The authors would like to acknowledge the Netherlands Organization for Scientific Research (NWO, grant 17.106.329)

Tierversuche wurden von der Tierschutzausschusses des Leiden University Medical Center (LUMC) zugelassen. 1. Herstellung der Zellen, Instrumente und Mäuse <ol><li> Einen Tag vor der Operation, rasieren die NOD / SCID-gamma (NSG) Mäuse aus dem vierten Brustwarze bis zur Mittellinie und wiegen die Mäuse, um zu überprüfen, dass alle Mäuse haben in etwa vergleichbar Gewichte. </li><li> Autoklavieren eine Schere, zwei Pinzetten und zwei gerade Moskito Pinzette (Abbildung 1A). </li><li> Am Tag der Operation, wäscht den menschlichen Brustadenokarzinom (MDA-MB-231-Zellen), die einmal mit phosphatgepufferter Salzlösung (PBS) injiziert wird, pH 7,4 und trypsinize die Zellen. Quenche die Trypsin durch Zugabe von 10 ml Serum enthaltendem DMEM-Medium auf die Oberseite der Zellen. Zentrifugieren Sie die Zellen bei 1200 rpm für 7 Minuten bei Raumtemperatur, um das Serum durch Resuspendieren der Zellen entweder in PBS oder in Medium ohne Serum zu entfernen. Zentrifugieren wieder um Spuren von Serum vollständig zu entfernen. Resuspendieren der Zellen in PBS oderMedien. </li><li> Zähle die Zellen mit einem Hämozytometer und berechnet die Menge von Zellen. Verwenden 500.000 Zellen / Maus in nicht mehr als 150 &amp; mgr; l. Optional zu PBS oder Medien, die Zellen werden in Matrigel. HINWEIS: Bestimmen Sie die Anzahl der Zellen in Abhängigkeit von der verwendeten Zelltyp. </li><li> Zeigen Zellen in ein steriles Mikrozentrifugenröhrchen und halten sie auf Eis. </li><li> Füllen einer 50 ml konischen Zentrifugenröhrchen mit 35 ml PBS pH 7.4 und einem weiteren 50 ml konischen Zentrifugenröhrchen mit 70% Ethanol. Genießen Wattestäbchen in jedes Röhrchen. </li></ol> 2. Orthotopische Injection <ol><li> Führen Sie die Operation in einer sterilen Haube, um eine sterile Atmosphäre zu erhalten. Anesthetize die Maus durch subkutane Injektion von Xylazin / Ketamin-Mischung bei einer Dosis von 10 mg / kg, 100 mg / kg Körpergewicht auf. Befestigen Sie die Maus auf einem Heizkissen. Bestätigen den Erfolg der Anästhesie durch den Mangel an Reaktion auf Zehe Prise. HINWEIS: Wenn man nicht sehr vertraut mit chirurgischen Eingriffen, kann eine Operation länger dauern. Vereinbarendie Anästhesie Dosis entsprechend. </li><li> Anwenden Augensalbe für die Augen von Mäusen, um die Augen vor dem Austrocknen zu schützen. </li><li> Reinigen Sie die rasierte Fläche mit der Wattestäbchen in Ethanol in Schritt 1.6 vorbereitet getaucht. Wechselnde Peelings mit Betadin und Alkohol dreimal im Kreis dreht weg von der geplanten Einschnittstelle durchgeführt werden. Alternativ Ionophor verwendet als Desinfektionsmittel. </li><li> Machen Sie einen kleinen Schnitt zwischen dem vierten Brustwarze und der Mittellinie mit einer Schere und eine Tasche, indem Sie das Wattestäbchen mit PBS, pH 7,4, befeuchtet. </li><li> Verwenden Sie eine Pinzette, um das Brustfettpolster aus. Beachten Sie die Fettpolster durch ihre weiße Farbe. </li><li> Drücken Sie die Fettpolster mit der anderen Pinzette von ihrer Basis; durch diese Weise voll setzen die Fettpolster (1B), um Injektionen leicht durchführen. </li><li> Homogenisieren des Zellgemisch durch Auf- und Abpipettieren. Vorsichtig aspirieren 50 ul der Zellsuspension in einem Insulin Spritze aufgezogen und indas Brustfettpolster, indem Sie die Nadel horizontal. Bestätigen erfolgreiche Injektion, indem Sie für Schwellungen der