نشكر الدكتور JL. Galzi (UMR7242 CNRS؛ إلكيرش، فرنسا) لدعمه. وأيد هذا العمل من قبل CNRS، INSERM، جامعة ستراسبورغ، الألزاس وBioValley من المنح المقدمة من Conectus، لوكالة الوطني للبحوث (ANR 08 EBIO 014.02) CONSEIL الجهوي كوت الألزاس (Pharmadol)، COMMUNAUTE URBAINE دي ستراسبورغ (Pharmadol)، ICFRC (Pharmadol)، OSEO (Pharmadol)، جنرال اتجاه قصر الانتاجية (Pharmadol).

أجريت جميع التجارب وفقا صارمة مع المبادئ التوجيهية الأوروبية لرعاية الحيوانات المختبرية (مجلس الجماعات الأوروبية التوجيه 86/609/ECC) والمبادئ التوجيهية الأخلاقية للتحقيق من الألم التجريبية في الحيوانات واعية 13. وتم إيواء في منشأة الحيوان المؤسسية مع موظفي الرعاية المسؤولة عن تشغيل المرفق في الامتثال للمعايير البيئية - ذكور الفئران C57BL6 / N تاك (30 ز 10 أسابيع، 25). وتم إيواء الحيوانات في مجموعات (بحد أقصى خمسة الفئران في قفص) تحت 12 ساعة / 12 ساعة ضوء / دورة الظلام في درجة حرارة ثابتة (21 ± 1 درجة مئوية) مع حرية الوصول إلى الغذاء والماء. أجريت جميع التجارب في نفس الفترة من اليوم (10:00 حتي 16:00) باستخدام فوج من 16 الفئران. يشار إلى المواد والمعدات المحددة في الجدول المواد. إجراء خمس خطوات لمراقبة المورفين التي يسببها فرط التألم والتسامح البروتوكول هوتنقسم إلى خمس خطوات متسلسلة (AE) خلال مدة 15 يوما الشكل 1. 1 التعامل مع الفئران (الخطوة A؛ د-7 إلى د-5) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التعامل مع الفئران وروض لهم بالدخول بحرية إلى كابح. هذه الخطوة الأولية يقلل من الإجهاد - وبالتالي التقليل من أي خلط مع الإجهاد الناجم عن وعي - ويسمح للحيوانات لتكون معتادا على المحقق والمناولة والتلاعب في كابح الماوس. يتم التعامل مع كل الماوس بلطف لمدة 5 دقائق كل يوم. </li></ol> 2 الاستجابة مسبب للألم بصل (الخطوة B؛ د-4 إلى د-1) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس الإختفاء انسحاب ذيل باستخدام اختبار الذيل الغمر (TIT): <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعيين الحرارة إلى 48 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أعرض بلطف الماوس في كابح. تراجع جاحظ 2/3 نهاية ذيله في حمام مائي وبدء الكرونومتر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وقف الكرونومتر في أقرب وقت الماوس تسحب ذيله من الماء الساخن وتسجيل الوقت الكمون (في ثانية). في اله عدم وجود أي رد فعل مسبب للألم، يتم استخدام 25 ثانية وقف انتاج المواد الانشطارية لمنع تلف الأنسجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استبدال الماوس في قفصه واختبار واحد القادم حتى نهاية السلسلة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تكرار القياسات استجابة مسبب للألم مرتين أكثر من ذلك، أخذ قياسات من الحيوانات في نفس الترتيب. يتم تحديد استجابة الكمون مسبب للألم (ثانية) لكل الماوس حيث بلغت قيمة متوسط ​​لمدة ثلاثة قرارات متتالية. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس استجابات الميكانيكية باستخدام اختبار الضغط الذيل (TPT) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أعرض بلطف الماوس إلى كابح ووضع ذيله تحت غيض مخروطي من analgesimeter. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اضغط على مفتاح القدم لتطبيق الضغط المتزايد بشكل موحد على الجزء القريب من الذيل حتى أول رد فعل مسبب للألم (المناضلة، الصرير) يحدث. في لحظة رد فعل الحيوان، تسجيل القوة الحالية (بالغرام) الذي يتسبب الاستجابة مسبب للألم. في غياب أي رد فعل، يتم استخدام 600 غرام قيمة الوقف لتجنب رإصدار الضرر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر هذا الإجراء على أجزاء الوسيط والبعيدة من الذيل من نفس الماوس. ويلاحظ فاصل زمني لا يقل عن 30 ثانية بين التدابير على الماوس نظرا لتجنب التكيف أو التحيز الإجهاد. استبدال الماوس في قفصه واختبار الحيوان المقبل حتى نهاية سلسلة (أي يتم اختبار جميع الفئران). يتم أخذ القيمة مسبب للألم (جرام) لكل الماوس حيث بلغت قيمة متوسط ​​لمدة ثلاثة قياسات (أي الداني، وسيطة وأجزاء البعيدة من الذيل من كل حيوان). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اختبار مسبب للألم كرر (المبينة كافة الإجراءات تحت الخطوة 2) في أيام لاحقة، د 3 إلى د-1. </li></ol> 3 قياس المورفين تسكين (الخطوة C؛ D0) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد أفضل مزيج من الحيوانات التي يسمح يعتبر اختيار مجموعتين (ن = 8 لكل مجموعة) من الفئران مع متوسط ​​القيم مسبب للألم مستقرة وقابلة للمقارنة، أيهما الطريقة مسبب للألم (TIT أو TPT). وستتخذ هذه القيمة على أنها القاعديةاستجابة مسبب للألم مرجعية ل&quot;المالحة&quot; و &quot;المورفين&quot; جماعات المستقبل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس وزن الجسم من كل حيوان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد محلول المورفين (0.5 ملغ لكل مل المورفين) في العقيمة المالحة الفسيولوجية (كلوريد الصوديوم 0.9٪) للإدارة تحت الجلد (5 ملغ مورفين لكل كيلوغرام من وزن الجسم الحيوان). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس الكمون استجابة مسبب للألم (كما اتخذت الوقت نقطة 0) لكل الماوس على حد سواء &quot;المالحة&quot; وجماعات &quot;المورفين&quot; في TIT (جميع الخطوات تحت 2.1 أعلاه). ثم قياس حس الألم في TPT (جميع الخطوات تحت 2.2 أعلاه). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن المورفين تحت الجلد (عادة 0.25 مل من 0.5 ملغ / مل حل المورفين لكل 25 غرام وزن الماوس) والمالحة (0.25 مل لكل 25 غرام وزن الماوس) إلى &quot;المورفين&quot; وجماعات &quot;المالحة&quot;، على التوالي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس القيم مسبب للألم على TIT وTPT (جميع الإجراءات المذكورة أعلاه في إطار الخطوات 2.1 و 2.2 على التوالي) على مدى بالطبع الوقت (في 30 دقيقة intervتسكين آل) لتقييم المورفين (5 ملغ / كلغ) التي يسببها: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 30 دقيقة بعد الحقن، وقياس استجابة مسبب للألم (تقرير واحد) لكل من الماوس &quot;المالحة&quot; وجماعات &quot;المورفين&quot;، وذلك باستخدام TIT ثم TPT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم قياس القيم استجابة مسبب للألم (TIT وTPT) في جميع الفئران في نقاط زمنية (في ساعة): 3.5 1-1.5-2-2.5-3 وبعد الحقن. </li></ol></li></ol> 4 علاج المورفين المزمنة - التي يسببها المورفين هبرلجسا. (الخطوة D؛ D1 إلى D6) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في يوم: D1 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس القيم استجابة مسبب للألم على TIT وTPT كما هو موضح أعلاه (الخطوات 2.1 و 2.2). تعليم بعناية الإختفاء الانسحاب وحدود الضغط لكل حيوان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد محلول المورفين الطازجة كما هو مفصل في الخطوة 3.2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن المورفين تحت الجلد (5 ملغ / كغ من وزن الجسم) إلى المجموعة بأكملها &quot;المورفين&quot; والمالحة الفسيولوجية (0.25 مل لكل 25 غرام وزن الماوس) إلى مجموعة &quot;المالحة&quot;. اسمحوا عشرالحيوانات البريد راحة حتى اليوم التالي. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> على أيام: D2، D3، D4، D5 D6 وتكرار عمليات وصفها تحت القسم 4.1 </li></ol> 5 الإثبات للتسامح مسكن (الخطوة E؛ D7) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقييم يسببها المورفين تسكين وفقا لنموذج الوقت بالطبع المفصل بالفعل في القسم 3. </li></ol> 6. الحصول على البيانات والتحليلات الإحصائية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقييم القيم الاستجابة بصل مسبب للألم (الخطوة ب) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب عن كل يوم (على د-4-1 د لفترة) ويعني ± SEM القيم (ن = 8) لاستجابات مسبب للألم القاعدية كما الممنوحة من TIT وTPT داخل &quot;المالحة&quot; وجماعات &quot;المورفين&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مؤامرة يعني مسبب للألم القيم القاعدية بوصفها وظيفة من الوقت (اليوم) لكلا الفريقين الشكل 2. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحليل المورفين تسكين الوقت بالطبع في يوم D0 (الخطوة C) وD7 (الخطوة E) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب، في كل نقطة زمنية بعد المورفينالحقن، يعني ± SEM القيم (ن = 8) لاستجابات مسبب للألم كما الممنوحة من TIT (في ثانية) وTPT (في ز) في كل مجموعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مؤامرة يعني القيم استجابة مسبب للألم بوصفها وظيفة من الوقت ل &#39;المالحة &quot;وجماعات&quot; المورفين &quot;في اليوم 0 الشكل 3 ويوم 7 الشكل 5. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطوير المورفين التي يسببها هبرلجسا (الخطوة D) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب عن كل يوم (أكثر من فترة العلاج D0-D7) يعني ± SEM القيم (ن = 8) للقيم استجابة مسبب للألم القاعدية كما الممنوحة من TIT وTPT داخل &#39;المعالجة المالحة&#39; والجماعات المعالجة المورفين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مؤامرة يعني القيم استجابة مسبب للألم القاعدية بوصفها وظيفة من الوقت (اليوم) ل &#39;المعالجة المالحة&#39; والجماعات المعالجة مورفين &#39;الشكل 4. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دليل للتسامح مسكن (خطوات C و E) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد من المورفين الوقت بالطبع الإلكترونيةتنفيذ xperiment في D0 الشكل 3 قيمة الوقت (أو نطاق الوقت) المطلوبة لالمورفين للحث على الاستجابة مسكن القصوى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأخذ هذه القيمة (عادة 30 دقيقة) كما في المرة إشارة إلى تقدير في D7 الشكل 5 قيمة حس الألم الأساس (المجموعة التي عولجت المالحة) واستجابة مسكن الفعلية (المجموعة التي عولجت المورفين) إلى المورفين الحادة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ، يتم عرض القيم مسبب للألم التي اتخذت في نقطة زمنية 30 دقيقة من المورفين تجارب الوقت بالطبع أجريت في D0 D7 وللمجموعات وتعامل المورفين-المعالجة المالحة كما رسوم بيانية الشكل 6. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إحصاءات: تحليل البيانات باستخدام طريقة واحدة التدابير المتكررة ANOVA. كانت عوامل الاختلاف العلاج (بين المواضيع) والوقت (ضمن الموضوع). للتحقق من الخلافات بشكل منفصل في كل مجموعة، تم تنفيذ تدابير المتكررة ANOVA. وأجريت مقارنات بين مجموعتين باستخدام المفردة اختبار t أو إقران اختبار t عند الاقتضاء. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم تعيين مستوى أهمية في P &lt;0.05. وتجرى جميع التحليلات الإحصائية باستخدام البرامج من STATview. </li></ol>

يعلن الكتاب أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.

