وأجري هذا العمل باستخدام مرافق قسم الهندسة الطبية الحيوية في جامعة فلوريدا الدولية.

1. إعداد Electrospinning جامع <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع رقائق الألومنيوم في قطعة مستطيلة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> طي قطعة مستطيلة في شريط مستطيل، ونعلق عليه عمودي على لوحة معدنية مسطحة مع الشريط (الشكل 1). ملاحظة: حجم حصيرة الألياف يعتمد على طول وعرض قطاع غزة. وبالتالي، فإن أبعاد الشريط يمكن تعديلها حسب الحاجة. </li></ol> 2. إعداد البوليمر الحل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلط الجلسرين وحمض dodecanedioic (DDA) في نسبة 1:1 المولي في كوب على 120 درجة مئوية لمدة 100 ساعة للحصول على PGD البوليمر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حل بولي (أكسيد الإيثيلين) (PEO) والجيلاتين في 65٪ من الإيثانول مع نسبة وزن 1.5:3:95.5 في أنبوب 15 مل، وتشديد سقف وتسخين الخليط في الفرن على 60 درجة مئوية لمدة 1 ساعة مع التحريك حتى يصبح الحل متجانسة (حل بصل). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لelectrospinning، مزيج البوليمر PGD والحل القاعدية في 04:06 نسبة الوزن. ملاحظة: تركيز PGD لديه ثنائيةز تأثير على قطر الألياف. 30٪ -50٪ في المئة PGD هو مقبول لإنتاج ألياف أطول من 5 سم مع زيادة أقطار الألياف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 0.1٪ الريبوفلافين إلى حل البوليمر وتخلط جيدا. </li></ol> 3. Electrospinning <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغذية حل البوليمر إلى 5 مل حقنة القياسية مع 18 G قلل المقاوم للصدأ إبرة الصلب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج حقنة في ضخ حقنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إرفاق الرصاص على الارض من مصدر الطاقة العالية الجهد لوحة معدنية والرصاص موجبة الشحنة إلى الإبرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضبط المسافة بين الإبرة واحباط قطاع الألمنيوم إلى 15 سم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع مضخة الحقنة في زاوية من حوالي 15 درجة مع الأفقي لمنع تجميع الألياف في الجزء الأمامي من قطاع غزة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدوره على ضخ حقنة وضبط معدل تدفق المضخة إلى 0.6 مل / ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدوره على مصدر الطاقة عالية الجهد وضبط الجهد التشغيل إلى 14.6 كيلو فولت. </li></ol> 4.تجهيز الألياف <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد اكتمال جمع، فضح حصيرة الألياف للأشعة فوق البنفسجية لمدة 60 دقيقة لعبر ربط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل حصيرة الألياف من رقائق الألومنيوم الشريط إلى 100 ملم طبق بيتري، وتعريضها لضوء الأشعة فوق البنفسجية لمدة 20 دقيقة أخرى للتعقيم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في مجلس الوزراء للسلامة الأحيائية، وقطع حصيرة الألياف إلى قطع مستديرة من نفس الحجم مع شفرة جراحية ووضع قطع في 24 لوحة جيدا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لخلية العلاج قبل البذر، تزج عينات الألياف في 1 مل من الفوسفات مخزنة المالحة (PBS)، واحتضان عند 37 درجة مئوية خلال الليل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في اليوم التالي، نضح PBS بعناية، إضافة 1 مل من التمايز المتوسطة (DMEM/F12، N2، وFGF2) (انظر الوصفة في الجدول مواد) إلى كل بئر واحتضان عند 37 درجة مئوية لمدة 3 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح بعناية التمايز المتوسطة، إضافة 0.2 مل من matrigel إلى كل عينة الألياف واحتضان عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. ملاحظة: يمكن أيضا أن تستخدم لLaminin الألياف الطلاء. إضافة 0.2 مل من 20 ميكروغرام / مل lamininإلى الألياف ويحضن في درجة حرارة الغرفة لمدة 3 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة بعناية matrigel الزائدة من كل بئر. شطف مع 2 مل من التمايز المتوسطة مرة واحدة. ملاحظة: عينات الألياف مستعدون للثقافة الخلية. </li></ol> 5. البذر خلية على ألياف <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 1 مل من Accutase إلى الخلية صحن الثقافة زارة التربية والعلم واحتضان لمدة 10 دقيقة عند 37 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 10 دقيقة، يتم فصل الخلايا زارة التربية والعلم من الطبق الثقافة. إضافة 4 مل من التمايز المتوسطة إلى اللوحة. جمع الخلايا زارة التربية والعلم العائمة في أنبوب 15 مل وخلايا ماصة صعودا وهبوطا لكسر المستعمرات (حوالي 15X). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أجهزة الطرد المركزي في 400 x ج لمدة 5 دقائق واعادة تعليق الخلايا في 4 مل من التمايز المتوسطة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عد الخلايا باستخدام عدادة الكريات. نقل 200 ميكرولتر من تعليق الخلية في أنبوب 15 مل وتمييع 10X مع تمايز المتوسطة. نقل 15 ميكرولتر من تعليق خلية المخفف إلى غرفة على عدادة الكريات مع غطاء للانزلاق في المكان. عدالخلايا في ساحة المركز 1 مم والساحات الزاوية أربعة من عدادة الكريات تحت المجهر. ملاحظة: خلية لكل مل = متوسط ​​عدد س لكل متر مربع عامل التخفيف × 10 4 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع ما يقرب من 5 × 10 4 خلايا زارة التربية والعلم على كل بئر. إسقاط ببطء تعليق الخلية إلى منتصف عينات من الألياف، بدلا من انزلاق إلى جانب البئر، لمنع الحل من استنزاف قبالة حصيرة الألياف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 1 مل من التمايز المتوسطة إلى كل بئر، والحفاظ على لوحة في حاضنة عند 37 درجة مئوية و 5٪ CO 2 مرفق للسماح للخلايا والنمو والتمايز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح المتوسطة القديمة من كل بئر واستبدالها مع 1 مل من المتوسط ​​التمايز جديدة كل يوم. </li></ol> 6. بقاء الخلية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح المتوسطة القديمة من كل بئر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مزيج حجم ال 1/10 من ريسازورين مضان كاشف مع مستنبت وإضافة 1 مل إلى كل بئر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Incubيأكلون في 37 درجة مئوية و 5٪ CO 2 لمدة 4 ساعة، محمية من الضوء المباشر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 4 ساعات، ونقل 100 ميكرولتر من كاشف 3X من كل بئر إلى 96 لوحة جيدا، ثم العينات جاهزة للقياس على معمل مضان باستخدام إعدادات التصفية 560EX nm/590EM. </li></ol> 7. في الوقت الحقيقي PCR <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 14 يوما من الثقافة، إضافة تحلل العازلة للعينات وعزل الحمض النووي الريبي مجموع من الخلايا على عينات من الألياف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام 4 ميكرولتر من الحمض النووي الريبي مجموع لتجميع كدنا] في 20 ميكرولتر جداول رد فعل من قبل النسخ العكسي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحضير خليط PCR رد الفعل في كل أنبوب بصري: 10 ميكرولتر ماجستير ميكس (2X)، 0.2 ميكرولتر صبغ، 8 ميكرولتر-نوكلياز الحرة المياه، 1 ميكرولتر [كدنا]، و 1 ميكرولتر التمهيدي (يتم سرد الاشعال المستخدمة في هذه الدراسة في الجدول رقم 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد برنامج PCR: أ. 95 ° C 02:20 دقيقة، 1 دورة ب. 95 ° C 3 ثانية → 60 ° C 1 دقيقة، 40 دورة ج. 95 ° C 15 ثانية، 1 دورة د. 60 ° C 1دقيقة، 1 دورة الإلكترونية. 95 ° C 15 ثانية، 1 دورة. اختيار الأسلوب المقارن C T لتحديد مستويات التعبير الجيني النسبي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد الانتهاء PCR، وتحليل في الوقت الحقيقي PCR النتائج مع برنامج StepOne وتصدير النتائج إلى Excel. </li></ol>

