التمويل: الجيش الأمريكي البحوث الطبية وقيادة العتاد (USAMRMC) ويديره التطبيب عن بعد ومركز بحوث تكنولوجيا متقدمة. ساهم Shunxi جي التعديل من الحقن كما هو موضح هنا.

1. نظام مجموعة المتابعة ويتكون النظام من عقد والتركيز خزان (HCT) مزودة خلاط واحد المرحلة، والقص عالية الخالط في الخط، ومضخة الأسطوانة لنقل السوائل بين كليات التقنية العليا والخالط، ومبادل للحرارة (الشكل 1). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع تعقيمها، الفم واسعة 4 L سفينة جمع الزجاج مزودة 2 الموانئ قاعدة و 3 منافذ جانبية تحت خلاط مرحلة واحدة. خفض الرأس إلى الفم خلاط السفينة وضمان تركيب الغاز محكم باستخدام الأختام المطاطية أو شريط (من أجل منع الهواء المحيط من تلويث الفضاء الرأس). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تناسب واحدة من الموانئ قاعدة (الشكل 1، الميناء رقم 1) من كليات التقنية العليا مع العقيمة 3/8 &quot;(ID) أنابيب واضحة، ما يقرب من 10&quot; لفترة طويلة، مزودة محبس 3 الطريقة في الطرف عن مجموعة من مستحلب المركزة . </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تناسب ميناء القاعدة الثانية (الشكل 1، الميناء رقم 2) مع العقيمة 3/8 &quot;(ID) أنابيب، approximatelذ 36 &quot;في الطول. تتغذى هذه الأنابيب من خلال مضخة الأسطوانة. تناسب مدخل القص الخالط عالية مع T-قطعة من بينهم اثنان من الموانئ وربط على النحو التالي: ربط الأنابيب من ميناء رقم 2، من خلال مضخة الأسطوانة والاتصال إلى جانب منفذ T-قطعة. إرفاق منفذ آخر لدبابة الأكسجين باستخدام مقياس الجريان غاز الأكسجين المنخفضة تدفق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ربط ميناء منفذ من القص الخالط عالية لمدخل الميناء لمبادل الحرارة في خط الحفاظ على 4 درجات مئوية. ربط ميناء مخرج المبادل الحراري إلى ميناء عودة كليات التقنية العليا (الشكل 1، الميناء # 3)، وخلق نظام حلقة مغلقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إرفاق خزان الأكسجين (عن طريق مقياس الجريان) إلى كليات التقنية العليا (الشكل 1، ومنفذ رقم 4). نعلق شاشة تكوين الغاز التي هي مفتوحة في الغلاف الجوي إلى ميناء العلوي من كليات التقنية العليا (الشكل 1، الميناء # 5). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا كان المطلوب العقم، تعقيم مكونات الزجاج والمعدن قبل كل استخدام بواسطة الأوتوكلاف. تعقيم مكونات أنابيب وشارك البلاستيكnnectors بواسطة أكسيد الإيثيلين قبل كل استعمال. هذا أمر مهم خاصة إذا كان المنتج هو لفحصها في الجسم الحي. </li></ol> 2. تصنيع LOM <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع 20 غرام من 1،2-GMP distearoyl-SN-glycero-3-phosphocholine (DSPC) و 10 غرام من الكولسترول في قاعدة كليات التقنية العليا. إضافة 1 لتر من البلازما LYTE ألف لكليات التقنية العليا واليد ضجة لمدة 1 دقيقة، ودمج أكبر قدر ممكن من المادة الدهنية في المرحلة المائية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خفض خلاط مرحلة واحدة في المرحلة المائية، وضمان أن رأسه خلاط كامل تغطيها المرحلة المائية. تأكد من أن الجزء العلوي من كليات التقنية العليا هو الغاز ضيق (انظر الخطوة 1.1 أعلاه) وأنه لا توجد منافذ جانبية مفتوحة. بدوره على مصدر الغاز تعلق على منفذ رقم 4 وانتظر حتى الكسر الأكسجين من فراغ الرأس HCT تصل&gt; 95٪. في 10 لتر / دقيقة (LPM)، وهذا ينبغي أن تأخذ ~ 10 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام خلاط مرحلة واحدة، ومزيج مستحلب السلائف لمدة 5 دقائق عند 5،000 دورة في الدقيقة. يجب أن تظهر الخليط الناتج أبيض شاحب ولا تحتوي على أية معهد العلوم الإندونيسي مرئيةد كتل. مرة واحدة مختلطة، ويمكن تخزين المياه غير المستخدمة خليط الدهون في 4 درجة مئوية لمدة تصل إلى 30 يوما قبل استخدام مرة واحدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رئيس كامل نظام حلقة مغلقة مع مستحلب السلائف عن طريق تشغيل المضخة الدوارة في 1.3 LPM. مرة واحدة وتستعد النظام، والحفاظ على المضخة عند 1.3 LPM. