SZ وDW تتلقى منحة غير المقيد للViropharma.

1. إعداد بروميلين المعاملة خلايا الدم الحمراء <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلايا الدم الحمراء كتبته-0 غسل 3x أخرى مع برنامج تلفزيوني 1X (الطرد المركزي في 664 x ج لمدة 2-5 دقيقة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان 1 حجم كرات الدم الحمراء محملة مجلدين من حل بروميلين 0.5٪ لمدة 10 دقيقة عند 37 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل الخلايا مع برنامج تلفزيوني 1X 3x أخرى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الخلايا يمكن تخزينها كحل 3٪ في 4 درجات مئوية في برنامج تلفزيوني 1X لمدة أسبوع واحد على الأقل. </li></ol> 2. C3 و C4 تحليل ترسب على كرات الدم الحمراء عن طريق نظام مراقبة الأصول الميدانية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للحرارة تعطيل المبلغ المطلوب من مصل المريض (أو غيرها من مصدر الأجسام المضادة لمكافحة RBC) عن طريق تسخين العينة لمدة 30 دقيقة عند 56 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل كرات الدم الحمراء المعالجة بروميلين ثلاث مرات في VBG - (5 ملي Veronal، 150 ملي مول كلوريد الصوديوم، 0.05٪ الجيلاتين ودرجة الحموضة 7.4) و resuspend لهم في VBG + + (VBG - + 2 + 2 ملي MgCl 10 مم CaCl 2) لإعطاء 0.5٪ محلول. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة المكونات التالية في لوحة جولة القاع مع كوب اللؤلؤ (وأو الخلط السليم): 25 ميكرولتر كرات الدم الحمراء 0.5٪، 37.5 ميكرولتر مصل الطازجة AB (مصدر مكمل) و 37.5 ميكرولتر 200 ميكروغرام / مل مكافحة C5. مكافحة C5 مكلفة ويمكن أن يكون من الصعب الحصول عليها. يمكن للمرء أن تنظر في استخدام المصل أو C5-/C6-/C7- C8-ناقصة بدلا من AB المصل ومكافحة C5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة مصل المريض لكل بئر إلى تركيز النهائي من 0،1 حتي 33٪. الصحيح الاختلافات في تركيز المصل لكل بئر بسبب استخدام الحرارة المعطل AB المصل. إضافة VBG + + للحصول على الحجم النهائي من 150 ميكرولتر / جيد. لوحة الوثيق مع ELISA احباط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان 1.5-2 ساعة عند 37 درجة مئوية في حين تهتز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل كرات الدم الحمراء ثلاث مرات مع برنامج تلفزيوني + 0.5٪ BSA (الطرد المركزي في 664 x ج لمدة 2 دقيقة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة fluorescently المسمى مكافحة C3 والاجسام المضادة لمكافحة C4 أو شظايا فاب الخاصة بهم (للحد من تراص) في برنامج تلفزيوني + 0.5٪ BSA إلى تركيز النهائي من 1 ميكروغرام / مل. هنا وضعت مخصصة لمكافحة C3-اليكسا فلور 488 وتستخدم لمكافحة C4-اليكسا فلور 647 الاجسام المضادة، واختيار تساه تسميات الفلورسنت يسمح الكشف في وقت واحد من C3 و C4 بواسطة نظام مراقبة الأصول الميدانية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان 30-45 دقيقة في درجة حرارة الغرفة مع الهز لطيف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسيل كرات الدم الحمراء 3X مع برنامج تلفزيوني + 0.5٪ BSA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في resuspend كرات الدم الحمراء 150 ميكرولتر في برنامج تلفزيوني +0.5٪ BSA وماصة لهم في لوحة جديدة (للتخلص من اللؤلؤ الزجاج قبل تحليل نظام مراقبة الأصول الميدانية). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحليل أداء نظام مراقبة الأصول الميدانية. الخلايا وحيدة منفصلة عن الحلل في مبعثر بالتآمر FSC-A؛ تعيين البوابة على كرات الدم الحمراء واحد، واختيار القناة المناسبة للكشف عن الإشارات مضان (مثل FITC وAPC). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس النتائج باستخدام كثافة مضان وسيطة. </li></ol> ملاحظة: من الممكن استخدام isotype السيطرة (على سبيل المثال وصفت fluorescently مكافحة IL6 الماوس IgG1). ومع ذلك، فمن المستحسن لتشمل مراقبة سلبية حقيقية مثل التي يحتضنها كرات الدم الحمراء دون مصل المريض (فقط AB المصل) أو بدون مصدر مكمل (الحرارة المعطل AB المصل والمصل المريض الحرارة المعطل)، ود ثم وصمة عار هذه مع نفس المضادة للC3-اليكسا فلور 488 والمضادة للC4-اليكسا فلور 647 الأجسام المضادة. وهذا يعطي المزيد من السيطرة صالحة من مجرد isotype السيطرة في حالة خلايا الدم الحمراء 12، على الرغم من أن هذه الضوابط المختلفة عادة ما تعطي نفس، نتائج سلبية. 3. الفحص الانحلالي الكمي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للحرارة تعطيل المبلغ المطلوب من الأمصال المريض (أو غيرها من مصدر الأجسام المضادة لمكافحة RBC) عن طريق تسخين العينة 30 دقيقة في 56 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسيل كرات الدم الحمراء 3X مع VBG - ومرة واحدة مع VBG + +. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة المكونات التالية في لوحة جولة القاع مع لؤلؤة الزجاج (لخلط السليم): 35 ميكرولتر 3٪ كرات الدم الحمراء، و 25 ميكرولتر الطازجة المصل AB (مصدر مكمل) ومصل المريض 1-50٪. الصحيح الاختلافات في تركيز المصل باستخدام الحرارة المعطل AB المصل. إضافة VBG + + للحصول على الحجم النهائي من 150 ميكرولتر / جيد. لوحة الوثيق مع ELISA احباط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان عند 37 درجة مئوية لمدة 1.5-2 ساعة مع اهتزاز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Cلوحة entrifuge في 664 x ج لمدة 5 دقائق مع خفض التباطؤ (مثل التباطؤ إلى وقف كامل في 2-3 دقيقة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة بعناية طاف 90 ميكرولتر في وحة microtiter جديدة. من المهم في هذه الخطوة لمنع فقاعات الهواء ومنع أن تتخذ على طول خلايا سليمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس A414/690 في معمل مناسبة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعبير عن تحلل كنسبة مئوية من تحلل كرات الدم الحمراء لعينة بالماء النقي. </li></ol>

