وأيد هذا العمل من المنح المقدمة من SNF [31003A-138528]، وOctav ومؤسسة مارسيلا Botnar، مؤسسة نوفارتيس ومؤسسة إيما Muschamp. نشكر مارتين Lambelet، وجان كريستوف Stehle للمساعدة التقنية الممتازة.

وافقت اللجنة الأخلاقية من جامعة لوزان التجارب، والتي هي وفقا للمبادئ الواردة في إعلان هلسنكي لعام 1975، بصيغته المنقحة في عام 1983 لاستخدام الأنسجة البشرية. 1. الإنسان العظمى الوريد الصافن الحصاد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحصول على شرائح الفائض من غير دوالي الأوردة الصافن الإنسان من المرضى الذين يخضعون لجراحة الأطراف السفلية الالتفافية لنقص التروية. في غرفة العمليات، وتطهير المحطة بالكامل مع محلول اليود وثنى المريض لفضح الساق من الفخذ إلى القدم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء شق متوسط ​​من الفخذ إلى الركبة (ترك الجزء الجلد توقف). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حصاد الوريد الصافن الكبير مع عنيق المحيطة (تقنية عدم اللمس) الأنسجة. فروع جانبية آمنة الأوردة 4-0 العلاقات مع الحرير. تخزين على الفور ما لا يقل عن 9 سم شريحة فائض طويلة من الوريد الصافن أكبر، مع القطر الخارجي من 2.5-4 ملم في 4 درجات مئوية في RPMI-1640 Glutamax المتوسطة، تستكمل مع 12.5٪ مصل العجل الجنين وجعله إلى المختبر. </li></ol> 2. EVPS التصميم <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تجميع المعدات العامة هو مبين في الشكل 1. الأوتوكلاف جميع المعدات والحفاظ على جميع مكونات تحت ظروف معقمة. وبالإضافة إلى ذلك، تأكد من أن النظام هو ماء ولا تسرب المواد الكيميائية في المتوسط. استخدام الميثيل polymethacrylate (PMMA-GS) للتغطية. الصلب (X5 كر ني 18 10) والبلاستيك polyoxymethylene (بوم) والدعم الوريد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تصميم غرفة نضح لهندسة المطلوب للسماح موضع الوريد وعلاقته. تأكد من عمق (أو نصف القطر في حالة استخدام بناء أسطواني) هو 2.5 سم على الأقل لذلك يسمح الحد الأدنى من انثناء وتمدد السفينة جنبا إلى جنب مع تغطية مستمرة من قبل وسائل الإعلام ثقافة (الشكل 1). الختم هو قضية رئيسية والسبب يستخدم مستطيل البناء PMMA-GS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تصميم الدعم الوريد إلى geometr المطلوبذ. لتجنب مجعد الوريد أو عبر انتفاخ، والسماح تعديل طول طريق دفع أو سحب (المسمار لا يمكن أن تستخدم لهذا الغرض، كما الوريد سوف تكون ملتوية مع المسمار). ويستخدم قضيب من الصلب الكامل متصلة بواسطة 2 انزلاق على شكل L القطع التي تدعم اسطوانات الوريد (2 5 مم لتناسب السفينة) والوريد (1B الشكل والشكل 2) هنا: ملاحظة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تصميم عمود الضغط، بحيث يكون &quot;الضغط يستريح&quot; المطبقة على هذا النظام هو: ع = 0-10 = HX ρ x ج، حيث p = الضغط (N / م 2، باسكال) ح = ارتفاع عمود السائل (م) ρ = كثافة السائل (كجم / م 3) و (ز) = ثابت الجاذبية (9.81 متر / ثانية 2). تصميم أربع قنوات اتصال، من أعلى إلى أسفل: لتطبيق الضغط، للخروج (من الوريد)، تدفق (إلى الوريد) والسماح التغيير المتوسط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد المتوسطة. استنادا إلى الدراسات السابقة 5،11-14، اختر RPMI-1640، على أن تستكمل مع Glutamax، 12.5٪ مصل العجل الجنين، و 1٪ حل للمضادات الحيوية مضاد فطري (10،000 U / مل البنسلين G، بالإضافة إلى 10 ملغ / مل كبريتات الستربتومايسين، بالإضافة إلى 25 ملغ / مل الأمفوتريسين B، بالإضافة إلى 0.5 ميكروغرام / مل: الجنتاميسين). وتعطى إجهاد القص (SS) بواسطة SS = 4 μQ / π * ص 3 س هو معدل التدفق (مل / ثانية)، ص نصف قطرها (سم) من الجزء الوريد، وμ هي اللزوجة من المتوسط ​​الارواء. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> SS تعدل عن طريق ضبط اللزوجة من خلال إضافة 70 كيلو دالتون ديكستران. قياس اللزوجة مع مقياس اللزوجة. هنا، إضافة 8٪ 70 كيلو دالتون ديكستران لوضع SS إلى 9-15 داين / سم 2. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضبط مضخة تستعد للحث على إشارة قلبي الشكل نابض من 60 نبضة / دقيقة والسعة ثابتة توليد تدفق أحادي الاتجاه من 150 ± 15 مل / دقيقة، مستقلة عن الضغوط التي مورست في النظام والتي يسيطر عليها جهاز كمبيوتر. تأكد من أن برنامج القيادة يدمج الاستحواذ المستمر ورصد الضغوط، سرعة تدفق، ومعدل النبض، وإشارة. إذا رغبت في ذلك، استخدام مضخة الثانية (غير متزامنةhronized) لإنتاج غير الصفحي، التدفق المضطرب. </li></ol> 3. الجمعية EVPS (الشكل 1) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل البدء، تأكد من أن جميع المعدات معقمة. تنفيذ كافة الخطوات التالية في عقامة تحت غطاء تدفق الصفحي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الوريد في طبق بيتري مليئة متوسطة. استخدام شفرة جراحية وتقسيم العرق إلى 3 شرائح متساوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطف على الفور شريحة واحدة في برنامج تلفزيوني. تقسيم قطعة في 3 أجزاء، وتحديد واحد في الفورمالين لقياس الأشكال. تجميد اثنين آخرين للحصول على النسخة الكمي (RT-PCR) والبروتين (وصمة عار الغربية) التحليل. النظر في هذه القطاعات كعنصر تحكم، الوريد غير perfused ل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام شرائح 2 المتبقية لنضح. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن بلطف شديد المتوسطة في الوريد وتحديد اتجاه التدفق العادي؛ في وجود صمامات يتم عكس الوريد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اغلاق الأوردة هو من أهمية قصوى لنجاح التجربة. تحقق من وجود تسرب من خلال الضمانات. تأمين أي تسرب مع خيوط الحرير 6-0. </li> &lt;/ OL&gt; </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ربط قطاع الوريد بين اثنين من الاسطوانات المعدنية، نهاية واحدة في وقت واحد (2.3، الشكل 1). تأمين اسطوانات مع Ethibon 3-0 حول الفجوات (الشكل 1A و B). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع شريحة الوريدي بأكمله في غرفة نضح شغل سابقا مع المتوسط. كرر نفس الإجراء الجزء الثاني. ملاحظة: إن الفشل في اغلاق الوريد بشكل صحيح إلى اسطوانة تكون مصدرا للتسرب، تتطلب إعادة التداخل، وزيادة كبيرة في خطر العدوى والفشل التجريبية. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتعزيز (شبكة) الجزء الثاني، والإفراج عن اثنين من اسطوانات (مع الوريد المرفقة) من على شكل L قطعة (2.3) والشكل (1). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أن يكون لطيف و لا تلمس الوريد مع أي الصكوك. حرك شبكة أولا على اسطوانة ثم الى الوريد. وهناك التدافع دفع / سحب حصول على عيون في الوريد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة تغطي شبكة كامل سطح الوريد تأمين يacketed الوريد إلى اسطوانات مع Ethibon 3-0. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يحشدوا مجمع الوريد / اسطوانة للدعم على شكل L وتحويلها إلى غرفة نضح، وشغل سابقا مع المتوسط. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ربط كل اسطوانة معدنية (في وتدفق) إلى Y-الخائن باستخدام المعالجة بيروكسيد أنابيب السيليكون مع قطرها الداخلي 3.2 مم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ربط الخائن تدفق إلى الثاني Y-الخائن باستخدام نفس النوع من الأنابيب. من هذا Y-الخائن، استخدام أنبوب واحد لقياس ضغط التروية من خلال كل السفن. ربط الآخر إلى العمود لتشكيل نظام حلقة مغلقة (الشكل 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> داخل الحاضنة، واستخدام طويل (متر واحد طول) أنبوب لتوصيل عمود الضغط في الرأس مضخة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استكمال إنشاء طريق ربط رئيس المضخة إلى تدفق Y-الخائن مع طول أنبوب طويل آخر (الشكل 1). </li></ol> 4. الأوردة الإرواء <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد أن كانت الجمعية EVPS التعاونmpleted، وملء العمود مع المتوسطة (البقاء تحت لاصق الوريد تدفق للسماح إعادة تعبئة). إضافة المزيد من المتوسطة إلى العمود حتى النظام ممتلئ. نقل كافة النظام في الحاضنة الحفاظ على 37 ± 0.1 درجة مئوية مع درجة الحموضة أبقى ثابتا عند 7.40 ± 0.01 (باستخدام خوارزمية CO 2 / درجة الحموضة على أساس معادلة هندرسون-Hasselbach). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جلب رئيس مضخة والعتاد خارج الحاضنة وتوصيله إلى محرك مضخة والعتاد. المسمار قضبان لتأمين التجمع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تبديل على السلطة مضخة، تأكد من تفعيلها على برنامج القيادة والسماح 5 دقائق على المدى المتوسط ​​ليتم توزيعها بالتساوي في كل حجرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لمراقبة الضغط، استخدام خط المراقبة الشرياني. وصل الناتج الضغط EVPS (أنه يتوافق مع القسطرة الشريانية) إلى محول الضغط مرتبطة بالكمبيوتر. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأكد شغل في الأنبوب تماما مع المتوسطة ولا يحتوي على أي فقاعات. دي فقاعة نظام الثقافة من خلال &quot;لي الشريانيشمال شرق &quot;أنبوب (الشكل 2). إيلاء الاهتمام لعرض والبحث عن إشارة قلبي الشكل نابض من 60 نبضة / دقيقة السعة ثابتة. عند هذه النقطة، والضغط المتوسط ​​هو بين 0-10 ملم زئبق. إذا كان الضغط &lt;0 والعمود يفرغ تدريجيا نبحث عن تسرب (ضمانات الوريد أو عدم كفاية ختم بين الوريد وأنبوب). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضبط ضغط الحد الأدنى إلى 6 ملم زئبق لاختبار الوريدي أو على 90 ملم زئبق للاختبار الشرياني. في ظل هذه الظروف، حاقن الهواء ينطبق الضغط المطلوبة لعمود والنظام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغيير المتوسطة كل أيام 2 باستخدام الأنبوب متصلا عمود الضغط. لمنع الضرر التغير في الضغط، افتح المكونات العمود أولا. </li></ol> 5. الانتهاء من الإرواء <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 3 أو 7 أيام من نضح: اتخاذ EVPS من الحاضنة وترجل الأوردة. تجاهل 5 مم الداني والقاصي ينتهي المرفقة الوريد إلى المعدات. خفض المركزي، رين 5 ممع من قطاع المتبقية وإصلاح في الفورمالين (قياس الأشكال). تجميد الأجزاء المتبقية والحد إلى مسحوق لمزيد من التحليلات الجزيئية. </li></ol>