الأفيونية التي يسببها فرط التألم (OIH) ومسكن التسامح تحد من الفعالية السريرية للمواد الأفيونية في الحيوانات والبشر 1-3. يتم استكشاف إشراك الموالية للالتهابات 4،5 أو المؤيدة للمسبب للألم (مكافحة الأفيونية) 6،7 نظم حاليا الفرضيات. توضيح من الآليات الكامنة OIH والتسامح يتطلب مزيجا من المجراة في المختبر النهج، وذلك باستخدام نماذج حيوانية مناسبة، البروتوكولات التجريبية والأدوات الجزيئية. الصيدلة السلوكية هو النموذج المهيمن لرصد وتحديد ولايات مسكن ومفرط التألم في الحيوانات المختبرية (الجرذان والفئران). تطبيق الحوافز الضارة (الحرارية والميكانيكية أو الكيميائية) لجزء من الجسم مريحة (hindpaw، الذيل) من الحيوان يؤدي إلى انسحاب nocifensive التي يمكن وسجل بسهولة. نقترح هنا مقاربة منهجية لإحداث وتسجيل وقياس OIH والتسامح في البرية من نوع الفئران، وذلك باستخدام الذيل والذيل الغمر اختبارات الضغط. يسمح الإجراء لتحديد سهلة وحساسة وقابلة للتكرار القيم استجابة مسبب للألم الحرارية والميكانيكية في الفئران. كما هو موضح في بروتوكول الفيديو، C57BL / 6 الفئران تجربة فرط التألم الهامة التالية الإدارة المورفين المزمنة والحفاظ على هذا لعدة أيام. وخفضت بشكل كبير سواء القيم مسبب للألم الحرارية والميكانيكية، مقارنة مع المقاييس على الحيوانات السذاجة. علاوة على ذلك، لدينا التجريبية مجموعة المتابعة يسمح لمراقبة، بالإضافة إلى تطوير OIH، وانخفاض الاستجابة للمسكن المورفين (التسامح). دعم البيانات المقدمة عن رأي مفاده أن فرط التألم والتسامح قد تنطوي على الآليات الخلوية والجزيئية شيوعا 8،9، على الرغم من أن هذا هو المتنازع عليها في الأدب 1،10-12. أخيرا، هذا البروتوكول يمكن تكييفها على نحو مماثل لالفئران المعدلة وراثيا من أجل تقييم دور الجينات الفردية في MODULAنشوئها من الألم. كما يوفر النظام نموذج لتقييم فعالية وكلاء العلاجية المحتملة لتحسين تأثيرات مسكنة الأفيونية.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="879">
	<tbody>
		<tr height="17">
			<td height="34" rowspan="2" style="height:34px;width:220px;">Name</td>
			<td rowspan="2" style="width:231px;">Company</td>
			<td rowspan="2" style="width:139px;">Catalog Number</td>
			<td rowspan="2" style="width:291px;">Comments/description</td>
		</tr>
		<tr height="17">
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">C57BL/6N Tac mice</td>
			<td style="width:231px;">Taconic, Ry, Denmark</td>
			<td style="width:139px;">C57BL/6N Tac B6-M</td>
			<td style="width:291px;">Male mice (25-30g)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">Morphine hydrochloride</td>
			<td style="width:231px;">Francopia, Paris, France</td>
			<td style="width:139px;">CAS n&#176; 52-26-6</td>
			<td style="width:291px;">Delivered with special authorization</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">Syringes (Terumo)</td>
			<td style="width:231px;">Dutscher, Brumath, France</td>
			<td style="width:139px;">050000</td>
			<td style="width:291px;">Polypropylene; Sterile; Volume : 1 ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">Needles (Terumo)</td>
			<td style="width:231px;">Dutscher, Brumath, France</td>
			<td style="width:139px;">050101</td>
			<td style="width:291px;">G26 &#189; (Terumo reference : NN2613RO1)</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:220px;">Mouse restrainer</td>
			<td style="width:231px;">Home-made</td>
			<td style="width:139px;">-</td>
			<td style="width:291px;">Two metallic grids (5x11cm) assembled with adhesive tape and staples.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">Thermostated water bath GR150</td>
			<td style="width:231px;">Grant Instruments, Cambridge, UK</td>
			<td style="width:139px;">GP 0540003</td>
			<td style="width:291px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">Analgesimeter</td>
			<td style="width:231px;">Panlab, Barcelona, Spain</td>
			<td style="width:139px;">LE 7306</td>
			<td style="width:291px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Kaleidagraph software</td>
			<td style="width:231px;">Synergy software, Reading, PA, USA</td>
			<td style="width:139px;">Kaleidagraph 4.03&#160;</td>
			<td style="width:291px;">Scientific graphing</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">STATview software</td>
			<td style="width:231px;"></td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:291px;">Free download; Statistics</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessment of morphine-induced hyperalgesia and analgesic tolerance in mice using thermal and mechanical nociceptive modalities

فرط التألم الناجم عن المواد الأفيونية والتسامح تؤثر بشدة على الفعالية السريرية للمواد الأفيونية مسكنات الألم كما في الحيوانات والبشر. الآليات الجزيئية الكامنة وراء كل من الظواهر ليست مفهومة جيدا وينبغي أن تستفيد من التوضيح لهم من دراسة النماذج الحيوانية ومن تصميم البروتوكولات التجريبية المناسبة. نحن هنا وصف الأسلوب المنهجي للحمل، وتسجيل وقياس التي يسببها المورفين فرط التألم وكذلك لتثبت التسامح مسكن، وذلك باستخدام الذيل والذيل الغمر اختبارات الضغط في البرية من نوع الفئران. كما هو موضح في الفيديو، وينقسم إلى خمسة بروتوكول خطوات متسلسلة. التعامل والتعود مراحل تسمح بتحديد الآمن للاستجابة مسبب للألم القاعدية من الحيوانات. إدارة المورفين المزمن يؤدي فرط التألم كبيرة كما يتضح من زيادة في كل من الحساسية الحرارية والميكانيكية، في حين أن المقارنة بين تسكين الوقت دورات بعد الحاد أو مندوبيشير علاج المورفين عتيد بوضوح تنمية التسامح تتجلى في انخفاض في السعة استجابة مسكن. هذا البروتوكول يمكن تكييفها على نحو مماثل لالفئران المعدلة وراثيا من أجل تقييم دور الجينات الفردية في التشكيل من حس الألم وتسكين المورفين. كما يوفر نظام نموذجي للتحقيق في فعالية العوامل العلاجية المحتملة لتحسين فعالية المسكنات الأفيونية.

