The authors would like to acknowledge the Netherlands Organization for Scientific Research (NWO, grant 17.106.329)

وتمت الموافقة على التجارب على الحيوانات من قبل لجنة الرفق بالحيوان من المركز الطبي لجامعة لايدن (LUMC). 1. إعداد الخلايا، أدوات والفئران <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وقبل يوم من العملية، ويحلق في NOD / SCID جاما (مجموعة موردي المواد النووية) الفئران من الحلمة الرابعة إلى خط الوسط ووزن الفئران للتحقق من أن جميع الفئران لها أوزان مقاربا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الأوتوكلاف مقص، واثنين من ملاقط واثنين من ملقط البعوض على التوالي (الشكل 1A). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في يوم العملية، وغسل غدية الثدي الإنسان (MDA-MB-231) الخلايا التي سوف يتم حقنه مرة واحدة مع الفوسفات مخزنة المالحة (PBS)، ودرجة الحموضة 7.4 ويعرض للتريبسين الخلايا. إخماد التربسين وذلك بإضافة 10 مل تحتوي على المصل DMEM وسائل الاعلام على أعلى من الخلايا. أجهزة الطرد المركزي الخلايا في 1،200 دورة في الدقيقة لمدة 7 دقائق على RT لإزالة المصل عن طريق إعادة التعليق الخلايا إما في برنامج تلفزيوني أو في وسائل الإعلام دون المصل. أجهزة الطرد المركزي لهم مرة أخرى لإزالة آثار مصل تماما. resuspend الخلايا في برنامج تلفزيوني أووسائل الاعلام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عدد الخلايا مع عدادة الكريات وحساب كمية من الخلايا. استخدام 500000 خلية / الماوس في عدم أكثر من 150 ميكرولتر. اختياري لبرنامج تلفزيوني أو وسائل الإعلام، resuspend الخلايا في matrigel. ملاحظة: تحديد كمية الخلايا اعتمادا على نوع من الخلايا المستخدمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الخلايا في أنابيب microcentrifuge معقمة والاحتفاظ بها على الجليد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملء واحدة 50 مل مخروطي أنبوب الطرد المركزي مع 35 مل من PBS الرقم الهيدروجيني 7.4 وآخر 50ML المخروطية أنبوب الطرد المركزي مع 70٪ من الإيثانول. نقع قطعة قطن في كل أنبوب. </li></ol> 2. حقن مثلي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء الجراحة في غطاء العقيمة للحفاظ على جو معقم. تخدير الماوس عن طريق الحقن تحت الجلد Xylazin / الكيتامين مزيج بجرعة 10MG / كغ، و 100 ملغم / كغم من وزن الجسم على التوالي. إصلاح الماوس على وسادة التدفئة. تأكيد نجاح التخدير بسبب عدم وجود رد فعل حتى أخمص القدمين قرصة. ملاحظة: إذا كان أحد ليست مألوفة جدا مع العمليات الجراحية وجراحة قد يستغرق وقتا أطول. رتبالتخدير جرعة وفقا لذلك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق مرهم للعين على العيون من الفئران، لمنع العينين من الجفاف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنظيف المنطقة حلق باستخدام قطعة من القطن مغموسة إلى إيثانول أعدت في الخطوة 1.6. بالتناوب الدعك باستخدام بتدين والكحول ثلاث مرات بطريقة دائرية الدورية بعيدا عن موقع شق المخطط يجب أن يتم تنفيذ. بدلا من ذلك، استخدم حامل الأيون كمطهر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء شق صغير بين الحلمة الرابعة وخط الوسط مع مقص وجعل جيب عن طريق إدخال مسحة القطن مبللة PBS الرقم الهيدروجيني 7.4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام الملقط لفضح لوحة الدهون الثديية. مراقبة لوحة الدهون التي كتبها لونه أبيض. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضغط لوحة الدهون مع منتاش آخرين من قاعدتها. من خلال ذلك، كشف تماما لوحة الدهون (الشكل 1B) لإجراء الحقن بسهولة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تجانس الخليط خلية pipetting صعودا وهبوطا. نضح بلطف 50 ميكرولتر من تعليق خلية في حقنة الأنسولين ويحقنلوحة الدهون الثديية من خلال عقد الإبرة أفقيا. تأكيد حقن ناجحة عن طريق التحقق من تورم لوحة الدهون. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الافراج عن لوحة الدهون بلطف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خياطة شق باستخدام برنامج تشغيل الإبرة. جعل ثلاث رميات من خلال تحويل خياطة حول السائق الإبرة في اتجاه عقارب الساعة، عكس عقارب الساعة واتجاه عقارب الساعة. وينبغي أن تستخدم وهما عقدة في خياطة الجروح. ملاحظة: تأكد من أن عقدة ضيقة خلاف الفئران يمكن أن تفتح الغرز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد الجراحة، وحقن مسكن، مثل temgesic في ،05-،1 ملغم / كغم من وزن الجسم، تحت الجلد من أجل تخفيف الألم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لا تترك الحيوانات غير المراقب حتى الحصول على وعيه والحفاظ على رقود القصية. وضع كل الحيوانات في أقفاص مختلفة حتى يتم استردادها بالكامل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للحفاظ على العقم، واستخدام أقفاص تعقيمها والمياه. تغيير أقفاص كل ثلاثة أيام للحفاظ على أجواء نظيفة. </li></ol> 3. حصاد أجهزة لتحليل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فييوم الحصاد، وبعد 8 أسابيع من زرع الخلايا، وملء 15 مل أنابيب الطرد المركزي المخروطية مع 3 مل من محلول بوان لكل الماوس. وبالإضافة إلى ذلك، استخدام اثنين من 15 مل أنابيب مليئة 5 مل من محلول الفورمالين في الماوس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الحيوانات عن طريق حقن Xylazin / الكيتامين، بجرعة 10 ملغ / كغ 100 ملغ / كغ من وزن الجسم تحت الجلد. الانتظار حتى يفقد الحيوان قرصة أخمص قدميه الانسحاب لا ارادي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إصلاح الحيوان مع الإبر على قاعدة. جعل طويلة، الرأسي شق خط الوسط مع مقص. جعل اثنين من الشقوق الأفقية الحق دون الساق الأمامية وفوق الساق الخلفية. كشف الورم عن طريق تعلق الجلد إلى القاعدة. قياس حجم الورم باستخدام الفرجار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فصل الورم من الجلد باستخدام المقص. التقط تجميد جزء من الورم في النيتروجين السائل لعزل الحمض النووي الريبي. وضع الجزء الآخر، في أنبوب الطرد المركزي المخروطية مليئة الفورمالين لأداء المناعية التالية تضمين البارافين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بلطف اخراج الرئتين. ضعغادر الرئة إلى حل بوان. الحفاظ على الرئة في حل لمدة 3 أيام. مراقبة بؤر المنتشر سطحيا بشكل واضح للعين المجردة. اختياريا، ضع الرئة اليمنى في الفورمالين للتحقق من نقيلة مجهرية باستخدام haematoxylin ويوزين (H &amp; E) تلطيخ. ملاحظة: على الرغم من ورم خبيث في الرئة لوحظ في كثير من الأحيان في سرطان الثدي، واحد قد ترغب أيضا في جمع العظام والكبد والدماغ والطحال لتحليل ورم خبيث. الخلايا في منطقة النقيلي هي أكثر كثافة ومختلفة شكليا، وبالتالي يمكن تمييزها بسهولة من أنسجة الرئة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وبعد يوم الحصاد، ونضح الحل الفورمالين من 15 مل أنابيب واستبدال مع 70٪ من الإيثانول. تضمين الأنسجة في البارافين وإجراء الدراسات المناعية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتحليل الدم، وفتح تجويف الصدر مع مقص. سحب الدم 450 ميكرولتر من خلال ثقب في القلب. ضع عينة من الدم في أنبوب microcentrifuge تحتوي على 50 ميكرولتر من 3.2٪ سيترات الصوديوم. بعد جمع الدم، وتدور عليه في 2،000 x ج لمدة 10 ميلن. تخزين عينات البلازما في -20 درجة مئوية حتى استخدامها مرة أخرى. ملاحظة: هناك عدة تقنيات جمع الدم الأخرى التي تستخدم عادة في الممارسة 20 والتقنية التي تحتاج لاستخدامها يعتمد على الإعداد التجريبية واختيار العلماء. إذا لم يكن مطلوبا عينة من الدم، والموت ببطء الحيوان وفقا لبروتوكول الحيوان أو وفقا للمبادئ التوجيهية المؤسسة. </li></ol>

