Mohammed R. Milad is supported by NIMH grant R01 MH097880 and institutional funds from the Department of Psychiatry at MGH.

הערה: כל הנהלים בפרוטוקול זה אושרו על ידי ועדת המשנה למחקר טיפול בבעלי חיים, המשמש כועדה המוסדית הטיפול בבעלי חיים והשימוש (IACUC) לבית החולים הכללי מסצ&#39;וסטס, ועומדים במכונים הלאומי לבריאות הנחיות. 1. שיכון בעלי חיים ונוהל טיפול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם ההגעה, חולדות נקבות בוגרות בית ספראג Dawley כ 8-10 שבועות של גיל (במשקל 200-225 גר &#39;) בקבוצות של 3-4 פחי פלסטיק אינץ&#39; עם מצעי woodchip. לשמור אותם בדיאטת גישה כרצונך מודעה של לצ&#39;ו ומים ושעתי אור 12 / מחזור כהה. השאר חולדות להסתגל למתקן תנאי דיור ובעלי חיים למינימום של שבוע 1. הערה: כל הנהלים בכתב היד הזה מתבצעים במהלך מחזור האור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות תקופת הסתגלות זו, לטפל בכל בעלי החיים במשך 5 דקות כל אחד במשך 2-3 ימים. כראוי להרים את חולדות אחד בכל פעם (נתמך על ידי פלג הגוף העליון ולא בזנב),להחזיק אותם באופן מאובטח, וללטף אותם בתקופה זו. ידית בעלי חיים המופיעים יותר הדגיש, עצבני, או חרדה לתקופות זמן ארוכות יותר. לעשות את זה כדי למזער את הטיפול בלחץ, שעלול להשפיע על השלבים הבאים בפרוטוקול זה. הערה: מספר הימים ומשך זמן טיפול בבעלי החיים יכולים להשתנות בין מעבדות שונות; עם זאת, אלה צריכים להיות עקביים בין ניסויים באותה המעבדה. </li></ol> 2. ניטור מחזור הייחום: הנרתיק ספוגית מריחה ומכתים נוהל <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך 0.9% תמיסת מלח (נתרן כלורי מומס במים מזוקקים). להרטיב המוליך כותנה שקצה בפתרון זה. למחוק את הקצה בעזרת מגבת נייר, כדי למנוע oversaturation, מה שעלול להוביל לאוסף מדגם לקוי או אובדן של תאים. מחזיק את הזנב כלפי מעלה מאת פתח הנרתיק, בעדינות להכניס את קצה הכותנה לתעלת הנרתיק ולהתגלגל הקירות כדי ללכוד תאי נרתיק רופפים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם בעל החיים משתינים על המיטהטיפ טון, להחליף עם אחד חדש, כמו זיהום בשתן יקשה על זיהוי שלב. להיות זהיר מאוד כדי לא לגרום למצוקה לבעלי החיים במהלך הליך זה, כי חשיפה ללחץ תשבש את מחזור הייחום. כאשר בניקוי, במטרה להשיג הכנסה מהירה ונסיגה שאינה עמוק מדי במטרה לצמצם את הגירוי נוסף לצוואר הרחם, שיכול לגרום לpseudopregnancy. הערה: Pseudopregnancy יכול להיות מזוהה כמחזור ייחום אציקליים, כי בדרך כלל נמשך כ 12 ימים, כלומר ימים רצופים של diestrus 25. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוציא בזהירות את קצה המוליך ולגלגל אותו לשקופית מיקרוסקופ שכותרתו מראש. הימנע לחיצה חזקה מדי, יותר מדי נוזלים בשקופית יכול לעשות זיהוי שלב קשה ברגע שיבש. הערה: שקופית אחת יכולה להכיל מספר ימים לכל חיה, למרות שזה יכול להיעשות בהתאם להעדפות אישיות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא העברות מדגם לשקופית. לאסוף דגימות לניתקימים רצופים אל על שקופית אחת כדי להיות מסוגלים לעקוב אחר טוב יותר ולזהות שינויי שלבי ייחום יומיים. הערה: במידת האפשר, את זה הוא גם אידיאלי אם אנשי איסוף דגימות יישארו זהים לכל בעלי החיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שהשקופית היא יבשה, להתחיל הפרוטוקול מכתים לזיהוי שלב. שימוש בערכת הצביעה (ראה טבלה של חומרים), לטבול את שקופיות 10 פעמים במקבעות (תכלת), 10 פעמים בפתרון כתם (ורוד), ו -5 פעמים בפתרון counterstain (סגול). יש לשטוף את השקופיות בעדינות מתחת למים זורמים. בואו שקופיות יבשות לחלוטין אוויר לפני הצגה תחת מיקרוסקופ. הערה: מחזור הייחום הארוך בדרך כלל 4-5 היום מורכב מ( לפי הסדר הזה): ייחום (E), metestrus (M), diestrus (ד &#39;), וproestrus (P) 26. הייחום מאופיין בתאים כחולים, cornified, metestrus על ידי כדוריות דם לבנות ושילוב של תאי cornified והגרעיניים, diestrus דומה לmetestrus בנוכחות של סוגי תאים למעט הם מאוד דלילים, וproestrus ידי אגרגטים מוכתמים סגוליםתאים של בעלי הגרעין (איור 1). ישנם נהלים שונים צביעה, בנוסף לאלו שתוארו לעיל, כי הם יעילים באותה מידה לציטולוגית מריחה בנרתיק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף דגימות לפחות שני מחזורים מלאים (כ 8-10 ימים) על מנת לעקוב אחר השלבים במדויק לפני ניסויים. בקנה אחד עם הזמן של יום הדגימות נלקחות. לאסוף דגימות משטח מהנרתיק יומי לאורך כל דרך ועד לסוף הניסוי. </li></ol> 3. טרום חשיפה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני תחילתו של הניסוי, לפני לחשוף את בעלי החיים לאוויר תאים לאפשר החיות להסתגל למסגרת (תאי אוויר) לפני כל בדיקות התנהגותיות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טרום לחשוף את הנקבות לתאי האוויר (הממוקמים בתיבות ממתנות-קול) עם אורות הבית בבמשך 20-30 דקות ביום במשך 3 ימים לפני כל ניסויים. הקצה את התיבה שהם כלתאם למחקר נחשף מראש. t לנקות ביסודיותהוא קופסות (קירות ומגשים) בין פגישות ובעלי חיים כדי להסיר ריחות שכן הם יכולים להשפיע על התנהגות ומחזור הייחום. </li></ol></li></ol> 4. יום 1: הרגלה / פחד אוויר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שהבעלים החיים אומתו להיות בשלב הייחום של מחזורי הייחום שלהם, תתחיל את שלב התרגלות / אוויר של ניסוי 3 הימים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח מראש טון צעדים בסיסיים של הקפאת מצגות לפני הגירוי המותנה הטון הראשון (CS) בכל יום של הניסוי. לעשות זאת על ידי רכישת ציוני הקפאת אחוזים (מחושבים על ידי חלוקת שניות בילו נייח על ידי משך המשפט, כפול 100) במרווח זמן הגירוי-נעדר בתחילת משפט CS-לבד הראשון לפני תחילת CS. הערה: צעדים אלה יכולים לשמש כדי להעריך ולהשוות את רמות הקפאה בסיסיות עם אלה במהלך הרגלה, אוויר, הכחדה, וזכירה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנהל אימוני הכחדה בשלב metestrus,להתנות את החולדות ביום האחרון שלהם של ייחום. שלב ספוגית ולזהות ייחום (שלב 2) בכל יום לפני תחילת פרוטוקול הניסוי (אוויר / הכחדה / זוכר). כשלב הייחום עלול להימשך זמן רב יותר מיום אחד, היסטורית מחזור השימוש לחזות אורך שלבים כדי לקבוע מתי בעלי החיים מוכנים להתחיל אימון. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בתאי האוויר, לחבר את רצפת רשת רגל-ההלם לגנרטור גירוי חשמלי. השתמש ברמת גירוי של 0.5-0.6 mA כגירוי מותנה (US). השתמש kHz 4, 80 טון dB כגירוי המותנה (CS). הערה: פרמטרים אלו עשויים להשתנות בכל מעבדות ועשויים להיות שונה לאוויר אופטימלי. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם תכנית ניתוח ההקפאה דורשת רמזים חזותיים (בניגוד לזמן), שיתוף להפעיל אור LED עם הטון. מקם את האור בצד החיצוני של התא אופרנטית, בתוך מסגרת וידאו. בתחילת כל ניסוי, להפעיל את אור LED ולשמור אותו מואר ועד לסוף המשפט דואר. הערה: אור זה לא נראה לעין על ידי בעלי החיים, ורק משמש כסמן לייזום ולסיומו של המשפט בתוך קבצי וידאו המוקלטים (שמשמש למדידת התנהגות הקפאה). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את בעלי החיים לתאי האוויר במשך 5 ניסויים CS-לבד של התרגלות. מייד לאחר פגישת הרגלה, לבצע ניסויי 7 CS-אמריקאים לזווג פחד האוויר. ודא שטון CS נמשך 30 שניות וcoterminates עם הלם שניות 0.5. ניסויים לרוץ בכל המפגשים (התרגלות, אוויר, הכחדה, וזכירה) עם מרווח intertrial משתנה בממוצע 3 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בסוף פגישת האוויר, להחזיר את החיות לכלובים בביתם ולמתקן בעלי החיים עד ליום המחרת. </li></ol> 5. יום 2: אסטרדיול הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספוגית ולזהות את שלב הייחום לכל בעלי החיים שעברו יום 1 של פרוטוקול זה. הכן אסטרדיול (הידוע גם בE2, 17beta-אסטרדיול, אובטא-אסטרדיול) ל15 מיקרוגרם / קילוגרם מינון הזרקה תת עורית באמצעות שמן שומשום או מלח 0.9% כרכב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לחשב את הסכום של אסטרדיול כדי להתכונן לזריקות, להשתמש במשקל הגוף של כל בעלי החיים, שנמדדו ונרשמו כאשר הם מותנים ביום 1 של פרוטוקול זה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות חישובים כדי לתקן את עוצמת הקול של אסטרדיול מנוהל (כלומר 0.2 מיליליטר) לחולדה. מאז אסטרדיול קשה לפזר בשל insolubility המים שלה ודורש נפח גדול של ממס למנה הקטנה, להכין פתרון מניות על ידי ערבוב אסטרדיול בשמן שומשום על אש עד שהיא נמסה. הפתרון אז יכול להיות מועבר דרך מסנן 0.22 מיקרומטר להסרת מזהמים. לדוגמא, להוסיף נפח מחושב של פתרון מניות שמן שומשום 3000 מיקרוגרם אסטרדיול מיליליטר / 1 עד נפח הדרושים הכולל של שמן שומשום על מנת להשיג 15 מיקרוגרם / קילוגרם מינון בהזרקה 0.2 מיליליטר לכל חיה נפח. הערה: לחלופין, להשתמש בצורות אחרות של tha אסטרוגן<html> t הם מסיסים במים וקלים יותר לפזר. </li></ol> 6. יום 2: אסטרדיול מנהל / הדרכת הכחדה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנהל את תת עורי אסטרדיול. הרם את העור הרפוי בין ההשכמות בצוואר בעת צרה עדינה ולהכניס את מחט המזרק לתוך המשולש שנוצר על ידי קפלי העור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 30 דקות הבאות זריקות תת עוריות של אסטרדיול, למקם את בעלי החיים בתאי האוויר שוב ולהתחיל אימוני הכחדה. בפגישה זו הכחדה, לבצע 20 ניסויים CS-לבד, עם כל ניסוי בהיקף של 30 שניות, 4 kHz, צליל dB 80, שהוצג במרווח intertrial משתנה בממוצע 3 דקות. הערה: ההשפעה של אסטרדיול על החזרה מתרחשת כאשר אסטרדיול מנוהל לפני אימון הכחדה או מייד לאחר הכחדה. ההשפעה לא נצפתה הודעה הכחדה-4 שעות, ולכן מומלץ להזריק קרוב בזמן לתחילתו או בסופו של האימון 15. </li></ol>. Le &quot;&gt; 7 יום 3: Extinction Recall <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 24 שעות לאחר אימון ההכחדה, ספוגית בעלי החיים שהשלימו יום 1 ו- 2 של פרוטוקול זה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את החיות לתאי האוויר שהוקצו להם (כמו יום 1 ו -2). להתחיל את ההפעלה זוכר הכחדה על ידי הצגת 3 ניסויי CS-לבד (שלושה הניסויים של זיכרון הכחדה), אשר מורכבים מניסויי CS-לבד רק 3.80 dB עם מרווחי intertrial דומים ל -20 הניסויים מנוהלים לאימוני הכחדה כמתואר בשלב 6.2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם השלמת הפעלת הזיכרון, להחזיר את החיות לכלובים בביתם. </li></ol> ניתוח נתונים 8. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לרכוש נתונים התנהגותיים באמצעות וידאו ולנתח אותם באמצעות תוכנת מחשב. הערה: ציוני הקפאה גם ניתן לספור ידני על ידי הנסיין שהוא עיוור לטיפול התרופתי על ידי תזמון התקפי הקפאה במהלך מצגת CS של כל ניסוי, הביע כאחוז מהזמן בילה בהקפאה את הטון. הקפאה היאשהוגדר על ידי חוסר מוחלט של תנועה למעט הנשימה במהלך 30 ניסויי שניות CS-ארה&quot;ב. לחשב הקפאת אחוזים על ידי חלוקת שניות בילו הקפאה (נייח) על ידי 30 שניות (משך המשפט) כפולות 100. </li></ol>

