يعترف الكتاب دعم تمويل المعاهد الوطنية للصحة / NIDCR R00DE018212 (SPH)، NIH/NIDCR-R01DE022032 (SPH)، المعاهد الوطنية للصحة / NIDCR T32 DE07306 (AJ، رابطة الدفاع اليهودية)، المعاهد الوطنية للصحة / NCRR S10RR026645، (SPH) وأقسام علوم طب الأسنان الوقائي والتصالحية و العلوم فموي وجهي، سان فرانسيسكو. بالإضافة إلى ذلك، والكتاب يعترف Xradia زمالة الدراسات العليا (AJ)، Xradia شركة، بليسانتون، كاليفورنيا. المؤلفين نشكر الدكتور كاثرين Grandfield، سان فرانسيسكو لتقديم المساعدة لها مع تجهيز آخر البيانات؛ الدكاترة. ستيفن وينر وجيلي نافيه، معهد وايزمان للعلوم في رحوفوت، وإسرائيل، والدكتور رون شاهار، الجامعة العبرية في القدس، إسرائيل لإجراء مناقشات الثاقبة الخاصة لفي الجهاز تحميل الموقع. فإن الكتاب أود أيضا أن أشكر الحيوية والهندسة الحيوية مرفق MicroCT التصوير في سان فرانسيسكو لاستخدام مايكرو XCT والجهاز في التحميل الموقع.

السكن الحيوان والقتل الرحيم: تم إيواء جميع الحيوانات المستخدمة في هذه المظاهرة في ظل ظروف خالية من مسببات الأمراض وفقا للمبادئ التوجيهية للجنة المؤسسي رعاية الحيوان واستخدام (IACUC) والمعهد الوطني للصحة (NIH). توفير الحيوانات مع معيار يصعب بيليه تشاو الفئران وعفوي المياه. الموت ببطء الحيوانات عبر وسيلة من خطوتين من الاختناق ثاني أكسيد الكربون، بضع الصدر الثنائية وفقا للبروتوكول قياسي من سان فرانسيسكو كما وافقت عليها IACUC. أداء اختبار النشاط الحيوي في غضون 24 ساعة من التضحية الحيوانية لتجنب تدهور الأنسجة. 1. إعداد وتشريح الفأر أو الفك الأسفل الفك <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الفك السفلي الفئران بقطع بلطف الأنسجة والأنسجة العضلية الغشائي المرفقات مع الحفاظ على الفك السفلي بأكمله، بما في ذلك عملية المنقاري وعملية لقمي (الشكل 1) 15. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> hemimandibles منفصلة بالسيارةقطع efully النسيج الليفي من الارتفاق الفك السفلي بشفرة المشرط. ملاحظة: العمليات التاجية واللقمة، والفرع من الفك السفلي (الشكل 1) ينبغي إزالتها إذا انها تعرقل جسديا اختبار النشاط الحيوي من المولي الثانية 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع القواطع من دون تعريض غرفة اللب حتى لا تعوق التحميل من الرحى. </li></ol> 2. تحضير العينة لفي الموقع ضاغطة تحميل (الشكل 2) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شل العينة على كعب الصلب باستخدام المواد التي هي أشد بكثير من العينة التجريبية قبل تحميله في الجهاز التحميل الموقع (الشكل 2A) في. ملاحظة: تم استخدام ميثاأكريلات (PMMA) لشل حركة العينة في هذه الدراسة والزائدة، إن وجدت، وإزالتها باستخدام المستكشف الأسنان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> محاذاة سطح الإطباق من المولي (ق) من الفائدة بالتوازي مع القرص العينة فؤاد المعادن باستخدام حافة مستقيمة في كل منطائرات (أي إنسي-القاصي والشدق اللغات). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إنشاء حوض بأداة حادة المحيطة الأضراس. ملاحظة: يجب أن هذا الفضاء بمثابة &quot;خندق&quot; لاحتواء السائل الزائد والحفاظ على ترطيب الأنسجة أثناء التحميل في الموقع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد سطح الأسنان لبناء لمتحدة المركز (الشكل 2B) أو غريب الأطوار (الشكل 2C) التحميل باستخدام مركب الأسنان. حفر سطح الأسنان في المصالح مع 35٪ هلام حامض الفوسفوريك على سطح الإطباق لمدة 15 ثانية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطف منمش جيدا بالماء منزوع الأيونات وتجفيف السطح باستخدام حقنة الهواء / الماء أو اسطوانة الهواء المضغوط. مع المستكشف، وانتشار قطرة من عامل الربط في الشرفات المفتوحة في طبقة رقيقة. علاج مركب مع ضوء علاج الأسنان. ملاحظة: يجب أن يتم تنفيذ جميع الخطوات التي تنطوي على المركبة دون الضوء المباشر من مصباح. ان مثل هذه الظروف غير مرغوب فيه تسريع عملية البلمرة، وقد يزيد عدد الجياعد منع تحديد المكان المناسب للمركب. إضاءة الغرفة هو مقبول. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة عامل الربط الزائدة من الأسنان المجاورة مع مشرط الغرامة أو شفرة حلاقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع مركب الأسنان flowable على السطح بعد إعداد السطح وانتشاره في الأخاديد من المولي (ق) من الفائدة باستخدام المستكشف الأسنان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كشف مركب لعلاج الأسنان الخفيفة لمدة 30 ثانية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> العفن وتراكم الإطباق من حوالي 3-4 مم باستخدام الراتنج المركب الأسنان، من الطائرة الإطباق من المولي (ق) من الفائدة وعلاج ضوء لمدة 30 ثانية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحد الأعلى للتراكم مركب إلى سطح مستو مواز لتمكين نظام التحميل متناسقة عبر جميع العينات باستخدام حافة مستقيمة وقطعة عالية السرعة اليد. ملاحظة: أثناء اختبار النشاط الحيوي، يجب أن يتم تخزين العينات الأخرى في تريس فوسفات حل مخزنة (TBS) مع 50 ملغ / مل البنسلين، الستربتوميسين و15. </li></ol> 3. تحميل الانجراف جهاز وصلابة، مادة الملكية التفريق القدرة، تحميل الموقع من الليفية المشتركة في <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأمين العينة مع تراكم مركب على سندان مرحلة التحميل، واختبار للتحميل موحدة كما هو مبين في الشكل 2B. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع ورقة يعبرون عنه على سطح المركب تليها تحميل العينة إلى حمولة محدودة للتحقق من مركزية أو غريب الأطوار التحميل (أرقام 2B و 2C). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع Kimwipe غارقة TBS حول العينة لضمان عينة الماء. جعل الحوض الصغير حول العينة وملء مع TBS للحفاظ على الجهاز رطب أثناء التصوير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حمل الذروة ومعدل الإدخال النزوح في البرنامج Deben لضغط الرحى لحمل الذروة المرجوة بمعدل النزوح التالية الشلل في نصف الفك. ملاحظة: يجب أن تتضمن قراءات نموذجية حمولة الرجعية كما يتم ضغط المواد مع مرور الوقت (حساسية تحميل محول = 0.1N). من الحمل لمرة والنزوح الوقت، ينبغي الحصول على منحنى الحمل التشريد للمواد مضغوطة 16-18. باستخدام البيانات التي تم جمعها من دورات التحميل، ويمكن أيضا أن تحدد الخصائص المختلفة للمشترك. ينبغي أن يحسب صلابة من المشترك من خلال اتخاذ المنحدر من الجزء خطي (حوالي الماضي 30٪ من البيانات) للمرحلة التحميل من الحمل مقابل منحنى الإزاحة 19. </li></ol> 4. تلطيخ من الأنسجة لينة، وPDL، مع حمض الفسفوتنغستيك (منطقة التجارة التفضيلية) ملاحظة: لتعزيز الأشعة السينية التوهين المقابل، فإن PDL ينبغي ملطخة 5٪ لمنطقة التجارة التفضيلية حل 20. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الردم منطقة التجارة التفضيلية حل تلطيخ إلى 1.8 مل نظيفة الزجاج carpule ووضع carpule تحميلها في حقنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن محلول ببطء (5 دقيقة / carpule) في PDL الفضاء من الأسنان المجاورة لمنع الضرر الهيكلي للأنسجة اللثة المحيطة المولي من الفائدة. ملاحظة: يجب أن الخطوات المذكورة أعلاه بيتم حقن ه المتكررة حتى حوالي 5 carpules كامل (9 مل) من الحل، وسمحت في التدفق إلى الأنسجة المحيطة بها. ويمكن أيضا أن العينات تكون غارقة بين عشية وضحاها هيأهم في حل PTA المتبقية (8 ساعات). </li></ol> 5. أوصت إعدادات المسح الضوئي μ-XCT أداء م XCT مع إعدادات المسح التالية: <table border="1" cellpadding="0" cellspacing="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> التكبير الهدف </td><td> 4X، 10X </td></tr><tr><td></td><td> 1،800 الصور </td></tr><tr><td> الأشعة السينية أنبوب الجهد </td><td> 75 KVP (50 KVP منطقة التجارة التفضيلية لعينات الملون) </td></tr><tr><td></td><td> 8 W </td></tr><tr><td> التعرض التوقيت </td><td> ~ 8-25 ثانية * </td></tr><tr><td></td><td> ~ 4 ميكرومتر (الهدف 4X)، ~ 2 ميكرومتر (الهدف 10X) ** </td></tr></tbody></table> * وقت التعرض يمكن أن تختلف على أساس الهندسة والكثافة الضوئية للعينة والأشعة السينية أنبوب فوltage. ** بكسل القرار الفعلية تختلف قليلا استنادا إلى تكوين المصدر، عينة، وكاشف.