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لبدء تصنيع LOMs، بدوره على القص عالية الخالط في خط ل7،500 دورة في الدقيقة. بعد ذلك مباشرة، بدوره على تدفق الأكسجين إلى جزء من مدخل الخالط عند 0.5 LPM. الحفاظ على خلاط مرحلة واحدة (في HCT) على 3،500 دورة في الدقيقة في. تتشكل LOMs في واجهة من ريش الدوار وشاشات emulsor ضمن الخالط في الخط (الشكل 2). في غضون دقائق، وينبغي أن تصبح أكثر لزوجة السائل بشكل واضح. نهج أكثر صرامة لتحديد اللزوجة بوصفها وظيفة من الوقت، والتي يمكن أن يتم عن طريق إزالة مأخوذة من ميناء 1 خلال تلفيق وتحليل مع جهاز قياس اللزوجة. ملاحظة: إذا فقاعات الهواء مرئية موجودة في أنابيب الخروج من خلاط، والأكسجينتتدفق إلى الخالط في خط مرتفع جدا. عاير أسفل تدفق الغاز السائل حتى مبهمة ولا تحتوي على فقاعات الغاز مرئية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشغيل النظام لمدة 15 دقيقة، ثم إيقاف الخالط القص عالية ومدخل الأوكسجين إليها. الاستمرار في تشغيل الخلاط مرحلة واحدة في كليات التقنية العليا حتى تتم إزالة مستحلب؛ هذا يخفف مرحلة الانفصال وتحافظ على المنتج موحدة نسبيا في كليات التقنية العليا. ملاحظة: حجم مستحلب مليئة بالغاز يجب زيادة حوالي 2-3X خلال مرحلة تركيز المسلسل. إذا لم يحدث ذلك، تحقق للتأكد من أن الأكسجين يتدفق في القص الخالط عالية وأن تركيزات الدهون في مستحلب السلائف صحيحة. كفاءة الإنتاج يتناقص كما يقلل تركيز الدهون. </li></ol> 3. جمع وتركيز، وتقييم، وتخزين LOMs <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إرفاق العقيمة، وتعديل 140 مل بالتركيبة قفل محبس حقنة لتعلق على المنفذ الأساسي رقم 1 على متن السفينة المجموعة. وضع 100 مل من السوائل. الغطاء بإحكام حقنة وتكرار حتى تمت إزالة جميع السوائل. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعديل الحقن من خلال سحب 100 مل من الهواء في حقنة ثم بالنشر قبالة الغطاس الزائدة والمواد حقنة فوق علامة مل 140. ملء والحقن الفارغة باستخدام ملقط مسنن لوضع المكبس. هذا التعديل يسمح أسهل الطرد المركزي. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المحاقن الطرد المركزي مع نهاية توج المنحى النزولي في المبرد (4 º C) دلو الطرد المركزي في 225 x ج لمدة 10 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وثلاث طبقات من المواد تظهر بعد الطرد المركزي. طرد الطبقة السفلية من المرحلة المائية الزائدة غائم وتجاهل. الطبقة الثانية هي بيضاء مشرقة ويحتوي LOMs المركزة. نقل الرغوة المركزة إلى حقنة الغاز غير منفذة باستخدام محبس ثلاثي لمنع التلوث الغاز المحيطة. تجاهل الطبقة النهائية، والذي يحتوي على غاز الأكسجين خالية من LOMs تمزق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويمكن تقييم نوعية الرغوة من خلال الوصول ≥ الغاز 90٪ من الرغوة المركزة. Calculأكلت تركيز الغاز على النحو التالي: حجم الغاز٪ = [(الوزن رغوة / رغوة حجم) - 1] × 100 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كما لمراقبة الجودة الثاني، microbubbles حجم التعمية بواسطة الضوء لتحديد ما إذا كان حجم الجسيمات هو ضمن النطاق المتوقع. تجدر الإشارة إلى أن أي تغيير في الوقت التجانس أو صياغة قد يغير حجم الفقاعة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الغطاء بإحكام الحقنة الزجاج مع تركيب-بالتركيبة القفل. يمكن أن تضعف LOMs مركزة مع البلازما LYTE A في وقت الاستخدام. ويمكن تخزين المحاقن في 22، 4، أو -20 درجة مئوية؛ قد توفر درجات حرارة أكثر برودة وتعزيز الاستقرار الجرف الحياة 7. </li></ol>