<ol>
	<li>Aaronson, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+factors+and+cancer.">Growth factors and cancer.</a> Science. 254 (5035), 1146-1153 (1991).</li><li>Bao, L., Matsumura, Y., Baban, D., Sun, Y., Tarin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+inoculation+site+and+Matrigel+on+growth+and+metastasis+of+human+breast+cancer+cells.">Effects of inoculation site and Matrigel on growth and metastasis of human breast cancer cells.</a> Br. J. Cancer. 70 (2), 228-232 (1994).</li><li>Brouxhon, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoclonal+antibody+against+the+ectodomain+of+E-cadherin+(DECMA-1)+suppresses+breast+carcinogenesis:+involvement+of+the+HER/PI3K/Akt/mTOR+and+IAP+pathways.">Monoclonal antibody against the ectodomain of E-cadherin (DECMA-1) suppresses breast carcinogenesis: involvement of the HER/PI3K/Akt/mTOR and IAP pathways.</a> Clin. Cancer Res. 19 (12), 3234-3246 (2013).</li><li>Dobie, K. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variegated+transgene+expression+in+mouse+mammary+gland+is+determined+by+the+transgene+integration+locus.">Variegated transgene expression in mouse mammary gland is determined by the transgene integration locus.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 93 (13), 6659-6664 (1996).</li><li>Ewens, A., Mihich, E., Ehrke, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distant+metastasis+from+subcutaneously+grown+E0771+medullary+breast+adenocarcinoma.">Distant metastasis from subcutaneously grown E0771 medullary breast adenocarcinoma.</a> Anticancer Res. 25 (6B), 3905-3915 (2005).</li><li>Fidler, I. J., Naito, S., Pathak, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+implantation+is+essential+for+the+selection,+growth+and+metastasis+of+human+renal+cell+cancer+in+nude+mice+[corrected.">Orthotopic implantation is essential for the selection, growth and metastasis of human renal cell cancer in nude mice [corrected.</a> Cancer Metastasis Rev. 9 (2), 149-165 (1990).</li><li>Fridman, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+tumor+growth+of+both+primary+and+established+human+and+murine+tumor+cells+in+athymic+mice+after+coinjection+with+Matrigel.">Enhanced tumor growth of both primary and established human and murine tumor cells in athymic mice after coinjection with Matrigel.</a> J. Natl. Cancer Inst. 83 (11), 769-774 (1991).</li><li>Fynan, T. M., Reiss, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resistance+to+inhibition+of+cell+growth+by+transforming+growth+factor-beta+and+its+role+in+oncogenesis.">Resistance to inhibition of cell growth by transforming growth factor-beta and its role in oncogenesis.</a> Crit Rev. Oncog. 4 (5), 493-540 (1993).</li><li>Huang, H. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trypsin-induced+proteome+alteration+during+cell+subculture+in+mammalian+cells.">Trypsin-induced proteome alteration during cell subculture in mammalian cells.</a> J. Biomed. Sci. 17, 36 (2010).</li><li>Iorns, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+mouse+model+for+the+study+of+human+breast+cancer+metastasis.">A new mouse model for the study of human breast cancer metastasis.</a> PLoS. One. 7 (10), e47995 (2012).</li><li>Jessani, N., Niessen, S., Mueller, B. M., Cravatt, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breast+cancer+cell+lines+grown+in+vivo:+what+goes+in+isn't+always+the+same+as+what+comes+out.">Breast cancer cell lines grown in vivo: what goes in isn't always the same as what comes out.</a> Cell Cycle. 4 (2), 253-255 (2005).</li><li>Kalluri, R., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+basics+of+epithelial-mesenchymal+transition.">The basics of epithelial-mesenchymal transition.</a> J. Clin. Invest. 119 (6), 1420-1428 (2009).</li><li>Kocaturk, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternatively+spliced+tissue+factor+promotes+breast+cancer+growth+in+a+beta1+integrin-dependent+manner.">Alternatively spliced tissue factor promotes breast cancer growth in a beta1 integrin-dependent manner.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 110, 11517-11522 (2013).</li><li>Lowe, S. W., Lin, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptosis+in+cancer.">Apoptosis in cancer.</a> Carcinogenesis. 21 (3), 485-495 (2000).</li><li>Meek, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+p53+response+to+DNA+damage.">The p53 response to DNA damage.</a> DNA Repair (Amst). 3 (8-9), 1049-1056 (2004).</li><li>Meek, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+suppression+by+p53:+a+role+for+the+DNA+damage+response).">Tumor suppression by p53: a role for the DNA damage response).</a> Nat. Rev. Cancer. 9 (10), 714-723 (2009).</li><li>Miller, F. R., Medina, D., Heppner, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preferential+growth+of+mammary+tumors+in+intact+mammary+fatpads.">Preferential growth of mammary tumors in intact mammary fatpads.</a> Cancer Res. 41 (10), 3863-3867 (1981).</li><li>Mueller, B. M., Ruf, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Requirement+for+binding+of+catalytically+active+factor+VIIa+in+tissue+factor-dependent+experimental+metastasis.">Requirement for binding of catalytically active factor VIIa in tissue factor-dependent experimental metastasis.</a> J. Clin. Invest. 101 (7), 1372-1378 (1998).</li><li>Paoli, P., Giannoni, E., Chiarugi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anoikis+molecular+pathways+and+its+role+in+cancer+progression.">Anoikis molecular pathways and its role in cancer progression.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1833 (12), 3481-3498 (2013).</li><li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals.">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> J. Pharmacol. Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).</li><li>Shay, J. W., Zou, Y., Hiyama, E., Qright, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Telomerase+and+cancer.">Telomerase and cancer.</a> Hum. Mol. Genet.. 10 (7), 677-685 (2001).</li><li>Sporn, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+war+on+cancer.">The war on cancer.</a> Lancet. 347 (9012), 1377-1381 (1996).</li><li>Tao, K., Fang, M., Alroy, J., Sahagian, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imagable+4T1+model+for+the+study+of+late+stage+breast+cancer.">Imagable 4T1 model for the study of late stage breast cancer.</a> BMC. Cancer. 8, 228 (2008).</li><li>Versteeg, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protease-activated+receptor+(PAR)+2,+but+not+PAR1,+signaling+promotes+the+development+of+mammary+adenocarcinoma+in+polyoma+middle+T+mice.">Protease-activated receptor (PAR) 2, but not PAR1, signaling promotes the development of mammary adenocarcinoma in polyoma middle T mice.</a> Cancer Res. 68 (17), 7219-7227 (2008).</li><li>Versteeg, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+tissue+factor+signaling+suppresses+tumor+growth.">Inhibition of tissue factor signaling suppresses tumor growth.</a> Blood. 111 (1), 190-199 (2008).</li><li>Wagner, K. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+breast+cancer:+quo+vadis,+animal+modeling?.">Models of breast cancer: quo vadis, animal modeling?.</a> Breast Cancer Res. 6 (1), 31-38 (2004).</li><li>Weigelt, B., Peterse, J. L., van't Veer, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breast+cancer+metastasis:+markers+and+models.">Breast cancer metastasis: markers and models.</a> Nat. Rev. Cancer. 5 (8), 591-602 (2005).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests.