<ol>
	<li>Popowics, T. E., Rensberger, J. M., Herring, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enamel+microstructure+and+microstrain+in+the+fracture+of+human+and+pig+molar+cusps.">Enamel microstructure and microstrain in the fracture of human and pig molar cusps.</a> Arch. Oral Biol. 49, 595-605 (2004).</li><li>Jantarat, J., Palamara, J. E., Messer, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+investigation+of+cuspal+deformation+and+delayed+recovery+after+occlusal+loading.">An investigation of cuspal deformation and delayed recovery after occlusal loading.</a> J. Dent. 29, 363-370 (2001).</li><li>Jantarat, J., Panitvisai, P., Palamara, J. E., Messer, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+methods+for+measuring+cuspal+deformation+in+teeth.">Comparison of methods for measuring cuspal deformation in teeth.</a> J. Dent. 29, 75-82 (2001).</li><li>Asundi, A., Kishen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+strain+gauge+and+photoelastic+analysis+of+in+vivo+strain+and+in+vitro+stress+distribution+in+human+dental+supporting+structures.">A strain gauge and photoelastic analysis of in vivo strain and in vitro stress distribution in human dental supporting structures.</a> Arch. Oral Biol. 45, 543-550 (2000).</li><li>Asundi, A., Kishen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advanced+digital+photoelastic+investigations+on+the+tooth-bone+interface.">Advanced digital photoelastic investigations on the tooth-bone interface.</a> J. Biomed. Opt. 6, 224-230 (2001).</li><li>Wang, R. Z., Weiner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strain-structure+relations+in+human+teeth+using+Moire+fringes.">Strain-structure relations in human teeth using Moire fringes.</a> J. Biomech. 31, 135-141 (1998).</li><li>Wood, J. D., Wang, R., Weiner, S., Pashley, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+of+tooth+deformation+caused+by+moisture+change+using+moire+interferometry.">Mapping of tooth deformation caused by moisture change using moire interferometry.</a> Dent. Mater. 19, 159-166 (2003).</li><li>Dong-Xu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulus+of+elasticity+of+human+periodontal+ligament+by+optical+measurement+and+numerical+simulation.">Modulus of elasticity of human periodontal ligament by optical measurement and numerical simulation.</a> Angle Orthod. 81, 229-236 (2011).</li><li>Li, J., Li, H., Fok, A. S., Watts, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+correlations+of+material+parameters+of+light-cured+dental+composites.">Multiple correlations of material parameters of light-cured dental composites.</a> 25, 829-836 (2009).</li><li>Zhang, D., Arola, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+digital+image+correlation+to+biological+tissues.">Applications of digital image correlation to biological tissues.</a> J. Biomed. Opt. 9, 691-699 (2004).</li><li>Zhang, D., Mao, S., Lu, C., Romberg, E., Arola, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dehydration+and+the+dynamic+dimensional+changes+within+dentin+and+and+enamel.">Dehydration and the dynamic dimensional changes within dentin and and enamel.</a> Dent. Mater. 25, 937-945 (2009).</li><li>Qian, L., Todo, M., Morita, Y., Matsushita, Y., Koyano, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deformation+analysis+of+the+periodontium+considering+the+viscoelasticity+of+the+periodontal.">Deformation analysis of the periodontium considering the viscoelasticity of the periodontal.</a> 25, 1285-1292 (2009).</li><li>Lin, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomechanics+of+a+bone-periodontal+ligament-tooth+fibrous+joint.">Biomechanics of a bone-periodontal ligament-tooth fibrous joint.</a> J. Biomech. , (2012).</li><li>Qian, L., Todo, M., Morita, Y., Matsushita, Y., Koyano, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deformation+analysis+of+the+periodontium+considering+the+viscoelasticity+of+the+periodontal.">Deformation analysis of the periodontium considering the viscoelasticity of the periodontal.</a> 25, 1285-1292 (2009).</li><li>Huelke, D. F., Castelli, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+blood+supply+of+the+rat+mandible.">The blood supply of the rat mandible.</a> Anat. Rec. 153, 335-341 (1965).</li><li>Chiba, M., Komatsu, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+responses+of+the+periodontal+ligament+in+the+transverse+section+of+the+rat+mandibular+incisor+at+various+velocities+of+loading+in+vitro.">Mechanical responses of the periodontal ligament in the transverse section of the rat mandibular incisor at various velocities of loading in vitro.</a> J. Biomech. 26, 561-570 (1993).</li><li>Natali, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+visco-hyperelastic-damage+constitutive+model+for+the+analysis+of+the+biomechanical+response+of+the+periodontal+ligament.">A visco-hyperelastic-damage constitutive model for the analysis of the biomechanical response of the periodontal ligament.</a> J. Biomech. Eng. 130, (2008).</li><li>Naveh, G. R., Shahar, R., Brumfeld, V., Weiner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tooth+movements+are+guided+by+specific+contact+areas+between+the+tooth+root+and+the+jaw+bone:+A+dynamic+3D+microCT+study+of+the+rat+molar.">Tooth movements are guided by specific contact areas between the tooth root and the jaw bone: A dynamic 3D microCT study of the rat molar.</a> J. Struct. Biol. 177, 477-483 (2012).</li><li>Lin, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomechanics+of+a+bone-periodontal+ligament-tooth+fibrous+joint.">Biomechanics of a bone-periodontal ligament-tooth fibrous joint.</a> J. Biomech. 46, 443-449 (2013).</li><li>Metscher, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroCT+for+comparative+morphology:+simple+staining+methods+allow+high-contrast+3D+imaging+of+diverse+non-mineralized+animal+tissues.">MicroCT for comparative morphology: simple staining methods allow high-contrast 3D imaging of diverse non-mineralized animal tissues.</a> BMC Physiol. 9, 11 (2009).</li><li>Carrillo, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoindentation+of+polydimethylsiloxane+elastomers:+Effect+of+crosslinking,+work+of+adhesion,+and+fluid+environment+on+elastic+modulus+(vol+20,+pg+2820).">Nanoindentation of polydimethylsiloxane elastomers: Effect of crosslinking, work of adhesion, and fluid environment on elastic modulus (vol 20, pg 2820).</a> J. Mater. Res. 21, 535-537 (2006).</li><li>Hiiemae, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Masticatory+function+in+the+mammals.">Masticatory function in the mammals.</a> J. Dent. Res. 46, 883-893 (1967).</li><li>Hunt, H. R., Rosen, S., Hoppert, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphology+of+molar+teeth+and+occlusion+in+young+rats.">Morphology of molar teeth and occlusion in young rats.</a> J. Dent. Res. 49, 508-514 (1970).</li><li>Komatsu, K., Sanctuary, C., Shibata, T., Shimada, A., Botsis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress-relaxation+and+microscopic+dynamics+of+rabbit+periodontal+ligament.">Stress-relaxation and microscopic dynamics of rabbit periodontal ligament.</a> J. Biomech. 40, 634-644 (2007).</li><li>Lin, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomechanics+of+a+bone-periodontal+ligament-tooth+fibrous+joint.">Biomechanics of a bone-periodontal ligament-tooth fibrous joint.</a> J. Biomech. 46, 443-449 (2013).</li><li>Quintarelli, G., Zito, R., Cifonelli, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+phosphotungstic+acid+staining.">On phosphotungstic acid staining.</a> I. J. Histochem. Cytochem. 19, 641-647 (1971).</li><li>Quintarelli, G., Cifonelli, J. A., Zito, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+phosphotungstic+acid+staining.">On phosphotungstic acid staining.</a> II. J. Histochem. Cytochem. 19, 648-653 (1971).</li><li>Quintarelli, G., Bellocci, M., Geremia, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+phosphotungstic+acid+staining.+IV.+Selectivity+of+the+staining+reaction.">On phosphotungstic acid staining. IV. Selectivity of the staining reaction.</a> J. Histochem. Cytochem. 21, 155-160 (1973).</li><li>Crabtree, W. N., Murphy, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+value+of+ethanol+as+a+fixative+in+urinary+cytology.">The value of ethanol as a fixative in urinary cytology.</a> Acta Cytol. 24, 452-455 (1980).</li></ol>