<ol>
	<li>Zeerleder, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoimmune+haemolytic+anaemia+-+a+practical+guide+to+cope+with+a+diagnostic+and+therapeutic+challenge.">Autoimmune haemolytic anaemia - a practical guide to cope with a diagnostic and therapeutic challenge.</a> Neth. J. Med. 69 (4), 177-184 (2011).</li><li>Reardon, J. E., Marques, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+evaluation+and+transfusion+support+of+patients+with+autoimmune+hemolytic+anemia.">Laboratory evaluation and transfusion support of patients with autoimmune hemolytic anemia.</a> Am. J. Clin. Pathol. 125, 71-77 (2006).</li><li>Lai, M., Leone, G., Landolfi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoimmune+hemolytic+anemia+with+gel-based+immunohematology+tests.">Autoimmune hemolytic anemia with gel-based immunohematology tests.</a> Am. J. Clin. Pathol. 139 (4), 457-463 (2013).</li><li>Zantek, N. D., Koepsell, S. A., Tharp Jr, ., R, D., Cohn, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+direct+antiglobulin+test:+A+critical+step+in+the+evaluation+of+hemolysis.">The direct antiglobulin test: A critical step in the evaluation of hemolysis.</a> Am. J. Hematol. 87 (7), 707-709 (2012).</li><li>Natukunda, B., Brand, A., Schonewille, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Red+blood+cell+alloimmunization+from+an+African+perspective.">Red blood cell alloimmunization from an African perspective.</a> Curr. Opin. Hematol. 17 (6), 565-570 (2010).</li><li>Packman, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemolytic+anemia+due+to+warm+autoantibodies.">Hemolytic anemia due to warm autoantibodies.</a> Blood Rev. 22 (1), 17-31 (2008).</li><li>Berentsen, S., Tj&#248;nnfjord, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+and+treatment+of+cold+agglutinin+mediated+autoimmune+hemolytic+anemia.">Diagnosis and treatment of cold agglutinin mediated autoimmune hemolytic anemia.</a> Blood Rev. 26 (3), 107-115 (2012).</li><li>Petz, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cold+antibody+autoimmune+hemolytic+anemia.">Cold antibody autoimmune hemolytic anemia.</a> Blood Rev. 22 (1), 1-15 (2008).</li><li>Barros, M. M. O., Blajchman, M. A., Bordin, J. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Warm+autoimmune+hemolytic+anemia:+recent+progress+in+understanding+the+immunobiology+and+the+treatment.">Warm autoimmune hemolytic anemia: recent progress in understanding the immunobiology and the treatment.</a> Transfus. Med. Rev. 24 (3), 195-210 (2010).</li><li>Endoh, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimal+prewarming+conditions+for+Rh+antibody+testing.">Optimal prewarming conditions for Rh antibody testing.</a> Transfusion. 46 (9), 1521-1525 (2006).</li><li>Wouters, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C1-esterase+inhibitor+concentrate+rescues+erythrocytes+from+complement-mediated+destruction+in+autoimmune+hemolytic+anemia.">C1-esterase inhibitor concentrate rescues erythrocytes from complement-mediated destruction in autoimmune hemolytic anemia.</a> Blood. 121 (7), 1242-1244 (2013).</li><li>Arndt, P. A., Garratty, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Critical+Review+of+Published+Methods+for+Analysis+of+Red+Cell+Antigen-Antibody+Reactions+by+Flow+Cytometry,+and+Approaches+for+Resolving+Problems+with+Red+Cell+Agglutination.">A Critical Review of Published Methods for Analysis of Red Cell Antigen-Antibody Reactions by Flow Cytometry, and Approaches for Resolving Problems with Red Cell Agglutination.</a> Transfus. Med. Rev. 24 (3), 172-194 (2010).</li></ol>

والكتاب ليس لديهم ما يكشف.

المقايسات أعلاه هي استنساخه وقوية. فهي سهلة لأداء وأنه من الممكن القيام بها مع العديد من العينات في نفس الوقت (في لوحة 96 أيضا). وبالتالي، فإن هذا النهج أيضا أن تكون مناسبة لنظام مؤتمتة بالكامل، مثل نظام الروبوت ELISA. وعلى النقيض من التقنيات المستخدمة حاليا، وهذه ال...

