نريد ان نشكر سورين المجموعة (ميلانو، إيطاليا) لتزويدنا العرف الدوائر نضح الكلى. وعلاوة على ذلك نشكر XVIVO الإرواء شركة (غوتنبرغ، السويد) لتزويدنا ستين الحل، BBraun AG (Melsungen، ألمانيا) لتوريد مضخات مع حقنة، وريبر GMBH &amp; CO KG (ريوتلنجن، ألمانيا).

ملاحظة: يتم تقديم لمحة تخطيطية للبروتوكول الدراسة في الشكل 1. <img alt="الشكل 1" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig1.jpg" /> الشكل 1. بروتوكول الدراسة. هذا البروتوكول دراسة سوي الحرارة خارج الجسم الحي الكلى نضح يستند إلى نموذج الخنازير. بعد تشريح جراحي الأوعية من الكسب غير المشروع الكلى والتنظيف مع 500 مل من الحامض الاميني التربتوفان-كيتوغلوتارات (HTK)، يمكن استرجاع الكسب غير المشروع. بعد التخزين البارد (SCS) لمدة 3 ساعات، وperfused لوالكسب غير المشروع الكلى سوي الحرارة خارج الجسم الحي (NEVKP) لساعات عدة حتى زرع المعينة. جميع الحيوانات تلقت الرعاية الإنسانية في الامتثال مع &#39;&#39; مبادئ رعاية الحيوان المعملية &#39;&#39; التي وضعتها الجمعية الوطنية للأبحاث الطبية و&#39;&#39; دليل لرعاية الحيوانات المختبرية &#39;&#39; نشرت من قبل المعاهد الوطنية للصحة،أونتاريو، كندا. وافقت لجنة رعاية الحيوان من معهد بحوث تورونتو العام جميع الدراسات. 1. الحيوانات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام الخنازير الذكور يوركشاير (27-33 كلغ) في هذا البروتوكول. </li></ol> 2. الجهاز استرجاع <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الإجراءات قبل الجراحة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بيت الخنازير يوركشاير الذكور في منشأة بحثية لمدة أسبوع على الأقل للحد من مستوى التوتر لديهم. صيام الخنازير مدة لا تقل عن 6 ساعات قبل تحريض التخدير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدء التخدير الخنزير عن طريق الحقن العضلي الكيتامين (25 ملغ / كلغ)، الأتروبين (0.04 ملغ / كلغ)، وميدازولام (0.15 ملغ / كلغ). وفي وقت لاحق، نقل الحيوان من منشأة سكنية لغرفة العمليات (OR). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الخنزير في موقف ضعيف على الطاولة OR. السماح لها التنفس 2 L الأكسجين مع 5٪ من الأيزوفلورين من تلقاء أنفسهم. بعد الاسترخاء، وفضح الحبال الصوتية مع منظار ورذاذ لهم مع 2٪ ليدوكائين لمنع تشنج الناجمة عن التنبيب. AFثالثا التنبيب مع 6.5 مم أنبوب، كتلة الكفة مع 3-5 مل من الهواء. ملاحظة: Capnometry يكشف عن الموقف الصحيح من أنبوب القصبة الهوائية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خفض الغاز الأيزوفلورين إلى 2.5٪. تعيين جهاز التنفس الصناعي ل14-16 الأنفاس / دقيقة وحجم المد والجزر إلى 10-15 مل / كغم من وزن الجسم. رصد الخنازير عن كثب. يتم تسجيل معدل ضربات القلب وتشبع الأكسجين التي كتبها نبض قياس التأكسج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحت ظروف معقمة، وإدخال 8.5 الأب × 10 سم قسطرة في الوريد الوداجي في سيلدينغر تقنية 13. ولذلك، استخدم إبرة ثقب السفينة الوريدية. بعد إدخال سلك، يستعاض عن إبرة مع القسطرة. القضاء على الأسلاك وإصلاح القسطرة على الجلد. إدارة 200 مل من محلول لاكتات رينغر في ساعة طوال الجراحة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الإجراءات الجراحية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد التطهير وتغطية الجراحي الميداني، إجراء شق خط الوسط من سيفي الشكل إلى الارتفاق العانة. للتخفيف من التعرض، وتوسيع نطاق النهج الجراحية معشق الجانبي الأيسر. تغطية الأمعاء الكبيرة والصغيرة مع منشفة والموقف منها إلى الجانب الأيسر من أجل الوصول الأمثل إلى الكلية اليمنى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فصل الوريد الأجوف السفلي (IVC) من الشريان الأورطي البطني. فروع الشريان الأبهر Ligate من