والكتاب ليس لديهم ما يكشف.

الخطوة الأولى في إنشاء هذا البروتوكول تشارك تقييم صلابة من الإطار التحميل باستخدام هيئة جامدة. استنادا إلى النتائج، وصلابة أعلى بكثير مما يساعد على استخدام الجهاز لتحميل مزيد من التجارب من العينات مع القيم صلابة أقل من ذلك بكثير. سلط الضوء على الخطوة الثانية قدرة أد...

يواصل العديد من الطرق التجريبية لاستخدامها للتحقيق في الميكانيكا الحيوية للمفاصل ومفصلي ليفية. أساليب محددة للالميكانيكا الحيوية الجهاز الأسنان تشمل استخدام أجهزة قياس الضغط 1-3، وأساليب المرونة الضوئية 4، 5، تموج في النسيج التداخل 6 و 7 و الإلكترونية نمط التداخل رقطة 8، وارتباط الصورة الرقمية (DIC) 9-14. في هذه الدراسة، يشمل النهج المبتكرة التصوير موسع باستخدام الأشعة السينية للكشف عن الهياكل الداخلية للمشترك ليفية (الأنسجة المعدنية والواجهات التي تتكون من مناطق ليونة، وتفاعل الأنسجة مثل الأربطة) في الأحمال يعادل في الجسم الحي الظروف. وسوف تستخدم لفي الجهاز التحميل الموضع إلى جانب لمجهر-X-راي الصغرى. وسيتم جمع للوقت التحميل ومنحنيات الحمل التشريد كما المولي من الفائدة ضمن المقطوع حديثا الفئران نصفي الفك السفلي يتم تحميل. مهدف العين النهج المقدمة في هذه الدراسة هو التأكيد على تأثير ثلاثي الأبعاد مورفولوجيا الأسنان والعظام من خلال مقارنة الأوضاع في: 1) عدم التحميل وعند تحميلها، وعندما 2) تحميل بتكثف وامركزي. سوف يلغي الحاجة لقطع العينات، وإجراء تجارب على أجهزة سليمة كلها تحت ظروف رطبة تسمح للحفاظ على الحد الأقصى من حالة التوتر 3D. هذا يفتح مجالا جديدا للتحقيق في فهم العمليات الديناميكية للمجمع في إطار مختلف سيناريوهات التحميل. في هذه الدراسة، وأساليب لاختبار الميكانيكا الحيوية PDL داخل المشتركة ليفية سليمة من الفئران سبراغ داولي، مشترك يعتبر كنظام نموذج الهندسة الحيوية الأمثل سوف تكون مفصلة. وسوف تشمل تجارب المحاكاة للأحمال المضغ في ظل الظروف المائية من أجل تسليط الضوء على ثلاث ميزات هامة للمشترك من حيث صلتها الميكانيكا الحيوية مستوى الجهاز. وسوف تشمل ثلاث نقاط: 1) قوة الرجعية مقابل الإزاحة:النزوح الأسنان داخل مأخذ السنخية واستجابة رجعية لتحميل، 2) ثلاثي الأبعاد (3D) التكوين المكاني وmorphometrics: علاقة هندسية من الأسنان مع مقبس السنخية، و 3) التغييرات في قراءات 1 و 2 بسبب تغيير في محور التحميل، أي من مركزية للأحمال غريب الأطوار. وقراءات الأساسية الثلاثة للتقنية المقترح يمكن تطبيقه على التحقيق في طبيعة التكيفية من المفاصل في الفقاريات إما بسبب التغيرات في مطالب وظيفية، و / أو المرض. ويمكن تطبيق التغييرات في قراءات المذكورة آنفا، وتحديدا العلاقة بين الأحمال الرجعية مع التشرد، وما ينتج عنها من الحمل لمرة وتحميل التشريد منحنيات الرجعية في مختلف معدلات التحميل لتسليط الضوء على التغييرات الشاملة في الميكانيكا الحيوية المشتركة. وسيتم تقييم فعالية البروتوكول المقترح من قبل اقتران قراءات اختبار الميكانيكية لmorphometrics 3D والميكانيكا الحيوية الشاملة للمشترك.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="652">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:169px;">Bard Parker Blade</td>
			<td style="width:101px;">BD</td>
			<td style="width:123px;">MEDC-001054</td>
			<td style="width:259px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:169px;">AFM metal disk</td>
			<td style="width:101px;">Ted Pella</td>
			<td style="width:123px;">16218</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:169px;">Polymethyl methacrylate&#160;</td>
			<td style="width:101px;">GC America</td>
			<td style="width:123px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:169px;">Uni-Etch</td>
			<td style="width:101px;">Bisco</td>
			<td style="width:123px;">E5502EBM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:169px;">Optibond Solo Plus</td>
			<td style="width:101px;">Kerr Corp</td>
			<td style="width:123px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:169px;">Filtek Flow</td>
			<td style="width:101px;">3M</td>
			<td style="width:123px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:169px;">Hurculite Ultra</td>
			<td style="width:101px;">Kerr</td>
			<td style="width:123px;">34346</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:169px;">Tris buffer</td>
			<td style="width:101px;">Mediatech Inc.</td>
			<td style="width:123px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:169px;">Articulating paper</td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:169px;">Phosphotungstic Acid</td>
			<td style="width:101px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">HT152</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in situ compressive loading and correlative noninvasive imaging of the bone-periodontal ligament-tooth fibrous joint

