murine Model

Here we describe a novel diabetic murine model utilizing hairless mice for real-time, non-invasive, monitoring of biofilm wound infections of bioluminescent Pseudomonas aeruginosa. This method can be adapted to evaluate infection of other bacterial species and genetically modified microorganisms, including multi-species biofilms, and test the efficacy of antibiofilm strategies.

לצידו. אור: בויוו ניטור של דלקות Biofilm Pseudomonas aeruginosa לפצעים כרוניים במודל מאתר של שיער סוכרתית

The presence of bacteria as structured biofilms in chronic wounds, especially in diabetic patients, is thought to prevent wound healing and resolution. ...

An Efficient and Simple Method to Establish NK and T Cell Lines from Patients with Chronic Active Epstein-Barr Virus Infection

A number of methods have been described to establish NK/T cell lines from patients with lymphoma or lymphoproliferative syndrome. These methods employed feeder cells, purified NK or T cells with as much as 10 mL of blood, or a high-dose of IL-2. This study presents a new method with a powerful and simple strategy to establish NK and T cell lines by culturing the peripheral blood mononuclear cells (PBMC) with the addition of recombinant human IL-2 (rhIL-2), and uses as little as 2 mL of whole blood. The cells can proliferate quickly in two weeks and be maintained for more than 3 months. With this method, 7 NK or T cell lines have been established with a high success rate. This method is simple, reliable, and applicable to establishing cell lines from more cases of CAEBV or NK/T cell lymphoma.

A simple method for obtaining NK and T cell clones from CAEBV patients was developed with high efficiency, a small amount of peripheral blood, and a low-dose of IL-2.

שיטה פשוטה ויעילה להקים NK וקווים תא T של חולים עם דלקת כרונית פעילה וירוס אפשטיין בר

A number of methods have been described to establish NK/T cell lines from patients with lymphoma or lymphoproliferative syndrome. These methods employed ...

Long-term In Vivo Tracking of Inflammatory Cell Dynamics Within Drosophila Pupae

During the rapid inflammatory response to tissue damage, cells of the innate immune system are quickly recruited to the injury site. Once at the wound, innate immune cells perform a number of essential functions, such as fighting infection, clearing necrotic debris, and stimulating matrix deposition. In order to fully understand the diverse signaling events that regulate this immune response, it is crucial to observe the complex behaviors of (and interactions that occur between) multiple cell lineages in vivo, and in real-time, with the high spatio-temporal resolution. The optical translucency and the genetic tractability of Drosophila embryos have established Drosophila as an invaluable model to live-image and dissect fundamental aspects of inflammatory cell behavior, including mechanisms of developmental dispersal, clearance of apoptotic corpses&#160;and/or microbial pathogens, and recruitment to wounds. However, more recent work has now demonstrated that employing a much later stage in the Drosophila lifecycle &#8211; the Drosophila pupa &#8211; offers a number of distinct advantages, including improved RNAi efficiency, longer imaging periods, and significantly greater immune cell numbers. Here we describe a protocol for imaging wound repair and the associated inflammatory response at the high spatio-temporal resolution in live Drosophila pupae. To follow the dynamics of both re-epithelialization and inflammation, we use a number of specific in vivo fluorescent markers for both the epithelium and innate immune cells. We also demonstrate the effectiveness of photo-convertible fluorophores, such as Kaede, for following the specific immune cell subsets, to track their behavior as they migrate to, and resolve from, the injury site.

Long-term In Vivo Tracking of Inflammatory Cell Dynamics Within Drosophila Pupae

Here we present a protocol for live-imaging wound repair and the associated inflammatory response at high spatio-temporal resolution in vivo. This method utilizes the pupal stage of Drosophila development to enable long-term imaging and tracking of specific cell populations over time and is compatible with efficient RNAi-mediated gene inactivation.

לטווח ארוך In Vivo מעקב של תאים דלקתיים הדינמיקה בתוך דרוזופילה הגלמים

During the rapid inflammatory response to tissue damage, cells of the innate immune system are quickly recruited to the injury site. Once at the wound, ...

Assessing Cellular Stress and Inflammation in Discrete Oxytocin-secreting Brain Nuclei in the Neonatal Rat Before and After First Colostrum Feeding

The goal of this protocol is to isolate oxytocin-receptor rich brain nuclei in the neonatal brain before and after first colostrum feeding. The expression of proteins known to respond to metabolic stress was measured in brain-nuclei isolates using Western blotting. This was done to assess whether metabolic stress-induced nutrient insufficiency in the body triggered neuronal stress. We have previously demonstrated that nutrient insufficiency in neonates elicits metabolic stress in the gut. Furthermore, colostrum oxytocin modulates cellular stress response, inflammation, and autophagy markers in newborn rat gut villi prior to and after first feed. Signaling protein markers associated with the endoplasmic reticulum stress [ER chaperone binding immunoglobulin protein (BiP), eukaryotic translation initiation factor 2A (eIF2a), and eIF2a kinase protein kinase R (p-PKR)], as well as two inflammation-signaling proteins [nuclear factor-&#954;B (NF-kB) and inhibitor &#954;B (IkB)], were measured in newborn brain nuclei [nucleus of the solitary tract (NTS), paraventricular nucleus (PVN), supra-optic nucleus (SON), cortex (CX), striatum nuclei (STR), and medial preoptic nucleus (MPO)] before the first feed (unprimed by colostrum) and after the start of nursing (primed by colostrum). Expression of BiP/GRP78 and p-eIF2a were upregulated in unprimed and downregulated in primed NTS tissue. NF-kB was retained (high) in the CX, STR, and MPO cytoplasm, whereas NF-kB was lower and unchanged in NTS, PVN, and SON in both conditions. The collective BiP and p-eIF2 findings are consistent with a stress response. eIf2a was phosphorylated by dsRNA dependent kinase (p-PKR) in the SON, CX, STR, and MPO. However, in the NTS (and to a lesser extent in PVN), eIf2a was phosphorylated by another kinase, general control nonderepressible-2 kinase (GCN2). The stress-modulating mechanisms previously observed in newborn gut enterocytes appear to be mirrored in some OTR-rich brain regions. The NTS and PVN may utilize a different phosphorylation mechanism (under nutrient deficiency) from other regions and be refractory to the impact of nutrient insufficiency. Collectively, this data suggests that brain responses to nutrient insufficiency stress are offset by signaling from colostrum-primed enterocytes.

Here, we present a protocol to isolate brain nuclei in the neonatal rat brain in conjunction with first colostrum feeding. This technique allows the study of nutrient insufficiency stress in the brain as modulated by enterocyte signaling.

הערכת מתח סלולארית, דלקת דיסקרטית מפריש אוקסיטוצין המוח גרעינים בחולדה Neonatal לפני ואחרי האכלה קולוסטרום הראשון

The goal of this protocol is to isolate oxytocin-receptor rich brain nuclei in the neonatal brain before and after first colostrum feeding. The expression ...