<ol>
	<li>Lentacker, I., De Smedt, S. C., Sanders, N. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug+loaded+microbubble+design+for+ultrasound+triggered+delivery.">Drug loaded microbubble design for ultrasound triggered delivery.</a> Soft Matter. 5 (11), 2161-2170 (2009).</li><li>Ren, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Ultrasound+Microbubble+Carrying+Gene+and+Tat+Peptide:+Preparation+and+Characterization.">A Novel Ultrasound Microbubble Carrying Gene and Tat Peptide: Preparation and Characterization.</a> Academic Radiology. 16 (12), 1457-1465 (2009).</li><li>Tinkov, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbubbles+as+Ultrasound+Triggered+Drug+Carriers.">Microbubbles as Ultrasound Triggered Drug Carriers.</a> Journal of Pharmaceutical Sciences. 98 (6), 1935-1961 (2009).</li><li>Hernot, S., Klibanov, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbubbles+in+ultrasound-triggered+drug+and+gene+delivery.">Microbubbles in ultrasound-triggered drug and gene delivery.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 60 (10), 1153-1166 (2008).</li><li>Lanza, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+site-targeted+ultrasonic+contrast+agent+with+broad+biomedical+application.">A novel site-targeted ultrasonic contrast agent with broad biomedical application.</a> Circulation. 94 (12), 3334-3340 (1996).</li><li>Cavalli, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+characterization+of+dextran+nanobubbles+for+oxygen+delivery.">Preparation and characterization of dextran nanobubbles for oxygen delivery.</a> International Journal of Pharmaceutics. 381 (2), 160-165 (2009).</li><li>Kheir, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxygen+Gas-Filled+Microparticles+Provide+Intravenous+Oxygen+Delivery.">Oxygen Gas-Filled Microparticles Provide Intravenous Oxygen Delivery.</a> Science Translational Medicine. 4 (140), (2012).</li><li>Lindner, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microvascular+rheology+of+definity+microbubbles+after+intra-arterial+and+intravenous+administration.">Microvascular rheology of definity microbubbles after intra-arterial and intravenous administration.</a> Journal of the American Society of Echocardiography. 15 (5), 396-403 (2002).</li><li>Zhao, Y. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation,+characterization+and+in+vivo+observation+of+phospholipid-based+gas-filled+microbubbles+containing+hirudin.">Preparation, characterization and in vivo observation of phospholipid-based gas-filled microbubbles containing hirudin.</a> Ultrasound in Medicine and Biology. 31 (9), 1237-1243 (2005).</li><li>Seo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+Assembly+of+Monodisperse,+Nanoparticle-Incorporated+Perfluorocarbon+Microbubbles+for+Medical+Imaging+and+Therapy.">Microfluidic Assembly of Monodisperse, Nanoparticle-Incorporated Perfluorocarbon Microbubbles for Medical Imaging and Therapy.</a> Langmuir. 26 (17), 13855-13860 (2010).</li><li>Wan, J. D., Stone, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coated+Gas+Bubbles+for+the+Continuous+Synthesis+of+Hollow+Inorganic+Particles.">Coated Gas Bubbles for the Continuous Synthesis of Hollow Inorganic Particles.</a> Langmuir. 28 (1), 37-41 (2012).</li><li>Duncanson, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monodisperse+Gas-Filled+Microparticles+from+Reactions+in+Double+Emulsions.">Monodisperse Gas-Filled Microparticles from Reactions in Double Emulsions.</a> Langmuir. 28 (17), 6742-6745 (2012).</li><li>Kendall, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scaled-Up+Production+of+Monodisperse,+Dual+Layer+Microbubbles+Using+Multi-Array+Microfluidic+Module+for+Medical+Imaging+and+Drug+Delivery.">Scaled-Up Production of Monodisperse, Dual Layer Microbubbles Using Multi-Array Microfluidic Module for Medical Imaging and Drug Delivery.</a> Bubble Science Engineering and Technology. 4 (1), 12-20 (2012).</li><li>Szijjarto, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Perfluorocarbon+Gases+on+the+Size+and+Stability+Characteristics+of+Phospholipid-Coated+Microbubbles:+Osmotic+Effect+versus+Interfacial+Film+Stabilization.">Effects of Perfluorocarbon Gases on the Size and Stability Characteristics of Phospholipid-Coated Microbubbles: Osmotic Effect versus Interfacial Film Stabilization.</a> Langmuir. 28 (2), 1182-1189 (2012).</li><li>Rossi, S., Waton, G., Krafft, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phospholipid-Coated+Gas+Bubble+Engineering:+Key+Parameters+for+Size+and+Stability+Control,+as+Determined+by+an+Acoustical+Method.">Phospholipid-Coated Gas Bubble Engineering: Key Parameters for Size and Stability Control, as Determined by an Acoustical Method.</a> Langmuir. 26 (3), 1649-1655 (2010).</li><li>Swanson, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phospholipid-Stabilized+Microbubble+Foam+for+Injectable+Oxygen+Delivery.">Phospholipid-Stabilized Microbubble Foam for Injectable Oxygen Delivery.</a> Langmuir. 26 (20), 15726-15729 (2010).</li><li>Kv&#229;le, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Size+fractionation+of+gas-filled+microspheres+by+flotation.">Size fractionation of gas-filled microspheres by flotation.</a> Separations Technology. 6 (4), 219-226 (1996).</li><li>Dressaire, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interfacial+polygonal+nanopatterning+of+stable+microbubbles.">Interfacial polygonal nanopatterning of stable microbubbles.</a> Science. 320 (5880), 1198-1201 (2008).</li><li>Kheir, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bulk+Manufacture+of+Concentrated+Oxygen+Gas-Filled+Microparticles+for+Intravenous+Oxygen+Delivery.">Bulk Manufacture of Concentrated Oxygen Gas-Filled Microparticles for Intravenous Oxygen Delivery.</a> Advanced Healthcare Materials. , (2013).</li></ol>