Fettpolster. </li><li> Lassen Sie die Fettpolster sanft. </li><li> Naht der Einschnitt unter Verwendung einer Nadeltreiber. Make drei Würfe durch Drehen des Fadens um den Nadeltreiber im Uhrzeigersinn, gegen den Uhrzeigersinn und im Uhrzeigersinn. Zwei Knoten pro Naht verwendet werden. HINWEIS: Sicherstellen, dass die Äste dicht sind anders Mäusen eröffnen können die Nähte. </li><li> Nach der Operation injiziert ein Analgetikum, wie Temgesic bei 0,05-0,1 mg / kg Körpergewicht subkutan, um die Schmerzen zu lindern. </li><li> Die Tiere nicht unbeaufsichtigt lassen, bis sie das Bewusstsein gewinnen und zu erhalten sternalen recumbence. Zeigen alle Tiere in verschiedenen Käfigen, bis sie vollständig wiederhergestellt werden. </li><li> Um die Sterilität zu gewährleisten, verwenden autoklaviertem Käfigen und Wasser. Ändern Sie die Käfige alle drei Tage, um die Atmosphäre zu reinigen. </li></ol> 3. Organraub für Analysis <ol><li> An derTag der Ernte, 8 Wochen nach der Implantation der Zellen zu füllen 15 ml konischen Zentrifugenröhrchen mit 3 ml Bouin-Lösung für jede Maus. Darüber hinaus verwenden Sie zwei 15-ml-Röhrchen mit 5 ml Formalin-Lösung pro Maus gefüllt. </li><li> Betäuben der Tiere durch Injektion von Xylazin / Ketamin, bei einer Dosis von 10 mg / kg, 100 mg / kg Körpergewicht subkutan. Warten Sie, bis das Tier verliert toe Prise Rückzug Reflex. </li><li> Befestigen Sie das Tier mit Nadeln auf einem Sockel. Machen Sie einen langen, vertikalen Mittelschnitt mit einer Schere. Machen Sie zwei horizontale Schnitte direkt unter dem Vorderbein und über dem hinteren Bein. Setzen Sie den Tumor durch Pinning die Haut an der Basis. Messen des Tumorvolumens mit Hilfe einer Schieblehre. </li><li> Distanzieren, den Tumor von der Haut mit einer Schere. Schnellfrost einen Teil des Tumors in flüssigem Stickstoff für die RNA-Isolierung. Legen Sie das andere Teil, in den konischen Zentrifugenröhrchen mit Formalin gefüllten Immunhistochemie folgenden Paraffineinbettung durchzuführen. </li><li> Vorsichtig nehmen Sie in die Lunge. Platzieren Sie dielinke Lunge in Bouin-Lösung. Halten Sie die Lunge in Lösung für 3 Tage. Beachten oberflächliche Metastasenherde deutlich mit bloßem Auge. Wahlweise legen Sie die rechte Lunge in Formalin auf Mikrometastasen mit Hämatoxylin und Eosin (H &amp; E) Färbung zu überprüfen. Hinweis: Obwohl, Lungenmetastasen häufig bei Brustkrebs beobachtet, könnte man auch wünschen Knochen, Leber, Hirn und Milz sammeln, um Metastasen zu analysieren. Die Zellen an der metastatischen Bereich dichter und morphologisch verschieden sind und daher leicht von Lungengewebe zu unterscheiden. </li><li> Einen Tag nach der Ernte, saugen Sie den Formalin-Lösung von 15 ml-Röhrchen und ersetzen mit 70% Ethanol. Betten Sie das Gewebe in Paraffin und führen Immunhistochemie Studien. </li><li> Für Blutanalyse, die Öffnung des Brustkorbes mit einer Schere. Ziehen Sie 450 ul Blut über Herzpunktion. Platzieren Blutprobe in ein Mikrozentrifugenröhrchen, das 50 &amp; mgr; l 3,2% Natriumcitrat. Nach dem Blut gesammelt, drehen Sie es bei 2.000 × g für 10 kmn. Speichern die Plasmaproben bei -20 ° C bis zur weiteren Verwendung. HINWEIS: Es gibt mehrere andere Blutentnahme Techniken, die üblicherweise in der Praxis 20 verwendet, und die Technik, die verwendet werden muss, hängt von Versuchsaufbau und Wahl Wissenschaftlers. Wenn Blutprobe nicht erforderlich ist, das Tier einzuschläfern gemäß der Tier Protokoll oder gemäß den Richtlinien Institution. </li></ol>

