ونود أن نشكر كيرستين ثيم (استرا زينيكا، لوند، السويد)، بينيتا داهلبرغ والدكتور اندرس إكلوند (معهد كارولينسكا في ستوكهولم، السويد)، وكذلك الدكتور مارتن Stampfli (جامعة ماكماستر، هاملتون، ON، كندا) للحصول على المساعدة ماهرا ومشورة الخبراء.

وتمت الموافقة على الدراسات على الحيوانات من قبل لجنة الأخلاق الرفق بالحيوان الشمالية ستوكهولم. تم تنفيذ الإجراءات التجريبية في الامتثال للقانون السويدي. 1. توليد LPS الهباء <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حل 0.5 غرام تنقية P. الزنجارية LPS في 50 مل ملحي معقم مع الإثارة لطيف والتحقق من الحل. تمييع 1 مل حل LPS في 9 مل ملحي معقم، إلى تركيز النهائي من 1 ملغ / مل. يحفظ بعيدا عن الضوء بورق الألمنيوم وتخزينها في -20 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ذوبان الجليد LPS تذوب في الظلام في درجة حرارة الغرفة وتخلط جيدا فورا قبل الاستخدام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في التهوية من المستوى الثاني واقية غطاء محرك السيارة، اضافة الى وجود مدخل الحمراء في البخاخات، وربط البخاخات لضغط هواء الغرفة عبر الأنابيب التي تقدمها (مخطط مراجعة تقديم الأجهزة التجريبية في الشكل 1) المصنعة. تنبيه: معدات الوقاية الشخصية المناسبة، بما في ذلك نصف قطعة الوجه respirat قابلة لإعادة الاستخدامأو مع مرشحات الجسيمات، نظارات واقية وقفازات والملابس الواقية وينبغي أن تستخدم أثناء التعرض. </li></ol><img alt="الشكل (1)" src="/files/ftp_upload/51470/51470fig1highres.jpg" /> الشكل 1: عرض تخطيطي من الأجهزة التجريبية المستخدمة لتوليد الهباء الجوي يتم توصيل مدخل من البخاخات إلى العرض الجوي. توصيل منفذ من البخاخات أول من تدفق متر عبر 15.9 مم أنبوب وفلتر الهواء، والعرض الجوي يتم ضبط إلى 5.0 L / م 2 في الضغط kbar. منفذ توصيل القادم إلى مربع زجاجي مزودة الأغطية القابلة للإزالة و 5 ملم الثقوب لمنع تراكم الضغط. <ol start="4" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قم بتوصيل منفذ من البخاخات إلى مقياس الجريان الشامل عبر فلتر الهواء. ربط مقياس الجريان الكتلة إلى التيار الكهربائي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضبط العرض الجوي إلى 5 لتر / دقيقة، مع الضغط المتبقية في 1.0-2.0 بار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة مقياس الجريان الجماعية وقطع التيار الهواء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قم بتوصيل منفذ من البخاخات إلى 15.9 مم أنبوب، التي bifurcates ويتصل صندوقين زجاجي مع الأبعاد: 150 × 163 X 205 مم، مزودة الأغطية القابلة للإزالة. وينبغي أن يكون كل مربع حفرة 5 ملم في الجانب معارضة مدخل، لمنع تراكم الضغط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع ما يصل إلى 5 الفئران في كل مربع زجاجي وإغلاق الأغطية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح البخاخات وملء إدراج مع لا يقل عن 4 مل LPS المذاب في محلول ملحي معقم أو مركبة وحدها (ملحي معقم؛ وينبغي ألا يتجاوز حجم 8 مل). إعادة ربط مدخل إلى العرض الجوي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح للالهباء الجوي في التدفق إلى صناديق مغلقة زجاجي لمدة 10 دقيقة. مراقبة الحيوانات باستمرار. تأكد من يبقى العرض الجوي المضمون بإحكام إلى مدخل من البخاخات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع التيار الهواء. مع الأغطية مغلقة، والسماح تبقى الحيوانات في مربعات زجاجي لمدة 2 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح الأغطية والسماح للالهباء الجوي لتفريق، وعودة الحيوانات إلى tانه الأقفاص. إذا ظهرت الحيوانات الرطب، ضع أقفاص على وسادة التدفئة المقرر أن درجة حرارة منخفضة، لمنع انخفاض حرارة الجسم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مراقبة الحيوانات بشكل مستمر لمدة 30 دقيقة الأولى، وبعد ذلك كل 2 ساعة لساعة 6 الأولى. يجب على الحيوانات تظهر نمط التنفس الطبيعي والنشاط أثناء وبعد العملية إرذاذ. </li></ol> 2. القصبات الغسل (BAL) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عند نقطة نهاية التجريبية، تخدير عميق الحيوانات مع isoflurane إلى تأثير على النحو الموصى به من قبل الموظفين البيطري مؤسستك. قرصة مخلب الخلفية للتحقق من رد فعل الانسحاب لضمان عمق كاف من التخدير لإجراء عملية جراحية كبرى. رش أسفل الفراء للحيوانات مع 70٪ من الإيثانول. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح البطن باستخدام مقص، وقطع الشريان الأبهر ليستنزف الحيوان. ضع قطعة من النسيج على البطن لامتصاص الدم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> و FOLLWING القتل الرحيم، واستخدام قطع الأمامي الخلفي واحد من المقص لفضح القفص الصدري. رفع القفص الصدري من قبل طرف الأمامي من عظمة القص واستخدام المقص لثقب في الحجاب الحاجز معظم نقطة البطنية، بدون تقطيع في أي الفص الرئة. فتح القفص الصدري من خلال جعل اثنين من التخفيضات في الاتجاه الأمامي الخلفي (اجتماع تحت الفك). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سحب بلطف بعيدا القفص الصدري باستخدام ملقط، وقطع القصبة الهوائية تحت الحنجرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رفع القصبة الهوائية مع ملقط وإزالة الرئتين عن طريق قطع الأربطة التي تربط فصوص إلى التجويف الصدري، وسحب بلطف من قبل الدهنية والأنسجة القلبية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج أنبوب البولي ايثيلين (القطر الداخلي: 0.58 مم؛ القطر الخارجي: 0،965 ملم) في القصبة الهوائية وتأمين أنبوب مع سلسلة من الخيوط الحريرية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ربط قبالة multilobe (فصوص أربعة من الرئة اليمنى) مع خيط الحرير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اضافة الى وجود إبرة قياس 23 في أنبوب البولي ايثيلين وحقن ببطء 250 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني العقيمة الجليد الباردة في الفص واحد مع حقنة 1 مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الاستفادة بعناية الرئتين30 مرة وجمع السائل من خلال حقنة. كرر الإجراء مع 200 ميكرولتر PBS (حوالي 300 ميكرولتر PBS يجب أن تعافى من الفص واحد من إجمالي كمية حقن 450 ميكرولتر). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحفاظ على السائل غسل القصبات (BALF) على الجليد، أو تعداد خلايا بال على الفور. عد الخلايا مع heamocytometer، وذلك باستخدام حل الترك وصمة عار على الخلايا 11. حساب عدد الخلايا الكلي عن طريق ضرب عدد من الخلايا التي تحتوي على عامل التخفيف من الحل تلطيخ وحجم في مجال عدها من heamocytometer. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد تعداد خلايا التفاضلية من خلايا cytocentrifuged كما هو موضح في مكان آخر (11). </li></ol> 3. الفورمالين التثبيت من أنسجة الرئة لتقييم النسيجي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة multilobe والمفاجئة تجميد الثلج الجاف. تخزين في -80 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جبل حقنة 60 مل مع المكبس إزالتها على دعم موقف المعدنية. ملء المحاقن مع 10٪ من الفورمالين لعلى ارتفاع 20 سم فوق مقاعد البدلاء المختبر، وهو ما يمثل 20 سم من الضغط المستمر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ربط الإبرة 23 مقياس المضمون إلى القصبة الهوائية إلى الحقنة 60 مل عن طريق أنبوب من البلاستيك مع صمام للتحكم في تدفق الفورمالين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نفخ في الفص الرئة مع الفورمالين لمدة 5 دقائق. افصل إبرة وإزالته جنبا إلى جنب مع أنبوب البولي إيثيلين من القصبة الهوائية في حين سحب على خيط الحرير ليغلق القصبة الهوائية والإبقاء على الضغط في الرئة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يغرق الفص الرئة في الفورمالين وإصلاح لمدة 24 ساعة في 4 درجات مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل الأنسجة الثابتة ثلاث مرات لمدة 20 دقيقة على الأقل مع الايثانول 70٪، ويذوى وحتى الزيلين من خلال نظام التالية (1 ساعة لكل منهما): <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 3X الايثانول 70٪ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 3X 95٪ من الإيثانول </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 3X الإيثانول بنسبة 100٪ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 3X زيلين </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 1X (السائل) البارافين </li></ul></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تضمين الأنسجة المجففة في البارافين، وقطع في 4-5 ميكرون أقسام، وصمة عار مع الهيماتوكسيلين ويوزين للسماح لتقييم النسيجي.</li>
</ol>

