وقد تم تطوير هذا البروتوكول بالتعاون مع أعضاء السابقة للمختبر مغينس، كيم A. الصولجان وجوزيف جيم بيرسون. نشكر الجهود المتواصلة من قبل المركز الأسهم ذبابة الفاكهة بلومنجتون لعملهم لتنظيم وتوزيع أسهم القيمة. وأيد هذا العمل من خلال تمويل من المعاهد الوطنية للصحة (R01 GM077197 وK12 GM68524) وعائلة هربرت شتيرن. معتمد حاليا من قبل MTJ غرانت عدد 5G12RR003060-26 من المركز الوطني للبحوث الموارد والمنح عدد 8G12MD7603-27 من المعهد الوطني لصحة الأقليات والفوارق الصحية. المحتوى هو فقط من مسؤولية الكتاب ولا تمثل بالضرورة وجهة النظر الرسمية للمعهد الوطني في الأقلية الصحة والصحة التفاوت أو المعاهد الوطنية للصحة.

بروتوكول الجرح الجنينية ذبابة الفاكهة يمكن تلخيصها في خمس خطوات: (1) جمع الأجنة، (2) إعداد الأجنة (3) إصابة الأجنة، (4) حقن مكروي الأجنة، و (5) تثبيت الأجنة. 1. الجنين كوكتيل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع الذباب الكبار، بعد 2-3 أيام eclosing، إضافة 50 إناث و 25 ذكور إلى قفص جمع الأجنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع عصير التفاح الطازج بالإضافة إلى لوحة أجار الخميرة كل صباح لمدة 3 أيام. ملاحظات: لجمع الجنين الأمثل، ودورة الذباب على جدول زمني يومي 12 ساعة في حاضنة 25 ° C (05:00 أضواء &quot;ON&quot; و 17:00 أضواء &quot;OFF&quot;)؛ الذباب الإناث الاستجابة للتغيرات في دورة الضوء و ستودع كميات أكبر من البيض خلال التحول من أضواء &quot;ON&quot; إلى أضواء &quot;OFF&quot; 10،11. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في فترة ما بعد الظهر من يوم 3، ووضع عصير التفاح الطازج بالإضافة إلى الخميرة وحة آغار على القفص وجمع الأجنة لمدة 2 ساعة. وضع لوحة جديدة على الخميرة القفص وحفظ2 لوحة جمع ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخزين لوحة لجمع 14 ساعة إضافية عند 25 درجة مئوية إلى سن الأجنة. ملاحظات: يمكن أن يعاير التئام الجروح في أي مرحلة خلال تطوير ذبابة الفاكهة، وصحفيين الناجم عن الجرح النسخي وصفها في هذه الورقة لها النشاط الأمثل بين المراحل 15-16 ديسمبر. في أواخر المرحلة 17، والجنين هو قديم جدا لاختراق بسهولة بشرة الناضجة وتفعيل كفاءة صحفيين الجرح أو الجرح الناجم عن الكشف عن النسخ. لإتاحة الوقت لجمع وجرح الوقت أن يحدث خلال ساعات الذروة المختبر، ونحن نتابع جدولا زمنيا لجمع الأجنة لمدة 2 ساعة (16:00 حتي 18:00)، تبادل لوحة جمع مع لوحة جديدة في الساعة 18:00، والعمر لوحة جمع عند 25 درجة مئوية لمدة 14 ساعة (بين عشية وضحاها)، والجرح الأجنة في الساعة 08:00 (اليوم التالي). </li></ol> 2. إعداد الجنين ملاحظات: يتضمن هذا البروتوكول استخدام العديد من الأدوات والأشياء التي هي حادة أو مصنوعة من زمعشوقة. التعامل مع جميع الأدوات الحادة والأجسام الزجاج مع الحرص على تجنب الإصابة الشخصية. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بلطف إزالة الأجنة من لوحات مجموعة مع الفرشاة وذلك بإضافة 2-3 مل من الماء لوحة ودوامات. نقل المياه والأجنة من لوحة لشبكة النايلون وأنبوب جمع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 4-5 مل من المبيض إلى غطاء من البلاستيك بيتري لوحة طبق ونقع في تغطية شبكة نهاية الأنبوب الذي يحتوي على جمع الأجنة في التبييض لمدة 2 دقيقة؛ الذي يزيل قشر البيض الخارجي للجنين. تدوير يدويا أنبوب جمع بضع مرات لمنع الأجنة من التثاقل في التبييض. شطف الأجنة مع 10x المياه وتجفيف شبكة تغطية جمع الأنبوب الذي يحتوي على أجنة dechorionated على منشفة ورقية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام إبرة تشريح لنقل الأجنة ~ 50 من النايلون شبكة لوحة آغار. نضيف الأخضر تلوين الطعام على لوحة أجار لإضافة التباين والمساعدات في محاذاة الجنين. تحت المجهر تشريح، وجعل اثنين من صفوف متوازية من 25 ~ الأجنة، محاذاة امبريالسراج على الشريحة بحيث أنها سوف تكون في زوايا الحق في ثقب الإبرة على جهاز microinjection. ترك القليل من الفضاء (حوالي 1 طول الجنين) بين الأجنة لأغراض تبادل الغازات. يجب أن تكون صفوف متوازية اثنين حوالي 5 ملم وبصرف النظر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الشريحة مع ضعف العصا الشريط على رأس الأجنة الانحياز والضغط بعناية الشريحة لنقل الأجنة من لوحة خضراء إلى الشريحة. ثم الهواء الجاف الأجنة ~ 25 دقيقة لتخفيف الضغط الداخلي على الجنين ومنع حدوث انفجار عند اصابة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع 2-3 قطرات من مزيج النفط الهالوكربون على الأجنة لمنع مزيد من الجفاف. </li></ol> 3. إصابة الجنين <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الشريحة الجنين في مرحلة المجهر الحقن. العثور على الأجنة في مجال الرؤية والممارسة تتحرك مرحلة مجهر مقلوب. ملاحظات: قبل أن تبدأ العمل مع الإبرة، والتركيز على الطائرة منتصف الجنين على طول محور ظهري بطني. للسماح للجرح الفعال للالأجنة الانحياز، تبدأ اصابة الصف أقرب إلى جهاز الإبرة. نقل المرحلة لتحقيق أعلى صف من الأجنة الانحياز في مجال الرؤية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع بعناية وتأمين إبرة سحبت في حامل الإبرة. استخدام مياداة مجهرية لتحريك الإبرة إلى أسفل نحو الشريحة. محاذاة الإبرة مع الجنين، في نفس المستوى البؤري. مرة واحدة على الإبرة في التركيز مع الجنين، لا تتحرك الإبرة مع مياداة مجهرية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل المرحلة ثقب الجنين من خلال وعبر، ثم الانتقال إلى الجنين القادم في الصف. عندما تنتهي من ذلك اصابة الصف الأول، استخدم مياداة مجهرية لتحريك الإبرة تماما وحتى بعيدا من مرحلة قبل الانتقال الشريحة؛ تدوير يدويا الشريحة 180 درجة والجرح الصف الثاني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخزين الأجنة تحت الهالوكربون النفط في درجة حرارة الغرفة والمضي قدما في تثبيت الجنين إذا به الموقع التهجين أو تلوين الأجسام المضادة في (راجع الخطوة الإجرائية 5). بدلا من ذلك، تخزين الأجنة لمدة 4-6 ساعةتحت الهالوكربون النفط والمضي قدما الجرح النسخي التصور مراسل الفلورسنت (ممثل النتائج). ملاحظات: للحصول على تصور لمراسل الفلورسنت، ونحن تخدير الأجنة باستخدام 50٪ 1-فينوكسي-2-بروبانول 13. تتم إزالة الأجنة من النفط الهالوكربون ووضعها على شريحة جديدة. نضع الخرز الزجاجي حول الأجنة، إضافة بضع قطرات من مخدر، ووضع زلة تغطية على الأجنة. </li></ol> 4. الجنين حقن مكروي ملاحظات: لم يتم الآلي وجهاز microinjection التي نستخدمها في البروتوكول لتسليم حجم محددة خلال الفحص. نضيف صبغة إلى حل لتصور حقن مكروي ومحاولة تطبيع حجم تسليمها. إذا تم حقن الكثير الحل في الجنين، والغشاء المحي تنفجر. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحميل الإبرة من الخلف مع 1 ميكرولتر من المحلول الكيميائي بالإضافة إلى صبغ (على سبيل المثال 0.6 MH 2 O 2). تسمح الشعريةعمل لرسم الحل الكيميائية إلى رأس الإبرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لكسر إبرة، ضع الغطاء زلة في زاوية على شريحة ومعطف حافة مع مزيج النفط الهالوكربون. إحضار إبرة شنت في التركيز مع حافة الغطاء زلة الزاوية وبلطف نقل زلة تغطية حافة عبر غيض من الإبرة حتى كسر. الضغط على جهاز microinjection وتحقق من أن الحل الكيميائية بالإضافة إلى صبغ يتدفق من الإبرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع الشريحة التي تحتوي على أجنة الانحياز على المسرح المجهر. المضي قدما في التركيز على الجنين والإبرة في نفس الطائرة. ثقب في وقت واحد والحل microinject الكيميائية بالإضافة إلى صبغ في كل الجنين. ملاحظات: الإبر انسداد تحدث بشكل متكرر؛ كسر إبرة جديدة لتجنب حقن مكروي غير مكتملة. لا الجرح وهناك معلومات إبرة حادة كما نظيفة باعتبارها طرف الإبرة الزاوية. ضبط ساترة لغير زاوية 90 درجة خلال الكسر هو الأمثل لإنتاج طرف الإبرة الزاوية. </li></ol> 5. الفورمالديهايد فايxation ويلاحظ: إن المواد الكيميائية المستخدمة في هذا التثبيت ذبابة الفاكهة الضارة. استخدام معدات الوقاية الشخصية (مثل القفازات، معطف المختبر، ونظارات السلامة) عند التعامل مع المواد الكيميائية. اتباع المبادئ التوجيهية المؤسسية الفردية للتخلص من المواد الكيميائية الخاضعة للتنظيم. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد جرح، انتظر 15، 30، 60، دقائق أو أكثر لتفعيل النسخي من الجينات التي يسببها الجرح تحدث. لإزالة الأجنة من حقن الشرائح، واستنزاف بعناية مزيج النفط الهالوكربون من الشرائح، تتكئ الشريحة ضد رف وصمة عار النهاية مع Kimwipe. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ماصة الزجاج لشطف هيبتان على الشريحة وغسل السائل شطف إلى طبق بتري الزجاج. سوف هيبتان حل الشريط وإطلاق سراح الأجنة. تواصل شطف حتى يتم إزالة جميع الأجنة من الشريحة. انتقل إلى الشريحة التالية، حتى يتم إزالة جميع الأجنة من الشرائح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل هيبتان بالإضافة إلى حل الجنين من الطبق الزجاجي إلى الخيال العلمي 20 ملntillation القارورة. هز القارورة لمدة 2-3 دقيقة، وإزالة هيبتان وإضافة 5 مل من هيبتان الطازجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 5 مل من الطازجة، والحل تثبيت (انظر قائمة الكواشف لصفة). قبعة القارورة ونعلق على منصة شاكر المداري. هز قارورة تحتوي على أجنة لمدة 25 دقيقة في 220-230 دورة في الدقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد الهز، والسماح للفقاعات في واجهة البوب. تماما إزالة، المرحلة المائية أسفل مع ماصة، وتجنب سحب ما يصل الأجنة. تتكون الطبقة السفلية من الحل التثبيت وينبغي التخلص منها بشكل سليم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 5 مل من الميثانول، وكأب القارورة ويهز بقوة باليد لمدة 20-30 ثانية، دوامة ووضعه على مقاعد البدلاء. سوف الأجنة الجرحى البقاء في البيني ولن تنزل الى القاع. ملاحظات: بعد التثبيت سوف تنفجر الغشاء المحي من الجنين المعافين عادة خلال الخطوة الجفاف مع الميثانول. ومع ذلك، هو كسر الغشاء المحي في جنين الجرحى بالفعل وسوف خطوة الجفاف تقم بإزالة MEMB المحيRANE. مطلوب اليد devitellinzation لاستكمال بروتوكول التثبيت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة بعناية طبقة هيبتان أعلى ثم قم بإضافة 5 مل من الميثانول النقي. هز القارورة ويجب أن الأجنة تغرق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الميثانول بالإضافة إلى حل الجنين مع ماصة نقل الزجاج وجمع في أنبوب جمع شبكة من النايلون في طبق زجاجي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الميثانول وشطف الأجنة مع الحل برنامج تلفزيوني 1X. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الأجنة من شبكة من النايلون لوحة عصير التفاح. نشر الأجنة على طول سطح اللوحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الأجنة إلى شريحة زجاجية مزدوجة العصا الشريط. تغطية الأجنة مع برنامج تلفزيوني 1X. ملاحظات: الأجنة تميل إلى أجمة بسبب الغشاء المحي. باستخدام عصير التفاح مكان يسمح لفصل سريع للأجنة تجمعت. يجب إزالة الأجنة من لوحة ونقلها إلى شريحة زجاجية العصا الشريط مزدوجة لأن الأجنة تغوص لوحة آغار عندما يتم تطبيق قوة لإزالة الجنين منالمحي الغشاء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دفع بعناية الأجنة مع إبرة تشريح ل&quot;البوب&quot; الغشاء المحي. الجنين يجب أن تغرق في برنامج تلفزيوني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ماصة الزجاج لنقل برنامج تلفزيوني 1X بالإضافة إلى الأجنة إلى أنبوب 1.5 مل. شطف الأجنة مع برنامج تلفزيوني 1X وتخزينها في 4 درجات مئوية. انتقل إلى يذوى أجنة باستخدام الإيثانول: سلسلة برنامج تلفزيوني وتواصل مع الموقع التهجين أو immunolocalization البروتوكول في 14. </li></ol>