الجزء الخلفي من الشريان الأورطي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد تشريح الأبهري الكامل إلى الوراء، تمرير رباط حول الجمجمة الأبهر إلى فروع الكلى. بالإضافة إلى ذلك، وضع اثنين من الأربطة والجمجمة من التشعب الحرقفي. وضع ربطة عنق حول الشريان الكلوي الأيسر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحرير الكلية اليمنى من نسيجه ملتصقة. تشريح الوريد الكلوي، الشريان، والحالب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح الحجاب الحاجز وإدارة 1000 IU الهيبارين لكل كيلوغرام من وزن المانحة في القلب. لنموذج DCD، وضخ 40 mval من بوكل intracardially 3 دقائق بعد تنقص النظامية للحث على السكتة القلبية. وتبلغ قيمة السكتة القلبية كنقطة انطلاق لنقص التروية الدافئ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وفي الوقت نفسه، لجمع الدم، وربط خطوط أكياس CPDA (سترات والفوسفات، وسكر العنب، لdenosine) لالقسطرة التي أدخلت على حبل الوريد العلوي الأيسر. أداء تدور لينة (1500 x ج بدون فرامل). إزالة البلازما ومعطف الشهباء تحت ظروف معقمة (الدرجة الوزراء للسلامة الأحيائية II) وتخزين كريات الدم الحمراء لنقل الدم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يقني؛ يدخل القنية الشريان الأورطي مع هيئة خط تدفق فوق التشعب الحرقفي. ربط الأربطة في الشريان الأورطي والشريان الكلوي الأيسر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدفق الكلى مع الحامض الاميني التربتوفان-كيتوغلوتارات (HTK) حل مع ضغط 100 سم H 2 O. المشبك الأجوف الصدر وجمع الدم عن طريق القسطرة الوداجي. قطع الأجوف البطن تحت الوريد الكلوي لتأمين تدفق الأمثل في الكلى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد مطاردة كاملة من الكلية اليمنى، استرداد الكسب غير المشروع مع جزء من الشريان الأورطي. قطع الوريد الكلوي وترك الحالب فترة طويلة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> العودة إعداد جدول الكسب غير المشروع الكلى للالإرواء <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحرير الكلى من الأنسجة الملتصقة. إغلاق جزء من الجمجمة الشريان الأورطي مع ربطة عنق لالثاني يقني؛ يدخل القنية الجزء السفلي مع &quot;س 3/8&quot; 1/4 المخفض. التعادل خارج فروع الشرايين الصغيرة القادمة من الشريان الأورطي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يقني؛ يدخل القنية الوريد الكلوي مع 1/4 &quot;س 3/8&quot; المخفض مباشرة. أنبوبا الحالب مع 8 الأب أنبوب تغذية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الكلى على الجليد حتى بداية NEVKP. </li></ol></li></ol> 3. سوي الحرارة خارج الحي الكلى الإرواء (NEVKP) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الدائرة الإرواء تتكون الدائرة نضح من الأطفال حديثي الولادة المعدات المجازة القلبية الرئوية (الشكل 2). <img alt="الرقم 2" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig2.jpg" /> الشكل 2. تخطيطي رسم من الدائرة الإرواء. وتتكون الدائرة من الأطفال حديثي الولادة التكنولوجيا المجازة القلبية الرئوية. يتم جمع الحل نضح في الخزان الوريدي. A مضخة طرد مركزي حركة تدفع الحل في مكساج، حيث يتم تخصيبه مع الأكسجين ودرجة حرارة 37 ° C. بعد السلطة الفلسطينيةssing الشرايين مرشح فقاعة، هو الدافع وراء الإرواء مع الضغط من 60-80 مم زئبق عن طريق الشريان الكلوي في الكلى. تدفق الوريدي (0-3 مم زئبق) يؤدي سائل الإرواء مرة أخرى إلى الخزان وريدي. حقنة وضخ مضخات تأمين إمدادات مع مركبات إضافية. يتم جمع البول في جميع أنحاء الارواء. يتم تسجيل خصائص الدائرة نضح باستمرار. ويتم تحليل عينات الغاز الوريدي والشرياني في الساعة، وعلامات إصابة الكلى. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"> <li style=";text-align:right;direction:rtl"> ربط العرف الدائرة نضح إلى جهاز نضح الكلى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توصيل الأنابيب إلى خزان الوريدي ومكساج. توصيل أنابيب خط الشرايين لتدفق الدم من مكساج ووضع مرشح فقاعة على حامله. ربط خط تطهير. ربط خط الأنابيب الوريدية إلى مدخل الخزان الوريدي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للتقييم خلال نضح، توصيل التحقيق في درجة الحرارة في منفذ الشرايين، وربط تدفق متر وبواستشعار bble إلى أنابيب خط الشرايين، وربط خطوط الضغط. ربط أجهزة الاستشعار المستوى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ربط خطوط عينة الوريدية والشريانية إلى الموانئ عينة الوريدية والشريانية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع دائرة الجهاز على الوقوف وإدخال الأنبوب الوريدي والشرياني من خلال الثقوب المعدة. إصلاح الأنبوب الى طاولة المفاوضات وغرفة بحزم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج أنابيب الشفط في المضخة الدوارة ووضع نهاية واحدة في غرفة لجمع السوائل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توصيل أنابيب الأكسجين إلى خزان الغاز التي تحتوي على 95٪ O 2/5٪ CO 2 ومكساج. توصيل أنابيب حدة التدفئة إلى مكساج وغرفة الجهاز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام الأنابيب المشابك لإغلاق خطوط تدفق الوريدية والشريانية. تطبيق المشبك أنابيب آخر لتدفق الخزان الوريدي. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الإرواء الحل، ملاحق إضافية، وفتيلة حلبة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام واحد مضخة التسريب لتحل محل البول المنتجة معاكتات رينغر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام واحد ضخ حقنة لإدارة التغذية (الجلوكوز 0.5 مل / ساعة، والأحماض الأمينية 0.5 مل / ساعة) والانسولين (5 IU / ساعة) إلى الخزان وريدي. الاستفادة من ضخ حقنة الثانية للبث وعائي (فيراباميل، 0.25 ملغ / ساعة) مباشرة في خط الشرايين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملء الخزان الوريدي مع حل الارواء. ولذلك، من أجل اللاكتات رينغر (175 مل)، STEEN الحل (200 مل)، درو (27 مل)، الهيبارين (1000 IU)، بيكربونات الصوديوم لضبط درجة الحموضة، وجلوكونات الكالسيوم في خزان الوريدي. أخيرا، إضافة كريات الدم الحمراء غسلها (125 مل). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التبديل على جهاز القلب الرئة (HLM). تفعيل وحات الضغط، ودرجة الحرارة، ومستوى، وأجهزة الاستشعار فقاعة. تفعيل نظام إدارة البيانات (DMS) لتسجيل البيانات في جميع أنحاء الارواء. تفعيل وحدة التدفئة لتدفئة حل نضح وغرفة الجهاز إلى 37 درجة مئوية. فتح العرض O 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح المشبك أنابيب خلف الخزان الوريدي وتحرير centrifugآل رأس المضخة من الهواء تماما. بدء تشغيل مضخة طرد مركزي في 1000 دورة في الدقيقة، والسماح للحل لأن دفعت في جميع أنحاء الدائرة. المشبك أنابيب تجاوز تصفية الدم والافراج عن الهواء من المرشح الشرايين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> صفر خطوط الضغط. تفعيل حقنة وضخ المضخات. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الكلى الكسب غير المشروع الإرواء <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الكلى من الجليد، ووضع الكلى على الفراش في غرفة الجهاز. وضع القسطرة البول في جامع البول. بعد التأكد من أن الوريدي وأنابيب الشرايين خالية من الهواء، وتوصيل وصلات إلى أنابيب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إغلاق الاختصار بين الشرايين وخطوط الأنابيب الوريدية. ضبط ضغط الدم إلى 75 مم زئبق عن طريق تنظيم سرعة مضخة طرد مركزي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الضغوط سجل، وتدفق الدم الشرياني، ودرجة الحرارة، وجود