<ol>
	<li>Aaronson, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+factors+and+cancer.">Growth factors and cancer.</a> Science. 254 (5035), 1146-1153 (1991).</li><li>Bao, L., Matsumura, Y., Baban, D., Sun, Y., Tarin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+inoculation+site+and+Matrigel+on+growth+and+metastasis+of+human+breast+cancer+cells.">Effects of inoculation site and Matrigel on growth and metastasis of human breast cancer cells.</a> Br. J. Cancer. 70 (2), 228-232 (1994).</li><li>Brouxhon, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoclonal+antibody+against+the+ectodomain+of+E-cadherin+(DECMA-1)+suppresses+breast+carcinogenesis:+involvement+of+the+HER/PI3K/Akt/mTOR+and+IAP+pathways.">Monoclonal antibody against the ectodomain of E-cadherin (DECMA-1) suppresses breast carcinogenesis: involvement of the HER/PI3K/Akt/mTOR and IAP pathways.</a> Clin. Cancer Res. 19 (12), 3234-3246 (2013).</li><li>Dobie, K. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variegated+transgene+expression+in+mouse+mammary+gland+is+determined+by+the+transgene+integration+locus.">Variegated transgene expression in mouse mammary gland is determined by the transgene integration locus.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 93 (13), 6659-6664 (1996).</li><li>Ewens, A., Mihich, E., Ehrke, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distant+metastasis+from+subcutaneously+grown+E0771+medullary+breast+adenocarcinoma.">Distant metastasis from subcutaneously grown E0771 medullary breast adenocarcinoma.</a> Anticancer Res. 25 (6B), 3905-3915 (2005).</li><li>Fidler, I. J., Naito, S., Pathak, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+implantation+is+essential+for+the+selection,+growth+and+metastasis+of+human+renal+cell+cancer+in+nude+mice+[corrected.">Orthotopic implantation is essential for the selection, growth and metastasis of human renal cell cancer in nude mice [corrected.</a> Cancer Metastasis Rev. 9 (2), 149-165 (1990).</li><li>Fridman, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+tumor+growth+of+both+primary+and+established+human+and+murine+tumor+cells+in+athymic+mice+after+coinjection+with+Matrigel.">Enhanced tumor growth of both primary and established human and murine tumor cells in athymic mice after coinjection with Matrigel.</a> J. Natl. Cancer Inst. 83 (11), 769-774 (1991).</li><li>Fynan, T. M., Reiss, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resistance+to+inhibition+of+cell+growth+by+transforming+growth+factor-beta+and+its+role+in+oncogenesis.">Resistance to inhibition of cell growth by transforming growth factor-beta and its role in oncogenesis.</a> Crit Rev. Oncog. 4 (5), 493-540 (1993).</li><li>Huang, H. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trypsin-induced+proteome+alteration+during+cell+subculture+in+mammalian+cells.">Trypsin-induced proteome alteration during cell subculture in mammalian cells.</a> J. Biomed. Sci. 17, 36 (2010).</li><li>Iorns, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+mouse+model+for+the+study+of+human+breast+cancer+metastasis.">A new mouse model for the study of human breast cancer metastasis.</a> PLoS. One. 7 (10), e47995 (2012).</li><li>Jessani, N., Niessen, S., Mueller, B. M., Cravatt, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breast+cancer+cell+lines+grown+in+vivo:+what+goes+in+isn't+always+the+same+as+what+comes+out.">Breast cancer cell lines grown in vivo: what goes in isn't always the same as what comes out.</a> Cell Cycle. 4 (2), 253-255 (2005).</li><li>Kalluri, R., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+basics+of+epithelial-mesenchymal+transition.">The basics of epithelial-mesenchymal transition.</a> J. Clin. Invest. 119 (6), 1420-1428 (2009).