The authors thank Mona Chambers, Geoffrey Hidalgo and Maurissa Two Two for their technical assistance. We also thank Dr. Earl White for amino acid analysis, Dr. Roger Simonds for analysis of pollen for pesticides, and Drs. Stanley S. Schneider, Vanessa Corby-Harris and Kirk Anderson for their reviews and discussion of earlier versions of the manuscript and many helpful suggestions.

1. الحصول على خبز النحل من AHB وEHB المستعمرات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الفخاخ حبوب اللقاح على مستعمرات نحل العسل وجمع حبوب اللقاح. طحن حبوب اللقاح إلى مسحوق ناعم (على غرار حبوب اللقاح من المتك تسليط) باستخدام طاحونة القهوة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إنشاء 5 مستعمرات كل من AHB وEHB في المنطقة الرحلة هو المغلقة (EFA) بحيث النحل العلف فقط على حبوب اللقاح المقدمة. لمنع العمال من الانجراف بين EHB والمستعمرات AHB، تقسيم التعليم للجميع إلى أقسام منفصلة بحيث النحل لا يمكن أن يعبر بينهما. وضع EHB الفردي أو المستعمرات AHB مع 3،500-4،000 النحل العامل، والشمع مشط مع الرحيق والعسل والحضنة غير ناضجة ومشط فارغة في كل قسم من أقسام التعليم للجميع. ملاحظة: المستعمرات لم يكن لديك تخزين حبوب اللقاح عندما أنشئت. معدل يتم تخزين حبوب اللقاح التي يمكن زيادة بنسبة لا بما في ذلك ملكة زرع في المستعمرات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغذية حبوب اللقاح الأرض إلى المستعمرات من خلال وضع صينية مع حبوب اللقاح في كل قسم من أقسام التعليم للجميع. نشر حوالي 60 غرام من حبوب اللقاح على كل علبة بحيث foraginيمكن ز النحل بجمع أنه الأحمال corbicular كما وتخزين حبوب اللقاح في مستعمراتها كما خبز النحل. مواصلة تقديم حبوب اللقاح الطازجة على كل علبة يوميا لمدة 3 أسابيع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الرجوع إلى خبز النحل من المستعمرات الأوروبية، خبز النحل الأوروبي (EBB)، ومن المستعمرات Africanized كما Africanized خبز النحل (ABB). </li></ol> 2. النحل التغذية في أقفاص <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إطارات مكان مختومة الحضنة عامل من AHB وEHB المستعمرات في أقفاص منفصلة ظهور في غرفة البيئية وضعت في 32-34 درجة مئوية والرطوبة النسبية 40٪ .. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عندما تظهر العمال وحوالي 24 ساعة من العمر، وإنشاء 12 زجاجي أقفاص الأحيائي (أبعاد = 11.5 X 7.5 × 16.5 سم 3) وإضافة إما 100 EHB ظهرت حديثا أو 100 ظهرت حديثا النحل العامل AHB إلى كل قفص. وضع قسم من مشط مع عدد معروف من خلايا إما EBB أو ABB (24-30 الخلايا في قفص) في كل قفص لتوليد تركيبات العلاج التالية: AHB تغذية ABB، EHB تغذية ABB، AHB تغذية EBB وEHB تغذية EBB. (4 العلاجات؛ (6)أقفاص في العلاج؛ 24 أقفاص في المجموع). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة قارورة من الماء والعسل 50٪ والحل المياه التي صاغها الصوت إلى كل قفص. إعادة ملء العسل والماء قارورة يوميا لفترة الدراسة 11 يوما. </li></ol> 3. النحل أخذ العينات العمال وخبز النحل وتقدير الاستهلاك <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عينة ظهرت حديثا 10 EHB وAHB العمال قبل وضعها في أقفاص. الرجوع إلى هذه كما يوم 0 النحل، ويكون لهم بمثابة الأساس لتركيزات البروتين الدملمف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة 10 النحل من كل قفص بعد أن يتغذى على EBB أو ABB لمدة 4 و 7 و 11 يوما. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع النحل الحي في أنابيب microcentrifuge الفردية وتعيين على كمادات الثلج. اختيار عينة فرعية من أربعة النحل لتحليل تركيز البروتين الدملمف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد أخذ العينات النحل في يوم-11، عد عدد الخلايا مشط التي لا تزال تحتوي على خبز النحل. هذا هو مقياس النسبي للاستهلاك خبز النحل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة خبز النحل المتبقية من الخلايا في كل قفص وتخزينها في separأكل أنابيب microcentrifuge وفقا لالقفص. الحفاظ على عينات خبز النحل في -80 درجة مئوية حتى تحليلها لدرجة الحموضة، تركيز البروتين القابلة للذوبان، ومحتوى الأحماض الأمينية. </li></ol> 4. تقدير درجة الحموضة من حبوب اللقاح وخبز النحل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يستغرق ستة عشوائية 0.3 ز عينات من حبوب اللقاح لتغذية النحل في التعليم للجميع وحله في 300 ميكرولتر من الماء المقطر. قياس الرقم الهيدروجيني باستخدام ماء مزدوج تقاطع درجة الحموضة الرمح مع دقة +0.01. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خذ 0.3 غرام عينة من خبز النحل التي بقيت بعد فترة الرضاعة 11 يوما في كل قفص. حل خبز النحل في 300 ميكرولتر من الماء المقطر وقياس درجة الحموضة كما هو موضح لحبوب اللقاح (4.1). </li></ol> 5. تحليل البروتين <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يستغرق ستة عينات من حبوب اللقاح وعينة من EBB وABB من كل قفص. عينات في مخزن -20 درجة مئوية حتى تحليلها لتركيز البروتين القابلة للذوبان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلط 20 ملغ من حبوب اللقاح إما أو خبز النحل مع 1،000 ميكرولتر من 0.1 M الفوسفات حل العازلة (PBS). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فوrtex الخليط لمدة 10 ثانية والطرد المركزي في 571.2 x ج لمدة 1 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة عينة 10 ميكرولتر من طاف ومكان في الآبار من 96 مسطحة القاع جيدا EIA / RIA لوحة البوليسترين. تكرار كل عينة في ثلاثة آبار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رسم الدملمف من النحل التي تم جمعها من كل قفص عن طريق إدخال أنبوب شعري 20 ميكرولتر (التي تم تسخينها وسحبت إلى نقطة إبرة حادة) في الجزء الجانبي الأيمن من الصدر بالقرب من نقطة الحجز على الأجنحة. جمع الدملمف إضافية، إذا لزم الأمر، عن طريق إدخال الأنبوب نفسه في غشاء بين tergites البطن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 1 ميكرولتر من الدملمف إلى 9 ميكرولتر من 0.1 M PBS. تخزين حل الدملمف في -20 درجة مئوية حتى تحليل للبروتين للذوبان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد مجموع تركيزات بروتين قابل للذوبان في غبار الطلع، خبز النحل، وعينات الدملمف باستخدام برادفورد عدة البروتين مقايسة التجارية. اتبع تعليمات الشركة الصانعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إنشاء منحنى القياسية لتقدير القابلة للذوبان البروتين جoncentration في العينات عن طريق قياس البروتين الامتصاصية مع تركيزات البروتين المعروفة في ألبومين المصل البقري (BSA). قياس البروتين الامتصاصية في 595 نانومتر باستخدام مقياس الطيف الضوئي. </li></ol> 6. الأمينية تحليل حمض <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عينات فردية تجمع من خلايا مشط من كل مستعمرة لخلق عينة تمثيلية من EBB وABB للتحليل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأخذ حبوب اللقاح 50 ملغ أو وزن عينة خبز النحل في قوارير الاوتوماتيكى، وإضافة 1 مل من الماء المقطر إلى القارورة، جنبا إلى جنب مع 100 ميكرولتر من 50 نانوغرام / ميكرولتر حل معيار داخلي تتألف من د 4 -alanine، د 23 حمض -lauric، 13 C 6 -glucose ود 39 حمض -arachidiac. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سقف العينة ويصوتن لمدة 5 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حالة خرطوشة HLB عن طريق إضافة 1 مل من الميثانول، ومعايرتها عن طريق إضافة 1 مل من الماء المقطر تليها إضافة 1 مل من خبز النحل أو حبوب اللقاح العينة. غسل خرطوشة مع 1 مل من 5.0٪ MeOH / H 2 O وELUالشركة المصرية للاتصالات مع 1 مل من 80٪ MeOH / H 2 O. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تتبخر العينة إلى جفاف تحت سيل من النيتروجين. إعادة العينة مع 50 ميكرولتر من بيريدين و 100 ميكرولتر من N، O-مكرر (trimethylsilyl) trifluoroacetamide + Trimethylchlorosilane (BSTFA + TMCS). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كاب واحتضان العينة على 70 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح للعينة لتبريد وتحويلها إلى الاوتوماتيكى قارورة نظيفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كاب ووضع العينة إلى الانتقائية للكشف عن قداس ربطه إلى اللوني الغاز لتحليل العينات على حد سواء للمركبات طيارة والأحماض العضوية. فصل الأحماض السكر والعضوية التالية TMS اشتقاق مع BSTFA + TMCS باستخدام عمود (30 م × 0.25 ملم معرف) مع سمك 1.0 ميكرون الفيلم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضبط فرن العمود في 50 C لمدة 2 دقيقة، ثم زيادة درجة حرارة خطيا إلى 290 درجة مئوية في 5 C / دقيقة. وعقد لمدة 7 دقائق. تعيين حاقن GC وGC / MS واجهة إلى 250 ° C و 290 درجة مئوية، على التوالي. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام الهليوم باعتبارها الناقل في فلومعدل W من 1.0 مل / دقيقة. ضبط درجة الحرارة مصدر MS إلى 230 درجة مئوية. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضبط ومعايرة مطياف الكتلة يوميا مع Perfluorotributylamine (PFTBA). استخدام حقن 1 ميكرولتر من PFTBA في مسح كامل (35-700 اتحاد المغرب العربي) وضع ايون ايجابية للحصول على بيانات على وجود وتركيز الأحماض الأمينية. </li></ol>