تقييم القيم بصل مسبب للألم من الفئران السذاجة (الخطوة ب) طبقت TIT وTPT بالتتابع إلى فوج كامل من الفئران (ن = 16)، وتوفير متوسط ​​القيم استجابة مسبب للألم. أفضل مزيج من الحيوانات سمح تعريف البعدية للمجموعتين (ن = 8) من الفئران، ويشار إلى المالحة والمورفين، الذي عرض قيم مسبب للألم القاعدية مماثلة ومستقرة الشكل 2. وتكافؤ المجموعتين صالحة مهما كانت اختبار مسبب للألم ( TIT: الشكل 2A؛ TPT: الشكل 2B) الذي تم تحديده. الوقت طبعا للمورفين في تسكين يوم 0 (الخطوة C) تم تقييم المورفين تسكين بعد حقنة واحدة (الشوري) من المورفين (5 ملغ / كلغ) في الفئران السذاجة باستخدام كل TIT الشكل 3A وTPT الشكل 3B. في كل الاختبارات، والتحليلات الإحصائية مع طريقة واحدة التدابير المتكررة ANOVA reveaل أن هناك تفاعل كبير بين العلاج والوقت لTIT (F (7، 98) = 72، ع &lt;0.001) وTPT (F (7، 98) = 31، ع &lt;0.001). TIT والبيانات TPT يحلل استخدام تدابير المتكررة ANOVA تشير إلى أنه لا يوجد تأثير حقن المياه المالحة (F (7، 49) = 0.49، ع&gt; 0.05) وجمعة (7، 49) = 1.85، P&gt; 0.05 على التوالي لTIT وTPT الاختبارات)، في حين حقن المورفين يؤدي الى تسكين قوية في الفئران (F (7، 49) = 92.46، ع &lt;0.001) وجمعة (7، 49) = 34.37، ع &lt;0.001 على التوالي لTIT والاختبارات TPT). تم التوصل إلى تأثير مسكن القصوى من المورفين بعد 30 دقيقة في TIT وبعد 60 دقيقة في TPT بالمقارنة مع الضوابط حقن المياه المالحة (ع &lt;0.001، المفردة اختبار t). كرر المورفين إدارات يقنع هبرلجسا في الفئران (الخطوة D) تم قياس القيم القاعدية مسبب للألم كل يومقبل المالحة أو المورفين ادارة (انظر البروتوكول). كما هو مبين في الشكل (4)، والإدارات المورفين مرة واحدة يوميا على مدى فترة العلاج 6 أيام يسببها لخفض الحرارية (F (7، 56) = 11.6، P &lt;0.001، والتدابير المتكررة ANOVA؛ الشكل 4A) كبيرة والتقدمية والميكانيكية (F ( 7،56) = 15،55، ع &lt;0.001، وكرر التدابير ANOVA؛ الشكل 4B) مسبب للألم القيم القاعدية. وضعت فرط التألم بسرعة كما بدأت تكون كبيرة في يوم 1 في TIT (ع &lt;0.01، المفردة اختبار t، مقارنة مع الضوابط حقن المياه المالحة) وفي يوم 2 في TPT (ع &lt;0.05، المفردة اختبار t، مقارنة المالحة حقن الضوابط). الوقت طبعا للمورفين في تسكين 7 يوم، بعد المزمن علاج المورفين (الخطوة E) في يوم 7، تم فحص الفئران التي تلقت المورفين أو المالحة حقن يومية على مدى 7 أيام (D0 إلى D6) في TIT الشكل 5A وTPT الشكل 5B الأول للقيم مسبب للألم القاعدية وثم لاستجابتها لمسكن المورفين الحاد (5 ملغ / كغ، واتفاقية استكهولم). في اتفاق مع تطور فرط التألم هو مبين في الشكل (4)، وكان قيمة مسبب للألم القاعدية (الوقت 0) من الفئران التي عولجت بشكل مزمن مع المورفين أقل بكثير من السيطرة على الفئران حقن المياه المالحة (ع &lt;0.001، المفردة اختبار t). التالية المورفين الحادة، واستجابة مسبب للألم من المجموعة التي عولجت المورفين المزمن بشكل ملحوظ، ولكن فقط قليلا تجاوزت قيمة مسبب للألم القاعدية من السيطرة على الفئران المحقونة المالحة قياسها 30 دقيقة في TIT وTPT (ع &lt;0.01 و p &lt;0.05، ر المفردة اختبار، على التوالي)، وعلى 60 دقيقة في TIT (ع &lt;0.05؛ المفردة اختبار t). من 2 ساعة بعد العلاج المورفين حتى نهاية التجربة، عاد الردود مسبب للألم إلى قيم أقل من تلك الفئران التحكم (ع&lt;0.001، المفردة اختبار t). مقارنة بين الردود مسكن القصوى من الفئران إلى مورفين قبل (يوم 0) وبعد علاج المورفين المزمن (يوم 7). القيم عتبة مسبب للألم المعروضة في الشكل (6) هم من TIT (A) وTPT (B) تنفيذ 30 دقيقة بعد حقن المورفين أو المالحة كما هو موضح في الشكلين 3 (يوم 0) و 5 (يوم 7). ولوحظ وجود انخفاض قوي في تسكين المورفين في الفئران بعد العلاج المورفين المزمن لمدة 7 أيام في مقارنة مع استجابتهم الأولية للوعي في اليوم 0 في كل الاختبارات مسبب للألم (ع &lt;0.001 إقران اختبار t). تظهر هذه البيانات أن التسامح لم تتطور في آلام شديدة الحساسية الحيوانات. <img alt="الشكل 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51264/51264fig1highres.jpg" width="500" /> الشكل 1. A خمس خطوات المواليةcedure لمراقبة المورفين التي يسببها فرط التألم والتسامح. وينقسم البروتوكول إلى خمس خطوات متسلسلة (AE) خلال المدة الإجمالية 15 يوما. <img alt="الرقم 2" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51264/51264fig2highres.jpg" width="500" /> . الرقم 2 تعريف القيم القاعدية مسبب للألم استجابة (الخطوة B؛ د-4 إلى د-1). يتم تطبيق الغمر الذيل (TIT) (A) والذيل الضغط (TPT) (B) اختبارات لسلسلة كاملة من الحيوانات من أجل تقييم القيم القاعدية مسبب للألم بهم. بعد ذلك، مجموعتين من الفئران (ن = 8)، ويشار إلى &quot;المالحة&quot; وجماعات &quot;المورفين&quot;، يتم تعريف بحيث تظهر متوسط ​​القيم مسبب للألم مستقرة وقابلة للمقارنة، ومهما كانت طريقة مسبب للألم الذي يعتبر. <img alt="الرقم 3" fo:content-width="5in" srج = &quot;/ files/ftp_upload/51264/51264fig3highres.jpg&quot; العرض = &quot;500&quot; /&gt; الرقم 3. بالطبع حان الوقت لتسكين المورفين في اليوم 0 (الخطوة C) في TIT (A) وTPT (B). تم تحديد القيمة القاعدية استجابة مسبب للألم من الفئران كل 30 دقيقة بعد المورفين واحد (5 ملغ / كغ، واتفاقية استكهولم. ) أو حقن المياه المالحة. يتم التعبير عن البيانات كما يعني ± SEM، ن = 8 الفئران في كل مجموعة. * P &lt;0.05، ** P &lt;0.01، *** P &lt;0.001، المفردة اختبار t مقارنة بالمجموعة الضابطة. <img alt="الرقم 4" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51264/51264fig4highres.jpg" width="500" /> الشكل 4 تطوير فرط التألم التالية الإدارة المتكررة المورفين (الخطوة D؛ D1 إلى D6). تم تحديد القيمة مسبب للألم القاعدية من الفئران عن طريق TIT (A) وTPT (B) مرة واحدة يوميا قبل المورفين (5 ملغ / كغ،الشوري) أو الإدارة المالحة. يتم التعبير عن بيانات القيم يعني ± SEM كما، ن = 8 الفئران في كل مجموعة. * P &lt;0.05، ** P &lt;0.01، *** P &lt;0.001 كتبها المفردة اختبار t بالمقارنة مع مجموعة المراقبة المعالجة المالحة. <img alt="الرقم 5" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51264/51264fig5highres.jpg" width="500" /> الرقم 5. الوقت بالطبع لتسكين المورفين في المورفين المزمنة الفئران التي عولجت في يوم 7 (الخطوة E) في TIT (A) وTPT (B). الفئران التي عولجت بشكل مزمن مع المورفين (النقاط السوداء) أو المالحة (مثلثات بيضاء) من يوم ليوم 6 0، وردت في اليوم 7 حقنة واحدة من المورفين (5 ملغ / كغ، SC) أو المالحة، على التوالي. تم تحديد استجابة مسبب للألم من الفئران كل 30 دقيقة بعد حقن المورفين أو المالحة. يتم التعبير عن البيانات كما يعني ± SEM، ن = 8 الفئران في كل مجموعة. * P &lt;0.05، ** P &amp; #60؛ 0.01 بواسطة المفردة اختبار t بالمقارنة مع مجموعة المراقبة المعالجة المالحة. أشرطة الخطأ التي لا يتجاوز حجم رموز مخفية. <img alt="الرقم 6" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51264/51264fig6highres.jpg" width="500" /> الشكل 6. مقارنة بين الحد الأقصى الردود مسكن من الفئران لالمورفين (5 ملغ / كغ، واتفاقية استكهولم.) قبل (يوم 0) وبعد العلاج المورفين المزمن (يوم 7). القيم ذكرت هنا من التجارب هو مبين في الشكل (3) والشكل (5). تم قياس القيم مسبب للألم باستخدام TIT (A) وTPT (B) 30 دقيقة بعد حقن المورفين أو المالحة. يتم التعبير عن البيانات كما يعني ± SEM، ن = 8 الفئران في كل مجموعة. *** P &lt;0.001 قبل الاقتران اختبار t.