<ol>
	<li>King, J. D., Kocincova, D., Westman, E. L., Lam, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review:+Lipopolysaccharide+biosynthesis+in+Pseudomonas+aeruginosa.">Review: Lipopolysaccharide biosynthesis in Pseudomonas aeruginosa.</a> Innate Immun. 15, 261-312 (2009).</li><li>Grommes, J., Soehnlein, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+neutrophils+to+acute+lung+injury.">Contribution of neutrophils to acute lung injury.</a> Mol Med. 17, 293-307 (2011).</li><li>Pesci, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+cells+and+mediators+in+bronchial+lavage+of+patients+with+chronic+obstructive+pulmonary+disease.">Inflammatory cells and mediators in bronchial lavage of patients with chronic obstructive pulmonary disease.</a> Eur Respir J. 12, 380-386 (1998).</li><li>Hoogerwerf, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+Inflammation+Induced+by+Lipoteichoic+Acid+or+Lipopolysaccharide+in+Humans.">Lung Inflammation Induced by Lipoteichoic Acid or Lipopolysaccharide in Humans.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 178, 34-41 (2008).</li><li>Scheuchenzuber, W. J., Eskew, M. L., Zarkower, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+humoral+responses+to+Escherichia+coli+and+sheep+red+blood+cell+antigens+introduced+via+the+respiratory+tract.">Comparative humoral responses to Escherichia coli and sheep red blood cell antigens introduced via the respiratory tract.</a> Exp Lung Res. 13, 97-112 (1987).</li><li>Asti, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipopolysaccharide-induced+lung+injury+in+mice.+I.+Concomitant+evaluation+of+inflammatory+cells+and+haemorrhagic+lung+damage.">Lipopolysaccharide-induced lung injury in mice. I. Concomitant evaluation of inflammatory cells and haemorrhagic lung damage.</a> Pulm Pharmacol Ther. 13, 61-69 (2000).</li><li>Brand, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Total+deposition+of+therapeutic+particles+during+spontaneous+and+controlled+inhalations.">Total deposition of therapeutic particles during spontaneous and controlled inhalations.</a> Journal of pharmaceutical sciences. 89, 724-731 (2000).</li><li>Liu, F., Li, W., Pauluhn, J., Trubel, H., Wang, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipopolysaccharide-induced+acute+lung+injury+in+rats:+comparative+assessment+of+intratracheal+instillation+and+aerosol+inhalation.">Lipopolysaccharide-induced acute lung injury in rats: comparative assessment of intratracheal instillation and aerosol inhalation.</a> Toxicology. 304, 158-166 (2013).</li><li>Skerrett, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+the+type+1+TNF+receptor+in+lung+inflammation+after+inhalation+of+endotoxin+or+Pseudomonas+aeruginosa.">Role of the type 1 TNF receptor in lung inflammation after inhalation of endotoxin or Pseudomonas aeruginosa.</a> American Journal of Physiology - Lung Cellular and Molecular Physiology. 276, L715-L727 (1999).</li><li>Roos, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+epithelial-C/EBPbeta+contributes+to+LPS-induced+inflammation+and+its+suppression+by+formoterol.">Lung epithelial-C/EBPbeta contributes to LPS-induced inflammation and its suppression by formoterol.</a> Biochem Biophys Res Commun. 423, 134-139 (2012).</li><li>Didon, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+epithelial+CCAAT/enhancer-binding+protein-beta+is+necessary+for+the+integrity+of+inflammatory+responses+to+cigarette+smoke.">Lung epithelial CCAAT/enhancer-binding protein-beta is necessary for the integrity of inflammatory responses to cigarette smoke.</a> Am J Respir Crit Care Med. 184, 233-242 (2011).</li><li>Silverpil, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Negative+feedback+on+IL-23+exerted+by+IL-17A+during+pulmonary+inflammation.">Negative feedback on IL-23 exerted by IL-17A during pulmonary inflammation.</a> Innate Immunity. 19, 479-492 (2013).</li><li>Mercer, P. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteinase-Activated+Receptor-1,+CCL2+and+CCL7+Regulate+Acute+Neutrophilic+Lung+Inflammation.">Proteinase-Activated Receptor-1, CCL2 and CCL7 Regulate Acute Neutrophilic Lung Inflammation.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. , (2013).</li><li>Korkmaz, B., Horwitz, M. S., Jenne, D. E., Gauthier, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Neutrophil Elastase, Proteinase 3, and Cathepsin G as Therapeutic Targets in Human Diseases. Pharmacological Reviews. 62, 726-759 (2010).</li><li>Bafadhel, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+Exacerbations+of+COPD:+Identification+of+Biological+Clusters+and+Their+Biomarkers.">Acute Exacerbations of COPD: Identification of Biological Clusters and Their Biomarkers.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. , 201104-200597 (2011).</li><li>Hurst, J. R., Perera, W. R., Wilkinson, T. M. A., Donaldson, G. C., Donaldson, G. C., Wedzicha, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systemic+and+Upper+and+Lower+Airway+Inflammation+at+Exacerbation+of+Chronic+Obstructive+Pulmonary.">Systemic and Upper and Lower Airway Inflammation at Exacerbation of Chronic Obstructive Pulmonary.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 173, 71-78 (2006).</li><li>Rabe, K. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+Strategy+for+the+Diagnosis,+Management,+and+Prevention+of+Chronic+Obstructive+Pulmonary+Disease:+GOLD+Executive+Summary.">Global Strategy for the Diagnosis, Management, and Prevention of Chronic Obstructive Pulmonary Disease: GOLD Executive Summary.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 176, 532-555 (2007).</li></ol>