فقاعات باستمرار مع DMS. مراقبة القيم بعناية في جميع أنحاء الارواء. خلال التروية، وتسرب الدم الى داخل القاعة هو كوليالمديرية عبر أنابيب شفط مرة أخرى إلى الخزان وريدي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسجيل كمية البول المنتجة. جمع الوريدية عينات الدم والبول كل ساعة. مراقبة نضح من خلال اتخاذ الوريدي وعينات غازات الدم الشرياني والألانين اسبارتاتي (AST)، وتحليل اللاكتات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في نهاية نضح، قطع أنابيب من الشريان الكلوي والوريد، تدفق الكسب غير المشروع مع HTK البارد، وتخزينها على الجليد في كيس الجهاز معقمة حتى الزرع. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Wolfe, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+mortality+in+all+patients+on+dialysis,+patients+on+dialysis+awaiting+transplantation,+and+recipients+of+a+first+cadaveric+transplant.">Comparison of mortality in all patients on dialysis, patients on dialysis awaiting transplantation, and recipients of a first cadaveric transplant.</a> The New England journal of medicine. 341 (23), 1725-1730 (1999).</li><li>Rabbat, C. G., Thorpe, K. E., Russell, J. D., Churchill, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+mortality+risk+for+dialysis+patients+and+cadaveric+first+renal+transplant+recipients+in+Ontario,+Canada.">Comparison of mortality risk for dialysis patients and cadaveric first renal transplant recipients in Ontario, Canada.</a> Journal of the American Society of Nephrology : JASN. 11 (5), 917-922 (2000).</li><li>Fuquay, R., Teitelbaum, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplant+outcomes+and+dialysis+modality.">Transplant outcomes and dialysis modality.</a> Contributions to nephrology. 178, 251-257 (2012).</li><li>Ingsathit, A., Kamanamool, N., Thakkinstian, A., Sumethkul, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival+advantage+of+kidney+transplantation+over+dialysis+in+patients+with+hepatitis+C:+a+systematic+review+and+meta-analysis.">Survival advantage of kidney transplantation over dialysis in patients with hepatitis C: a systematic review and meta-analysis.</a> Transplantation. 95 (7), 943-948 (2013).</li><li>Davis, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+extent+and+predictors+of+waiting+time+geographic+disparity+in+kidney+transplantation+in+the+United+States.">The extent and predictors of waiting time geographic disparity in kidney transplantation in the United States.</a> Transplantation. 97 (10), 1049-1057 (2014).</li><li>Perico, N., Cattaneo, D., Sayegh, M. H., Remuzzi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delayed+graft+function+in+kidney+transplantation.">Delayed graft function in kidney transplantation.</a> Lancet. 364 (9447), 1814-1827 (2004).</li><li>Maggiore, U., Cravedi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+marginal+kidney+donor.">The marginal kidney donor.</a> Current opinion in organ transplantation. 19 (4), 372-380 (2014).</li><li>Dittrich, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+cold+storage+on+renal+ischemia+reperfusion+injury+after+non-heart-beating+donor+explantation.">Influence of cold storage on renal ischemia reperfusion injury after non-heart-beating donor explantation.</a> Nephron. Experimental nephrology. 96 (3), e97-e102 (2004).