<ol>
	<li>Sal Go, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Executive+summary:+heart+disease+and+stroke+statistics--2014+update:+a+report+from+the+american+heart+association.">Executive summary: heart disease and stroke statistics--2014 update: a report from the american heart association.</a> Circulation. 129, 399-410 (2014).</li><li>Sal Conte, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Results+of+PREVENT+III:+a+multicenter,+randomized+trial+of+edifoligide+for+the+prevention+of+vein+graft+failure+in+lower+extremity+bypass+surgery.">Results of PREVENT III: a multicenter, randomized trial of edifoligide for the prevention of vein graft failure in lower extremity bypass surgery.</a> Journal of Vascular Surgery. 43, 742-751 (2006).</li><li>Yu, P., Nguyen, B. T., Tao, M., Bai, Y., Ozaki, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+vein+graft+hemodynamic+manipulations+to+enhance+experimental+utility.">Mouse vein graft hemodynamic manipulations to enhance experimental utility.</a> The American Journal of Pathology. 178, 2910-2919 (2011).</li><li>Davies, M. G., Hagen, P. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reprinted+article+&amp;#34;Pathophysiology+of+vein+graft+failure:+a+review&amp;#34;.">Reprinted article &amp;#34;Pathophysiology of vein graft failure: a review&amp;#34;.</a> European journal of vascular and endovascular surgery : the official journal of the European Society for Vascular Surgery. 42, S19-S29 (2011).</li><li>Berard, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+hemodynamic+forces+in+the+ex+vivo+arterialization+of+human+saphenous+veins.">Role of hemodynamic forces in the ex vivo arterialization of human saphenous veins.</a> Journal of Vascular Surgery. 57, 1371-1382 (2013).</li><li>Vijayan, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+reduction+of+medial+and+intimal+thickening+in+porcine+saphenous+vein+grafts+with+a+polyglactin+biodegradable+external+sheath.">Long-term reduction of medial and intimal thickening in porcine saphenous vein grafts with a polyglactin biodegradable external sheath.</a> Journal of Vascular Surgery. 40, 1011-1019 (2004).</li><li>Jeremy, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+biology+of+saphenous+vein+grafts+fitted+with+external+synthetic+sheaths+and+stents.">On the biology of saphenous vein grafts fitted with external synthetic sheaths and stents.</a> Biomaterials. 28, 895-908 (2007).</li><li>Zilla, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Constrictive+external+nitinol+meshes+inhibit+vein+graft+intimal+hyperplasia+in+nonhuman+primates.">Constrictive external nitinol meshes inhibit vein graft intimal hyperplasia in nonhuman primates.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 136, 717-725 (2008).</li><li>Zilla, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utilization+of+shape+memory+in+external+vein-graft+meshes+allows+extreme+diameter+constriction+for+suppressing+intimal+hyperplasia:+a+non-human+primate+study.">Utilization of shape memory in external vein-graft meshes allows extreme diameter constriction for suppressing intimal hyperplasia: a non-human primate study.</a> Journal of Vascular Surgery. 49, 1532-1542 (2009).</li><li>Yeoman, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+constitutive+model+for+the+warp-weft+coupled+non-linear+behavior+of+knitted+biomedical+textiles.">A constitutive model for the warp-weft coupled non-linear behavior of knitted biomedical textiles.</a> Biomaterials. 31, 8484-8493 (2010).</li><li>Longchamp, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+external+mesh+reinforcement+to+reduce+intimal+hyperplasia+and+preserve+the+structure+of+human+saphenous+veins.">The use of external mesh reinforcement to reduce intimal hyperplasia and preserve the structure of human saphenous veins.</a> Biomaterials. 35, 2588-2599 (2014).</li><li>Saucy, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+pulsatile+perfusion+of+human+saphenous+veins+induces+intimal+hyperplasia+and+increased+levels+of+the+plasminogen+activator+inhibitor+1.">Ex vivo pulsatile perfusion of human saphenous veins induces intimal hyperplasia and increased levels of the plasminogen activator inhibitor 1.</a> European Surgical Research. Europaische Chirurgische Forschung. Recherches Chirurgicales Europeennes. 45, 50-59 (2010).</li><li>Dubuis, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atorvastatin-loaded+hydrogel+affects+the+smooth+muscle+cells+of+human+veins.">Atorvastatin-loaded hydrogel affects the smooth muscle cells of human veins.</a> The Journal of pharmacology and experimental. 347, 574-581 (2013).</li><li>Deglise, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+connexin43+expression+in+human+saphenous+veins+in+culture+is+associated+with+intimal+hyperplasia.">Increased connexin43 expression in human saphenous veins in culture is associated with intimal hyperplasia.</a> Journal of Vascular Surgery. 41, 1043-1052 (2005).</li><li>Muto, A., Model, L., Ziegler, K., Eghbalieh, S. D., Dardik, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+vein+graft+adaptation+to+the+arterial+circulation:+insights+into+the+neointimal+algorithm+and+management+strategies.">Mechanisms of vein graft adaptation to the arterial circulation: insights into the neointimal algorithm and management strategies.</a> Circulation Journal : Official Journal of the Japanese Circulation Society. 74, 1501-1512 (2010).</li><li>Tao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+murine+intimal+hyperplasia+model+founded+on+a+focal+carotid+stenosis.">A simplified murine intimal hyperplasia model founded on a focal carotid stenosis.</a> The American Journal of Pathology. 182, 277-287 (2013).</li><li>Berard, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salvage+treatment+for+venous+aneurysm+complicating+vascular+access+arteriovenous+fistula:+use+of+an+exoprosthesis+to+reinforce+the+vein+after+aneurysmorrhaphy.">Salvage treatment for venous aneurysm complicating vascular access arteriovenous fistula: use of an exoprosthesis to reinforce the vein after aneurysmorrhaphy.</a> European Journal of Vascular and Endovascular Surgery : the Official Journal of the European Society for Vascular Surgery. 40, 100-106 (2010).</li></ol>