وقد تلقت إبراهيم روس رسم محاضر من بورنغير إنغلهايم، منح السفر من استرا زينيكا R &amp; D ومنحة بحثية من استرا زينيكا R &amp; D. ماغنوس نورد هو موظف بدوام كامل من استرا زينيكا R &amp; D، وتلقى المنح البحثية من استرا زينيكا R &amp; D. يوهان GRÜNEWALD وتوف بيرغ هي زملاؤها على مشروع بحث لا علاقة لها بتمويل من استرا زينيكا R &amp; D.

رذاذ LPS يولد استجابة التهابية في الشعب الهوائية، والتي تتميز العدلات في مخاطية الظهارية، ومساحات المحيطة الشعب الهوائية إجراء، وكذلك المساحات السنخية. وهذا هو، جنبا إلى جنب مع زيادة محتوى البروتين الكلي في BALF، يدل على تسرب البلازما، ممثل علم الأمراض من إصابة الرئة ?...

lipopolysaccharide في (LPS) هو أحد مكونات جدار الخلية من البكتيريا سالبة الجرام 1. تحديا لLPS هو نموذج موثقة جيدا من إصابة الرئة الحادة، وهو متلازمة تتميز التهاب العدلات الحاد وذمة 2. وبالإضافة إلى ذلك، العدلات الرئوية هي أيضا السمة المميزة لمرض الانسداد الرئوي المزمن (COPD) 3، والتحدي LPS في البشر وقد استخدم لنموذج التفاقم COPD 4. وهكذا، نماذج تجريبية من التعرض LPS هي سريريا الأدوات ذات الصلة وقيمة لفهم الأمراض البشرية. والهدف من تسليم الرئوي من LPS رذاذ الموصوفة هنا هو لتوليد استجابة التهابية عدلة في إجراء والهوائية في الجهاز التنفسي، دون الجهازية. وقد وصفت العديد من التقنيات التحدي LPS سابقا. حقن وريدية من LPS هو الطريق الأكثر استخداما للإدارة. على الرغم من أن هذه التقنية يمكن الوصول إليها بسهولة، رانه الضرر الأساسي هو البطانة، مع تدمير الثانوي من الظهارة الرئوية التالية الهجرة المتعادلة إلى الرئة. إدارة وريدية أيضا يدفع التهاب النظامية 2، والتي قد تعقيد الصورة السريرية في النماذج الحيوانية. التهاب النظامية في المقابل لم يلاحظ مع الإدارة داخل القصبة الهوائية. هذه التقنية، ومع ذلك، هو عمالة كثيفة ويتطلب التخدير وكذلك تدريب كبير 5، 6. وعلاوة على ذلك، ترسب الرئوي عن طريق هذا الطريق الإدارة يعتمد على التنفس 7. وهكذا، يتأثر ترسب الرئوي من عمق التخدير اللازمة ليمكن ملاحظة ادارة القصبة الهوائية داخل وترسب متغير في الشعب الهوائية. في المقابل، والتسليم الرئوي مع LPS رذاذ يتطلب الحد الأدنى من التدريب، ويمكن بسهولة أن يتحقق على عدد كبير من الحيوانات مع ضئيلة أو معدومة الاختلاف بين الأفراد 5 و 8.وتؤكد دراسة حديثة أن تسليم الهباء الجوي متفوقة على الطريق داخل القصبة الهوائية فيما يتعلق الترسيب، وأن جرعات أكثر أهمية من LPS تحفز التهاب العدلات مع هذا النموذج 8. وقد أثبتت دراسات سابقة أن التحدي إلى رذاذ Psuedomonas الزنجارية LPS يولد استجابة التهابية ملحوظة في التجويف الهوائي وحمة الرئة، بما في ذلك المسافات السنخية 9 و 10. يتميز الالتهاب من قبل غلبة العدلات وجود وذمة رئوية، وبالتالي يمكن استخدامها لمعالجة التسبب في إصابة الرئة الحادة واكتساب المزيد من المعارف من الآليات التي تسهم في علم الأمراض المرض.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:931px;" width="929">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:307px;">Name of the material/equipment&#160;</td>
			<td style="width:244px;">Company</td>
			<td style="width:145px;">Catalog number</td>
			<td style="width:235px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:307px;">Purified Pseudomonas aeruginosa LPS&#160;</td>
			<td style="width:244px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:145px;"></td>
			<td style="width:235px;">Harmful. Recomended purification. LPS purified from other bactria may be used.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Pari LC sprint star nebulizer</td>
			<td style="width:244px;">PARI Respiratory Equipment Inc.&#160;</td>
			<td style="width:145px;">023G1250</td>
			<td style="width:235px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:307px;">TSI mass flowmeter 4040</td>
			<td style="width:244px;">TSI</td>
			<td style="width:145px;">4040</td>
			<td style="width:235px;">Alternative product from supplier may be used.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Saint-Gobain 15.9 mm Tygon tube</td>
			<td style="width:244px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:145px;">Z685704</td>
			<td style="width:235px;">Recomended brand.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:307px;">Plexiglas boxes with removable lids</td>
			<td style="width:244px;">Custom built</td>
			<td style="width:145px;">N/A</td>
			<td style="width:235px;">150 x 163 x 205 mm (a 2 mm hole on the side).&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">3M Half Facepiece Reusable Respirator</td>
			<td style="width:244px;">3M</td>
			<td style="width:145px;">7503</td>
			<td style="width:235px;">Recomended brand.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">3M Advanced Particulate Filters (P100)&#160;</td>
			<td style="width:244px;">3M</td>
			<td style="width:145px;">2291</td>
			<td style="width:235px;">Recomended brand.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Sissors</td>
			<td style="width:244px;">VWR</td>
			<td style="width:145px;">233-1104</td>
			<td style="width:235px;">Preferred scissors may be used.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Forceps&#160;</td>
			<td style="width:244px;">VWR</td>
			<td style="width:145px;">232-1313</td>
			<td style="width:235px;">Preferred forceps may be used.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Intramedic PE50 polyethylene tube</td>
			<td style="width:244px;">BD</td>
			<td style="width:145px;">427411</td>
			<td style="width:235px;">Recomended brand.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Ethicon 2-0 Perma-hand silk tread&#160;</td>
			<td style="width:244px;">VWR</td>
			<td style="width:145px;">95056-992</td>
			<td style="width:235px;">Recomended brand.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">26 &#189;&#160; gage needle&#160;</td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:145px;"></td>
			<td style="width:235px;">Alternative suppliers exist.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">1 mL BD slip-tip syringe, non-sterile</td>
			<td style="width:244px;">BD</td>
			<td style="width:145px;"><a href="http://catalog.bd.com/bdCat/viewProduct.doCustomer?productNumber=301025">301025</a></td>
			<td style="width:235px;">Alternative suppliers exist.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:307px;">60 mL BD Luer-Lok syringe, non-sterile, polypropolene&#160;</td>
			<td style="width:244px;">BD</td>
			<td style="width:145px;">301035</td>
			<td style="width:235px;">Alternative suppliers exist.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Fluka Hematoxylin-Eosin</td>
			<td style="width:244px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:145px;">3972</td>
			<td style="width:235px;">Alternative suppliers exist.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">T&#252;rk&#39;s solution</td>
			<td style="width:244px;">Merck Millipore</td>
			<td style="width:145px;">109277</td>
			<td style="width:235px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Table top centrifuge</td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:145px;"></td>
			<td style="width:235px;">Alternative manufacturers exist.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Cytospin 4 cytocentrifuge</td>
			<td style="width:244px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:145px;">A78300003</td>
			<td style="width:235px;">Alternative centrifuge can be used.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">HEMA-3 stat pack</td>
			<td style="width:244px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:145px;">23-123-869</td>
			<td style="width:235px;">Alternative staining kits exists.</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:307px;">Formalin solution, neutral buffered, 10%</td>
			<td style="width:244px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:145px;">HT501128&#160;</td>
			<td style="width:235px;">Alternative suppliers exist.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a method for generating pulmonary neutrophilia using aerosolized lipopolysaccharide