<ol>
	<li>Germeraad, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+transformation+in+Drosophila+by+microinjection+of+DNA.">Genetic transformation in Drosophila by microinjection of DNA.</a> Nature. 262 (5565), 229-231 (1976).</li><li>Payre, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+control+of+epidermis+differentiation+in+Drosophila.">Genetic control of epidermis differentiation in Drosophila.</a> Int. J. Dev. Biol. 48 (2-3), 207-215 (2004).</li><li>Gurtner, G. C., Werner, S., Barrandon, Y., Longaker, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+repair+and+regeneration.">Wound repair and regeneration.</a> Nature. 453 (7193), 314-321 (2008).</li><li>Mace, K. A., Pearson, J. C., McGinnis, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+epidermal+barrier+wound+repair+pathway+in+Drosophila+is+mediated+by+grainy+head.">An epidermal barrier wound repair pathway in Drosophila is mediated by grainy head.</a> Science. 308 (5720), 381-385 (2005).</li><li>Ting, S. B., Caddy, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+homolog+of+Drosophila+grainy+head+is+essential+for+epidermal+integrity+in+mice.">A homolog of Drosophila grainy head is essential for epidermal integrity in mice.</a> Science. 308 (5720), 411-413 (2005).</li><li>Pearson, J. C., Juarez, M. T., Kim, M., Drivenes, &. #. 2. 1. 6. ;., McGinnis, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+transcription+factor+codes+activate+epidermal+wound-response+genes+in+Drosophila.">Multiple transcription factor codes activate epidermal wound-response genes in Drosophila.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 106 (7), 2224-2229 (2009).</li><li>Campos, I., Geiger, J. A., Santos, A. C., Carlos, V., Jacinto, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+screen+in+Drosophila+melanogaster+uncovers+a+novel+set+of+genes+required+for+embryonic+epithelial+repair.">Genetic screen in Drosophila melanogaster uncovers a novel set of genes required for embryonic epithelial repair.</a> Genetics. 184 (1), 129-140 (2010).</li><li>Lesch, C., Jo, J., Wu, Y., Fish, G. S., Galko, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+targeted+UAS-RNAi+screen+in+Drosophila+larvae+identifies+wound+closure+genes+regulating+distinct+cellular+processes.">A targeted UAS-RNAi screen in Drosophila larvae identifies wound closure genes regulating distinct cellular processes.</a> Genetics. 186 (3), 943-957 (2010).</li><li>Juarez, M. T., Patterson, R. A., Sandoval-Guillen, E., McGinnis, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Duox,+Flotillin-2,+and+Src42A+are+required+to+activate+or+delimit+the+spread+of+the+transcriptional+response+to+epidermal+wounds+in+Drosophila.">Duox, Flotillin-2, and Src42A are required to activate or delimit the spread of the transcriptional response to epidermal wounds in Drosophila.</a> PLoS Genet. 7 (12), e1002424 (2011).</li><li>Allemand, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+light+condition+modification+on+the+circadian+rhythm+of+vitellogenesis+and+ovulation+in+Drosophila+melanogaster.">Influence of light condition modification on the circadian rhythm of vitellogenesis and ovulation in Drosophila melanogaster.</a> J. Insect Physiol. 22 (8), 1075-1080 (1976).</li><li>Allemand, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rhythm+of+vitellogenesis+and+ovulation+in+photoperiod+ld+12:12+of+Drosophila+melanogaster.">Rhythm of vitellogenesis and ovulation in photoperiod ld 12:12 of Drosophila melanogaster.</a> Insect Physiol. 22 (7), 1031-1035 (1976).</li><li>Pierre, S. E., Thurmond, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FlyBase+101+-+the+basics+of+navigating+FlyBase.">FlyBase 101 - the basics of navigating FlyBase.</a> Nucleic Acids Res. 40 (D1), D706-D714 (2012).</li><li>Wyeth, R. C., Croll, R. P., Willows, A. O. D., Spencer, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=1-Phenoxy-2-propanol+is+a+useful+anaesthetic+for+gastropods+used+in+neurophysiology.">1-Phenoxy-2-propanol is a useful anaesthetic for gastropods used in neurophysiology.</a> J. Neurosci. Methods. 176 (2), 121-128 (2009).</li><li>Kosman, D., Mizutani, C. M., Lemons, D., Cox, W. G., McGinnis, W., Bier, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplex+detection+of+RNA+expression+in+Drosophila+embryos.">Multiplex detection of RNA expression in Drosophila embryos.</a> Science. 305 (5685), 846 (2004).</li><li>Barolo, S., Castro, B., Posakony, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+Drosophila+transgenic+reporters:+insulated+P-element+vectors+expressing+fast-maturing+RFP.">New Drosophila transgenic reporters: insulated P-element vectors expressing fast-maturing RFP.</a> BioTechniques. 36 (3), 436-440 (2004).</li><li>Brand, A. H., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+gene+expression+as+a+means+of+altering+cell+fates+and+generating+dominant+phenotypes.">Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes.</a> Development. 118 (2), 401-415 (1993).</li><li>Casso, D., Ram&#237;rez-Weber, F., Kornberg, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GFP-tagged+balancer+chromosomes+for+Drosophila+melanogaster.">GFP-tagged balancer chromosomes for Drosophila melanogaster.</a> Mech. Dev. 91 (1-2), 451-454 (2000).</li><li>Patterson, R. A., Juarez, M. T., Hermann, A., Sasik, R., Hardiman, G., McGinnis, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serine+proteolytic+pathway+activation+reveals+an+expanded+ensemble+of+wound+response+genes+in+Drosophila.">Serine proteolytic pathway activation reveals an expanded ensemble of wound response genes in Drosophila.</a> PloS one. 8 (4), e61773 (2013).</li><li>Evans, I. R., Zanet, J., Wood, W., Stramer, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+imaging+of+Drosophila+melanogaster+embryonic+hemocyte+migrations.">Live imaging of Drosophila melanogaster embryonic hemocyte migrations.</a> J. Vis. Exp. (36), e1696 (2010).</li><li>Small, C., Paddibhatla, I., Rajwani, R., Govind, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+introduction+to+parasitic+wasps+of+Drosophila+and+the+antiparasite+immune+response.">An introduction to parasitic wasps of Drosophila and the antiparasite immune response.</a> J. Vis. Exp. (63), e3347 (2012).</li><li>Repiso, A., Berganti&#241;os, C., Corominas, M., Serras, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+repair+and+regeneration+in+Drosophila+imaginal+discs.">Tissue repair and regeneration in Drosophila imaginal discs.</a> Dev. Growth Differ. 53 (2), 177-185 (2011).</li><li>Worley, M. I., Setiawan, L., Hariharan, I. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+and+transdetermination+in+Drosophila+imaginal+discs.">Regeneration and transdetermination in Drosophila imaginal discs.</a> Annu. Rev. Genet. 46, 289-310 (2012).</li></ol>