<ol>
	<li>Migneco, F., Huang, Y. -. C., Birla, R. K., Hollister, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Poly+(glycerol-dodecanoate),+a+biodegradable+polyester+for+medical+devices+and+tissue+engineering+scaffolds.">Poly (glycerol-dodecanoate), a biodegradable polyester for medical devices and tissue engineering scaffolds.</a> Biomaterials. 30, 6479-6484 (2009).</li><li>Reneker, D. H., Yarin, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrospinning+jets+and+polymer+nanofibers.">Electrospinning jets and polymer nanofibers.</a> Polymer. 49, 2387-2425 (2008).</li><li>Wang, Y., Ameer, G. A., Sheppard, B. J., Langer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+tough+biodegradable+elastomer.">A tough biodegradable elastomer.</a> Nature biotechnology. 20, 602-606 (2002).</li><li>Panunzi, S., De Gaetano, A., Mingrone, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Approximate+linear+confidence+and+curvature+of+a+kinetic+model+of+dodecanedioic+acid+in+humans.">Approximate linear confidence and curvature of a kinetic model of dodecanedioic acid in humans.</a> American Journal of Physiology-Endocrinology And Metabolism. 289, (2005).</li><li>Park, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apparatus+for+preparing+electrospun+nanofibers:+designing+an+electrospinning+process+for+nanofiber+fabrication.">Apparatus for preparing electrospun nanofibers: designing an electrospinning process for nanofiber fabrication.</a> Polymer Internationa l. 56, 1361-1366 (2007).</li><li>Barnes, C. P., Sell, S. A., Boland, E. D., Simpson, D. G., Bowlin, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanofiber+technology:+designing+the+next+generation+of+tissue+engineering+scaffolds.">Nanofiber technology: designing the next generation of tissue engineering scaffolds.</a> Advanced drug delivery reviews. 59, 1413-1433 (2007).</li><li>Li, W. -. J., Mauck, R. L., Tuan, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrospun+nanofibrous+scaffolds:+production,+characterization,+and+applications+for+tissue+engineering+and+drug+delivery.">Electrospun nanofibrous scaffolds: production, characterization, and applications for tissue engineering and drug delivery.</a> Journal of Biomedical Nanotechnology. 1, 259-275 (2005).</li><li>Pham, Q. P., Sharma, U., Mikos, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrospinning+of+polymeric+nanofibers+for+tissue+engineering+applications:+a+review.">Electrospinning of polymeric nanofibers for tissue engineering applications: a review.</a> Tissue engineering. 12, 1197-1211 (2006).</li><li>Lim, S. H., Mao, H. -. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrospun+scaffolds+for+stem+cell+engineering.">Electrospun scaffolds for stem cell engineering.</a> Advanced drug delivery reviews. 61, 1084-1096 (2009).</li><li>Lowery, J. L., Datta, N., Rutledge, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+fiber+diameter,+pore+size+and+seeding+method+on+growth+of+human+dermal+fibroblasts+in+electrospun+poly+(epsilon-caprolactone)+fibrous+mats.">Effect of fiber diameter, pore size and seeding method on growth of human dermal fibroblasts in electrospun poly (epsilon-caprolactone) fibrous mats.</a> Biomaterials. 31, 491-504 (2010).</li><li>Tillman, B. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+in+vivo+stability+of+electrospun+polycaprolactone-collagen+scaffolds+in+vascular+reconstruction.">The in vivo stability of electrospun polycaprolactone-collagen scaffolds in vascular reconstruction.</a> Biomaterials. 30, 583-588 (2009).</li><li>Ju, Y. M., Choi, J. S., Atala, A., Yoo, J. J., Lee, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bilayered+scaffold+for+engineering+cellularized+blood+vessels.">Bilayered scaffold for engineering cellularized blood vessels.</a> Biomaterials. 31, 4313-4321 (2010).</li><li>McCullen, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+collagen+polymerization+of+layered+cell-seeded+electrospun+scaffolds+for+bone+tissue+engineering+applications.">In situ collagen polymerization of layered cell-seeded electrospun scaffolds for bone tissue engineering applications.</a> Tissue Engineering Part C: Methods. 16, 1095-1105 (2010).</li></ol>