وتوضح هذه الدراسة بروتوكول الميكانيكا الحيوية رواية الاختبار. ميزة هذا البروتوكول يتضمن استخدام جهاز التحميل الموضع إلى جانب لمجهر الأشعة السينية عالية الدقة في، مما يمكن التصور من العناصر الهيكلية الداخلية تحت الأحمال الفسيولوجية ومحاكاة الظروف الرطبة. وسوف تشمل العينات التجريبية سليمة الرباط العظام اللثة (PDL) الأسنان المفاصل الليفية. وتوضح نتائج ثلاث سمات هامة للبروتوكول كما يمكن تطبيقها على مستوى الجهاز الميكانيكا الحيوية: 1) قوة الرجعية مقابل الإزاحة: النزوح الأسنان داخل مأخذ السنخية واستجابة رجعية لتحميل، 2) ثلاثي الأبعاد (3D) التكوين المكاني وmorphometrics: علاقة هندسية من الأسنان مع مقبس السنخية، و 3) التغييرات في قراءات 1 و 2 بسبب تغير في محور التحميل، أي من مركزية للأحمال غريب الأطوار. وسيتم تقييم فعالية البروتوكول المقترح من قبل الشركة المصرية للاتصالات اقتران الميكانيكيةقراءات لدغة morphometrics 3D والميكانيكا الحيوية الشاملة للمشترك. بالإضافة إلى ذلك، فإن هذه التقنية تؤكد على الحاجة للتوازن الظروف التجريبية، والأحمال الرجعية تحديدا قبل الحصول على tomograms المفاصل الليفية. تجدر الإشارة إلى أن البروتوكول المقترح يقتصر على اختبار العينات تحت ظروف خارج الحي، وأن استخدام عوامل التباين لتصور الأنسجة الرخوة استجابة ميكانيكية يمكن أن تؤدي إلى استنتاجات خاطئة حول الأنسجة وعلى مستوى الجهاز الميكانيكا الحيوية.

تقدير التحميل الجهاز &quot;رد فعل&quot;، &quot;النكسة&quot;، وصلابة، والانجراف النظام تحت تحميل ثابت ردة فعل: بين التحميل والتفريغ أجزاء من دورة، هناك وقفة من 3 ثوانى خلالها نقلات العكسي داخل المحرك قبل بدء التفريغ صحيح، ...

Watch this Scientific Journal Video about In situ Compressive Loading and Correlative Noninvasive Imaging of the Bone-periodontal Ligament-tooth Fibrous Joint at JoVE.com

In situ Compressive Loading and Correlative Noninvasive Imaging of the Bone-periodontal Ligament-tooth Fibrous Joint

في هذه الدراسة، وستتم مناقشة استخدام جهاز التحميل الموضع إلى جانب التصوير المقطعي بالأشعة الجزئي X-الميكانيكا الحيوية المشتركة ليفية في. سوف قراءات تجريبية تحديدها مع التغيير الشامل في الميكانيكا الحيوية المشتركة ما يلي: 1) قوة الرجعية مقابل التشرد، أي الأسنان النزوح داخل مأخذ السنخية واستجابة رجعية لتحميل، 2) ثلاثي الأبعاد (3D) التكوين المكاني وmorphometrics، أي هندسية علاقة الأسنان مع مقبس السنخية، و 3) التغييرات في قراءات 1 و 2 بسبب تغيير في محور التحميل، أي الأحمال متحدة المركز أو غريب الأطوار.

في الموقع تحميل ضاغطة والتصوير موسع الارتباطي من العظم اللثة الرباط الأسنان الليفية المشتركة

This study demonstrates a novel biomechanics testing protocol. The advantage of this protocol includes the use of an in situ loading device coupled to a ...

in-situ-compressive-loading-correlative-noninvasive-imaging-bone

Research

JoVE Journal

Bioengineering

In situ Compressive Loading and Correlative Noninvasive Imaging of the Bone-periodontal Ligament-tooth Fibrous Joint

13.2K Views.  University of California San Francisco.  في هذه الدراسة، وستتم مناقشة استخدام جهاز التحميل الموضع إلى جانب التصوير المقطعي بالأشعة الجزئي X-الميكانيكا الحيوية المشتركة ليفية في. سوف قراءات تجريبية تحديدها مع التغيير الشامل في الميكانيكا الحيوية المشتركة ما يلي: 1) قوة ا...

Video: In situ Compressive Loading and Correlative Noninvasive Imaging of the Bone-periodontal Ligament-tooth Fibrous Joint

High-resolution Fiber-optic Microendoscopy for in situ Cellular Imaging

Many biological and clinical studies require the longitudinal study and analysis of morphology and function with cellular level resolution. Traditionally, multiple experiments are run in parallel, with individual samples removed from the study at sequential time points for evaluation by light microscopy. Several intravital techniques have been developed, with confocal, multiphoton, and second harmonic microscopy all demonstrating their ability to be used for imaging in situ 1. With these systems, however, the required infrastructure is complex and expensive, involving scanning laser systems and complex light sources. Here we present a protocol for the design and assembly of a high-resolution microendoscope which can be built in a day using off-the-shelf components for under US$5,000. The platform offers flexibility in terms of image resolution, field-of-view, and operating wavelength, and we describe how these parameters can be easily modified to meet the specific needs of the end user.
We and others have explored the use of the high-resolution microendoscope (HRME) in in vitro cell culture 2-5, in excised 6 and living animal tissues 2,5, and in human tissues in vivo 2,7. Users have reported the use of several different fluorescent contrast agents, including proflavine 2-4, benzoporphyrin-derivative monoacid ring A (BPD-MA) 5, and fluoroscein 6,7, all of which have received full, or investigational approval from the FDA for use in human subjects. High-resolution microendoscopy, in the form described here, may appeal to a wide range of researchers working in the basic and clinical sciences. The technique offers an effective and economical approach which complements traditional benchtop microscopy, by enabling the user to perform high-resolution, longitudinal imaging in situ.