</li><li>Summers, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+donor+age+and+cold+storage+time+on+outcome+in+recipients+of+kidneys+donated+after+circulatory+death+in+the+UK:+a+cohort+study.">Effect of donor age and cold storage time on outcome in recipients of kidneys donated after circulatory death in the UK: a cohort study.</a> Lancet. 381 (9868), 727-734 (2013).</li><li>Hosgood, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=et+al.+pilot+study+assessing+the+feasibility+of+a+short+period+of+normothermic+preservation+in+an+experimental+model+of+non+heart+beating+donor+kidneys.">et al. pilot study assessing the feasibility of a short period of normothermic preservation in an experimental model of non heart beating donor kidneys.</a> The Journal of surgical research. 171 (1), 283-290 (2011).</li><li>Hosgood, S. A., Patel, M., Nicholson, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+conditioning+effect+of+ex+normothermic+perfusion+in+an+experimental+kidney+model.">The conditioning effect of ex normothermic perfusion in an experimental kidney model.</a> The Journal of surgical research. 182 (1), 153-160 (2013).</li><li>Nicholson, M. L., Hosgood, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+transplantation+after+ex+vivo+normothermic+perfusion:+the+first+clinical+study.+American+journal+of+transplantation.">Renal transplantation after ex vivo normothermic perfusion: the first clinical study. American journal of transplantation.</a> official journal of the American Society of Transplantation and the American Society of Transplant Surgeons. 13 (5), 1246-1252 (2013).</li><li>Seldinger, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Catheter+replacement+of+the+needle+in+percutaneous+arteriography;+a+new+technique.">Catheter replacement of the needle in percutaneous arteriography; a new technique.</a> Acta radiologica. 39 (5), 368-376 (1953).</li><li>Stubenitsky, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exsanguinous+metabolic+support+perfusion--a+new+strategy+to+improve+graft+function+after+kidney+transplantation.">Exsanguinous metabolic support perfusion--a new strategy to improve graft function after kidney transplantation.</a> Transplantation. 70 (8), 1254-1258 (2000).</li><li>Delpech, P. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+warm+ischaemia+combined+with+cold+preservation+on+the+hypoxia-inducible+factor+1&#945;+pathway+in+an+experimental+renal+autotransplantation+model.">Effects of warm ischaemia combined with cold preservation on the hypoxia-inducible factor 1&#945; pathway in an experimental renal autotransplantation model.</a> The British journal of surgery. , (1002).</li><li>Cypel, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normothermic+ex+vivo+lung+perfusion+in+clinical+lung+transplantation.">Normothermic ex vivo lung perfusion in clinical lung transplantation.</a> The New England journal of medicine. 364 (15), 1431-1440 (2011).</li><li>Knaak, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subnormothermic+Ex+vivo+liver+perfusion+reduces+endothelial+cell+and+bile+duct+injury+after+DCD+pig+liver+transplantation.">Subnormothermic Ex vivo liver perfusion reduces endothelial cell and bile duct injury after DCD pig liver transplantation.</a> Liver transplantation : official publication of the American Association for the Study of Liver Diseases and the International Liver Transplantation Society. , (2014).