<ol>
	<li>Brodschneider, R., Crailsheim, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nutrition+and+health+in+honey+bees.">Nutrition and health in honey bees.</a> Apidologie. 41 (3), 278-294 (2010).</li><li>Spivak, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relative+success+of+Africanized+and+European+honey-bees+over+a+range+of+life-zones+in+Costa+Rica.">The relative success of Africanized and European honey-bees over a range of life-zones in Costa Rica.</a> J. Appl. Ecol. 29 (1), 150-162 (1992).</li><li>Schneider, S. S., McNally, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+foraging+patterns+and+colony+energy+status+in+the+African+honey+bee+Apis+mellifera+scutellata.">Spatial foraging patterns and colony energy status in the African honey bee Apis mellifera scutellata.</a> J. Insect Behav. 6 (2), 195-210 (1993).</li><li>Becerra-Guzman, F., Guzman-Novoa, E., Correa-Benitez, A., Zozaya-Rubio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Length+of+life,+age+at+first+foraging+and+foraging+life+of+Africanized+and+European+honey+bee+(Apis+mellifera)+workers,+during+conditions+of+resource+abundance.">Length of life, age at first foraging and foraging life of Africanized and European honey bee (Apis mellifera) workers, during conditions of resource abundance.</a> J. Api. Res. 44 (4), 151-156 (2005).</li><li>Saltykova, E. S., Lvov, A. V., Ben&#8217;kovskaya, G. V., Poskryakov, A. V., Nikolenko, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interracial+differences+in+expression+of+genes+of+antibacterial+peptides,+Abaecin,+Hymenoptaecin,+and+Defensin,+in+bees+Apis+mellifera+mellifera+and+Apis+mellifera+caucasica.">Interracial differences in expression of genes of antibacterial peptides, Abaecin, Hymenoptaecin, and Defensin, in bees Apis mellifera mellifera and Apis mellifera caucasica.</a> J. Evol. Biochem. Phys. 41 (5), 506-510 (2005).</li><li>Decanini, L. I., Collins, A. M., Evans, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variation+and+heritability+in+immune+gene+expression+by+diseased+honeybees.">Variation and heritability in immune gene expression by diseased honeybees.</a> J. Hered. 98 (3), 195-201 (2007).</li><li>Gilliam, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbiology+of+pollen+and+beebread:+the+genus+Bacillus.">Microbiology of pollen and beebread: the genus Bacillus.</a> Apidologie. 10 (3), 269-274 (1979).</li><li>Gilliam, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbiology+of+pollen+and+beebread:+the+yeasts.">Microbiology of pollen and beebread: the yeasts.</a> Apidologie. 10 (3), 43-53 (1979).</li><li>Gilliam, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+roles+of+non-pathogenic+microflora+associated+with+honey+bees.">Identification and roles of non-pathogenic microflora associated with honey bees.</a> FEMS Microbiology Letters. 155 (1), 1-10 (1997).</li><li>Loper, G. M., Standifer, L. N., Thompson, M. J., Gilliam, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemistry+and+microbiology+of+bee-collected+almond+(Prunus+dulcis)+pollen+and+beebread.+I.+Fatty+acids,+sterols,+vitamins,+and+minerals.">Biochemistry and microbiology of bee-collected almond (Prunus dulcis) pollen and beebread. I. Fatty acids, sterols, vitamins, and minerals.</a> Apidologie. 11 (1), 63-73 (1980).</li><li>Khachatryan, Z. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predominant+role+of+host+genetics+in+controlling+the+composition+of+gut+microbiota.">Predominant role of host genetics in controlling the composition of gut microbiota.</a> PLoS ONE. 3 (8), e3064 (2008).</li><li>Turnbaugh, P. J., Ley, R. E., Mahowald, M. A., Magrini, V., Mardis, E. R., Gordon, J. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+obesity+associated+gut+microbiome+with+increased+capacity+for+energy+harvest.">An obesity associated gut microbiome with increased capacity for energy harvest.</a> Nature. 444 (7122), 1027-1031 (2006).</li><li>Ley, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obesity+alters+gut+microbial+ecology.">Obesity alters gut microbial ecology.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 102 (31), 11070-11075 (2005).</li><li>Ley, R. E., Peterson, D. A., Gordon, J. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ecological+and+evolutionary+forces+shaping+microbial+diversity+in+the+human+intestine.">Ecological and evolutionary forces shaping microbial diversity in the human intestine.</a> Cell. 124 (4), 837-848 (2006).</li><li>Standifer, L. N., McCaughey, W. F., Dixon, S. E., Gilliam, M., Loper, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemistry+and+microbiology+of+pollen+collected+by+honey+bees+(Apis+mellifera+L.)+from+almond,+Prunisdulcis.+II.+Protein,+amino+acids+and+enzymes.">Biochemistry and microbiology of pollen collected by honey bees (Apis mellifera L.) from almond, Prunisdulcis. II. Protein, amino acids and enzymes.</a> Apidologie. 11 (2), 163-171 (1980).</li><li>Human, H., Nicolson, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nutritional+content+of+fresh,+bee-collected+and+stored+pollen+of+Aloe+greatheadii+var+davyana+(Asphodelaceae).">Nutritional content of fresh, bee-collected and stored pollen of Aloe greatheadii var davyana (Asphodelaceae).</a> Phytochem. 67 (14), 1486-1492 (2006).</li><li>Schneider, S. S., DeGrandi-Hoffman, G., Smith, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+African+honeybee:+Factors+contributing+to+a+successful+biological+invasion.">The African honeybee: Factors contributing to a successful biological invasion.</a> Ann. Rev. Entomol. 49, 351-376 (2004).</li><li>Winston, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+biology+and+management+of+Africanized+honey+bees.">The biology and management of Africanized honey bees.</a> Annu. Rev. Entomol. 37, 173-193 (1992).</li><li>Woyke, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brood-rearing+ef&#64257;ciency+and+absconding+in+Indian+honeybees.">Brood-rearing ef&#64257;ciency and absconding in Indian honeybees.</a> J. Apic. Res. 15 (3/4), 133-143 (1976).</li><li>Woyke, J., Fletcher, D. J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brood+rearing+and+absconding+of+tropical+honey+bees.">Brood rearing and absconding of tropical honey bees.</a> African Bees. , 96-102 (1977).</li><li>Winston, M. L., Otis, G. W., Taylor, O. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Absconding+behavior+of+the+Africanized+honey+bee+in.">Absconding behavior of the Africanized honey bee in.</a> South America. J. Api. Res. 18 (2), 85-94 (1979).</li><li>Schneider, S. S., McNally, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+in&#64258;uencing+seasonal+absconding+in+colonies+of+the+African+honey+bee,+Apis+mellifera+scutellata.">Factors in&#64258;uencing seasonal absconding in colonies of the African honey bee, Apis mellifera scutellata.</a> Insectes Soc. 39 (4), 402-423 (1992).</li><li>Hepburn, H. R., Reece, S. L., Neumann, P., Moritz, R. F. A., Radloff, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Absconding+in+honeybees+(Apis+mellifera)+in+relation+to+queen+status+and+mode+of+worker+reproduction.">Absconding in honeybees (Apis mellifera) in relation to queen status and mode of worker reproduction.</a> Insectes Soc. 46 (4), 323-326 (1999).</li><li>Harrison, J. F., Fewell, J. H., Anderson, K. E., Loper, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+physiology+of+the+invasion+of+the+Americas+by+Africanized+honeybees.">Environmental physiology of the invasion of the Americas by Africanized honeybees.</a> Integr. Comp. Biol. 46 (6), 1110-1122 (2006).</li><li>DeGrandi-Hoffman, G., Eckholm, B. J., Huang, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+bee+bread+made+by+Africaized+and+European+honey+bees+(Apis+mellifera)+and+its+effects+on+hemolymph+protein+titers.">A comparison of bee bread made by Africaized and European honey bees (Apis mellifera) and its effects on hemolymph protein titers.</a> Apidologie. 44 (1), 52-63 (2013).</li><li>Cappelari, F. A., Turcatto, A. P., Morais, M. M., DeJong, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Africanized+honey+bees+more+efficiently+convert+protein+diets+into+hemolymph+protein+than+do+Carniolan+bee+(Apis+melliferacarnica).">Africanized honey bees more efficiently convert protein diets into hemolymph protein than do Carniolan bee (Apis melliferacarnica).</a> Genet. Mol. Res. 8 (4), 1245-1249 (2009).</li><li>Human, H., Nicolson, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nutritional+content+of+fresh,+bee-collected+and+stored+pollen+of+Aloe+greatheadii+var+davyana+(Asphodelaceae).">Nutritional content of fresh, bee-collected and stored pollen of Aloe greatheadii var davyana (Asphodelaceae).</a> Phytochem. 67, 1486-1492 (2006).</li><li>Bonvehi, J. S., Jorda, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nutrient+composition+and+microbiological+quality+of+honeybee-collected+pollen+in+Spain.">Nutrient composition and microbiological quality of honeybee-collected pollen in Spain.</a> J. Agric. Food Chem. 45 (3), 725-732 (1997).</li><li>Anderson, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial+ecology+of+the+hive+and+pollination+landscape:+Bacterial+associates+from+floral+nectar,+the+alimentary+tract+and+stored+food+of+honey+bees+(Apismellifera).">Microbial ecology of the hive and pollination landscape: Bacterial associates from floral nectar, the alimentary tract and stored food of honey bees (Apismellifera).</a> PLoS ONE. 8 (12), e83125 (2013).</li><li>Southwick, E. E., Roubik, D. W., Williams, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+energy+balance+in+groups+of+Africanized+and+European+honey+bees:+ecological+implications.">Comparative energy balance in groups of Africanized and European honey bees: ecological implications.</a> Comp. Biochem. Physiol. A. 97 (1), 1-7 (1990).</li><li>Spivak, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relative+success+of+Africanized+and+European+honey-bees+over+a+range+of+life-zones+in+Costa+Rica.">The relative success of Africanized and European honey-bees over a range of life-zones in Costa Rica.</a> J. Appl. Ecol. 29 (1), 150-162 (1992).</li><li>Francoy, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphometric+and+genetic+changes+in+a+population+of+Apis+mellifera+after+34+years+of+Africanization.">Morphometric and genetic changes in a population of Apis mellifera after 34 years of Africanization.</a> Genet. Mol. Res. 8 (2), 709-717 (2009).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