High-resolution Fiber-optic Microendoscopy for in situ Cellular Imaging

In many biological and clinical situations it is advantageous to study cellular processes as they evolve in their native microenvironment. Here we describe the assembly and use of a low-cost fiber-optic microscope which can provide real time imaging in cell culture, animal studies, and clinical patient studies.

ذات دقة عالية الألياف الضوئية للMicroendoscopy في الموقع الخلوية التصوير

Many biological and clinical studies require the longitudinal study and analysis of morphology and function with cellular level resolution.  ...

Demonstrating the Uses of the Novel Gravitational Force Spectrometer to Stretch and Measure Fibrous Proteins

The study of macromolecular structure has become critical to the elucidation of molecular mechanisms and function. There are several limited, but important bioinstruments capable of testing the force dependence of structural features in proteins. Scale has been a limiting parameter on how accurately researchers can peer into the nanomechanical world of molecules, such as nucleic acids, enzymes, and motor proteins that perform life-sustaining work. Atomic force microscopy (AFM) is well tuned to determine native structures of fibrous proteins with a distance resolution on par with electron microscopy. However, in AFM force studies, the forces are typically much higher than a single molecule might experience 1, 2. Optical traps (OT) are very good at determining the relative distance between the trapped beads and they can impart very small forces 3. However, they do not yield accurate absolute lengths of the molecules under study. Molecular simulations provide supportive information to such experiments, but are limited in the ability to handle the same large molecular sizes, long time frames, and convince some researchers in the absence of other supporting evidence2, 4.
The gravitational force spectrometer (GFS) fills a critical niche in the arsenal of an investigator by providing a unique combination of abilities. This instrument is capable of generating forces typically with 98% or better accuracy from the femtonewton range to the nanonewton range. The distance measurements currently are capable of resolving the absolute molecular length down to five nanometers, and relative bead pair separation distances with a precision similar to an optical trap. Also, the GFS can determine stretching or uncoiling where the force is near equilibrium, or provide a graded force to juxtapose against any measured structural changes. It is even possible to determine how many amino acid residues are involved in uncoiling events under physiological force loads 2. Unlike in other methods where there is extensive force calibration that must precede any assay, the GFS requires no such force calibration 5. By complementing the strengths of other methods, the GFS will bridge gaps in understanding the nanomechanics of vital proteins and other macromolecules.

This is a step-by step guide showing the purpose, operation, and representative results from the novel gravitational force spectrometer.

مما يدل على استخدامات مطياف الرواية قوة الجاذبية على التمدد وقياس البروتينات الليفية

The study of macromolecular structure has become critical to the elucidation of molecular mechanisms and function. There are several limited, but ...

In vitro Synthesis of Native, Fibrous Long Spacing and Segmental Long Spacing Collagen

Collagen fibrils are present in the extracellular matrix of animal tissue to provide structural scaffolding and mechanical strength. These native collagen fibrils have a characteristic banding periodicity of ~67 nm and are formed in vivo through the hierarchical assembly of Type I collagen monomers, which are 300 nm in length and 1.4 nm in diameter. In vitro, by varying the conditions to which the monomer building blocks are exposed, unique structures ranging in length scales up to 50 microns can be constructed, including not only native type fibrils, but also fibrous long spacing and segmental long spacing collagen. Herein, we present procedures for forming the three different collagen structures from a common commercially available collagen monomer. Using the protocols that we and others have published in the past to make these three types typically lead to mixtures of structures. In particular, unbanded fibrils were commonly found when making native collagen, and native fibrils were often present when making fibrous long spacing collagen. These new procedures have the advantage of producing the desired collagen fibril type almost exclusively. The formation of the desired structures is verified by imaging using an atomic force microscope.

In vitro Synthesis of Native, Fibrous Long Spacing and Segmental Long Spacing Collagen

Simple and reproducible procedures are described for making three structurally distinct collagen assemblies from a common commercially available Type I collagen monomer. Native type, fibrous long spacing or segmental long spacing collagen can be constructed by varying the conditions to which the 300 nm long and 1.4 nm diameter monomer building block is exposed.

في تركيب المختبر من تباعد الليفية الأصلية، طويل والقطاعي الكولاجين تباعد طويل

Collagen fibrils are present in the  extracellular matrix of animal tissue to provide structural scaffolding and  mechanical strength. These native ...

Design of a Biaxial Mechanical Loading Bioreactor for Tissue Engineering

We designed a loading device that is capable of applying uniaxial or biaxial mechanical strain to a tissue engineered biocomposites fabricated for transplantation. While the device primarily functions as a bioreactor that mimics the native mechanical strains, it is also outfitted with a load cell for providing force feedback or mechanical testing of the constructs. The device subjects engineered cartilage constructs to biaxial mechanical loading with great precision of loading dose (amplitude and frequency) and is compact enough to fit inside a standard tissue culture incubator. It loads samples directly in a tissue culture plate, and multiple plate sizes are compatible with the system. The device has been designed using components manufactured for precision-guided laser applications. Bi-axial loading is accomplished by two orthogonal stages. The stages have a 50 mm travel range and are driven independently by stepper motor actuators, controlled by a closed-loop stepper motor driver that features micro-stepping capabilities, enabling step sizes of less than 50 nm. A polysulfone loading platen is coupled to the bi-axial moving platform. Movements of the stages are controlled by Thor-labs Advanced Positioning Technology (APT) software. The stepper motor driver is used with the software to adjust load parameters of frequency and amplitude of both shear and compression independently and simultaneously. Positional feedback is provided by linear optical encoders that have a bidirectional repeatability of 0.1 &mu;m and a resolution of 20 nm, translating to a positional accuracy of less than 3 &mu;m over the full 50 mm of travel. These encoders provide the necessary position feedback to the drive electronics to ensure true nanopositioning capabilities. In order to provide the force feedback to detect contact and evaluate loading responses, a precision miniature load cell is positioned between the loading platen and the moving platform. The load cell has high accuracies of 0.15% to 0.25% full scale.

