المؤلفون ممتنون للمساعدة السيدة شارون سبانا في رصد القوارض والمناولة والتجريب. تم توفير الدعم المالي الدكتوراه من جامعة سيدني ومركز الأبحاث الأسترالية للتميز في الرؤية.

هذا البروتوكول يتبع المبادئ التوجيهية رعاية الحيوان من جامعة سيدني. 1. صنع أقطاب <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بناء القطب الموجب (واحد والتي سوف نتصل القرنية) من مسافة قصيرة (5 سم) طول سلك البلاتين 1-2 مم في القطر. أزياء قبل أن تتحول إلى حلقة بضعة ملليمترات. ربط هذه الحلقة إلى رصاص التقليدي، طويلة بما فيه الكفاية للوصول إلى مرحلة الإدخال من مكبر للصوت (انظر الشكل 4). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بناء القطب السالب (والتي سوف تذهب في فم الحيوان) باستخدام حج / أجكل بيليه 1-2 مم في القطر، وأيضا على صلة الرصاص اتفاقية (انظر الشكل 4). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كما القطب المرجعية (التي سوف تذهب إلى الردف الحيوان)، واستخدام إبرة تحت الجلد نظيفة (23 G)، مرتبطة أيضا بفارق طول المناسب (انظر الشكل 4). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> من الناحية المثالية، استخدام الكابلات الثلاثة الرصاص المقدمة من قبل الشركات المصنعة أداة، لتوصيل الأقطاب الثلاثة (إيجابية U94؛ القرنية، سلبي → الفم، إشارة → الكفل) لمكبر للصوت. </li></ol> 2. اتصال ومعايرة ضوء التحفيز وأرج مجموعة المتابعة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إنشاء (أو موقع) مختبر تسجيل صغير، والتي يمكن أن تكون مصنوعة الظلام. تجهيز مع أي من الإفراط في مقاعد البدلاء ضوء مصنوعة أحمر أو أحمر الرأس مصباح أو كليهما. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام متر لوكس للتأكد من أن الضوء الأحمر مضوائية الوصول إلى عين فأر أثناء الإعداد لا تتجاوز 1 لوكس. ملاحظة: يمكن استخدام فلتر الكثافة محايدة للحد من سطوع المصباح ومصدر ضوء مصباح يجب أن تنبعث منها على وجه التحديد الضوء الأحمر. وسوف يتأثر التكيف الظلام إذا مصادر الضوء ينبعث الدنيا (مرئية) الأطوال الموجية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اغلاق كافة الضوء الشارد دخول المختبر تسجيل (هذا غالبا ما يتطلب استمرار مع الشريط مبهمة) وإعداد فلتر الكثافة المحايدة (يمكن شراؤها في ورقة) كبيرة بما يكفي لتناسب أكثر، وخافت جدا، أي شاشة الكمبيوتر سوف يكون في المختبر. ملاحظة: ضوء شارد وضوء شاشة تكفي ليمس التكيف مع الظلام من العين الفئران. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توصيل مكبر للصوت الأجهزة الحصول على البيانات. ربط الإيجابية، ويؤدي سلبية وإشارة إلى مكبر للصوت. تأكد من توصيل الكمبيوتر وفريق Ganzfeld الصمام وحدة إمدادات الطاقة بشكل آمن إلى مصدر الأرض. ملاحظة: بعض المعامل المتخصصة ونقاط التأريض، متصلة الأرض بناء. النرجيلة هو بديل فعال. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> معايرة مصدر ضوء LED مع الاشعاع البحوث ذات الجودة. إصلاح أجهزة الاستشعار المقياس في الموضع الذي سيقع العين الحيوان أثناء التجربة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> برنامج المصابيح فريق Ganzfeld لتشغيل بروتوكول أرج كامل الحقل مع زيادات تدريجية في الطاقة فلاش، مدة فلاش، فلاش التكرار والوقت بين ومضات، ووصف interstimuls الفاصلة (ISI)، إعدادات. لوضع بروتوكول سبيل المثال كامل الحقل أنظر الجدول 1. ملاحظة: حقل كامل زيادة ومضات أرج من ومضات خافتة المتكررة لبومضات الصحيحة بطريقة حكيمة الخطوة. يتبع برنامج فلاش مزدوج على من بروتوكول كامل الحقل ويمكن عزل قضيب ومخروط الردود. </li></ol> 3. يوم قبل أرج التجريب <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الظلام التكيف مع الفئران سبراغ داولي لمدة 12 ساعة قبل التسجيل. أنه لأمر مريح للقيام بذلك في المختبر التسجيل، مرة واحدة وقد تم القضاء على ضوء شارد. </li></ol> 4. يوم أرج التجريب <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ترتيب للحيوان أن تكون ساخنة بلطف أثناء التسجيل. نستخدم منصة المعادن الخفيفة بنيت بحيث رأس الحيوان يمكن أن تبقى عند نقطة الصحيحة عند مدخل إلى فريق Ganzfeld. على منصة لديه أنابيب يحمل في ثناياه عوامل نستطيع من خلالها ضخ المياه مسخن الى 40 درجة مئوية في حمام مائي. ملاحظة: تبين التجربة أن هذا يبقي درجة الحرارة الأساسية الحيوان عند 37 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وزن الفئران في ظل الظروف المظلمة. سجل الوزن والماكياج الكيتامين الصحيح (60 ملغ / كلغ) وزيلازين (5 ملغ / كلغ) جرعة. كبح جماح الفئران جنرالTLY وحقن مخدر داخل الصفاق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملاحظة وقت الحقن. مرة واحدة الحيوان فاقد الوعي (عادة في غضون 5 دقائق) تحقق عمق التخدير بواسطة معسر برفق وسادة قدم واحدة، لمعرفة ما إذا كان رد الفعل المنعكس موجودة. فمن الأفضل أن ننتظر حتى هذا لا ارادي غير موجود أو ضعيف، قبل المتابعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق قطرة واحدة من الأتروبين وآخر من proxmethacaine إلى القرنية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع بطول 10 سم من الخيط الأسود. جعل حلقة مع عقدة بسيطة وزلة حلقة فوق خط الاستواء للعين. تشديد عليه قليلا؛ وأثر هو رسم مقلة العين إلى الأمام قليلا، مع الحد الأدنى من الضغط. هذا يحافظ على القرنية واضحة من الجفون. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطرات العين تطبيق كربومير على سطح القرنية. تبقى ضمان كربومير على سطح القرنية ولا تسرب على الجفون أو وجهه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الفراش ماصة على قمة منصة ساخنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> موقف الفئران على الفراش، مع الرأس في مكان الموصى بها في الجلسة الافتتاحية للفريق Ganzfeld. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج الباحثالتحقيق في درجة الحرارة ernal في المستقيم. التحقيق في درجة الحرارة آمن في الموقف عن طريق تسجيل الحبل التحقيق الى الذيل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج القطب المرجعية (إبرة 23 G) تحت الجلد في الساق الخلفية، والاتصال مكبر للصوت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع القطب السالب (بيليه حج / أجكل) بشكل آمن في الفم. لمنع هذا الانزلاق خارج الفم، ويضعوا زمام المبادرة بالاتصال على سطح ثابت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع القطب الموجب على مركز للقرنية. باستخدام micromanipulator، تأكد من أن القطب يلمس القرنية بلطف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحقق من درجة حرارة الجسم في 37،0-37،5 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة يتم وضع الحيوان بشكل صحيح والأقطاب في مكانها الصحيح، ثنى الإعداد كله (فريق Ganzfeld والحيوان) مع مادة مبهمة (للحفاظ على التكيف مع الظلام). نستخدم قطعة قماش سوداء لينة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في برنامج الحصول على تعيين في معدل أخذ العينات 2 كيلو هيرتز مع الوقت مجموعة من 100-1000 ميللي ثانية مع 5 ميللي ثانية لأخذ العينات قبل المجموعة. تعيين مرشحات تمرير الفرقة 1-1،000يتم تشغيل هرتز والتأكد من أخذ العينات لأخذ عينات من فترة ~ 250 مللي ثانية بعد ومضة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحقق من الأساس التسجيل. يجب أن تكون خالية من الضوضاء الدخيلة، ولكن تظهر بعض الضوضاء مكبر للصوت والتذبذب في الجهاز التنفسي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا تبين الأساس الضوضاء الدخيلة، تبدأ المشاكل. ترتبط معظم مشاكل لإنزلاق في موقف القطب، أو التأريض. استخدام قفص فاراداي لضمان التسجيلات خالية من الضوضاء الدخيلة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشغيل فلاش اختبار، 0.4 سجل الاسكتلندي cd.sm -2. الموجي أرج على غرار الشكل يجب أن تظهر 2A. في مختبرنا ردود نموذجية ل0.4 سجل الاسكتلندي cd.sm -2 فلاش هي: (أ الموجة: -474 ± 39 μV وب الموجة: 1512 ± 160 μV، ن = 11). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح الحيوان مظلمة إعادة التكيف لمدة 10 دقيقة. أنها مريحة لاستخدام هذه 10 دقيقة لإعادة فحص خط الأساس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد تأكيد إشارة مستقرة تبدأ تسجيل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في نهاية الدورة تسجيل، تأكد من أن temperat الجسمواستمر لدى عودتهم. إزالة الأقطاب. تطبيق البوليمر كربومير لقرنية العين. السماح للحيوان للتعافي على وسادة الحرارة حتى يصبح المحمول بشكل كامل وفعال، قبل أن يعود إلى حظائر الحيوانات. </li></ol> 5. نقص التروية عن بعد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أداء نقص التروية عن بعد في أي من القوارض مستيقظا أو anesthetised. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا تم تخدير الحيوان، وضعه على منصة ساخنة (أعلاه)، وتنزلق الكفة مقياس ضغط الدم على الجزء العلوي من أطرافه الخلفية، واضحة في الركبة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا تم استخدام الحيوانات ليجري التعامل معها، فمن الممكن لتنفيذ هذا الإجراء دون تخدير. هذا يتطلب شخصين. شخص واحد يقيد الحيوان برفق والثانية تنطبق الكفة مقياس ضغط الدم ويعمل على مقياس ضغط الدم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للحيوانات مستيقظا، استخدم قطعة من منشفة ~ 15 سم × 30-50 سم إلى التفاف بلطف الحيوان، مع hindlimb واحد مجانا. وضع الحيوان على ظهرها (ويقول) الساعد الأيسر، مع رئيسها مدسوس بين ذراع حامل والجذع، ومكانصفعة وصفها بأنها مجرد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فرغ الكفة والتأكد من إغلاق صمام ضغط الهواء. ضخ الكفة إلى 160 مم زئبق في الحيوانات anesthetised، وإلى 180 مم زئبق في الحيوانات مستيقظا. هذا يتجاوز الضغط الانقباضي (عادة 140 مم زئبق و 160 مم زئبق على التوالي). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحفاظ على هذه الضغوط على النحو المطلوب، وذلك باستخدام مضخة يدوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد الوقت المخطط له لنقص التروية (نستخدم 2 فترات 5 دقائق مفصولة 5 دقائق ضخه)، فرغ ضغط الكفة عن طريق فك صمام ضغط الهواء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأكيد تأثير نقص التروية عن بعد مع تحقيق درجة حرارة الجلد تعلق على قاطع الطريق. درجة حرارة الجلد وعادة ما تقع 32-30 ° C، أكثر من 5 دقائق ويتعافى على ضخه. </li></ol> 6. ضوء الأضرار <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأكد من أن الفئران هي في ليلة وضحاها تكييفها الظلام، قبل إجراء اضرار طفيفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في الوقت المناسب بعد نقص تروية الأطراف (في تجاربنا دون تأخير)، يتم وضع كل حيوان منفردة إلى صناديق شبكي، وايالمياه التاسع والمواد الغذائية في حاويات القائم على الأرض. ملاحظة: لا يمكن إلا أن يضطلع الضرر الناجم عن الضوء في الحيوانات البيضاء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التبديل على 1000 لوكس الضوء الأبيض معايرة قبل في وقت قياسي (عادة 9:00) والحفاظ على هذه الحالة لمدة 24 ساعة. </li></ol> 7. أرج استخراج وتحليل البيانات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اكتساب أشكال موجة متوسط ​​من أرج. إذا لزم الأمر، صحيح لخط الأساس غير صفرية، من خلال الطرح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس السعة من على بعد موجة (قدمت في منتصف لشدة التحفيز عالية)، حيث أن فرق الجهد بين خط الأساس والأولى (&lt;30 مللي ثانية الكمون) حوض (الشكل 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس السعة ب الموجة بالفرق بين الجهد ذروة في الموجة والموجب من الموجة التالية، والتي تحدث عادة في الكمون من 80-100 ميللي ثانية (الشكل 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عزل إمكانات متذبذبة باستخدام تحويل فورييه لتصفية البيانات 60-235 هرتز، مع فرقة الانتقال 90 هرتز <sup&gt; 7. إذا يمكن بعد ذلك طرح المطلوبة معزولة إشارة محتملة متذبذبة من الموجي فلتر لتأكيد هوية الحوض الصغير على بعد الموجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الوقت الضمني (الكمون) من A و B موجة القمم يمكن أيضا أن تكون مقياسا مفيدا (الشكل 1). استخدام مضات التوأم لعزل استجابة قضيب. طرح استجابة مخروط (فلاش 2) من ردود فعل متباينة (فلاش 1) لعزل استجابة قضيب (الشكل 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيع شدة الضوء الفردية على الموجة وسعة ب الموجة (بعد العلاج / بعد المعاملة الأساس) أو متوسط ​​لمجموعات العلاج. منحنيات شدة الاستجابة مؤامرة سعة مجموعة والخطأ ضد الطاقة فلاش. </li></ol>