Watch this Scientific Journal Video about Assessment of Morphine-induced Hyperalgesia and Analgesic Tolerance in Mice Using Thermal and Mechanical Nociceptive Modalities at JoVE.com

Assessment of Morphine-induced Hyperalgesia and Analgesic Tolerance in Mice Using Thermal and Mechanical Nociceptive Modalities

وصفنا بروتوكول لدراسة تطور فرط التألم الناجم عن المواد الأفيونية والتسامح في الفئران. استنادا إلى قياس الاستجابات مسبب للألم الحرارية والميكانيكية للحيوانات السذاجة والمعالجة المورفين، فإنه يسمح لقياس الزيادة في حساسية الألم (فرط التألم) وانخفاض في تسكين (التسامح) المرتبطة بإدارة الأفيونية المزمن.

تقييم المورفين التي يسببها هبرلجسا ومسكن التسامح في الفئران عن طريق الحرارية والميكانيكية مسبب للألم طرائق

Opioid-induced hyperalgesia and tolerance severely impact the clinical efficacy of opiates as pain relievers in animals and humans. The molecular ...

assessment-morphine-induced-hyperalgesia-analgesic-tolerance-mice

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Pharmacology

Neuroscience

Unit 1

Drugs for Pain Management: Opioid Analgesics and General Anesthetics

SCIENTISTS IN ACTION

33.0K Views.  Université de Strasbourg.  وصفنا بروتوكول لدراسة تطور فرط التألم الناجم عن المواد الأفيونية والتسامح في الفئران. استنادا إلى قياس الاستجابات مسبب للألم الحرارية والميكانيكية للحيوانات السذاجة والمعالجة المورفين، فإنه يسمح لقياس الزيادة في حساسية الألم (فرط التأل...