<ol>
	<li>Baron-Cohen, S., Knickmeyer, R. C., Belmonte, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+differences+in+the+brain:+implications+for+explaining+autism.">Sex differences in the brain: implications for explaining autism.</a> Science. 310 (5749), 819-823 (2005).</li><li>Voyer, D., Voyer, S., Bryden, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Magnitude+of+sex+differences+in+spatial+abilities:+a+meta-analysis+and+consideration+of+critical+variables.">Magnitude of sex differences in spatial abilities: a meta-analysis and consideration of critical variables.</a> Psychological Bulletin. 117 (2), 250-270 (1995).</li><li>Pinker, S., Spelke, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Conversation+with+Steven+Pinker+and+Elizabeth+Spelke.">A Conversation with Steven Pinker and Elizabeth Spelke.</a> The Science of Gender and Science. , (2005).</li><li>Hampson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen-related+variations+in+human+spatial+and+articulatory-motor+skills.">Estrogen-related variations in human spatial and articulatory-motor skills.</a> Psychoneuroendocrinology. 15, 97-111 (1990).</li><li>Hampson, E., Kimura, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reciprocal+effects+of+hormonal+fluctuations+on+human+motor+and+perceptual-spatial+skills.">Reciprocal effects of hormonal fluctuations on human motor and perceptual-spatial skills.</a> Behavioral Neuroscience. 102, 456-459 (1988).</li><li>Hampson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variations+in+sex-related+cognitive+abilities+across+the+menstrual+cycle.">Variations in sex-related cognitive abilities across the menstrual cycle.</a> Brain and Cognition. 14 (1), 26-43 (1990).</li><li>Kilpatrick, D. G., Resnick, H. S., Milanak, M. E., Miller, M. W., Keyes, K. M., Friedman, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=National+estimates+of+exposure+to+traumatic+events+and+PTSD+prevalence+using+DSM-IV+and+DSM-5+criteria.">National estimates of exposure to traumatic events and PTSD prevalence using DSM-IV and DSM-5 criteria.</a> Journal of Traumatic Stress. 26 (5), 537-547 (2013).</li><li>Breslau, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gender+differences+in+trauma+and+posttraumatic+stress+disorder.">Gender differences in trauma and posttraumatic stress disorder.</a> Journal of Gender-Specific Medicine. 5 (1), 34-40 (2002).</li><li>Frans, O., Rimmo, P. A., Aberg, L., Fredrikson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trauma+exposure+and+post-traumatic+stress+disorder+in+the+general+population.">Trauma exposure and post-traumatic stress disorder in the general population.</a> Acta Psychiatrica Scandinavica. 111 (4), 291-299 (2005).</li><li>Breslau, N., Kessler, R. C., Chilcoat, H. D., Schultz, L. R., Davis, G. C., Andreski, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trauma+and+posttraumatic+stress+disorder+in+the+community:+the+1996+Detroit+Area+Survey+of+Trauma.">Trauma and posttraumatic stress disorder in the community: the 1996 Detroit Area Survey of Trauma.</a> Archives of General Psychiatry. 55 (7), 626-632 (1996).</li><li>Seedat, S., Stein, D. J., Carey, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Post-traumatic+stress+disorder+in+women:+epidemiological+and+treatment+issues.">Post-traumatic stress disorder in women: epidemiological and treatment issues.</a> CNS Drugs. 19 (5), 411-427 (2005).</li><li>Holbrook, T. L., Hoyt, D. B., Stein, M. B., Sieber, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gender+differences+in+long-term+posttraumatic+stress+disorder+outcomes+after+major+trauma:+women+are+at+higher+risk+of+adverse+outcomes+than+men.">Gender differences in long-term posttraumatic stress disorder outcomes after major trauma: women are at higher risk of adverse outcomes than men.</a> Journal of Trauma. 53 (5), 882-888 (2002).</li><li>Labad, J., Menchon, J. M., Alonso, P., Segalas, C., Jimenez, S., Jaurrieta, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gender+differences+in+obsessive-compulsive+symptom+dimensions.">Gender differences in obsessive-compulsive symptom dimensions.</a> Depression and Anxiety. 25 (10), 832-838 (2008).</li><li>Gupta, R. R., Sen, S., Diepenhorst, L. L., Rudick, C. N., Maren, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen+modulates+sexually+dimorphic+contextual+fear+conditioning+and+hippocampal+long-term+potentiation+(LTP)+in+rats.">Estrogen modulates sexually dimorphic contextual fear conditioning and hippocampal long-term potentiation (LTP) in rats.</a> Brain Research. 888, 356-365 (2001).</li><li>Milad, M. R., Igoe, S. A., Lebron-Milad, K., Novales, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrous+cycle+phase+and+gonadal+hormones+influence+conditioned+fear+extinction.">Estrous cycle phase and gonadal hormones influence conditioned fear extinction.</a> Neuroscience. 164 (3), 887-895 (2009).</li><li>Zeidan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estradiol+modulates+medial+prefrontal+cortex+and+amygdala+activity+during+fear+extinction+in+women+and+female+rats.">Estradiol modulates medial prefrontal cortex and amygdala activity during fear extinction in women and female rats.</a> Biological Psychiatry. 