حقن مثلي من خلايا سرطان الثدي هو نموذج قوي لدراسة جميع جوانب نمو السرطان. زرع هذه الخلايا في لوحة الدهون الثديية من الفئران يجب أن يتم تنفيذ بعناية من أجل منع التباين في نمو الورم. الأهم من ذلك، حقن نفس الكمية من الخلايا لكل فأر أمر بالغ الأهمية. للقيام بذلك، ينبغي للم?...

السرطان مرض معقد جدا التي كانت تخضع لدراسات لأكثر من قرون. سرطان الثدي هو نوع السرطان الأكثر شيوعا. يحدث في الغالب في الإناث ولكن قد يحدث أيضا بشكل متقطع في الذكور 27. وينجم هذا المرض أساسا عن فقدان آلية السيطرة انقسام الخلايا الحكم والذي بدوره يؤدي إلى نمو لا حصر له من الخلايا في الجسم. يمكن أن يكون سبب هذه الأعطال من قبل عدة آليات: أولا، الخلايا السليمة تحتاج إشارات نمو من الخلايا المحيطة بها من أجل تتكاثر الخلايا السرطانية في حين تجعل عوامل النمو الخاصة بها وتزيد من التعبير عن مستقبلات عوامل النمو وبالتالي الحصول على أعلى معدل التكاثري 1؛ الثانية، الخلايا السرطانية هي أقل عرضة للإشارات مكافحة التكاثري 8؛ ثالثا، لتحقيق التوازن في عدد الخلايا في مطلوب أيضا وفاة خلية من خلايا الجسم. ومع ذلك، الخلايا السرطانية الهروب من موت الخلايا المبرمج، وصفته موت الخلايا المبرمج 14؛ الرابع، وخلايا تلتزم مصفوفات خارج الخليةمن أجل البقاء على قيد الحياة ولكن الخلايا السرطانية يمكن أن تنمو من دون الحاجة إلى التعلق وتظهر مقاومة anoikis 19. الخامس وتفعيل التيلوميراز تلتف تقصير التيلومير ويمنع الشيخوخة تنسخي 21؛ أخيرا وليس آخرا، تخطي مراقبة الجودة DNA التالية النتائج الانقسام في المحتوى الجيني تغير 15،16. من أجل تحديد الجينات المسرطنة أو المكثفات الورم التي تلعب دورا في هذا الانتشار المحررة من القيود التنظيمية، والتجارب نمو الورم في الفئران هي الحاسمة. نمو الورم الرئيسي عموما ليست السبب الرئيسي للوفاة. هجرة الخلايا السرطانية من الموقع الأساسي إلى موقع ثانوي، يطلق ورم خبيث، هو السبب الرئيسي للوفاة في معظم مرضى السرطان 22. ورم خبيث ينطوي غزو الخلايا السرطانية، دخول الوعاء، والسفر من خلال الدورة الدموية، وتجنب المناعة الهجوم، التسرب والنمو في الموقع الثانوي. الظهارية للانتقال الوسيطة (EMT) هو عملية أساسية فيورم خبيث وينطوي على التبديل في ملامح التعبير الجيني العائد الخلايا مع ارتفاع الحركة والغازية، والتي هي بمستلزمات للخلية نقيلي 12. ولما كانت عملية السرطانية هي حصيلة مجموعة من الإجراءات المختلفة، بما في ذلك التفاعلات المتبادلة بين الخلايا السرطانية والخلايا اللحمية والخلايا المؤيدة والمضادة للالتهابات، وهو نهج في المختبر بالسرطان في كثير من الأحيان لا توفر رؤية كاملة في عملية السرطانية. وبالمثل، والعلاجات المضادة للسرطان تؤثر على الأوعية الدموية السرطانية يمكن في كثير من الأحيان لا يتم دراستها في المختبر، وبالتالي فإن استخدام الجسم الحي في النهج أمر لا مفر منه. لدراسة تطور سرطان الثدي، وقد وضعت الطرق التجريبية المختلفة. النموذج الأكثر استخداما هو الحقن تحت الجلد من خلايا سرطان الثدي في الفئران 5. في هذا الإعداد التجريبية، يجوز للمحقق تقديم مجموعة واسعة من التعديلات على خط خلية من خيار في المختبر (أيupregulation، downregulation من البروتينات) وحقن الخلايا تحت الجلد. على الرغم من أن هذه الطريقة هي واضحة وعملية حقن بسيطة دون الحاجة إلى إجراء عمليات جراحية على الفئران، الموقع الذي يتم حقن الورم لا يمثل البيئة الورم الثديية المحلية وغياب هذه البيئة قد يؤدي إلى الإصابة بسرطان الثدي الذي يختلف عن تلك التي لوحظت في علم الأمراض البشرية. ثانيا، تستخدم فئران معدلة وراثيا في كثير من الأحيان كأداة في الجسم الحي لدراسة تطور سرطان الثدي. في هذا النموذج، هو الدافع وراء الجين الورمي (أي PyMT، نوي) التعبير من قبل المروج محدد الأنسجة الثديية مما أدى إلى تشكيل عفوية ورم الثدي الصورة. هذا الإعداد التجريبية مفيد لدراسة جوانب العلاج من هذا المرض عن طريق حقن المخدرات أو الأجسام المضادة أثناء التحقق من حجم الورم في الوقت المناسب 3. ومع ذلك، تربية هذه الفئران مع سلالات الفئران الأخرى ناقصة أو تحور في الجينات في المصالح ويمكن أيضا إعطاء الإضافيةights في دور البروتينات المختلفة في نمو الورم الثدي 24. الجانب السلبي من هذا النموذج هو أنه عرضة للتفاوت في حجم الورم والعدد. وعلاوة على ذلك، فإن مستوى التعبير التحوير يعتمد على موقع التكامل في الجينوم، ويمكن أن تتغير من سلالة الماوس واحد إلى 4 آخر. في هذا النموذج، والتعبير عن التحوير يمكن أن يتحقق من قبل جميع الخلايا الظهارية مع الأصل بينما في الأمراض التي تصيب البشر، فقط جزء من السكان من الخلايا التعبير عن الجين الورمي أو downregulate مستويات الكابتة للورم 26. لدراسة ورم خبيث، ويمكن أيضا أن حقن خلايا سرطان الثدي عن طريق الوريد (نموذج يسمى ورم خبيث تجريبي) 25. ومع ذلك، فإن هذا النهج يلخص فقط عملية المنتشر جزئيا. انها تلتف شرط للخلايا