أعلن عن أي تضارب في المصالح.

قيود من هواة جمع بسيطة أو تعقيدات الدورية جامعي التي تستخدم حاليا لelectrospinning زيادة تقييد الحصول على الطول المطلوب وحجم الألياف حصيرة لبعض التطبيقات. بالإضافة إلى ذلك، نقل الألياف من جامع الأرض إلى الطبق الثقافة أو غيرها من ركائز يشكل تحديا 5. في هذا التقرير، وكا?...

Electrospinning هي واحدة من طرق المعالجة الفعالة لإنتاج السقالات الألياف الدقيقة لحجم نانومتر. المبدأ الأساسي للelectrospinning ينطوي على مخروط تايلور من الحل الذي يقام في فتحة إبرة من خلال تطبيق الجهد العالي بين رأس الإبرة وجامع الارض. عندما التنافر الكهربائي في حل يتغلب على التوتر السطحي، يتم إخراج طائرة السائل مشحونة من طرف الإبرة، ينتقل عن طريق الهواء مع تبخر المذيبات، ويترسب في النهاية على جامع على الارض. يوفر ضخ حقنة تدفق مستمر من محلول الناشئة من مغزال ويمكن أن تكون ملفقة نسخ بالتالي متعددة من ألياف electrospun في غضون فترة قصيرة من الزمن. أثناء مغادرة مغزال للوصول إلى جامع، فإن طائرة اتهم الخضوع لتمتد والجلد وفقا لعدد من المعايير التي تشمل اللزوجة والتوتر السطحي من الحل البوليمرية، وelectrostatiج القوة في الحل، والتفاعل بين المجال الكهربائي الخارجي، الخ 2. في عملية electrospinning، يقدم أحد هواة جمع باعتبارها الركيزة موصل حيث يمكن أن تودع الألياف الدقيقة لنانومتر. في هذه الدراسة، تم تصميم نوع جديد من الألياف جامع للحصول على حصائر الألياف مع الحجم المطلوب (الطول × العرض). تقليديا، يتم استخدام رقائق الألومنيوم وجامع ولكن من الصعب نقل الألياف من سطح مستو لالركيزة أخرى. كانت صعوبة حصاد الألياف حصيرة سليمة من أحد هواة جمع التقليدية ويرجع ذلك أساسا إلى حقيقة أن الألياف electrospun إرفاق بقوة على سطح جامع. ولذلك، فإننا تعديل جامع من قبل للطي قطعة من رقائق الألومنيوم في شريط مستطيل وإرفاقها عمودي على لوحة معدنية مسطحة. وامتدت الألياف electrospun عبر المنطقة الواقعة بين غيض من الشريط وصفيحة معدنية، والتي يمكن نقلها بسهولة إلى substrat أخرىه. الفائدة في البوليمرات المرنة crosslinked حراريا ينمو بسرعة بسبب العمل الرائد لمجموعة روبرت لانغر، الذي قدم بولي (الجلسرين sebacate) (PGS)، والبوليستر والتي هي مماثلة لمطاط مبركن في عام 2002 3. مماثلة لPGS، وقد وضعنا بنجاح بولي (الجلسرين-dodecanoate) (PGD) من خلال التكثيف الحراري من الجلسرين وحمض dodecanedioic وأظهرت فريدة الذاكرة شكل ممتلكاتها 1. خلافا لصلابة المواد الاصطناعية بولي (الهيدروكسيل بوتيرات) أو بولي (L-lactide) (معاملات الرجوعية يونغ من 250 ميجا باسكال و 660 ميجا باسكال، على التوالي)، PGD يسلك الملكية المرنة مثل المطاط، مع معامل يونج (أ) من 1.08 ميجا باسكال عندما تكون درجة الحرارة فوق 37 درجة C، وهي المباراة على مقربة من الأعصاب الطرفية في الموقع (0.45 ميجا باسكال). بالإضافة إلى ذلك، PGD هو القابلة للتحلل وتدهور الوقت يمكن صقلها من خلال تغيير نسبة الجلسرين وحمض dodecanedioic. حمض Dodecanedioic هو دون الاثني عشر الكربونموقف مع مجموعتين الكربوكسيلية المحطة، HOOC (CH 2) 10 COOH. الأحماض ثنائي الكربوكسيل الزوجية مثل حمض سيباسيك وحمض dodecanedioic يمكن استقلابه إلى أسيتيل التميم وأدخل حمض الكربوكسيليك (TCA) / (حمض الستريك) دورة. المنتج التمثيل الغذائي للأحماض ثنائي الكربوكسيل، succinyl، لجنة الزراعة، هو السلائف gluconeogenetic والمتوسطة دورة TCA 4. وبالتالي، اقترحت بعض الدراسات أنه يمكن استخدامها بوصفها الركيزة الوقود البديلة للتغذية المعوية وبالحقن، وخاصة في الحالات المرضية. بالإضافة إلى ذلك، PGD يسلك الذاكرة شكل فريد لأن درجة حرارة التحول الزجاجي لها هو 31 درجة مئوية، وبالتالي فإنه يظهر الخواص الميكانيكية متميزة في درجة حرارة الغرفة وبدرجة حرارة الجسم. في خلاصة القول، PGD هو القابلة للتحلل، حيويا، واظهار خصائص المرونة فريدة من نوعها مع الخصائص الميكانيكية مماثلة لأنسجة العصب؛ وبالتالي، فإنه هو مادة مناسبة للتطبيقات هندسة الأنسجة العصبية. في هذا البروتوكول، وelectrospunملفقة ألياف طويلة تمتد منطقة ديعة كبيرة عن طريق جمع المصممة حديثا من PGD. يمكن السقالات الألياف دعم نمو الخلايا الجذعية المحفزة الماوس والتمايز.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="729">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:268px;">Glycerol</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">G7757</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:268px;">Dodecanedioic acid</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">D1009</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:268px;">Gelatin</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">D1890</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:268px;">Poly (ehtylene oxide) (PEO)</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">182028</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:268px;">Riboflavin</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">132350250</td>
			<td style="width:167px;">0.10%</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:268px;">Mouse embryonic stem cells</td>
			<td style="width:175px;">GlobalStem</td>
			<td style="width:119px;">GSC-5002</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:268px;">Matrigel</td>
			<td style="width:175px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:119px;">356234</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:268px;">DMEM/F12</td>
			<td style="width:175px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">SH30272.02</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:268px;">N2 supplement&#160;</td>
			<td style="width:175px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">17502048</td>
			<td style="width:167px;">1%</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:268px;">FGF2</td>
			<td style="width:175px;">Stemgent</td>
			<td style="width:119px;">03-0002</td>
			<td style="width:167px;">10ng/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:268px;">Accutase</td>
			<td style="width:175px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">A11105-01</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:268px;">Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td style="width:175px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">10010-031&#160;</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:268px;">Resazurin fluorescence dye&#160;</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">62758-13-8&#160;</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:268px;">SV Total RNA Isolation System</td>
			<td style="width:175px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">Z3100</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:268px;">GoScript Reverse Transcription System</td>
			<td style="width:175px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">A5000</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:268px;">GoTaq&#129; qPCR Master Mix</td>
			<td style="width:175px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">A6001</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:268px;">Syringe pump&#160;</td>
			<td style="width:175px;">Fisher scientific</td>
			<td style="width:119px;">14-831-200</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;width:268px;">High voltage power source&#160;</td>
			<td style="width:175px;">Spellman High Voltage Electronics Corporation</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">SL30</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:268px;">UV light</td>
			<td style="width:175px;">Philips</td>
			<td style="width:119px;">308643</td>
			<td style="width:167px;">15W/G15T8</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:268px;">Synergy HT Multi-Mode Microplate Reader</td>
			<td style="width:175px;">BioTek</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:268px;">Perkin Elmer GeneAmp PCR System 9600</td>
			<td style="width:175px;">Perkin Elmer</td>
			<td style="width:119px;">8488</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:268px;">StepOne Real-time PCR System</td>
			<td style="width:175px;">Applied Biosystems</td>
			<td style="width:119px;">4376357</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