</li><li>Kocaturk, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternatively+spliced+tissue+factor+promotes+breast+cancer+growth+in+a+beta1+integrin-dependent+manner.">Alternatively spliced tissue factor promotes breast cancer growth in a beta1 integrin-dependent manner.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 110, 11517-11522 (2013).</li><li>Lowe, S. W., Lin, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptosis+in+cancer.">Apoptosis in cancer.</a> Carcinogenesis. 21 (3), 485-495 (2000).</li><li>Meek, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+p53+response+to+DNA+damage.">The p53 response to DNA damage.</a> DNA Repair (Amst). 3 (8-9), 1049-1056 (2004).</li><li>Meek, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+suppression+by+p53:+a+role+for+the+DNA+damage+response).">Tumor suppression by p53: a role for the DNA damage response).</a> Nat. Rev. Cancer. 9 (10), 714-723 (2009).</li><li>Miller, F. R., Medina, D., Heppner, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preferential+growth+of+mammary+tumors+in+intact+mammary+fatpads.">Preferential growth of mammary tumors in intact mammary fatpads.</a> Cancer Res. 41 (10), 3863-3867 (1981).</li><li>Mueller, B. M., Ruf, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Requirement+for+binding+of+catalytically+active+factor+VIIa+in+tissue+factor-dependent+experimental+metastasis.">Requirement for binding of catalytically active factor VIIa in tissue factor-dependent experimental metastasis.</a> J. Clin. Invest. 101 (7), 1372-1378 (1998).</li><li>Paoli, P., Giannoni, E., Chiarugi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anoikis+molecular+pathways+and+its+role+in+cancer+progression.">Anoikis molecular pathways and its role in cancer progression.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1833 (12), 3481-3498 (2013).</li><li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals.">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> J. Pharmacol. Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).</li><li>Shay, J. W., Zou, Y., Hiyama, E., Qright, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Telomerase+and+cancer.">Telomerase and cancer.</a> Hum. Mol. Genet.. 10 (7), 677-685 (2001).</li><li>Sporn, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+war+on+cancer.">The war on cancer.</a> Lancet. 347 (9012), 1377-1381 (1996).</li><li>Tao, K., Fang, M., Alroy, J., Sahagian, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imagable+4T1+model+for+the+study+of+late+stage+breast+cancer.">Imagable 4T1 model for the study of late stage breast cancer.</a> BMC. Cancer. 8, 228 (2008).</li><li>Versteeg, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protease-activated+receptor+(PAR)+2,+but+not+PAR1,+signaling+promotes+the+development+of+mammary+adenocarcinoma+in+polyoma+middle+T+mice.">Protease-activated receptor (PAR) 2, but not PAR1, signaling promotes the development of mammary adenocarcinoma in polyoma middle T mice.</a> Cancer Res. 68 (17), 7219-7227 (2008).</li><li>Versteeg, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+tissue+factor+signaling+suppresses+tumor+growth.">Inhibition of tissue factor signaling suppresses tumor growth.</a> Blood. 111 (1), 190-199 (2008).</li><li>Wagner, K. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+breast+cancer:+quo+vadis,+animal+modeling?.">Models of breast cancer: quo vadis, animal modeling?.</a> Breast Cancer Res. 6 (1), 31-38 (2004).</li><li>Weigelt, B., Peterse, J. L., van't Veer, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breast+cancer+metastasis:+markers+and+models.">Breast cancer metastasis: markers and models.</a> Nat. Rev. Cancer. 5 (8), 591-602 (2005).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests.