أجسام مضادة ضد خلايا الدم الحمراء (كرات الدم الحمراء) يمكن أن يتسبب عن طريق نقل الدم من كرات الدم الحمراء معربا عن مستضد والذي هو غير موجود على كرات الدم الحمراء المتلقي. ويمكن لهذه الأجسام المضادة ألو يسبب ردود فعل الانحلالي الحاد نقل نظرا لتكمل التنشيط على نقل التالية 5. في المناعة الذاتية فقر الدم الانحلالي (AIHA)، المرضى الذين لديهم أضداد ذاتية ضد كرات الدم الحمراء الخاصة بهم. وهذا يؤدي إلى تسارع إزالة الخلايا عن طريق التفاعل بين مفتش ملزمة لكرات الدم الحمراء مع Fcγ-المستقبلات على البالعات في الطحال و / أو في حالة أضداد ذاتية قادرة على تنشيط مستقبلات مكملا عبر مكملا في الكبد 6،7. تفعيل مكملا مداهم انحلال الدم داخل الأوعية الدموية مما يؤدي إلى أمر نادر الحدوث ولكن غالبا ما يكون مميتا. المعجل، تكمل بوساطة الدمار الناجم عن RBC إما النتائج أو الأجسام المضادة في ألو فقر الدم الحاد ونقص الأكسجة الأنسجة وبالتالي يحتمل أن تكون قاتلة. تصنف الأجسام المضادة لصناعة السيارات في AIHA في الأجسام المضادة الحارة والباردة، DEPENDINز على درجة الحرارة المثلى التي تربط لكرات الدم الحمراء (37 درجة مئوية أو أقل، على التوالي). الأجسام المضادة الدافئة وعادة ما تكون من مفتش نمط إسوي والأجسام المضادة الباردة من الغلوبولين المناعي نمط إسوي 8،9. AIHA يمكن أن تكون ثانوية بالنسبة لمثل lymphoprolyferative اضطرابات وأمراض النسيج الضام، والأورام الصلبة، والالتهابات أو المخدرات، ولكن في 50٪ من الحالات مجهولة السبب هو AIHA 9. يتم إجراء كشف gammaglobulins (على سبيل المثال. مفتش أو الغلوبولين المناعي) وتكمل ملزمة لكرات الدم الحمراء المريض عن طريق اختبار ضد الغلوبولين المباشرة نصف كمي (كومبس) (DAT). في DAT يتم تحضين كرات الدم الحمراء المريض مع المضادة للمفتش أو المضادة للC3D. حدوث تراص RBC يوضح وجود مكونات تكملة المرفقة أو مفتش ملزمة. يتم إجراء الكشف عن الأجسام المضادة، ألو أو في مصل المريض عن طريق اختبار ضد الغلوبولين غير المباشرة (IAT). في معهد التكنولوجيا التطبيقية، يتم تحضين اختبار كرات الدم الحمراء المعالجة بروميلين مع مصل المريض، وغسلها ثم حضنت مع المضادة للحأومان مفتش. في حال تم توعية كرات الدم الحمراء مع المضادة للمفتش RBC موجودة في مصل المريض تراص سيحدث. والأجسام المضادة الغلوبولين المناعي لكرات الدم الحمراء يؤدي مباشرة إلى تراص على حضانة اختبار كرات الدم الحمراء المعالجة بروميلين مع مصل المريض. ويتم تقييم RBC تراص في اختبار كومبس المباشر أو في IAT بصريا إما عن طريق العين في أنبوب اختبار أو عن طريق تحميل العينة على عمود Sephadex صغيرة تفصل كرات الدم الحمراء التصق واحد عن طريق حجم 1. آخر تقنية استخداما لقياس تفعيل تكمل على كرات الدم الحمراء هو فحص الدم الانحلالي 1، التي يتم فيها تقييم قدرة المريض المصل للحث (بوساطة تكمل) انحلال الدم من كرات الدم الحمراء المعالجة بروميلين 10. ويلاحظ اختبار بأنها إيجابية عندما طاف بعد الطرد المركزي اتسخت الأحمر بسبب الهيموغلوبين صدر ويعتبر أن تكون سلبية إذا كان لا يزال عديم اللون. كل من اختبار ضد الغلوبولين وفحص الدم الانحلالي هي نصف كمي، منذ أعلى سيرووتدل م التخفيف التي الاختبار لا تزال ايجابية. اختبار ضد الغلوبولين وفحص الدم الانحلالي والمقايسات قوية التي يتم استخدامها بشكل روتيني في التشخيص. لأن هذه القياسات ليست نصف كمي ويعتمد على تجربة أداء فني الفحص أنها ليست مناسبة لدراسة الفروق الدقيقة التنشيط تكمل على كرات الدم الحمراء، حسب الحاجة عند تقييم فعالية مثبطات مكملا. لذلك، قمنا بتطوير اثنين من المقايسات الكمية لتحديد التنشيط مكملا بنسبة (السيارات) الأجسام المضادة لكرات الدم الحمراء، والتي سنقوم بشرح في هذه الورقة. الأول، وضعنا مقايسة لقياس ترسب شظايا تفعيل المتممة C3 و C4 على كرات الدم الحمراء (الشكل 1A). في هذا الاختبار، يتم تحضين المعالجة بروميلين الإنسان نوع 0 كرات الدم الحمراء مع المصل الحرارة المعطل المريض (المضادة للRBC مصدر الأجسام المضادة)، مصل AB الطازجة (المصدر مكملا) والمضادة للC5 ريتوكسيماب (Eculizumab). خلال هذا المؤتمر الوطني العراقيubation، سوف تحدث C3 و C4 ترسب إذا كان المصل يحتوي على المريض تكمل تفعيل الأجسام المضادة للRBC. من أجل منع تحلل RBC عن طريق تفعيل تكملة المصب يتم إضافة عرقلة مكافحة C5 وحيدة النسيلة الأجسام المضادة. المقبل، يتم الكشف C3 و C4 ترسب على كرات الدم الحمراء عن طريق نظام مراقبة الأصول الميدانية باستخدام الأجسام المضادة وحيدة النسيلة fluorescently المسمى أو فاب-شظايا التفاعل مع C3 و C4، على التوالي. تبوب على كرات الدم الحمراء واحدة من المهم لضمان موثوقية النتائج. وتشمل مزايا هذه التقنية أن كمية صغيرة من مادة المريض هو مطلوب، تكمل التنشيط في مرحلة مبكرة من تتالي يتم تقييم والأسلوب هو استنساخه والكمي. ميزة إضافية للنظر في كل من C3 و C4 هو أن التمييز يمكن أن يتم بين الكلاسيكية وكتين تفعيل المسار (سواء C3 و C4 ترسب) وتفعيل مسار بديل (C3 فقط ترسب). استخدام كرات الدم الحمراء المعالجة بروميلين بدلا من كرات الدم الحمراء غير المعالجة يزيد من حساسية كمايقول. ويستند الفحص الثاني على فحص الدم الانحلالي المستخدمة حاليا (الشكل 1B). يتم تحضين المعالجة بروميلين الإنسان نوع 0 كرات الدم الحمراء مع المصل الحرارة المعطل المريض (المضادة للRBC مصدر الأجسام المضادة) والمصل AB الطازجة (مصدر مكمل). إذا تم تنشيط مكملا من قبل الأجسام المضادة للRBC المريض، سوف تحدث الجرعة تعتمد RBC تحلل، مما يؤدي إلى إطلاق سراح من الهيموغلوبين. وكميا كمية الهيموجلوبين صدر عن طريق قياس الامتصاصية في 414 نانومتر في في طاف بعد الغزل أسفل كرات الدم الحمراء سليمة ومجزأة. الامتصاصية يرتبط مع كمية من انحلال الدم حدث. وعلى النقيض من الفحص المستخدمة حاليا، وهذا البروتوكول يسمح للهدف، والقيمة الكمية للانحلال الدم وهذا هو استنساخه جدا ولا تعتمد على الشخص تفسير الفحص. وقد وصفت لتطبيق هذه الأساليب في 11، حيث كان احتمال استخدام مثبط C1-كما المانع مكملا في AIHA قtudied.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="845">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">PBS</td>
			<td style="width:195px;">Fresenius Kabi</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:316px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">BSA</td>
			<td style="width:195px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">B-4287</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Barbital</td>
			<td style="width:195px;">Fagron</td>
			<td style="width:119px;">0261</td>
			<td>This chemical is subject to drug regulation.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sodium Barbital</td>
			<td style="width:195px;">Fagron</td>
			<td style="width:119px;">0263</td>
			<td>This chemical is subject to drug regulation.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Gelatin</td>
			<td style="width:195px;">Merck</td>
			<td style="width:119px;">1.0470.0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sodium chloride</td>
			<td style="width:195px;">Merck</td>
			<td style="width:119px;">1.06404.1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Magnesium Chloride</td>
			<td style="width:195px;">Merck</td>
			<td style="width:119px;">1.05833.0250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Calcium chloride</td>
			<td style="width:195px;">Merck</td>
			<td style="width:119px;">1.0238.0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Dylight 488 amine reactive dye</td>
			<td style="width:195px;">Pierce</td>
			<td style="width:119px;">46402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Dylight 650 amine reactive dye</td>
			<td style="width:195px;">Pierce</td>
			<td style="width:119px;">62265</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">&#945;C5 (Eculizumab)</td>
			<td style="width:195px;">Alexion Pharmaceuticals</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">FACS (Canto)</td>
			<td style="width:195px;">BD</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Any FACS can be used that has the appropiate lasers.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Spectrophotometer (e.g. Multiskan spectrum)</td>
			<td style="width:195px;">Thermo Labsystems</td>
			<td style="width:119px;">1500-193</td>
			<td>Any spectrophotometer with the right wavelength range can be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">BD FACSDiva software v 6.1.2</td>
			<td style="width:195px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">643629</td>
			<td>Any compatible FACS analysis software can be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">bromelain</td>
			<td style="width:195px;">Sanquin</td>
			<td style="width:119px;">K1121</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