electrospun fibrous scaffolds of poly(glycerol-dodecanedioate) for engineering neural tissues from mouse embryonic stem cells

لتطبيقات هندسة الأنسجة، وإعداد السقالات القابلة للتحلل حيويا وهي المهمة الأكثر مرغوب فيه ولكنها صعبة. بين مختلف أساليب التصنيع، electrospinning هو الأكثر جاذبية واحد نظرا لبساطته والتنوع. بالإضافة إلى ذلك، ألياف النانو electrospun تحاكي حجم المصفوفة خارج الخلية الطبيعية وضمان المزيد من الدعم لبقاء الخلية والنمو. وأظهرت هذه الدراسة جدوى تصنيع ألياف طويلة تمتد منطقة إيداع أكبر للبوليمر القابلة للتحلل حيويا والرواية المسماة بولي (الجلسرين-dodecanoate) (PGD) 1 باستخدام جامع المصممة حديثا لelectrospinning. PGD ​​يسلك خصائص المرونة فريدة من نوعها مع الخصائص الميكانيكية مماثلة لأنسجة العصب، وبالتالي فهي مناسبة لتطبيقات هندسة الأنسجة العصبية. وكان التوليف والتلفيق انشاء لصنع مواد ليفية سقالات بسيطة، تكرار للغاية، وغير مكلفة. في توافق مع الحياةالاختبار، ويمكن أن الخلايا المشتقة من الخلايا الجذعية الجنينية التمسك وتنمو على الألياف PGD electrospun. باختصار، قدمت هذا البروتوكول أسلوب تلفيق تنوعا لصنع الألياف electrospun PGD لدعم نمو الماوس الخلايا الجذعية الجنينية المستمدة الخلايا العصبية النسب.