أعلن عن أي تضارب في المصالح.

استجابة فورية لالنسخي التنظيمية العظة الخارجية يسمح الخلايا لتنسيق الاستجابة للمحفزات محلية خارج الخلية، والتي يمكن أن تشمل الإجهاد، والضرر، أو العدوى. سيطرة غير السليم للاستجابة محلية يمكن أن يكون لها آثار ضارة على الخلايا المجاورة، فضلا عن هدر الموارد لإصلاح الضرر. يوفر الجنين ذبابة الفاكهة نظام ممتاز لإجراء تجارب التئام الجروح الأساسية في الحفاظ على لسهلة وغير مكلفة والنموذج الحي. إمكانية التعاون بين البحوث في الكائنات نموذج آخر وذبابة الفاكهة يوفر فرصة فريدة لاستكشاف العديد من الأسئلة البيولوجية. تقنية إضافية للصحفيين الجرح هو مزيج من الخلفيات الوراثية متحولة، وتوفير وسيلة فعالة لاختبار الجينات مساهمة جديدة لتفعيل المسار استجابة البشرة الجرح. لدينا البشرة الناجم عن الجرح صحفيين النسخي AVailable على كل من الثانية 2 و 3 الكروموزومات الثالثة 5. في هذه الدراسة التي نستخدمها UAS ونظم GAL4 من 16 من overexpression. للدراسات مع الأليلات الطافرة قاتلة نحدد الخلفية الجينية باستخدام كروموسوم موازن الفلورسنت، على سبيل المثال Kruppel-GFP 17. قمنا بتحليل توطين مراسل الجرح في عدة خلفيات وراثية (TABLE1). وهناك تعديل محتمل للتقنية هو الجمع بين حقن مكروي وجرح. حقن مكروي يمكن استخدامها لتقديم حل الكيميائية إلى الجنين. وقد تم اختبار العديد من المركبات الكيميائية وعثر لتنظيم نشاط للصحفيين البشرة الجرح 9. هذا الأسلوب من جرح وحقن مكروي في وقت واحد يمكن أن يكون مفيدا لزيادة عدد الخلايا في الجنين ذبابة الفاكهة التي تستجيب إشارة الجرح، ويمكن استخدامها مباشرة لرصد التغيرات في التعبير الجيني بعد اصابة 18. وسوف تطبيقها في المستقبل من تقنية حقن مكروي يكون لاختبار المواد الكيميائية الرواية لتنظيم استجابة البشرة الجرح. ذبابة الفاكهة كنظام نموذج للدراسات الجينية يقدم مجموعة واسعة من بروتوكولات بسيط لمعالجة المسائل المعقدة بكفاءة. التقارير الأخيرة حول جدوى تقنيات ذبابة الفاكهة يسلط الضوء على استخدام الهجرة كرية دموية 19 وإصابة 20 دبور الطفيلية كوسيلة لتوسيع تأثير مجتمع البحوث ذبابة الفاكهة. بالإضافة إلى دراسات إصلاح الجرح، ويوفر ذبابة الفاكهة نموذجا الكلاسيكية للتجديد مع نظام القرص تخيلي 21،22. التقدم جنبا إلى جنب في الدراسات القرص تجديد تخيلي وثقب / حقن مكروي جرح يوفر نظام ممتاز لاكتشاف مكونات حفظها جيدا من إصلاح الأنسجة.