methods for quantitative detection of antibody-induced complement activation on red blood cells

أجسام مضادة ضد خلايا الدم الحمراء (كرات الدم الحمراء) يمكن أن يؤدي إلى تنشيط تكمل مما أدى إلى تسارع التخليص عبر مستقبلات مكملا في الكبد (انحلال الدم خارج الأوعية) أو يؤدي إلى تحلل كرات الدم الحمراء داخل الأوعية الدموية لل. Alloantibodies (على سبيل المثال ABO) أو الأجسام المضادة لمستضدات RBC (كما رأينا في فقر الدم الانحلالي الذاتية، AIHA) مما يؤدي إلى تفعيل تكمل يحتمل أن تكون ضارة ويمكن أن يكون - وخصوصا عندما يؤدي إلى تحلل داخل الأوعية الدموية - 1 القاتلة. حاليا، تكمل التنشيط بسبب (السيارات) الأجسام المضادة في كرات الدم الحمراء في المختبر يتم تقييم باستخدام اختبار كومبس يعكس ترسب تكمل على RBC أو عن طريق فحص الدم الانحلالي nonquantitative يعكس RBC تحلل 1-4. ومع ذلك، من أجل تقييم فعالية مثبطات مكملا، وهي ملزمة أن يكون التقنيات الكمية. نحن هنا وصف اثنين من هذه التقنيات. الأول، وهو فحص للكشف عن C3 و C4 ترسب على خلايا الدم الحمراء التي يسببها الأجسام المضادة في مصل المريض قبلsented. لهذا، يتم استخدام تحليل نظام مراقبة الأصول الميدانية مع fluorescently المسمى مكافحة C3 أو C4 لمكافحة الأجسام المضادة. المقبل، وصفت الحالة للدم الفحص الكمي. يتم قياس انحلال الدم بوساطة تكمل في هذا الاختبار، الناجمة عن المصل المريض استفادة من الكشف الطيفي من الهيموغلوبين الافراج عنهم. كل من هذه المقايسات استنساخه جدا والكمية، وتسهيل الدراسات التنشيط تكملة الناجم عن الأجسام المضادة.