70 (10), 920-927 (2011).</li><li>Lebron-Milad, K., Milad, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+differences,+gonadal+hormones+and+the+fear+extinction+network:+implications+for+anxiety+disorders.">Sex differences, gonadal hormones and the fear extinction network: implications for anxiety disorders.</a> Biology of Mood &amp; Anxiety Disorders. 2 (3), (2012).</li><li>Rey, C. D., Lipps, J., Shansky, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine+d1+receptor+activation+rescues+extinction+impairments+in+low-estrogen+female+rats+and+induces+cortical+layer-specific+activation+changes+in+prefrontal-amygdala+circuits.">Dopamine d1 receptor activation rescues extinction impairments in low-estrogen female rats and induces cortical layer-specific activation changes in prefrontal-amygdala circuits.</a> Neuropsychopharmacology. 39 (5), 1282-1289 (2013).</li><li>Str&#246;m, J. O., Theodorsson, A., Ingberg, E., Isaksson, I. M., Theodorsson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovariectomy+and+17&#946;-estradiol+Replacement+in+Rats+and+Mice:+A+Visual+Demonstration.">Ovariectomy and 17&#946;-estradiol Replacement in Rats and Mice: A Visual Demonstration.</a> Journal of Visualized Experiments. , e4013 (2012).</li><li>Markham, J. A., Pych, J. C., Juraska, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+hormone+replacement+to+aged+ovariectomized+female+rats+benefits+acquisition+of+the+morris+water+maze.">Ovarian hormone replacement to aged ovariectomized female rats benefits acquisition of the morris water maze.</a> Hormones &amp; Behavior. 42 (3), 284-293 (2002).</li><li>Markowska, A. L., Savonenko, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effectiveness+of+estrogen+replacement+in+restoration+of+cognitive+function+after+long-term+estrogen+withdrawal+in+aging+rats.">Effectiveness of estrogen replacement in restoration of cognitive function after long-term estrogen withdrawal in aging rats.</a> Journal of Neuroscience. 22 (24), 10985-10995 (2002).</li><li>Bredemann, T. M., McMahon, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=17&#946;+Estradiol+Increases+Resilience+and+Improves+Hippocampal+Synaptic+Function+in+Helpless+Ovariectomized+Rats.">17&#946; Estradiol Increases Resilience and Improves Hippocampal Synaptic Function in Helpless Ovariectomized Rats.</a> Psychoneuroendocrinology. 42, 77-88 (2014).</li><li>Grueso, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early,+but+not+late+onset+estrogen+replacement+therapy+prevents+oxidative+stress+and+metabolic+alterations+caused+by+ovariectomy.">Early, but not late onset estrogen replacement therapy prevents oxidative stress and metabolic alterations caused by ovariectomy.</a> Antioxidants and Redox Signaling. 20 (2), 236-246 (2014).</li><li>Shughrue, P. J., Bushnell, C. D., Dorsa, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen+receptor+messenger+ribonucleic+acid+in+female+rat+brain+during+the+estrous+cycle:+a+comparison+with+ovariectomized+females+and+intact+males.">Estrogen receptor messenger ribonucleic acid in female rat brain during the estrous cycle: a comparison with ovariectomized females and intact males.</a> Endocrinology. 131 (1), 381-388 (1992).</li><li>Frye, C. A., Erskine, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+time+of+mating+and+paced+copulation+on+induction+of+pseudopregnancy+in+cyclic+female+rats.">Influence of time of mating and paced copulation on induction of pseudopregnancy in cyclic female rats.</a> Journal of Reproduction and Fertility. 90 (2), 375-385 (1990).</li><li>Becker, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategies+and+methods+for+research+on+sex+differences+in+brain+and+behavior.">Strategies and methods for research on sex differences in brain and behavior.</a> Endocrinology. 146, 1650-1673 (2005).</li><li>Westwood, F. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+female+rat+reproductive+cycle:+a+practical+histological+guide+to+staging.">The female rat reproductive cycle: a practical histological guide to staging.</a> Toxicologic Pathology. 36 (3), 375-384 (2008).</li><li>Hurn, P. D., Macrae, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen+as+a+Neuroprotectant+in+Stroke.">Estrogen as a Neuroprotectant in Stroke.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. 20, 631-652 (2000).</li><li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals.">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> Journal of Pharmacology and Pharmacotherapeutics. 1 (2), 87-93 (2010).</li><li>Gillies, G. E., McArthur, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen+actions+in+the+brain+and+the+basis+for+differential+action+in+men+and+women:+a+case+for+sex-specific+medicines.">Estrogen actions in the brain and the basis for differential action in men and women: a case for sex-specific medicines.</a> Pharmacological Reviews. 62 (2), 155-198 (2010).</li><li>Tolin, D. F., Foa, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+differences+in+trauma+and+posttraumatic+stress+disorder:+a+quantitative+review+of+25+years+of+research.">Sex differences in trauma and posttraumatic stress disorder: a quantitative review of 25 years of research.</a> Psychological Bulletin. 132, 959-992 (2006).</li></ol>