Orthotopische Injektion von Brustkrebszellen ist ein leistungsfähiges Modell, alle Aspekte der Krebswachstum zu studieren. Implantation der Zellen in den Brustfettpolster der Mäuse sollte sorgfältig ausgewählt, um Variation in das Tumorwachstum zu verhindern durchgeführt werden. Am wichtigsten ist, ist entscheidend Injektion der gleichen Menge von Zellen jeder Maus. Um dies zu tun, sollte man die Zellen trypsinieren konsequent, ohne die Lebensfähigkeit der Zellen. Nicht lebensfähigen Zellen sollten bei der Zellz?...

Krebs ist eine sehr komplexe Krankheit, die seit über Jahrhunderte zogen worden Studien. Brustkrebs ist die häufigste Krebsart; sie tritt vorwiegend bei Frauen, kann aber vereinzelt auch bei Männern 27 auftreten. Die Erkrankung wird hauptsächlich durch den Verlust der Kontrolle der Zellteilung Verfahren gesteuert, die wiederum führt zu einer unendlichen Wachstum von Zellen im Körper verursacht. Diese Störungen können durch verschiedene Mechanismen verursacht werden: Zunächst müssen die gesunden Zellen Wachstumssignale aus den umliegenden Zellen, um sich zu vermehren, während Krebszellen ihre eigenen Wachstumsfaktoren und erhöhen die Expression von Wachstumsfaktor-Rezeptoren somit eine höhere Proliferationsrate 1 erhalten wird; zweitens sind die Krebszellen weniger anfällig für anti-proliferative Signale 8; drittens, um die Anzahl der Zellen im Körper Zelltod ist auch erforderlich, auszugleichen; aber Krebszellen Flucht aus den programmierten Zelltod, die Apoptose bezeichnet 14; vierten, Zellen an extrazelluläre Matrix haftenUm zu überleben, aber Tumorzellen ohne die Notwendigkeit von Befestigungs wachsen und zeigen Beständigkeit gegen anoikis 19; fünften, Aktivierung der Telomerase umgeht die Verkürzung der Telomere und verhindert die replikative Seneszenz 21; nicht zuletzt, das Überspringen von DNA-Qualitätskontrolle nach der Mitose resultiert eine neue genetische Inhalt 15,16. Um Onkogenen oder Tumorsuppressoren, die eine Rolle in dieser deregulierten Proliferation spielen zu identifizieren, sind Tumorwachstum Experimenten an Mäusen entscheidend. Primäre Tumorwachstum ist im allgemeinen nicht der Hauptgrund für den Tod. Migration von Krebszellen aus dem Primärstandort zu einer sekundären Seite, bezeichnet als Metastasen ist die häufigste Todesursache in den meisten Krebspatienten 22. Metastasen bringt Tumorzellinvasion, intravasation, sich durch den Kreislauf vermieden Immunangriff, Extravasation und das Wachstum an der Sekundärstation. Epithelial zu mesenchymale Transition (EMT) ist ein Schlüsselprozess inMetastasierung und beinhaltet einen Schalter in Genexpressionsprofile ergeben Zellen mit höheren Motilität und Invasivität, die Voraussetzungen für die metastasierenden Zelle 12 sind. Denn Krebsprozesses ist die Resultierende aus einer Kombination von verschiedenen Maßnahmen, einschließlich der gegenseitigen Wechselwirkungen zwischen Tumorzellen, Stromazellen und pro- und anti-inflammatorischen Zellen, ein in vitro Ansatz zur Krebs verleiht häufig keinen vollständigen Einblick in die Krebsprozess. Ähnlich Krebsbehandlungen beeinflussen die Tumorvaskulatur oft nicht in vitro untersucht werden, wodurch die Verwendung von in vivo-Ansätzen ist unvermeidlich. Um Brustkrebs Progression zu studieren, wurden verschiedene experimentelle Methoden entwickelt. Das am häufigsten verwendete Modell ist die subkutane Injektion von Brustkrebszellen in Mäuse 5. In diesem Versuchsaufbau kann der Forscher eine Vielzahl von Änderungen an einer Zelllinie der Wahl in vitro eingeführt (dhHochregulierung, die Herunterregulierung von Proteinen) und injizieren die Zellen unter die Haut. Dieses Verfahren ist zwar einfach und der Einspritzvorgang ist einfach, ohne dass eine Operation an den Mäusen durchgeführt, wird die Stelle, an der der Tumor injiziert nicht die lokale Mammatumorumgebung und das Fehlen dieser Umwelt darstellen kann in der Entwicklung von Brustkrebs Ergebnis, dass unterscheidet sich von dem in der menschlichen Pathologie beobachtet. Zweitens werden gentechnisch veränderte Mäuse häufig als in vivo Werkzeug Brustkrebsprogression Studie verwendet. In diesem Modell wird Onkogen (dh PyMT, Neu) Expression von einem Brustgewebe spezifischen Promotor, der zur Bildung von spontanen Brusttumor s angetrieben. Diese Versuchsanordnung ist nützlich, um die Behandlung Aspekt der Krankheit, die durch Injektion von Medikamenten oder Antikörper während der Überprüfung der Tumorgröße in der Zeit 3 studieren. Allerdings Zucht dieser Mäuse mit anderen Mausstämme mangelhaft oder in einem Gen von Interesse kann auch geben Ins mutiertights in die Rolle von verschiedenen Proteinen in Brusttumorwachstum 24. Der Nachteil dieses Modells ist, dass es anfällig für Schwankungen der Tumorgröße und Anzahl ist. Außerdem ist das Niveau der Expression des Transgens hängt von der Integrationsstelle im Genom und können von einem Mausstamm auf einen anderen 4 ändern. In diesem Modell kann die Expression des Transgens