السرطانية لغزو وintravasate، ويبدأ من النقطة التي الخلايا السرطانية هي بسهولة الموجودة في التداول. في عملنا، ونحن استخدام حقن مثليأيون نموذج لدراسة تورط الجينات في المصالح في تطور سرطان الثدي 13. نحن بإفراط عن البروتين في خلايا سرطان الثدي البشرية وضخها إلى لوحة الدهون الثديية من NOD / غاما SCID (مجموعة موردي المواد النووية) الفئران. هذه الطريقة هو مفيد من نواح عديدة: فهو يسمح التغيرات الجينية السريعة جدا ومتنوعة في خط الخلية حقن، فإنه يغطي كامل عملية تطور سرطان الثدي من نمو الورم الرئيسي لورم خبيث في المواقع ذات الصلة مرضي، وأنه يوفر أيضا نموذج تجريبي جيد لدراسة تأثير العلاجات العلاجية في مراحل مبكرة أو متأخرة من المرض. وبالإضافة إلى ذلك، وذلك باستخدام هذا النموذج يمكن لأحد أن التحقيق في دور انسجة مقابل السرطان البروتينات المشتقة من خلية في تطور المرض باستخدام الفئران المعدلة وراثيا أو الخلايا. وعلى الرغم من الحقن تحت الجلد هي أسهل لأداء، ونماذج مثلي تؤدي إلى نشوء الخلايا السرطانية أكثر السكان مكون للأورام وأكثر النقيلي. وهكذا، والنتائج التي تم الحصول عليها عن طريق الحقن تحت الجلدالصورة قد تكون إما كاذبة أو سلبي إيجابية كاذبة 6،17 تشجيع استخدام نماذج مثلي لدراسة نمو الورم.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1093">
	<tbody>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:185px;">Name of material/equipment</td>
			<td style="width:172px;">Company</td>
			<td style="width:95px;">Catalog number</td>
			<td style="width:641px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Bouin&#39;s solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT10132</td>
			<td>Used for investigating the metastasis on lungs</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Formalin solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT501128</td>
			<td>Used to fix the tissues</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Matrigel, growth factor reduced</td>
			<td>Corning</td>
			<td>356230</td>
			<td>Cells can be resuspended in matrigel for injection</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Mosquito forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>13008-12</td>
			<td>Used for stiching</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Angled forceps</td>
			<td>Electron microscopy sciences</td>
			<td>72991-4c</td>
			<td>These make the exposure of mammary fat pad easier</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Scissors</td>
			<td>B Braun Medicals</td>
			<td>BC056R</td>
			<td>Used to cut open the mice</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Straight forceps</td>
			<td>B Braun Medicals</td>
			<td>BD025R</td>
			<td>This is used to open up the skin to expose mammary fat pad</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">NOD scid gamma mice</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>005557</td>
			<td>Experimental animal used for experiment</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">MDA-MB-231</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>92020424</td>
			<td>Experimental cells used for injections</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Oculentum simplex</td>
			<td>Teva Pharmachemie</td>
			<td></td>
			<td>Opthalmic ointment used to prevent drying out of eyes</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Betadine</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>19-898-859</td>
			<td>Ionophore, used to disinfect the surgical area</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Xylazin/Ketamine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>X1251, K2753</td>
			<td>Use injected anesthesia as 10mg/kg and 100mg/kg body weight respectively</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Temgesic</td>
			<td>Schering-Plough</td>
			<td></td>
			<td>Use the painkiller as 0,05-0,1mg/kg body weight</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">DMEM</td>
			<td>Life sciences</td>
			<td>11995</td>
			<td>For trypsin neutralization,use media with serum(FBS:media 1:10 volume); for injection, use media with no serum</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Buffered sodium citrate</td>
			<td>Aniara</td>
			<td>A12-8480-10</td>
			<td>Use the volume ratio as citrate:blood; 1:9</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