<ol>
	<li>Arden, G. B., Heckenlively, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Principles and practice of clinical electrophysiology of vision. , 139-183 (2006).</li><li>Bui, B. V., Fortune, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ganglion+cell+contributions+to+the+rat+full-field+electroretinogram.">Ganglion cell contributions to the rat full-field electroretinogram.</a> Journal of Physiology-London. 555 (1), 153-173 (2004).</li><li>Fortune, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+ganglion+cell+functional+loss+in+rats+with+experimental+glaucoma.">Selective ganglion cell functional loss in rats with experimental glaucoma.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 45 (6), 1854-1862 (2004).</li><li>Alarcon-Martinez, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short+and+long+term+axotomy-induced+ERG+changes+in+albino+and+pigmented+rats.">Short and long term axotomy-induced ERG changes in albino and pigmented rats.</a> Molecular Vision. 15 (254-255), 2373-2383 (2009).</li><li>Lyubarsky, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functionally+rodless+mice:+transgenic+models+for+the+investigation+of+cone+function+in+retinal+disease+and+therapy.">Functionally rodless mice: transgenic models for the investigation of cone function in retinal disease and therapy.</a> Vision Research. 42 (4), 401-415 (2002).</li><li>Bush, R. A., Sieving, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> A PROXIMAL RETINAL COMPONENT IN THE PRIMATE PHOTOPIC ERG A-WAVE. Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 35 (2), 635-645 (1994).</li><li>Liu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+electroretinographic+oscillatory+potentials+in+normal+and+ROP+rats.">Development of the electroretinographic oscillatory potentials in normal and ROP rats.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 47 (12), 5447-5452 (2006).</li><li>Casson, R. J., Wood, J. P. M., Melena, J., Chidlow, G., Osborne, N. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+ischemic+preconditioning+on+light-induced+photoreceptor+injury.">The effect of ischemic preconditioning on light-induced photoreceptor injury.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 44 (3), 1348-1354 (2003).</li><li>Lawson, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aerobic+Exercise+Protects+Retinal+Function+and+Structure+from+Light-Induced+Retinal+Degeneration.">Aerobic Exercise Protects Retinal Function and Structure from Light-Induced Retinal Degeneration.</a> Journal of Neuroscience. 34 (7), 2406-2412 (2014).</li><li>Grimm, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIF-1-induced+erythropoietin+in+the+hypoxic+retina+protects+against+light-induced+retinal+degeneration.">HIF-1-induced erythropoietin in the hypoxic retina protects against light-induced retinal degeneration.</a> Nature Medicine. 8 (7), 718-724 (2002).</li><li>Weymouth, A. E., Vingrys, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+electroretinography:+Methods+for+extraction+and+interpretation+of+rod+and+cone+responses.">Rodent electroretinography: Methods for extraction and interpretation of rod and cone responses.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 27 (1), 1-44 (2008).</li><li>Bayer, A. U., Cook, P., Brodie, S. E., Maag, K. P., Mittag, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+different+recording+parameters+to+establish+a+standard+for+flash+electroretinography+in+rodents.">Evaluation of different recording parameters to establish a standard for flash electroretinography in rodents.</a> Vision Research. 41 (17), 2173-2185 (2001).</li><li>Pugh, E. N., Lamb, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AMPLIFICATION+AND+KINETICS+OF+THE+ACTIVATION+STEPS+IN+PHOTOTRANSDUCTION.">AMPLIFICATION AND KINETICS OF THE ACTIVATION STEPS IN PHOTOTRANSDUCTION.</a> Biochimica Et Biophysica Acta. 1141 (2-3), 111-149 (1993).</li><li>Breton, M. E., Schueller, A. W., Lamb, T. D., Pugh, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ANALYSIS+OF+ERG+A-WAVE+AMPLIFICATION+AND+KINETICS+IN+TERMS+OF+THE+G-PROTEIN+CASCADE+OF+PHOTOTRANSDUCTION.">ANALYSIS OF ERG A-WAVE AMPLIFICATION AND KINETICS IN TERMS OF THE G-PROTEIN CASCADE OF PHOTOTRANSDUCTION.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 35 (1), 295-309 (1994).</li><li>Mizota, A., Adachi-Usami, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+body+temperature+on+electroretinogram+of+mice.">Effect of body temperature on electroretinogram of mice.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 43 (12), 3754-3757 (2002).</li><li>Szabo-Salfay, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+electroretinogram+and+visual+evoked+potential+of+freely+moving+rats.">The electroretinogram and visual evoked potential of freely moving rats.</a> Brain Research Bulletin. 56 (1), 7-14 (2001).</li><li>Charng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conscious+Wireless+Electroretinogram+and+Visual+Evoked+Potentials+in+Rats.">Conscious Wireless Electroretinogram and Visual Evoked Potentials in Rats.</a> Plos One. 8 (9), (2013).</li><li>Galambos, R., Juhasz, G., Kekesi, A. K., Nyitrai, G., Szilagyi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NATURAL+SLEEP+MODIFIES+THE+RAT+ELECTRORETINOGRAM.">NATURAL SLEEP MODIFIES THE RAT ELECTRORETINOGRAM.