يعلن الكتاب أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.

أهم الخطوات لخلق المركزة، LOMs الاوكسيجين للغاية وتشمل: 1) التأكد من أن فراغ الرأس داخل كليات التقنية العليا لا تزال الاوكسيجين تماما؛ 2) ضمان نقاء السواغات الدهون هو الأمثل (بما في ذلك ظروف التخزين واستخدام منتجات GMP)؛ 3) ضمان أن الدهون مسحوق مزيج تماما مع المرحلة المائي?...

وقد وضعت Microbubbles تتكون من البروتين، والبوليمر، وقذائف الدهون كذلك ناقلا لتسليم المخدرات، والعلاج الجيني، وعوامل التباين الموجات فوق الصوتية 1-5. لأن هذه الاستخدامات العلاجية تتطلب استمرار microbubble داخل الأوعية الدموية، وتمتلئ هذه microbubbles عادة مع الخاملة، الغازات عالية الوزن الجزيئي مثل الهيدروكربونات المشبعة بالفلور 6، والتي لها قدرة منخفضة على الذوبان في الدم واستقرار 3،4 فقاعة. مؤخرا، تم تصميمها على أساس الدهون microbubbles الأكسجين (LOMs) لتقديم الجرعات العلاجية من الأكسجين، والذي حفظه نهاية الجهاز تسليم الأوكسجين والدورة الدموية منع عدم الاستقرار خلال فترات انسداد مجرى الهواء أو نقص الأكسجة 7. المستحلبات مصممة للتسليم الغاز في الوريد تتطلب ميزات تصميم تختلف عن تلك المستخدمة لعوامل التباين الموجات فوق الصوتية أو تسليم المخدرات المستهدفة. أولا، لأن الجسم يستهلك كميات كبيرة من غاز الأكسجين (~ 200 مل / دقيقة)، يجب أن تنتج LOMs وحقن على نطاق واسع. هذا يتطلب أن عملية التصنيع تكون فعالة. ثانيا، ينبغي أن تكون عملية التصنيع حلقة مغلقة من أجل تجنب التلوث النيتروجين من خلال التعرض لLOMs (التي ينبغي أن تملأ مع 100٪ من الأكسجين) إلى الهواء المحيط. الثالثة، وذلك لأن الغرض من LOMs هو تسليم الغاز في الوريد، يجب أن يكون الحد الأقصى جزء من الغاز LOMs، مع الاعتراف القيود التي تفرضها مستحلب اللزوجة 7. أخيرا، كما هو الحال مع أي حقن في الوريد، مراقبة دقيقة على توزيع حجم الجسيمات هو ضروري لتجنب انسداد الاوعية الدموية الدقيقة 8. هناك العديد من الطرق التي أنشئت لتصنيع microbubble. صوتنة يستخدم كثافة عالية، وتطبيق الموجات فوق الصوتية ذات التردد المنخفض إلى واجهة الهواء السائل من مستحلب الذي يتضمن السطحي، مثل فوسفورية متقابلة الزمر، في وجود فراغ الرأس الغاز لإنتاج microbubbles 7،9. هذه العملية يمكن السيطرة عليها من خلال تغيير فائقةتردد الصوت والقوة ومدة النبضة، وتوزيع حجم الناتج يمكن أن تكون مصممة لإنتاج microbubbles لتوزيع حجم معين، على الرغم من صوتنة ونادرا ما يستخدم في صناعة microbubbles المستخدمة سريريا. الدمج هو التحريض الميكانيكية مكثفة من السطحي والغاز في نظام مغلق، والذي هو أيضا من الصعب زيادة لاستيعاب كميات كبيرة 2. استنادا على microfluidics الحبرية، يسمح بالتحكم الدقيق في توزيع حجم microbubble 10-13. وإن كان من الصعب تقليديا لزيادة، متعدد القنوات، وقد وصفت على microfluidics عالية السرعة التي تزيد microbubble كفاءة الإنتاج 13. Microbubbles تصنيعها باستخدام أي من هذه الأساليب قد تتطلب عمليات تصنيع للحد من حجم آخر، مثل تجزئة الطرد المركزي و14،15 16،17 microbubble التعويم. آخر بالطريقة المحددة لتصنيع microbubbles درجة عالية من الاستقرار هو homogeniz القصأوجه 6، والذي يمكن أن يؤدي إلى وجود نمط فوسفورية سداسية استقرار على سطح microbubble 18. بناء على هذا المفهوم، ونحن تصف التأسيس من القص عالية الخالط في خط لخلق LOMs الذاتي تجميع 19. في هذه العملية، ويستخدم الخالط الدورية بسرعة ريش على مقربة من غرامة شاشات شبكة emulsor المزدوج، وخلق عالية القص الميكانيكية والهيدروليكية لإنشاء microbubbles. تركيز المسلسل من مستحلب الدهون من خلال هذا النظام ينتج عن جزء الغاز تتركز على نحو متزايد، والتي يمكن حتى تتركز المزيد بواسطة الطرد المركزي.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:239px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:141px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:405px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:239px;">1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DSPC)</td>
			<td style="width:141px;">Avanti Polar Lipids</td>
			<td style="width:119px;">770365</td>
			<td>Alternate product: non-GMP from NOF America (Coatsome MC-8080)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Cholesterol</td>
			<td style="width:141px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">C75209</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Plasma-Lyte A</td>
			<td style="width:141px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">80089-818</td>
			<td>Alternatively can use NaCl</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Glass collection vessel</td>
			<td style="width:141px;">Specialty Glass, Inc.</td>
			<td style="width:119px;">Custom</td>
			<td>Contact: Pam Zurbrick - 281-595-2210</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Gas composition (oxygen) monitor</td>
			<td style="width:141px;">Precision Medical</td>
			<td style="width:119px;">PM5900L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Sarns 8000 roller pump</td>
			<td style="width:141px;">Calicut Medical</td>
			<td style="width:119px;">16407</td>
			<td>Part of a modular perfusion system</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">BIOtherm Heat Exchanger</td>
			<td style="width:141px;">Medtronic</td>
			<td style="width:119px;">ECMOtherm-II</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:239px;">Verso laboratory in-line mixer</td>
			<td style="width:141px;">Silverson Machines, Inc</td>
			<td style="width:119px;">TH-IL-102-VERSO</td>
			<td>Use multistage workheads and front-end extension with T piece</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:239px;">T-piece for Silverson Verso inlet port</td>
			<td style="width:141px;">Process Innovations</td>
			<td style="width:119px;">Custom</td>
			<td>Contact: Brian Leavitt - 508-423-2266</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:239px;">L5M-A laboratory mixer</td>
			<td style="width:141px;">Silverson Machines, Inc</td>
			<td style="width:119px;">NC0136483</td>
			<td>Use mesh emulsor screen (fine)</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:239px;">Rochester-Ochsner toothed forceps</td>
			<td style="width:141px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">13-812-18</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:239px;">140 mL syringe</td>
			<td style="width:141px;">Kendall Healthcare Monoject&#160;</td>
			<td style="width:119px;">8881114030</td>
			<td>Ensure there is a luer lock.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">IX71 Inverted light microscope</td>
			<td style="width:141px;">Olympus</td>
			<td style="width:119px;">IX71</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:239px;">Retiga-2000R microscope camera</td>
			<td style="width:141px;">QImaging</td>
			<td style="width:119px;">RET-2000R-F-M-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:239px;">Accusizer 780A Autodilution</td>
			<td style="width:141px;">PSS-NICOMP Particle Sizing Systems</td>
			<td style="width:119px;">Out of production</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