orthotopic injection of breast cancer cells into the mammary fat pad of mice to study tumor growth.

<html> يمكن دراسة نمو سرطان الثدي في الفئران باستخدام مجموعة كبيرة من النماذج. التلاعب الجيني للخلايا سرطان الثدي يمكن أن توفر نظرة ثاقبة وظائف البروتينات المشاركة في التقدم أنكجنيك أو مساعدة لاكتشاف المكثفات الورم جديدة. وبالإضافة إلى ذلك، حقن الخلايا السرطانية في الفئران مع الأنماط الجينية المختلفة قد توفير فهم أفضل لأهمية المقصورة اللحمية. قد يكون العديد من النماذج مفيدة للتحقيق في جوانب معينة من تطور المرض ولكن لا ألخص عملية السرطانية بأكملها. في المقابل، خلايا سرطان الثدي engraftment إلى لوحة الدهون الثديية من الفئران أفضل يلخص موقع للمرض وجود مقصورة انسجة سليمة وبالتالي يحاكي أفضل مرض سرطاني البشري. في هذه المقالة، نحن تصف كيفية زرع خلايا سرطان الثدي في الفئران orthotopically وشرح كيفية جمع الأنسجة لتحليل: 14px؛ خط الطول: 28px؛ &quot;&gt; ورم الوسط والانبثاث إلى أعضاء بعيدة عن طريق هذا النموذج، العديد من الجوانب (النمو، والأوعية الدموية، والانبثاث) من السرطان يمكن تحقيق ذلك ببساطة عن طريق توفير البيئة المناسبة لخلايا الورم في النمو.

ويستند التطبيق الناجح ل&quot;نموذج سرطان الثدي مثلي&quot; على حقن السليم من الخلايا في لوحة الدهون الثديية. أخطاء التجريبية مثل التلقيح غير دقيق من الخلايا أو تسرب قد يؤدي إلى اختلافات في حجم الورم أو حتى عدم وجود الورم الذي يؤدي إلى تشكيل هيكل أبحث مشابهة لمنصة الدهون ال?...

Watch this Scientific Journal Video about Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mammary Fat Pad of Mice to Study Tumor Growth. at JoVE.com

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mammary Fat Pad of Mice to Study Tumor Growth.

السرطان مرض معقد يتأثر الأنسجة المحيطة للورم، وكذلك المؤيد المحلية والمضادة للالتهابات وسطاء. لذلك، ونماذج حقن المتعامدة التغاير، بدلا من نماذج تحت الجلد قد تكون مفيدة لدراسة تطور سرطان بطريقة يحاكي أفضل علم الأمراض البشرية.

حقن مثلي من خلايا سرطان الثدي في الثديية الدهون وسادة من الفئران لدراسة نمو الأورام.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the ...

orthotopic-injection-breast-cancer-cells-into-mammary-fat-pad-mice-to

Research

JoVE Journal

Medicine

78.3K Views.  Leiden University Medical Center.  السرطان مرض معقد يتأثر الأنسجة المحيطة للورم، وكذلك المؤيد المحلية والمضادة للالتهابات وسطاء. لذلك، ونماذج حقن المتعامدة التغاير، بدلا من نماذج تحت الجلد قد تكون مفيدة لدراسة تطور سرطان بطريقة يحاكي أفضل علم الأمراض البشرية. 

Video: Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mammary Fat Pad of Mice to Study Tumor Growth.

Performing and Processing FNA of Anterior Fat Pad for Amyloid

Historically, heart, liver, and kidney biopsies were performed to demonstrate amyloid deposits in amyloidosis. Since the clinical presentation of this disease is so variable and non-specific, the associated risks of these biopsies are too great for the diagnostic yield. Other sites that have a lower biopsy risk, such as skin or gingival, are also relatively invasive and expensive. In addition, these biopsies may not always have sufficient amyloid deposits to establish a diagnosis. Fat pad aspiration has demonstrated good clinical correlation with low cost and minimal morbidity. However, there are no standardized protocols for performing this procedure or processing the aspirated specimen, which leads to variable and nonreproducible results. The most frequently utilized modality for detecting amyloid in tissue is an apple-green birefringence on Congo red stained sections using a polarizing microscope. This technique requires cell block preparation of aspirated material. Unfortunately, patients presenting in early stage of amyloidosis have minimal amounts of amyloid which greatly reduces the sensitivity of Congo red stained cell block sections of fat pad aspirates. Therefore, ultrastructural evaluation of fat pad aspirates by electron microscopy should be utilized, given its increased sensitivity for amyloid detection. This article demonstrates a simple and reproducible procedure for performing anterior fat pad aspiration for the detection of amyloid utilizing both Congo red staining of cell block sections and electron microscopy for ultrastructural identification.

Fat pad aspiration is a preferred, minimally invasive, and low cost approach as compared to other methods to detect amyloid for diagnosis of systemic amyloidosis. This video article demonstrates a procedural outline for performing fat pad aspiration with appropriate processing of the specimen for the optimal diagnostic outcome.