باستخدام الأساليب المذكورة أعلاه، وجدنا أن خبز النحل التي أدلى بها AHB كان يستهلك بكميات أكبر من قبل كل من AHB وEHB. على الرغم من EHB وAHB تستهلك كميات مماثلة من كل نوع من خبز النحل، وكان AHB أعلى التتر البروتين الدملمف. وكانت النتائج على أساس طرقنا مماثلة إلى التقارير السابقة حيث كانت مستويات البروتين الدملمف في AHB أعلى مما كانت عليه في EHB على الرغم من كل غذيت بنفس الوجبات الغذائية 26. من خلال قياس استهلاك EBB وABB التي كانت تستهلك بمعدلات مختلفة من قبل كل من EHB وAHB، تقرر أن تركيز البروتين الدملمف في كل السلالة لا يمكن أن تثار عن طريق زيادة استهلاك الأغذية. ويبدو أن هناك هضبة لالدملمف تركيز البروتين في العمال من العمر ممرضة النحل وأن نقطة مجموعة للهضبة أعلى في AHB من EHB. هناك العديد من الشروط الهامة لإقامة المستعمرات لإنتاج خبز النحل التي من شأنها تحسين معدل تخزين حبوب اللقاح. أولا، شاركlonies تحتاج الإطارات مع الحضنة المفتوحة. دون الحضنة مفتوح لإطعام، والعمال لا جمع الكثير من حبوب اللقاح. ثانيا، يجب أن تكون مستعمرة queenless بحيث يتم إنتاج أي الحضنة إضافية. الحضنة تربية تتطلب كميات كبيرة من حبوب اللقاح، ويتم تخزين حبوب اللقاح الزائد الوحيد. في مستعمرات صغيرة أنشئت في توفير التعليم للجميع، لن يكون هناك غبار الطلع قليلا ليتم تخزينها على شكل خبز النحل إذا المناطق الحضنة تم التوسع لذلك تحتاج المستعمرات لتكون queenless. وأخيرا، لخبز النحل يتعين القيام بها، يجب جمع حبوب اللقاح كما الأحمال corbicular وتخزينها في الخلايا المشط. إذا يتم جمع حبوب اللقاح في الفخاخ حبوب اللقاح، فإنه يجب أن تكون الأرض إلى مسحوق ناعم قبل عرضه على النحل حتى يتمكنوا من جمع أنها الأحمال corbicular. أساليب لقياس استهلاك خبز النحل ولدت النوع بدلا من التقديرات المطلقة. وكان استهلاك الوحيد الذي كان يحسب عندما خلايا أفرغت تماما من الخبز النحل. يمكن الحصول على تقديرات أكثر دقة من إجمالي استهلاك الخبز النحل عن طريق إزالة ر النحلEAD من الخلايا وجعلها في باتي يمكن أن يكون وزنه قبل وبعد فترة الدراسة. ومع ذلك، أردنا للحفاظ على الخبز النحل في الخلايا بحيث النحل يمكن أن تتغذى على ذلك كما يفعلون في مستعمرة وربما تستمر معالجتها خلال فترة الدراسة. الفرق في الوزن الأقسام مشط قبل وبعد الدراسة لم تستخدم تقديرا للاستهلاك وذلك لأن الوزن قد زادت لأن النحل وضعت العسل المخفف تغذية لهم في بعض الخلايا. أيضا قد أضاف العمال بعض من العسل المخفف للخبز النحل. لهذه الأسباب، احصي الخلايا التي تحتوي على كميات متساوية تقريبا من الخبز النحل قبل وبعد فترة التغذية ولدت القياس النوعي. ومع ذلك، كان هناك وجود فرق صارخ بين هذين النوعين من خبز النحل في عدد الخلايا ABB فارغة عدها مقارنة مع EBB بعد 11 يوما. يمكن تحديد متى يصبح حبوب اللقاح المخزنة خبز النحل يكون ديfficult لأن النحل حبوب اللقاح باستمرار إضافة إلى الخلايا. تم إنشاء المستعمرات المستخدمة لإنتاج خبز النحل مع إطارات من الحضنة مفتوحة حتى النحل أن جمع حبوب اللقاح. ومع ذلك، كانت المستعمرات queenless حيث كانت هناك اليرقات لإطعام فقط حوالي 9 أيام بعد أنشئت مستعمرة. للفترة المتبقية من فترة 3 أسابيع عندما كانت المستعمرات في التعليم للجميع، وحبوب اللقاح أن النحل التي تم جمعها تخزين ويجري تحويلها إلى خبز النحل. حفظ حبوب اللقاح المخزنة في الخلايا مشط لمدة 11 يوما إضافية عند تغذية لالنحل في أقفاص أيضا قد واصلت تجهيز حبوب اللقاح إلى خبز النحل. تحويل حبوب اللقاح إلى خبز النحل يستغرق حوالي 7 أيام 8. كان خبز النحل لتغذية EHB وAHB أقل درجة الحموضة وانخفاض تركيزات البروتين مقارنة مع تغذية حبوب اللقاح. وقد تم الإبلاغ عن نتائج مماثلة للتغيرات في حبوب اللقاح خبز النحل بعد تحويل من قبل الآخرين 7،10،27. اختلفت نتائجنا من التقارير السابقة ولكن في وجود فروق في تركيزات سو الأحماض الأمينية معينة بين خبز النحل وحبوب اللقاح. التغييرات في كل من البروتين والأحماض تركيز الأحماض يمكن أن يعزى إلى نشاط الأنزيمات المحللة للبروتين، والمصدر منها قد يكون النحل أنفسهم أو المجتمعات الميكروبية التي أنشئت في خبز النحل 7،8،28،29. وكانت الأساليب المستخدمة لقياس تركيز البروتين مماثلة لتلك التي سبق وصفها لتحديد آثار البروتين الغذائي على Africanized والنحل الأوروبية 26. امتدادا من الطرق، كنا قادرين على تقدير البروتين القابلة للذوبان في حبوب اللقاح وخبز النحل. تلك الأساليب ولدت نتائج مماثلة لتقارير سابقة 7،10،27. وتقدم النتائج التي توصلنا إليها دليلا إضافيا على أن AHB استيعاب أكثر كفاءة البروتين الغذائي من EHB، وأن هذا يمكن أن يكون عاملا رئيسيا في الهيمنة الإيكولوجية للAHB في معظم المناطق حيث هاجر وتصبح أنشئت 30-32.