إصابة الرئة الحادة (ALI) هو مرض حاد يتميز العدلات السنخية، مع خيارات العلاج محدودة، وارتفاع معدل الوفيات. نماذج تجريبية من ALI أساسية في تعزيز فهمنا لإمراض المرض. lipopolysaccharide في (LPS) المستمدة من البكتيريا إيجابية الجرام يدفع التهاب العدلات في الشعب الهوائية والرئة حمة من الفئران. تسليم الرئوي الفعال للمركبات مثل LPS، مع ذلك، من الصعب تحقيقه. في النهج وصفها هنا، ويتحقق تسليم الرئوي في الفئران عن طريق تحديا لرذاذ الزائفة الزنجارية LPS. كان رذاذ حل LPS من قبل البخاخات متصلة الهواء المضغوط. تعرض الفئران لاستمرار تدفق LPS الهباء الجوي في صندوق زجاجي لمدة 10 دقيقة، تليها 2 تكييف دقيقة بعد أن تم التوقف عن الهباء الجوي. التنبيب الرغامي والقصبات غسيل لاحق، تليها نضح الفورمالين تم إجراء المقبل، والذي يسمح لتوصيف ع معقمالتهاب ulmonary. رذاذ LPS يولد الالتهاب الرئوي تتميز العدلات السنخية، في الكشف عن غسل القصبات والتقييم النسيجي. يمكن تعيين هذه التقنية بتكلفة صغيرة مع قليل من الأجهزة، ويتطلب الحد الأدنى من التدريب والخبرة. ويمكن بالتالي فإن النظام التعرض أن يؤديها بشكل روتيني في أي مختبر، مع القدرة على تعزيز فهمنا لعلم الأمراض الرئة.

تحديا لرذاذ P. الزنجارية LPS عادة ما تعطي الاستجابة الالتهابية ملحوظ في التجويف الهوائي والفضاء السنخية، وتتميز غلبة العدلات في كل نقطة زمنية المبكرة والمتأخرة. رذاذ LPS يحرض العدلات الرئوية <p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"...

Watch this Scientific Journal Video about A Method for Generating Pulmonary Neutrophilia Using Aerosolized Lipopolysaccharide at JoVE.com

A Method for Generating Pulmonary Neutrophilia Using Aerosolized Lipopolysaccharide

نحن تصف طريقة لإحداث الالتهاب الرئوي العدلات التي كتبها تحديا للعديد السكاريد الشحمي رذاذ بالإرذاذ، لنموذج إصابة الرئة الحادة. بالإضافة إلى ذلك، كما وصفت التقنيات الجراحية الأساسية لعزل الرئة، التنبيب الرغامي والقصبات غسيل.

وهناك طريقة لتوليد الرئوي العدلات عن طريق رذاذ lipopolysaccharide في

Acute lung injury (ALI) is a severe disease characterized by alveolar neutrophilia, with limited treatment options and high mortality. Experimental models ...

a-method-for-generating-pulmonary-neutrophilia-using-aerosolized

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

11.6K Views.  Karolinska Institutet.  نحن تصف طريقة لإحداث الالتهاب الرئوي العدلات التي كتبها تحديا للعديد السكاريد الشحمي رذاذ بالإرذاذ، لنموذج إصابة الرئة الحادة. بالإضافة إلى ذلك، كما وصفت التقنيات الجراحية الأساسية لعزل الرئة، التنبيب الرغامي والقصبات غسيل. 

Video: A Method for Generating Pulmonary Neutrophilia Using Aerosolized Lipopolysaccharide

A Method for Labeling Vasculature in Embryonic Mice

The establishment of a functional blood vessel network is an essential part of organogenesis, and is required for optimal organ function. For example, in the thymus proper vasculature formation and patterning is essential for thymocyte entry into the organ and mature T-cell exit to the periphery. The spatial arrangement of blood vessels in the thymus is dependent upon signals from the local microenvironment, namely thymic epithelial cells (TEC). Several recent reports suggest that disruption of these signals results in thymus blood vessel defects 1,2. Previous studies have described techniques used to label the neonatal and adult thymus vasculature 1,2. We demonstrate here a technique for labeling blood vessels in the embryonic thymus. This method combines the use of FITC-dextran or Griffonia (Bandeiraea) Simplicifolia Lectin I (GSL 1 - isolectin B4) facial vein injections and CD31 antibody staining to identify thymus vascular structures and PDGFR-&beta; to label thymic perivascular mesenchyme 3-5. The option of using cryosections or vibratome sections is also provided. This protocol can be used to identify thymus vascular defects, which is critical for defining the roles of TEC-derived molecules in thymus blood vessel formation. As the method labels the entire vasculature, it can also be used to analyze the vascular networks in multiple organs and tissues throughout the embryo including skin and heart 6-10.

This article describes a method for labeling embryonic skin and thymus blood vessels.

A طريقة لوصفها الأوعية الدموية في الفئران الجنينية

The establishment of a functional blood vessel network is an essential part of organogenesis, and is required for optimal organ function. For example, in ...

