الحرارة اختبار الألم باستخدام TSA Thermostimulator الثاني 1. مقدمة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> هذا الإجراء يستخدم TSA الثاني ، وهو متاح تجاريا الحرارية الحسية التي توفر محفزات محلل الحرارة على الجلد مع thermode (ميدوك متقدمة للأنظمة الطبية ، دورهام ، كارولينا الشمالية). وحدة مركزية تولد وتنقل إشارة إلى thermode. وتسيطر هذه الإشارة بواسطة البرمجيات الاحتكارية عادة تخزين على جهاز كمبيوتر محمول متصل إلى وحدة مركزية. يعلق أيضا إلى وحدة التحكم المركزية هي باليد التي تسمح موضوع دراسة لوقف تسخين thermode. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم تسليم سبعة المحفزات حرارة متسلسلة ومتطابقة ، مع جملة من الحوافز فترات 30S. يتم تعيين درجة الحرارة thermode القاعدية في C. 35 º مريحة تم تعيين المعدل الذي thermode يسخن في 1 درجة مئوية / ثانية ، في حين تم تعيين المعدل الذي يبرد حتى 10 درجة مئوية ثانية / C يتم تعيين درجة الحرارة القصوى في thermode 52 درجة مئوية. </li></ol> 2. إعداد وتدريب الموضوعات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للتحضير للاختبار المواد مقعد مريح لهم الألم الحرارة في كرسي مستلق الذي يوفر الدعم الكافي لرأسه وذراعيه وساقيه. وينبغي السماح للرئيس أيضا سهولة الوصول إلى مواقع الجسم فحصها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يجب أن يكون مرفق اختبار في درجة حرارة الغرفة مريحة ، وتوفير بيئة محايدة تماما وبدون الهاء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل بدء التجربة ، يجب أن يكون جميع المشاركين مدربة تدريبا جيدا في جميع جوانب الحرارة اختبار الألم. يمكن للتدريب أن يتم في أي وقت قبل التجربة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وينبغي أن تقتصر دراسة التفاعلات بين الموضوعات والمحققين لتلك اللازمة لجمع البيانات. ويثبط المزاح والحديث الصغيرة لأنها قد تفسد البيانات الاتساق. وأبلغت دراسة الموضوعات التي سيتم التفاعل عمدا رتيب نوعا ما والحياد خلال التجارب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحفاظ على تعليمات واضحة وبسيطة ومتناسقة. التأكيد على أن الألم هو ذاتي ، وليس هناك إجابات صحيحة أو خاطئة. ومن المهم للغاية أن تكون متسقة. تحديد عتبة الألم الحرارة كنقطة بين أن يكون &quot;على وشك أن تكون مؤلمة&quot; و &quot;أصبح مجرد مؤلمة&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فمن الأهمية بمكان أن يعرف بالضبط موضوع ما يمكن توقعه خلال جلسة اختبار. قد أي &quot;مفاجآت&quot; في البيانات نتيجة أقل اتساقا ، لأنه قد يكون إنشاء مثل القلق الإرباك. على سبيل المثال ، إذا كنت تستخدم seven احساس بالالم الحرارة لتحديد عتبة الألم الحرارة ، ويجب أن نعرف هذا الموضوع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في أي وقت ، يمكن أن يخضع وقف thermode من الحصول على أي سخونة بالضغط على زر تحكم باليد. وسوف يتم التحكم في الحد من القلق موضوعا وستجعل المزيد من البيانات الموثوقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الدورة التدريبية فرصة للحكم على أداء موضوع الدراسة. قد يكون من الأفضل لتدريب الموضوعات خلال دورات الاختبار 2-4 حتى عتباتها الألم تختلف من فرد لا يزيد عن 0.8 درجة مئوية ، وبشكل مثالي من قبل ما لا يزيد على 0.6 درجة مئوية بين دورات مشاركة اختبار اثنين. عادة يتم استبعاد الاشخاص الذين يفشلون في تنفيذ باستمرار من الدراسة. </li></ol> 3. تحديد عتبة الألم <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للبدء في دورات الاختبار عتبة الألم علامة موضع thermode على الجلد في هذا الموضوع. في هذه التجربة سوف يتم اختبار نفس الآفة الجلدية ملتهبة المستخدمة لmicrodialysis للألم لمعرفة المزيد عن المواد الكيميائية الحيوية صدر استجابة لاختبار الألم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم ، والشروع في كل دورة من خلال وضع thermode على منطقة الجلد ملحوظ. تطابق موقف thermode مع علامات قدر الإمكان. السماح لدرجات الحرارة بين الجلد وthermode ولكي تتوازن إلى 35 درجة مئوية -- وهي درجة الحرارة التي بأمان سوف يسبب أي ألم. هذا سوف يستغرق نحو 5 ثوان ، وسوف يكون المشار إليها بواسطة قراءة 35 درجة مئوية على شاشة الكمبيوتر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل البدء ، وإعطاء عنصر التحكم باليد لهذا الموضوع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام الضغط المستمر ورقيقة للحفاظ على كامل سطح thermode على اتصال كامل مع الجلد هذا الموضوع خلال الاختبار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الآن بدء اختبار الخوارزمية مبرمجة مسبقا. سوف تبدأ thermode تسخين درجة مئوية في 1 / ثانية. حالما تخضع تجارب الألم ، وأنها سوف اضغط على الجهاز باليد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد الضغط على الجهاز باليد ، سيتم تلقائيا الألم درجة الحرارة يسبب thermode تكون مسجلة وسيبدأ خفض بمعدل 10 درجة مئوية / ثانية وصولا الى خط الأساس لديها درجة الحرارة من 35 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وسوف تلقائيا التحقيق في درجة الحرارة يمكن الاحتفاظ بها في 35 درجة مئوية لمدة 30 ق قبل أن يبدأ في الارتفاع مرة أخرى في 1 درجة مئوية / ثانية ، حتى موضوع يدفع مرة أخرى على زر الجهاز باليد. قبل قليل درجة الحرارة thermode على وشك الارتفاع مرة أخرى ، أذكر أن هذا هو موضوع على وشك الحدوث. هذا وسوف تبقي هذا الموضوع تركيزا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وسوف يتكرر هذا التسلسل حتى تم تسجيل درجات الحرارة التسجيلات السبعة. حساب متوسط ​​هذه تيمبيقراءات rature ، وهذا هو عتبة الألم الحرارة. </li></ol> الميكانيكية اختبار الألم مع مجسات ضغط تتخللها 1. مقدمة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نستخدم العرف معايرة الضغط تحقيقات تتخللها ، لأنها توفر نتائج أكثر ثباتا من الشعر المستخدمة تقليديا ومتاحة تجاريا فراي فون. يتم إجراء تحقيقات مماثلة من أسلاك الفولاذ المقاوم للصدأ الاسطوانية (240 قطرها ميكرون) محمولة على قضبان النحاس من أوزان مختلفة (1 ، 2 ، 4 ، 8 ، 16 ، 32 ، 49 ، 64 ، و 81 غراما) التي تتحرك بحرية داخل أوسع اليد عقد أنبوب الألومنيوم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نفس الظروف التجريبية العامة التي وردت لاختبار الألم الحرارة تنطبق على اختبار الألم الميكانيكية. وينبغي أن نكون مستعدين الموضوعات والمدربين جيدا. من المهم خصوصا لطمأنة الموضوعات التي تحقيقات وصريحا ، وسوف لا ثقب الجلد. وهذا سوف يساعد على الاسترخاء الموضوعات وتوفير بيانات متناسقة. </li></ol> 2. تحديد عتبة الألم الميكانيكية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتحديد عتبة الألم الميكانيكية ، أولا تطبيق غيض من أسلاك الفولاذ أخف التحقيق عموديا على الجلد في مركز الآفة ملتهبة تجريبيا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم يتم إنزال أنبوب الألومنيوم باليد نحو الجلد دون لمسها. بهذه الطريقة ، والوزن الكامل للقضيب من النحاس داخل أنبوب الألمنيوم الصلب تقع على طرف السلك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> موضوع الدراسة تشير إلى ما إذا كان التحقيق ثم تسبب الألم بالقول &quot;نعم&quot; أو &quot;لا&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا كانت الإجابة الموضوع &quot;لا&quot; ، ثم فإما أن تستخدم نفس لجنة التحقيق أو التحقيق أثقل المقبل المقبل. وهذا ما يسمى خوارزمية التحفيز تسلسل تصاعدي. تحديد ما إذا كان عشوائيا التحقيق التالي هو أثقل أو من نفس الوزن. هذا وسوف تبقي موضوعا أعمى لالخوارزمية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق تحقيقات في تسلسل تصاعدي حتى يجيب موضوع &quot;نعم.&quot; يتم تسجيل متوسط ​​وزن التحقيقات الماضيين في هذه السلسلة كنقطة انعطاف الأولى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد الأجوبة موضوع &quot;نعم&quot; ، تبدأ باستخدام تسلسل تنازلي التحفيز ، وإما استخدام أخف التحقيق أو التحقيق نفسه كما كان من قبل. تحديد ما إذا كان عشوائيا التحقيق التالي هو أخف وزنا أو من نفس الوزن. هذا وسوف تبقي موضوعا أعمى لالخوارزمية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق تحقيقات في تسلسل تنازلي حتى الأجوبة الموضوع &quot;لا&quot;. الوزن المتوسط ​​للتحقيقات الماضيين في هذه السلسلة تشكل نقطة انعطاف الثانية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عندما يجيب موضوع &quot;لا&quot; ، التبديل إلى تسلسل تصاعدي التحفيز. بالتناوب بين الصعود والنزول متواليات حتى يتم تسجيل نقطة انعطاف السبعة. متوسط ​​هذه النقاط السبع هي عتبة الألم الميكانيكية. </li></ol>