יש הסופרים של כתב היד הזה לא אינטרסים מתחרים פיננסיים או סכסוכים אחרים של עניין לחשוף.

הכחדת פחד, נחקרה בהרחבה בחולדות זכרים עם המנגנונים העצביים תיווך הכחדת פחד מותנה לזהות ולהעריך תחת מניפולציות שונות. מעטים יחסית מחקרים בחנו חולדות נקבות או את התפקיד של הורמוני אשכים בהכחדת פחד. ללמוד באופן ספציפי את ההשפעה של אסטרוגן על הכחדת פחד, חולדות נקבות באו?...

הבדלים בין מינים הטמונים הם נצפו על פני התנהגויות קוגניטיביות שונות ופרדיגמות למידה בשני בני אדם ומכרסמים. לדוגמא, זה כבר דווח כי, בדרך כלל, לנשים יש יכולות מילוליות ואורינטצית פירוט חזקות, בעוד שגברים יש יכולות מרחבית טובות יותר 1-3. הבדלים בין מינים אלה עשויים להיות בין שאר כתוצאה מההשפעה של הורמוני אשכים. רמות אסטרדיול גבוהות לשפר את הביצועים במשימות שבו נשים הן יותר טובים, אבל להחמיר את הביצועים במשימות שגברים בדרך כלל עושים טובים 4-6. למרות עדות זו היא משכנעת, היכולת המוגבלת לשלוט לחלוטין סביבות ניסוי במחקרים בבני אדם עושה את זה קשה לקבוע אם ניתן לייחס את ההשפעות הללו על התנהגות ספציפית להורמונים. מחקרים בבעלי חיים, לעומת זאת, מאפשרים לנסיבות בשליטה מלאה. למרות המנגנונים העצביים הבסיסיים של הכחדת פחד זוהו ונלמדים גם בגברים, לא ברור אםמערכות אלה הן אותם בנקבות או איך הם משתנים לאורך מחזור הייחום. אוויר פחד והכחדה נמצאים בשימוש נרחב פרדיגמות התנהגות במכרסמים ובני אדם לבצע מחקרים הקשורים להפרעות חרדה. בהתחשב בכך שיש לי נשים בסיכון גבוה יותר להפרעות חרדה, כמו גם משך סימפטום גבוה יותר ובחומרה 7-13, זה קריטי לכולל נקבות במחקרים אלה. תת-הייצוג של נשים במחקר זה ניתן לייחס לאתגרים של ניטור ייחום שלב וחשבונאיים להשפעות ההתנהגותיות של הורמוני מין. מעבדות שעושות לבחון נקבות בסוגיות מפגש הקשר זה, כי לעתים קרובות אינו מדווח או אינם מתואר בשיטות ללימודיהם. מתעורר ראיות במכרסמים מצביע על כך שהבדלים בין מינים בהכחדת פחד הם מווסתים על ידי הורמוני אשכים 14-18. בפחד אוויר, הם מאומנים לפחד גירוי מסוים. לאחר מספר מצגות unreinforced שלהגירוי, בעלי החיים ללמוד לא לפחד קיו, תהליך הנקרא הכחדה. כמה טוב בעלי החיים לומדים ומאחדים את הזיכרון של למידת משימה זו ניתן לצפות במהלך בדיקת זיכרון הכחדה נתנה כמה זמן אחרי אימון ההכחדה. ביטוי פחד פחות בזכרון הכחדה מדגים גיבוש זיכרון הכחדה טוב. ממצאים אחרונים מהמעבדה שלנו מציעים כי אסטרוגן יכול לווסת את האיחוד של זיכרון הכחדת פחד ולשפר את זיכרון הכחדה. באופן ספציפי, חולדות נקבות שכובו בproestrus, השלב של מחזור הייחום שבמהלכו במחזור שיא רמות האסטרוגן, שימור משופר תערוכת זיכרון הכחדה. בניגוד לכך, נשים שכבו בתצוגת שלב metestrus אסטרוגן הנמוך זוכרת הכחדה עניה יחסית, שניתן לשפר עם ממשל אסטרדיול אקסוגניים לפני או מייד לאחר אימון הכחדת 15,16. המנגנונים העצביים של גיבוש זיכרון הכחדה (כולל מע&quot;מuding את התפקיד של הורמוני אשכים) בנקבות אינם ברורים. בחיות מעבדה, התפקיד של הורמונים יכול להיחקר באמצעות נהלי הסרה כירורגית פולשנית כגון סירוס וovariectomy. לאחר התאוששות מניתוח, הורמוני אשכים לעתים קרובות מניפולציות אקסוגני בזמן ההופעה של משימה התנהגותית 19. גישה זו סיפקה מידע קריטי על הורמוני מין ושימושי משום שהיא מאפשרת למניפולציות מבוקרות היטב של הורמוני אשכים (במונחים של תזמון ומינון) 20-23. גישה זו, עם זאת, לא להעריך את ההשפעה של התנודות טבעיות המתרחשות על פני מחזור הייחום וגם אינו מייצגים בעלי חיים &quot;נורמלים&quot;, וכך להגביל את פוטנציאל translational למחקרים בבני אדם. זה תועד היטב כי שיא רמות הורמון מין נשי וירידה בשלבים מסוימים של מחזור הייחום, וביטוי קולטן אסטרוגן שינויים במחזור,ואחרי ovariectomy 24. לפיכך, יש צורך לערוך מחקרים על נשים עם בלוטות מין שלמים ולשפר את העיצוב ניסיוני ללמוד באופן מהימן את ההשפעות שמדינות אסטרוגן גבוהות ונמוכות עשויות להיות בנקבות בכל תוחלת החיים שלהם. פרוטוקול זה מתמקד בהשפעה של אסטרוגן על מערכות נוירו-הביולוגיות מעורבות בהכחדת פחד. הוא מתאר כיצד: 1) לפקח בזהירות את מחזור הייחום, 2) להכין מינונים אפקטיביים של אסטרדיול לממשל מערכתי, ו- 3) לעקוב אחר פרדיגמה התנהגות הכוללת אוויר פחד, הכחדה, ולהיזכר בחולדות נקבות באופן טבעי רכיבה על אופניים. פרוטוקול זה יכול להיות שונה עם מניפולציות תרופתיות אחרות וכלים תאיים ומולקולריים כדי לסייע מחקרים כדי להבין טוב יותר הבדלים בין מינים שנצפו במותנה פחד הכחדת התנהגות. שים לב כי הנהלים המפורטים להלן הם אלה המשמשים במעבדה שלנו, וקיים מספר הווריאציות של נהלים אלה in הספרות.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="613">
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:120px;">Name</td>
			<td style="width:159px;">Company</td>
			<td style="width:135px;">Catalog number</td>
			<td style="width:199px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:120px;">Fear conditioning chamber</td>
			<td style="width:159px;">Coulbourn Instruments</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:120px;">Graphic State</td>
			<td style="width:159px;">Coulbourn Instruments</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:120px;">Sound-attenuating box</td>
			<td style="width:159px;">Med Associates, Inc.</td>
			<td style="width:135px;">NIR-022MD</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:120px;">Estradiol</td>
			<td style="width:159px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">E1024</td>
			<td style="width:199px;">In sesame oil for subcutaneous injection</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:120px;">Sesame oil</td>
			<td style="width:159px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">S3547-250ML</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:120px;">Freezescan</td>
			<td style="width:159px;">Cleversys, Inc.</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:120px;">Dip quick stain</td>
			<td style="width:159px;">Jorgensen Laboratories, Inc.</td>
			<td style="width:135px;">J0322A1, J0322A2, J0322A3</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:120px;">Cotton-tipped applicators</td>
			<td style="width:159px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:135px;">23-400-114</td>
			<td style="width:199px;">6-inch, sterile</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:120px;">0.9% saline</td>
			<td style="width:159px;">LabChem, Inc.</td>
			<td style="width:135px;">LC23460-2</td>
			<td style="width:199px;">Sodium chloride w/v</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:120px;">Selectfrost microscope slides</td>
			<td style="width:159px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:135px;">12-550-003</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:120px;">Virex II 256</td>
			<td style="width:159px;">Diversey, Inc.</td>
			<td style="width:135px;">5019317</td>
			<td style="width:199px;">Dilute 1:256 with water</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:120px;">Luer-Lok Tip 1ml Syringes</td>
			<td style="width:159px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:135px;">309628</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:120px;">Hypodermic disposable needles</td>
			<td style="width:159px;">Exelint International, Co.</td>
			<td style="width:135px;">26402</td>
			<td style="width:199px;">26-gauge</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

protocol for studying extinction of conditioned fear in naturally cycling female rats