يوضح ويبين المكونات الرئيسية للelectrospinning في الشكل 1. تم الحصول على حصيرة كبيرة من الألياف حجم عادة من خلال تعلق عموديا الألومنيوم احباط الشريط وصفيحة معدنية مسطحة الشكل 2 تصميم جامع وحصيرة الألياف electrospinning. عرض وطول يمكن تعديلها لمختلف التطبيقات. طول...

Watch this Scientific Journal Video about Electrospun Fibrous Scaffolds of Polyglycerol-dodecanedioate for Engineering Neural Tissues From Mouse Embryonic Stem Cells at JoVE.com

Electrospun Fibrous Scaffolds of Polyglycerol-dodecanedioate for Engineering Neural Tissues From Mouse Embryonic Stem Cells

وأفادت التقارير التوليف وتصنيع الألياف electrospun طويلة تمتد منطقة الإيداع عبر أكبر جامع المصممة حديثا من بوليمر القابلة للتحلل الرواية المسماة بولي (الجلسرين-dodecanoate) (PGD). كانت قادرة على دعم نمو الخلايا المشتقة من الخلايا الجذعية المحفزة الماوس الألياف.

Electrospun الليفية سقالات بولي (الجلسرين-dodecanedioate) للهندسة الأنسجة العصبية من الخلايا الجذعية الجنينية الماوس

For tissue engineering applications, the preparation of biodegradable and biocompatible scaffolds is the most desirable but challenging task. &#160;Among ...

electrospun-fibrous-scaffolds-polyglycerol-dodecanedioate-for

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Electrospun Fibrous Scaffolds of Poly(glycerol-dodecanedioate) for Engineering Neural Tissues From Mouse Embryonic Stem Cells

10.8K Views.  Florida International University.  وأفادت التقارير التوليف وتصنيع الألياف electrospun طويلة تمتد منطقة الإيداع عبر أكبر جامع المصممة حديثا من بوليمر القابلة للتحلل الرواية المسماة بولي (الجلسرين-dodecanoate) (PGD). كانت قادرة على دعم نمو الخلايا المشتقة من الخلايا الجذعية المحفزة الما?...

Video: Electrospun Fibrous Scaffolds of Polyglycerol-dodecanedioate for Engineering Neural Tissues From Mouse Embryonic Stem Cells

Elastomeric PGS Scaffolds in Arterial Tissue Engineering

Cardiovascular disease is one of the leading cause of mortality in the US and especially, coronary artery disease increases with an aging population and increasing obesity1. Currently, bypass surgery using autologous vessels, allografts, and synthetic grafts are known as a commonly used for arterial substitutes2. However, these grafts have limited applications when an inner diameter of arteries is less than 6 mm due to low availability, thrombotic complications, compliance mismatch, and late intimal hyperplasia3,4. To overcome these limitations, tissue engineering has been successfully applied as a promising alternative to develop small-diameter arterial constructs that are nonthrombogenic, robust, and compliant. Several previous studies have developed small-diameter arterial constructs with tri-lamellar structure, excellent mechanical properties and burst pressure comparable to native arteries5,6. While high tensile strength and burst pressure by increasing collagen production from a rigid material or cell sheet scaffold, these constructs still had low elastin production and compliance, which is a major problem to cause graft failure after implantation. Considering these issues, we hypothesized that an elastometric biomaterial combined with mechanical conditioning would provide elasticity and conduct mechanical signals more efficiently to vascular cells, which increase extracellular matrix production and support cellular orientation.
The objective of this report is to introduce a fabrication technique of porous tubular scaffolds and a dynamic mechanical conditioning for applying them to arterial tissue engineering. We used a biodegradable elastomer, poly (glycerol sebacate) (PGS)7 for fabricating porous tubular scaffolds from the salt fusion method. Adult primary baboon smooth muscle cells (SMCs) were seeded on the lumen of scaffolds, which cultured in our designed pulsatile flow bioreactor for 3 weeks. PGS scaffolds had consistent thickness and randomly distributed macro- and micro-pores. Mechanical conditioning from pulsatile flow bioreactor supported SMC orientation and enhanced ECM production in scaffolds. These results suggest that elastomeric scaffolds and mechanical conditioning of bioreactor culture may be a promising method for arterial tissue engineering.

Elastomeric PGS scaffolds with vascular smooth muscle cells cultured in a pulsatile flow bioreactor may lead to promising small-diameter arterial constructs with native ECM production in a relatively short culture period.

PGS السقالات المرنة في هندسة الأنسجة الشرياني

Cardiovascular disease is one of the leading cause of mortality in the US and especially, coronary artery disease increases with an aging population and ...

Preparation of 3D Fibrin Scaffolds for Stem Cell Culture Applications

Stem cells are found in naturally occurring 3D microenvironments in vivo, which are often referred to as the stem cell niche 1. Culturing stem cells inside of 3D biomaterial scaffolds provides a way to accurately mimic these microenvironments, providing an advantage over traditional 2D culture methods using polystyrene as well as a method for engineering replacement tissues 2. While 2D tissue culture polystrene has been used for the majority of cell culture experiments, 3D biomaterial scaffolds can more closely replicate the microenvironments found in vivo by enabling more accurate establishment of cell polarity in the environment and possessing biochemical and mechanical properties similar to soft tissue.3 A variety of naturally derived and synthetic biomaterial scaffolds have been investigated as 3D environments for supporting stem cell growth. While synthetic scaffolds can be synthesized to have a greater range of mechanical and chemical properties and often have greater reproducibility, natural biomaterials are often composed of proteins and polysaccharides found in the extracelluar matrix and as a result contain binding sites for cell adhesion and readily support cell culture. Fibrin scaffolds, produced by polymerizing the protein fibrinogen obtained from plasma, have been widely investigated for a variety of tissue engineering applications both in vitro and in vivo 4. Such scaffolds can be modified using a variety of methods to incorporate controlled release systems for delivering therapeutic factors 5. Previous work has shown that such scaffolds can be used to successfully culture embryonic stem cells and this scaffold-based culture system can be used to screen the effects of various growth factors on the differentiation of the stem cells seeded inside 6,7.
 This protocol details the process of polymerizing fibrin scaffolds from fibrinogen solutions using the enzymatic activity of thrombin. The process takes 2 days to complete, including an overnight dialysis step for the fibrinogen solution to remove citrates that inhibit polymerization. These detailed methods rely on fibrinogen concentrations determined to be optimal for embryonic and induced pluripotent stem cell culture. Other groups have further investigated fibrin scaffolds for a wide range of cell types and applications - demonstrating the versatility of this approach 8-12.