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

تكشف هذه الدراسة المجراة سابقا نظام الوريد نضح (EVPS) لإجراء دراسات واسعة في الدورة الدموية عروق الإنسان. هذا النظام يسمح الأوردة الصافن نضح تحت معلمات الدورة الدموية محددة في غياب العوامل الالتهابية والنمو المشددة الصادرة عن تعميم الخلايا في الجسم الحي. وبالتالي، فإنه يوفر فهما أفضل للمسارات الأساسية تشارك في السيطرة على IH في عروق الإنسان الطعوم 5،11،12،15. اضطرابات الدورة الدموية استنساخه وكمية محدودة في الجسم الحي. وقد وصفت عدة إجراءات المجهرية الفئران المعقدة. باستخدام نموذج الالتفافية طعم إسوي عبر مداخلة من الوريد الأجوف من الماوس المانحة في الصحيح الشريان السباتي المشترك وخلق إضافي لربط فرع تدفق، منتصف الكسب غير المشروع أو تضيق الشريان السباتي المشترك، وتدفق وSS انخفضت بشكل حاد وتعزيز IH 3. الخارج مقابل يمكن إعادة عرض مزيد من الداخل يكون أمورrogated باستخدام منتصف الوصل، مقابل السباتي المشترك البعيدة تضيق 16. في الحيوانات الكبيرة (الأغنام والخنازير، والبابون)، الطعوم الالتفافية هي أسهل من الناحية الفنية، وتمثل نهجا جذابا لاختبار الأجهزة الحجم الإنسان ما قبل السريرية مثل شبكة المستخدمة في الدراسة 8-10. ومع ذلك، تكلفته وندرة الأدوات الجزيئية التحقق من صحة تحد من استخدام هذه الاستراتيجيات. أخيرا، هذه التلاعبات تدفق يغير باستمرار التوتر الجدار وتفشل لاستجواب التأسيسية واحد. بالإضافة إلى ذلك، العلاقات المعقدة بين ديناميكا الدم وجهاز المناعة والغدد الصماء مزيد تحد من تحليل لاعبا واحد. تنشأ العديد من القضايا مع استخدام EVPS. 1) التلوث الجرثومي منخفض الدرجة غالبا ما يرافق الحصاد الوريد البشري وغياب فيفو السابقين تعميم خلايا تقف باعتبارها سببا هاما للعدوى. يتم منع هذا بشكل رئيسي من قبل غسل اليدين القطع بشكل منفصل ثم التعقيم جميع المواد قبلاستخدام. وعلاوة على ذلك يتم تنفيذ التجميع في أقل من 90 دقيقة وتحت عقامة دقيق. 2) ختم أن يتحمله التعقيم المتكررة. لهذا السبب، تم استخدام مستطيل البناء PMMA-GS، وتجنب استخدام المفاصل والحد من تشوه. 3) يتم احتساب SS والتوتر الجدار في نقطة زمنية محددة، على أساس نصف قطر التجويف سفينة (علم الأنسجة)، وتدفق واللزوجة كونها ثابتة. إدماج التصوير الطولي (كاميرا عالية الوضوح، أو الليزر دوبلر) التي تراقب باستمرار قطر الوريد و / أو وتدفق توفير معلومات أكثر تفصيلا عن الاختلافات تدفق المحلية والسماح الحسابات سلالة دوري. 4) قد يكون شرائح الوريد موازية اثنين من الاختلافات غير المنضبط في الامتثال جدار ونصف قطرها. وبالتالي، قارنا فقط شرائح من نفس المنوال ونفترض أن تحت نفس الضغط، ونمط معدل تدفق مماثل في كل القطاعات. في هذه الدراسة، وقدمت الأوردة إلى تدفق الصفحي نابض. ومع ذلك، 50٪ ستحدث الآفات المفرطة التصنع باطنة الشريان جمعة في المناطق نهاية إلى الجانب perianastomotic من الكسب غير المشروع الوريد، حيث تعطل تدفق الصفحي. يمكن أن تكون على غرار الظروف المضطربة مع إضافة مضخة الثانية، غير متزامنة مع المضخة الأولى. سيتم إجراء دراسات مستقبلية لتقييم تحديدا تأثير اضطراب تدفق الصفحي على IH والتأثير المحتمل المفيد للشبكة التعزيز. ومن المثير للاهتمام، وهيكل مرن للشبكة يسمح التفاف كفافي في مواقع مفاغرة، كما أديت لإصلاح النواسير أمدمي 17 (الشكل 4). وبالتالي، يمكن للشبكة أن تكون مفيدة للحد من توسع perianastomotic، تعطل تدفق الصفحي وبالتالي تقليل IH في مواقع مفاغرة. قد يكون هذا مفيدا بشكل خاص في القاصي الالتفافية الكسب غير المشروع، أثرت كثيرا ما قطرها عدم تطابق بين الوريد والشريان الشظوي أو عظام الساق. وباختصار، فإن الإعداد هو موضح هنا يسمح نضح مواز ضد البشريةEINS، في ظل ظروف مماثلة الدورة الدموية. وتظهر هذه البيانات أن استخدام لmacroporous شبكة البوليستر أنبوبي الخارجية وسيلة فعالة للحد من تطوير IH في الوريد الطعوم إدراجها في بيئة الشرايين 11. هذا النظام يمكن أن تستفيد العديد من مجالات البحث. خاصة، يتضح كأداة قوية لإجراء دراسات ما قبل السريرية اختبار جدوى وكفاءة الطرق المختلفة للحد IH في المواد البشرية، ويعتبر إضافة قيمة إلى الجسم الحي في النماذج الحيوانية. سيتم تقييم الدعم أو المغلفة تنسجم مع وكلاء الصيدلانية الاصطناعية الأخرى التي تستخدم هذه الطريقة 6-10. وبالإضافة إلى ذلك، يمكن للمرء تصور لاختبار الجزيئات الدوائية المطبقة محليا لمنع IH في الأنسجة البشرية، في ظل الحالة الفسيولوجية القريب. تدخلات العلاج الجيني هي أيضا قابلة للتحقيق، transducing شريحة الوريد إلى بإفراط أو الجينات المستهدفة صمت الفائدة. في الختام، سيقوم نظامنا زيادة الامم المتحدة لديناderstanding مساهمة للأمراض الدورة الدموية الوريد الكسب غير المشروع الإنسان. أنه يوفر منصة مبتكرة لاختبار استراتيجيات علاجية جديدة ويمكن أن تنشأ باعتبارها &quot;مقاعد البدلاء إلى جانب أداة الترجمة&quot;.

أمراض القلب والأوعية الدموية هي السبب الرئيسي للمراضة والوفيات في الدول الغربية 1. على الرغم من التقدم المحرز في العلاجات اللف، تبقى عملية جراحية في العمود الفقري العلاجات المعاصرة، تتم الآن أكثر من نصف مليون ترقيع الوريد سنويا في الولايات المتحدة. ومع ذلك، على الرغم من عقود من البحث، 30-60٪ أقل من الطعوم أقصى الوريد تفشل في غضون السنوات الأولى بسبب تضخم باطنة (IH) 2. القوات الميكانيكية، والإجهاد المنخفض بشكل خاص القص (SS) والتوتر الشديد الجدار، تقوم بدور محوري في بدء وتطوير هذه الاستجابة المفرطة التصنع 3،4. لمعالجة هذه القضية، تم إنشاؤها بحكم فيفو الأوردة نظام نضح (EVPS) للدراسة، في ظل ظروف رقابة صارمة الدورة الدموية (ضغط وإجهاد القص)، وسلوك الصافن عروق الإنسان. في هذه الدراسة، بعد الإدراج إلى الدورة الدموية مثل الشرايين، وارتفاع ضغط (يعني = 100 ملم زئبق) كان كافيا لتحفيز proliferation والهجرة من خلايا العضلات الملساء في طبقة باطنة (IH) 5. واشارت دراسات الثدييات استخدام التعزيز الخارجي وسيلة فعالة لدعم &quot;ريد arterialized&quot; ومواجهة التغيرات في الدورة الدموية الحادة الوريد يواجه مزروع مرة واحدة إلى الوسط الشرياني. شبكة منعت الإفراط في انتفاخ، زيادة إجهاد القص، وخفض التوتر الجدار وبالتالي IH 6-10. ومع ذلك، فإن الآليات الكامنة وانطباقها على عروق الإنسان في تحسين الالتفافية المباح لم يتميز بشكل كامل. تم استخدام EVPS جهدنا لمقارنة، في حالة محاكاة التعديلات الوريد تواجه إدراج مرة واحدة إلى نظام الشرياني (إجهاد القص العالية والضغط)، وسلوك الإنسان الأوردة الصافن في غياب وجود macroporous شبكة البوليستر أنبوبي الخارجية. عن طريق منع إعادة عرض المرضية وIH، قدمت شبكة دليل على فعاليته المحتملة السريرية 11 </sup&gt;. هذه الدراسة 1) يقدم نموذجا للخارج الحي الصافن عروق الإنسان نضح تحت ضغط رقابة وإجهاد القص 2) يدل على أن الكلية التي يسهل اختراقها الخارجية البوليستر شبكة يقلل IH وتوفر معلومات حاسمة لتطبيقه السريرية المحتملة.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1113">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:453px;">Name</td>
			<td style="width:371px;">Company</td>
			<td style="width:145px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:144px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RPMI 1640 - Glutamax</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>61870-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"><a name="RANGE!A3">Penicilline/Streptomycine/Fungizone</a></td>
			<td>Bioconcept</td>
			<td>4-02F00-H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dextran from Leuconostoc spp. 500 gr.</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>31390</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tampon PBS CHUV pH 7.1-7.3 1 lt.</td>
			<td>Laboratorium und Grosse Apotheke Dr. G. Bichsel AG</td>
			<td>100 0 324 00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cryosectionning embedding medium - Tissue-Tek OCT Compound</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-373-65</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Silicon Tubing (Peroxide) L/S 16 (96400-16 ) - 7.5m</td>
			<td>Idex Health &#38; Science GMBH</td>
			<td>MF0037ST</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Y-splitter&#160;</td>
			<td>Idex Health &#38; Science GMBH</td>
			<td>Y-connector</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">35 mm Culture dish</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>CLS430165-100EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">15 ml Falcon tube</td>
			<td>BD Bioscence</td>
			<td>352096</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">50 ml Falcon tube</td>
			<td>BD Bioscence</td>
			<td>352098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Gearing pump - Reglo-Z</td>
			<td>Idex Health &#38; Science GMBH</td>
			<td>SM 895&#160;</td>
			<td>&#160;App-Nr 03736-00194</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pump Head</td>
			<td>Idex Health &#38; Science GMBH</td>
			<td>MI0008&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Monitoring Kit TRANSPAC IV</td>
			<td>icumedical</td>
			<td>011-0J736-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">20 mL Syringes</td>
			<td>B. Braun Medical SA</td>
			<td>4612041-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Etibon 3-0 FS-2</td>
			<td>Ethicon- Johnson&#38;Johnson</td>
			<td>EH7346H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mesh ProVena 6-8mm</td>
			<td>B. Braun Medical SA</td>
			<td>1105012-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NaCl: Sodium Chlorure Solution perfusion 0.9% (100 ml)</td>
			<td>B. Braun Medical SA</td>
			<td>534534</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Masterflex L/S Standard Drive</td>
			<td>Cole-Parmer Instrument Co</td>
			<td>7521-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Acquisition card</td>
			<td>National Instruments</td>
			<td>PCI-6024 E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Flowmeter module</td>
			<td>Transonic Systems Inc.</td>
			<td>TS410 and T402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Stopcock with 3-ways</td>
			<td>BD Connexta Luerlock</td>
			<td>394600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Millex Filter</td>
			<td>Milian</td>
			<td>SE2M229I04</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

procedure for human saphenous veins ex vivo perfusion and external reinforcement

عماد العلاجات المعاصرة لمرض الانسداد الشرياني الوريدي واسعة هي الالتفافية الكسب غير المشروع. ومع ذلك، هدد متانته من تضخم باطنة (IH) الذي يؤدي في النهاية إلى انسداد الأوعية وفشل الكسب غير المشروع. القوات الميكانيكية، وإجهاد القص المنخفض وخاصة التوتر العالي الحائط، ويعتقد لبدء ومواصلة هذه التغيرات الخلوية والجزيئية، ولكن يبقى مساهمتها بالضبط إلى أن تفككت. لتقييم انتقائي دور ضغط وإجهاد القص على بيولوجيا IH، تم إنشاء نظام نضح خارج الحي (EVPS) ليروي شرائح الصافن عروق الإنسان في ظل نظام الشرايين (إجهاد القص العالية والضغط العالي). مزيد من الابتكارات التقنية سمحت نضح وقت واحد من جزأين من نفس المنوال، واحدة عززت مع شبكة خارجية. كانت تحصد عروق باستخدام تقنية عدم اللمس ونقل على الفور إلى المختبر لتجميع في EVPS. شريحة واحدة من ISOL طازجةلم perfused لated الوريد (السيطرة، يوم 0). تم perfused لشرائح اثنين آخرين لمدة تصل إلى 7 أيام، واحد يجري محمية تماما مع 4 مم (قطر) شبكة خارجية. الضغط، سرعة التدفق، ومعدل النبض وراقب باستمرار وتعديلها لمحاكاة الظروف السائدة الدورة الدموية في الشريان الفخذي. عند الانتهاء من نضح، تم إلغاء تحميل الأوردة ويستخدم لالنسيجية والتحليل الجزيئي. تحت فيفو السابقين الظروف، نضح الضغط العالي (الشرايين، متوسط ​​= 100 ملم زئبق) كافية لتوليد IH وإعادة تشكيل عروق الإنسان. يتم تخفيض هذه التعديلات في وجود شبكة البوليستر الخارجية.

يوفر EVPS أداة قيمة لتقييم مستقل قوات الدورة الدموية في الوريد الصافن البشري الطعوم وإعادة IH. ويبين الشكل 1 غرفة نضح والدعم الوريد. في أرقام 1A و B، ودعم الوريد قبل (الشكل 1A) وبعد (الشكل 1B) التجمع، على التوالي، والمصورة. وهو يتألف (من أعلى إلى أسفل) من 1 عادي أنبوب الفولاذ المقاوم للصدأ قياس 9 سم، التي هي بمثابة دعم لمدة 2 على شكل L القطع التي يمكن أن تنزلق بسهولة (من اليسار إلى اليمين) وتوفر تقنية موثوقة ل ضبط حجم الدعم إلى الوريد. كل من هذه القطع حاصل على القرص بوم لتناسب اسطوانة الصلب (موصل الوريد) ثابتة في مكانها بواسطة المسمار متكامل (رأس السهم). يبين الشكل 1C-D غرفة نضح وحدها (C) وبعد الإدراج الدعم المنوال (D). على غرفة نضح، مصممة المنخفضات لعقد الدعم في مكان الوريد (أعلى) وتجنب مجعد من الأنبوب الذي يربط القادمة والخروج من الوريد (القاع). ويبين الشكل 2 الصور في الوقت الحقيقي (الشكل 2A) والتمثيل التخطيطي (الشكل 2B) من EVPS. غرفة نضح والأوردة والدعم لها، فضلا عن عمود الضغط، يتم الاحتفاظ بها في بيئة تسيطر عليها (درجة الحرارة، CO 2 و O 2) في حين أن مضخة، ضغط حاقن، وأجهزة التحكم عن البقاء خارج الحاضنة. ويوضح الشكل المضخة تستعد (1) الذي يولد إشارة نابض يسيطر عليها جهاز كمبيوتر (2)، التي تراقب سرعة تدفق (3)، الضغط (4)، وتسيطر على الضغط الانبساطي الحد الأدنى (5)؛ وترتبط جزأين من نفس الوريد الصافن بالتوازي مع مضخة نضح نضح داخل غرف منفصلة (6A و 6B) توضع في حاضنة ثقافة الخلية. في الشكل (3)يظهر تحليل القياس النسيجي أن التعزيز الخارجي يمنع تضخم باطنة وإعادة سائل الإعلام المرضية لوحظ خلاف ذلك بعد 7 أيام تحت ضغط عال (نظام الشرياني، متوسط ​​= 100 ملم زئبق) الارواء. في الشكل 3A، المقاطع النسيجية تمثيلية الملون لالهيماتوكسيلين يوزين (HE) يكشف بطانة التجويف بواسطة نوى الخلايا البطانية ونوى SMCS في طبقة وسائل الإعلام في جميع الظروف. أرقام 3B-C معارض التمثيلي فان Gieson مطاطا الصفيحة ( VGEL) ملطخة أقسام. في الشكل 3B، تزداد سماكة البطانية (IH) في الأوردة perfused لفي الضغط العالي (يعني = 100 ملم زئبق) لمدة 7 أيام مقابل السيطرة على الأوردة غير perfused ل، انخفض ظاهرة إلى حد كبير في وجود شبكة خارجية. يوضح الشكل 3C لإعادة عرض المرضية إلى الخارج ووسائل الإعلام رقيق في الأوردة يتعرض إلى 7 أيام من الضغط الشرياني. يتم منع هذا إلى حد كبير من التعزيز الخارجي. Furthermorه، في الشكل 3D، تلوين ثلاثي الألوان ماسون (الازرق = النسيج الضام، والأحمر = العضلات) هذه الزميلة إعادة المرضية مع استمرار احدة فقط من ثلاث طبقات العضلات وتراكم خلايا العضلات الملساء في الطبقة الداخلية (البطانية). التعزيز الخارجي يحافظ على توزيع SMCS وسائل الإعلام هيكل. ويوضح الشكل 4 التطبيق السريري الحالي للشبكة الخارجية. وتقدم مثالا توضيحيا عن طريق التعزيز الخارجي من أمهات الدم الشريانية الوريدية-الناسور (الوصول إلى غسيل الكلى). يبين الشكل 4A تمثيل الوقت خلال تعزيز الوريد (من أعلى إلى أسفل). أولا، تم وضع شبكة حول أنبوب جامدة في حين يتم إصلاح أقصى الوريد إلى مغزل (اللوحة العليا). ثم، تم سحب الوريد من خلال أنبوب بفضل مغزل. مرة واحدة كان الوريد في مكان، وقد تراجع الأنبوب ببطء، وترك شبكة حول الوريد (شpper وحة والمتوسطة). في هذه الحالة بالذات، وقد يتكرر هذا الإجراء على كلا الجانبين من الأوردة، وجمعت شرائح الأوردة وتعزيزات من قبل شبكة مفاغرة نهاية إلى نهاية (اللوحة السفلى). يوفر الشكل 4B وجهة نظر أكبر من نهاية الشريانية الوريدية مفاغرة تفرضه جانب، وتبين أن شبكة وملفوفة حول مفاغرة من خلال ربطه على طول الجدار الخلفي للشريان. <img alt="الشكل 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/52079/52079fig1highres.jpg" width="500" /> الشكل 1. دعم الوريد وغرفة نضح. A. وتتكون دعم الوريد من 1 أنبوب عادي، على شكل L 2 قطعة، وأقراص واسطوانات (تشكل أعلى إلى أسفل). B. الدعم الوريد تجميعها مرة واحدة. C. الشخصي للغرفة الارواء. D. ونضح تم تصميم غرفة لعقد في مكان الوريد الدعم ويسمح لها الاتصالأيون إلى الوريد وأنابيب التوصيل. <img alt="الشكل 2" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/52079/52079fig2highres.jpg" width="500" /> الرقم 2. فيفو السابقين نظام الارواء. A. إن تجميع تماما EVPS في الحاضنة خلية ثقافة. B. تمثيل تخطيطي. 1) مضخة توليد موجة نابض قلبي الشكل. 2) الكمبيوتر السيطرة على الضغط والتدفق (نوع، ومعدل والسعة). 3) تدفق متر. 4) محول الضغط - خط الشرياني. 5) حاقن الضغط. 6) و perfused جزأين من نفس الوريد الصافن دون (6A) أو مع تعزيز شبكة خارجي (6B). <img alt="الرقم 3" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/52079/52079fig3highres.jpg" width="500" /> الشكل 3. التعزيز الخارجي يمنع باطنة تضخم. و. المقاطع النسيجية التمثيلية ملطخة الهيماتوكسيلين يوزين (HE). شريط يمثل 50 ميكرومتر. قبل الميلاد. المقاطع النسيجية التمثيلية الملون لالإيلاستين (VGEL). ل = م = التجويف سائل الإعلام، IH = باطنة تضخم. شريط يمثل 50 ميكرومتر. المقاطع النسيجية D. الممثل ملطخة ماسون ثلاثي الألوان. يمثل شريط 50 ميكرون. <img alt="الرقم 4" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/52079/52079fig4highres.jpg" width="500" /> الرقم 4. التعزيز الخارجي للناسور أم الدم. الصور A. الزمني سياق تعزيز الوريد (من الأعلى إلى الأسفل). B. الصورة للالشريانية الوريدية نهاية إلى جانب مفاغرة.

Watch this Scientific Journal Video about Procedure for Human Saphenous Veins Ex Vivo Perfusion and External Reinforcement at JoVE.com

Procedure for Human Saphenous Veins Ex Vivo Perfusion and External Reinforcement

لا تزال غير مفهومة الآليات التي تؤدي إلى تطوير تضخم باطنة (IH) وفشل الكسب غير المشروع الوريد. توضح هذه الدراسة نظام خارج الحي ليروي عروق الإنسان في ظل التدفق والضغط التي تسيطر عليها. وعلاوة على ذلك تعزيز كفاءة شبكة خارجي للحد تم تقييم تطوير IH.

إجراءات الصافن عروق الإنسان<em&gt; فيفو السابقين</em&gt; الإرواء والتعزيز الخارجي

The mainstay of contemporary therapies for extensive occlusive arterial disease is venous bypass graft. However, its durability is threatened by intimal ...

procedure-for-human-saphenous-veins-ex-vivo-perfusion-external

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Medicine

Procedure for Human Saphenous Veins Ex Vivo Perfusion and External Reinforcement

11.1K Views.  Brigham and Women's Hospital/Harvard Medical School.  لا تزال غير مفهومة الآليات التي تؤدي إلى تطوير تضخم باطنة (IH) وفشل الكسب غير المشروع الوريد. توضح هذه الدراسة نظام خارج الحي ليروي عروق الإنسان في ظل التدفق والضغط التي تسيطر عليها. وعلاوة على ذلك تعزيز كفاءة شبكة خارجي للحد تم تقييم تط?...

Video: Procedure for Human Saphenous Veins Ex Vivo Perfusion and External Reinforcement

Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. In most transplant regions 20-30% of patients on the waiting list for liver transplantation die without receiving an organ transplant or are delisted for disease progression. One strategy to increase the donor pool is the utilization of marginal grafts, such as fatty livers, grafts from older donors, or donation after cardiac death (DCD). The current preservation technique of cold static storage is only poorly tolerated by marginal livers resulting in significant organ damage. In addition, cold static organ storage does not allow graft assessment or repair prior to transplantation.
These shortcomings of cold static preservation have triggered an interest in warm perfused organ preservation to reduce cold ischemic injury, assess liver grafts during preservation, and explore the opportunity to repair marginal livers prior to transplantation. The optimal pressure and flow conditions, perfusion temperature, composition of the perfusion solution and the need for an oxygen carrier has been controversial in the past.
In spite of promising results in several animal studies, the complexity and the costs have prevented a broader clinical application so far. Recently, with enhanced technology and a better understanding of liver physiology during ex vivo perfusion the outcome of warm liver perfusion has improved and consistently good results can be achieved.
This paper will provide information about liver retrieval, storage techniques, and isolated liver perfusion in pigs. We will illustrate a) the requirements to ensure sufficient oxygen supply to the organ, b) technical considerations about the perfusion machine and the perfusion solution, and c) biochemical aspects of isolated organs.

Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts

Marginal grafts, such as fatty livers, grafts from older donors, or livers retrieved after cardiac death (DCD) tolerate conventional, cold static storage only poorly. We developed a novel model of subnormothermic ex vivo liver perfusion for preservation, assessment, and repair of marginal liver grafts prior to transplantation.

تقنية Subnormothermic<em&gt; فيفو السابقين</em&gt; الكبد الإرواء للتخزين، تقييم، وإصلاح الطعوم الكبد الهامشية

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. In most transplant regions 20-30% of patients on the waiting list for ...

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed lung transplantation in humans to become more readily available by enabling the ability to assess organs and expand the donor pool. As this technology expands and improves, the ability to potentially evaluate and improve the quality of substandard lungs prior to transplant is a critical need. In order to more rigorously evaluate these approaches, a reproducible animal model needs to be established that would allow for testing of improved techniques and management of the donated lungs as well as to the lung-transplant recipient. In addition, an EVLP animal model of associated pathologies, e.g., ventilation induced lung injury (VILI), would provide a novel method to evaluate treatments for these pathologies. Here, we describe the development of a rat EVLP lung program and refinements to this method that allow for a reproducible model for future expansion. We also describe the application of this EVLP system to model VILI in rat lungs. The goal is to provide the research community with key information and &#8220;pearls of wisdom&#8221;/techniques that arose from trial and error and are critical to establishing an EVLP system that is robust and reproducible.

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed lung transplantation in humans to become more readily available by enabling the ability to assess organs and expand the donor pool. Here, we describe the development of a rat EVLP program and refinements that allow for a reproducible model for future expansion.

طريقة معزولة<em&gt; فيفو السابقين</em&gt; الإرواء الرئة في الفئران نموذج: الدروس المستفادة من تطوير برنامج EVLP الجرذ

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed ...

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial cells tend to lose hormone receptor expression. Widely used hormone receptor positive breast cancer cell lines are of limited relevance to the in vivo situation. Here, we describe an ex vivo model to study hormone action in the human breast. Fresh human breast tissue specimens from surgical discard material such as reduction mammoplasties or mammectomies are mechanically and enzymatically digested to obtain tissue fragments containing ducts and lobules and multiple stromal cell types. These tissue microstructures kept in basal medium without growth factors preserve their intercellular contacts, the tissue architecture, and remain hormone responsive for several days. They are readily processed for RNA and protein extraction, histological analysis or stored in freezing medium. Fluorescence activated cell sorting (FACS) can be used to enrich for specific cell populations. This protocol provides a straightforward, standard approach for translational studies with highly complex, varied human specimens.

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

We have developed a novel ex vivo model to study hormone action in the human breast. It is based on tissue microstructures isolated from surgical breast tissue specimens which preserve tissue architecture, intercellular interactions, and paracrine signaling.

ل<em&gt; السابقين فيفو</em&gt; نموذج لدراسة هرمون العمل في الثدي البشري

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial ...

Human Dupuytren's Ex Vivo Culture for the Study of Myofibroblasts and Extracellular Matrix Interactions

Organ fibrosis or &#8220;scarring&#8221; is known to account for a high death toll due to the extensive amount of disorders and organs affected (from cirrhosis to cardiovascular diseases). There is no effective treatment and the in vitro tools available do not mimic the in vivo situation rendering the progress of the out of control wound healing process still enigmatic.
To date, 2D and 3D cultures of fibroblasts derived from DD patients are the main experimental models available. Primary cell cultures have many limitations; the fibroblasts derived from DD are altered by the culture conditions, lack cellular context and interactions, which are crucial for the development of fibrosis and weakly represent the derived tissue. Real-time PCR analysis of fibroblasts derived from control and DD samples show that little difference is detectable. 3D cultures of fibroblasts include addition of extracellular matrix that alters the native conditions of these cells. 
As a way to characterize the fibrotic, proliferative properties of these resection specimens we have developed a 3D culture system, using intact human resections of the nodule part of the cord. The system is based on transwell plates with an attached nitrocellulose membrane that allows contact of the tissue with the medium but not with the plastic, thus, preventing the alteration of the tissue. No collagen gel or other extracellular matrix protein substrate is required. The tissue resection specimens maintain their viability and proliferative properties for 7 days. This is the first &#8220;organ&#8221; culture system that allows human resection specimens from DD patients to be grown ex vivo and functionally tested, recapitulating the in vivo situation.

Human Dupuytren's Ex Vivo Culture for the Study of Myofibroblasts and Extracellular Matrix Interactions

Dupuytren&#8217;s disease (DD) is a fibroproliferative disease of the palm of the hand. Here, we present a protocol to culture resection specimens from DD in a three-dimensional (3D) culture system. Such short-term culture system allows preservation of the 3D structure and molecular properties of the fibrotic tissue.

الإنسان دوبوترين<em&gt; فيفو السابقين</em&gt; الثقافة لدراسة Myofibroblasts وخارج الخلية مصفوفة التفاعلات

Organ fibrosis or &#8220;scarring&#8221; is known to account for a high death toll due to the extensive amount of disorders and organs affected (from ...

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

In contrast to conventional static cold preservation (0-4 &#176;C), ex situ machine perfusion may provide better preservation of donor livers. Continuous perfusion of organs provides the opportunity to improve organ quality and allows ex situ viability assessment of donor livers prior to transplantation. This video article provides a step by step protocol for ex situ normothermic machine perfusion (37 &#176;C) of human donor livers using a device that provides a pressure and temperature controlled pulsatile perfusion of the hepatic artery and continuous perfusion of the portal vein. The perfusion fluid is oxygenated by two hollow fiber membrane oxygenators and the temperature can be regulated between 10 &#176;C and 37 &#176;C. During perfusion, the metabolic activity of the liver as well as the degree of injury can be assessed by biochemical analysis of samples taken from the perfusion fluid. Machine perfusion is a very promising tool to increase the number of livers that are suitable for transplantation.

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

Here we present a protocol describing oxygenated ex situ machine perfusion of donor liver grafts. This article contains a step by step protocol to procure and prepare the liver graft for machine perfusion, prepare the perfusion fluid, prime the perfusion machine and perform oxygenated normothermic machine perfusion of the liver graft.

خارج الموقع سوي الحرارة آلة الإرواء من الأكباد المانحة

In contrast to conventional static cold preservation (0-4 &#176;C), ex situ machine perfusion may provide better preservation of donor livers. Continuous ...

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

Kidney transplantation has become a well-established treatment option for patients with end-stage renal failure. The persisting organ shortage remains a serious problem. Therefore, the acceptance criteria for organ donors have been extended leading to the usage of marginal kidney grafts. These marginal organs tolerate cold storage poorly resulting in increased preservation injury and higher rates of delayed graft function. To overcome the limitations of cold storage, extensive research is focused on alternative normothermic preservation methods.
Ex vivo normothermic organ perfusion is an innovative preservation technique. The first experimental and clinical trials for ex vivo lung, liver, and kidney perfusions demonstrated favorable outcomes.
In addition to the reduction of cold ischemic injury, the method of normothermic kidney storage offers the opportunity for organ assessment and repair. This manuscript provides information about kidney retrieval, organ preservation techniques, and isolated ex vivo normothermic kidney perfusion (NEVKP) in a porcine model. Surgical techniques, set up for the perfusion solution and the circuit, potential assessment options, and representative results are demonstrated.

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

The severe organ shortage has resulted in increased use of marginal kidney grafts for transplantation. This has triggered interest in alternative storage methods, since marginal grafts especially tolerate cold storage poorly. The technique of normothermic ex vivo kidney perfusion (NEVKP) represents a novel preservation method for kidney grafts prior to &#160;transplantation.

سوي الحرارة<em&gt; السابقين فيفو</em&gt; الإرواء الكلى للحفاظ على الكلى الطعوم قبل الزرع

Kidney transplantation has become a well-established treatment option for patients with end-stage renal failure. The persisting organ shortage remains a ...

Generation of Microtumors Using 3D Human Biogel Culture System and Patient-derived Glioblastoma Cells for Kinomic Profiling and Drug Response Testing

The use of patient-derived xenografts for modeling cancers has provided important insight into cancer biology and drug responsiveness. However, they are time consuming, expensive, and labor intensive. To overcome these obstacles, many research groups have turned to spheroid cultures of cancer cells. While useful, tumor spheroids or aggregates do not replicate cell-matrix interactions as found in vivo. As such, three-dimensional (3D) culture approaches utilizing an extracellular matrix scaffold provide a more realistic model system for investigation. Starting from subcutaneous or intracranial xenografts, tumor tissue is dissociated into a single cell suspension akin to cancer stem cell neurospheres. These cells are then embedded into a human-derived extracellular matrix, 3D human biogel, to generate a large number of microtumors. Interestingly, microtumors can be cultured for about a month with high viability and can be used for drug response testing using standard cytotoxicity assays such as 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) and live cell imaging using Calcein-AM. Moreover, they can be analyzed via immunohistochemistry or harvested for molecular profiling, such as array-based high-throughput kinomic profiling, which is detailed here as well. 3D microtumors, thus, represent a versatile high-throughput model system that can more closely replicate in vivo tumor biology than traditional approaches.

Patient-derived xenografts of glioblastoma multiforme can be miniaturized into living microtumors using 3D human biogel culture system. This in vivo-like 3D tumor assay is suitable for drug response testing and molecular profiling, including kinomic analysis.

جيل من Microtumors عن طريق نظام الثقافة 3D Biogel الإنسان وخلايا ورم أرومي دبقي المستمدة من المريض لKinomic التنميط والدواء استجابة اختبار

The use of patient-derived xenografts for modeling cancers has provided important insight into cancer biology and drug responsiveness. However, they are ...

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, normothermic ex vivo liver perfusion (NEVLP) has been introduced as a method to evaluate and modify organ function. NEVLP has many advantages in comparison to hypothermic and subnormothermic perfusion including reduced preservation injury, restoration of normal organ function under physiologic conditions, assessment of organ performance, and as a platform for organ repair, remodeling, and modification. Both murine and porcine NEVLP models have been described. We demonstrate a rat model of NEVLP and use this model to show one of its important applications &#8212; the use of a therapeutic molecule added to liver perfusate. Catalase is an endogenous reactive oxygen species (ROS) scavenger and has been demonstrated to decrease ischemia-reperfusion in the eye, brain, and lung. Pegylation has been shown to target catalase to the endothelium. Here, we added pegylated-catalase (PEG-CAT) to the base perfusate and demonstrated its ability to mitigate liver preservation injury. An advantage of our rodent NEVLP model is that it is inexpensive in comparison to larger animal models. A limitation of this study is that it does not currently include post-perfusion liver transplantation. Therefore, prediction of the function of the organ post-transplantation cannot be made with certainty. However, the rat liver transplant model is well established and certainly could be used in conjunction with this model. In conclusion, we have demonstrated an inexpensive, simple, easily replicable NEVLP model using rats. Applications of this model can include testing novel perfusates and perfusate additives, testing software designed for organ evaluation, and experiments designed to repair organs.

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

There is a significant liver donor shortage, and criteria for liver donors have been expanded. Normothermic ex vivo liver perfusion (NEVLP) has been developed to evaluate and modify organ function. This study demonstrates a rat model of NEVLP and tests the ability of pegylated-catalase, to mitigate liver preservation injury.

نموذج حيوانات صغيرة من نضح الكبد نورموثيرميك السابقين فيفو

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, ...

Optocardiography and Electrophysiology Studies of Ex Vivo Langendorff-perfused Hearts

Small animal models are most commonly used in cardiovascular research due to the availability of genetically modified species and lower cost compared to larger animals. Yet, larger mammals are better suited for translational research questions related to normal cardiac physiology, pathophysiology, and preclinical testing of therapeutic agents. To overcome the technical barriers associated with employing a larger animal model in cardiac research, we describe an approach to measure physiological parameters in an isolated, Langendorff-perfused piglet heart. This approach combines two powerful experimental tools to evaluate the state of the heart: electrophysiology (EP) study and simultaneous optical mapping of transmembrane voltage and intracellular calcium using parameter sensitive dyes (RH237, Rhod2-AM). The described methodologies are well suited for translational studies investigating the cardiac conduction system, alterations in action potential morphology, calcium handling, excitation-contraction coupling and the incidence of cardiac alternans or arrhythmias.

The objective of this study was to establish a method for investigating cardiac dynamics using a translational animal model. The described experimental approach incorporates dual-emission optocardiography in conjunction with an electrophysiological study to assess electrical activity in an isolated, intact porcine heart model.

دراسات الفيزيولوجيا الكهربية والدراسات الكهربائية السابقة لل فيفو لانغرندوف

Small animal models are most commonly used in cardiovascular research due to the availability of genetically modified species and lower cost compared to ...

Determining and Controlling External Power Output During Regular Handrim Wheelchair Propulsion

The use of a manual wheelchair is critical to 1% of the world&#39;s population. Human powered wheeled mobility research has considerably matured, which has led to improved research techniques becoming available over the last decades. To increase the understanding of wheeled mobility performance, monitoring, training, skill acquisition, and optimization of the wheelchair-user interface in rehabilitation, daily life, and sports, further standardization of measurement set-ups and analyses is required. A crucial stepping-stone is the accurate measurement and standardization of external power output (measured in Watts), which is pivotal for the interpretation and comparison of experiments aiming to improve rehabilitation practice, activities of daily living, and adaptive sports. The different methodologies and advantages of accurate power output determination during overground, treadmill, and ergometer-based testing are presented and discussed in detail. Overground propulsion provides the most externally valid mode for testing, but standardization can be troublesome. Treadmill propulsion is mechanically similar to overground propulsion, but turning and accelerating is not possible. An ergometer is the most constrained and standardization is relatively easy. The goal is to stimulate good practice and standardization to facilitate the further development of theory and its application among research facilities and applied clinical and sports sciences around the world.

Accurate and standardized assessment of external power output is crucial in the evaluation of physiological, biomechanical, and perceived stress, strain, and capacity in manual wheelchair propulsion. The current article presents various methods to determine and control power output during wheelchair propulsion studies in the laboratory and beyond.

تحديد ومراقبة خرج الطاقة الخارجية أثناء دفع كرسي متحرك منتظم

The use of a manual wheelchair is critical to 1% of the world&#39;s population. Human powered wheeled mobility research has considerably matured, which ...

إجراءات الصافن عروق الإنسان

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

تقنية Subnormothermic

طريقة معزولة

ل

الإنسان دوبوترين

خارج الموقع سوي الحرارة آلة الإرواء من الأكباد المانحة

سوي الحرارة

جيل من Microtumors عن طريق نظام الثقافة 3D Biogel الإنسان وخلايا ورم أرومي دبقي المستمدة من المريض لKinomic التنميط والدواء استجابة اختبار

نموذج حيوانات صغيرة من نضح الكبد نورموثيرميك السابقين فيفو

دراسات الفيزيولوجيا الكهربية والدراسات الكهربائية السابقة لل فيفو لانغرندوف

تحديد ومراقبة خرج الطاقة الخارجية أثناء دفع كرسي متحرك منتظم