ويبين الشكل 2A مؤامرة مبعثر ممثل لكرات الدم الحمراء. ويمكن رؤية النابضة مناسبة لكرات الدم الحمراء واحدة في دي FSC-W - FSC-A مؤامرة (P1). عادة حوالي 95٪ من كرات الدم الحمراء تقع ضمن هذه البوابة P1 (الخلايا واحد)، ولكن عندما يتم استخدام نسبة عالية من مصل المريض، وهذا يمكن ...

Watch this Scientific Journal Video about Methods for Quantitative Detection of Antibody-induced Complement Activation on Red Blood Cells at JoVE.com

Methods for Quantitative Detection of Antibody-induced Complement Activation on Red Blood Cells

نحن هنا وصف اثنين من المقايسات لقياس تفعيل مكملا الناجم عن أجسام مضادة ضد خلايا الدم الحمراء. وميزة كبيرة على المقايسات الحالي الكمي وطبيعة السهل تفسير ل.

طرق للكشف الكمي للجسم التي يسببها تكملة التنشيط على خلايا الدم الحمراء.

Antibodies against red blood cells (RBCs) can lead to complement activation resulting in an accelerated clearance via complement receptors in the liver ...

methods-for-quantitative-detection-antibody-induced-complement

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

30.4K Views.  University of Amsterdam.  نحن هنا وصف اثنين من المقايسات لقياس تفعيل مكملا الناجم عن أجسام مضادة ضد خلايا الدم الحمراء. وميزة كبيرة على المقايسات الحالي الكمي وطبيعة السهل تفسير ل. 

Video: Methods for Quantitative Detection of Antibody-induced Complement Activation on Red Blood Cells

Depletion of Specific Cell Populations by Complement Depletion

The purification of immune cell populations is often required in order to study their unique functions. In particular, molecular approaches such as real-time PCR and microarray analysis require the isolation of cell populations with high purity. Commonly used purification strategies include fluorescent activated cell sorting (FACS), magnetic bead separation and complement depletion. Of the three strategies, complement depletion offers the advantages of being fast, inexpensive, gentle on the cells and a high cell yield. The complement system is composed of a large number of plasma proteins that when activated initiate a proteolytic cascade culminating in the formation of a membrane-attack complex that forms a pore on a cell surface resulting in cell death1. The classical pathway is activated by IgM and IgG antibodies and was first described as a mechanism for killing bacteria. With the generation of monoclonal antibodies (mAb), the complement cascade can be used to lyse any cell population in an antigen-specific manner. Depletion of cells by the complement cascade is achieved by the addition of complement fixing antigen-specific antibodies and rabbit complement to the starting cell population. The cells are incubated for one hour at 37&deg;C and the lysed cells are subsequently removed by two rounds of washing. MAb with a high efficiency for complement fixation typically deplete 95-100% of the targeted cell population. Depending on the purification strategy for the targeted cell population, complement depletion can be used for cell purification or for the enrichment of cell populations that then can be further purified by a subsequent method.

To effectively study the function of immune cell populations their purification is often required. Complement depletion is a fast and inexpensive technique for the isolation of immune cell populations with high purity.

نضوب بالسكان خلية معينة من قبل استنفاد تكملة

The purification of immune cell populations is often required in order to study their unique functions.  In particular, molecular approaches such as ...

Isolation of Mouse Peritoneal Cavity Cells

The peritoneal cavity is a membrane-bound and fluid-filled abdominal cavity of mammals, which contains the liver, spleen, most of the gastro-intestinal tract and other viscera. It harbors a number of immune cells including macrophages, B cells and T cells. The presence of a high number of na&iuml;ve macrophages in the peritoneal cavity makes it a preferred site for the collection of na&iuml;ve tissue resident macrophages (1). The peritoneal cavity is also important to the study of B cells because of the presence of a unique peritoneal cavity-resident B cell subset known as B1 cells in addition to conventional B2 cells. B1 cells are subdivided into B1a and B1b cells, which can be distinguished by the surface expression of CD11b and CD5. B1 cells are an important source of natural IgM providing early protection from a variety of pathogens (2-4). These cells are autoreactive in nature (5), but how they are controlled to prevent autoimmunity is still not understood completely. On the contrary, CD5+ B1a cells possess some regulatory properties by virtue of their IL-10 producing capacity (6). Therefore, peritoneal cavity B1 cells are an interesting cell population to study because of their diverse function and many unaddressed questions associated with their development and regulation. The isolation of peritoneal cavity resident immune cells is tricky because of the lack of a defined structure inside the peritoneal cavity. Our protocol will describe a procedure for obtaining viable immune cells from the peritoneal cavity of mice, which then can be used for phenotypic analysis by flow cytometry and for different biochemical and immunological assays.

The peritoneal cavity in mammals contains different immune cell populations crucial for innate immune responses. An efficient isolation method is required for biochemical and functional analyses of these cells. Here we provide a comprehensive method for the isolation of peritoneal cavity cells in the mouse.

عزل خلايا فأر التجويف البريتوني

The peritoneal cavity is a membrane-bound and fluid-filled abdominal cavity of mammals, which contains the liver, spleen, most of the gastro-intestinal ...