durch alle Zellen mit epithelialem Ursprung erreicht werden, während bei menschlichen Krankheiten, nur eine Subpopulation der Zellen das Onkogen oder herunterregulieren Tumorsuppressor Ebenen 26. Um Metastasen studieren kann Brustkrebszellen auch intravenös injiziert werden (ein Modell bezeichnet experimentelle Metastasierung) 25. Dieser Ansatz rekapituliert nur die metastatischen Prozess teilweise; er umgeht das Erfordernis für die Tumorzellen eindringen und intravasate und beginnt ab dem Punkt, an dem die Tumorzellen leicht in dem Blutkreislauf vor. In unserer Arbeit verwenden wir eine orthotope spritzenIonen-Modell, um die Beteiligung der Gene von Interesse bei Brustkrebs Progression 13 zu studieren. Wir überexprimieren das Protein in menschlichen Brustkrebszellen und injizieren sie in das Brustfettpolster von NOD / SCID gamma (NSG) Mäusen. Dieses Verfahren ist vorteilhaft in vielerlei Hinsicht: Sie ermöglicht sehr schnelle und vielfältige genetische Veränderungen in der injizierten Zelllinie deckt es den gesamten Prozess von Brustkrebs Progression von Primärtumorwachstum zur Metastasierung bei pathologisch relevanten Websites, und es bietet auch eine gute Versuchsmodell zur Untersuchung der Wirkung von therapeutischen Behandlungen zu frühen oder späten Stadien der Erkrankung. Zusätzlich unter Verwendung dieses Modells kann man die Rolle der Stromazellen gegen Krebszellen stammenden Proteinen in den Krankheitsverlauf unter Verwendung gentechnisch veränderten Mäusen oder Zellen zu untersuchen. Obwohl subkutane Injektionen sind einfacher durchzuführen, geben orthotope Modellen aber zu einer tumorigenen und metastatischen Krebszellpopulation. Somit wird mittels der subkutanen Injektion erhaltenen Ergebnisses kann entweder falsch-negative oder falsch-positive 6,17 Förderung der Verwendung von orthotopen Modelle, die das Tumorwachstum zu studieren.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1093">
	<tbody>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:185px;">Name of material/equipment</td>
			<td style="width:172px;">Company</td>
			<td style="width:95px;">Catalog number</td>
			<td style="width:641px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Bouin&#39;s solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT10132</td>
			<td>Used for investigating the metastasis on lungs</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Formalin solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT501128</td>
			<td>Used to fix the tissues</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Matrigel, growth factor reduced</td>
			<td>Corning</td>
			<td>356230</td>
			<td>Cells can be resuspended in matrigel for injection</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Mosquito forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>13008-12</td>
			<td>Used for stiching</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Angled forceps</td>
			<td>Electron microscopy sciences</td>
			<td>72991-4c</td>
			<td>These make the exposure of mammary fat pad easier</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Scissors</td>
			<td>B Braun Medicals</td>
			<td>BC056R</td>
			<td>Used to cut open the mice</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Straight forceps</td>
			<td>B Braun Medicals</td>
			<td>BD025R</td>
			<td>This is used to open up the skin to expose mammary fat pad</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">NOD scid gamma mice</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>005557</td>
			<td>Experimental animal used for experiment</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">MDA-MB-231</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>92020424</td>
			<td>Experimental cells used for injections</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Oculentum simplex</td>
			<td>Teva Pharmachemie</td>
			<td></td>
			<td>Opthalmic ointment used to prevent drying out of eyes</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Betadine</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>19-898-859</td>
			<td>Ionophore, used to disinfect the surgical area</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Xylazin/Ketamine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>X1251, K2753</td>
			<td>Use injected anesthesia as 10mg/kg and 100mg/kg body weight respectively</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Temgesic</td>
			<td>Schering-Plough</td>
			<td></td>
			<td>Use the painkiller as 0,05-0,1mg/kg body weight</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">DMEM</td>
			<td>Life sciences</td>
			<td>11995</td>
			<td>For trypsin neutralization,use media with serum(FBS:media 1:10 volume); for injection, use media with no serum</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Buffered sodium citrate</td>
			<td>Aniara</td>
			<td>A12-8480-10</td>
			<td>Use the volume ratio as citrate:blood; 1:9</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