التغذية يلعب دورا أساسيا في صحة وحيوية مستعمرات النحل العسل وفي إنشائها كما السكان. المواد المغذية من الطعام وتوفر الطاقة والمكونات الكيميائية الحيوية اللازمة لتربية الحضنة، الحراري، تستخدم علفا والاستجابة المناعية. لمستعمرات النحل والعسل، والعناصر الغذائية اللازمة لنمو السكان مستعمرة والحفاظ على صحتهم تأتي من الرحيق وحبوب اللقاح. توفر الرحيق وغبار الطلع الكربوهيدرات لوازم المتبقية المتطلبات الغذائية مثل البروتين، والدهون، والفيتامينات والمعادن 1. يمكن أن سلالات من نحل العسل تختلف في مقرها غذائيا المعلمات على مستوى مستعمرة مثل طول العمر عامل، الحضنة تربية، وآليات الحصانة الاجتماعية 2-6. قد تكون مرتبطة هذه الاختلافات في كيفية الغذائي، لا سيما تتم معالجة حبوب اللقاح من قبل مستعمرة وهضمها في الأفراد. يتم تخزين حبوب اللقاح في الخلايا مشط وخلال بالميكروبات بوساطة حمض اللبنيك التخمير يتم تغيير كيميائيا <sup&gt; 7-10. ويطلق على حبوب اللقاح المخمرة خبز النحل. قد تكون هناك اختلافات الوراثي بين السلالات في قدرتها على الحصول على المواد الغذائية من حبوب اللقاح التي جمع وتخزين وهذا يمكن أن يؤثر على نمو المستعمرة والبقاء على قيد الحياة. وقد تم توثيق الآثار الوراثي على تجهيز الأغذية واكتساب العناصر الغذائية في الكائنات الحية الأخرى التي تسبب بعض الأفراد للحصول على مزيد من المواد الغذائية والسعرات الحرارية من غيرها في حين تستهلك نفس الأطعمة 11-14. نحن هنا وصف الأساليب المستخدمة لمقارنة تكوين واستهلاك خبز النحل التي أدلى بها سلالات مختلفة من عسل النحل. أساليب لقياس الناتج الدملمف التتر البروتين في الشغالات أيضا تم وصفها. وقد أجريت الدراسات السابقة على تكوين الغذائية للخبز النحل مع العسل النحل الأوروبية (EHB) 10،15،16. ومع ذلك، قد تكون هناك اختلافات في خبز النحل التي أدلى بها النحل من السلالات المختلفة حتى عندما تتغذى على نفس حبوب اللقاح. وتمت مقارنة EHB وAHB لأن هذه الغواصاتPECIES لها الاختلافات السلوكية والفسيولوجية المميزة التي قد تكون ذات صلة تجهيز الأغذية والمواد الغذائية اقتناء 17. بعض من أبرز الاختلافات هي التي AHB جمع واستهلاك المزيد من حبوب اللقاح من EHB ويبدو لتحويله بسهولة إلى الحضنة 18. المستعمرات AHB لديهم معدلات ويحتشدون من EHB ويهرب عندما تصبح الموارد الغذائية محدود 19-23. فرار أمر نادر الحدوث في EHB. لديهم أيضا معدلات التمثيل الغذائي AHB أعلى من EHB 24. أساس التغذية للاختلافات على مستوى مستعمرة بين EHB وAHB قد تكون ذات صلة معدل جمع حبوب اللقاح، وكذلك إلى المحتوى المغذيات لها (على سبيل المثال، والأحماض الأمينية والبروتين) بعد أن تم تحويله إلى خبز النحل. استهلاك خبز النحل واكتساب البروتين مما يؤدي أيضا قد تلعب دورا في الاختلافات على مستوى مستعمرة بين EHB وAHB. باستخدام الأساليب المتقدمة، أدلى EHB وAHB خبز النحل من مصدر حبوب اللقاح نفسه. ثم تم تغذية خبز النحل الى النحل من EACح السلالة ويمكن تحديد ما إذا كان النحل تكتسب البروتين من خبز النحل بطريقة مميزة لالسلالة أو إلى مصدر للخبز النحل.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="792">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:308px;">Name of the Material/Equipment</td>
			<td style="width:153px;">Company</td>
			<td style="width:140px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:191px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">waterproof double junction pH spear&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td>Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Coffee Grinder</td>
			<td>Mr. Coffee&#160;</td>
			<td>model 1DS77</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Dulbecco&#39;s phosphate buffer solution</td>
			<td>Emd-millipore</td>
			<td>BSS-1005-B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">EIA/RIA polystyrene plate</td>
			<td>Sigma-Aldrich-Corning</td>
			<td align="left">CLS3590-100EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">microcapillary pipets</td>
			<td>Kimble Glass Inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Quick Start Bradford Protein Assay Kit 2&#160;</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>#500-0202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td>Laboratories</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Spectrophotometer</td>
			<td>Biotek Synergy HT&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mass Selective Detector&#160;</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>5973N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">HLB cartridge</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">gas chromatograph&#160;</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>6930</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#160;gas chromatography column&#160;</td>
			<td>A J&#38;W Scientific&#160;</td>
			<td>DB-1701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">d4-alanine&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>488917</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">d23-lauric acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>451401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">13C6-glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>389374</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pyridine&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>270970</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">N,O-Bis (trimethylsilyl)trifluoroacetamide +&#160;&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Trimethylchlorosilane (BSTFA + TMCS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>33148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Perfluorotributylamine (PFTBA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>442747-U</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;">d39-arachidiac acid</td>
			<td>Cambridge Isotope&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td>Laboratories</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