<ol>
	<li>Angst, M. S., Clark, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comment+on+Koltzenburg+et+al.:+Differential+sensitivity+of+three+experimental+pain+models+in+detecting+the+analgesic+effects+of+transdermal+fentanyl+and+buprenorphine.">Comment on Koltzenburg et al.: Differential sensitivity of three experimental pain models in detecting the analgesic effects of transdermal fentanyl and buprenorphine.</a> Pain. 126, 165-174 (2006).</li><li>Angst, M. S., Clark, J. D., Carvalho, B., Tingle, M., Schmelz, M., Yeomans, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokine+profile+in+human+skin+in+response+to+experimental+inflammation,+noxious+stimulation,+and+administration+of+a+COX-inhibitor:+A+microdialysis+study.">Cytokine profile in human skin in response to experimental inflammation, noxious stimulation, and administration of a COX-inhibitor: A microdialysis study.</a> Pain. , (2008).</li><li>Angst, M. S., Koppert, W., Pahl, I., Clark, J. D., Schmelz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short-term+infusion+of+the+mu-opioid+agonist+remifentanil+in+humans+causes+hyperalgesia+during+withdrawal.">Short-term infusion of the mu-opioid agonist remifentanil in humans causes hyperalgesia during withdrawal.</a> Pain. 106, 49-57 (2003).</li><li>Lotsch, J., Angst, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mu-opioid+agonist+remifentanil+attenuates+hyperalgesia+evoked+by+blunt+and+punctuated+stimuli+with+different+potency:+a+pharmacological+evaluation+of+the+freeze+lesion+in+humans.">The mu-opioid agonist remifentanil attenuates hyperalgesia evoked by blunt and punctuated stimuli with different potency: a pharmacological evaluation of the freeze lesion in humans.</a> Pain. 102, 151-161 (2003).</li></ol>