We designed a novel mechanical loading bioreactor that can apply uniaxial or biaxial mechanical strain to a cartilage biocomposite prior to transplantation into an articular cartilage defect.

تصميم مفاعل حيوي ذو محورين الميكانيكية جار للهندسة الأنسجة

We  designed a loading device that is capable of applying uniaxial or biaxial  mechanical strain to a tissue engineered biocomposites fabricated for  ...

FIBS-enabled Noninvasive Metabolic Profiling

In the era of computational biology, new high throughput experimental systems are necessary in order to populate and refine models so that they can be validated for predictive purposes. Ideally such systems would be low volume, which precludes sampling and destructive analyses when time course data are to be obtained. What is needed is an in situ monitoring tool which can report the necessary information in real-time and noninvasively. An interesting option is the use of fluorescent, protein-based in vivo biological sensors as reporters of intracellular concentrations. One particular class of in vivo biosensors that has found applications in metabolite quantification is based on F&#246;rster Resonance Energy Transfer (FRET) between two fluorescent proteins connected by a ligand binding domain. FRET integrated biological sensors (FIBS) are constitutively produced within the cell line, they have fast response times and their spectral characteristics change based on the concentration of metabolite within the cell. In this paper, the method for constructing Chinese hamster ovary (CHO) cell lines that constitutively express a FIBS for glucose and glutamine and calibrating the FIBS in vivo in batch cell culture in order to enable future quantification of intracellular metabolite concentration is described. Data from fed-batch CHO cell cultures demonstrates that the FIBS was able in each case to detect the resulting change in the intracellular concentration. Using the fluorescent signal from the FIBS and the previously constructed calibration curve, the intracellular concentration was accurately determined as confirmed by an independent enzymatic assay.

A description of how to calibrate F&#246;rster Resonance Energy Transfer integrated biological sensors (FIBS) for in situ metabolic profiling is presented.&#160;The FIBS can be used to measure intracellular levels of metabolites noninvasively aiding in the development of metabolic models and high throughput screening of bioprocess conditions.

تمكين أكذوبة موسع الأيض التنميط

In the era of computational biology, new high throughput experimental systems are necessary in order to populate and refine models so that they can be ...

Studying the Stoichiometry of Epidermal Growth Factor Receptor in Intact Cells using Correlative Microscopy

This protocol describes the labeling of epidermal growth factor receptor (EGFR) on COS7 fibroblast cells, and subsequent correlative fluorescence microscopy and environmental scanning electron microscopy (ESEM) of whole cells in hydrated state. Fluorescent quantum dots (QDs) were coupled to EGFR via a two-step labeling protocol, providing an efficient and specific protein labeling, while avoiding label-induced clustering of the receptor. Fluorescence microscopy provided overview images of the cellular locations of the EGFR. The scanning transmission electron microscopy (STEM) detector was used to detect the QD labels with nanoscale resolution. The resulting correlative images provide data of the cellular EGFR distribution, and the stoichiometry at the single molecular level in the natural context of the hydrated intact cell. ESEM-STEM images revealed the receptor to be present as monomer, as homodimer, and in small clusters. Labeling with two different QDs, i.e.,&#160;one emitting at 655 nm and at 800 revealed similar characteristic results.

This protocol describes the labeling of epidermal growth factor receptor (EGFR) on COS7 fibroblast cells, and subsequent correlative light- and electron microscopy of whole cells in hydrated state. The label contained fluorescent quantum dots. The protocol can be used to study the stoichiometry of EGFR at the single molecule level.

دراسة رياضيات الكيمياء من البشرة عامل نمو مستقبلات في الخلايا السليمة باستخدام الميكروسكوب المتلازم

This protocol describes the labeling of epidermal growth factor receptor (EGFR) on COS7 fibroblast cells, and subsequent correlative fluorescence ...

Optimized Setup and Protocol for Magnetic Domain Imaging with In Situ Hysteresis Measurement

This paper elaborates the sample preparation protocols required to obtain optimal domain patterns using the Bitter method, focusing on the extra steps compared to standard metallographic sample preparation procedures. The paper proposes a novel bespoke rig for dynamic domain imaging with in situ BH (magnetic hysteresis) measurements and elaborates the protocols for the sensor preparation and the use of the rig to ensure accurate BH measurement. The protocols for static and ordinary dynamic domain imaging (without in situ BH measurements) are also presented. The reported method takes advantage of the convenience and high sensitivity of the traditional Bitter method and enables in situ BH measurement without interrupting or interfering with the domain wall movement processes. This facilitates establishing a direct and quantitative link between the domain wall movement processes&#8211;microstructural feature interactions in ferritic steels with their BH loops. This method is anticipated to become a useful tool for the fundamental study of microstructure&#8211;magnetic property relationships in steels and to help interpret the electromagnetic sensor signals for non-destructive evaluation of steel microstructures.

Optimized Setup and Protocol for Magnetic Domain Imaging with In Situ Hysteresis Measurement

This paper elaborates the sample and sensor preparation procedures and the protocols for using the test rig particularly for dynamic domain imaging with in situ BH measurements in order to achieve optimal domain pattern quality and accurate BH measurements.

الإعداد الأمثل وبروتوكول لتصوير المجال المغناطيسي مع القياس التباطؤ في الموقع

This paper elaborates the sample preparation protocols required to obtain optimal domain patterns using the Bitter method, focusing on the extra steps ...