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 91 (11), 5153-5157 (1994).</li><li>Galambos, R., Szabo-Salfay, O., Szatmar, E., Szilagyi, N., Juhasz, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sleep+modifies+retinal+ganglion+cell+responses+in+the+normal+rat.">Sleep modifies retinal ganglion cell responses in the normal rat.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 98 (4), 2083-2088 (2001).</li><li>Guarino, I., Loizzo, S., Lopez, L., Fadda, A., Loizzo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+chronic+implant+to+record+electroretinogram,+visual+evoked+potentials+and+oscillatory+potentials+in+awake,+freely+moving+rats+for+pharmacological+studies.">A chronic implant to record electroretinogram, visual evoked potentials and oscillatory potentials in awake, freely moving rats for pharmacological studies.</a> Neural Plasticity. 11 (3-4), 241-250 (2004).</li><li>Huang, J. C., Salt, T. E., Voaden, M. J., Marshall, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NON-COMPETITIVE+NMDA-RECEPTOR+ANTAGONISTS+AND+ANOXIC+DEGENERATION+OF+THE+ERG+B-WAVE+IN-VITRO.">NON-COMPETITIVE NMDA-RECEPTOR ANTAGONISTS AND ANOXIC DEGENERATION OF THE ERG B-WAVE IN-VITRO.</a> Eye (London). 5 (4), 476-480 (1991).</li><li>Sasovetz, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> KETAMINE HYDROCHLORIDE - EFFECTIVE GENERAL ANESTHETIC FOR USE IN ELECTRORETINOGRAPHY. Annals of Ophthalmology. 10 (11), 1510-1514 (1978).</li><li>Mojumder, D. K., Wensel, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topical+Mydriatics+Affect+Light-Evoked+Retinal+Responses+in+Anesthetized+Mice).">Topical Mydriatics Affect Light-Evoked Retinal Responses in Anesthetized Mice).</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 51 (1), 567-576 (2010).</li><li>Fraunfel, F. t., Burns, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ACUTE+REVERSIBLE+LENS+OPACITY+-+CAUSED+BY+DRUGS,+COLD,+ANOXIA,+ASPHYXIA,+STRESS,+DEATH+AND+DEHYDRATION.">ACUTE REVERSIBLE LENS OPACITY - CAUSED BY DRUGS, COLD, ANOXIA, ASPHYXIA, STRESS, DEATH AND DEHYDRATION.</a> Experimental Eye Research. 10 (1), 19 (1970).</li><li>Calderone, L., Grimes, P., Shalev, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ACUTE+REVERSIBLE+CATARACT+INDUCED+BY+XYLAZINE+AND+BY+KETAMINE-XYLAZINE+ANESTHESIA+IN+RATS+AND+MICE.">ACUTE REVERSIBLE CATARACT INDUCED BY XYLAZINE AND BY KETAMINE-XYLAZINE ANESTHESIA IN RATS AND MICE.</a> Experimental Eye Research. 42 (4), 331-337 (1986).</li><li>Behn, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dark+adaptation+is+faster+in+pigmented+than+albino+rats.">Dark adaptation is faster in pigmented than albino rats.</a> Documenta Ophthalmologica. 106 (2), 153-159 (2003).</li><li>Sugawara, T., Sieving, P. A., Bush, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+relationship+of+the+scotopic+and+photopic+ERG+to+photoreceptor+cell+loss+in+light+damaged+rats.">Quantitative relationship of the scotopic and photopic ERG to photoreceptor cell loss in light damaged rats.</a> Experimental Eye Research. 70 (5), 693-705 (2000).</li><li>Machida, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=P23H+rhodopsin+transgenic+rat:+Correlation+of+retinal+function+with+histopathology.">P23H rhodopsin transgenic rat: Correlation of retinal function with histopathology.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 41 (10), 3200-3209 (2000).</li><li>Brandli, A., Stone, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Remote+Ischemia+Influences+the+Responsiveness+of+the+Retina.">Remote Ischemia Influences the Responsiveness of the Retina.</a> Observations in the Rat. Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 55 (4), 2088-2096 (2014).</li><li>Maccarone, R., Di Marco, S., Bisti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Saffron+supplement+maintains+morphology+and+function+after+exposure+to+damaging+light+in+mammalian+retina.">Saffron supplement maintains morphology and function after exposure to damaging light in mammalian retina.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 49 (3), 1254-1261 (2008).</li><li>Hood, D. C., Birch, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+abnormal+rod+photoreceptor+activity+with+the+a-wave+of+the+electroretinogram:+Applications+and+methods.">Assessing abnormal rod photoreceptor activity with the a-wave of the electroretinogram: Applications and methods.</a> Documenta Ophthalmologica. 92 (4), 253-267 (1996).</li><li>Robson, J. G., Frishman, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+rod-driven+a-wave+of+the+dark-adapted+mammalian+electroretinogram.">The rod-driven a-wave of the dark-adapted mammalian electroretinogram.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 39, 1-22 (2014).</li><li>Hood, D. C., Birch, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+COMPUTATIONAL+MODEL+OF+THE+AMPLITUDE+AND+IMPLICIT+TIME+OF+THE+B-WAVE+OF+THE+HUMAN+ERG.">A COMPUTATIONAL MODEL OF THE AMPLITUDE AND IMPLICIT TIME OF THE B-WAVE OF THE HUMAN ERG.</a> Visual Neuroscience. 8 (2), 107-126 (1992).</li><li>Wachtmeister, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscillatory+potentials+in+the+retina:+what+do+they+reveal.">Oscillatory potentials in the retina: what do they reveal.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 17 (4), 485-521 (1998).</li></ol>