Video: Assessment of Morphine-induced Hyperalgesia and Analgesic Tolerance in Mice Using Thermal and Mechanical Nociceptive Modalities

Assessment of Motor Balance and Coordination in Mice using the Balance Beam

Brain injury, genetic manipulations, and pharmacological treatments can result in alterations of motor skills in mice. Fine motor coordination and balance can be assessed by the beam walking assay. The goal of this test is for the mouse to stay upright and walk across an elevated narrow beam to a safe platform. This test takes place over 3 consecutive days: 2 days of training and 1 day of testing. Performance on the beam is quantified by measuring the time it takes for the mouse to traverse the beam and the number of paw slips that occur in the process. Here we report the protocol used in our laboratory, and representative results from a cohort of C57BL/6 mice. This task is particularly useful for detecting subtle deficits in motor skills and balance that may not be detected by other motor tests, such as the Rotarod.

Deficits in fine motor coordination can be assessed with the balance beam test. Performance on the beam is quantified by the speed at which the beam is traversed and the number of times the mouse slips on the beam.

تقييم الرصيد موتور والتنسيق في الفئران باستخدام عارضة التوازن

Brain injury, genetic manipulations, and pharmacological treatments can result in alterations of motor skills in mice.  Fine motor coordination and ...

Rapid Determination of the Thermal Nociceptive Threshold in Diabetic Rats

Painful diabetic neuropathy (PDN) is characterized by hyperalgesia i.e., increased sensitivity to noxious stimulus, and allodynia i.e., hypersensitivity to normally innocuous stimuli1. Hyperalgesia and allodynia have been studied in many different rodent models of diabetes mellitus2. However, as stated by B&ouml;lcskei et al, determination of "pain" in animal models is challenging due to its subjective nature3. Moreover, the traditional methods used to determine behavioral responses to noxious thermal stimuli usually lack reproducibility and pharmacological sensitivity3. For instance, by using the hot-plate method of Ankier4, flinch, withdrawal and/or licking of either hind- and/or fore-paws is quantified as reflex latencies at constant high thermal stimuli (52-55 &deg;C). However, animals that are hyperalgesic to thermal stimulus do not reproducibly show differences in reflex latencies using those supra-threshold temperatures3,5. As the recently described method of B&ouml;lcskei et al.6, the procedures described here allows for the rapid, sensitive and reproducible determination of thermal nociceptive thresholds (TNTs) in mice and rats. The method uses slowly increasing thermal stimulus applied mostly to the skin of mouse/rat plantar surface. The method is particularly sensitive to study anti-nociception during hyperalgesic states such as PDN. The procedures described bellow are based on the ones published in detail by Alm&aacute;si et al 5 and B&ouml;lcskei et al 3. The procedures described here have been approved the Laboratory Animal Care and Use Committee (LACUC), Wright State University.

Here, we describe a rapid reliable and simple procedure to determine the lowest temperature at which rats or mice show nocifensive behavior, i.e. the thermal nociceptive threshold (TNT). This method applies a slowly increasing thermal stimulus allowing precise and reproducible estimation of TNTs with minimum, if any, stress to the animals.

سريع تحديد العتبة Nociceptive الحرارية في الفئران المصابة بمرض السكر

Painful diabetic neuropathy (PDN) is characterized by hyperalgesia i.e., increased sensitivity to noxious stimulus, and allodynia i.e., hypersensitivity ...

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life. The cold plantar assay allows the objective and inexpensive assessment of cold sensitivity in mice, and can quantify both analgesia and hypersensitivity. Mice are acclimated on a glass plate, and a compressed dry ice pellet is held against the glass surface underneath the hindpaw. The latency to withdrawal from the cooling glass is used as a measure of cold sensitivity.
Cold sensation is also important for survival in regions with seasonal temperature shifts, and in order to maintain sensitivity animals must be able to adjust their thermal response thresholds to match the ambient temperature. The Cold Plantar Assay (CPA) also allows the study of adaptation to changes in ambient temperature by testing the cold sensitivity of mice at temperatures ranging from 30 &#176;C to 5 &#176;C. Mice are acclimated as described above, but the glass plate is cooled to the desired starting temperature using aluminum boxes (or aluminum foil packets) filled with hot water, wet ice, or dry ice. The temperature of the plate is measured at the center using a filament T-type thermocouple probe. Once the plate has reached the desired starting temperature, the animals are tested as described above.
This assay allows testing of mice at temperatures ranging from innocuous to noxious. The CPA yields unambiguous and consistent behavioral responses in uninjured mice and can be used to quantify both hypersensitivity and analgesia. This protocol describes how to use the CPA to measure cold hypersensitivity, analgesia, and adaptation in mice.

The Cold Plantar Assay (CPA) measures cold responsiveness between 30 &#176;C and 5 &#176;C, and can also measure cold adaptation. This protocol describes how to use the CPA to measure cold hypersensitivity, analgesia, and adaptation in mice.

طريقة بسيطة وغير مكلفة لتحديد الباردة الحساسية والتكيف في الفئران

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

Assessment of Hippocampal Dendritic Complexity in Aged Mice Using the Golgi-Cox Method

Dendritic spines are the protuberances from the neuronal dendritic shafts that contain&#160; excitatory synapses. The morphological and branching variations of the neuronal dendrites within the hippocampus are implicated in cognition and memory formation. There are several approaches to Golgi staining, all of which have been useful for determining the morphological characteristics of dendritic arbors and produce a clear background. The present Golgi-Cox method, (a slight variation of the protocol that is provided with a commercial Golgi staining kit), was designed to assess how a relatively low dose of the chemotherapeutic drug 5-flurouracil (5-Fu) would affect dendritic morphology, the number of spines, and the complexity of arborization within the hippocampus. The 5-Fu significantly modulated the dendritic complexity and decreased the spine density throughout the hippocampus in a region-specific manner. The data presented show that the Golgi staining method effectively stained the mature neurons in the CA1, the CA3, and the dentate gyrus (DG) of the hippocampus. This protocol reports the details for each step so that other researchers can reliably stain tissue throughout the brain with high quality results and minimal troubleshooting.