التلاعب في الأجنة ذبابة الفاكهة باستخدام تقنية حقن مكروي هو مقايسة راسخة 1. أهمية أسلوب مراسل استجابة البشرة الجرح هو الجمع بين بروتوكول للثقب / حقن مكروي مع صحفيين الفلورسنت وتصور استجابة في الجسم الحي لإصابات البشرة في أجنة ذبابة الفاكهة. الهدف من هذا الأسلوب هو تمكين مجموعة أوسع من العلماء لاستخدام ذبابة الفاكهة كأداة للتحقيق في العمليات التي تنظم استجابة النسخي لإصابات البشرة ثقب. البشرة احدة الطبقات في ذبابة الفاكهة يوفر نظام بسيط لدراسة استجابة البشرة الجرح بعد إصابة ثقب 2. الجنين ذبابة الفاكهة هو نظام نموذجي قوية لتشريح وراثيا مراحل إصلاح الجرح، بما في ذلك الاستجابة الجرح، والالتهابات، وعودة التظهرن 3. هذا هو في جزء منه لأن العديد أو معظم لاقحي المسوخ البقاء على قيد الحياة حتى نهاية embryogenesهو وتطوير الحواجز البشرة حتى عندما يذهب الزخرفة التنموية منحرف عميقا. توصيف سابق من حفظها جيدا عامل النسخ رئيس محبب (GRH)، حدد أن الجينات المستهدفة GRH دوبا كربوكسيل (DDC) وهيدروكسيلاز التيروزين (التنوير القائل) يتم تنشيط transcriptionally حول مواقع الإصابة 4. ذبابة الفاكهة باعتباره النموذج الحي للاستجابة الجرح يوفر خط التكميلية التحقيق للمضي قدما في دراسات الثدييات التئام الجروح 5. وقد حددت الدراسات اللاحقة ذبابة الفاكهة جينات إضافية الناجم عن الجرح ووضع &quot;أدوات&quot; للعديد من الصحفيين الجرح الفلورسنت لرصد المجراة البشرة استجابة لتنظيف الجرح جرح 6. وقد ركزت التقارير الأخيرة بشأن تنظيم شفاء الجرح ذبابة الفاكهة على النمط الظاهري إغلاق الجرح، مما يسمح باكتشاف العديد من مسارات تنظيم الهجرة الخلية 7،8. مع تحليلالجرح صحفيين الفلورسنت، وقد حددت الدراسات لدينا مجموعة جديدة من الجينات المطلوبة للتعبير المترجمة من البشرة الجرح محرض الجينات 9. واحدة من مزايا أسلوب مراسل استجابة الجرح هو أن النتائج تقدم المزيد من التبصر في آلية لكيفية transduced إشارات من موقع الإصابة إلى الخلايا المجاورة. ومع ذلك، واحدة من عيوب أسلوب مراسل استجابة الجرح هو أن النتائج لا تصل مباشرة إلى الظواهر في التئام الجروح أو إصلاح. وتوسيع نطاق الاستفادة من بروتوكول الجرح ثقب نظيفة في شاشات الوراثية والكيميائية سماح المنظمين جديدة للاستجابة النسخي إلى البشرة مما أسفر عن إصابة الكشف عن هويته، وتعزيز التئام الجروح ترجمة الاكتشافات في نماذج الثدييات من العلاجات الاصابة.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="576">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:199px;">yeast</td>
			<td style="width:124px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:133px;">51475</td>
			<td style="width:121px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">apple juice</td>
			<td>Generic</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">agar</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>50-824-297</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">bleach</td>
			<td>Generic</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">halocarbon oil, 700 W</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>H8898</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">halocarbon oil, 27 W</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>H8773</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1-phenoxy-2-propanol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>484423</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">hydrogen peroxide</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>H324</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">methyl-&#946;-cyclodextrin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C4555</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">toluidine blue</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>89640</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">formaldehyde, 16%</td>
			<td>Polysciences, Inc</td>
			<td>18814-20</td>
			<td>toxic chemical</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">heptane</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>H360-1</td>
			<td>toxic chemical</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">methanol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A412-1</td>
			<td>toxic chemical</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10x PBS</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>50-899-90013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">0.5 M EGTA</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>50-255-956</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">RNase free H2O</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP2819-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:199px;">Equipment</td>
			<td style="width:124px;">Company</td>
			<td style="width:133px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:121px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Drosophila incubator</td>
			<td>Genessee Scientific</td>
			<td>59-197</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">fly cage</td>
			<td>Genessee Scientific</td>
			<td>59-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">embryo collection tube</td>
			<td>Genessee Scientific</td>
			<td>46-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">plastic Petri dish</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>50-202-037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">double-stick tape</td>
			<td>Generic</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">paintbrush</td>
			<td>Generic</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">dissection needle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-965A</td>
			<td>sharp object</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">glass cover slip</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>3306</td>
			<td>sharp object</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">microscope slide</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>4445</td>
			<td>sharp object</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">dissecting microscope</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td>Stemi-2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">capillary needle</td>
			<td>FHC</td>
			<td>30-30-1</td>
			<td>sharp object</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">needle puller</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>PC10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">microinjection needle holder</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>MINJ4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">micromanipulator</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>MN151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">inverted microscope</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td>Primo-Vert</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">glass Petri dish</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-747A</td>
			<td>sharp object</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">glass Pasteur pipette</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-063-172</td>
			<td>sharp object</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">transfer bulb</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>03-448-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Kimwipe</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>06-666A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">scintillation vial</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>03-337-7</td>
			<td>sharp object</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">orbital shaker</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td style="width:133px;">14-259-260</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1.5 ml tube</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>05-408-129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">laser scanning confocal</td>
			<td>Leica</td>
			<td>SP2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">fixation solution</td>
			<td>(5 ml)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">16% formaldehyde</td>
			<td>2.5 ml</td>
			<td></td>
			<td>toxic chemical</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10x PBS</td>
			<td>0.5 ml</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">0.5 M EGTA</td>
			<td>0.5 ml</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">RNase free H2O</td>
			<td>1.5 ml</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Halocarbon oil mix</td>
			<td>(10 ml)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">halocarbon oil, 700 W</td>
			<td>5 ml</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">halocarbon oil, 27 W</td>
			<td>5 ml</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microinjection wound assay and in vivo localization of epidermal wound response reporters in drosophila embryos.