هذا الفيديو يوضح خوارزميات لتقييم الحرارة والميكانيكية عتبة الألم في الجلد ملتهبة من متطوعين من البشر. تصور الألم هو ذاتي. جمع البيانات الكافية ألم يتطلب مرفق اختبار مناسب (على سبيل المثال هادئة ومطمئنة) ، وتدريب شامل للالمشاركين في الدراسة مع مدمجة بيانات تدابير مراقبة الجودة (تجارب اعادة اختبار الموثوقية) ، والتقيد الصارم لبروتوكول الدراسة موحدة ، وتجنب عوامل خارجية (مثل الإجهاد ، والقلق). بيانات موثوق بها بشأن حساسية ذاتية الألم ، ويقترن التدخلات مثل إدارة دواء مسكن وجمع البيانات الآلية مثل الإفراج المحلية للوساطة في nociceptive توفير معلومات قيمة حول آليات الألم ، وسيلة لمنع أو تخفيف ذلك.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>TSA-II Neuro Sensory Analyzer</td>
<td>Tool</td>
<td>Medoc Advanced Medical Systems</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Puntuated Pressure Probes</td>
<td>Tool</td>
<td>Custom-made</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Alternatively, commercially available von Frey Hairs can be used.</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

determining heat and mechanical pain threshold in inflamed skin of human subjects