manufacture of concentrated, lipid-based oxygen microbubble emulsions by high shear homogenization and serial concentration

وقد وضعت microbubbles مليئة بالغاز مثل الموجات فوق الصوتية وكلاء النقيض تسليم المخدرات. يمكن أن تنتج عن طريق معالجة Microbubbles السطحي باستخدام صوتنة، والإثارة الميكانيكية، وأجهزة ميكروفلويديك، أو التجانس. مؤخرا، تم تصميمها على أساس الدهون microbubbles الأكسجين (LOMs) لتسليم الأكسجين عن طريق الوريد أثناء حالات الطوارئ الطبية، وعكس نقص الأكسجة التي تهدد الحياة، ومنع الإصابة اللاحقة الجهاز، وتوقف القلب والموت. نقدم طرق لإنتاج مصغرة تتكون من microbubbles الاوكسيجين للغاية باستخدام حلقة مغلقة عالية القص الخالط. عملية يمكن أن تنتج 2 L من LOMs المركزة (90٪ من حيث الحجم) في 90 دقيقة. فقاعات الناتجة لديها قطر متوسط ​​~ 2 ميكرون، والتشكيل rheologic يتفق مع الدم عندما تضعف إلى 60٪ حجم. هذه التقنية تنتج LOMs في قدرة عالية وعالية النقاء مع الأكسجين، مما يشير إلى أن هذه التقنية قد تكون مفيدة لمختبرات البحوث متعدية.

عالية التجانس القص تمكن كفاءة (أي في غضون احدة بعد الظهر) إنتاج LOMs كافية لدراسة أجريت على الحيوانات و لا يتطلب خبرة تقنية. مرة واحدة يتقن، لتصل إلى 2 لتر من LOMs المركزة يمكن تصنيعها في 90 دقيقة. تم تقييم حجم Microbubble والتشكل بواسطة ?...

Watch this Scientific Journal Video about Manufacture of Concentrated, Lipid-based Oxygen Microbubble Emulsions by High Shear Homogenization and Serial Concentration at JoVE.com

Manufacture of Concentrated, Lipid-based Oxygen Microbubble Emulsions by High Shear Homogenization and Serial Concentration

نحن تصف أساليب لتصنيع كميات كبيرة من الدهون على أساس microbubbles الأكسجين (LOMs) مصممة للتسليم الأوكسجين عن طريق الوريد باستخدام التجانس عالية القص وتركيز المسلسل.

تصنيع المركزة، الأوكسجين القائم على الدهون Microbubble المستحلبات بواسطة High القص التجانس والتركيز المسلسل

Gas-filled microbubbles have been developed as ultrasound contrast and drug delivery agents. Microbubbles can be produced by processing surfactants using ...

manufacture-concentrated-lipid-based-oxygen-microbubble-emulsions

Research

JoVE Journal

Bioengineering

14.9K Views.  Harvard Medical School.  نحن تصف أساليب لتصنيع كميات كبيرة من الدهون على أساس microbubbles الأكسجين (LOMs) مصممة للتسليم الأوكسجين عن طريق الوريد باستخدام التجانس عالية القص وتركيز المسلسل. 