הכחדה של פחד מותנה נחקרה בהרחבה במכרסמים זכר. לאחרונה, היה מספר גדל והולך של מחקרים המראים כי מנגנונים עצביים למשימות התנהגותיות מסוימות והתנהגויות תגובה שונים אצל נשים וגברים. שימוש בנשים במחקרים יכול לייצג אתגר בגלל הווריאציה של הורמוני אשכים במהלך מחזור הייחום שלהם. פרוטוקול זה מתאר נהלים מבוססים היטב כי הם שימושיים בחקירת תפקידו של אסטרוגן בגיבוש זיכרון הכחדת פחד בחולדות נקבות. שלב של מחזור הייחום וממשל אסטרוגן אקסוגני לפני אימון הכחדה יכול להשפיע על זיכרון הכחדה 24 שעות מאוחר יותר. טכניקת שטיפת הנרתיק לזיהוי שלב ייחום המתואר כאן מסייעת בחינה ומניפולציה של מטבע רכיבה על אופניים הורמוני אשכים. השימוש במודל מכרסם בסיסי זה עשוי להתוות עוד יותר את המנגנונים שבאמצעותם אסטרוגן יכול לווסת את זיכרון הכחדת פחד בנקבות.

בפרוטוקול זוכר הכחדת הפחד הזה, הקפאת אחוזים נמדדה כמדד לפחד. בעלי חיים שכיבו היטב ושמרו את זכרו של אימון ההכחדה הציגו פחד נמוך ביום האחרון של הבדיקות התנהגותיות במהלך זוכר הכחדה. חולדות זכרים ונקבה אינן שונות באופן משמעותי בביטוי פחד מותנה באוויר, ההכחדה, ולהיזכר בשל...

Watch this Scientific Journal Video about Protocol for Studying Extinction of Conditioned Fear in Naturally Cycling Female Rats at JoVE.com

Protocol for Studying Extinction of Conditioned Fear in Naturally Cycling Female Rats

Gonadal hormones such as estrogen modulate memory formation in a number of experimental paradigms including fear extinction memory. This protocol describes a set of methods for investigating the influence of gonadal hormones specifically during extinction in naturally cycling females, including estrous cycle monitoring and exogenous estrogen administration.

פרוטוקול עבור לימוד ההכחדה של פחד אוויר באופן טבעי רכיבה על אופני חולדות נקבות

Extinction of conditioned fear has been extensively studied in male rodents. Recently, there have been an increasing number of studies indicating that ...

protocol-for-studying-extinction-conditioned-fear-naturally-cycling

Research

JoVE Journal

Behavior

13.2K Views.  Massachusetts General Hospital. Gonadal hormones such as estrogen modulate memory formation in a number of experimental paradigms including fear extinction memory. This protocol describes a set of methods for investigating the influence of gonadal hormones specifically during extinction in naturally cycling females, including estrous cycle monitoring and exogenous estrogen administration.

Video: Protocol for Studying Extinction of Conditioned Fear in Naturally Cycling Female Rats

Stereotaxic Microinjection of Viral Vectors Expressing Cre Recombinase to Study the Role of Target Genes in Cocaine Conditioned Place Preference

Microinjecting recombinant adenoassociated viral (rAAV) vectors expressing Cre recombinase into distinct mouse brain regions to selectively knockout genes of interest allows for enhanced temporally- and regionally-specific control of gene deletion, compared to existing methods. While conditional deletion can also be achieved by mating mice that express Cre recombinase under the control of specific gene promoters with mice carrying a floxed gene, stereotaxic microinjection allows for targeting of discrete brain areas at experimenter-determined time points of interest. In the context of cocaine conditioned place preference, and other cocaine behavioral paradigms such as self-administration or psychomotor sensitization that can involve withdrawal, extinction and/or reinstatement phases, this technique is particularly useful in exploring the unique contribution of target genes to these distinct phases of behavioral models of cocaine-induced plasticity. Specifically, this technique allows for selective ablation of target genes during discrete phases of a behavior to test their contribution to the behavior across time. Ultimately, this understanding allows for more targeted therapeutics that are best able to address the most potent risk factors that present themselves during each phase of addictive behavior.

This article describes how to microinject viral vectors into mouse brain and then test in a conditioned place preference paradigm that includes an acquisition, extinction and reinstatement phase.

Microinjection Stereotaxic של וקטורים ויראליים הבעת Cre recombinase כדי ללמוד את התפקיד של גני מטרה בהעדפות מקום אוויר קוקאין

Microinjecting recombinant adenoassociated viral (rAAV) vectors expressing Cre recombinase into distinct mouse brain regions to selectively knockout genes ...

A Procedure to Study the Effect of Prolonged Food Restriction on Heroin Seeking in Abstinent Rats

In human drug addicts, exposure to drug-associated cues or environments that were previously associated with drug taking can trigger relapse during abstinence. Moreover, various environmental challenges can exacerbate this effect, as well as increase ongoing drug intake.
The procedure we describe here highlights the impact of a common environmental challenge, food restriction, on drug craving that is expressed as an augmentation of drug seeking in abstinent rats.
Rats are implanted with chronic intravenous i.v. catheters, and then trained to press a lever for i.v. heroin over a period of 10-12 days. Following the heroin self-administration phase the rats are removed from the operant conditioning chambers and housed in the animal care facility for a period of at least 14 days. While one group is maintained under unrestricted access to food (sated group), a second group (FDR group) is exposed to a mild food restriction regimen that results in their body weights maintained at 90% of their nonrestricted body weight. On day 14 of food restriction the rats are transferred back to the drug-training environment, and a drug-seeking test is run under extinction conditions (i.e.&#160;lever presses do not result in heroin delivery).
The procedure presented here results in a highly robust augmentation of heroin seeking on test day in the food restricted rats. In addition, compared to the acute food deprivation manipulations we have used before, the current procedure is a more clinically relevant model for the impact of caloric restriction on drug seeking. Moreover, it might be closer to the human condition as the rats are not required to go through an extinction-training phase before the drug-seeking test, which is an integral component of the popular reinstatement procedure.

A procedure that allows a demonstration of robust augmentation of drug seeking in food-restricted rats is described. Following heroin self-administration training, rats go through an abstinence period, in a drug-free environment, during which they are mildly food restricted. Drug seeking is then tested in the drug-associated environment.

פרוצדורה כדי לחקור את ההשפעה של הגבלת מזון ממושכת בהרואין מחפש אצל חולדות מתנזרות

In human drug addicts, exposure to drug-associated cues or environments that were previously associated with drug taking can trigger relapse during ...