Diagnosing Pulmonary Tuberculosis with the Xpert MTB/RIF Test

Tuberculosis (TB) due to Mycobacterium tuberculosis (MTB) remains a major public health issue: the infection affects up to one third of the world population1, and almost two million people are killed by TB each year.2 Universal access to high-quality, patient-centered treatment for all TB patients is emphasized by WHO's Stop TB Strategy.3 The rapid detection of MTB in respiratory specimens and drug therapy based on reliable drug resistance testing results are a prerequisite for the successful implementation of this strategy. However, in many areas of the world, TB diagnosis still relies on insensitive, poorly standardized sputum microscopy methods. Ineffective TB detection and the emergence and transmission of drug-resistant MTB strains increasingly jeopardize global TB control activities.2
Effective diagnosis of pulmonary TB requires the availability - on a global scale - of standardized, easy-to-use, and robust diagnostic tools that would allow the direct detection of both the MTB complex and resistance to key antibiotics, such as rifampicin (RIF). The latter result can serve as marker for multidrug-resistant MTB (MDR TB) and has been reported in &gt; 95% of the MDR-TB isolates.4, 5 The rapid availability of reliable test results is likely to directly translate into sound patient management decisions that, ultimately, will cure the individual patient and break the chain of TB transmission in the community.2
Cepheid's (Sunnyvale, CA, U.S.A.) Xpert MTB/RIF assay6, 7 meets the demands outlined above in a remarkable manner. It is a nucleic-acids amplification test for 1) the detection of MTB complex DNA in sputum or concentrated sputum sediments; and 2) the detection of RIF resistance-associated mutations of the rpoB gene.8 It is designed for use with Cepheid's GeneXpert Dx System that integrates and automates sample processing, nucleic acid amplification, and detection of the target sequences using real-time PCR and reverse transcriptase PCR. The system consists of an instrument, personal computer, barcode scanner, and preloaded software for running tests and viewing the results.9 It employs single-use disposable Xpert MTB/RIF cartridges that hold PCR reagents and host the PCR process. Because the cartridges are self-contained, cross-contamination between samples is eliminated.6 Current nucleic acid amplification methods used to detect MTB are complex, labor-intensive, and technically demanding. The Xpert MTB/RIF assay has the potential to bring standardized, sensitive and very specific diagnostic testing for both TB and drug resistance to universal-access point-of-care settings3, provided that they will be able to afford it. In order to facilitate access, the Foundation for Innovative New Diagnostics (FIND) has negotiated significant price reductions. Current FIND-negotiated prices, along with the list of countries eligible for the discounts, are available on the web.10

The Xpert MTB/RIF test integrates sample decontamination, hands-free operation, on-board sample processing, and ultra-sensitive hemi-nested PCR for the simultaneous detection of Mycobacterium tuberculosis and rifampicin resistance, either in expectorated sputum or concentrated sputum sediments, in approximately two hours. Testing is standardized and requires only moderate laboratory infrastructure and training.

تشخيص السل الرئوي مع اختبار MTB / RIF كسبيرت

Tuberculosis (TB) due to Mycobacterium tuberculosis (MTB) remains a major public health issue: the infection affects up to one third of the world ...

Two-photon Intravital Imaging of Leukocytes During the Immune Response in Lipopolysaccharide-treated Mouse Liver

Sepsis is a type of severe infection that can cause organ failure and tissue damage. Although the mortality and morbidity rates associated with sepsis are extremely high, no direct treatment or organ-related mechanism has been examined in detail in real time. The liver is the key organ that manages toxins and infections in the human body. Herein, we aimed to perform intravital imaging of mouse liver after induction of endotoxemia in order to track the motility of immune cells, such as neutrophils and liver capsular macrophages (LCMs). Accordingly, we designed a novel surgical method for exposure of the liver with minimally invasive surgery. Mice were intraperitoneally injected with lipopolysaccharide (LPS), a common endotoxin. Using our novel surgical approach for exposure and intravital imaging of the mouse liver, we found that neutrophil recruitment in LPS-treated LysM-green fluorescent protein (GFP) mouse liver was increased compared with that in phosphate-buffered saline-treated liver. After LPS treatment, the number of neutrophils increased significantly with time. Additionally, using CX3Cr1-GFP mice, we successfully visualized liver resident macrophages called LCMs. Therefore, to investigate the efficacy of new reagents to control immune mobility in vivo, determining the motility and morphology of neutrophils and LCMs in the liver may allow us to identify therapeutic effect in organ failure and tissue damage caused by leukocytes activation in sepsis.

We established a novel surgical protocol for two-photon imaging of live mice liver with minimal invasion. With this technique, we identified the detailed structure of the liver during lipopolysaccharide-induced endotoxemia. We anticipate that this method may be utilized to determine the effectiveness of various reagents treatment to hepatic leukocyte migration.

اثنين-فوتون تصوير إينترافيتال من الكريات البيضاء خلال الاستجابة المناعية في الكبد تعامل Lipopolysaccharide الماوس

Sepsis is a type of severe infection that can cause organ failure and tissue damage. Although the mortality and morbidity rates associated with sepsis are ...

Generating Recombinant Avian Herpesvirus Vectors with CRISPR/Cas9 Gene Editing

Herpesvirus of turkeys (HVT) is an ideal viral vector for the generation of recombinant vaccines against a number of avian diseases, such as avian influenza (AI), Newcastle disease (ND), and infectious bursal disease (IBD), using bacterial artificial chromosome (BAC) mutagenesis or conventional recombination methods. The clustered regularly interspaced palindromic repeats (CRISPR)/Cas9 system has been successfully used in many settings for gene editing, including the manipulation of several large DNA virus genomes. We have developed a rapid and efficient CRISPR/Cas9-mediated genome editing pipeline to generate recombinant HVT. To maximize the potential use of this method, we present here detailed information about the methodology of generating recombinant HVT expressing the VP2 protein of IBDV. The VP2 expression cassette is inserted into the HVT genome via an NHEJ (nonhomologous end-joining)-dependent repair pathway. A green fluorescence protein (GFP) expression cassette is first attached to the insert for easy visualization and then removed via the Cre-LoxP system. This approach offers an efficient way to introduce other viral antigens into the HVT genome for the rapid development of recombinant vaccines.