Video: Manufacture of Concentrated, Lipid-based Oxygen Microbubble Emulsions by High Shear Homogenization and Serial Concentration

Introduction to the Ultrasound Targeted Microbubble Destruction Technique

In UTMD, bioactive molecules, such as negatively charged plasmid DNA vectors encoding a gene of interest, are added to the cationic shells of lipid microbubble contrast agents7-9. In mice these vector-carrying microbubbles can be administered intravenously or directly to the left ventricle of the heart. In larger animals they can also be infused through an intracoronary catheter. The subsequent delivery from the circulation to a target organ occurs by acoustic cavitation at a resonant frequency of the microbubbles. It seems likely that the mechanical energy generated by the microbubble destruction results in transient pore formation in or between the endothelial cells of the microvasculature of the targeted region10. As a result of this sonoporation effect, the transfection efficiency into and across the endothelial cells is enhanced, and transgene-encoding vectors are deposited into the surrounding tissue. Plasmid DNA remaining in the circulation is rapidly degraded by nucleases in the blood, which further reduces the likelihood of delivery to non-sonicated tissues and leads to highly specific target-organ transfection.

Ultrasound Targeted Microbubble Destruction (UTMD) can be used to direct site-specific delivery of bioactive molecules, including therapeutic genes, to target organs accessible to ultrasound, such as the heart and liver1-6.

مقدمة لتقنية الموجات فوق الصوتية مستهدفة تدمير Microbubble

In UTMD, bioactive molecules, such as negatively charged plasmid DNA vectors encoding a gene of interest, are added to the cationic shells of lipid ...

Characteristics of Precipitation-formed Polyethylene Glycol Microgels Are Controlled by Molecular Weight of Reactants

This work describes the formation of poly(ethylene glycol) (PEG) microgels via a photopolymerized precipitation reaction. Precipitation reactions offer several advantages over traditional microsphere fabrication techniques. Contrary to emulsion, suspension, and dispersion techniques, microgels formed by precipitation are of uniform shape and size, i.e.&#160;low polydispersity index, without the use of organic solvents or stabilizers. The mild conditions of the precipitation reaction, customizable properties of the microgels, and low viscosity for injections make them applicable for in vivo purposes. Unlike other fabrication techniques, microgel characteristics can be modified by changing the starting polymer molecular weight. Increasing the starting PEG molecular weight increased microgel diameter and swelling ratio. Further modifications are suggested such as encapsulating molecules during microgel crosslinking. Simple adaptations to the PEG microgel building blocks are explored for future applications of microgels as drug delivery vehicles and tissue engineering scaffolds.

This work describes the formation of poly(ethylene glycol) (PEG) microgels via a photopolymerized precipitation reaction. Increasing the PEG molecular weight increased microgel diameter and swelling ratio. Simple adaptations to the PEG microgel precipitation reaction are explored for future applications of microgels as drug delivery vehicles and tissue engineering scaffolds.

This work describes the formation of poly(ethylene glycol) (PEG) microgels via a photopolymerized precipitation reaction. Precipitation reactions offer ...

Generation of Shear Adhesion Map Using SynVivo Synthetic Microvascular Networks

Cell/particle adhesion assays are critical to understanding the biochemical interactions involved in disease pathophysiology and have important applications in the quest for the development of novel therapeutics. Assays using static conditions fail to capture the dependence of adhesion on shear, limiting their correlation with in vivo environment. Parallel plate flow chambers that quantify adhesion under physiological fluid flow need multiple experiments for the generation of a shear adhesion map. In addition, they do not represent the in vivo scale and morphology and require large volumes (~ml) of reagents for experiments. In this study, we demonstrate the generation of shear adhesion map from a single experiment using a microvascular network based microfluidic device, SynVivo-SMN. This device recreates the complex in vivo vasculature including geometric scale, morphological elements, flow features and cellular interactions in an in vitro format, thereby providing a biologically realistic environment for basic and applied research in cellular behavior, drug delivery, and drug discovery. The assay was demonstrated by studying the interaction of the 2 &#181;m biotin-coated particles with avidin-coated surfaces of the microchip. The entire range of shear observed in the microvasculature is obtained in a single assay enabling adhesion vs. shear map for the particles under physiological conditions.

Flow chambers used in adhesion experiments typically consist of linear flow paths and require multiple experiments at different flow rates to generate a shear adhesion map. SynVivo-SMN enables the generation of shear adhesion map using a single experiment utilizing microliter volumes resulting in significant savings in time and consumables.

جيل من القص التصاق خريطة طريق SynVivo شبكات الاوعية الدموية الدقيقة الاصطناعية

Cell/particle adhesion assays are critical to understanding the biochemical interactions involved in disease pathophysiology and have important ...

High-resolution Spatiotemporal Analysis of Receptor Dynamics by Single-molecule Fluorescence Microscopy

Single-molecule microscopy is emerging as a powerful approach to analyze the behavior of signaling molecules, in particular concerning those aspect (e.g., kinetics, coexistence of different states and populations, transient interactions), which are typically hidden in ensemble measurements, such as those obtained with standard biochemical or microscopy methods. Thus, dynamic events, such as receptor-receptor interactions, can be followed in real time in a living cell with high spatiotemporal resolution. This protocol describes a method based on labeling with small and bright organic fluorophores and total internal reflection fluorescence (TIRF) microscopy to directly visualize single receptors on the surface of living cells. This approach allows one to precisely localize receptors, measure the size of receptor complexes, and capture dynamic events such as transient receptor-receptor interactions. The protocol provides a detailed description of how to perform a single-molecule experiment, including sample preparation, image acquisition and image analysis. As an example, the application of this method to analyze two G-protein-coupled receptors, i.e., &#946;2-adrenergic and &#947;-aminobutyric acid type B (GABAB) receptor, is reported. The protocol can be adapted to other membrane proteins and different cell models, transfection methods and labeling strategies.