في مقال سابق في مجلة التجارب متصور أننا أظهرنا تقنيات microdialysis الجلد لجمع الأنسجة الخاصة والمواد الكيميائية الحيوية nociceptive التهابات في البشر. في هذه المقالة سوف نعرض نماذج لاختبار الألم التي غالبا ما تستخدم جنبا إلى جنب مع الإجراءات microdialysis. الجمع بين اختبارات الألم مع microdialysis يوفر علاقة حرجة بين البيانات السلوكية والبيوكيميائية التي تتيح التعرف على المواد الكيميائية الحيوية الرئيسية المسؤولة عن توليد ونشر الألم. وترد نموذجين من الألم تستحضر في الجلد ملتهبة من المشاركين في الدراسة الإنسان. النموذج الأول يثير الألم مع المعونة من المحفزات الحرارة. هو في الغالب بوساطة الحرارة أثار الألم كما هو موضح هنا من قبل الصغيرة ، وغير العصبي المحيطي الألياف العصبية nociceptive (C - ألياف). النموذج الثاني تثير الألم عن طريق الضغط تتخللها المحفزات. وتوسط في الغالب تتخللها الألم الضغط التي حركها ، العصبي المحيطي صغيرة الألياف العصبية nociceptive (A - دلتا ألياف). نماذج متميزة هما ميكانيكيا بشكل مستقل ، ودراسة معالجة nociceptive من الرئيسيتين هامشية السكان الألياف العصبية التي ينطوي عليها إشارات الألم. وأثار الألم الحرارة مع المعونة من TSA الثاني ، وهي متوفرة تجاريا الحرارية الحسية محلل (ميدوك متقدمة للأنظمة الطبية ، دورهام ، كارولينا الشمالية). تتم معالجة التكوين والتحفيز مع تسليم المعونة من برامج معينة. Thermodes تختلف في الحجم والشكل ولكن من حيث المبدأ تتكون من لوحة معدنية التي يمكن تسخينها أو تبريدها بمعدلات مختلفة ولفترات زمنية مختلفة. خوارزميات تقييم حرارة أثار الألم متعددة. في هذه التجارب هو موضح هنا ، ويطلب من المشاركين في الدراسة للإشارة إلى ما النقطة التي بدأت تشعر بألم بينما يسخن thermode على تماس مع الجلد بمعدل سلفا بدءا من درجة الحرارة التي لا تثير الألم. درجة الحرارة في thermode التي تواجه موضوعا يبدأ الألم يشكل عتبة الألم الحرارة. وأثار الألم الميكانيكية مع تحقيقات تتخللها. تحقيقات من هذا القبيل متاحة تجاريا من العديد من الشركات المصنعة (الشعر فراي فون). ومع ذلك ، فقد تعرضت لانتقادات من دقة فراي فون الشعر واستخدام العديد من المحققين العرف تحقيقات الضغط تتخللها. في التجارب المعروضة هنا هي تقدمت ثمانية مصنوعة خصيصا تحقيقات يتخللها من أوزان مختلفة في النظام على التوالي ، ودعا الى إجراء ما يصل إلى أسفل الخوارزمية ، لتحديد نقطة انعطاف إدراكي ، أي تغيير من أي ألم للشعور بالألم أو العكس بالعكس. وزن المتوسط ​​مما تسبب في انحراف إدراكي يشكل عتبة الألم الميكانيكية.

Watch this Scientific Journal Video about Determining heat and mechanical pain threshold in inflamed skin of human subjects at JoVE.com

Determining heat and mechanical pain threshold in inflamed skin of human subjects

وتظهر خوارزميات تقييم عتبات الألم والحرارة الملتهبة في الجلد الميكانيكية تجريبيا من الموضوعات دراسة الإنسان. اختبار الألم نموذجين دراسة مستقلة من قبل تجهيز nociceptive الرئيسيتين السكان الألياف العصبية الطرفية يحيل الألم ، أي غير مياليني ألياف C و A - الصغيرة مياليني دلتا الألياف.