This work details the preparation of 3D fibrin scaffolds for culturing and differentiating plutipotent stem cells. Such scaffolds can be used to screen the effects of various biological compounds on stem cell behavior as well as modified to contain drug delivery systems.

إعداد الفايبرين 3D السقالات لتطبيقات الجذعية زراعة الخلايا

Stem cells are found in naturally occurring 3D microenvironments in vivo, which are often referred to as the stem cell niche 1. Culturing stem cells ...

Postproduction Processing of Electrospun Fibres for Tissue Engineering

Electrospinning is a commonly used and versatile method to produce scaffolds (often biodegradable) for 3D tissue engineering.1, 2, 3 Many tissues in vivo undergo biaxial distension to varying extents such as skin, bladder, pelvic floor and even the hard palate as children grow. In producing scaffolds for these purposes there is a need to develop scaffolds of appropriate biomechanical properties (whether achieved without or with cells) and which are sterile for clinical use. The focus of this paper is not how to establish basic electrospinning parameters (as there is extensive literature on electrospinning) but on how to modify spun scaffolds post production to make them fit for tissue engineering purposes - here thickness, mechanical properties and sterilisation (required for clinical use) are considered and we also describe how cells can be cultured on scaffolds and subjected to biaxial strain to condition them for specific applications.
Electrospinning tends to produce thin sheets; as the electrospinning collector becomes coated with insulating fibres it becomes a poor conductor such that fibres no longer deposit on it. Hence we describe approaches to produce thicker structures by heat or vapour annealing increasing the strength of scaffolds but not necessarily the elasticity. Sequential spinning of scaffolds of different polymers to achieve complex scaffolds is also described. Sterilisation methodologies can adversely affect strength and elasticity of scaffolds. We compare three methods for their effects on the biomechanical properties on electrospun scaffolds of poly lactic-co-glycolic acid (PLGA).
Imaging of cells on scaffolds and assessment of production of extracellular matrix (ECM) proteins by cells on scaffolds is described. Culturing cells on scaffolds in vitro can improve scaffold strength and elasticity but the tissue engineering literature shows that cells often fail to produce appropriate ECM when cultured under static conditions. There are few commercial systems available that allow one to culture cells on scaffolds under dynamic conditioning regimes - one example is the Bose Electroforce 3100 which can be used to exert a conditioning programme on cells in scaffolds held using mechanical grips within a media filled chamber.4 An approach to a budget cell culture bioreactor for controlled distortion in 2 dimensions is described. We show that cells can be induced to produce elastin under these conditions. Finally assessment of the biomechanical properties of processed scaffolds cultured with or without cells is described.

Electrospun scaffolds can be processed post production for tissue engineering applications. Here we describe methods for spinning complex scaffolds (by consecutive spinning), for making thicker scaffolds (by multi-layering using heat or vapour annealing), for achieving sterility (aseptic production or sterilisation post production) and for achieving appropriate biomechanical properties.

المعالجة بعد الإنتاج من الألياف Electrospun للهندسة الأنسجة

Electrospinning is a commonly used and versatile method to produce  scaffolds (often biodegradable) for 3D tissue engineering.1, 2, 3 Many tissues in vivo ...

Engineering Skeletal Muscle Tissues from Murine Myoblast Progenitor Cells and Application of Electrical Stimulation

Engineered muscle tissues can be used for several different purposes, which include the production of tissues for use as a disease model in vitro, e.g. to study pressure ulcers, for regenerative medicine and as a meat alternative 1. The first reported 3D muscle constructs have been made many years ago and pioneers in the field are Vandenburgh and colleagues 2,3. Advances made in muscle tissue engineering are not only the result from the vast gain in knowledge of biochemical factors, stem cells and progenitor cells, but are in particular based on insights gained by researchers that physical factors play essential roles in the control of cell behavior and tissue development. State-of-the-art engineered muscle constructs currently consist of cell-populated hydrogel constructs. In our lab these generally consist of murine myoblast progenitor cells, isolated from murine hind limb muscles or a murine myoblast cell line C2C12, mixed with a mixture of collagen/Matrigel and plated between two anchoring points, mimicking the muscle ligaments. Other cells may be considered as well, e.g. alternative cell lines such as L6 rat myoblasts 4, neonatal muscle derived progenitor cells 5, cells derived from adult muscle tissues from other species such as human 6 or even induced pluripotent stem cells (iPS cells) 7. Cell contractility causes alignment of the cells along the long axis of the construct 8,9 and differentiation of the muscle progenitor cells after approximately one week of culture. Moreover, the application of electrical stimulation can enhance the process of differentiation to some extent 8. Because of its limited size (8 x 2 x 0.5 mm) the complete tissue can be analyzed using confocal microscopy to monitor e.g. viability, differentiation and cell alignment. Depending on the specific application the requirements for the engineered muscle tissue will vary; e.g. use for regenerative medicine requires the up scaling of tissue size and vascularization, while to serve as a meat alternative translation to other species is necessary.