Herpesvirus of turkeys (HVT) is widely used as a vector platform for the generation of recombinant vaccines against a number of avian diseases. This article describes a simple and rapid approach for the generation of recombinant HVT-vectored vaccines using an integrated NHEJ-CRISPR/Cas9 and Cre-Lox system.

توليد نواقل هربس إنفلونزا الطيور المؤتلف مع كريسبر/Cas9 الجينات تحرير

Herpesvirus of turkeys (HVT) is an ideal viral vector for the generation of recombinant vaccines against a number of avian diseases, such as avian ...

Co-immunoprecipitation Assay for Studying Functional Interactions Between Receptors and Enzymes

Receptor-associated enzymes are the major mediators of cellular activation. These enzymes are regulated, at least in part, by physical interactions with cytoplasmic tails of the receptors. The interactions often occur through specific protein domains and result in activation of the enzymes. There are several methods to study interactions between proteins. While co-immunoprecipitation is commonly used to study domains that are required for protein-protein interactions, there are no assays that document the contribution of specific domains to activity of the recruited enzymes at the same time. Accordingly, the method described here combines co-immunoprecipitation and an on-bead enzymatic activity assay for simultaneous evaluation of interactions between proteins and associated enzymatic activation. The goal of this protocol is to identify the domains that are critical for physical interactions between a protein and enzyme and the domains that are obligatory for complete activation of the enzyme. The importance of this assay is demonstrated, as certain receptor protein domains contribute to the binding of the enzyme to the cytoplasmic tail of the receptor, while other domains are necessary to regulate the function of the same enzyme.

Here, we present a protocol for co-immunoprecipitation and an on-bead enzymatic activity assay to simultaneously study the contribution of specific protein domains of plasma membrane receptors to both enzyme recruitment and enzyme activity.

الإنزيم Co-إيمونوبريسيبيتيشن لدراسة التفاعلات الوظيفية بين المستقبلات والأنزيمات

Receptor-associated enzymes are the major mediators of cellular activation. These enzymes are regulated, at least in part, by physical interactions with ...

Novel Protocol for Generating Physiologic Immunogenic Dendritic Cells

Extracorporeal photochemotherapy (ECP) is a widely used cancer immunotherapy for cutaneous T cell lymphoma (CTCL), operative in over 350 university centers worldwide. While ECP&#8217;s clinical efficacy and exemplary safety profile have driven its widespread use, elucidation of the underlying mechanisms has remained a challenge, partly owing to lack of a laboratory ECP model. To overcome this obstacle and create a simple, user-friendly platform for ECP research, we developed a scaled-down version of the clinical ECP leukocyte-processing device, suitable for work with both mouse models, and small human blood samples. This device is termed the Transimmunization (TI) chamber, or plate. In a series of landmark experiments, the miniaturized device was used to produce a cellular vaccine that regularly initiated therapeutic anti-cancer immunity in several syngeneic mouse tumor models. By removing individual factors from the experimental system and ascertaining their contribution to the in vivo anti-tumor response, we then elucidated key mechanistic drivers of ECP immunizing potential. Collectively, our results revealed that anti-tumor effects of ECP are initiated by dendritic cells (DC), physiologically generated through blood monocyte interaction with platelets in the TI plate, and loaded with antigens from tumor cells whose apoptotic cell death is finely titrated by exposure to the photoactivatable DNA cross-linking agent 8-methoxypsoralen and UVA light (8-MOPA). When returned to the mouse, this cellular vaccine leads to specific and transferable anti-tumor T cell immunity. We verified that the TI chamber is also suitable for human blood processing, producing human DCs fully comparable in activation state and profile to those derived from the clinical ECP chamber. The protocols presented here are intended for ECP studies in mouse and man, controlled generation of apoptotic tumor cells with 8-MOPA, and rapid production of physiologic human and mouse monocyte-derived DCs for a variety of applications.

The transimmunization (TI) device or plate and related protocols have been developed to replicate the key features of extracorporeal photochemotherapy (ECP), in an experimental setting, allowing for production of physiologically activated, tunable dendritic cells (DCs) for cancer immunotherapy.

بروتوكول جديد لتوليد الخلايا العصبية المناعية الفسيولوجية

Extracorporeal photochemotherapy (ECP) is a widely used cancer immunotherapy for cutaneous T cell lymphoma (CTCL), operative in over 350 university ...

Visualization of Bacterial Resistance using Fluorescent Antibiotic Probes

Fluorescent antibiotics are multipurpose research tools that are readily used for the study of antimicrobial resistance, due to their significant advantage over other methods. To prepare these probes, azide derivatives of antibiotics are synthesized, then coupled with alkyne-fluorophores using azide-alkyne dipolar cycloaddition by click chemistry. Following purification, the antibiotic activity of the fluorescent antibiotic is tested by minimum inhibitory concentration assessment. In order to study bacterial accumulation, either spectrophotometry or flow cytometry may be used, allowing for much simpler analysis than methods relying on radioactive antibiotic derivatives. Furthermore, confocal microscopy can be used to examine localization within the bacteria, affording valuable information about mode of action and changes that occur in resistant species. The use of fluorescent antibiotic probes in the study of antimicrobial resistance is a powerful method with much potential for future expansion.

Fluorescently tagged antibiotics are powerful tools that can be used to study multiple aspects of antimicrobial resistance. This article describes the preparation of fluorescently tagged antibiotics and their application to studying antibiotic resistance in bacteria. Probes can be used to study mechanisms of bacterial resistance (e.g., efflux) by spectrophotometry, flow cytometry, and microscopy.