تحديد حرارة والميكانيكية عتبة الألم في الجلد ملتهبة من الموضوعات البشرية

In a previous article in the Journal of Visualized Experiments we have demonstrated skin microdialysis techniques for the collection of tissue-specific ...

determining-heat-mechanical-pain-threshold-inflamed-skin-human

Research

JoVE Journal

Biology

20.7K Views.  Stanford University School of Medicine. وتظهر خوارزميات تقييم عتبات الألم والحرارة الملتهبة في الجلد الميكانيكية تجريبيا من الموضوعات دراسة الإنسان. اختبار الألم نموذجين دراسة مستقلة من قبل تجهيز nociceptive الرئيسيتين السكان الألياف العصبية الطرفية يحيل الألم ، أي غير مياليني ألياف C و A - الصغيرة ميالين...

Video: Determining heat and mechanical pain threshold in inflamed skin of human subjects

Using Micro-Electro-Mechanical Systems (MEMS) to Develop Diagnostic Tools

Using Micro-Electro-Mechanical Systems MEMS to Develop Diagnostic Tools

باستخدام مايكرو سيستمز الكهربائية والميكانيكية (ممس) لتطوير أدوات التشخيص

Murine Skin Transplantation

As one of the most stringent and least technically challenging models, skin transplantation is a standard method to assay host T cell responses to MHC-disparate donor antigens. The aim of this video-article is to provide the viewer with a step-by-step visual demonstration of skin transplantation using the mouse model. The protocol is divided into 5 main components: 1) harvesting donor skin; 2) preparing recipient for transplant; 3) skin transplant; 4) bandage removal and monitoring graft rejection; 5) helpful hints. Once proficient, the procedure itself should take &lt;10 min to perform.

Allogeneic skin transplantation is a standard model to assay host T cell responses to MHC-disparate donor antigens. This video-article provides a visual tutorial of each step involved in performing a BALB/c--&gt;C57BL/6 skin transplant.

زرع الجلد الفئران

As one of the most stringent and least technically challenging models, skin transplantation is a standard method to assay host T cell responses to ...

Implantation of Engineered Tissue in the Rat Heart

Rodent surgery is often an important component in assessing the utility of engineered tissues. A wide variety of surgical procedures can be performed in common laboratory rats or mice and these quite frequently serve as an intermediate step between bench-top experiments and large animal testing or human trials. Given that rodents provide an established, cost-effective, and physiologically-relevant model system in which to test novel combinations of scaffolding materials and cells, they are particularly well-suited for cardiovascular tissue engineering studies. Presently, we describe an open-heart surgical procedure to implant engineered tissue containing myogenic progenitor cells in the atrioventricular (AV) groove of a rat heart. These implants are intended to create an electrical conduit between the right atrium and right ventricle with the ultimate goal of providing an alternative treatment to conventional pacemaker implantation in pediatric patients with complete heart block[1]. The engineered tissue is implanted in the AV-groove by means of a thoracotomy. For our purposes, Lewis rats are anesthetized and invasively ventilated to maintain positive airway pressure during the sterile surgical procedure. The approach to the heart is performed by a right thoracotomy through an antero-lateral incision at the 5th intercostal space. The tissue construct is fixed in the AV groove using a single 7-0 Prolene suture and positioned between the right ventricle and atrium at the ventral portion of the heart. The epicardium is partially removed to allow direct contact between the recipient myocardial cells and those contained in the engineered tissue. Following implantation, the chest wall is closed in layers, any pneumothorax is evacuated, and the animal is extubated and treated with analgesic.

Here, we describe a cardiac surgical procedure to implant engineered tissue in the atrioventricular (AV)-groove of an adult Lewis rat.

زرع الأنسجة المهندسة في قلب فأر

Rodent surgery is often an important component in assessing the utility of engineered tissues. A wide variety of surgical procedures can be performed in ...