methods for comparing nutrients in beebread made by africanized and european honey bees and the effects on hemolymph protein titers

عسل النحل الحصول على المواد الغذائية من حبوب اللقاح التي يجمعونها وتخزينها في الخلية كما خبز النحل. قمنا بتطوير طرق للسيطرة على مصدر حبوب اللقاح التي جمع النحل وتحويله إلى خبز النحل عن طريق وضع المستعمرات في منطقة رحلة المغلقة شيدت خصيصا. تم تطوير طرق لتحليل البروتين وتكوين الأحماض الأمينية من حبوب اللقاح وخبز النحل. وصفنا أيضا كيف تم قياس استهلاك خبز النحل والأساليب المستخدمة لتحديد عامل الكبار التتر البروتين الدملمف النحل بعد تتغذى على خبز النحل لمدة 4 و 7 و 11 أيام بعد ظهور. طبقت أساليب لتحديد ما إذا كان النمط الجيني يؤثر على تحويل حبوب اللقاح إلى خبز النحل والمعدل الذي النحل تستهلك والحصول على البروتين من ذلك. قدمت مع مصدر حبوب اللقاح نفسه، واثنتان السلالة (EHB وAHB على التوالي نحل العسل الأوروبية وAfricanized). وبناء على أساليب تطويرها، وكان خبز النحل التي أدلى بها كل من سلالات أقل تركيزات البروتين والقيم الرقم الهيدروجيني من حبوب اللقاح. بشكل عام، الأمينية يخدع الحمضيةكانت centrations في خبز النحل التي أدلى بها إما EHB أو AHB مماثلة وقعت في المستويات العليا في خبز النحل مما كان عليه في حبوب اللقاح. كلا AHB وEHB تستهلك أكثر بكثير من خبز النحل التي أدلى بها AHB من قبل EHB. على الرغم من EHB وAHB تستهلك كميات مماثلة من كل نوع من خبز النحل، وكانت تركيزات البروتين الدملمف في AHB أعلى مما كانت عليه في EHB. قد تعكس الاختلافات في اكتساب البروتين بين AHB وEHB التكيفات البيئية المتصلة المنطقة الجغرافية التي تطورت كل السلالات. هذه الاختلافات يمكن أن يسهم في نجاح إنشاء السكان AHB في العالم الجديد بسبب الآثار المترتبة على تربية الحضنة والنمو مستعمرة.