Murine Model of CD40-activation of B cells

Research on B cells has shown that CD40 activation improves their antigen presentation capacity. When stimulated with interleukin-4 and CD40 ligand (CD40L), human B cells can be expanded without difficulties from small amounts of peripheral blood within 14 days to very large amounts of highly-pure CD40-B cells (&gt;109 cells per patient) from healthy donors as well as cancer patients1-4. CD40-B cells express important lymph node homing molecules and can attract T cells in vitro5. Furthermore they efficiently take up, process and present antigens to T cells6,7. CD40-B cells were shown to not only prime na&iacute;ve, but also expand memory T cells8,9. Therefore CD40-activated B cells (CD40-B cells) have been studied as an alternative source of immuno-stimulatory antigen-presenting cells (APC) for cell-based immunotherapy1,5,10. In order to further study whether CD40-B cells induce effective T cell responses in vivo and to study the underlying mechanism we established a cell culture system for the generation of murine CD40-activated B cells. Using splenocytes or purified B cells from C57BL/6 mice for CD40-activation, optimal conditions were identified as follows: Starting from splenocytes of C57BL/6 mice (haplotype H-2b) lymphocytes are purified by density gradient centrifugation and co-cultured with HeLa cells expressing recombinant murine CD40 ligand (tmuCD40L HeLa)11. Cells are recultured every 3-4 days and key components such as CD40L, interleukin-4, -Mercaptoethanol and cyclosporin A are replenished. In this protocol we demonstrate how to obtain fully activated murine CD40-B cells (mCD40B) with similar APC-phenotype to human CD40-B cells (Fig 1a,b). CD40-stimulation leads to a rapid outgrowth and expansion of highly pure (&gt;90%) CD19+ B cells within 14 days of cell culture (Fig 1c,d). To avoid contamination with non-transfected cells, expression of the murine CD40 ligand on the transfectants has to be controlled regularly (Fig 2). Murine CD40-activated B cells can be used to study B-cell activation and differentiation as well as to investigate their potential to function as APC in vitro and in vivo. Moreover, they represent a promising tool for establishing therapeutic or preventive vaccination against tumors and will help to answer questions regarding safety and immunogenicity of this approach12.

In this video, we demonstrate the procedure of CD40-activation and expansion of murine B cells from splenocytes of C57BL/6 mice, which can be used as a model antigen-presenting cell (APC) to study induction of immunity.

الفئران نموذج تفعيل CD40 - B من الخلايا

Research on B cells has shown that CD40 activation improves their antigen presentation capacity. When stimulated with interleukin-4 and CD40 ligand ...

Detection of  Neu1 Sialidase Activity in Regulating TOLL-like Receptor Activation

Mammalian Toll-like receptors (TLRs) are a family of receptors that recognize pathogen-associated molecular patterns. Not only are TLRs crucial sensors of microbial (e.g., viruses, bacteria and parasite) infections, they also play an important role in the pathophysiology of infectious diseases, inflammatory diseases, and possibly in autoimmune diseases. Thus, the intensity and duration of TLR responses against infectious diseases must be tightly controlled. It follows that understanding the structural integrity of sensor receptors, their ligand interactions and signaling components is essential for subsequent immunological protection. It would also provide important opportunities for disease modification through sensor manipulation. Although the signaling pathways of TLR sensors are well characterized, the parameters controlling interactions between the sensors and their ligands still remain poorly defined. We have recently identified a novel mechanism of TLR activation by its natural ligand, which has not been previously observed 1,2. It suggests that ligand-induced TLR activation is tightly controlled by Neu1 sialidase activation. We have also reported that Neu1 tightly regulates neurotrophin receptors like TrkA and TrkB 3, which involve Neu1 and matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) cross-talk in complex with the receptors 4. The sialidase assay has been initially use to find a novel ligand, thymoquinone, in the activation of Neu4 sialidase on the cell surface of macrophages, dendritic cells and fibroblast cells via GPCR G&alpha;i proteins and MMP-9 5. For TLR receptors, our data indicate that Neu1 sialidase is already in complex with TLR-2, -3 and -4 receptors, and is induced upon ligand binding to either receptor. Activated Neu1 sialidase hydrolyzes sialyl &alpha;-2,3-linked &beta;-galactosyl residues distant from ligand binding to remove steric hinderance to TLR-4 dimerization, MyD88/TLR4 complex recruitment, NFkB activation and pro-inflammatory cell responses. In a collaborative report, Neu1 sialidase has been shown to regulate phagocytosis in macrophage cells 6. Taken together, the sialidase assay has provided us with powerful insights to the molecular mechanisms of ligand-induced receptor activation. Although the precise relationship between Neu1 sialidase and the activation of TLR, Trk receptors has yet to be fully elucidated, it would represent a new or pioneering approach to cell regulation pathways.

The sialidase assay is a simple technical approach that will elucidate novel molecular mechanism(s) of TLR sensors of microbial infections and involvement in inflammatory diseases at the receptor level on the cell surface of live macrophages.

الكشف عن نشاط تنظيم سياليداز Neu1 في اتصال مثل تنشيط مستقبلات

Mammalian Toll-like receptors (TLRs) are a family of receptors that recognize pathogen-associated molecular patterns. Not only are TLRs crucial sensors of ...

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

This protocol describes a simple approach for adhesive-tape-based sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by on-tape fluorescence in situ hybridization (FISH) for rapid culture-independent detection of Salmonella spp. Cell-charged tapes can also be placed face-down on selective agar for solid-phase enrichment prior to detection. Alternatively, low-volume liquid enrichments (liquid surface miniculture) can be performed on the surface of the tape in non-selective broth, followed by FISH and analysis via flow cytometry. To begin, sterile adhesive tape is brought into contact with fresh produce, gentle pressure is applied, and the tape is removed, physically extracting microbes present on these surfaces. Tapes are mounted sticky-side up onto glass microscope slides and the sampled cells are fixed with 10% formalin (30 min) and dehydrated using a graded ethanol series (50, 80, and 95%; 3 min each concentration). Next, cell-charged tapes are spotted with buffer containing a Salmonella-targeted DNA probe cocktail and hybridized for 15 - 30 min at 55&deg;C, followed by a brief rinse in a washing buffer to remove unbound probe. Adherent, FISH-labeled cells are then counterstained with the DNA dye 4',6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) and results are viewed using fluorescence microscopy. For solid-phase enrichment, cell-charged tapes are placed face-down on a suitable selective agar surface and incubated to allow in situ growth of Salmonella microcolonies, followed by FISH and microscopy as described above. For liquid surface miniculture, cell-charged tapes are placed sticky side up and a silicone perfusion chamber is applied so that the tape and microscope slide form the bottom of a water-tight chamber into which a small volume (&le; 500 &mu;L) of Trypticase Soy Broth (TSB) is introduced. The inlet ports are sealed and the chambers are incubated at 35 - 37&deg;C, allowing growth-based amplification of tape-extracted microbes. Following incubation, inlet ports are unsealed, cells are detached and mixed with vigorous back and forth pipetting, harvested via centrifugation and fixed in 10% neutral buffered formalin. Finally, samples are hybridized and examined via flow cytometry to reveal the presence of Salmonella spp. As described here, our "tape-FISH" approach can provide simple and rapid sampling and detection of Salmonella on tomato surfaces. We have also used this approach for sampling other types of fresh produce, including spinach and jalape&ntilde;o peppers.