Contextual and Cued Fear Conditioning Test Using a Video Analyzing System in Mice

The contextual and cued fear conditioning test is one of the behavioral tests that assesses the ability of mice to learn and remember an association between environmental cues and aversive experiences. In this test, mice are placed into a conditioning chamber and are given parings of a conditioned stimulus (an auditory cue) and an aversive unconditioned stimulus (an electric footshock). After a delay time, the mice are exposed to the same conditioning chamber and a differently shaped chamber with presentation of the auditory cue. Freezing behavior during the test is measured as an index of fear memory. To analyze the behavior automatically, we have developed a video analyzing system using the ImageFZ application software program, which is available as a free download at http://www.mouse-phenotype.org/. Here, to show the details of our protocol, we demonstrate our procedure for the contextual and cued fear conditioning test in C57BL/6J mice using the ImageFZ system. In addition, we validated our protocol and the video analyzing system performance by comparing freezing time measured by the ImageFZ system or a photobeam-based computer measurement system with that scored by a human observer. As shown in our representative results, the data obtained by ImageFZ were similar to those analyzed by a human observer, indicating that the behavioral analysis using the ImageFZ system is highly reliable. The present movie article provides detailed information regarding the test procedures and will promote understanding of the experimental situation.

This article presents a protocol for a contextual and cued fear conditioning test using a video analyzing system to assess fear learning and memory in mice.

אוויר מבחן הקשר ורמז פחד באמצעות מערכת ניתוח וידאו בעכברים

The contextual and cued fear conditioning test is one of the behavioral tests that assesses the ability of mice to learn and remember an association ...

Trace Fear Conditioning in Mice

In this experiment we present a technique to measure learning and memory. In the trace fear conditioning protocol presented here there are five pairings between a neutral stimulus and an unconditioned stimulus. There is a 20 sec trace period that separates each conditioning trial. On the following day freezing is measured during presentation of the conditioned stimulus (CS) and trace period. On the third day there is an 8 min test to measure contextual memory. The representative results are from mice that were presented with the aversive unconditioned stimulus (shock) compared to mice that received the tone presentations without the unconditioned stimulus. Trace fear conditioning has been successfully used to detect subtle learning and memory deficits and enhancements in mice that are not found with other fear conditioning methods. This type of fear conditioning is believed to be dependent upon connections between the medial prefrontal cortex and the hippocampus. One current controversy is whether this method is believed to be amygdala-independent. Therefore, other fear conditioning testing is needed to examine amygdala-dependent learning and memory effects, such as through the delay fear conditioning.

In the following experiment we describe a protocol for trace fear conditioning in mice. This type of associative memory includes a trace period that separates the neutral stimulus and the unconditioned stimulus.

עקוב אחר פחד אוויר בעכברים

In this experiment we present a technique to measure learning and memory. In the trace fear conditioning protocol presented here there are five pairings ...

A Procedure to Observe Context-induced Renewal of Pavlovian-conditioned Alcohol-seeking Behavior in Rats

Environmental contexts in which drugs of abuse are consumed can trigger craving, a subjective Pavlovian-conditioned response that can facilitate drug-seeking behavior and prompt relapse in abstinent drug users. We have developed a procedure to study the behavioral and neural processes that mediate the impact of context on alcohol-seeking behavior in rats. Following acclimation to the taste and pharmacological effects of 15% ethanol in the home cage, male Long-Evans rats receive Pavlovian discrimination training (PDT) in conditioning chambers. In each daily (Mon-Fri) PDT session, 16 trials each of two different 10 sec auditory conditioned stimuli occur. During one stimulus, the CS+, 0.2 ml of 15% ethanol is delivered into a fluid port for oral consumption. The second stimulus, the CS-, is not paired with ethanol. Across sessions, entries into the fluid port during the CS+ increase, whereas entries during the CS- stabilize at a lower level, indicating that a predictive association between the CS+ and ethanol is acquired. During PDT each chamber is equipped with a specific configuration of visual, olfactory and tactile contextual stimuli. Following PDT, extinction training is conducted in the same chamber that is now equipped with a different configuration of contextual stimuli. The CS+ and CS- are presented as before, but ethanol is withheld, which causes a gradual decline in port entries during the CS+. At test, rats are placed back into the PDT context and presented with the CS+ and CS- as before, but without ethanol. This manipulation triggers a robust and selective increase in the number of port entries made during the alcohol predictive CS+, with no change in responding during the CS-. This effect, referred to as context-induced renewal, illustrates the powerful capacity of contexts associated with alcohol consumption to stimulate alcohol-seeking behavior in response to Pavlovian alcohol cues.

A procedure to study the capacity of an alcohol associated environmental context to trigger the renewal of alcohol-seeking behavior in rats is described.

נוהל ללב התחדשות מושרה הקשר של התנהגות אלכוהול מחפשי מיזוג הפבלובית בחולדות

Environmental contexts in which drugs of abuse are consumed can trigger craving, a subjective Pavlovian-conditioned response that can facilitate ...

A Treatment Package without Escape Extinction to Address Food Selectivity

Feeding difficulties and feeding disorders are a commonly occurring problem for young children, particularly children with developmental delays including autism. Behavior analytic interventions for the treatment of feeding difficulties oftentimes include escape extinction as a primary component of treatment. The use of escape extinction, while effective, may be problematic as it is also associated with the emergence of challenging behavior (e.g., extinction burst). Such challenging behavior may be an acceptable side effect in treatment cases where feeding problems are severe and chronic (e.g., failure to thrive). However, in more acute cases (e.g., selective eating), the negative side effect may be unwarranted and undesired. More recent research on the behavioral treatment of food selectivity has begun to evaluate treatments for feeding difficulties that do not include escape extinction (e.g., demand fading, behavioral momentum), with some success. However, research to date reveals individual differences in responsiveness to such treatments and no clear preferable treatment has emerged. This manuscript describes a multi-component treatment package that includes shaping, sequential presentation and simultaneous presentation, for the treatment of food selectivity in four young children with developmental delays. This treatment package extends the literature on the behavioral treatment for food selectivity and offers a multi-component treatment protocol that may be clinically applicable across a range of treatment scenarios and settings.

Feeding difficulties are a common problem for children with developmental disorders, including autism, and behavioral interventions often include escape extinction. Recent research has begun to evaluate treatments that do not include escape extinction. This manuscript describes a multicomponent treatment package that does not use escape extinction to treat feeding difficulties.

חבילת טיפול ללא הכחדת בריחה לכתובת מזון הסלקטיביות

Feeding difficulties and feeding disorders are a commonly occurring problem for young children, particularly children with developmental delays including ...