الجنين ذبابة الفاكهة يطور طبقة البشرة قوية يخدم على حد سواء لحماية الخلايا الداخلية من البيئة الخارجية القاسية وكذلك للحفاظ على التوازن الخلوية. إصابة ثقب الإبر مع الزجاج يوفر طريقة مباشرة لتحريك البشرة الجرح الاستجابة السريعة التي ينشط الجرح صحفيين النسخي، والتي يمكن أن تصور من قبل إشارة مراسل المترجمة في الأجنة الحية أو اليرقات. كما يوفر ثقب أو الليزر إصابة الإشارات التي تشجع على توظيف hemocytes إلى موقع الجرح. من المستغرب، شديدة (من خلال وعبر) إصابة الأجنة ثقب في مرحلة متأخرة إلا نادرا يعطل التطور الجنيني الطبيعي، وأكثر من 90٪ من هذه الأجنة الجرحى البقاء على قيد الحياة إلى مرحلة البلوغ عندما يتم حقن الأجنة في المتوسط ​​للنفط التي تقلل من تسرب الفوري لالدملمف من مواقع ثقب . الإجراء الجرح لا تتطلب المجهرية للأجنة ذبابة الفاكهة، بما في ذلك المواءمة دليل للأجنة على آغلوحات ع ونقل الأجنة إلى محاذاة المجهر الشرائح. يوفر استجابة ذبابة الفاكهة البشرة الجرح فحص نظام سريع لاختبار متطلبات الوراثية من مجموعة متنوعة من الوظائف البيولوجية التي تعزز التئام الجروح، وكذلك وسيلة للكشف عن المركبات الكيميائية المحتملة التي تعزز التئام الجروح. دورة حياة قصيرة وسهلة زراعة الروتينية جعل ذبابة الفاكهة نموذج كائن قوية. يبدو ذبابة الفاكهة نظيفة التئام الجروح لتنسيق استجابة التجدد البشرة، مع الاستجابة المناعية الفطرية، في الطرق التي لا تزال قيد التحقيق، والذي يوفر نظام ممتاز للعثور على الحفظ التنظيمية آليات مشتركة لذبابة الفاكهة والثدييات البشرة جرح.

للحصول على النتائج المبينة في هذا الأسلوب، وتنصهر في إطار القراءة المفتوح للبروتين الفلورية الخضراء (GFP) إلى مروج / الجرح الناجم عن تسلسل محسن من دوبا كربوكسيل (DDC) وتنصهر DsRed لتسلسل الجرح محسن من هيدروكسيلاز التيروزين ( التنوير القائل) 4،6. في ذبابة الفاكهة الأجنة الحية، ونضوج البروتين الفلوري مراسل الجرح هو الأمثل 4-6 ساعة بعد اصابة، والذي يسمح الوقت لتراكم البروتين كافية لتصور، وكذلك الوقت المناسب لبروتين فلوري للأكسدة للدولة الفلورسنت 15. لمراقبة توطين مراسل المجهر الفلورسنت مجمع كافية. لمراقبة التكبير أعلى من توطين مراسل المجهر متحد البؤر هو الأمثل لتوليد إسقاط الحد الأقصى من المقاطع البصرية متعددة (الشكل 1). متحد البؤر التصوير في الجسم الحي من أجنة ذبابة الفاكهة تعقيدا هو راالتموجات PID الجنين. . وجهة نظر كاملة من الجنين يمكن الحصول عليها مع 20X الهدف وجهة نظر عن قرب من موقع الجرح ويمكن الحصول عليها مع 40X الهدف. وجهة نظر العلوي من البشرة مراسل الجرح التوطين ولا يمكن تصوير مع 10 أقسام متتالية البصرية 1μm. وجهة نظر الأطراف من البشرة مراسل الجرح التوطين ولا يمكن تصوير مع 40 المتتالية 1 ميكرومتر المقاطع البصرية. باستخدام أساليب معبر الجينية القياسية، فمن الممكن الجمع بين صحفيين الجرح مع الطفرات الجينية. أحد الأمثلة الواردة في هذه الورقة هو Flotillin-2 (فلو-2)، وذلك لأن كسب من بين وظيفة (ولدت من overexpression مع التعبير في كل مكان في جميع الخلايا) المسوخ الخسارة من وظيفة (أليل فارغة ولدت مع P-عنصر الإدراج) و فلو 2 تدليل على الجين المنتج فلو-2 غير الضرورية والكافية لمنع توطين DDC-GFP الجرح صحفيين 9 (أرقام 2A و 2B). باستخدام ميلبروتوكول croinjection، فمن الممكن لاختبار ما إذا كان إدخال المحاليل الكيميائية superactivates أو يحول دون توطين صحفيين الجرح. تم الأجنة جرح كيميائيا الجرحى في وقت واحد وحقنه مع نسبة 1٪ 01:04 طولويدين صبغة زرقاء والمركبات solubilized. طولويدين صبغة زرقاء يسمح لتأكيد البصرية من المركبات solubilized يجري حقنها في تجويف الجسم. أصيب الأجنة التحكم بإبرة تحتوي على كسر 1:04 نسبة 1٪ طولويدين صبغة زرقاء والمذاب دون الكيميائية. مثالين الواردة في هذه الورقة هي بيروكسيد الهيدروجين (H 2 O 2) وميثيل β-cyclodextrin (MβCD)، لأن كلا من المحاليل الكيميائية كافية لتنشيط عالميا في توطين DDC-GFP الجرح صحفيين 9 (أرقام 2C و 2D) . تم تخفيفه بيروكسيد الهيدروجين (H 2 O 2) في H 2 O إلى 0.6 م ميثيل β-cyclodextrin (MβCD) تم solubilized في 1 مM هيدروكسيد الصوديوم إلى 3 ملم. باستخدام بروتوكول الجنين التثبيت، فمن الممكن للكشف عن تفعيل النسخ من الجينات استجابة الجرح في مجال المترجمة، المحيطة موقع الجرح. أحد الأمثلة الواردة في هذه الورقة هو الموقع التهجين تحقيقات الحمض النووي الريبي لفي الكشف عن DDC والنصوص التنوير القائل 4،6،9 (أرقام 3A 3B و). <img alt="الشكل 1" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/50750/50750fig1.jpg" width="600px" /> الشكل 1. DDC-GFP والتنوير القائل-DsRed الجرح مراسل التعريب. Brightfield والصور الفلورسنت في اصابة الأجنة البرية من نوع (أ) عرض للأعلى DDC-GFP مراسل الجرح. (B) عرض للأعلى التنوير القائل-DsRed الجرح المراسل. تم جمع كافة الصور على ايكا المجهر متحد البؤر SP2، مع 20X الهدف. سهام بمناسبة موقع الجرح. الخطوط المتقطعة في لوحة البياناتو بمناسبة الخطوط العريضة للأجنة. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50750/50750fig1highres.jpg" target="_blank">اضغط هنا لمشاهدة صورة بشكل اكبر</a> . <img alt="الرقم 2" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/50750/50750fig2.jpg" width="500px" /> الشكل 2. توطين مراسل DDC-GFP الجرح في الخلفيات متحولة الوراثية والكيميائية microinjected الأجنة. Brightfield والصور الفلورسنت من الجرحى Flotillin-2 (فلو-2) الأجنة متحولة. (A) لتخفيف من وظيفة فلو-2} {KG00210 المسوخ، التوسع في النشاط الصحفي في جميع خلايا البشرة. (B) كسب من بين وظيفة فلو 2 (المدرع-GAL4، UAS-Flo2) المسوخ، وتثبيط النشاط مراسل في جميع خلايا البشرة. (C) بيروكسيد الهيدروجين (H 2 O 2 ) حقن مكروي الحل، وتوسيع مندوبORTER النشاط في جميع خلايا البشرة. (D) ميثيل β-cyclodextrin (MβCD) حقن مكروي الحل، والتوسع في النشاط الصحفي في جميع خلايا البشرة. تم جمع كافة الصور على ايكا المجهر متحد البؤر SP2، مع 20X الهدف. سهام بمناسبة موقع الجرح. الخطوط المتقطعة في لوحات البيانات بمناسبة الخطوط العريضة للأجنة. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50750/50750fig2highres.jpg" target="_blank">اضغط هنا لمشاهدة صورة بشكل اكبر</a> . <img alt="الرقم 3" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/50750/50750fig3.jpg" width="600px" /> الرقم 3. الكشف عن استجابة الجرح نسخ الرنا الجينات. الصور نيون من الموقع التهجين والكشف عن الحمض النووي الريبي في الأجنة في الجرحى النوع البري. DDC (A) والتنوير القائل (B) نسخ الحمض النووي الريبي تتجمع حول موقع الجرح. وكانت كل الصور جامعيتيد على ايكا المجهر متحد البؤر SP2، مع الهدف 20X. سهام بمناسبة موقع الجرح. الخطوط المتقطعة في لوحات البيانات بمناسبة الخطوط العريضة للأجنة. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50750/50750fig3highres.jpg" target="_blank">اضغط هنا لمشاهدة صورة بشكل اكبر</a> . <img alt="الجدول 1" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/50750/50750table1.jpg" width="600px" /> الجدول 1. ملخص للصحفيين ردا البشرة الجرح. الإدراج من صحفيين ردا الجرح الأربعة (DDC، التنوير القائل، ام اس ان، KKV) متوفرة على كل من الكروموسومات الثانية والثالثة. كل من صحفيين ردا الجرح تنشيط الجين مضان (GFP أو DsRed) في عدد محدود من خلايا البشرة المحيطة بموقع الإصابة ثقب في البرية من نوع الخلفية (مثل النمط الظاهري &quot;المحلي&quot;). DDC وام اس ان الجرح للصحفيين ردا تتطلب GRH ل تفعيل fluorescenم الجين بعد إصابة ثقب (على سبيل المثال &quot;لا شيء&quot; النمط الظاهري). كل من صحفيين الجرح تتطلب فلو-2 لتوطين الجين مضان بعد إصابة ثقب (مثل النمط الظاهري &quot;العالمية&quot;). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50750/50750table1highres.jpg" target="_blank">اضغط هنا لمشاهدة صورة بشكل اكبر</a> .