تصور المقاومة البكتيرية باستخدام تحقيقات المضادات الحيوية الفلورية

Fluorescent antibiotics are multipurpose research tools that are readily used for the study of antimicrobial resistance, due to their significant ...

Cigarette Smoke Exposure in Mice using a Whole-Body Inhalation System

Close to 14% of adults in the United States were reported to smoke cigarettes in 2018. The effects of cigarette smoke (CS) on lungs and cardiovascular diseases have been widely studied, however, the impact of CS in other tissues and organs such as blood and bone marrow remain incompletely defined. Finding the appropriate system to study the effects of CS in rodents can be prohibitively expensive and require the purchase of commercially available systems. Thus, we set out to build an affordable, reliable, and versatile system to study the pathologic effects of CS in mice. This whole-body inhalation exposure system (WBIS) set-up mimics the breathing and puffing of cigarettes by alternating exposure to CS and clean air. Here we show that this do-it-yourself (DIY) system induces airway inflammation and lung emphysema in mice after 4-months of cigarette smoke exposure. The effects of whole-body inhalation (WBI) of CS on hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) in the bone marrow using this apparatus are also shown.

This protocol demonstrates the study of the pathophysiologic effects of cigarette smoke (CS) with a whole-body inhalation (WBI) exposure system (WBIS) built in-house. This system can expose animals to CS under controlled repeatable conditions for research of CS-mediated effects on lung emphysema and hematopoiesis.

التعرض لدخان السجائر في الفئران باستخدام نظام استنشاق الجسم كله

Close to 14% of adults in the United States were reported to smoke cigarettes in 2018. The effects of cigarette smoke (CS) on lungs and cardiovascular ...

Generating Transgenics and Knockouts in Strongyloides Species by Microinjection

The genus Strongyloides consists of multiple species of skin-penetrating nematodes with different host ranges, including Strongyloides stercoralis and Strongyloides ratti. S.&#160;stercoralis is a human-parasitic, skin-penetrating nematode that infects approximately 610 million people, while the rat parasite S.&#160;ratti is closely related to S.&#160;stercoralis and is often used as a laboratory model for S.&#160;stercoralis. Both S.&#160;stercoralis and S.&#160;ratti are easily amenable to the generation of transgenics and knockouts through the exogenous nucleic acid delivery technique of intragonadal microinjection, and as such, have emerged as model systems for other parasitic helminths that are not yet amenable to this technique.
Parasitic Strongyloides adults inhabit the small intestine of their host and release progeny into the environment via the feces. Once in the environment, the larvae develop into free-living adults, which live in feces and produce progeny that must find and invade a new host. This environmental generation is unique to the Strongyloides species and similar enough in morphology to the model free-living nematode Caenorhabditis elegans that techniques developed for C. elegans can be adapted for use with these parasitic nematodes, including intragonadal microinjection. Using intragonadal microinjection, a wide variety of transgenes can be introduced into Strongyloides. CRISPR/Cas9 components can also be microinjected to create mutant Strongyloides larvae. Here, the technique of intragonadal microinjection into Strongyloides, including the preparation of free-living adults, the injection procedure, and the selection of transgenic progeny, is described. Images of transgenic Strongyloides larvae created using CRISPR/Cas9 mutagenesis are included. The aim of this paper is to enable other researchers to use microinjection to create transgenic and mutant Strongyloides.

Generating Transgenics and Knockouts in Strongyloides Species by Microinjection

The functional genomic toolkit for the parasitic nematodes Strongyloides stercoralis and Strongyloides ratti includes transgenesis, CRISPR/Cas9-mediated mutagenesis, and RNAi. This protocol will demonstrate how to use intragonadal microinjection to introduce transgenes and CRISPR components into S.&#160;stercoralis and S.&#160;ratti.

توليد الجينات والضربة القاضية في أنواع Strongyloides عن طريق الحقن المجهري

The genus Strongyloides consists of multiple species of skin-penetrating nematodes with different host ranges, including Strongyloides stercoralis and ...

Intravital Widefield Fluorescence Microscopy of Pulmonary Microcirculation in Experimental Acute Lung Injury Using a Vacuum-Stabilized Imaging System

Intravital imaging of leukocyte-endothelial interactions offers valuable insights into immune-mediated disease in live animals. The study of acute lung injury (ALI)/acute respiratory distress syndrome (ARDS) and other respiratory pathologies in vivo is difficult due to the limited accessibility and inherent motion artifacts of the lungs. Nonetheless, various approaches have been developed to overcome these challenges. This protocol describes a method for intravital fluorescence microscopy to study real-time leukocyte-endothelial interactions in the pulmonary microcirculation in an experimental model of ALI. An in vivo lung imaging system and 3-D printed intravital microscopy platform are used to secure the anesthetized mouse and stabilize the lung while minimizing confounding lung injury. Following preparation, widefield fluorescence microscopy is used to study leukocyte adhesion, leukocyte rolling, and capillary function. While the protocol presented here focuses on imaging in an acute model of inflammatory lung disease, it may also be adapted to study other pathological and physiological processes in the lung.

Intravital fluorescence microscopy can be utilized to study leukocyte-endothelial interactions and capillary perfusion in real-time. This protocol describes methods to image and quantify these parameters in the pulmonary microcirculation using a vacuum-stabilized lung imaging system.

الفحص المجهري الفلوري واسع المجال داخل الحيوية لدوران الأوعية الدقيقة الرئوية في إصابات الرئة الحادة التجريبية باستخدام نظام تصوير مستقر بالفراغ

Intravital imaging of leukocyte-endothelial interactions offers valuable insights into immune-mediated disease in live animals. The study of acute lung ...