Here we present a Golgi-Cox protocol in extensive detail. This reliable tissue stain method allows for a high-quality assessment of the cytoarchitecture in the hippocampus, and throughout the entire brain, with minimal troubleshooting.

تقييم التعقيد الجذعي الحصين في الفئران المسنين باستخدام طريقة جولجي-كوكس

Dendritic spines are the protuberances from the neuronal dendritic shafts that contain&#160; excitatory synapses. The morphological and branching ...

Assessment of Dopaminergic Homeostasis in Mice by Use of High-performance Liquid Chromatography Analysis and Synaptosomal Dopamine Uptake

Dopamine (DA) is a modulatory neurotransmitter controlling motor activity, reward processes and cognitive function. Impairment of dopaminergic (DAergic) neurotransmission is strongly associated with several central nervous system-associated diseases such as Parkinson&#39;s disease, attention-deficit-hyperactivity disorder and drug addiction1,2,3,4. Delineating disease mechanisms involving DA imbalance is critically dependent on animal models to mimic aspects of the diseases, and thus protocols that assess specific parts of the DA homeostasis are important to provide novel insights and possible therapeutic targets for these diseases.
Here, we present two useful experimental protocols that when combined provide a functional read-out of the DAergic system in mice. Biochemical and functional parameters on DA homeostasis are obtained through assessment of DA levels and dopamine transporter (DAT) functionality5. When investigating the DA system, the ability to reliably measure endogenous levels of DA from adult brain is essential. Therefore, we present how to perform high-performance liquid chromatography (HPLC) on brain tissue from mice to determine levels of DA. We perform the experiment on tissue from dorsal striatum (dStr) and nucleus accumbens (NAc), but the method is also suitable for other DA-innervated brain areas.
DAT is essential for reuptake of DA into the presynaptic terminal, thereby controlling the temporal and spatial activity of released DA. Knowing the levels and functionality of DAT in the striatum is of major importance when assessing DA homeostasis. Here, we provide a protocol that allows to simultaneously deduce information on surface levels and function using a synaptosomal6 DA uptake assay.
Current methods combined with standard immunoblotting protocols provide the researcher with relevant tools to characterize the DAergic system.

Synaptosomal dopamine uptake and high-performance liquid chromatography analysis represent experimental tools to investigate dopamine homeostasis in mice by assessing the function of the dopamine transporter and levels of dopamine in striatal tissue, respectively. Here we present protocols to measure dopamine tissue content and assess the functionality of the dopamine transporter.

تقييم التوازن تتميز في الفئران باستخدام التحليل اللوني السائل عالي الأداء وامتصاص الدوبامين سينابتوسومال

Dopamine (DA) is a modulatory neurotransmitter controlling motor activity, reward processes and cognitive function. Impairment of dopaminergic (DAergic) ...

Visual Evoked Potential Recordings in Mice Using a Dry Non-invasive Multi-channel Scalp EEG Sensor

For scalp EEG research environments with laboratory mice, we designed a dry-type 16 channel EEG sensor which is non-invasive, deformable, and re-usable because of the plunger-spring-barrel structural facet and mechanical strengths resulting from metal materials. The whole process for acquiring the VEP responses in vivo from a mouse consists of four steps: (1) sensor assembly, (2) animal preparation, (3) VEP measurement, and (4) signal processing. This paper presents representative measurements of VEP responses from multiple mice with a submicro-voltage signal resolution and sub-hundred millisecond temporal resolution. Although the proposed method is safer and more convenient compared to other previously reported animal EEG acquiring methods, there are remaining issues including how to enhance the signal-to-noise ratio and how to apply this technique with freely moving animals. The proposed method utilizes easily available resources and shows a repetitive VEP response with a satisfactory signal quality. Therefore, this method could be utilized for longitudinal experimental studies and reliable translational research exploiting non-invasive paradigms.

We designed a dry-type 16 channel EEG sensor which is non-invasive, deformable, and re-usable. This paper describes the whole process from manufacturing the proposed EEG electrode to signal processing of visual evoked potential (VEP) signals measured on a mouse scalp using a dry non-invasive multi-channel EEG sensor.

تسجيلات المحتملة مقولة البصرية في الفئران باستخدام الجاف غير الغازية متعدد القنوات فروة الرأس الاستشعار EEG

For scalp EEG research environments with laboratory mice, we designed a dry-type 16 channel EEG sensor which is non-invasive, deformable, and re-usable ...

Assessment of Sensory Thresholds in Dogs Using Mechanical and Hot Thermal Quantitative Sensory Testing

Quantitative sensory testing (QST) is used to evaluate the function of the somatosensory system in dogs by assessing the response to applied mechanical and thermal stimuli. QST is used to determine normal dogs&#39; sensory thresholds and evaluate alterations in peripheral and central sensory pathways caused by various disease states, including osteoarthritis, spinal cord injury, and cranial cruciate ligament rupture. Mechanical sensory thresholds are measured by electronic von Frey anesthesiometers and pressure algometers. They are determined as the force at which the dog exhibits a response indicating conscious stimulus perception. Hot thermal sensory thresholds are the latency to respond to a fixed or ramped temperature stimulus applied by a contact thermode.
Following a consistent protocol for performing QST and paying attention to details of the testing environment, procedure, and individual study subjects are critical for obtaining accurate QST results for dogs. Protocols for the standardized collection of QST data in dogs have not been described in detail. QST should be performed in a quiet, distraction-free environment that is comfortable for the dog, the QST operator, and the handler. Ensuring that the dog is calm, relaxed, and properly positioned for each measurement helps produce reliable, consistent responses to the stimuli and makes the testing process more manageable. The QST operator and handler should be familiar and comfortable with handling dogs and interpreting dogs&#39; behavioral responses to potentially painful stimuli to determine the endpoint of testing, reduce stress, and maintain safety during the testing process.