Demonstration of Cutaneous Allodynia in Association with Chronic Pelvic Pain

Pelvic pain is a common condition that is associated with dysmenorrhea and endometriosis. In some women the severe episodes of cyclic pain change and the resultant pain becomes continuous and this condition becomes known as Chronic Pelvic Pain. This state can be present even after the appropriate medical or surgical therapy has been instituted. It can be associated with pain and tenderness in the muscles of the abdomen wall and intra-pelvic muscles leading to severe dyspareunia. Additional symptoms of irritable bowel and interstitial cystitis are common. A common sign of the development of this state is the emergence of cutaneous allodynia which emerges from the so-called viscero-somatic reflex. A simple bedside test for the presence of cutaneous allodynia is presented that does not require excessive time or special equipment. This test builds on previous work associated with changes in sensation related to gall bladder function and the viscera-somatic reflex(1;2).
The test is undertaken with the subject s permission after an explanation of how the test will be performed. Allodynia refers to a condition in which a stimulus that is not normally painful is interpreted by the subject as painful. In this instance the light touch associated with a cotton-tipped applicator would not be expected to be painful. A positive test is however noted by the woman as suddenly painful or suddenly sharp. The patterns of this sensation are usually in a discrete pattern of a dermatome of the nerves that innervate the pelvis.
The underlying pathology is now interpreted as evidence of neuroplasticity as a consequence of severe and repeating pain with changes in the functions of the dorsal horns of the spinal cord that results in altered function of visceral tissues and resultant somatic symptoms(3). 
The importance of recognizing the condition lies in an awareness that this process may present coincidentally with the initiating condition or after it has been treated. It also permits the clinician to evaluate the situation from the perspective that alternative explanations for the pain may be present that may not require additional surgery.

Demonstration of Cutaneous Allodynia in Association with Chronic Pelvic Pain

A demonstration of the bedside test for cutaneous allodynia and its clinical implications.

مظاهرة Allodynia الجلدية في الشراكة مع ألم مزمن في الحوض

Pelvic pain is a common condition that is associated with dysmenorrhea and endometriosis.  In some women the severe episodes of cyclic pain change and the ...

Isolation and Culture of Adult Epithelial Stem Cells from Human Skin

The homeostasis of all self-renewing tissues is dependent on adult stem cells. As undifferentiated stem cells undergo asymmetric divisions, they generate daughter cells that retain the stem cell phenotype and transit-amplifying cells (TA cells) that migrate from the stem cell niche, undergo rapid proliferation and terminally differentiate to repopulate the tissue.
Epithelial stem cells have been identified in the epidermis, hair follicle, and intestine as cells with a high in vitro proliferative potential and as slow-cycling label-retaining cells in vivo 1-3. Adult, tissue-specific stem cells are responsible for the regeneration of the tissues in which they reside during normal physiologic turnover as well as during times of stress 4-5. Moreover, stem cells are generally considered to be multi-potent, possessing the capacity to give rise to multiple cell types within the tissue 6. For example, rodent hair follicle stem cells can generate epidermis, sebaceous glands, and hair follicles 7-9. We have shown that stem cells from the human hair follicle bulge region exhibit multi-potentiality 10.
Stem cells have become a valuable tool in biomedical research, due to their utility as an in vitro system for studying developmental biology, differentiation, tumorigenesis and for their possible therapeutic utility. It is likely that adult epithelial stem cells will be useful in the treatment of diseases such as ectodermal dysplasias, monilethrix, Netherton syndrome, Menkes disease, hereditary epidermolysis bullosa and alopecias 11-13. Additionally, other skin problems such as burn wounds, chronic wounds and ulcers will benefit from stem cell related therapies 14,15. Given the potential for reprogramming of adult cells into a pluripotent state (iPS cells)16,17, the readily accessible and expandable adult stem cells in human skin may provide a valuable source of cells for induction and downstream therapy for a wide range of disease including diabetes and Parkinson's disease.

A rapid, robust way of isolating viable adult epithelial stem cells from human skin is described. The method utilizes enzymatic digestion of skin collagen matrix , followed by plucking of hair follicles and isolation of single cell suspensions or tissue fragments for cell culture.

العزلة وثقافة الكبار الخلايا الجذعية الظهارية من الجلد البشري

The homeostasis of all self-renewing tissues is dependent on adult stem cells. As undifferentiated stem cells undergo asymmetric divisions, they generate ...

Digital Inline Holographic Microscopy (DIHM) of Weakly-scattering Subjects

Weakly-scattering objects, such as small colloidal particles and most biological cells, are frequently encountered in microscopy. Indeed, a range of techniques have been developed to better visualize these phase objects; phase contrast and DIC are among the most popular methods for enhancing contrast. However, recording position and shape in the out-of-imaging-plane direction remains challenging. This report introduces a simple experimental method to accurately determine the location and geometry of objects in three dimensions, using digital inline holographic microscopy (DIHM). Broadly speaking, the accessible sample volume is defined by the camera sensor size in the lateral direction, and the illumination coherence in the axial direction. Typical sample volumes range from 200 &#181;m&#160;x 200 &#181;m&#160;x 200 &#181;m using LED illumination, to 5 mm&#160;x 5 mm&#160;x 5 mm or larger using laser illumination. This illumination light is configured so that plane waves are incident on the sample. Objects in the sample volume then scatter light, which interferes with the unscattered light to form interference patterns perpendicular to the illumination direction. This image (the hologram) contains the depth information required for three-dimensional reconstruction, and can be captured on a standard imaging device such as a CMOS or CCD camera. The Rayleigh-Sommerfeld back propagation method is employed to numerically refocus microscope images, and a simple imaging heuristic based on the Gouy phase anomaly is used to identify scattering objects within the reconstructed volume. This simple but robust method results in an unambiguous, model-free measurement of the location and shape of objects in microscopic samples.