orthotopic injection of breast cancer cells into the mammary fat pad of mice to study tumor growth.

<html> Das Wachstum von Brustkrebs in Mäusen mit einer Vielzahl von Modellen untersucht werden. Genetische Manipulation von Brustkrebszellen können Einblicke in die Funktion von Proteinen in onkogenen Progression oder consequat liefern neue Tumorsuppressoren entdecken. Zusätzlich Injektion von Krebszellen in Mäusen, die mit verschiedenen Genotypen liefern ein besseres Verständnis der Bedeutung der Stroma. Viele Modelle nützlich, um bestimmte Aspekte der Progression der Erkrankung untersucht, aber nicht die gesamte Krebsprozess wiederholen. Im Gegensatz dazu Brustkrebszellen Transplantation in die Brustfettpolster von Mäusen besser rekapituliert den Ort der Erkrankung und die Präsenz der richtigen Stromatumoren Fach und daher besser imitiert menschliche Krebserkrankung. In diesem Artikel, wie Sie Brustkrebszellen orthotop in Mäuse implantiert werden und erklären, wie man Gewebe, um die Analyse zu sammeln beschreiben wir: 14px; line-height:. 28px; &quot;&gt; Tumormilieu und Metastasierung in entfernte Organe Unter Verwendung dieses Modells vielen Aspekten (Wachstum, Angiogenese und Metastasierung) von Krebs kann einfach durch eine günstige Umgebung für die Tumorzellen wachsen untersucht werden.

Erfolgreiche Anwendung des &quot;orthotopen Brustkrebsmodell&quot; auf ordnungsgemäße Injektion von Zellen in das Brustfettpolster basieren. Experimentelle Fehler wie ungenaue Inokulation von Zellen oder undicht sein, um Variationen in der Größe des Tumors oder sogar die Abwesenheit eines Tumors, der zur Bildung einer Struktur führt sucht ähnlich einer Brustfettpolster mit einem Steuerungspuffer (2A) injiziert führen. Die Wachstumsrate des Tumors ist abhängig von der Art des injizierten Zelllini...

Watch this Scientific Journal Video about Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mammary Fat Pad of Mice to Study Tumor Growth. at JoVE.com

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mammary Fat Pad of Mice to Study Tumor Growth.

Krebs ist eine komplexe Erkrankung, die durch den den Tumor umgebenden Gewebes sowie lokale pro- und anti-inflammatorischen Mediatoren beeinflusst wird. Daher kann orthotrope Pritzer, anstatt subkutanen Modellen nützlich sein, um Krebsprogression in einer Weise, dass eine bessere ahmt menschlichen Pathologie studieren.

Orthotopische Injektion von Brustkrebszellen in das Brustfettpolster von Mäusen, das Tumorwachstum zu studieren.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the ...

orthotopic-injection-breast-cancer-cells-into-mammary-fat-pad-mice-to

Research

JoVE Journal

Medicine

78.2K Aufrufe.  Leiden University Medical Center.  Krebs ist eine komplexe Erkrankung, die durch den den Tumor umgebenden Gewebes sowie lokale pro- und anti-inflammatorischen Mediatoren beeinflusst wird. Daher kann orthotrope Pritzer, anstatt subkutanen Modellen nützlich sein, um Krebsprogression in einer Weise, dass eine bessere ahmt menschlichen Pathologie studieren. 