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

This protocol describes a simple adhesive-tape-based approach for sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by rapid whole cell detection of Salmonella using fluorescence in situ hybridization (FISH).

مزيج من الشريط اللاصق على أساس أخذ العينات والإسفار في الموقع تهجين للكشف السريع عن السالمونيلا على المنتجات الطازجة

This protocol describes a simple approach for adhesive-tape-based sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by on-tape fluorescence in ...

Protocol for Recombinant RBD-based SARS Vaccines: Protein Preparation, Animal Vaccination and Neutralization Detection

Based on their safety profile and ability to induce potent immune responses against infections, subunit vaccines have been used as candidates for a wide variety of pathogens 1-3. Since the mammalian cell system is capable of post-translational modification, thus forming properly folded and glycosylated proteins, recombinant proteins expressed in mammalian cells have shown the greatest potential to maintain high antigenicity and immunogenicity 4-6.
Although no new cases of SARS have been reported since 2004, future outbreaks are a constant threat; therefore, the development of vaccines against SARS-CoV is a prudent preventive step and should be carried out. The RBD of SARS-CoV S protein plays important roles in receptor binding and induction of specific neutralizing antibodies against virus infection 7-9. Therefore, in this protocol, we describe novel methods for developing a RBD-based subunit vaccine against SARS. Briefly, the recombinant RBD protein (rRBD) was expressed in culture supernatant of mammalian 293T cells to obtain a correctly folded protein with proper conformation and high immunogenicity 6. The transfection of the recombinant plasmid encoding RBD to the cells was then performed using a calcium phosphate transfection method 6,10 with some modifications. Compared with the lipid transfection method 11,12, this modified calcium phosphate transfection method is cheaper, easier to handle, and has the potential to reach high efficacy once a transfection complex with suitable size and shape is formed 13,14. Finally, a SARS pseudovirus neutralization assay was introduced in the protocol and used to detect the neutralizing activity of sera of mice vaccinated with rRBD protein. This assay is relatively safe, does not involve an infectious SARS-CoV, and can be performed without the requirement of a biosafety-3 laboratory 15.
The protocol described here can also be used to design and study recombinant subunit vaccines against other viruses with class I fusion proteins, for example, HIV, respiratory syncytial virus (RSV), Ebola virus, influenza virus, as well as Nipah and Handra viruses. In addition, the methods for generating a pseudovirus and subsequently establishing a pseudovirus neutralization assay can be applied to all these viruses.

This protocol describes a general procedure for studying recombinant receptor-binding domain (RBD)-based subunit vaccines against SARS. It includes methods for transfection and expression of RBD protein in 293T cells, immunization of mice with RBD and detection of neutralization activity of mouse sera using an established SARS pseudovirus neutralization assay.

بروتوكول لقاحات مرض السارس المؤتلف RBD المستندة : إعداد البروتين ، والكشف عن تطعيم الحيوانات تحييد

Based on their safety profile and ability to induce potent immune responses against infections, subunit vaccines have been used as candidates for a wide ...

High-throughput Detection Method for Influenza Virus

Influenza virus is a respiratory pathogen that causes a high degree of morbidity and mortality every year in multiple parts of the world. Therefore, precise diagnosis of the infecting strain and rapid high-throughput screening of vast numbers of clinical samples is paramount to control the spread of pandemic infections. Current clinical diagnoses of influenza infections are based on serologic testing, polymerase chain reaction, direct specimen immunofluorescence and cell culture 1,2.
Here, we report the development of a novel diagnostic technique used to detect live influenza viruses. We used the mouse-adapted human A/PR/8/34 (PR8, H1N1) virus 3 to test the efficacy of this technique using MDCK cells 4. MDCK cells (104 or 5 x 103 per well) were cultured in 96- or 384-well plates, infected with PR8 and viral proteins were detected using anti-M2 followed by an IR dye-conjugated secondary antibody. M2 5 and hemagglutinin 1 are two major marker proteins used in many different diagnostic assays. Employing IR-dye-conjugated secondary antibodies minimized the autofluorescence associated with other fluorescent dyes. The use of anti-M2 antibody allowed us to use the antigen-specific fluorescence intensity as a direct metric of viral quantity. To enumerate the fluorescence intensity, we used the LI-COR Odyssey-based IR scanner. This system uses two channel laser-based IR detections to identify fluorophores and differentiate them from background noise. The first channel excites at 680 nm and emits at 700 nm to help quantify the background. The second channel detects fluorophores that excite at 780 nm and emit at 800 nm. Scanning of PR8-infected MDCK cells in the IR scanner indicated a viral titer-dependent bright fluorescence. A positive correlation of fluorescence intensity to virus titer starting from 102-105 PFU could be consistently observed. Minimal but detectable positivity consistently seen with 102-103 PFU PR8 viral titers demonstrated the high sensitivity of the near-IR dyes. The signal-to-noise ratio was determined by comparing the mock-infected or isotype antibody-treated MDCK cells.
Using the fluorescence intensities from 96- or 384-well plate formats, we constructed standard titration curves. In these calculations, the first variable is the viral titer while the second variable is the fluorescence intensity. Therefore, we used the exponential distribution to generate a curve-fit to determine the polynomial relationship between the viral titers and fluorescence intensities. Collectively, we conclude that IR dye-based protein detection system can help diagnose infecting viral strains and precisely enumerate the titer of the infecting pathogens.