Digital Inline Holographic Microscopy DIHM of Weakly-scattering Subjects

The three-dimensional locations of weakly-scattering objects can be uniquely identified using digital inline holographic microscopy (DIHM), which involves a minor modification to a standard microscope. Our software uses a simple imaging heuristic coupled with Rayleigh-Sommerfeld back-propagation to yield the three-dimensional position and geometry of a microscopic phase object.

الرقمية المضمنة المجسم مجهرية (DIHM) من الموضوعات وكلي نثر

Weakly-scattering objects, such as small colloidal particles and most biological cells, are frequently encountered in microscopy. Indeed, a range of ...

Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo

Mitochondrion is a critical intracellular organelle responsible for energy production and intracellular signaling in eukaryotic systems. Mitochondrial dysfunction often accompanies and contributes to human disease. Majority of the approaches that have been developed to evaluate mitochondrial function and dysfunction are based on in vitro or ex vivo measurements. Results from these experiments have limited ability in determining mitochondrial function in vivo. Here, we describe a novel approach that utilizes confocal scanning microscopy for the imaging of intact tissues in live aminals, which allows the evaluation of single mitochondrial function in a real-time manner in vivo. First, we generate transgenic mice expressing the mitochondrial targeted superoxide indicator, circularly permuted yellow fluorescent protein (mt-cpYFP). Anesthetized mt-cpYFP mouse is fixed on a custom-made stage adaptor and time-lapse images are taken from the exposed skeletal muscles of the hindlimb. The mouse is subsequently sacrificed and the heart is set up for Langendorff perfusion with physiological solutions at 37 &deg;C. The perfused heart is positioned in a special chamber on the confocal microscope stage and gentle pressure is applied to immobilize the heart and suppress heart beat induced motion artifact. Superoxide flashes are detected by real-time 2D confocal imaging at a frequency of one frame per second. The perfusion solution can be modified to contain different respiration substrates or other fluorescent indicators. The perfusion can also be adjusted to produce disease models such as ischemia and reperfusion. This technique is a unique approach for determining the function of single mitochondrion in intact tissues and in vivo.

Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo

Confocal scanning microscopy is applied for imaging single mitochondrial events in perfused heart or skeletal muscles in live animal. Real-time monitoring of single mitochondrial processes such as superoxide flashes and membrane potential fluctuations enables the evaluation of mitochondrial function in a physiologically relevant context and during pathological perturbations.

التصوير متحد البؤر واحدة من الميتوكوندريا الأكسيد ومضات في القلب سليمة أو<em&gt; في فيفو</em

Mitochondrion is a critical intracellular organelle responsible for energy production and intracellular signaling in eukaryotic systems. Mitochondrial ...

Ex vivo Culture of Mouse Embryonic Skin and Live-imaging of Melanoblast Migration

Melanoblasts are the neural crest derived precursors of melanocytes; the cells responsible for producing the pigment in skin and hair. Melanoblasts migrate through the epidermis of the embryo where they subsequently colonize the developing hair follicles1,2. Neural crest cell migration is extensively studied in vitro but in vivo methods are still not well developed, especially in mammalian systems. One alternative is to use ex vivo organotypic culture3-6. Culture of mouse embryonic skin requires the maintenance of an air-liquid interface (ALI) across the surface of the tissue3,6. High resolution live-imaging of mouse embryonic skin has been hampered by the lack of a good method that not only maintains this ALI but also allows the culture to be inverted and therefore compatible with short working distance objective lenses and most confocal microscopes. This article describes recent improvements to a method that uses a gas permeable membrane to overcome these problems and allow high-resolution confocal imaging of embryonic skin in ex vivo culture6. By using a melanoblast specific Cre-recombinase expressing mouse line combined with the R26YFPR reporter line we are able to fluorescently label the melanoblast population within these skin cultures. The technique allows live-imaging of melanoblasts and observation of their behavior and interactions with the tissue in which they develop. Representative results are included to demonstrate the capability to live-image 6&#160;cultures in parallel.