Watch this Scientific Journal Video about Microinjection Wound Assay and In vivo Localization of Epidermal Wound Response Reporters in Drosophila Embryos. at JoVE.com

Microinjection Wound Assay and In vivo Localization of Epidermal Wound Response Reporters in Drosophila Embryos.

البشرة الجنينية من الأجنة مرحلة متأخرة جدا ذبابة الفاكهة يوفر نظام في الجسم الحي لتحليل استجابة ثقب الجرح سريعا ويمكن دمجها مع التلاعب الجيني أو علاجات حقن مكروي الكيميائية للمضي قدما دراسات في التئام الجروح للترجمة في نماذج الثدييات.

حقن مكروي الجرح الفحص و<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; توطين البشرة الجرح مراسلون الاستجابة في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; الأجنة.

The Drosophila embryo develops a robust epidermal layer that serves both to protect the internal cells from a harsh external environment as well as to ...

microinjection-wound-assay-vivo-localization-epidermal-wound-response

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Microinjection Wound Assay and In vivo Localization of Epidermal Wound Response Reporters in Drosophila Embryos.

12.4K Views.  The City College of New York.  البشرة الجنينية من الأجنة مرحلة متأخرة جدا ذبابة الفاكهة يوفر نظام في الجسم الحي لتحليل استجابة ثقب الجرح سريعا ويمكن دمجها مع التلاعب الجيني أو علاجات حقن مكروي الكيميائية للمضي قدما دراسات في التئام الجروح للترجمة في نماذج ال?...

Video: Microinjection Wound Assay and In vivo Localization of Epidermal Wound Response Reporters in Drosophila Embryos.

Creating Two-Dimensional Patterned Substrates for Protein and Cell Confinement

Microcontact printing provides a rapid, highly reproducible method for the creation of well-defined patterned substrates.1 While microcontact printing can be employed to directly print a large number of molecules, including proteins,2 DNA,3 and silanes,4 the formation of self-assembled monolayers (SAMs) from long chain alkane thiols on gold provides a simple way to confine proteins and cells to specific patterns containing adhesive and resistant regions. This confinement can be used to control cell morphology and is useful for examining a variety of questions in protein and cell biology. Here, we describe a general method for the creation of well-defined protein patterns for cellular studies.5 This process involves three steps: the production of a patterned master using photolithography, the creation of a PDMS stamp, and microcontact printing of a gold-coated substrate. Once patterned, these cell culture substrates are capable of confining proteins and/or cells (primary cells or cell lines) to the pattern.
The use of self-assembled monolayer chemistry allows for precise control over the patterned protein/cell adhesive regions and non-adhesive regions; this cannot be achieved using direct protein stamping. Hexadecanethiol, the long chain alkane thiol used in the microcontact printing step, produces a hydrophobic surface that readily adsorbs protein from solution. The glycol-terminated thiol, used for backfilling the non-printed regions of the substrate, creates a monolayer that is resistant to protein adsorption and therefore cell growth.6 These thiol monomers produce highly structured monolayers that precisely define regions of the substrate that can support protein adsorption and cell growth. As a result, these substrates are useful for a wide variety of applications from the study of intercellular behavior7 to the creation of microelectronics.8
While other types of monolayer chemistry have been used for cell culture studies, including work from our group using trichlorosilanes to create patterns directly on glass substrates,9 patterned monolayers formed from alkane thiols on gold are straight-forward to prepare. Moreover, the monomers used for monolayer preparation are commercially available, stable, and do not require storage or handling under inert atmosphere. Patterned substrates prepared from alkane thiols can also be recycled and reused several times, maintaining cell confinement.10

Self-assembled monolayers (SAMs) formed from long chain alkane thiols on gold provide well-defined substrates for the formation of protein patterns and cell confinement. Microcontact printing of hexadecanethiol using a polydimethylsiloxane (PDMS) stamp followed by backfilling with a glycol-terminated alkane thiol monomer produces a pattern where protein and cells adsorb only to the stamped hexadecanethiol region.

إنشاء ثنائي الأبعاد ركائز منقوشة على الحبس البروتين والخلايا

Microcontact printing provides a rapid, highly reproducible method for the creation of well-defined patterned substrates.1  While microcontact printing ...

Optical Mapping of Action Potentials and Calcium Transients in the Mouse Heart

The mouse heart is a popular model for cardiovascular studies due to the existence of low cost technology for genetic engineering in this species. Cardiovascular physiological phenotyping of the mouse heart can be easily done using fluorescence imaging employing various probes for transmembrane potential (Vm), calcium transients (CaT), and other parameters. Excitation-contraction coupling is characterized by action potential and intracellular calcium dynamics; therefore, it is critically important to map both Vm and CaT simultaneously from the same location on the heart1-4. Simultaneous optical mapping from Langendorff perfused mouse hearts has the potential to elucidate mechanisms underlying heart failure, arrhythmias, metabolic disease, and other heart diseases. Visualization of activation, conduction velocity, action potential duration, and other parameters at a myriad of sites cannot be achieved from cellular level investigation but is well solved by optical mapping1,5,6. In this paper we present the instrumentation setup and experimental conditions for simultaneous optical mapping of Vm and CaT in mouse hearts with high spatio-temporal resolution using state-of-the-art CMOS imaging technology. Consistent optical recordings obtained with this method illustrate that simultaneous optical mapping of Langendorff perfused mouse hearts is both feasible and reliable.

This paper details the dissection procedure, instrumental setup, and experimental conditions during optical mapping of transmembrane potential (Vm) and intracellular calcium transient (CaT) in intact isolated Langendorff perfused mouse hearts.

رسم الخرائط البصرية إمكانيات العمل والعابرون الكالسيوم في القلب ماوس

The mouse heart is a popular model for cardiovascular studies due to the existence of low cost technology for genetic engineering in this species. ...