This protocol describes how to use total internal reflection fluorescence microscopy to visualize and track single receptors on the surface of living cells and thereby analyze receptor lateral mobility, size of receptor complexes as well as to visualize transient receptor-receptor interactions. This protocol can be extended to other membrane proteins.

عالية الدقة تحليل الزمانية المكانية من مستقبلات حيوية من قبل جزيء واحدة الإسفار الميكروسكوب

Single-molecule microscopy is emerging as a powerful approach to analyze the behavior of signaling molecules, in particular concerning those aspect (e.g., ...

Synthesis of Gold Nanoparticle Integrated Photo-responsive Liposomes and Measurement of Their Microbubble Cavitation upon Pulse Laser Excitation

Photo-responsive nanoparticles (NPs) have received considerable attention because of their potential in providing spatial, temporal, and dosage control over the drug release. However, most of the relevant technologies are still in the development process and are unprocurable by clinics. Here, we describe a facile fabrication of these photo-responsive NPs with commercially available gold NPs and thermo-responsive liposomes. Calcein is used as a model drug to evaluate the encapsulation efficiency and the release kinetic profile upon heat/light stimulation. Finally, we show that this photo-triggered release is due to the membrane disruption caused by microbubble cavitation, which can be measured with hydrophone.

This protocol describes a simple preparation method for gold nanoparticle integrated photo-responsive liposomes with the commercially available materials. It also shows how to measure the microbubble cavitation process of the synthesized liposomes upon the treatment of pulsed laser.

توليف الذهب الجسيمات النانوية الليبوزومات المتكاملة صور متجاوبة وقياس تلك Microbubble التجويف على نبض الليزر الإثارة

Photo-responsive nanoparticles (NPs) have received considerable attention because of their potential in providing spatial, temporal, and dosage control ...

Manufacture and Drug Delivery Applications of Silk Nanoparticles

Silk is a promising biopolymer for biomedical and pharmaceutical applications due to its outstanding mechanical properties, biocompatibility and biodegradability, as well its ability to protect and subsequently release its payload in response to a trigger. While silk can be formulated into various material formats, silk nanoparticles are emerging as promising drug delivery systems. Therefore, this article covers the procedures for reverse engineering silk cocoons to yield a regenerated silk solution that can be used to generate stable silk nanoparticles. These nanoparticles are subsequently characterized, drug loaded and explored as a potential anticancer drug delivery system. Briefly, silk cocoons are reverse engineered first by degumming the cocoons, followed by silk dissolution and clean up, to yield an aqueous silk solution. Next, the regenerated silk solution is subjected to nanoprecipitation to yield silk nanoparticles &#8211; a simple but powerful method that generates uniform nanoparticles. The silk nanoparticles are characterized according to their size, zeta potential, morphology and stability in aqueous media, as well as their ability to entrap a chemotherapeutic payload and kill human breast cancer cells. Overall, the described methodology yields uniform silk nanoparticles that can be readily explored for a myriad of applications, including their use as a potential nanomedicine.

Nanoparticles are emerging as promising drug delivery systems for a broad range of indications. Here, we describe a simple yet powerful method to manufacture silk nanoparticles using reverse engineered Bombyx mori silk. These silk nanoparticles can be readily loaded with a therapeutic payload and subsequently explored for drug delivery applications.

تطبيقات تصنيع وتسليم المخدرات من النانوية الحرير

Silk is a promising biopolymer for biomedical and pharmaceutical applications due to its outstanding mechanical properties, biocompatibility and ...

Quantifying Intermembrane Distances with Serial Image Dilations

A recently-described extracellular nanodomain, termed the perinexus, has been implicated in ephaptic coupling, which is an alternative mechanism for electrical conduction between cardiomyocytes. The current method for quantifying this space by manual segmentation is slow and has low spatial resolution.We developed an algorithm that uses serial image dilations of a binary outline to count the number of pixels between two opposing 2 dimensional edges.This algorithm requires fewer man hours and has a higher spatial resolution than the manual method while preserving the reproducibility of the manual process.In fact, experienced and novice investigators were able to recapitulate the results of a previous study with this new algorithm.The algorithm is limited by the human input needed to manually outline the perinexus and computational power mainly encumbered by a pre-existing pathfinding algorithm.However, the algorithm&#39;s high-throughput capabilities, high spatial resolution and reproducibility make it a versatile and robust measurement tool for use across a variety of applications requiring the measurement of the distance between any 2-dimensional (2D) edges.

The purpose of this algorithm is to continuously measure the distance between two 2-dimensional edges using serial image dilations and pathfinding. This algorithm can be applied to a variety of fields such as cardiac structural biology, vascular biology, and civil engineering.

قياس المسافات إينتيرميمبراني مع ديليشنز صورة المسلسل

A recently-described extracellular nanodomain, termed the perinexus, has been implicated in ephaptic coupling, which is an alternative mechanism for ...