Ex vivo Culture of Mouse Embryonic Skin and Live-imaging of Melanoblast Migration

We describe the dissection and ex vivo culture of mouse embryonic skin. The culture system maintains an air-liquid interface across the tissue surface and allows imaging on an inverted microscope. Melanoblasts, a component of the developing skin, are fluorescently labeled allowing their behavior to be observed using confocal microscopy.

فيفو السابقين الثقافة من الفأر الجنينية بالبشرة والتصوير لايف للهجرة أرومة ميلانينية

Melanoblasts are the neural crest derived precursors of melanocytes; the cells responsible for producing the pigment in skin and hair. Melanoblasts ...

Gap Junctional Intercellular Communication: A Functional Biomarker to Assess Adverse Effects of Toxicants and Toxins, and Health Benefits of Natural Products

This protocol describes a scalpel loading-fluorescent dye transfer (SL-DT) technique that measures intercellular communication through gap junction channels, which is a major intercellular process by which tissue homeostasis is maintained. Interruption of gap junctional intercellular communication (GJIC) by toxicants, toxins, drugs, etc. has been linked to numerous adverse health effects. Many genetic-based human diseases have been linked to mutations in gap junction genes. The SL-DT technique is a simple functional assay for the simultaneous assessment of GJIC in a large population of cells. The assay involves pre-loading cells with a fluorescent dye by briefly perturbing the cell membrane with a scalpel blade through a population of cells. The fluorescent dye is then allowed to traverse through gap junction channels to neighboring cells for a designated time. The assay is then terminated by the addition of formalin to the cells. The spread of the fluorescent dye through a population of cells is assessed with an epifluorescence microscope and the images are analyzed with any number of morphometric software packages that are available, including free software packages found on the public domain. This assay has also been adapted for in vivo studies using tissue slices from various organs from treated animals. Overall, the SL-DT assay can serve a broad range of in vitro pharmacological and toxicological needs, and can be potentially adapted for high throughput set-up systems with automated fluorescence microscopy imaging and analysis to elucidate more samples in a shorter time.

This protocol describes a scalpel loading-fluorescent dye transfer technique that measures intercellular communication through gap junction channels. Gap junctional intercellular communication is a major cellular process by which tissue homeostasis is maintained and disruption of this cell signaling has adverse health effects.

الفجوة صلي بين الخلايا الاتصالات: العلامات البيولوجية الوظيفية لتقييم التأثيرات السلبية للالسميات والسموم، والصحة فوائد المنتجات الطبيعية

This protocol describes a scalpel loading-fluorescent dye transfer (SL-DT) technique that measures intercellular communication through gap junction ...

A Buoyancy-based Method of Determining Fat Levels in Drosophila

Drosophila melanogaster is a key experimental system in the study of fat regulation. Numerous techniques currently exist to measure levels of stored fat in Drosophila, but most are expensive and/or laborious and have clear limitations. Here, we present a method to quickly and cheaply determine organismal fat levels in L3 Drosophila larvae. The technique relies on the differences in density between fat and lean tissues and allows for rapid detection of fat and lean phenotypes. We have verified the accuracy of this method by comparison to body fat percentage as determined by neutral lipid extraction and gas chromatography coupled with mass spectrometry (GCMS). We furthermore outline detailed protocols for the collection and synchronization of larvae as well as relevant experimental recipes. The technique presented below overcomes the major shortcomings in the most widely used lipid quantitation methods and provides a powerful way to quickly and sensitively screen L3 larvae for fat regulation phenotypes while maintaining the integrity of the larvae. This assay has wide applications for the study of metabolism and fat regulation using Drosophila.

A Buoyancy-based Method of Determining Fat Levels in Drosophila

Here we present a method to measure organismal fat levels in the third instar (L3) larval stage of Drosophila melanogaster. This method exploits the comparatively low density of fat tissue to differentiate between larvae with altered fat stores. Buoyancy-based analysis is a valuable tool for rapid, reproducible, and economical screening.

والأسلوب القائم على الطفو من تحديد مستويات الدهون في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em

Drosophila melanogaster is a key experimental system in the study of fat regulation. Numerous techniques currently exist to measure levels of stored fat ...