This work describes a standard protocol for mechanical and hot thermal quantitative sensory testing to evaluate the somatosensory system in dogs. Sensory thresholds are measured using an electronic von Frey anesthesiometer, pressure algometer, and hot contact thermode.

تقييم العتبات الحسية في الكلاب باستخدام الاختبارات الحسية الكمية الميكانيكية والحرارية الساخنة

Quantitative sensory testing (QST) is used to evaluate the function of the somatosensory system in dogs by assessing the response to applied mechanical ...

Recording Network Activity in Spinal Nociceptive Circuits Using Microelectrode Arrays

The roles and connectivity of specific types of neurons within the spinal cord dorsal horn (DH) are being delineated at a rapid rate to provide an increasingly detailed view of the circuits underpinning spinal pain processing. However, the effects of these connections for broader network activity in the DH remain less well understood because most studies focus on the activity of single neurons and small microcircuits. Alternatively, the use of microelectrode arrays (MEAs), which can monitor electrical activity across many cells, provides high spatial and temporal resolution of neural activity. Here, the use of MEAs with mouse spinal cord slices to study DH activity induced by chemically stimulating DH circuits with 4-aminopyridine (4-AP) is described. The resulting rhythmic activity is restricted to the superficial DH, stable over time, blocked by tetrodotoxin, and can be investigated in different slice orientations. Together, this preparation provides a platform to investigate DH circuit activity in tissue from na&#239;ve animals, animal models of chronic pain, and mice with genetically altered nociceptive function. Furthermore, MEA recordings in 4-AP-stimulated spinal cord slices can be used as a rapid screening tool to assess the capacity of novel antinociceptive compounds to disrupt activity in the spinal cord DH.

The combined use of microelectrode array technology and 4-aminopyridine-induced chemical stimulation for investigating network-level nociceptive activity in the spinal cord dorsal horn is outlined.

تسجيل نشاط الشبكة في الدوائر الحساسة للألم في العمود الفقري باستخدام صفائف الأقطاب الدقيقة

The roles and connectivity of specific types of neurons within the spinal cord dorsal horn (DH) are being delineated at a rapid rate to provide an ...

Mechanical Conflict-Avoidance Assay to Measure Pain Behavior in Mice

Pain comprises of both sensory (nociceptive) and affective (unpleasant) dimensions. In preclinical models, pain has traditionally been assessed using reflexive tests that allow inferences regarding pain's nociceptive component but provide little information about the affective or motivational component of pain. Developing tests that capture these components of pain are therefore translationally important. Hence, researchers need to use non-reflexive behavioral assays to study pain perception at that level. Mechanical conflict-avoidance (MCA) is an established voluntary non-reflexive behavior assay, for studying motivational responses to a noxious mechanical stimulus in a 3 chamber paradigm. A change in a mouse's location preference, when faced with competing noxious stimuli, is used to infer the perceived unpleasantness of bright light versus tactile stimulation of the paws. This protocol outlines a modified version of the MCA assay which pain researchers can use to understand affective-motivational responses in a variety of mouse pain models. Though not specifically described here, our example MCA data use the intraplantar complete Freund's adjuvant (CFA), spared nerve injury (SNI), and a fracture/casting model as pain models to illustrate the MCA procedure.

The mechanical conflict-avoidance assay is used as a non-reflexive readout of pain sensitivity in mice which can be used to better understand affective-motivational responses in a variety of mouse pain models.

فحص ميكانيكي لتجنب الصراع لقياس سلوك الألم في الفئران

Pain comprises of both sensory (nociceptive) and affective (unpleasant) dimensions. In preclinical models, pain has traditionally been assessed using ...

Assessment of Thermal Damage from Robot-Drilled Craniotomy for Cranial Window Surgery in Mice

Cranial window surgery allows for the imaging of brain tissue in live mice with the use of multiphoton or other intravital imaging techniques. However, when performing any craniotomy by hand, there is often thermal damage to brain tissue, which is inherently variable surgery-to-surgery and may be dependent on individual surgeon technique. Implementing a surgical robot can standardize surgery and lead to a decrease in thermal damage associated with surgery. In this study, three methods of robotic drilling were tested to evaluate thermal damage: horizontal, point-by-point, and pulsed point-by-point. Horizontal drilling utilizes a continuous drilling schematic, while point-by-point drills several holes encompassing the cranial window. Pulsed point-by-point adds a &#34;2 s on, 2 s off&#34; drilling scheme to allow for cooling in between drilling. Fluorescent imaging of Evans Blue (EB) dye injected intravenously measures damage to brain tissue, while a thermocouple placed under the drilling site measures thermal damage. Thermocouple results indicate a significant decrease in temperature change in the pulsed point-by-point (6.90 &#176;C &#177; 1.35 &#176;C) group compared to the horizontal (16.66 &#176;C &#177; 2.08 &#176;C) and point-by-point (18.69 &#176;C &#177; 1.75 &#176;C) groups. Similarly, the pulsed point-by-point group also showed significantly less EB presence after cranial window drilling compared to the horizontal method, indicating less damage to blood vessels in the brain. Thus, a pulsed point-by-point drilling method appears to be the optimal scheme for reducing thermal damage. A robotic drill is a useful tool to help minimize training, variability, and reduce thermal damage. With the expanding use of multiphoton imaging across research labs, it is important to improve the rigor and reproducibility of results. The methods addressed here will help inform others of how to better use these surgical robots to further advance the field.

Cranial windows have become a ubiquitously implemented surgical technique to allow for intravital imaging in transgenic mice. This protocol describes the use of a surgical robot that performs semi-automated bone drilling of cranial windows and can help reduce surgeon-to-surgeon variability and partially mitigate thermal blood-brain barrier damage.

تقييم الضرر الحراري الناجم عن حج القحف المثقوب بواسطة الروبوت لجراحة نافذة الجمجمة في الفئران

Cranial window surgery allows for the imaging of brain tissue in live mice with the use of multiphoton or other intravital imaging techniques. However, ...