Engineered muscle tissue has great potential in regenerative medicine, as disease model and also as an alternative source for meat. Here we describe the engineering of a muscle construct, in this case from mouse myoblast progenitor cells, and the stimulation by electrical pulses.

مناديل الهندسة العضلات الهيكلية من الفئران الخلايا الاصلية Myoblast وتطبيق تحفيز الكهربائية

Engineered muscle tissues can be used for several different purposes, which include the production of tissues for use as a disease model in vitro, e.g. to ...

Development, Expansion, and In vivo Monitoring of Human NK Cells from Human Embryonic Stem Cells (hESCs) and Induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs)

We present a method for deriving natural killer (NK) cells from undifferentiated hESCs and iPSCs using a feeder-free approach. This method gives rise to high levels of NK cells after 4 weeks culture and can undergo further 2-log expansion with artificial antigen presenting cells. hESC- and iPSC-derived NK cells developed in this system have a mature phenotype and function. The production of large numbers of genetically modifiable NK cells is applicable for both basic mechanistic as well as anti-tumor studies. Expression of firefly luciferase in hESC-derived NK cells allows a non-invasive approach to follow NK cell engraftment, distribution, and function. We also describe a dual-imaging scheme that allows separate monitoring of two different cell populations to more distinctly characterize their interactions in vivo. This method of derivation, expansion, and dual in vivo imaging provides a reliable approach for producing NK cells and their evaluation which is necessary to improve current NK cell adoptive therapies.

Development, Expansion, and In vivo Monitoring of Human NK Cells from Human Embryonic Stem Cells hESCs and Induced Pluripotent Stem Cells iPSCs

This protocol describes the development, expansion, and in vivo imaging of NK cells derived from hESCs and iPSCs.

التنمية، والتوسع، و<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; رصد خلايا NK الإنسان من الخلايا الجذعية الجنينية البشرية (hESCs) وافرة القوة والتي يسببها الخلايا الجذعية (iPSCs)

We present a method for deriving natural killer (NK) cells from undifferentiated hESCs and iPSCs using a feeder-free approach. This method gives rise to ...

Electrospinning Growth Factor Releasing Microspheres into Fibrous Scaffolds

This procedure describes a method to fabricate a multifaceted substrate to direct nerve cell growth. This system incorporates mechanical, topographical, adhesive and chemical signals. Mechanical properties are controlled by the type of material used to fabricate the electrospun fibers. In this protocol we use 30% methacrylated Hyaluronic Acid (HA), which has a tensile modulus of ~500 Pa, to produce a soft fibrous scaffold. Electrospinning on to a rotating mandrel produces aligned fibers to create a topographical cue. Adhesion is achieved by coating the scaffold with fibronectin. The primary challenge addressed herein is providing a chemical signal throughout the depth of the scaffold for extended periods. This procedure describes fabricating&#160;poly(lactic-co-glycolic acid) (PLGA) microspheres that contain Nerve Growth Factor (NGF) and directly impregnating the scaffold with these microspheres during the electrospinning process. Due to the harsh production environment, including high sheer forces and electrical charges, protein viability is measured after production. The system provides protein release for over 60 days and has been shown to promote primary nerve cell growth.

This protocol combines electrospinning and microspheres to develop tissue engineered scaffolds to direct neurons. Nerve growth factor was encapsulated within PLGA microspheres and electrospun into Hyaluronic Acid (HA) fibrous scaffolds. The protein bioactivity was tested by seeding the scaffolds with primary chick Dorsal Root Ganglia and culturing for 4-6 days.

عامل نمو Electrospinning الافراج الجزئي في الليفية السقالات

This procedure describes a method to fabricate a multifaceted substrate to direct nerve cell growth.  This system incorporates mechanical, topographical, ...

Optimizing Attachment of Human Mesenchymal Stem Cells on Poly(&#949;-caprolactone) Electrospun Yarns

Research into biomaterials and tissue engineering often includes cell-based in vitro investigations, which require initial knowledge of the starting cell number. While researchers commonly reference their seeding density this does not necessarily indicate the actual number of cells that have adhered to the material in question. This is particularly the case for materials, or scaffolds, that do not cover the base of standard cell culture well plates. This study investigates the initial attachment of human mesenchymal stem cells seeded at a known number onto electrospun poly(&#949;-caprolactone) yarn after 4 hr in culture. Electrospun yarns were held within several different set-ups, including bioreactor vessels rotating at 9 rpm, cell culture inserts positioned in low binding well plates and polytetrafluoroethylene (PTFE) troughs placed within petri dishes. The latter two were subjected to either static conditions or positioned on a shaker plate (30 rpm). After 4 hr incubation at 37&#160;oC, 5% CO2, the location of seeded cells was determined by cell DNA assay. Scaffolds were removed from their containers and placed in lysis buffer. The media fraction was similarly removed and centrifuged &#8211; the supernatant discarded and pellet broken up with lysis buffer. Lysis buffer was added to each receptacle, or well, and scraped to free any cells that may be present. The cell DNA assay determined the percentage of cells present within the scaffold, media and well fractions. Cell attachment was low for all experimental set-ups, with greatest attachment (30%) for yarns held within cell culture inserts and subjected to shaking motion. This study raises awareness to the actual number of cells attaching to scaffolds irrespective of the stated cell seeding density.