<html> تم تخزينها خبز النحل في -80 درجة مئوية لمدة أقل من شهر قبل أن يتم تحليلها لدرجة الحموضة والبروتين التركيز، ولمدة 4 أشهر قبل تحليل الأحماض الأمينية. اختلف خبز النحل من حبوب اللقاح في درجة الحموضة وتركيز البروتين (الشكل 1). وكانت درجة حموضة أقل من خبز النحل حبوب اللقاح كما كان تركيز البروتين. كلا EHB وAHB تستهلك المزيد من ABB من EBB (الشكل 2). وكانت مستويات من البروتين القابلة للذوبان في الدملمف من AHB أعلى بكثير من EHB بغض النظر عن نوع من خبز النحل أنها تستهلك (الشكل 3). وقعت هذه الاختلافات في مستويات البروتين الدملمف على الرغم من EHB وAHB تستهلك كميات مماثلة من كل نوع من خبز النحل. عمر النحل في وقت أخذ العينات تتأثر بشكل كبير تركيزات البروتين القابلة للذوبان في الدملمف. وكانت تركيزات البروتين أقل من ذلك بكثير في يوم 4 النحل مقارنة مع يوم 7 أو 11 والتي لم تختلف. <html> _content &quot;&gt; من الأحماض الأمينية 10 التي هي ضرورية لنحل العسل، تم الكشف عن ولكن الحامض الاميني في حبوب اللقاح. وفي معظم الحالات، كانت تركيزات الأحماض الأمينية تقاس خبز النحل أعلى مما كانت عليه في حبوب اللقاح (الشكل 4). على سبيل المثال، تركيزات كان ليسين وثريونين أعلى بحوالي 60٪ في خبز النحل مقارنة مع حبوب اللقاح، وكانت تركيزات حمض أميني أساسي أعلى بنحو 25٪. ألانين، كما كانت مستويات حمض، الجلوتامين، وميثيونين الأسبارتيك العالي في خبز النحل مما كان عليه في حبوب اللقاح. لم تركيزات الأحماض الأمينية لا تختلف كثيرا بين كانت ABB وEBB باستثناء الفنيل الأنين والسيستين. مستويات الفنيل الانين عن ضعفي في ABB مقارنة مع أي EBB أو حبوب اللقاح. وكانت تركيزات أقل السيستين في EBB مقارنة مع ABB أو حبوب اللقاح، وكان تريبتوفان الوحيد الحاضر الأحماض الأمينية في تركيزات أعلى في وكانت حبوب اللقاح مما كان عليه في EBB أو ABB. تركيزات البرولين في حبوب اللقاح وABB أعلى منه في EBB. &quot;دائما&quot;&gt; <img alt="الشكل (1)" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/52448/52448fig1highres.jpg" width="600" /> الشكل 1: مقارنات الرقم الهيدروجيني (A) وتركيزات البروتين القابلة للذوبان (B) في حبوب اللقاح وخبز النحل التي أدلى بها الأوروبي (EHB) أو Africanized (AHB) عسل النحل. كانت درجة الحموضة من حبوب اللقاح أعلى بكثير من خبز النحل على النحو الذي يحدده تحليل التباين (F = 2،12 3725، ص &lt;0.0001) تليها Tukeys W- التجارب المقارنة متعددة. وكان تركيز البروتين في حبوب اللقاح أعلى بكثير مما كانت عليه في خبز النحل التي أدلى بها EHB (EBB) أو AHB (ABB) (F = 2،27 16.49؛ P &lt;0.0001). وسائل تليها نفس الرسالة ليست مختلفة بشكل ملحوظ على مستوى 0.05. <img alt="الشكل 2" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/52448/52448fig2highres.jpg" width="600" /> الشكل 2: متوسط ​​النسبة المئوية للسلليرة سورية تحتوي على خبز النحل التي كانت تستهلك تماما على مدى فترة 11 يوما بعد النحل في قفص. وجاء خبز النحل إما الأوروبي (EHB) أو Africanized (AHB) النحل باستخدام مصدر حبوب اللقاح نفسه. وقدرت وسائل من خمسة أقفاص من كل معاملة. أولئك الذين لديهم نفس الرسالة لا تختلف بشكل ملحوظ على مستوى 0.05 على النحو الذي يحدده تحليل التباين الأحادي (F = 3،16 7.3، ع = 0.003) وتوكي W الاختبار. لقد تم تعديل هذا الشكل من 25. <img alt="الشكل (3)" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/52448/52448fig3highres.jpg" width="600" /> الرقم 3: متوسط ​​تركيز البروتين في الدملمف من أوروبا (EHB) أو Africanized (AHB) نحل العسل خبز النحل يتغذى التي أدلى بها Africanized (ABB) النحل الأوروبي (EBB) أو لمدة 4 و 7 و 11 يوما تحليل التدابير المتكررة. وأشار التباين اختلافات كبيرة بين trea 4مجموعات tment (F = 3،20 19.7، p &lt;0.001). وكانت مستويات من البروتين القابلة للذوبان في AHB تغذية ABB أعلى بكثير من EHB تغذية ABB (ع = 0.008) أو EBB (ع = 0.018). عمر النحل في وقت أخذ العينات تتأثر بشكل كبير تركيزات البروتين القابلة للذوبان في الدملمف. وكانت مستويات أقل من ذلك بكثير في يوم 4 النحل مقارنة مع يوم 7 (ع &lt;0.0001) أو 11 (P = 0.001). لم يوم 7 و day11 النحل لا تختلف (ع = 0.149). لقد تم تعديل هذا الرقم من 25. <img alt="الشكل (4)" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/52448/52448fig4highres.jpg" width="600" /> الرقم 4: تركيزات الأحماض الأمينية (ميكروغرام لكل غرام من حبوب اللقاح أو خبز النحل) في حبوب اللقاح أو خبز النحل جعلت منه EBB وخبز النحل الذي أدلى به النحل الأوروبية وقدم ABB من قبل النحل Africanized. تم رسم التربتوفان، السيستين، الفنيل الأنين والبرولين بشكل منفصل لأغراض الوضوح في ما قبلsenting مبالغها. لقد تم تعديل هذا الرقم من 25.

Watch this Scientific Journal Video about Methods for Comparing Nutrients in Beebread Made by Africanized and European Honey Bees and the Effects on Hemolymph Protein Titers at JoVE.com

Methods for Comparing Nutrients in Beebread Made by Africanized and European Honey Bees and the Effects on Hemolymph Protein Titers

Here are methods to quantify nutrients in pollen before and after its conversion to beebread by two subspecies of honeybees. We describe techniques to measure beebread consumption and resulting protein titers in both subspecies.

طرق لمقارنة العناصر الغذائية في خبز النحل الذي أدلى به Africanized والعسل النحل الأوروبي والتأثيرات على التتر البروتين الدملمف

Honey bees obtain nutrients from pollen they collect and store in the hive as beebread. We developed methods to control the pollen source that bees ...

methods-for-comparing-nutrients-beebread-made-africanized-european

Research

JoVE Journal

Biology

10.6K Views.  USDA-ARS. Here are methods to quantify nutrients in pollen before and after its conversion to beebread by two subspecies of honeybees. We describe techniques to measure beebread consumption and resulting protein titers in both subspecies. 

Video: Methods for Comparing Nutrients in Beebread Made by Africanized and European Honey Bees and the Effects on Hemolymph Protein Titers

Monitoring Acupuncture Effects on Human Brain by fMRI

Functional MRI is used to study the effects of acupuncture on the BOLD response and the functional connectivity of the human brain.  Results demonstrate that acupuncture mobilizes a limbic-paralimbic-neocortical network and its anti-correlated sensorimotor/paralimbic network at multiple levels of the brain and that the hemodynamic response is influenced by the psychophysical response.  Physiological monitoring may be performed to explore the peripheral response of the autonomic nerve function. This video describes the studies performed at LI4 (hegu), ST36 (zusanli) and LV3 (taichong), classical acupoints that are commonly used for modulatory and pain-reducing actions. Some issues that require attention in the applications of fMRI to acupuncture investigation are noted.

FMRI and physiological monitoring is used to study the effects of Acupuncture on the central and peripheral nervous systems. Acupuncture mobilizes a limbic-paralimbic-neocortical network, with great overlap with the default mode network, to modulate neurological activity, possibly related to its autonomic effect in the peripheral nervous system.

رصد تأثيرات الوخز بالإبر في الدماغ بواسطة الرنين المغناطيسي الوظيفي الإنسان

Functional MRI is used to study the effects of acupuncture on the BOLD response and the functional connectivity of the human brain.  Results demonstrate ...