جوناثان ستون هو مدير شركة خاصة محدودة الأبيض المتوسط

فلاش طريقة أرج الظلام تكييفها المذكورة أعلاه هو طريقة يمكن الاعتماد عليها لتقييم وظيفة شبكية العين في الفئران. خفضت كل من على بعد موجة وب الموجة التي كتبها اضرار طفيفة. جهاز التحكم عن بعد شروط مسبقة الدماغية التخفيف التخفيضات الناجمة عن الأضرار الخفيفة في لالموجة وا...

وأرج هو إمكانية الكهربائية المولدة عن طريق القرنية في الاستجابة للضوء، والمسجلة من سطح القرنية من العين. عندما تدار شروط تسجيل بعناية، وأرج يمكن استخدامها في مجموعة متنوعة من الطرق لتقييم وظيفة الشبكية. نحن هنا وصف كيفية تسجيل &quot;فلاش أرج&quot;، واحتمال ولدت عندما يتعرض الشبكية إلى وجيزة، ومضة مشرقة المعروضة في خلفية فريق Ganzfeld. وفريق Ganzfeld يشتت ضوء متجانس ومضة من الضوء تصل إلى شبكية العين كلها تقريبا بشكل موحد. إذا شبكية العين ويتم تكييف الظلام قبل التسجيل، ويتم الحفاظ على التكيف مع الظلام، كما يتم إعداد الحيوان للتسجيل، حصل على أرج يتم إنشاؤها من قبل كل من قضيب والمخروط خلايا مستقبلة للضوء. فلاش أرج تتكيف مع الظلام لديه الموجي مميزة، والتي تم تحليلها بطريقتين. أولا، تم تمييزها المبكرة والمتأخرة مكونات الموجي أرج، وترتبط إلى سلسلة من الخلايا العصبيةتفعيل القاعدة في شبكية العين. أقرب العنصر هو الكمون القصير إمكانية الذهاب سلبيا، وعلى بعد موجة (الشكل 1). ويتبع ذلك عن طريق إمكانية الذهاب إيجابية، ودعا ب الموجة. المرحلة طلوع ب الموجة تظهر التذبذبات، التي تعتبر عنصرا منفصلا (إمكانات متذبذبة أو المكتب). يعتبر من الموجة إلى أن تولدها خلايا مستقبلة للضوء، وب الموجة من قبل خلايا الطبقة النووية الداخلية، والبروتوكولات الاختيارية من قبل خلايا عديم الاستطالات 1. استنادا إلى قوة التحفيز، وصفته الردود على ومضات خافتة جدا الاستجابة عتبة ظلامية ممكنة. ومن المفهوم الاستجابة عتبة ظلامية أن تتولد من خلايا الشبكية العقدة 2-4. ثانيا، فلاش أرج يمكن فصلها عن طريق التكيف مع الضوء، أو عن طريق بروتوكول اثنين فلاش هو موضح أدناه، إلى مكونات rod- ويحركها مخروط. في ظل ظروف فوتوبيك، وعلى بعد موجة ليست قابلة للكشف في الفئران، لأن السكان مخروط منخفض، ولكن مكتب خدمات المشاريع وأ ب الموجة هيواضح 5. في المقدمات، التي لديها السكان مخروط أعلى شبكية العين، سواء rod- ومسارات cone- توليد للكشف على الموجة 6. اثنين من التدابير المفيدة في كثير من الأحيان المستخرجة من فلاش أرج هي سعة من A و B موجات يقاس في الشكل 1، مع الردود فلاش النموذجية هو مبين في الشكل (2). وعندما يتم خفض السكان مبصرة، على سبيل المثال من خلال التعرض لدمارا مشرق ضوء، يتم تخفيض جميع مكونات أرج. التدخلات اعصاب، مثل البعيد شروط مسبقة الدماغية (RIP)، ويمكن التصديق عليها من قبل المحافظة على سعة من A و B موجات (الشكل 3). وباختصار، فإن تحليل ERG يتيح مقارنات بين الأصحاء، وعلى ضوء تلف شبكية العين وneuroprotected.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>PC computer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Powerlab, 4 channel acquistion hardware</td>
			<td>AD Instruments</td>
			<td>PL 35044</td>
			<td>Acquistion of ERG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal Bio Amp</td>
			<td>AD Instruments</td>
			<td>FE 136</td>
			<td>Amplifier for ERG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab chart</td>
			<td>AD Instruments</td>
			<td></td>
			<td>Signal collection software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ganzfield</td>
			<td>Photometric solutions</td>
			<td>FS-250A</td>
			<td>Light stimulus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ganzfield operating system</td>
			<td>Photometric solutions</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Research Radiometer</td>
			<td>International light technologies</td>
			<td>ILT-1700</td>
			<td>calibrate light series</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lux meter</td>
			<td></td>
			<td>LX-1010B&#160;</td>
			<td>check red light illumanation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Excel</td>
			<td>microsoft</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lead wires</td>
			<td>AD Instruments</td>
			<td></td>
			<td>Connect postive, negative ground electrodes to amplifier</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lead wires -aligator</td>
			<td>AD Instruments</td>
			<td></td>
			<td>ground ganzfield and acquistion hardware to computer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platinum wire 95%</td>
			<td>A&#38;E metals</td>
			<td></td>
			<td>postive electrode</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouth electrode Ag/AgCl Pellet</td>
			<td>SDR</td>
			<td>E205</td>
			<td>negative electode</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>26 gauge needle</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td>ground electode</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water pump</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubing</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Homeothermic blanket system with flexible probe</td>
			<td>Harvard Appartus</td>
			<td>507222F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atropine 1% w/v</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td></td>
			<td>topical mydriasis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proxmethycaine 0.5% w/v</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td></td>
			<td>topical anaesthetic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Visco tears eye drops</td>
			<td>Novartis</td>
			<td></td>
			<td>carbomer polymer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thread</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>retract eye lid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezers</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reusable adhesive</td>
			<td>Blu tac</td>
			<td></td>
			<td>Dim red headlamp. Affix electrodes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbent bedding</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamil - ketamine 100 mg/ml - 50 ml</td>
			<td>Troy Laboratories Pty Ltd</td>
			<td></td>
			<td>dissociative</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylium - Xylazine 100 mg/ml - 50 ml</td>
			<td>Troy Laboratories Pty Ltd</td>
			<td></td>
			<td>muscle relaxant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scale</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using the electroretinogram to assess function in the rodent retina and the protective effects of remote limb ischemic preconditioning

The ERG is the sum of all retinal activity. The ERG is usually recorded from the cornea, which acts as an antenna that collects and sums signals from the retina. The ERG is a sensitive measure of changes in retinal function that are pan-retinal, but is less effective for detecting damage confined to a small area of retina. In the present work we describe how to record the &#8216;flash&#8217; ERG, which is the potential generated when the retina is exposed to a brief light flash. We describe methods of anaesthesia, mydriasis and corneal management during recording; how to keep the retina dark adapted; electrode materials and placement; the range and calibration of stimulus energy; recording parameters and the extraction of data. We also describe a method of inducing ischemia in one limb, and how to use the ERG to assess the effects of this remote-from-the-retina ischemia on retinal function after light damage. A two-flash protocol is described which allows isolation of the cone-driven component of the dark-adapted ERG, and thereby the separation of the rod and cone components. Because it can be recorded with techniques that are minimally invasive, the ERG has been widely used in studies of the physiology, pharmacology and toxicology of the retina. We describe one example of this usefulness, in which the ERG is used to assess the function of the light-damaged retina, with and without a neuroprotective intervention; preconditioning by remote ischemia.

بروتوكول يمكن استخدامها لقياس وظيفة البصرية من القوارض شبكية العين في الجسم الحي. وعلى بعد موجة، وهو مقياس لوظيفة مبصرة، وب الموجة، وهو مقياس لوظيفة شبكية العين الداخلية، ومشروحة في الشكل 1. وأرج زيادات إشارة التي ?...

Watch this Scientific Journal Video about Using the Electroretinogram to Assess Function in the Rodent Retina and the Protective Effects of Remote Limb Ischemic Preconditioning at JoVE.com

Using the Electroretinogram to Assess Function in the Rodent Retina and the Protective Effects of Remote Limb Ischemic Preconditioning

The electroretinogram (ERG) is an electrical potential generated by the retina in response to light. This paper describes how to use the ERG to assess retinal function, in dark-adapted rats, and how it can be can be used to assess a neuroprotective intervention, in the present case remote ischemic preconditioning.