Vagus Nerve Stimulation as a Tool to Induce Plasticity in Pathways Relevant for Extinction Learning

Extinction describes the process of attenuating behavioral responses to neutral stimuli when they no longer provide the reinforcement that has been maintaining the behavior. There is close correspondence between fear and human anxiety, and therefore studies of extinction learning might provide insight into the biological nature of anxiety-related disorders such as post-traumatic stress disorder, and they might help to develop strategies to treat them. Preclinical research aims to aid extinction learning and to induce targeted plasticity in extinction circuits to consolidate the newly formed memory. Vagus nerve stimulation (VNS) is a powerful approach that provides tight temporal and circuit-specific release of neurotransmitters, resulting in modulation of neuronal networks engaged in an ongoing task. VNS enhances memory consolidation in both rats and humans, and pairing VNS with exposure to conditioned cues enhances the consolidation of extinction learning in rats. Here, we provide a detailed protocol for the preparation of custom-made parts and the surgical procedures required for VNS in rats. Using this protocol we show how VNS can facilitate the extinction of conditioned fear responses in an auditory fear conditioning task. In addition, we provide evidence that VNS modulates synaptic plasticity in the pathway between the infralimbic (IL) medial prefrontal cortex and the basolateral complex of the amygdala (BLA), which is involved in the expression and modulation of extinction memory.

Vagus nerve stimulation (VNS) has emerged as a tool to induce targeted synaptic plasticity in the forebrain to modify a range of behaviors. This protocol describes how to implement VNS to facilitate the consolidation of fear extinction memory.

הקוצב וגאלי ככלי כדי לגרום פלסטיות במסלולים רלוונטיים ללמידה הכחדה

Extinction describes the process of attenuating behavioral responses to neutral stimuli when they no longer provide the reinforcement that has been ...

Pavlovian Conditioned Approach Training in Rats

Cues that are contingently paired with unconditioned, rewarding stimuli can acquire rewarding properties themselves through a process known as the attribution of incentive salience, or the transformation of neutral stimuli into attractive, &#34;wanted&#39; stimuli capable of motivating behavior. Pavlovian conditioned approach (PCA) develops after the response-independent presentation of a conditioned stimulus (CS; e.g., a lever) that predicts the delivery of an unconditioned stimulus (US; e.g., a food pellet) and can be used to measure incentive salience. During training, three patterns of conditioned responses (CRs) can develop: sign-tracking behavior (CS-directed CR), goal-tracking behavior (US-directed CR), and an intermediate response (both CRs). Sign-trackers attribute incentive salience to reward-related cues and are more vulnerable to cue-induced reinstatement of drug-seeking as well as other addiction-related behaviors, making PCA a potentially valuable procedure for studying addiction vulnerability. Here, we describe materials and methods used to elicit PCA behavior from rats as well as analyze and interpret PCA behavior in individual experiments.

Here, we present a protocol to elicit Pavlovian conditioned approach behavior in rats. This procedure can be used to measure individual differences in the tendency to approach and attribute incentive salience to reward-related cues and investigate addiction vulnerability.

הדרכת גישה אלפה הפבלובית בחולדות

Cues that are contingently paired with unconditioned, rewarding stimuli can acquire rewarding properties themselves through a process known as the ...

Stress-Enhanced Fear Learning, a Robust Rodent Model of Post-Traumatic Stress Disorder

Fear behaviors are important for survival, but disproportionately high levels of fear can increase the vulnerability for developing psychiatric disorders such as post-traumatic stress disorder (PTSD). To understand the biological mechanisms of fear dysregulation in PTSD, it is important to start with a valid animal model of the disorder. This protocol describes the methodology required to conduct stress-enhanced fear learning (SEFL) experiments, a preclinical model of PTSD, in both rats and mice. SEFL was developed to recapitulate critical aspects of PTSD, including long-term sensitization of fear learning caused by an acute stressor. SEFL uses aspects of Pavlovian fear conditioning but produces a distinct and robust sensitized fear response far greater than normal conditional fear responses. The trauma procedure involves placing a rodent in a conditioning chamber and administering 15 unsignaled shocks randomly distributed over 90 minutes (for rat experiments; for mouse experiments, 10 unsignaled shocks randomly distributed over 60 minutes are used). On day 2, rodents are placed in a novel conditioning context where they receive a single shock; then, on day 3 they are placed back in the same context as on day 2 and tested for changes in freezing levels. Rodents that previously received the trauma display enhanced levels of freezing on the test day compared to those that received no shocks on the first day. Thus, with this model, a single highly stressful experience (the trauma) produces extreme fear of the stimuli associated with the traumatic event.

Here we describe the detailed methodology required to conduct stress-enhanced fear learning (SEFL) experiments, a preclinical model of post-traumatic stress disorder, in both rats and mice. The model utilizes aspects of Pavlovian fear conditioning and freezing as an index of enhanced fear in rodents.

פחד משופרת מתח למידה, מודל מכרסמים חזקים של הפרעה פוסט-טראומטית

Fear behaviors are important for survival, but disproportionately high levels of fear can increase the vulnerability for developing psychiatric disorders ...

A Conditioned Place Preference Protocol for Measuring Incubation of Craving in Rats

A major cause of repeated relapses is a craving for the drug. Drug craving increases progressively during the abstinence period, a phenomenon termed incubation of drug craving. Here, we describe a morphine conditioned place preference (CPP) protocol for measuring the incubation of craving in rats. In this protocol, a CPP paradigm mainly employing somatosensory cues is used to establish a long-term reward memory of morphine. A three-chamber CPP box that differs in the texture of the chamber floor is constructed. First, the animals are tested for their baseline preference to the two side chambers for three consecutive days. Then, they are injected intraperitoneally with morphine/saline and put into their non-preferred/preferred chamber for 45 min. After 6 days of conditioning, their preference to the side chambers is tested for 15 min at different time points after the last conditioning session. With this paradigm, the reward memory of morphine could last for at least 18 days. To test whether the above-mentioned protocol can model increased craving, the number of entrances into the two side chambers are counted during the abstinence period. The results show that the entrances increased, suggesting that the CPP paradigm could mimic the incubation of craving. Future studies can employ this model to study neural mechanisms underlying long-term memory and incubation of craving.

Here, a morphine conditioned place preference (CPP) protocol is described to measure incubation of craving in rats.

פרוטוקול העדפה המקום ממוזגים למדידת דגירה של השתוקקות אצל חולדות

A major cause of repeated relapses is a craving for the drug. Drug craving increases progressively during the abstinence period, a phenomenon termed ...