Nanosensors to Detect Protease Activity In Vivo for Noninvasive Diagnostics

Proteases are multi-functional enzymes that specialize in the hydrolysis of peptide-bonds and control broad biological processes including homeostasis and allostasis. Moreover, dysregulated protease activity drives pathogenesis and is a functional biomarker of diseases such as cancer; therefore, the ability to detect protease activity in vivo may provide clinically relevant information for biomedical diagnostics. The goal of this protocol is to create nanosensors that probe for protease activity in vivo by producing a quantifiable signal in urine. These protease nanosensors consist of two components: a nanoparticle and substrate. The nanoparticle functions to increase circulation half-life and substrate delivery to target disease sites. The substrate is a short peptide sequence (6-8 AA), which is designed to be specific to a target protease or group of proteases. The substrate is conjugated to the surface of the nanoparticle and is terminated by a reporter, such as a fluorescent marker, for detection. As dysregulated proteases cleave the peptide substrate, the reporter is filtered into urine for quantification as a biomarker of protease activity. Herein we describe construction of a nanosensor for matrix metalloproteinase 9 (MMP9), which is associated with tumor progression and metastasis, for detection of colorectal cancer in a mouse model.

Nanosensors to Detect Protease Activity In Vivo for Noninvasive Diagnostics

Proteases are tightly regulated enzymes involved in fundamental biological processes, and dysregulated protease activity drives progression of complex diseases such as cancer. This method&#39;s goal is to create nanosensors that measure protease activity in vivo by producing a cleavage signal that is detectable from host urine and discriminates disease.

Nanosensors للكشف عن حوزتي النشاط في فيفو لتشخيص موسع

Proteases are multi-functional enzymes that specialize in the hydrolysis of peptide-bonds and control broad biological processes including homeostasis and ...

Correlative Light Electron Microscopy (CLEM) for Tracking and Imaging Viral Protein Associated Structures in Cryo-immobilized Cells

Due to its high resolution, electron microscopy (EM) is an indispensable tool for virologists. However, one of the main difficulties when analyzing virus-infected or transfected cells via EM are the low efficiencies of infection or transfection, hindering the examination of these cells. In order to overcome this difficulty, light microscopy (LM) can be performed first to allocate the subpopulation of infected or transfected cells. Thus, taking advantage of the use of fluorescent proteins (FPs) fused to viral proteins, LM is used here to record the positions of the "positive-transfected" cells, expressing a FP and growing on a support with an alphanumeric pattern. Subsequently, cells are further processed for EM via high pressure freezing (HPF), freeze substitution (FS) and resin embedding. The ultra-rapid freezing step ensures excellent membrane preservation of the selected cells that can then be analyzed at the ultrastructural level by transmission electron microscopy (TEM). Here, a step-by-step correlative light electron microscopy (CLEM) workflow is provided, describing sample preparation, imaging and correlation in detail. The experimental design can be also applied to address many cell biology questions.

Correlative Light Electron Microscopy CLEM for Tracking and Imaging Viral Protein Associated Structures in Cryo-immobilized Cells

A correlative light electron microscopy (CLEM) method is applied to image virus-induced intracellular structures via electron microscopy (EM) in cells that are previously selected by light microscopy (LM). LM and EM are combined as a hybrid imaging approach to achieve an integrated view of virus-host interactions.

المجهر الإلكتروني الارتباطية الخفيفة (كليم) لتتبع وتصوير البروتينات الفيروسية المرتبطة الهياكل في الخلايا المعطل تداولها البرد

Due to its high resolution, electron microscopy (EM) is an indispensable tool for virologists. However, one of the main difficulties when analyzing ...

Isolation, Expansion, and Differentiation of Mesenchymal Stem Cells from the Infrapatellar Fat Pad of the Goat Stifle Joint

The IFP, present in the knee joint, serves as a promising source of MSCs. The IFP is an easily accessible tissue as it is routinely resected and discarded during arthroscopic procedures and knee replacement surgeries. Additionally, its removal is associated with minimal donor site morbidity. Recent studies have demonstrated that IFP-MSCs do not lose their proliferation capacity during in vitro expansion and have age-independent osteogenic differentiation potential. IFP-MSCs possess superior chondrogenic differentiation potential compared to bone marrow-derived MSCs (BMSCs) and adipose-derived stem cells (ADSCs). Although these cells are easily obtainable from aged and diseased patients, their effectiveness is limited. Hence, using IFP-MSCs from healthy donors is important to determine their efficacy in biomedical applications. As access to a healthy human donor is challenging, animal models could be a better alternative to enable fundamental understanding. Large animals such as dogs, horses, sheep, and goats play a crucial role in translational research. Amongst these, the goat could be a preferred model since the stifle joint of the goat has the closest anatomy to the human knee joint. Moreover, goat-IFP can fulfill the higher MSC numbers needed for tissue regeneration applications. Furthermore, low cost, availability, and compliance with the 3R principles for animal research make them an attractive model. This study demonstrates a simple protocol for isolating IFP-MSCs from the stifle joint of goats and in vitro culture conditions for their expansion and differentiation. The aseptically isolated IFP from the goat was washed, minced, and digested enzymatically. After filtration and centrifugation, the collected cells were cultured. These cells were adherent, had MSCs-like morphology, and demonstrated remarkable clonogenic ability. Further, they differentiated into adipogenic, chondrogenic, and osteogenic lineages, demonstrating their multipotency. In conclusion, the study demonstrates the isolation and expansion of MSCs, which show potential in tissue engineering and regenerative medicine applications.

Infrapatellar fat pad mesenchymal&#160;stem cells (IFP-MSCs) can be isolated easily from the infrapatellar fat pad of the knee joint. They proliferate well in vitro, form CFU-F colonies, and differentiate into adipogenic, chondrogenic, and osteogenic lineages. Herein, the methodology for the isolation, expansion, and differentiation of IFP-MSCs from goat stifle joint is provided.

عزل وتوسيع وتمايز الخلايا الجذعية الوسيطة من وسادة الدهون تحت الرضفة لمفصل خنق الماعز

The IFP, present in the knee joint, serves as a promising source of MSCs. The IFP is an easily accessible tissue as it is routinely resected and discarded ...