باستخدام مخطط كهربية لتقييم وظيفة في القوارض الشبكية وتأثيرات واقية من بعيد الاطراف الدماغية شروط مسبقة

The ERG is the sum of all retinal activity. The ERG is usually recorded from the cornea, which acts as an antenna that collects and sums signals from the ...

using-electroretinogram-to-assess-function-rodent-retina-protective

Research

JoVE Journal

Neuroscience

16.0K Views.  University of Sydney. The electroretinogram (ERG) is an electrical potential generated by the retina in response to light. This paper describes how to use the ERG to assess retinal function, in dark-adapted rats, and how it can be can be used to assess a neuroprotective intervention, in the present case remote ischemic preconditioning.

Video: Using the Electroretinogram to Assess Function in the Rodent Retina and the Protective Effects of Remote Limb Ischemic Preconditioning

Strategies for Study of Neuroprotection from Cold-preconditioning

Neurological injury is a frequent cause of morbidity and mortality from general anesthesia and related surgical procedures that could be alleviated by development of effective, easy to administer and safe preconditioning treatments. We seek to define the neural immune signaling responsible for cold-preconditioning as means to identify novel targets for therapeutics development to protect brain before injury onset. Low-level pro-inflammatory mediator signaling changes over time are essential for cold-preconditioning neuroprotection. This signaling is consistent with the basic tenets of physiological conditioning hormesis, which require that irritative stimuli reach a threshold magnitude with sufficient time for adaptation to the stimuli for protection to become evident.
Accordingly, delineation of the immune signaling involved in cold-preconditioning neuroprotection requires that biological systems and experimental manipulations plus technical capacities are highly reproducible and sensitive. Our approach is to use hippocampal slice cultures as an in vitro model that closely reflects their in vivo counterparts with multi-synaptic neural networks influenced by mature and quiescent macroglia / microglia. This glial state is particularly important for microglia since they are the principal source of cytokines, which are operative in the femtomolar range. Also, slice cultures can be maintained in vitro for several weeks, which is sufficient time to evoke activating stimuli and assess adaptive responses. Finally, environmental conditions can be accurately controlled using slice cultures so that cytokine signaling of cold-preconditioning can be measured, mimicked, and modulated to dissect the critical node aspects. Cytokine signaling system analyses require the use of sensitive and reproducible multiplexed techniques. We use quantitative PCR for TNF-&alpha; to screen for microglial activation followed by quantitative real-time qPCR array screening to assess tissue-wide cytokine changes. The latter is a most sensitive and reproducible means to measure multiple cytokine system signaling changes simultaneously. Significant changes are confirmed with targeted qPCR and then protein detection. We probe for tissue-based cytokine protein changes using multiplexed microsphere flow cytometric assays using Luminex technology. Cell-specific cytokine production is determined with double-label immunohistochemistry. Taken together, this brain tissue preparation and style of use, coupled to the suggested investigative strategies, may be an optimal approach for identifying potential targets for the development of novel therapeutics that could mimic the advantages of cold-preconditioning.

We seek to define the neural immune signaling responsible for cold-preconditioning as means to identify novel targets for therapeutics development to protect brain before injury onset. We present strategies for such work that require biological systems, experimental manipulations plus technical capacities that are highly reproducible and sensitive.

استراتيجيات لدراسة شروط مسبقة من العصبية الباردة

Neurological injury is a frequent cause of morbidity and mortality from general anesthesia and related surgical procedures that could be alleviated by ...

Tissue Preparation and Immunostaining of Mouse Sensory Nerve Fibers Innervating Skin and Limb Bones

Detection and primary processing of physical, chemical and thermal sensory stimuli by peripheral sensory nerve fibers is key to sensory perception in animals and humans. These peripheral sensory nerve fibers express a plethora of receptors and ion channel proteins which detect and initiate specific sensory stimuli. Methods are available to characterize the electrical properties of peripheral sensory nerve fibers innervating the skin, which can also be utilized to identify the functional expression of specific ion channel proteins in these fibers. However, similar electrophysiological methods are not available (and are also difficult to develop) for the detection of the functional expression of receptors and ion channel proteins in peripheral sensory nerve fibers innervating other visceral organs, including the most challenging tissues such as bone. Moreover, such electrophysiological methods cannot be utilized to determine the expression of non-excitable proteins in peripheral sensory nerve fibers. Therefore, immunostaining of peripheral/visceral tissue samples for sensory nerve fivers provides the best possible way to determine the expression of specific proteins of interest in these nerve fibers. So far, most of the protein expression studies in sensory neurons have utilized immunostaining procedures in sensory ganglia, where the information is limited to the expression of specific proteins in the cell body of specific types or subsets of sensory neurons. Here we report detailed methods/protocols for the preparation of peripheral/visceral tissue samples for immunostaining of peripheral sensory nerve fibers. We specifically detail methods for the preparation of skin or plantar punch biopsy and bone (femur) sections from mice for immunostaining of peripheral sensory nerve fibers. These methods are not only key to the qualitative determination of protein expression in peripheral sensory neurons, but also provide a quantitative assay method for determining changes in protein expression levels in specific types or subsets of sensory fibers, as well as for determining the morphological and/or anatomical changes in the number and density of sensory fibers during various pathological states. Further, these methods are not confined to the staining of only sensory nerve fibers, but can also be used for staining any types of nerve fibers in the skin, bones and other visceral tissue.

Immunocytochemical identification of peripheral sensory nerve fiber subtypes (and detection of protein expression therein) are key to the understanding of molecular mechanisms underlying peripheral sensation. Here we describe methods for preparation of peripheral/visceral tissue samples, such as skin and limb bones, for specific immunostaining of peripheral sensory nerve fibers.

تحضير الأنسجة وImmunostaining من الألياف العصبية الحسية ماوس التعصيب الجلد والعظام الاطراف

Detection and primary processing of physical, chemical and thermal sensory stimuli by peripheral sensory nerve fibers is key to sensory perception in ...

Direct Intraventricular Delivery of Drugs to the Rodent Central Nervous System

Due to an inability to cross the blood brain barrier, certain drugs need to be directly delivered into the central nervous system (CNS). Our lab focuses specifically on antisense oligonucleotides (ASOs), though the techniques shown in the video here can also be used to deliver a plethora of other drugs to the CNS. Antisense oligonucleotides (ASOs) have the capability to knockdown sequence-specific targets 1 as well as shift isoform ratios of specific genes 2. To achieve widespread gene knockdown or splicing in the CNS of mice, the ASOs can be delivered into the brain using two separate routes of administration, both of which we demonstrate in the video.
The first uses Alzet osmotic pumps, connected to a catheter that is surgically implanted into the lateral ventricle. This allows the ASOs to be continuously infused into the CNS for a designated period of time. The second involves a single bolus injection of a high concentration of ASO into the right lateral ventricle. Both methods use the mouse cerebral ventricular system to deliver the ASO to the entire brain and spinal cord, though depending on the needs of the study, one method may be preferred over the other.