This method describes the use of Infrared dye based imaging system for detection of H1N1 in bronchioalveolar lavage (BAL) fluid of infected mice at a high sensitivity. This methodology can be performed in a 96- or 384-well plate, requires &lt;10 &mu;l volume of test material and has the potential for concurrent screening of multiple pathogens.

الإنتاجية العالية لطريقة الكشف عن فيروس الإنفلونزا

Influenza virus is a respiratory pathogen that causes a high degree of morbidity and mortality every year in multiple parts of the world. Therefore, ...

Antigens Protected Functional Red Blood Cells By The Membrane Grafting Of Compact Hyperbranched Polyglycerols

Red blood cell (RBC) transfusion is vital for the treatment of a number of acute and chronic medical problems such as thalassemia major and sickle cell anemia 1-3. Due to the presence of multitude of antigens on the RBC surface (~308 known antigens 4), patients in the chronic blood transfusion therapy develop alloantibodies due to the miss match of minor antigens on transfused RBCs 4, 5. Grafting of hydrophilic polymers such as polyethylene glycol (PEG) and hyperbranched polyglycerol (HPG) forms an exclusion layer on RBC membrane that prevents the interaction of antibodies with surface antigens without affecting the passage of small molecules such as oxygen ,glucose, and ions3. At present no method is available for the generation of universal red blood donor cells in part because of the daunting challenge presented by the presence of large number of antigens (protein and carbohydrate based) on the RBC surface and the development of such methods will significantly improve transfusion safety, and dramatically improve the availability and use of RBCs. In this report, the experiments that are used to develop antigen protected functional RBCs by the membrane grafting of HPG and their characterization are presented. HPGs are highly biocompatible compact polymers 6, 7, and are expected to be located within the cell glycocalyx that surrounds the lipid membrane 8, 9 and mask RBC surface antigens10, 11.

The cell membrane modification of red blood cells (RBCs) with hyperbranched polyglycerol (HPG) is presented. Modified RBCs were characterized by aqueous two phase partitioning, osmotic fragility and complement mediated lysis. The camouflage of surface proteins and antigens was evaluated using the flow cytometry and Micro Typing System (MTS) blood phenotyping cards.

محمي مستضدات خلايا الدم الحمراء وظيفية بواسطة الغشاء مسمار Polyglycerols Hyperbranched الاتفاق

Red blood cell (RBC) transfusion is vital for the treatment of a number of acute and chronic medical problems such as thalassemia major and sickle cell ...

Qualitative and Quantitative Assays for Detection and Characterization of Protein Antimicrobials

Initial evaluations of large microbial libraries for potential producers of novel antimicrobial proteins require both qualitative and quantitative methods to screen for target enzymes prior to investing greater research effort and resources. The goal of this protocol is to demonstrate two complementary assays for conducting these initial evaluations. The microslide diffusion assay provides an initial or simple detection screen to enable the qualitative and rapid assessment of proteolytic activity against an array of both viable and heat-killed bacterial target substrates. As a counterpart, the increased sensitivity and reproducibility of the dye-release assay provides a quantitative platform for evaluating and comparing environmental influences affecting the hydrolytic activity of protein antimicrobials. The ability to label specific heat-killed cell culture substrates with Remazol brilliant blue R dye expands this capability to tailor the dye-release assay to characterize enzymatic activity of interest.

Here, we present protocols to rapidly screen and characterize enzymes for antimicrobial activity. The microslide diffusion assay and the dye-release assay utilize target bacterial substrates for qualitative and quantitative enzymatic activity evaluation.

فحوصات النوعية والكمية للكشف وتوصيف مضادات الميكروبات البروتين

Initial evaluations of large microbial libraries for potential producers of novel antimicrobial proteins require both qualitative and quantitative methods ...

Dextran Enhances the Lentiviral Transduction Efficiency of Murine and Human Primary NK Cells

The efficient transduction of specific genes into natural killer (NK) cells has been a major challenge. Successful transductions are critical to defining the role of the gene of interest in the development, differentiation, and function of NK cells. Recent advances related to chimeric antigen receptors (CARs) in cancer immunotherapy accentuate the need for an efficient method to deliver exogenous genes to effector lymphocytes. The efficiencies of lentiviral-mediated gene transductions into primary human or mouse NK cells remain significantly low, which is a major limiting factor. Recent advances using cationic polymers, such as polybrene, show an improved gene transduction efficiency in T cells. However, these products failed to improve the transduction efficiencies of NK cells. This work shows that dextran, a branched glucan polysaccharide, significantly improves the transduction efficiency of human and mouse primary NK cells. This highly reproducible transduction methodology provides a competent tool for transducing human primary NK cells, which can vastly improve clinical gene delivery applications and thus NK cell-based cancer immunotherapy.

The goal of this study was to formulate technologies that allow for successful gene transduction in primary natural killer (NK) cells. The dextran-mediated lentiviral transduction of human or mouse primary NK cells results in higher gene expression efficiencies. This method of gene transduction will vastly improve NK cell genetic manipulation.

ديكستران يعزز كفاءة توصيل لينتيفيرال الخلايا ناغورني كاراباخ الابتدائي مورين والبشرية

The efficient transduction of specific genes into natural killer (NK) cells has been a major challenge. Successful transductions are critical to defining ...