Simple Microfluidic Devices for in vivo Imaging of C. elegans, Drosophila and Zebrafish

Micro fabricated fluidic devices provide an accessible micro-environment for in vivo studies on small organisms. Simple fabrication processes are available for microfluidic devices using soft lithography techniques 1-3. Microfluidic devices have been used for sub-cellular imaging 4,5, in vivo laser microsurgery 2,6 and cellular imaging 4,7. In vivo imaging requires immobilization of organisms. This has been achieved using suction 5,8, tapered channels 6,7,9, deformable membranes 2-4,10, suction with additional cooling 5, anesthetic gas 11, temperature sensitive gels 12, cyanoacrylate glue 13 and anesthetics such as levamisole 14,15. Commonly used anesthetics influence synaptic transmission 16,17 and are known to have detrimental effects on sub-cellular neuronal transport 4. In this study we demonstrate a membrane based poly-dimethyl-siloxane (PDMS) device that allows anesthetic free immobilization of intact genetic model organisms such as Caenorhabditis elegans (C. elegans), Drosophila larvae and zebrafish larvae. These model organisms are suitable for in vivo studies in microfluidic devices because of their small diameters and optically transparent or translucent bodies. Body diameters range from ~10 &mu;m to ~800 &mu;m for early larval stages of C. elegans and zebrafish larvae and require microfluidic devices of different sizes to achieve complete immobilization for high resolution time-lapse imaging. These organisms are immobilized using pressure applied by compressed nitrogen gas through a liquid column and imaged using an inverted microscope. Animals released from the trap return to normal locomotion within 10 min.
We demonstrate four applications of time-lapse imaging in C. elegans namely, imaging mitochondrial transport in neurons, pre-synaptic vesicle transport in a transport-defective mutant, glutamate receptor transport and Q neuroblast cell division. Data obtained from such movies show that microfluidic immobilization is a useful and accurate means of acquiring in vivo data of cellular and sub-cellular events when compared to anesthetized animals (Figure 1J and 3C-F 4).
Device dimensions were altered to allow time-lapse imaging of different stages of C. elegans, first instar Drosophila larvae and zebrafish larvae. Transport of vesicles marked with synaptotagmin tagged with GFP (syt.eGFP) in sensory neurons shows directed motion of synaptic vesicle markers expressed in cholinergic sensory neurons in intact first instar Drosophila larvae. A similar device has been used to carry out time-lapse imaging of heartbeat in ~30 hr post fertilization (hpf) zebrafish larvae. These data show that the simple devices we have developed can be applied to a variety of model systems to study several cell biological and developmental phenomena in vivo.

Simple Microfluidic Devices for in vivo Imaging of C. elegans, Drosophila and Zebrafish

A simple microfluidic device has been developed to perform anesthetic free in vivo imaging of C. elegans, intact Drosophila larvae and zebrafish larvae. The device utilizes a deformable PDMS membrane to immobilize these model organisms in order to perform time lapse imaging of numerous processes such as heart beat, cell division and sub-cellular neuronal transport. We demonstrate the use of this device and show examples of different types of data collected from different model systems.

ميكروفلويديك أجهزة بسيطة لل<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; التصوير من<em&gt; C. ايليجانس</em&gt;،<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; واسماك الزرد

Micro fabricated fluidic devices provide an accessible micro-environment for in vivo studies on small organisms. Simple fabrication processes are ...

Quantification of Global Diastolic Function by Kinematic Modeling-based Analysis of Transmitral Flow via the Parametrized Diastolic Filling Formalism

Quantitative cardiac function assessment remains a challenge for physiologists and clinicians.&#160;Although historically invasive methods have comprised the only means available, the development of noninvasive imaging modalities (echocardiography, MRI, CT) having high temporal and spatial resolution provide a new window for quantitative diastolic function assessment. Echocardiography is the agreed upon standard for diastolic function assessment, but indexes in current clinical use merely utilize selected features of chamber dimension (M-mode) or blood/tissue motion (Doppler) waveforms without incorporating the physiologic causal determinants of the motion itself.&#160;The recognition that all left ventricles (LV) initiate filling by serving as mechanical suction pumps allows global diastolic function to be assessed based on laws of motion that apply to all chambers. What differentiates one heart from another are the parameters of the equation of motion that governs filling. Accordingly, development of the Parametrized Diastolic Filling (PDF) formalism&#160;has shown that the entire range of clinically observed early transmitral flow (Doppler E-wave) patterns are extremely well fit by the laws of damped oscillatory motion.&#160;This permits analysis of individual E-waves in accordance with a causal mechanism (recoil-initiated suction) that yields three (numerically) unique lumped parameters whose physiologic analogues are chamber stiffness (k), viscoelasticity/relaxation (c), and load (xo).&#160;The recording of transmitral flow (Doppler E-waves) is standard practice in clinical cardiology and, therefore, the echocardiographic recording method is only briefly reviewed. Our focus is on determination of the PDF parameters from routinely recorded E-wave data.&#160;As the highlighted results indicate, once the PDF parameters have been obtained from a suitable number of load varying E-waves, the investigator is free to use the parameters or construct indexes from the parameters (such as stored energy 1/2kxo2, maximum A-V pressure gradient kxo, load independent index of diastolic function, etc.) and select the aspect of physiology or pathophysiology to be quantified.

Accurate, causality-based quantification of global diastolic function has been achieved by kinematic modeling-based analysis of transmitral flow via the Parametrized Diastolic Filling (PDF) formalism. PDF generates unique stiffness, relaxation,&#160;and load parameters and elucidates &#39;new&#39; physiology while providing sensitive and specific indexes of dysfunction.

الكمي لالعالمي الانبساطي وظيفة عن طريق تحليل يستند النمذجة-الحركية من Transmitral التدفق عبر الشكلية ملء Parametrized الانبساطي

Quantitative cardiac function assessment remains a challenge for physiologists and clinicians.&#160;Although historically invasive methods have comprised ...

Fabrication and Characterization of a Conformal Skin-like Electronic System for Quantitative, Cutaneous Wound Management

Recent advances in the development of electronic technologies and biomedical devices offer opportunities for non-invasive, quantitative assessment of cutaneous wound healing on the skin. Existing methods, however, still rely on visual inspections through various microscopic tools and devices that normally include high-cost, sophisticated systems and require well trained personnel for operation and data analysis. Here, we describe methods and protocols to fabricate a conformal, skin-like electronics system that enables conformal lamination to the skin surface near the wound tissues, which provides recording of high fidelity electrical signals such as skin temperature and thermal conductivity. The methods of device fabrication provide details of step-by-step preparation of the microelectronic system that is completely enclosed with elastomeric silicone materials to offer electrical isolation. The experimental study presents multifunctional, biocompatible, waterproof, reusable, and flexible/stretchable characteristics of the device for clinical applications. Protocols of clinical testing provide an overview and sequential process of cleaning, testing setup, system operation, and data acquisition with the skin-like electronics, gently mounted on hypersensitive, cutaneous wound and contralateral tissues on patients.

This article presents methods to fabricate and characterize a conformal, skin-like electronic system and protocols for the use in clinical applications, particularly on cutaneous wound management.

تصنيع وتوصيف نظام الكتروني مثل الجلد امتثالي لإدارة الكمي، الجلدي الجرح

Recent advances in the development of electronic technologies and biomedical devices offer opportunities for non-invasive, quantitative assessment of ...

An In Vitro Organ Culture Model of the Murine Intervertebral Disc

Intervertebral disc (IVD) degeneration is a significant contributor to low back pain. The IVD is a fibrocartilaginous joint that serves to transmit and dampen loads in the spine. The IVD consists of a proteoglycan-rich nucleus pulposus (NP) and a collagen-rich annulus fibrosis (AF) sandwiched by cartilaginous end-plates. Together with the adjacent vertebrae, the vertebrae-IVD structure forms a functional spine unit (FSU). These microstructures contain unique cell types as well as unique extracellular matrices. Whole organ culture of the FSU preserves the native extracellular matrix, cell differentiation phenotypes, and cellular-matrix interactions. Thus, organ culture techniques are particularly useful for investigating the complex biological mechanisms of the IVD. Here, we describe a high-throughput approach for culturing whole lumbar mouse FSUs that provides an ideal platform for studying disease mechanisms and therapies for the IVD. Furthermore, we describe several applications that utilize this organ culture method to conduct further studies including contrast-enhanced microCT imaging and three-dimensional high-resolution finite element modeling of the IVD.