الأداء ومعالجة FNA من الدهون الأمامية لوحة اميلويد

Historically, heart, liver, and kidney biopsies were performed to demonstrate amyloid deposits in amyloidosis.  Since the clinical presentation of this ...

An In Vitro System to Study Tumor Dormancy and the Switch to Metastatic Growth

Recurrence of breast cancer often follows a long latent period in which there are no signs of cancer, and metastases may not become clinically apparent until many years after removal of the primary tumor and adjuvant therapy. A likely explanation of this phenomenon is that tumor cells have seeded metastatic sites, are resistant to conventional therapies, and remain dormant for long periods of time 1-4.
The existence of dormant cancer cells at secondary sites has been described previously as quiescent solitary cells that neither proliferate nor undergo apoptosis 5-7. Moreover, these solitary cells has been shown to disseminate from the primary tumor at an early stage of disease progression 8-10 and reside growth-arrested in the patients' bone marrow, blood and lymph nodes 1,4,11. Therefore, understanding mechanisms that regulate dormancy or the switch to a proliferative state is critical for discovering novel targets and interventions to prevent disease recurrence. However, unraveling the mechanisms regulating the switch from tumor dormancy to metastatic growth has been hampered by the lack of available model systems.
in vivo and ex vivo model systems to study metastatic progression of tumor cells have been described previously 1,12-14. However these model systems have not provided in real time and in a high throughput manner mechanistic insights into what triggers the emergence of solitary dormant tumor cells to proliferate as metastatic disease. We have recently developed a 3D in vitro system to model the in vivo growth characteristics of cells that exhibit either dormant (D2.OR, MCF7, K7M2-AS.46) or proliferative (D2A1, MDA-MB-231, K7M2) metastatic behavior in vivo . We demonstrated that tumor cells that exhibit dormancy in vivo at a metastatic site remain quiescent when cultured in a 3-dimension (3D) basement membrane extract (BME), whereas cells highly metastatic in vivo readily proliferate in 3D culture after variable, but relatively short periods of quiescence. Importantly by utilizing the 3D in vitro model system we demonstrated for the first time that the ECM composition plays an important role in regulating whether dormant tumor cells will switch to a proliferative state and have confirmed this in in vivo studies15-17. Hence, the model system described in this report provides an in vitro method to model tumor dormancy and study the transition to proliferative growth induced by the microenvironment.

An In Vitro System to Study Tumor Dormancy and the Switch to Metastatic Growth

A modified 3-D in vitro system is presented in which growth characteristics of several tumor cell lines in reconstituted basement membrane correlate with the dormant or proliferative behavior of the tumor cells at a metastatic secondary site in vivo.

و في المختبر النظام الدراسي لاستئصال ورم من الخمول وتبديل للنمو النقيلي

Recurrence of breast cancer often follows a long latent period in which there are no signs of cancer, and metastases may not become clinically apparent ...

An Orthotopic Bladder Tumor Model and the Evaluation of Intravesical saRNA Treatment

We present a novel method for treating bladder cancer with intravesically delivered small activating RNA (saRNA) in an orthotopic xenograft mouse bladder tumor model. The mouse model is established by urethral catheterization under inhaled general anesthetic. Chemical burn is then introduced to the bladder mucosa using intravesical silver nitrate solution to disrupt the bladder glycosaminoglycan layer and allows cells to attach. Following several washes with sterile water, human bladder cancer KU-7-luc2-GFP cells are instilled through the catheter into the bladder to dwell for 2 hours. Subsequent growth of bladder tumors is confirmed and monitored by in vivo bladder ultrasound and bioluminescent imaging. The tumors are then treated intravesically with saRNA formulated in lipid nanoparticles (LNPs). Tumor growth is monitored with ultrasound and bioluminescence. All steps of this procedure are demonstrated in the accompanying video.

Establishing an orthotopic bladder tumor model to evaluate antitumor effects of intravesically delivered saRNA and monitoring tumor growth by ultrasound and bioluminescent imaging.

ورم في المثانة Orthotopic النموذجي وتقييم المعالجة سارنا داخل المثانة

We present a novel method for treating bladder cancer with intravesically delivered small activating RNA (saRNA) in an orthotopic xenograft mouse bladder ...

Human Neuroendocrine Tumor Cell Lines as a Three-Dimensional Model for the Study of Human Neuroendocrine Tumor Therapy

Neuroendocrine tumors (NETs) are rare tumors, with an incidence of two per 100,&#x200A;000 individuals per year, and they account for 0.5% of all human malignancies.1 Other than surgery for the minority of patients who present with localized disease, there is little or no survival benefit of systemic therapy. Therefore, there is a great need to better understand the biology of NETs, and in particular define new therapeutic targets for patients with nonresectable or metastatic neuroendocrine tumors. 3D cell culture is becoming a popular method for drug screening due to its relevance in modeling the in vivo tumor tissue organization and microenvironment.2,3 The 3D multicellular spheroids could provide valuable information in a more timely and less expensive manner than directly proceeding from 2D cell culture experiments to animal (murine) models.
To facilitate the discovery of new therapeutics for NET patients, we have developed an in vitro 3D multicellular spheroids model using the human NET cell lines. The NET cells are plated in a non-adhesive agarose-coated 24-well plate and incubated under physiological conditions (5% CO2, 37 &deg;C) with a very slow agitation for 16-24 hr after plating. The cells form multicellular spheroids starting on the 3rd or 4th day. The spheroids become more spherical by the 6th day, at which point the drug treatments are initiated. The efficacy of the drug treatments on the NET spheroids is monitored based on the morphology, shape and size of the spheroids with a phase-contrast light microscope. The size of the spheroids is estimated automatically using a custom-developed MATLAB program based on an active contour algorithm. Further, we demonstrate a simple method to process the HistoGel embedding on these 3D spheroids, allowing the use of standard histological and immunohistochemical techniques. 
This is the first report on generating 3D spheroids using NET cell lines to examine the effect of therapeutic drugs. We have also performed histology on these 3D spheroids, and displayed an example of a single drug's effect on growth and proliferation of the NET spheroids. Our results support that the NET spheroids are valuable for further studies of NET biology and drug development.