Catalytic Scavenging of Plant Reactive Oxygen Species In Vivo by Anionic Cerium Oxide Nanoparticles

Reactive oxygen species (ROS) accumulation is a hallmark of plant abiotic stress response. ROS play&#160;a dual role in plants by acting as signaling molecules at low levels and damaging molecules at high levels. Accumulation of ROS in stressed plants can damage metabolites, enzymes, lipids, and DNA, causing a reduction of plant growth and yield. The ability of cerium oxide nanoparticles (nanoceria) to catalytically scavenge ROS in vivo provides a unique tool to understand and bioengineer plant abiotic stress tolerance. Here, we present a protocol to synthesize and characterize poly (acrylic) acid coated nanoceria (PNC), interface the nanoparticles with plants via leaf lamina infiltration, and monitor their distribution and ROS scavenging in vivo using confocal microscopy. Current molecular tools for manipulating ROS accumulation in plants are limited to model species and require laborious transformation methods. This protocol for in vivo ROS scavenging has the potential to be applied to wild type plants with broad leaves and leaf structure like Arabidopsis thaliana.

Catalytic Scavenging of Plant Reactive Oxygen Species In Vivo by Anionic Cerium Oxide Nanoparticles

Here, we present a protocol for the synthesis and characterization of cerium oxide nanoparticles (nanoceria) for ROS (reactive oxygen species) scavenging in vivo, nanoceria imaging in plant tissues by confocal microscopy, and in vivo monitoring of nanoceria ROS scavenging by confocal microscopy.

مسح الحفاز لمصنع الأكسجين التفاعلية الأنواع في فيفو بجسيمات نانوية أكسيد السيريوم أنيونى

Reactive oxygen species (ROS) accumulation is a hallmark of plant abiotic stress response. ROS play&#160;a dual role in plants by acting as signaling ...

Detection of Endotoxin in Nano-formulations Using Limulus Amoebocyte Lysate (LAL) Assays

When present in pharmaceutical products, a Gram-negative bacterial cell wall component endotoxin (often also called lipopolysaccharide) can cause inflammation, fever, hypo- or hypertension, and, in extreme cases, can lead to tissue and organ damage that may become fatal. The amounts of endotoxin in pharmaceutical products, therefore, are strictly regulated. Among the methods available for endotoxin detection and quantification, the Limulus Amoebocyte Lysate (LAL) assay is commonly used worldwide. While any pharmaceutical product can interfere with the LAL assay, nano-formulations represent a particular challenge due to their complexity. The purpose of this paper is to provide a practical guide to researchers inexperienced in estimating endotoxins in engineered nanomaterials and nanoparticle-formulated drugs. Herein, practical recommendations for performing three LAL formats including turbidity, chromogenic and gel-clot assays are discussed. These assays can be used to determine endotoxin contamination in nanotechnology-based drug products, vaccines, and adjuvants.

Detection of Endotoxin in Nano-formulations Using Limulus Amoebocyte Lysate LAL Assays

Detection of endotoxins in engineered nanomaterials represents one of the grand challenges in the field of nanomedicine. Here, we present a case study that describes the framework composed of three different LAL formats to estimate potential endotoxin contamination in nanoparticles.

كشف الذيفان في تركيبات النانو باستخدام فحوصات ليستي (ال) أموبوسيتي ليمولوس

When present in pharmaceutical products, a Gram-negative bacterial cell wall component endotoxin (often also called lipopolysaccharide) can cause ...

Fabrication of Zero Mode Waveguides for High Concentration Single Molecule Microscopy

In single molecule fluorescence enzymology, background fluorescence from labeled substrates in solution often limits fluorophore concentration to pico- to nanomolar ranges, several orders of magnitude less than many physiological ligand concentrations. Optical nanostructures called zero mode waveguides (ZMWs), which are 100&#8722;200 nm in diameter apertures fabricated in a thin conducting metal such as aluminum or gold, allow imaging of individual molecules at micromolar concentrations of fluorophores by confining visible light excitation to zeptoliter effective volumes. However, the need for expensive and specialized nanofabrication equipment has precluded the widespread use of ZMWs. Typically, nanostructures such as ZMWs are obtained by direct writing using electron beam lithography, which is sequential and slow. Here, colloidal, or nanosphere, lithography is used as an alternative strategy to create nanometer-scale masks for waveguide fabrication. This report describes the approach in detail, with practical considerations for each phase. The method allows thousands of aluminum or gold ZMWs to be made in parallel, with final waveguide diameters and depths of 100&#8722;200 nm. Only common lab equipment and a thermal evaporator for metal deposition are required. By making ZMWs more accessible to the biochemical community, this method can facilitate the study of molecular processes at cellular concentrations and rates.

Described here is a nanosphere lithography method for parallel fabrication of zero mode waveguides, which are arrays of nanoapertures in a metal-clad glass microscopy coverslip for single molecule imaging at nano- to micromolar concentrations of fluorophores. The method takes advantage of colloidal crystal self-assembly to create a waveguide template.

تصنيع أدلة الموجة وضع الصفر لارتفاع تركيز المجهر جزيء واحد

In single molecule fluorescence enzymology, background fluorescence from labeled substrates in solution often limits fluorophore concentration to pico- to ...