We describe a method to target drugs to the central nervous system by either implanting a catheter or performing a bolus injection into the right lateral ventricle in mice. We focus specifically on the delivery of antisense oligonucleotides. This technique is readily adaptable to other drugs and to rats.

مباشرة داخل البطين تسليم المخدرات الى القوارض الجهاز العصبي المركزي

Due to an inability to cross the blood brain barrier, certain drugs need to be directly delivered into the central nervous system (CNS). Our lab focuses ...

Assessment of Vascular Regeneration in the CNS Using the Mouse Retina

The rodent retina is perhaps the most accessible mammalian system in which to investigate neurovascular interplay within the central nervous system (CNS). It is increasingly being recognized that several neurodegenerative diseases such as Alzheimer&#8217;s, multiple sclerosis, and amyotrophic lateral sclerosis present elements of vascular compromise. In addition, the most prominent causes of blindness in pediatric and working age populations (retinopathy of prematurity and diabetic retinopathy, respectively) are characterized by vascular degeneration and failure of physiological vascular regrowth. The aim of this technical paper is to provide a detailed protocol to study CNS vascular regeneration in the retina. The method can be employed to elucidate molecular mechanisms that lead to failure of vascular growth after ischemic injury. In addition, potential therapeutic modalities to accelerate and restore healthy vascular plexuses can be explored. Findings obtained using the described approach may provide therapeutic avenues for ischemic retinopathies such as that of diabetes or prematurity and possibly benefit other vascular disorders of the CNS.

The rodent retina has long been recognized as an accessible window to the brain. In this technical paper we provide a protocol that employs the mouse model of oxygen-induced retinopathy to study the mechanisms that lead to failure of vascular regeneration within the central nervous system after ischemic injury. The described system can also be harnessed to explore strategies to promote regrowth of functional blood vessels within the retina and CNS.

تقييم الأوعية الدموية التجديد في الجهاز العصبي المركزي عن طريق الماوس الشبكية

The rodent retina is perhaps the most accessible mammalian system in which to investigate neurovascular interplay within the central nervous system (CNS). ...

Electroretinogram Analysis of the Visual Response in Zebrafish Larvae

The electroretinogram (ERG) is a noninvasive electrophysiological method for determining retinal function. Through the placement of an electrode on the surface of the cornea, electrical activity generated in response to light can be measured and used to assess the activity of retinal cells in vivo. This manuscript describes the use of the ERG to measure visual function in zebrafish. Zebrafish have long been utilized as a model for vertebrate development due to the ease of gene suppression by morpholino oligonucleotides and pharmacological manipulation. At 5-10 dpf, only cones are functional in the larval retina. Therefore, the zebrafish, unlike other animals, is a powerful model system for the study of cone visual function in vivo. This protocol uses standard anesthesia, micromanipulation and stereomicroscopy protocols that are common in laboratories that perform zebrafish research. The outlined methods make use of standard electrophysiology equipment and a low light camera to guide the placement of the recording microelectrode onto the larval cornea. Finally, we demonstrate how a commercially available ERG stimulator/recorder originally designed for use with mice can easily be adapted for use with zebrafish. ERG of larval zebrafish provides an excellent method of assaying cone visual function in animals that have been modified by morpholino oligonucleotide injection as well as newer genome engineering techniques such as Zinc Finger Nucleases (ZFNs), Transcription Activator-Like Effector Nucleases (TALENs), and Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats (CRISPR)/Cas9, all of which have greatly increased the efficiency and efficacy of gene targeting in zebrafish. In addition, we take advantage of the ability of pharmacological agents to penetrate zebrafish larvae to evaluate the molecular components that contribute to the photoresponse. This protocol outlines a setup that can be modified and used by researchers with various experimental goals.

We present a method for the electroretinographic (ERG) analysis of zebrafish larvae utilizing micromanipulation and electroretinography techniques. This is a simple and straightforward method for assaying visual function of zebrafish larvae in vivo.

تحليل مخطط كهربية الشبكية من الاستجابة البصرية في الزرد اليرقات

The electroretinogram (ERG) is a noninvasive electrophysiological method for determining retinal function. Through the placement of an electrode on the ...

Imaging Serotonergic Fibers in the Mouse Spinal Cord Using the CLARITY/CUBIC Technique

Long descending fibers to the spinal cord are essential for locomotion, pain perception, and other behaviors. The fiber termination pattern in the spinal cord of the majority of these fiber systems have not been thoroughly investigated in any species. Serotonergic fibers, which project to the spinal cord, have been studied in rats and opossums on histological sections and their functional significance has been deduced based on their fiber termination pattern in the spinal cord. With the development of CLARITY and CUBIC techniques, it is possible to investigate this fiber system and its distribution in the spinal cord, which is likely to reveal previously unknown features of serotonergic supraspinal pathways. Here, we provide a detailed protocol for imaging the serotonergic fibers in the mouse spinal cord using the combined CLARITY and CUBIC techniques. The method involves perfusion of a mouse with a hydrogel solution and clarification of the tissue with a combination of clearing reagents. Spinal cord tissue was cleared in just under two weeks, and the subsequent immunofluorescent staining against serotonin was completed in less than ten days. With a multi-photon fluorescent microscope, the tissue was scanned and a 3D image was reconstructed using Osirix software.

Supraspinal projections are important for pain perception and other behaviors, and serotonergic fibers are one of these fiber systems. The present study focused on the application of the combined CLARITY/CUBIC protocol to the mouse spinal cord in order to investigate the termination of these serotonergic fibers.

التصوير ألياف هرمون السيروتونين في الحبل الشوكي الماوس عن طريق وضوح / تقنية مكعب

Long descending fibers to the spinal cord are essential for locomotion, pain perception, and other behaviors. The fiber termination pattern in the spinal ...

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

The formation of the myelin sheath by Schwann cells (SCs) is essential for rapid conduction of nerve impulses along axons in the peripheral nervous system. SC-selective genetic manipulation in living animals is a powerful technique for studying the molecular and cellular mechanisms of SC myelination and demyelination in vivo. While knockout/knockin and transgenic mice are powerful tools for studying SC biology, these methods are costly and time consuming. Viral vector-mediated transgene introduction into the sciatic nerve is a simpler and less laborious method. However, viral methods have limitations, such as toxicity, transgene size constraints, and infectivity restricted to certain developmental stages. Here, we describe a new method that allows selective transfection of myelinating SCs in the rodent sciatic nerve using electroporation. By applying electric pulses to the sciatic nerve at the site of plasmid DNA injection, genes of interest can be easily silenced or overexpressed in SCs in both neonatal and more mature animals. Furthermore, this in vivo electroporation method allows for highly efficient simultaneous expression of multiple transgenes. Our novel technique should enable researchers to efficiently manipulate SC gene expression, and facilitate studies on SC development and function.