Optimizing Attachment of Human Mesenchymal Stem Cells on Poly(&amp;#949;-caprolactone) Electrospun Yarns

This article describes a range of set-ups for seeding human mesenchymal stem cells onto materials, in this case electrospun yarns, that do not cover the base of standard culture well plates in order to maximize and quantify the number of cells that initially attach compared to the known seeding density.

تحسين مرفق من الوسيطة الإنسان الخلايا الجذعية على بولي (ε-caprolactone) خيوط Electrospun

Research into biomaterials and tissue engineering often includes cell-based in vitro investigations, which require initial knowledge of the starting cell ...

Electrospun Nanofiber Scaffolds with Gradations in Fiber Organization

The goal of this protocol is to report a simple method for generating nanofiber scaffolds with gradations in fiber organization and test their possible applications in controlling cell morphology/orientation. Nanofiber organization is controlled with a new fabrication apparatus that enables the gradual decrease of fiber organization in a scaffold. Changing the alignment of fibers is achieved through decreasing deposition time of random electrospun fibers on a uniaxially aligned fiber mat. By covering the collector with a moving barrier/mask, along the same axis as fiber deposition, the organizational structure is easily controlled. For tissue engineering purposes, adipose-derived stem cells can be seeded to these scaffolds. Stem cells undergo morphological changes as a result of their position on the varied organizational structure, and can potentially differentiate into different cell types depending on their locations. Additionally, the graded organization of fibers enhances the biomimicry of nanofiber scaffolds so they more closely resemble the natural orientations of collagen nanofibers at tendon-to-bone insertion site compared to traditional scaffolds. Through nanoencapsulation, the gradated fibers also afford the possibility to construct chemical gradients in fiber scaffolds, and thereby further strengthen their potential applications in fast screening of cell-materials interaction and interfacial tissue regeneration. This technique enables the production of continuous gradient scaffolds, but it also can potentially produce fibers in discrete steps by controlling the movement of the moving barrier/mask in a discrete fashion.

Here, we present a protocol to fabricate electrospun nanofiber scaffolds with gradated organization of fibers and explore their applications in regulating cell morphology/orientation. Gradients with regard to physical and chemical properties of the nanofiber scaffolds offer a wide variety of applications in the biomedical field.

Electrospun ألياف نانوية السقالات مع التدريجات ​​في منظمة الألياف

The goal of this protocol is to report a simple method for generating nanofiber scaffolds with gradations in fiber organization and test their possible ...

Generation of ESC-derived Mouse Airway Epithelial Cells Using Decellularized Lung Scaffolds

Lung lineage differentiation requires integration of complex environmental cues that include growth factor signaling, cell-cell interactions and cell-matrix interactions. Due to this complexity, recapitulation of lung development in vitro to promote differentiation of stem cells to lung epithelial cells has been challenging. In this protocol, decellularized lung scaffolds are used to mimic the 3-dimensional environment of the lung and generate stem cell-derived airway epithelial cells. Mouse embryonic stem cell are first differentiated to the endoderm lineage using an embryoid body (EB) culture method with activin A. Endoderm cells are then seeded onto decellularized scaffolds and cultured at air-liquid interface for up to 21 days. This technique promotes differentiation of seeded cells to functional airway epithelial cells (ciliated cells, club cells, and basal cells) without additional growth factor supplementation. This culture setup is defined, serum-free, inexpensive, and reproducible. Although there is limited contamination from non-lung endoderm lineages in culture, this protocol only generates airway epithelial populations and does not give rise to alveolar epithelial cells. Airway epithelia generated with this protocol can be used to study cell-matrix interactions during lung organogenesis and for disease modeling or drug-discovery platforms of airway-related pathologies such as cystic fibrosis.

This protocol efficiently directs mouse embryonic stem cell-derived definitive endoderm to mature airway epithelial cells. This differentiation technique uses 3-dimensional decellularized lung scaffolds to direct lung lineage specification, in a defined, serum-free culture setting.

جيل من خلايا الفأر مجرى الهواء طلائي المشتقة ESC عن طريق Decellularized الرئة السقالات

Lung lineage differentiation requires integration of complex environmental cues that include growth factor signaling, cell-cell interactions and ...

Two Methods for Decellularization of Plant Tissues for Tissue Engineering Applications

The autologous, synthetic, and animal-derived grafts currently used as scaffolds for tissue replacement have limitations due to low availability, poor biocompatibility, and cost. Plant tissues have favorable characteristics that make them uniquely suited for use as scaffolds, such as high surface area, excellent water transport and retention, interconnected porosity, preexisting vascular networks, and a wide range of mechanical properties. Two successful methods of plant decellularization for tissue engineering applications are described here. The first method is based on detergent baths to remove cellular matter, which is similar to previously established methods used to clear mammalian tissues. The second is a detergent-free method adapted from a protocol that isolates leaf vasculature and involves the use of a heated bleach and salt bath to clear the leaves and stems. Both methods yield scaffolds with comparable mechanical properties and low cellular metabolic impact, thus allowing the user to select the protocol which better suits their intended application.

Here we present, and contrast two protocols used to decellularize plant tissues: a detergent-based approach and a detergent-free approach. Both methods leave behind the extracellular matrix of the plant tissues used, which can then be utilized as scaffolds for tissue engineering applications.

طريقتين ديسيلولاريزيشن أنسجة النباتية لتطبيقات هندسة الأنسجة

The autologous, synthetic, and animal-derived grafts currently used as scaffolds for tissue replacement have limitations due to low availability, poor ...