We present a simple agarose overlay platform to grow 3D multicellular spheroids using neuroendocrine cancer cell lines. This method provides a very convenient way to examine the effect of therapeutic drugs on the neuroendocrine tumor cells. It could also help us establish human neuroendocrine tumor spheroids for cancer therapy.

الإنسان الخلية السرطانية الهرموني العصبي خطوط بمثابة نموذج ثلاثي الأبعاد لدراسة الإنسان علاج ورم الغدد الصم العصبية

Neuroendocrine tumors (NETs) are rare tumors, with an incidence of two per 100,&#x200A;000 individuals per year, and they account for 0.5% of all human ...

Orthotopic Aortic Transplantation in Mice for the Study of Vascular Disease

Vascular procedures involving anastomoses in the mouse are generally thought to be difficult and highly dependent on the skill of the individual surgeon. This is largely true, but there are a number of important principles that can reduce the difficulty of these procedures and enhance reproducibility. Orthotopic aortic transplantation is an excellent procedure in which to learn these principles because it involves only two end-to-end anastomoses, but requires good suturing technique and handling of the vessels for consistent success. This procedure begins with the procurement of a length of abdominal aorta from a donor animal, followed by division of the native aorta in the recipient. The procured aorta is then placed between the divided ends of the recipient aorta and sutured into place using end-to-end anastomoses. To accomplish this objective successfully requires a high degree of concentration, good tools, a steady hand, and an appreciation of how easily the vasculature of a mouse can be damaged, resulting in thrombosis. Learning these important principles is what occupies most of the beginner's time when learning microsurgery in small rodents. Throughout this protocol, we refer to these important points. This model can be used to study vascular disease in a variety of different experimental systems1-8. In the context shown here, it is most often used for the study of post-transplant vascular disease, a common long-term complication of solid organ transplantation in which intimal hyperplasia occurs within the allograft. The primary advantage of the model is that it facilitates quantitative morphometric analyses and the transplanted vessel lies contiguous to the endogenous vessel, which can serve as an additional control9. The technique shown here is most often used for mice weighing 18-25 grams. We have accumulated most of our experience using the C57BL/6J, BALB/cJ, and C3H/HeJ strains.

We describe a technique in which a section of the abdominal aorta from a mouse is transplanted orthotopically to just below the renal arteries in an allogeneic or syngeneic recipient. This technique can be useful in studies in which transplantation of large arteries of uniform size is deemed advantageous.

زرع مثلي الشريان الأورطي في الفئران لدراسة أمراض الأوعية الدموية

Vascular procedures involving anastomoses in the mouse are generally thought to be difficult and highly dependent on the skill of the individual surgeon. ...

Time-lapse Imaging of Primary Preneoplastic Mammary Epithelial Cells Derived from Genetically Engineered Mouse Models of Breast Cancer

Time-lapse imaging can be used to compare behavior of cultured primary preneoplastic mammary epithelial cells derived from different genetically engineered mouse models of breast cancer. For example, time between cell divisions (cell lifetimes), apoptotic cell numbers, evolution of morphological changes, and mechanism of colony formation can be quantified and compared in cells carrying specific genetic lesions. Primary mammary epithelial cell cultures are generated from mammary glands without palpable tumor. Glands are carefully resected with clear separation from adjacent muscle, lymph nodes are removed, and single-cell suspensions of enriched mammary epithelial cells are generated by mincing mammary tissue followed by enzymatic dissociation and filtration. Single-cell suspensions are plated and placed directly under a microscope within an incubator chamber for live-cell imaging. Sixteen 650 &mu;m x 700 &mu;m fields in a 4x4 configuration from each well of a 6-well plate are imaged every 15 min for 5 days. Time-lapse images are examined directly to measure cellular behaviors that can include mechanism and frequency of cell colony formation within the first 24 hr of plating the cells (aggregation versus cell proliferation), incidence of apoptosis, and phasing of morphological changes. Single-cell tracking is used to generate cell fate maps for measurement of individual cell lifetimes and investigation of cell division patterns. Quantitative data are statistically analyzed to assess for significant differences in behavior correlated with specific genetic lesions.

Time-lapse imaging is used to assess behavior of primary preneoplastic mammary epithelial cells derived from genetically engineered mouse models of breast cancer risk to determine if there are correlations between specific behavioral parameters and distinct genetic lesions.

الوقت الفاصل بين التصوير من الخلايا الثديية سابق للورم ظهاري الأولية المستمدة من نماذج الماوس المعدلة وراثيا لسرطان الثدي

Time-lapse  imaging can be used to compare behavior of cultured primary preneoplastic  mammary epithelial cells derived from different genetically ...

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

We have successfully integrated previously established Intracranial window (ICW) technology 1-4 with intravital 2-photon confocal microscopy to develop a novel platform that allows for direct long-term visualization of tissue structure changes intracranially. Imaging at a single cell resolution in a real-time fashion provides supplementary dynamic information beyond that provided by standard end-point histological analysis, which looks solely at 'snap-shot' cross sections of tissue.
Establishing this intravital imaging technique in fluorescent chimeric mice, we are able to image four fluorescent channels simultaneously. By incorporating fluorescently labeled cells, such as GFP+ bone marrow, it is possible to track the fate of these cells studying their long-term migration, integration and differentiation within tissue. Further integration of a secondary reporter cell, such as an mCherry glioma tumor line, allows for characterization of cell:cell interactions. Structural changes in the tissue microenvironment can be highlighted through the addition of intra-vital dyes and antibodies, for example CD31 tagged antibodies and Dextran molecules.
Moreover, we describe the combination of our ICW imaging model with a small animal micro-irradiator that provides stereotactic irradiation, creating a platform through which the dynamic tissue changes that occur following the administration of ionizing irradiation can be assessed.
Current limitations of our model include penetrance of the microscope, which is limited to a depth of up to 900 &mu;m from the sub cortical surface, limiting imaging to the dorsal axis of the brain. The presence of the skull bone makes the ICW a more challenging technical procedure, compared to the more established and utilized chamber models currently used to study mammary tissue and fat pads 5-7. In addition, the ICW provides many challenges when optimizing the imaging.