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamA&Delta;41

Magnetotactic bacteria comprise a diverse group of aquatic microorganisms that are able to orientate themselves along geomagnetic fields. This behavior is believed to aid their search for suitable environments (1). This capability is conferred by the magnetosome, a subcellular organelle that consists of a linear-chain assembly of lipid vesicles each able to biomineralize and enclose a ~50-nm crystal of magnetite or greigite. A principle component of the magnetosome that was shown to be required for the formation of functional vesicles is MamA. MamA is a highly abundant magnetosome-associated protein which is one of the most characterized magnetosome-associated proteins in vivo (2-6). This article focuses on the purification of MamA, which despite being studied in vivo, no clear functional or structural details have been identified for it. Bioinformatics analysis suggested that MamA is a tetra-tricopeptide repeat (TPR) containing protein. TPR is a structural motif found as such or forming part of a bigger fold in a wide range of proteins, it serves as a template for protein-protein interactions and mediates multi-protein complexes (7). TPRs are involved in many crucial tasks in eukaryotic cell organelle processes and many bacterial pathways (8-14). In order to understand MamA, a unique TPR containing protein, highly purified protein is required as a first step. In this article, we present the purification protocol for a stable MamA deletion mutant (MamA&Delta;41) from M. magneticum AMB-1.

Purification of the &lt;em&gt;M. magneticum&lt;/em&gt; Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamA&amp;Delta;41

MamA is a unique Magnetosome associated protein which was shown to be involved in magnetosome activation. Here we present the purification protocol of MamA deletion mutant (MamA&Delta;41) from M. magneticum AMB-1.

تنقية م. magneticum سلالة AMB - 1 بروتين المرتبطين Magnetosome MamAΔ41

Magnetotactic bacteria comprise a diverse group of aquatic microorganisms that are able to orientate themselves along geomagnetic fields. This behavior is ...

Combining Single-molecule Manipulation and Imaging for the Study of Protein-DNA Interactions

The paper describes the combination of optical tweezers and single molecule fluorescence detection for the study of protein-DNA interaction. The method offers the opportunity of investigating interactions occurring in solution (thus avoiding problems due to closeby surfaces as in other single molecule methods), controlling the DNA extension and tracking interaction dynamics as a function of both mechanical parameters and DNA sequence. The methods for establishing successful optical trapping and nanometer localization of single molecules are illustrated. We illustrate the experimental conditions allowing the study of interaction of lactose repressor (lacI), labeled with Atto532, with a DNA molecule containing specific target sequences (operators) for LacI binding. The method allows the observation of specific interactions at the operators, as well as one-dimensional diffusion of the protein during the process of target search. The method is broadly applicable to the study of protein-DNA interactions but also to molecular motors, where control of the tension applied to the partner track polymer (for example actin or microtubules) is desirable.

Here we describe the instrumentation and methods for detecting single fluorescently-labeled protein molecules interacting with a single DNA molecule suspended between two optically trapped microspheres.

الجمع بين التلاعب جزيء واحدة والتصوير لدراسة التفاعلات-DNA البروتين

The paper describes the combination of optical tweezers and single molecule fluorescence detection for the study of protein-DNA interaction. The method ...

Quantitation of Endothelial Cell Adhesiveness In Vitro

One of the cardinal processes of inflammation is the infiltration of immune cells from the lumen of the blood vessel to the surrounding tissue. This occurs when endothelial cells, which line blood vessels, become adhesive to circulating immune cells such as monocytes. In vitro measurement of this adhesiveness has until now been done by quantifying the total number of monocytes that adhere to an endothelial layer either as a direct count or by indirect measurement of the fluorescence of adherent monocytes. While such measurements do indicate the average adhesiveness of the endothelial cell population, they are confounded by a number of factors, such as cell number, and do not reveal the proportion of endothelial cells that are actually adhesive. Here we describe and demonstrate a method which allows the enumeration of adhesive cells within a tested population of endothelial monolayer. Endothelial cells are grown on glass coverslips and following desired treatment are challenged with monocytes (that may be fluorescently labeled). After incubation, a rinsing procedure, involving multiple rounds of immersion and draining, the cells are fixed. Adhesive endothelial cells, which are surrounded by monocytes are readily identified and enumerated, giving an adhesion index that reveals the actual proportion of endothelial cells within the population that are adhesive.

Quantitation of Endothelial Cell Adhesiveness In Vitro

We report an in vitro method that allows the quantitation of the actual number of adhesive cells within an endothelial cell monolayer.

الكميات من البطانية الإلتصاق الخليوي<em&gt; في المختبر</em

One of the cardinal processes of inflammation is the infiltration of immune cells from the lumen of the blood vessel to the surrounding tissue. This ...

Gap Junctional Intercellular Communication: A Functional Biomarker to Assess Adverse Effects of Toxicants and Toxins, and Health Benefits of Natural Products

This protocol describes a scalpel loading-fluorescent dye transfer (SL-DT) technique that measures intercellular communication through gap junction channels, which is a major intercellular process by which tissue homeostasis is maintained. Interruption of gap junctional intercellular communication (GJIC) by toxicants, toxins, drugs, etc. has been linked to numerous adverse health effects. Many genetic-based human diseases have been linked to mutations in gap junction genes. The SL-DT technique is a simple functional assay for the simultaneous assessment of GJIC in a large population of cells. The assay involves pre-loading cells with a fluorescent dye by briefly perturbing the cell membrane with a scalpel blade through a population of cells. The fluorescent dye is then allowed to traverse through gap junction channels to neighboring cells for a designated time. The assay is then terminated by the addition of formalin to the cells. The spread of the fluorescent dye through a population of cells is assessed with an epifluorescence microscope and the images are analyzed with any number of morphometric software packages that are available, including free software packages found on the public domain. This assay has also been adapted for in vivo studies using tissue slices from various organs from treated animals. Overall, the SL-DT assay can serve a broad range of in vitro pharmacological and toxicological needs, and can be potentially adapted for high throughput set-up systems with automated fluorescence microscopy imaging and analysis to elucidate more samples in a shorter time.

This protocol describes a scalpel loading-fluorescent dye transfer technique that measures intercellular communication through gap junction channels. Gap junctional intercellular communication is a major cellular process by which tissue homeostasis is maintained and disruption of this cell signaling has adverse health effects.

الفجوة صلي بين الخلايا الاتصالات: العلامات البيولوجية الوظيفية لتقييم التأثيرات السلبية للالسميات والسموم، والصحة فوائد المنتجات الطبيعية

This protocol describes a scalpel loading-fluorescent dye transfer (SL-DT) technique that measures intercellular communication through gap junction ...

Comparison of Tobacco Host Cell Protein Removal Methods by Blanching Intact Plants or by Heat Treatment of Extracts

Plants not only provide food, feed and raw materials for humans, but have also been developed as an economical production system for biopharmaceutical proteins, such as antibodies, vaccine candidates and enzymes. These must be purified from the plant biomass but chromatography steps are hindered by the high concentrations of host cell proteins (HCPs) in plant extracts. However, most HCPs irreversibly aggregate at temperatures above 60 &#176;C facilitating subsequent purification of the target protein. Here, three methods are presented to achieve the heat precipitation of tobacco HCPs in either intact leaves or extracts. The blanching of intact leaves can easily be incorporated into existing processes but may have a negative impact on subsequent filtration steps. The opposite is true for heat precipitation of leaf extracts in a stirred vessel, which can improve the performance of downstream operations albeit with major changes in process equipment design, such as homogenizer geometry. Finally, a heat exchanger setup is well characterized in terms of heat transfer conditions and easy to scale, but cleaning can be difficult and there may be a negative impact on filter capacity. The design-of-experiments approach can be used to identify the most relevant process parameters affecting HCP removal and product recovery. This facilitates the application of each method in other expression platforms and the identification of the most suitable method for a given purification strategy.

Three heat precipitation methods are presented that effectively remove more than 90% of host cell proteins (HCPs) from tobacco extracts prior to any other purification step. The plant HCPs irreversibly aggregate at temperatures above 60 &#176;C.

مقارنة التبغ طرق إزالة المضيف بروتين الخلية من قبل السلق النباتات سليمة أو عن طريق المعالجة الحرارية من مقتطفات

Plants not only provide food, feed and raw materials for humans, but have also been developed as an economical production system for biopharmaceutical ...

Monitoring Colony-level Effects of Sublethal Pesticide Exposure on Honey Bees

The effects of sublethal pesticide exposure to honey bee colonies may be significant but difficult to detect in the field using standard visual assessment methods. Here we describe methods to measure the quantities of adult bees, brood, and food resources by weighing hives and hive parts, by photographing frames, and by installing hives on scales and with internal sensors. Data from these periodic evaluations are then combined with running average and daily detrended data on hive weight and internal hive temperature. The resulting datasets have been used to detect colony-level effects of imidacloprid applied in a sugar syrup as low as 5 parts per billion. The methods are objective, require little training, and provide permanent records in the form of sensor output and photographs.

Sublethal doses of pesticides may affect colonies in ways that are difficult to detect using only periodic or visual methods. Methods to measure total adult bee mass, brood, and food resources by weighing hives and hive parts, photographing frames, and installing sensors, are provided. Data analysis is also addressed.

رصد آثار مستعمرة-مستوى التعرض لمبيدات الآفات المقاسة على نحل العسل

The effects of sublethal pesticide exposure to honey bee colonies may be significant but difficult to detect in the field using standard visual assessment ...

Methods to Study Changes in Inherent Protein Aggregation with Age in Caenorhabditis elegans

In the last decades, the prevalence of neurodegenerative disorders, such as Alzheimer's disease (AD) and Parkinson's disease (PD), has grown. These age-associated disorders are characterized by the appearance of protein aggregates with fibrillary structure in the brains of these patients. Exactly why normally soluble proteins undergo an aggregation process remains poorly understood. The discovery that protein aggregation is not limited to disease processes and instead part of the normal aging process enables the study of the molecular and cellular mechanisms that regulate protein aggregation, without using ectopically expressed human disease-associated proteins. Here we describe methodologies to examine inherent protein aggregation in Caenorhabditis elegans through complementary approaches. First, we examine how to grow large numbers of age-synchronized C. elegans to obtain aged animals and we present the biochemical procedures to isolate highly-insoluble-large aggregates. In combination with a targeted genetic knockdown, it is possible to dissect the role of a gene of interest in promoting or preventing age-dependent protein aggregation by using either a comprehensive analysis with quantitative mass spectrometry or a candidate-based analysis with antibodies. These findings are then confirmed by in vivo analysis with transgenic animals expressing fluorescent-tagged aggregation-prone proteins. These methods should help clarify why certain proteins are prone to aggregate with age and ultimately how to keep these proteins fully functional.

Methods to Study Changes in Inherent Protein Aggregation with Age in Caenorhabditis elegans

The goal of the method presented here is to explore protein aggregation during normal aging in the model organism C. elegans. The protocol represents a powerful tool to study the highly insoluble large aggregates that form with age and to determine how changes in proteostasis impact protein aggregation.

أساليب "دراسة التغيرات" في "تجميع البروتين الأصيل" مع التقدم في السن في ايليجانس كاينورهابديتيس

In the last decades, the prevalence of neurodegenerative disorders, such as Alzheimer's disease (AD) and Parkinson's disease (PD), has grown. These ...

Quantification of Site-specific Protein Lysine Acetylation and Succinylation Stoichiometry Using Data-independent Acquisition Mass Spectrometry

Post-translational modification (PTM) of protein lysine residues by N&#400;-acylation induces structural changes that can dynamically regulate protein functions, for example, by changing enzymatic activity or by mediating interactions. Precise quantification of site-specific protein acylation occupancy, or stoichiometry, is essential for understanding the functional consequences of both global low-level stoichiometry and individual high-level acylation stoichiometry of specific lysine residues. Other groups have reported measurement of lysine acetylation stoichiometry by comparing the ratio of peptide precursor isotopes from endogenous, natural abundance acylation and exogenous, heavy isotope-labeled acylation introduced after quantitative chemical acetylation of proteins using stable isotope-labeled acetic anhydride. This protocol describes an optimized approach featuring several improvements, including: (1) increased chemical acylation efficiency, (2) the ability to measure protein succinylation in addition to acetylation, and (3) improved quantitative accuracy due to reduced interferences using fragment ion quantification from data-independent acquisitions (DIA) instead of precursor ion signal from data-dependent acquisition (DDA). The use of extracted peak areas from fragment ions for quantification also uniquely enables differentiation of site-level acylation stoichiometry from proteolytic peptides containing more than one lysine residue, which is not possible using precursor ion signals for quantification. Data visualization in Skyline, an open source quantitative proteomics environment, allows for convenient data inspection and review. Together, this workflow offers unbiased, precise, and accurate quantification of site-specific lysine acetylation and succinylation occupancy of an entire proteome, which may reveal and prioritize biologically relevant acylation sites.

Here, we present unbiased quantification of site-specific protein acetylation and/or succinylation occupancy (stoichiometry) of an entire proteome through a ratiometric analysis of endogenous modifications to modifications introduced after quantitative chemical acylation using stable isotope-labeled anhydrides. In combination with sensitive data-independent acquisition mass spectrometry, accurate site occupancy measurements are obtained.

التحديد الكمي للبروتين خاصة بالموقع يسين Acetylation و Succinylation Stoichiometry الكتلي حيازة مستقلة عن البيانات باستخدام

Post-translational modification (PTM) of protein lysine residues by N&#400;-acylation induces structural changes that can dynamically regulate protein ...

Detecting and Characterizing Protein Self-Assembly In Vivo by Flow Cytometry

Protein self-assembly governs protein function and compartmentalizes cellular processes in space and time. Current methods to study it suffer from low-sensitivity, indirect read-outs, limited throughput, and/or population-level rather than single-cell resolution. We designed a flow cytometry-based single methodology that addresses all of these limitations: Distributed Amphifluoric FRET or DAmFRET. DAmFRET detects and quantifies protein self-assemblies by sensitized emission FRET in vivo, enables deployment across model systems-from yeast to human cells-and achieves sensitive, single-cell, high-throughput read-outs irrespective of protein localization or solubility.

This article describes a FRET-based flow cytometry protocol to quantify protein self-assembly in both S. cerevisiae and HEK293T cells.