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

Here, we present an in vivo technique for gene transfer to Schwann cells (SCs) in the rodent sciatic nerve. This simple technique is useful for investigating signaling mechanisms involved in the development and maintenance of myelinating SCs.

في نقل فيفو جين لخلايا شوان في العصب القوارض وركي من Electroporation لل

The formation of the myelin sheath by Schwann cells (SCs) is essential for rapid conduction of nerve impulses along axons in the peripheral nervous ...

Effects of Blast-induced Neurotrauma on Pressurized Rodent Middle Cerebral Arteries

Though there have been studies on the histopathological and behavioral effects of blast exposure, fewer have been dedicated to blast&#39;s cerebral vascular effects. Impact (i.e., non-blast) traumatic brain injury (TBI) is known to decrease pressure autoregulation in the cerebral vasculature in both humans and experimental animals. The hypothesis that blast-induced traumatic brain injury (bTBI), like impact TBI, results in impaired cerebral vascular reactivity was tested by measuring myogenic dilatory responses to reduced intravascular pressure in rodent middle cerebral arterial (MCA) segments from rats subjected to mild bTBI using an Advanced Blast Simulator (ABS) shock tube. Adult, male Sprague-Dawley rats were anesthetized, intubated, ventilated and prepared for Sham bTBI (identical manipulation and anesthesia except for blast injury) or mild bTBI. Rats were randomly assigned to receive Sham bTBI or mild bTBI followed by sacrifice 30 or 60 min post-injury. Immediately after bTBI, righting reflex (RR) suppression times were assessed, euthanasia at the time points post-injury was completed, the brain was harvested and the individual MCA segments were collected, mounted and pressurized. As the intraluminal pressure perfused through the arterial segments was reduced in 20 mmHg increments from 100 to 20 mmHg, MCA diameters were measured and recorded. With decreasing intraluminal pressure, MCA diameters steadily increased significantly above baseline in the Sham bTBI groups while MCA dilator responses were significantly reduced (p &#60; 0.05) in both bTBI groups as evidenced by the impaired, smaller MCA diameters recorded for the bTBI groups. In addition, RR suppression in the bTBI groups was significantly (p &#60; 0.05) higher than in the Sham bTBI groups. MCA&#39;s collected from the Sham bTBI groups exhibited typical vasodilatory properties to decreases in intraluminal pressure while MCA&#39;s collected following bTBI exhibited significantly impaired myogenic vasodilatory responses to reduced pressure that persisted for at least 60 min after bTBI.

Here, we present a protocol to describe methods for ex vivo vascular reactivity determination following a primary blast traumatic brain injury (bTBI) using isolated, pressurized, rodent middle cerebral arterial (MCA) segments. bTBI induction is accomplished using a shock tube, also known as an Advanced Blast Simulator (ABS) device.

آثار Neurotrauma الناجمة عن الانفجار على القوارض المضغوط الأوسط الشرايين الدماغية

Though there have been studies on the histopathological and behavioral effects of blast exposure, fewer have been dedicated to blast&#39;s cerebral ...

3D Kinematic Analysis for the Functional Evaluation in the Rat Model of Sciatic Nerve Crush Injury

Compared to the Sciatic Functional Index (SFI), kinematic analysis is a more reliable and sensitive method for performing functional evaluations of sciatic nerve injury rodent models. In this protocol, we describe a novel kinematic analysis method that uses a three-dimensional (3D) motion capture apparatus for functional evaluations using a rat sciatic nerve crush injury model. First, the rat is familiarized with treadmill walking. Markers are then attached to the designated bone landmarks and the rat is made to walk on the treadmill at the desired speed. Meanwhile, the posterior limb movements of the rat are recorded using four cameras. Depending on the software used, marker tracings are created using both automatic and manual modes and the desired data are produced after subtle adjustments. This method of kinematic analysis, which uses a 3D motion capture apparatus, offers numerous advantages, including superior precision and accuracy. Many more parameters can be investigated during the comprehensive functional evaluations. This method has several shortcomings that require consideration: The system is expensive, can be complicated to operate, and may produce data deviations due to skin shifting. Nevertheless, kinematic analysis using a 3D motion capture apparatus is useful for performing functional anterior and posterior limb evaluations. In the future, this method may become increasingly useful for generating accurate assessments of various traumas and diseases.

We introduce a kinematic analysis method that uses a three-dimensional motion capture apparatus containing four cameras and data processing software for performing functional evaluations during fundamental research involving rodent models.

3D تحليل الحركية للتقييم الوظيفي في نموذج الفئران من عرق النسا الأعصاب سحق الإصابة

Compared to the Sciatic Functional Index (SFI), kinematic analysis is a more reliable and sensitive method for performing functional evaluations of ...

Combining Behavior and EEG to Study the Effects of Mindfulness Meditation on Episodic Memory

Although there has been recent interest in how mindfulness meditation can affect episodic memory as well as brain structure and function, no study has examined the behavioral and neural effects of mindfulness meditation on episodic memory. Here we present a protocol that combines mindfulness meditation training, an episodic memory task, and EEG to examine how mindfulness meditation changes behavioral performance and the neural correlates of episodic memory. Subjects in a mindfulness meditation experimental group were compared to a waitlist control group. Subjects in the mindfulness meditation experimental group spent four weeks training and practicing mindfulness meditation. Mindfulness was measured before and after training using the Five Facet Mindfulness Questionnaire (FFMQ). Episodic memory was measured before and after training using a source recognition task. During the retrieval phase of the source recognition task, EEG was recorded. The results showed that mindfulness, source recognition behavioral performance, and EEG theta power in right frontal and left parietal channels increased following mindfulness meditation training. In addition, increases in mindfulness correlated with increases in theta power in right frontal channels. Therefore, results obtained from combining mindfulness meditation training, an episodic memory task, and EEG reveal the behavioral and neural effects of mindfulness meditation on episodic memory.

Here we present a protocol for combining mindfulness meditation training, an episodic memory task, and EEG to understand the behavioral and neural effects of mindfulness meditation on episodic memory.

الجمع بين السلوك وتخطيط كهربية الدماغ لدراسة آثار التأمل الذهني على الذاكرة العرضية

Although there has been recent interest in how mindfulness meditation can affect episodic memory as well as brain structure and function, no study has ...