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

We describe a novel in vivo imaging technique that couples fluorescent chimeric mice with intracranial windows and high-resolution 2-photon microscopy. This imaging platform aids studies of dynamic changes in brain tissue and microvasculature, at a single-cell level, following pathological insults and is adaptable to assess intracranial drug delivery and distribution.

رواية عالية الدقة<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; تقنية التصوير لدراسة الاستجابة الديناميكية للمنشآت داخل القحف لنمو الورم والتداوي

We have successfully integrated previously established Intracranial window (ICW) technology 1-4 with intravital 2-photon confocal microscopy to develop a ...

Three Dimensional Cultures: A Tool To Study Normal Acinar Architecture vs. Malignant Transformation Of Breast Cells

Invasive breast carcinomas are a group of malignant epithelial tumors characterized by the invasion of adjacent tissues and propensity to metastasize. The interplay of signals between cancer cells and their microenvironment exerts a powerful influence on breast cancer growth and biological behavior1. However, most of these signals from the extracellular matrix are lost or their relevance is understudied when cells are grown in two dimensional culture (2D) as a monolayer. In recent years, three dimensional (3D) culture on a reconstituted basement membrane has emerged as a method of choice to recapitulate the tissue architecture of benign and malignant breast cells. Cells grown in 3D retain the important cues from the extracellular matrix and provide a physiologically relevant ex&#160;vivo system2,3. Of note, there is growing evidence suggesting that cells behave differently when grown in 3D as compared to 2D4. 3D culture can be effectively used as a means to differentiate the malignant phenotype from the benign breast phenotype and for underpinning the cellular and molecular signaling involved3. One of the distinguishing characteristics of benign epithelial cells is that they are polarized so that the apical cytoplasm is towards the lumen and the basal cytoplasm rests on the basement membrane. This apico-basal polarity is lost in invasive breast carcinomas, which are characterized by cellular disorganization and formation of anastomosing and branching tubules that haphazardly infiltrates the surrounding stroma. These histopathological differences between benign gland and invasive carcinoma can be reproduced in 3D6,7. Using the appropriate read-outs like the quantitation of single round acinar structures, or differential expression of validated molecular markers for cell proliferation, polarity and apoptosis in combination with other molecular and cell biology techniques, 3D culture can provide an important tool to better understand the cellular changes during malignant transformation and for delineating the responsible signaling.

Three dimensional culture of mammary epithelial cells on a reconstituted basement membrane is a useful method to recapitulate the in vivo architecture of the benign breast, and to differentiate the malignant phenotype from the benign breast phenotype. Importantly, this system can be applied to study invasive carcinomas in other tissues.

ثلاثة الثقافات الأبعاد: أداة لدراسة الهندسة المعمارية عادي عنيبية مقابل التحول السرطاني للخلايا الثدي

Invasive breast carcinomas are a group of malignant epithelial tumors characterized by the invasion of adjacent tissues and propensity to metastasize. The ...

Assessment of Viability of Human Fat Injection into Nude Mice with Micro-Computed Tomography

Lipotransfer is a vital tool in the surgeon&#8217;s armamentarium for the treatment of soft tissue deficits of throughout the body. Fat is the ideal soft tissue filler as it is readily available, easily obtained, inexpensive, and inherently biocompatible.1 However, despite its burgeoning popularity, fat grafting is hampered by unpredictable results and variable graft survival, with published retention rates ranging anywhere from 10-80%. 1-3
To facilitate investigations on fat grafting, we have therefore developed an animal model that allows for real-time analysis of injected fat volume retention. Briefly, a small cut is made in the scalp of a CD-1 nude mouse and 200-400 &#181;l&#160;of processed lipoaspirate is placed over the skull. The scalp is chosen as the recipient site because of its absence of native subcutaneous fat, and because of the excellent background contrast provided by the calvarium, which aids in the analysis process. Micro-computed tomography (micro-CT) is used to scan the graft at baseline and every two weeks thereafter. The CT images are reconstructed, and an imaging software is used to quantify graft volumes.
Traditionally, techniques to assess fat graft volume have necessitated euthanizing the study animal to provide just a single assessment of graft weight and volume by physical measurement ex vivo. Biochemical and histological comparisons have likewise required the study animal to be euthanized. This described imaging technique offers the advantage of visualizing and objectively quantifying volume at multiple time points after initial grafting without having to sacrifice the study animal. The technique is limited by the size of the graft able to be injected as larger grafts risk skin and fat necrosis. This method has utility for all studies evaluating fat graft viability and volume retention. It is particularly well-suited to providing a visual representation of fat grafts and following changes in volume over time.

Fat grafting is an essential technique for reconstructing soft tissue deficits. However, it remains an unpredictable procedure characterized by variable graft survival. Our goal was to devise a mouse model that utilizes a novel imaging method to compare volume retention between differing techniques of fat graft preparation and delivery.

تقييم الجدوى من الدهون الإنسان الحقن في الفئران عارية مع مايكرو-التصوير المقطعي

Lipotransfer is a vital tool in the surgeon&#8217;s armamentarium for the treatment of soft tissue deficits of throughout the body. Fat is the ideal soft ...

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial cells tend to lose hormone receptor expression. Widely used hormone receptor positive breast cancer cell lines are of limited relevance to the in vivo situation. Here, we describe an ex vivo model to study hormone action in the human breast. Fresh human breast tissue specimens from surgical discard material such as reduction mammoplasties or mammectomies are mechanically and enzymatically digested to obtain tissue fragments containing ducts and lobules and multiple stromal cell types. These tissue microstructures kept in basal medium without growth factors preserve their intercellular contacts, the tissue architecture, and remain hormone responsive for several days. They are readily processed for RNA and protein extraction, histological analysis or stored in freezing medium. Fluorescence activated cell sorting (FACS) can be used to enrich for specific cell populations. This protocol provides a straightforward, standard approach for translational studies with highly complex, varied human specimens.

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

We have developed a novel ex vivo model to study hormone action in the human breast. It is based on tissue microstructures isolated from surgical breast tissue specimens which preserve tissue architecture, intercellular interactions, and paracrine signaling.

ل<em&gt; السابقين فيفو</em&gt; نموذج لدراسة هرمون العمل في الثدي البشري

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial ...