Mohammed R. Milad is supported by NIMH grant R01 MH097880 and institutional funds from the Department of Psychiatry at MGH.

ملاحظة: وقد تمت الموافقة على جميع الإجراءات الواردة في هذا البروتوكول من قبل اللجنة الفرعية للبحوث رعاية الحيوان، والتي هي بمثابة لجنة رعاية واستخدام المؤسسية الحيوان (IACUC) لمستشفى ماساتشوستس العام، وتكون في الامتثال مع المعاهد الوطنية للصحة المبادئ التوجيهية. 1. السكن الحيوانية والإجراءات المناولة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ولدى وصوله، والكبار منزل سبراغ داولي الفئران الإناث حوالي 8-10 أسابيع من العمر (وزنها 200-225 ز) في مجموعات من 3-4 بوصة صناديق بلاستيكية مع أغطية فراش رقائق الخشب. المحافظة عليها على نظام غذائي من الوصول بالمال وبالشهرة أيضا الإعلان إلى تشاو والمياه و12 ساعة ضوء / دورة الظلام. ترك الفئران ليتأقلم مع ظروف السكن والحيوان منشأة مدة لا تقل عن 1 في الاسبوع. ملاحظة: تتم جميع الإجراءات في هذه المخطوطة خلال دورة الضوء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وبعد هذه الفترة التأقلم، والتعامل مع جميع الحيوانات لمدة 5 دقائق كل لمدة 2-3 أيام. اختيار بشكل صحيح حتى الفئران في وقت واحد (بدعم من الجذع وليس من ذيله)،عقد لهم بشكل آمن، والحيوانات الأليفة لهم خلال هذا الوقت. التعامل مع الحيوانات التي تظهر أكثر أكد ثاب، أو القلق لفترات أطول من الوقت. هل هذا لتقليل التعامل مع الإجهاد، والتي يمكن أن تؤثر على الخطوات التالية في هذا البروتوكول. ملاحظة: عدد الأيام وكمية من التعامل مع الحيوانات يمكن أن تختلف بين المختبرات المختلفة الزمن؛ ومع ذلك، ينبغي أن تكون هذه متسقة بين التجارب داخل نفس المختبر. </li></ol> 2. رصد نزو جنسي: المهبلية المسحة رتوش وتلطيخ الداخلي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل 0.9٪ محلول ملحي (كلوريد الصوديوم الذائب في الماء المقطر). بلل قضيب من القطن ذات الرؤوس في هذا الحل. صمة عار طرف باستخدام منشفة ورقية لتجنب oversaturation، مما قد يؤدي إلى عدم كفاية جمع أو فقدان الخلايا العينة. عقد الذيل إلى أعلى بعيدا عن فتحة المهبل، إدراج بلطف غيض القطن في القناة المهبلية ولفة حول الجدران لالتقاط خلايا المهبل فضفاضة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا يبول الحيوان على السريرطن طرف، مع استبدال واحدة جديدة، وتلوث البول سيجعل من الصعب على تحديد المرحلة. كن حذرا للغاية حتى لا تسبب الضيق للحيوان أثناء هذا الإجراء بسبب التعرض للإجهاد سوف يعطل نزو جنسي. عندما ينظف، نهدف إلى تحقيق الإدراج السريع والانسحاب ليست عميقة جدا لتقليل تحفيز اضافي لعنق الرحم، والتي يمكن أن تحدث حمل كاذب. يمكن التعرف على حمل كاذب باعتبارها دورة اللاحلقية داقية الذي يستمر عادة لمدة 12 يوما، أي أيام متتالية من هجوع الودق 25: ملاحظة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة بعناية طرف قضيب ولفة على شريحة المجهر وصفت مسبقا. تجنب الضغط على أسفل من الصعب جدا كما الكثير من السوائل على الشريحة يمكن أن تجعل من الصعب تحديد المرحلة مرة واحدة جافة. ملاحظة: واحد الشريحة يمكن أن تحتوي عدة أيام لكل حيوان، على الرغم من أن هذا يمكن أن يتم وفقا لتفضيلات الفردية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأكد من نقل العينة على الشريحة. جمع عينات لسيفرآل أيام متتالية على شريحة واحدة لتكون قادرة على أفضل مسار وتحديد اليومية مراحل داقية التغييرات. ملاحظة: إذا كان ذلك ممكنا، كما أنها مثالية إذا الشعب جمع عينات لا تزال هي نفسها لجميع الحيوانات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة الشريحة جافة، تبدأ بروتوكول تلطيخ لتحديد المرحلة. استخدام عدة تلطيخ (انظر جدول المواد)، تزج الشرائح 10 مرات في تثبيتي (الضوء الأزرق)، 10 مرات في حل وصمة عار (الوردي)، و 5 مرات في حل مباين (اللون الأرجواني). شطف الشرائح بلطف تحت الماء الجاري. السماح الشرائح تماما الهواء الجاف قبل عرض تحت المجهر. ملاحظة: تتكون دورة طويلة وداقية عادة 4-5 يوم (بهذا الترتيب): شبق (E)، تلية الوداق (M)، هجوع الودق (D)، ومقدمات الوداق (P) 26. يتميز شبق من قبل، وخلايا متقرن الزرقاء، تلية الوداق من قبل الكريات البيض ومزيج من خلايا متقرن والأنوية، هجوع الودق هو مماثل لتلية الوداق في وجود أنواع الخلايا باستثناء أنهم متفرق جدا، ومقدمات الوداق من قبل المجاميع الأرجواني الملطخةخلايا الأنوية (الشكل 1). هناك إجراءات تلطيخ المختلفة، بالإضافة إلى تلك المذكورة أعلاه، التي هي نفس القدر من الفعالية لالمهبلية علم الخلايا تشويه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع العينات لمدة سنتين على الأقل دورات كاملة (~ 8-10 أيام) من أجل رصد المراحل بدقة قبل التجريب. أن تكون متسقة مع الوقت من اليوم وتؤخذ العينات. جمع عينات مسحة المهبل يوميا في جميع أنحاء وحتى نهاية التجربة. </li></ol> 3. قبل التعرض <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل بدء التجربة، قبل فضح الحيوانات إلى تكييف غرف تسمح للحيوانات حتى يتأقلم مع السياق (غرف تكييف) قبل أي اختبار السلوكي. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل فضح الإناث إلى غرف تكييف (الموجود في مربعات تخفيف الصوت) مع أضواء المنزل لمدة 20-30 دقيقة يوميا لمدة 3 أيام قبل أي التجريب. تعيين مربع أنهم باسم الغرفة الخاصة لدراسة تتعرض مسبقا. ر نظيفة تماماانه صناديق (الجدران وصواني) بين الدورات، والحيوانات لإزالة الروائح لأنها يمكن أن تؤثر على السلوك ونزو جنسي. </li></ol></li></ol> 4. يوم 1: التعويد / تكييف الخوف <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة وقد تم التحقق من الحيوانات ليكون في مرحلة الشياع من دوراتها داقية، وتبدأ مرحلة التعود / تكييف التجربة لمدة 3 أيام. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خذ ما قبل هجة تدابير أساسية من التجمد (CS) العروض السابقة لهجة الأولى مكيفة التحفيز على كل يوم من التجربة. القيام بذلك عن طريق الحصول على عشرات المئة تجميد (بقسمة ثواني قضى متحرك قبل مدة من المحاكمة، مضروبا 100) أثناء الفاصل الزمني التحفيز غائبا الوقت في بداية أول CS-حدها المحاكمة قبل بداية CS. ملاحظة: يمكن استخدام هذه التدابير لتقييم ومقارنة مستويات تجميد أساسية مع تلك خلال التعود، تكييف، الانقراض، والتذكير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لإجراء تدريب الانقراض خلال المرحلة تلية الوداق،شرط الفئران في اليوم الأخير من للشبق. مسحة وتحديد المرحلة داقية (الخطوة 2) كل يوم قبل بدء بروتوكول تجريبي (تكييف / الانقراض / استدعاء). وبما أن المرحلة شبق قد تستمر لفترة أطول من يوم واحد، واستخدام دورة التاريخ للتنبؤ طول مراحل لتحديد متى الحيوانات جاهزة لبدء التدريب. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في غرف تكييف، قم بتوصيل القدم صدمة الطابق الشبكة لمولد التحفيز الكهربائي. استخدام مستوى التحفيز من 0،5-0،6 مللي أمبير كما التحفيز دون شروط (US). استخدام كيلوهرتز 4، 80 ديسيبل لهجة كما المثير الشرطي (CS). ملاحظة: قد تختلف هذه المعلمات عبر المختبرات ويجوز تعديلها للتكييف الأمثل. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا تطلب البرنامج تحليل تجميد الإشارات البصرية (على العكس من الزمانية)، وشارك في تفعيل ضوء LED مع لهجة. وضع ضوء على السطح الخارجي للغرفة استثابي، في إطار الفيديو. في بداية كل محاكمة، وتفعيل ضوء LED والحفاظ عليه مضاءة حتى نهاية تشرينالبريد المحاكمة. ملاحظة: هذا الضوء هو غير مرئي من قبل الحيوان ويخدم فقط كعلامة لبدء ونهاية المحاكمة داخل ملفات الفيديو المسجلة (لاستخدامها لقياس السلوك التجميد). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الحيوانات في غرف تكييف لمدة 5 محاكمات CS-حدها من التعود. عقب الجلسة التعود على الفور، نفذ 7 محاكمات CS-الولايات المتحدة تقرن تكييف الخوف. تأكد من أن لهجة CS يستمر لمدة 30 ثانية وcoterminates مع صدمة 0.5 ثانية في الولايات المتحدة. تجارب تشغيل في جميع الدورات (التعود، تكييف، الانقراض، وأذكر) مع فاصل زمني intertrial متغير في المتوسط ​​3 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في نهاية الدورة تكييف، والعودة إلى أقفاص الحيوانات وطنهم وإلى مرفق الحيوان حتى اليوم التالي. </li></ol> 5. يوم 2: إعداد استراديول <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مسحة وتحديد المرحلة داقية لجميع الحيوانات التي خضعت ليوم 1 من هذا البروتوكول. إعداد استراديول (المعروف أيضا باسم E2، 17beta استراديول، أوبيتا استراديول) لمدة 15 ميكروغرام / كغ جرعة الحقن تحت الجلد باستخدام زيت السمسم أو 0.9٪ المالحة كما السيارة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لحساب كمية استراديول للتحضير للحقن، استخدم وزن الجسم من جميع الحيوانات، والتي تم قياسها وتسجيلها عندما كانوا مكيفة في يوم 1 من هذا البروتوكول. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء حسابات لتوحيد حجم تدار من استراديول (أي 0.2 مل) في الفئران. منذ استراديول من الصعب حل بسبب الصلابة المياه، ويتطلب كمية كبيرة من المذيبات لجرعة صغيرة، وإعداد محلول المخزون عن طريق خلط استراديول في زيت السمسم على نار حتى يذوب. ومن ثم يمكن تمرير حل من خلال مرشح 0.22 ميكرون لإزالة الملوثات. على سبيل المثال، إضافة حجم المحسوب ل/ 1 مل من محلول الأسهم زيت السمسم 3،000 ميكروغرام استراديول لإجمالي كمية المطلوبة من زيت السمسم من أجل تحقيق 15 ميكروغرام / كغ جرعة في حجم 0.2 مل حقن لكل حيوان. ملاحظة: بدلا من ذلك، استخدم أشكال أخرى من هرمون الاستروجين ثا<html> ر هي المياه القابلة للذوبان وأسهل حل. </li></ol> 6. يوم 2: إدارة استراديول / الانقراض التدريب <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدارة تحت الجلد استراديول. رفع الجلد فضفاض بين لوح الكتف من الرقبة في السؤال لطيف وإدراج إبرة حقنة في المثلث الذي يتكون من طيات الجلد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 30 من زمن المباراة بعد الحقن تحت الجلد من استراديول، ووضع الحيوانات في غرف تكييف مرة أخرى ويبدأ التدريب الانقراض. في هذه الدورة الانقراض، تنفيذ 20 تجربة CS-حدها، مع كل محاكمة يتكون من 30 ثانية، و 4 كيلو هرتز، 80 ديسيبل لهجة، وقدمت في فترة intertrial متغير في المتوسط ​​3 دقائق. ملاحظة: تأثير استراديول على استدعاء يحدث عندما تدار استراديول قبل التدريب الانقراض أو مباشرة بعد انقراض. ولم يلاحظ تأثير 4 ساعات بعد الانقراض، لذلك فمن المستحسن لحقن قريبة في الوقت المناسب لبداية أو نهاية الدورة التدريبية 15. </li></ol>. لو &quot;&gt; 7 يوم 3: الانقراض إستدعاء <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 24 ساعة بعد التدريب الانقراض، مسحة الحيوانات التي أنجزت يوم 1 و 2 من هذا البروتوكول. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الحيوانات في غرف تكييف المسندة إليها (نفس يوم 1 و 2). بدء جلسة استدعاء الانقراض من خلال تقديم 3 محاكمات CS-حدها (المحاكمات الثلاث من استدعاء الانقراض)، الذي يتكون من فقط 3.80 ديسيبل محاكمات CS-حدها مع فترات intertrial مماثلة ل20 محاكمات تدار للتدريب الانقراض كما هو موضح في الخطوة 6.2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عند الانتهاء من الدورة استدعاء، والعودة إلى أقفاص الحيوانات وطنهم. </li></ol> 8. تحليل البيانات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحصول على البيانات السلوكية من خلال الفيديو وتحليلها باستخدام برامج الكمبيوتر. ملاحظة: يمكن أيضا تجميد عشرات تحسب من قبل المجرب الذي هو أعمى إلى العلاج من تعاطي المخدرات عن طريق توقيت نوبات تجميد أثناء العرض CS كل محاكمة يدويا، معبرا عنه كنسبة مئوية من الوقت الذي يقضيه تجميد خلال لهجة. تجميد هوالتي يحددها انعدام تام للحركة باستثناء التنفس أثناء المحاكمات 30 ثانية CS-الولايات المتحدة. حساب في المئة تجميد بقسمة ثواني قضى التجمد (متحرك) من خلال 30 ثانية (مدة المحاكمة) مضروبا في 100. </li></ol>

<ol>
	<li>Baron-Cohen, S., Knickmeyer, R. C., Belmonte, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+differences+in+the+brain:+implications+for+explaining+autism.">Sex differences in the brain: implications for explaining autism.</a> Science. 310 (5749), 819-823 (2005).</li><li>Voyer, D., Voyer, S., Bryden, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Magnitude+of+sex+differences+in+spatial+abilities:+a+meta-analysis+and+consideration+of+critical+variables.">Magnitude of sex differences in spatial abilities: a meta-analysis and consideration of critical variables.</a> Psychological Bulletin. 117 (2), 250-270 (1995).</li><li>Pinker, S., Spelke, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Conversation+with+Steven+Pinker+and+Elizabeth+Spelke.">A Conversation with Steven Pinker and Elizabeth Spelke.</a> The Science of Gender and Science. , (2005).</li><li>Hampson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen-related+variations+in+human+spatial+and+articulatory-motor+skills.">Estrogen-related variations in human spatial and articulatory-motor skills.</a> Psychoneuroendocrinology. 15, 97-111 (1990).</li><li>Hampson, E., Kimura, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reciprocal+effects+of+hormonal+fluctuations+on+human+motor+and+perceptual-spatial+skills.">Reciprocal effects of hormonal fluctuations on human motor and perceptual-spatial skills.</a> Behavioral Neuroscience. 102, 456-459 (1988).</li><li>Hampson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variations+in+sex-related+cognitive+abilities+across+the+menstrual+cycle.">Variations in sex-related cognitive abilities across the menstrual cycle.</a> Brain and Cognition. 14 (1), 26-43 (1990).</li><li>Kilpatrick, D. G., Resnick, H. S., Milanak, M. E., Miller, M. W., Keyes, K. M., Friedman, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=National+estimates+of+exposure+to+traumatic+events+and+PTSD+prevalence+using+DSM-IV+and+DSM-5+criteria.">National estimates of exposure to traumatic events and PTSD prevalence using DSM-IV and DSM-5 criteria.</a> Journal of Traumatic Stress. 26 (5), 537-547 (2013).</li><li>Breslau, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gender+differences+in+trauma+and+posttraumatic+stress+disorder.">Gender differences in trauma and posttraumatic stress disorder.</a> Journal of Gender-Specific Medicine. 5 (1), 34-40 (2002).</li><li>Frans, O., Rimmo, P. A., Aberg, L., Fredrikson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trauma+exposure+and+post-traumatic+stress+disorder+in+the+general+population.">Trauma exposure and post-traumatic stress disorder in the general population.</a> Acta Psychiatrica Scandinavica. 111 (4), 291-299 (2005).</li><li>Breslau, N., Kessler, R. C., Chilcoat, H. D., Schultz, L. R., Davis, G. C., Andreski, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trauma+and+posttraumatic+stress+disorder+in+the+community:+the+1996+Detroit+Area+Survey+of+Trauma.">Trauma and posttraumatic stress disorder in the community: the 1996 Detroit Area Survey of Trauma.</a> Archives of General Psychiatry. 55 (7), 626-632 (1996).</li><li>Seedat, S., Stein, D. J., Carey, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Post-traumatic+stress+disorder+in+women:+epidemiological+and+treatment+issues.">Post-traumatic stress disorder in women: epidemiological and treatment issues.</a> CNS Drugs. 19 (5), 411-427 (2005).</li><li>Holbrook, T. L., Hoyt, D. B., Stein, M. B., Sieber, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gender+differences+in+long-term+posttraumatic+stress+disorder+outcomes+after+major+trauma:+women+are+at+higher+risk+of+adverse+outcomes+than+men.">Gender differences in long-term posttraumatic stress disorder outcomes after major trauma: women are at higher risk of adverse outcomes than men.</a> Journal of Trauma. 53 (5), 882-888 (2002).</li><li>Labad, J., Menchon, J. M., Alonso, P., Segalas, C., Jimenez, S., Jaurrieta, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gender+differences+in+obsessive-compulsive+symptom+dimensions.">Gender differences in obsessive-compulsive symptom dimensions.</a> Depression and Anxiety. 25 (10), 832-838 (2008).</li><li>Gupta, R. R., Sen, S., Diepenhorst, L. L., Rudick, C. N., Maren, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen+modulates+sexually+dimorphic+contextual+fear+conditioning+and+hippocampal+long-term+potentiation+(LTP)+in+rats.">Estrogen modulates sexually dimorphic contextual fear conditioning and hippocampal long-term potentiation (LTP) in rats.</a> Brain Research. 888, 356-365 (2001).</li><li>Milad, M. R., Igoe, S. A., Lebron-Milad, K., Novales, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrous+cycle+phase+and+gonadal+hormones+influence+conditioned+fear+extinction.">Estrous cycle phase and gonadal hormones influence conditioned fear extinction.</a> Neuroscience. 164 (3), 887-895 (2009).</li><li>Zeidan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estradiol+modulates+medial+prefrontal+cortex+and+amygdala+activity+during+fear+extinction+in+women+and+female+rats.">Estradiol modulates medial prefrontal cortex and amygdala activity during fear extinction in women and female rats.</a> Biological Psychiatry. 70 (10), 920-927 (2011).</li><li>Lebron-Milad, K., Milad, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+differences,+gonadal+hormones+and+the+fear+extinction+network:+implications+for+anxiety+disorders.">Sex differences, gonadal hormones and the fear extinction network: implications for anxiety disorders.</a> Biology of Mood &amp; Anxiety Disorders. 2 (3), (2012).</li><li>Rey, C. D., Lipps, J., Shansky, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine+d1+receptor+activation+rescues+extinction+impairments+in+low-estrogen+female+rats+and+induces+cortical+layer-specific+activation+changes+in+prefrontal-amygdala+circuits.">Dopamine d1 receptor activation rescues extinction impairments in low-estrogen female rats and induces cortical layer-specific activation changes in prefrontal-amygdala circuits.</a> Neuropsychopharmacology. 39 (5), 1282-1289 (2013).</li><li>Str&#246;m, J. O., Theodorsson, A., Ingberg, E., Isaksson, I. M., Theodorsson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovariectomy+and+17&#946;-estradiol+Replacement+in+Rats+and+Mice:+A+Visual+Demonstration.">Ovariectomy and 17&#946;-estradiol Replacement in Rats and Mice: A Visual Demonstration.</a> Journal of Visualized Experiments. , e4013 (2012).</li><li>Markham, J. A., Pych, J. C., Juraska, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+hormone+replacement+to+aged+ovariectomized+female+rats+benefits+acquisition+of+the+morris+water+maze.">Ovarian hormone replacement to aged ovariectomized female rats benefits acquisition of the morris water maze.</a> Hormones &amp; Behavior. 42 (3), 284-293 (2002).</li><li>Markowska, A. L., Savonenko, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effectiveness+of+estrogen+replacement+in+restoration+of+cognitive+function+after+long-term+estrogen+withdrawal+in+aging+rats.">Effectiveness of estrogen replacement in restoration of cognitive function after long-term estrogen withdrawal in aging rats.</a> Journal of Neuroscience. 22 (24), 10985-10995 (2002).</li><li>Bredemann, T. M., McMahon, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=17&#946;+Estradiol+Increases+Resilience+and+Improves+Hippocampal+Synaptic+Function+in+Helpless+Ovariectomized+Rats.">17&#946; Estradiol Increases Resilience and Improves Hippocampal Synaptic Function in Helpless Ovariectomized Rats.</a> Psychoneuroendocrinology. 42, 77-88 (2014).</li><li>Grueso, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early,+but+not+late+onset+estrogen+replacement+therapy+prevents+oxidative+stress+and+metabolic+alterations+caused+by+ovariectomy.">Early, but not late onset estrogen replacement therapy prevents oxidative stress and metabolic alterations caused by ovariectomy.</a> Antioxidants and Redox Signaling. 20 (2), 236-246 (2014).</li><li>Shughrue, P. J., Bushnell, C. D., Dorsa, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen+receptor+messenger+ribonucleic+acid+in+female+rat+brain+during+the+estrous+cycle:+a+comparison+with+ovariectomized+females+and+intact+males.">Estrogen receptor messenger ribonucleic acid in female rat brain during the estrous cycle: a comparison with ovariectomized females and intact males.</a> Endocrinology. 131 (1), 381-388 (1992).</li><li>Frye, C. A., Erskine, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+time+of+mating+and+paced+copulation+on+induction+of+pseudopregnancy+in+cyclic+female+rats.">Influence of time of mating and paced copulation on induction of pseudopregnancy in cyclic female rats.</a> Journal of Reproduction and Fertility. 90 (2), 375-385 (1990).</li><li>Becker, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategies+and+methods+for+research+on+sex+differences+in+brain+and+behavior.">Strategies and methods for research on sex differences in brain and behavior.</a> Endocrinology. 146, 1650-1673 (2005).</li><li>Westwood, F. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+female+rat+reproductive+cycle:+a+practical+histological+guide+to+staging.">The female rat reproductive cycle: a practical histological guide to staging.</a> Toxicologic Pathology. 36 (3), 375-384 (2008).</li><li>Hurn, P. D., Macrae, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen+as+a+Neuroprotectant+in+Stroke.">Estrogen as a Neuroprotectant in Stroke.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. 20, 631-652 (2000).</li><li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals.">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> Journal of Pharmacology and Pharmacotherapeutics. 1 (2), 87-93 (2010).</li><li>Gillies, G. E., McArthur, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen+actions+in+the+brain+and+the+basis+for+differential+action+in+men+and+women:+a+case+for+sex-specific+medicines.">Estrogen actions in the brain and the basis for differential action in men and women: a case for sex-specific medicines.</a> Pharmacological Reviews. 62 (2), 155-198 (2010).</li><li>Tolin, D. F., Foa, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+differences+in+trauma+and+posttraumatic+stress+disorder:+a+quantitative+review+of+25+years+of+research.">Sex differences in trauma and posttraumatic stress disorder: a quantitative review of 25 years of research.</a> Psychological Bulletin. 132, 959-992 (2006).</li></ol>

واضعو هذا المخطوط ليس لديها مصالح مالية منافسة أو الصراعات الأخرى التي تهم الكشف عنها.

وقد تمت دراسة الخوف الانقراض على نطاق واسع في ذكور الفئران مع الآليات العصبية التوسط مشروط الانقراض الخوف تحديدها وتقييمها في إطار مختلف التلاعب. وقد درست عدد قليل نسبيا من الدراسات إناث الفئران أو دور هرمونات الغدد التناسلية في خوف الانقراض. لدراسة تحديدا آثار هرم?...

ويلاحظ الفروق بين الجنسين المتأصلة عبر السلوكيات المعرفية المختلفة ونماذج التعلم في كل من البشر والقوارض. على سبيل المثال، تم الإبلاغ عن أن النساء عموما القدرات اللفظية والتفصيل المنحى أقوى، في حين أن الرجال لديهم القدرات الحيزية أفضل 1-3. قد تكون هذه الفروق بين الجنسين يرجع ذلك جزئيا إلى تأثير الهرمونات الغدد التناسلية. مستويات استراديول عالية تحسين الأداء على المهام التي تكون فيها المرأة أفضل، ولكن تسوء الأداء على المهام أن الرجال عادة صنعا 4-6. على الرغم من أن هذه الأدلة مقنعة، وقدرة محدودة على السيطرة تماما البيئات التجريبية في الدراسات الإنسانية يجعل من الصعب تحديد ما إذا كان يمكن أن تعزى هذه التأثيرات على السلوك خصيصا لالهرمونات. الدراسات على الحيوانات، في المقابل، يسمح للظروف التي تسيطر عليها بشكل كامل. على الرغم من أن تم تحديد الآليات العصبية الأساسية من الخوف الانقراض ومدروسة في الذكور، فإنه من غير الواضح ما إذا كانتهذه الأنظمة هي نفسها في الإناث أو كيف تتغير عبر نزو جنسي. وتستخدم تكييف الخوف والانقراض على نطاق واسع النماذج السلوكية في القوارض والبشر لإجراء الدراسات المتعلقة اضطرابات القلق. وبالنظر إلى أن النساء لديهم مخاطر أعلى للاضطرابات القلق فضلا عن ارتفاع مدة وشدة أعراض 7-13، فمن الأهمية بمكان لتشمل الإناث في هذه الدراسات. ويمكن أن يعزى النقص في تمثيل الإناث في هذا البحث لتحديات المرحلة ودقي مراقبة والمحاسبة عن الآثار السلوكية الهرمونات الجنسية. المختبرات التي تقوم بفحص الإناث في هذا الصدد القضايا اللقاء الذي غالبا ما تذهب دون الإبلاغ عنها أو لم يتم وصفها في طرق دراستهم. الأدلة الناشئة في القوارض يشير إلى أن يتم ضبط الفروق بين الجنسين في خوف الانقراض عن طريق الهرمونات الغدد التناسلية 14-18. في تكييف الخوف، ويتم تدريب الحيوانات للخوف من التحفيز معين. بعد عدد من العروض غير المدعومة منالتحفيز، والحيوانات لا تعلم للخوف من جديلة، وهي عملية تسمى الانقراض. جيدا كيف يتعلم الحيوان ويعزز الذاكرة التعلم يمكن ملاحظتها خلال اختبار استدعاء الانقراض نظرا لبعض الوقت بعد التدريب انقراض هذه المهمة. أقل التعبير الخوف أثناء استدعاء الانقراض يوضح جيد توطيد الذاكرة الانقراض. وتشير النتائج الأخيرة من مختبرنا أن هرمون الاستروجين يمكن أن تعدل توطيد الذاكرة الانقراض الخوف وتحسين استدعاء الانقراض. على وجه التحديد، إناث الفئران التي انطفأت في مقدمات الوداق، ومرحلة من مراحل نزو جنسي خلالها تعميم مستويات هرمون الاستروجين الذروة، المعرض تعزيز الاحتفاظ الذاكرة الانقراض. في المقابل، الإناث التي انطفأت في انخفاض الاستروجين عرض المرحلة تلية الوداق فقيرة نسبيا استدعاء الانقراض، والتي يمكن أن تحسن مع إدارة استراديول خارجي قبل أو مباشرة بعد التدريب الانقراض 15،16. الآليات العصبية للذاكرة الانقراض التوحيد (بما فيuding دور هرمونات الغدد التناسلية) في الإناث ليست واضحة. في حيوانات المختبر، ويمكن التحقيق في دور الهرمونات باستخدام الغازية إجراءات الاستئصال الجراحي مثل الإخصاء واستئصال المبيض. وبعد التعافي من عملية جراحية، وغالبا ما هرمونات الغدد التناسلية التلاعب خارجيا أثناء أداء مهمة السلوكية 19. وقد قدم هذا النهج المعلومات الهامة حول الهرمونات الجنسية ومفيد لأنه يسمح للتلاعب تسيطر عليها بشكل جيد للهرمونات الغدد التناسلية (من حيث التوقيت وجرعة) 20-23. هذا النهج، ومع ذلك، لا تقييم تأثير التقلبات التي تحدث بشكل طبيعي أن تحدث في شتى أرجاء نزو جنسي كما أنها لا تمثل الحيوانات &quot;طبيعية&quot;، وبالتالي الحد من احتمال متعدية للدراسات الإنسانية. تم موثقة جيدا أن مستويات هرمون الجنس الأنثوي الذروة والانخفاض في مراحل محددة من نزو جنسي، والتغيرات مستقبلات هرمون الاستروجين التعبير ضمن دورة،وبعد استئصال المبيض 24. وبالتالي، هناك حاجة لإجراء دراسات على الإناث مع الغدد التناسلية سليمة وصقل تصاميم تجريبية لدراسة موثوق الآثار أن الدول عالية ومنخفضة الاستروجين قد يكون على الإناث طيلة حياتها. يركز هذا البروتوكول على تأثير الاستروجين على أنظمة العصبية الحيوية تشارك في خوف الانقراض. فهو يصف كيفية: 1) ترصد بدقة نزو جنسي، 2) إعداد جرعات فعالة من استراديول لإدارة النظامية، و3) اتباع النموذج السلوكي الذي يتضمن تكييف الخوف والانقراض، وأذكر في ركوب الدراجات بشكل طبيعي إناث الفئران. يمكن تعديل هذا البروتوكول مع التلاعب الدوائية وأدوات أخرى الخلوية والجزيئية للمساعدة من الدراسات لفهم أفضل الفروق بين الجنسين التي لوحظت في مشروط يخشون السلوك الانقراض. لاحظ أن الإجراءات الموضحة أدناه هي تلك المستخدمة داخل المختبر لدينا، وهناك وجود عدد من الاختلافات من هذه الإجراءات طن الأدب.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="613">
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:120px;">Name</td>
			<td style="width:159px;">Company</td>
			<td style="width:135px;">Catalog number</td>
			<td style="width:199px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:120px;">Fear conditioning chamber</td>
			<td style="width:159px;">Coulbourn Instruments</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:120px;">Graphic State</td>
			<td style="width:159px;">Coulbourn Instruments</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:120px;">Sound-attenuating box</td>
			<td style="width:159px;">Med Associates, Inc.</td>
			<td style="width:135px;">NIR-022MD</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:120px;">Estradiol</td>
			<td style="width:159px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">E1024</td>
			<td style="width:199px;">In sesame oil for subcutaneous injection</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:120px;">Sesame oil</td>
			<td style="width:159px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">S3547-250ML</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:120px;">Freezescan</td>
			<td style="width:159px;">Cleversys, Inc.</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:120px;">Dip quick stain</td>
			<td style="width:159px;">Jorgensen Laboratories, Inc.</td>
			<td style="width:135px;">J0322A1, J0322A2, J0322A3</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:120px;">Cotton-tipped applicators</td>
			<td style="width:159px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:135px;">23-400-114</td>
			<td style="width:199px;">6-inch, sterile</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:120px;">0.9% saline</td>
			<td style="width:159px;">LabChem, Inc.</td>
			<td style="width:135px;">LC23460-2</td>
			<td style="width:199px;">Sodium chloride w/v</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:120px;">Selectfrost microscope slides</td>
			<td style="width:159px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:135px;">12-550-003</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:120px;">Virex II 256</td>
			<td style="width:159px;">Diversey, Inc.</td>
			<td style="width:135px;">5019317</td>
			<td style="width:199px;">Dilute 1:256 with water</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:120px;">Luer-Lok Tip 1ml Syringes</td>
			<td style="width:159px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:135px;">309628</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:120px;">Hypodermic disposable needles</td>
			<td style="width:159px;">Exelint International, Co.</td>
			<td style="width:135px;">26402</td>
			<td style="width:199px;">26-gauge</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

protocol for studying extinction of conditioned fear in naturally cycling female rats

انقراض الخوف مشروط تمت دراسة على نطاق واسع في القوارض الذكور. في الآونة الأخيرة، كانت هناك عدد متزايد من الدراسات تشير إلى أن الآليات العصبية لبعض المهام السلوكية والسلوكيات استجابة مختلفة في الإناث والذكور. يمكن استخدام الإناث في الدراسات البحثية تمثل تحديا بسبب اختلاف الهرمونات الغدد التناسلية أثناء الدورة الشهرية وداقية. يصف هذا البروتوكول إجراءات راسخة التي هي مفيدة في التحقيق في دور هرمون الاستروجين في خوف توطيد الذاكرة الانقراض في إناث الفئران. المرحلة من نزو جنسي والإدارة الاستروجين الخارجية قبل التدريب الانقراض يمكن أن تؤثر استدعاء الانقراض بعد 24 ساعة. تقنية ينظف المهبل لتحديد المرحلة ودقي الموصوفة هنا الإيدز الفحص والتلاعب ركوب الدراجات بشكل طبيعي هرمونات الغدد التناسلية. استخدام هذا النموذج القوارض الأساسي قد يزيد تحدد الآليات التي هرمون الاستروجين يمكن أن تعدل الذاكرة الانقراض الخوف فيالإناث.

في هذا الخوف الانقراض بروتوكول التذكير، وقد تم قياس المئة تجميد كمؤشر على الخوف. أظهرت الحيوانات التي انطفأت بشكل جيد واحتفظت الذاكرة من التدريب الانقراض الخوف منخفض في اليوم الأخير من الاختبارات السلوكية خلال استدعاء الانقراض. الفئران الذكور والإناث لا تختلف كثير...

Watch this Scientific Journal Video about Protocol for Studying Extinction of Conditioned Fear in Naturally Cycling Female Rats at JoVE.com

Protocol for Studying Extinction of Conditioned Fear in Naturally Cycling Female Rats

Gonadal hormones such as estrogen modulate memory formation in a number of experimental paradigms including fear extinction memory. This protocol describes a set of methods for investigating the influence of gonadal hormones specifically during extinction in naturally cycling females, including estrous cycle monitoring and exogenous estrogen administration.

بروتوكول لدراسة الانقراض من الخوف مشروطة في ركوب الدراجات وبطبيعة الحال إناث الفئران

Extinction of conditioned fear has been extensively studied in male rodents. Recently, there have been an increasing number of studies indicating that ...

protocol-for-studying-extinction-conditioned-fear-naturally-cycling

Research

JoVE Journal

Behavior

13.1K Views.  Massachusetts General Hospital. Gonadal hormones such as estrogen modulate memory formation in a number of experimental paradigms including fear extinction memory. This protocol describes a set of methods for investigating the influence of gonadal hormones specifically during extinction in naturally cycling females, including estrous cycle monitoring and exogenous estrogen administration.

Video: Protocol for Studying Extinction of Conditioned Fear in Naturally Cycling Female Rats

Stereotaxic Microinjection of Viral Vectors Expressing Cre Recombinase to Study the Role of Target Genes in Cocaine Conditioned Place Preference

Microinjecting recombinant adenoassociated viral (rAAV) vectors expressing Cre recombinase into distinct mouse brain regions to selectively knockout genes of interest allows for enhanced temporally- and regionally-specific control of gene deletion, compared to existing methods. While conditional deletion can also be achieved by mating mice that express Cre recombinase under the control of specific gene promoters with mice carrying a floxed gene, stereotaxic microinjection allows for targeting of discrete brain areas at experimenter-determined time points of interest. In the context of cocaine conditioned place preference, and other cocaine behavioral paradigms such as self-administration or psychomotor sensitization that can involve withdrawal, extinction and/or reinstatement phases, this technique is particularly useful in exploring the unique contribution of target genes to these distinct phases of behavioral models of cocaine-induced plasticity. Specifically, this technique allows for selective ablation of target genes during discrete phases of a behavior to test their contribution to the behavior across time. Ultimately, this understanding allows for more targeted therapeutics that are best able to address the most potent risk factors that present themselves during each phase of addictive behavior.

This article describes how to microinject viral vectors into mouse brain and then test in a conditioned place preference paradigm that includes an acquisition, extinction and reinstatement phase.

حقن مكروي التجسيمي من ناقلات فيروسية وإذ تعرب عن لجنة المساواة العرقية recombinase البكتيري المحور إلى دراسة دور الجينات المستهدفة في الكوكايين مكيفة مكان ميول

Microinjecting recombinant adenoassociated viral (rAAV) vectors expressing Cre recombinase into distinct mouse brain regions to selectively knockout genes ...

A Procedure to Study the Effect of Prolonged Food Restriction on Heroin Seeking in Abstinent Rats

In human drug addicts, exposure to drug-associated cues or environments that were previously associated with drug taking can trigger relapse during abstinence. Moreover, various environmental challenges can exacerbate this effect, as well as increase ongoing drug intake.
The procedure we describe here highlights the impact of a common environmental challenge, food restriction, on drug craving that is expressed as an augmentation of drug seeking in abstinent rats.
Rats are implanted with chronic intravenous i.v. catheters, and then trained to press a lever for i.v. heroin over a period of 10-12 days. Following the heroin self-administration phase the rats are removed from the operant conditioning chambers and housed in the animal care facility for a period of at least 14 days. While one group is maintained under unrestricted access to food (sated group), a second group (FDR group) is exposed to a mild food restriction regimen that results in their body weights maintained at 90% of their nonrestricted body weight. On day 14 of food restriction the rats are transferred back to the drug-training environment, and a drug-seeking test is run under extinction conditions (i.e.&#160;lever presses do not result in heroin delivery).
The procedure presented here results in a highly robust augmentation of heroin seeking on test day in the food restricted rats. In addition, compared to the acute food deprivation manipulations we have used before, the current procedure is a more clinically relevant model for the impact of caloric restriction on drug seeking. Moreover, it might be closer to the human condition as the rats are not required to go through an extinction-training phase before the drug-seeking test, which is an integral component of the popular reinstatement procedure.

A procedure that allows a demonstration of robust augmentation of drug seeking in food-restricted rats is described. Following heroin self-administration training, rats go through an abstinence period, in a drug-free environment, during which they are mildly food restricted. Drug seeking is then tested in the drug-associated environment.

إجراء لدراسة تأثير الغذاء المطول تقييد على الهيروين المفضل في الجرذان متقشف

In human drug addicts, exposure to drug-associated cues or environments that were previously associated with drug taking can trigger relapse during ...

Contextual and Cued Fear Conditioning Test Using a Video Analyzing System in Mice

The contextual and cued fear conditioning test is one of the behavioral tests that assesses the ability of mice to learn and remember an association between environmental cues and aversive experiences. In this test, mice are placed into a conditioning chamber and are given parings of a conditioned stimulus (an auditory cue) and an aversive unconditioned stimulus (an electric footshock). After a delay time, the mice are exposed to the same conditioning chamber and a differently shaped chamber with presentation of the auditory cue. Freezing behavior during the test is measured as an index of fear memory. To analyze the behavior automatically, we have developed a video analyzing system using the ImageFZ application software program, which is available as a free download at http://www.mouse-phenotype.org/. Here, to show the details of our protocol, we demonstrate our procedure for the contextual and cued fear conditioning test in C57BL/6J mice using the ImageFZ system. In addition, we validated our protocol and the video analyzing system performance by comparing freezing time measured by the ImageFZ system or a photobeam-based computer measurement system with that scored by a human observer. As shown in our representative results, the data obtained by ImageFZ were similar to those analyzed by a human observer, indicating that the behavioral analysis using the ImageFZ system is highly reliable. The present movie article provides detailed information regarding the test procedures and will promote understanding of the experimental situation.

This article presents a protocol for a contextual and cued fear conditioning test using a video analyzing system to assess fear learning and memory in mice.

السياقية وملقن الخوف تكييف اختبار باستخدام نظام تحليل الفيديو في الفئران

The contextual and cued fear conditioning test is one of the behavioral tests that assesses the ability of mice to learn and remember an association ...

Trace Fear Conditioning in Mice

In this experiment we present a technique to measure learning and memory. In the trace fear conditioning protocol presented here there are five pairings between a neutral stimulus and an unconditioned stimulus. There is a 20 sec trace period that separates each conditioning trial. On the following day freezing is measured during presentation of the conditioned stimulus (CS) and trace period. On the third day there is an 8 min test to measure contextual memory. The representative results are from mice that were presented with the aversive unconditioned stimulus (shock) compared to mice that received the tone presentations without the unconditioned stimulus. Trace fear conditioning has been successfully used to detect subtle learning and memory deficits and enhancements in mice that are not found with other fear conditioning methods. This type of fear conditioning is believed to be dependent upon connections between the medial prefrontal cortex and the hippocampus. One current controversy is whether this method is believed to be amygdala-independent. Therefore, other fear conditioning testing is needed to examine amygdala-dependent learning and memory effects, such as through the delay fear conditioning.

In the following experiment we describe a protocol for trace fear conditioning in mice. This type of associative memory includes a trace period that separates the neutral stimulus and the unconditioned stimulus.

تتبع تكييف الخوف في الفئران

In this experiment we present a technique to measure learning and memory. In the trace fear conditioning protocol presented here there are five pairings ...

A Procedure to Observe Context-induced Renewal of Pavlovian-conditioned Alcohol-seeking Behavior in Rats

Environmental contexts in which drugs of abuse are consumed can trigger craving, a subjective Pavlovian-conditioned response that can facilitate drug-seeking behavior and prompt relapse in abstinent drug users. We have developed a procedure to study the behavioral and neural processes that mediate the impact of context on alcohol-seeking behavior in rats. Following acclimation to the taste and pharmacological effects of 15% ethanol in the home cage, male Long-Evans rats receive Pavlovian discrimination training (PDT) in conditioning chambers. In each daily (Mon-Fri) PDT session, 16 trials each of two different 10 sec auditory conditioned stimuli occur. During one stimulus, the CS+, 0.2 ml of 15% ethanol is delivered into a fluid port for oral consumption. The second stimulus, the CS-, is not paired with ethanol. Across sessions, entries into the fluid port during the CS+ increase, whereas entries during the CS- stabilize at a lower level, indicating that a predictive association between the CS+ and ethanol is acquired. During PDT each chamber is equipped with a specific configuration of visual, olfactory and tactile contextual stimuli. Following PDT, extinction training is conducted in the same chamber that is now equipped with a different configuration of contextual stimuli. The CS+ and CS- are presented as before, but ethanol is withheld, which causes a gradual decline in port entries during the CS+. At test, rats are placed back into the PDT context and presented with the CS+ and CS- as before, but without ethanol. This manipulation triggers a robust and selective increase in the number of port entries made during the alcohol predictive CS+, with no change in responding during the CS-. This effect, referred to as context-induced renewal, illustrates the powerful capacity of contexts associated with alcohol consumption to stimulate alcohol-seeking behavior in response to Pavlovian alcohol cues.

A procedure to study the capacity of an alcohol associated environmental context to trigger the renewal of alcohol-seeking behavior in rats is described.

إجراءات لمراقبة الناجم عن السياق تجديد مكيفة بافلوف-السلوك الكحول التماس في الجرذان

Environmental contexts in which drugs of abuse are consumed can trigger craving, a subjective Pavlovian-conditioned response that can facilitate ...

A Treatment Package without Escape Extinction to Address Food Selectivity

Feeding difficulties and feeding disorders are a commonly occurring problem for young children, particularly children with developmental delays including autism. Behavior analytic interventions for the treatment of feeding difficulties oftentimes include escape extinction as a primary component of treatment. The use of escape extinction, while effective, may be problematic as it is also associated with the emergence of challenging behavior (e.g., extinction burst). Such challenging behavior may be an acceptable side effect in treatment cases where feeding problems are severe and chronic (e.g., failure to thrive). However, in more acute cases (e.g., selective eating), the negative side effect may be unwarranted and undesired. More recent research on the behavioral treatment of food selectivity has begun to evaluate treatments for feeding difficulties that do not include escape extinction (e.g., demand fading, behavioral momentum), with some success. However, research to date reveals individual differences in responsiveness to such treatments and no clear preferable treatment has emerged. This manuscript describes a multi-component treatment package that includes shaping, sequential presentation and simultaneous presentation, for the treatment of food selectivity in four young children with developmental delays. This treatment package extends the literature on the behavioral treatment for food selectivity and offers a multi-component treatment protocol that may be clinically applicable across a range of treatment scenarios and settings.

Feeding difficulties are a common problem for children with developmental disorders, including autism, and behavioral interventions often include escape extinction. Recent research has begun to evaluate treatments that do not include escape extinction. This manuscript describes a multicomponent treatment package that does not use escape extinction to treat feeding difficulties.

A حزمة العلاج دون الهروب الانقراض لمعالجة الأغذية الانتقائية

Feeding difficulties and feeding disorders are a commonly occurring problem for young children, particularly children with developmental delays including ...

Vagus Nerve Stimulation as a Tool to Induce Plasticity in Pathways Relevant for Extinction Learning

Extinction describes the process of attenuating behavioral responses to neutral stimuli when they no longer provide the reinforcement that has been maintaining the behavior. There is close correspondence between fear and human anxiety, and therefore studies of extinction learning might provide insight into the biological nature of anxiety-related disorders such as post-traumatic stress disorder, and they might help to develop strategies to treat them. Preclinical research aims to aid extinction learning and to induce targeted plasticity in extinction circuits to consolidate the newly formed memory. Vagus nerve stimulation (VNS) is a powerful approach that provides tight temporal and circuit-specific release of neurotransmitters, resulting in modulation of neuronal networks engaged in an ongoing task. VNS enhances memory consolidation in both rats and humans, and pairing VNS with exposure to conditioned cues enhances the consolidation of extinction learning in rats. Here, we provide a detailed protocol for the preparation of custom-made parts and the surgical procedures required for VNS in rats. Using this protocol we show how VNS can facilitate the extinction of conditioned fear responses in an auditory fear conditioning task. In addition, we provide evidence that VNS modulates synaptic plasticity in the pathway between the infralimbic (IL) medial prefrontal cortex and the basolateral complex of the amygdala (BLA), which is involved in the expression and modulation of extinction memory.

Vagus nerve stimulation (VNS) has emerged as a tool to induce targeted synaptic plasticity in the forebrain to modify a range of behaviors. This protocol describes how to implement VNS to facilitate the consolidation of fear extinction memory.

تحفيز العصب المبهم كأداة للحث على اللدونة في مسارات ذات الصلة من أجل التعلم الانقراض

Extinction describes the process of attenuating behavioral responses to neutral stimuli when they no longer provide the reinforcement that has been ...

Pavlovian Conditioned Approach Training in Rats

Cues that are contingently paired with unconditioned, rewarding stimuli can acquire rewarding properties themselves through a process known as the attribution of incentive salience, or the transformation of neutral stimuli into attractive, &#34;wanted&#39; stimuli capable of motivating behavior. Pavlovian conditioned approach (PCA) develops after the response-independent presentation of a conditioned stimulus (CS; e.g., a lever) that predicts the delivery of an unconditioned stimulus (US; e.g., a food pellet) and can be used to measure incentive salience. During training, three patterns of conditioned responses (CRs) can develop: sign-tracking behavior (CS-directed CR), goal-tracking behavior (US-directed CR), and an intermediate response (both CRs). Sign-trackers attribute incentive salience to reward-related cues and are more vulnerable to cue-induced reinstatement of drug-seeking as well as other addiction-related behaviors, making PCA a potentially valuable procedure for studying addiction vulnerability. Here, we describe materials and methods used to elicit PCA behavior from rats as well as analyze and interpret PCA behavior in individual experiments.

Here, we present a protocol to elicit Pavlovian conditioned approach behavior in rats. This procedure can be used to measure individual differences in the tendency to approach and attribute incentive salience to reward-related cues and investigate addiction vulnerability.

بافلوف التدريب نهج مشروطة في الجرذان

Cues that are contingently paired with unconditioned, rewarding stimuli can acquire rewarding properties themselves through a process known as the ...

Stress-Enhanced Fear Learning, a Robust Rodent Model of Post-Traumatic Stress Disorder

Fear behaviors are important for survival, but disproportionately high levels of fear can increase the vulnerability for developing psychiatric disorders such as post-traumatic stress disorder (PTSD). To understand the biological mechanisms of fear dysregulation in PTSD, it is important to start with a valid animal model of the disorder. This protocol describes the methodology required to conduct stress-enhanced fear learning (SEFL) experiments, a preclinical model of PTSD, in both rats and mice. SEFL was developed to recapitulate critical aspects of PTSD, including long-term sensitization of fear learning caused by an acute stressor. SEFL uses aspects of Pavlovian fear conditioning but produces a distinct and robust sensitized fear response far greater than normal conditional fear responses. The trauma procedure involves placing a rodent in a conditioning chamber and administering 15 unsignaled shocks randomly distributed over 90 minutes (for rat experiments; for mouse experiments, 10 unsignaled shocks randomly distributed over 60 minutes are used). On day 2, rodents are placed in a novel conditioning context where they receive a single shock; then, on day 3 they are placed back in the same context as on day 2 and tested for changes in freezing levels. Rodents that previously received the trauma display enhanced levels of freezing on the test day compared to those that received no shocks on the first day. Thus, with this model, a single highly stressful experience (the trauma) produces extreme fear of the stimuli associated with the traumatic event.

Here we describe the detailed methodology required to conduct stress-enhanced fear learning (SEFL) experiments, a preclinical model of post-traumatic stress disorder, in both rats and mice. The model utilizes aspects of Pavlovian fear conditioning and freezing as an index of enhanced fear in rodents.

الخوف الإجهاد--تعزيز التعلم، نموذج القوارض قوية من اضطراب الإجهاد اللاحق للصدمة النفسية

Fear behaviors are important for survival, but disproportionately high levels of fear can increase the vulnerability for developing psychiatric disorders ...

A Conditioned Place Preference Protocol for Measuring Incubation of Craving in Rats

A major cause of repeated relapses is a craving for the drug. Drug craving increases progressively during the abstinence period, a phenomenon termed incubation of drug craving. Here, we describe a morphine conditioned place preference (CPP) protocol for measuring the incubation of craving in rats. In this protocol, a CPP paradigm mainly employing somatosensory cues is used to establish a long-term reward memory of morphine. A three-chamber CPP box that differs in the texture of the chamber floor is constructed. First, the animals are tested for their baseline preference to the two side chambers for three consecutive days. Then, they are injected intraperitoneally with morphine/saline and put into their non-preferred/preferred chamber for 45 min. After 6 days of conditioning, their preference to the side chambers is tested for 15 min at different time points after the last conditioning session. With this paradigm, the reward memory of morphine could last for at least 18 days. To test whether the above-mentioned protocol can model increased craving, the number of entrances into the two side chambers are counted during the abstinence period. The results show that the entrances increased, suggesting that the CPP paradigm could mimic the incubation of craving. Future studies can employ this model to study neural mechanisms underlying long-term memory and incubation of craving.

Here, a morphine conditioned place preference (CPP) protocol is described to measure incubation of craving in rats.

بروتوكول تفضيل مكان مكيفة لقياس الحضانة للرغبة في الفئران

A major cause of repeated relapses is a craving for the drug. Drug craving increases progressively during the abstinence period, a phenomenon termed ...