An In Vitro Organ Culture Model of the Murine Intervertebral Disc

Whole organ culture of the intervertebral disc (IVD) preserves the native extracellular matrix, cell phenotypes, and cellular-matrix interactions. Here we describe an IVD culture system using mouse lumbar and caudal IVDs in their functional spinal units and several applications utilizing this system.

ل<em&gt; في المختبر</em&gt; نموذج الثقافة الجهاز من الفئران فقرات القرص

Intervertebral disc (IVD) degeneration is a significant contributor to low back pain. The IVD is a fibrocartilaginous joint that serves to transmit and ...

Characterizing Cell Migration Within Three-dimensional In Vitro Wound Environments

Currently, most in vitro models of wound healing, such as well-established scratch assays, involve studying cell migration and wound closure on two-dimensional surfaces. However, the physiological environment in which in vivo wound healing takes place is three-dimensional rather than two-dimensional. It is becoming increasingly clear that cell behavior differs greatly in two-dimensional vs. three-dimensional environments; therefore, there is a need for more physiologically relevant in vitro models for studying cell migration behaviors in wound closure. The method described herein allows for the study of cell migration in a three-dimensional model that better reflects physiological conditions than previously established two-dimensional scratch assays. The purpose of this model is to evaluate cell outgrowth via the examination of cell migration away from a spheroid body embedded within a fibrin matrix in the presence of pro- or anti-migratory factors. Using this method, cell outgrowth from the spheroid body in a three-dimensional matrix can be observed and is easily quantifiable over time via brightfield microscopy and analysis of spheroid body area. The effect of pro-migratory and/or inhibitory factors on cell migration can also be evaluated in this system. This method provides researchers with a simple method of analyzing cell migration in three-dimensional wound associated matrices in vitro, thus increasing the relevance of in vitro cell studies prior to the use of in vivo animal models.

Characterizing Cell Migration Within Three-dimensional In Vitro Wound Environments

The goal of this protocol is to evaluate the effect of pro- and anti-migratory factors on cell migration within a three-dimensional fibrin matrix.

وصف الهجرة الخلية في إطار ثلاثي الأبعاد في المختبر الجرح البيئات

Currently, most in vitro models of wound healing, such as well-established scratch assays, involve studying cell migration and wound closure on ...

Microinjection of Western Corn Rootworm, Diabrotica virgifera virgifera, Embryos for Germline Transformation, or CRISPR/Cas9 Genome Editing

The western corn rootworm (WCR) is an important pest of corn and is well known for its ability to rapidly adapt to pest management strategies. Although RNA interference (RNAi) has proved to be a powerful tool for studying WCR biology, it has its limitations. Specifically, RNAi itself is transient (i.e. does not result in long-term Mendelian inheritance of the associated phenotype), and it requires knowing the DNA sequence of the target gene. The latter can be limiting if the phenotype of interest is controlled by poorly conserved, or even novel genes, because identifying useful targets would be challenging, if not impossible. Therefore, the number of tools in WCR&#39;s genomic toolbox should be expanded by the development of methods that could be used to create stable mutant strains and enable sequence-independent surveys of the WCR genome. Herein, we detail the methods used to collect and microinject precellular WCR embryos with nucleic acids. While the protocols described herein are aimed at the creation of transgenic WCR, CRISPR/Cas9-genome editing could also be performed using the same protocols, with the only difference being the composition of the solution injected into the embryos.

Microinjection of Western Corn Rootworm, Diabrotica virgifera virgifera, Embryos for Germline Transformation, or CRISPR/Cas9 Genome Editing

Here we present protocols for collecting and microinjecting precellular western corn rootworm embryos for the purpose of performing functional-genomic assays such as germline transformation and CRISPR/Cas9-genome editing.

Microinjection "روتوورم الذرة الغربية"، ظهرت فيرجيفيرا فيرجيفيرا، والأجنة لتحويل الخط، أو تحرير الجينوم كريسبر/Cas9

The western corn rootworm (WCR) is an important pest of corn and is well known for its ability to rapidly adapt to pest management strategies. Although ...

Rigid Embedding of Fixed and Stained, Whole, Millimeter-Scale Specimens for Section-free 3D Histology by Micro-Computed Tomography

For over a hundred years, the histological study of tissues has been the gold standard for medical diagnosis because histology allows all cell types in every tissue to be identified and characterized. Our laboratory is actively working to make technological advances in X-ray micro-computed tomography (micro-CT) that will bring the diagnostic power of histology to the study of full tissue volumes at cellular resolution (i.e., an X-ray Histo-tomography modality). Toward this end, we have made targeted improvements to the sample preparation pipeline. One key optimization, and the focus of the present work, is a straightforward method for rigid embedding of fixed and stained millimeter-scale samples. Many of the published methods for sample immobilization and correlative micro-CT imaging rely on placing the samples in paraffin wax, agarose, or liquids such as alcohol. Our approach extends this work with custom procedures and the design of a 3-dimensional printable apparatus to embed the samples in an acrylic resin directly into polyimide tubing, which is relatively transparent to X-rays. Herein, sample preparation procedures are described for the samples from 0.5 to 10 mm in diameter, which would be suitable for whole zebrafish larvae and juveniles, or other animals and tissue samples of similar dimensions. As proof of concept, we have embedded the specimens from Danio, Drosophila, Daphnia, and a mouse embryo; representative images from 3-dimensional scans for three of these samples are shown. Importantly, our methodology leads to multiple benefits including rigid immobilization, long-term preservation of laboriously-created resources, and the ability to re-interrogate samples.

We developed protocols and designed a custom apparatus to enable embedding of millimeter-scale specimens. We present sample preparation procedures with an emphasis on embedding in acrylic resin and polyimide tubing to achieve rigid immobilization and long-term storage of specimens for the interrogation of tissue architecture and cell morphology by micro-CT.

جامدة التضمين من الثابتة والملون، إجمالاً، مقياس الملليمتر العينات 3D خالية من قسم علم الأنسجة بالتصوير المقطعي الصغيرة المحسوبة

For over a hundred years, the histological study of tissues has been the gold standard for medical diagnosis because histology allows all cell types in ...

Manipulation of Single Neural Stem Cells and Neurons in Brain Slices using Robotic Microinjection

A central question in developmental neurobiology is how neural stem and progenitor cells form the brain. To answer this question, one needs to label, manipulate, and follow single cells in the brain tissue with high resolution over time. This task is extremely challenging due to the complexity of tissues in the brain. We have recently developed a robot, that guide a microinjection needle into brain tissue upon utilizing images acquired from a microscope to deliver femtoliter volumes of solution into single cells. The robotic operation increases resulting an overall yield that is an order of magnitude greater than manual microinjection and allows for precise labeling and flexible manipulation of single cells in living tissue. With this, one can microinject hundreds of cells within a single organotypic slice. This article demonstrates the use of the microinjection robot for automated microinjection of neural progenitor cells and neurons in the brain tissue slices. More broadly, it can be used on any epithelial tissue featuring a surface that can be reached by the pipette. Once set up, the microinjection robot can execute 15 or more microinjections per minute. The microinjection robot because of its throughput and versality will make microinjection a broadly straightforward high-performance cell manipulation technique to be used in bioengineering, biotechnology, and biophysics for performing single-cell analyses in organotypic brain slices.

This protocol demonstrates the use of a robotic platform for microinjection into single neural stem cells and neurons in brain slices. This technique is versatile and offers a method of tracking cells in tissue with high spatial resolution.

التلاعب بالخلايا الجذعية العصبية والخلايا العصبية في شرائح الدماغ باستخدام الحقن المجهري الروبوتي

A central question in developmental neurobiology is how neural stem and progenitor cells form the brain. To answer this question, one needs to label, ...