</li><li>Hosgood, S. A., Nicholson, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+normothermic+perfusion+of+declined+human+kidneys+after+inadequate+in+situ+perfusion.">Ex vivo normothermic perfusion of declined human kidneys after inadequate in situ perfusion.</a> American journal of transplantation official journal of the American Society of Transplantation and the American Society of Transplant Surgeons. 14 (2), 490-491 (2014).</li><li>Op den Dries, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+normothermic+machine+perfusion+and+viability+testing+of+discarded+human+donor+livers.">Ex vivo normothermic machine perfusion and viability testing of discarded human donor livers.</a> American journal of transplantation official journal of the American Society of Transplantation and the American Society of Transplant Surgeons. 13 (5), 1327-1335 (2013).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

توضح هذه الدراسة أن NEVKP مع الحل القائم على كرات الدم الحمراء يمكن أن يؤديها مع نتائج ممتازة لفترة طويلة من الزمن في نموذج الخنازير. خلال 10 ساعة خارج الحي نضح أظهرت الكلى المعلمات مستقرة التروية، والتمثيل الغذائي الكلوي النشط، التوازن، والحد الأدنى من الإصابة الكلوية. إنتاج البول وإصابة الكلى تعتمد على تكوين الحل نضح. فمن المهم للحفاظ على الضغط oncotic والأسمولية من الإرواء ضمن نطاق فيزيولوجي. على وجه الخصوص، فإن الضغط oncotic المنخفض يؤدي إلى إنتاج عالية unphysiologically البول مع وذمة الكلى كبيرة وعلامات متزايدة للإصابة الكلى. يتم اختيار STEEN محلول يحتوي على الزلال في هذا النموذج لتنظيم ضغط oncotic ومحاكاة الظروف الفسيولوجية للالكلى. يتم إضافة بيكربونات الصوديوم وغلوكونات الكالسيوم في النظام لتحقيق القيم الفسيولوجية ودرجة الحموضة، HCO 3 </suب&gt;، الصوديوم، البوتاسيوم، الكالسيوم، والكلور. اختيار وجرعة عائي مهمة لتأمين تدفق كمية كافية من الدم والأوكسجين. تقنية سوي الحرارة خارج الجسم الحي الكلى نضح لديها العديد من القيود. لا ترتبط خارج الحي نضح بدعم الهرموني في الكلى، والتي يمكن أن تؤثر سلبا على فترات نضح أطول. وبالإضافة إلى ذلك، فإن التكنولوجيا الجديدة، في هذه المرحلة من الزمن، ويرتبط مع زيادة التكاليف. تحسينات في المستقبل قد تبسيط التكنولوجيا وتقليل التكاليف. تطوير جهاز نضح الكلى المحمولة قد تسمح لتجنب تماما الكلى تخزين بارد في المستقبل. النقص الحاد والمستمر الجهاز يؤدي إلى زيادة استخدام أجهزة هامشية (تنمية الطفولة المبكرة أو DCD الكلى ترقيع) 7. حاليا، يقوم الحفاظ على جهاز التخزين البارد ثابت أو تبريدي نضح الجهاز. كوقت الدماغية البارد لفترات طويلة له عفريت كبيرالفعل على نتائج وظائف الكلى من المعايير القياسية 15 و ترقيع هامشية 8،9، تقنيات الحفظ الجديدة التقليل من التخزين البارد هي من الأهمية 16-19. والعقبة الرئيسية لاستخدام الطعوم هامشية أكثر على نطاق واسع هو عدم القدرة على تقييم جودة وسلامة الأجهزة قبل الزرع. حاليا، يتم استخدام المعلمات السريرية فقط مثل العمر المانحة، وأمراض المانحة ذات الصلة، ووقت نقص التروية الدافئ للترقيع لقرار ما إذا كان قبول أو رفض جهازا للزرع. من خلال الحفاظ على الكسب غير المشروع في ظل ظروف سوي الحرارة، وتقييم الكسب غير المشروع على أساس الخصائص نضح والبيانات ممكنا. من المفترض أن تكون المعلمات مفيدة لتقييم جدوى من الكسب غير المشروع المعلمات في الوقت الحقيقي مثل تدفق الكلوي الأوعية الدموية والضغط والمقاومة داخل الكلية، وإنتاج البول، واستهلاك الأوكسجين، والمعلمات إصابة الكلى (مثل AST و لاكتات). في الخاأيون، والأيض نشطة خلال NEVKP يسمح تطبيق استراتيجيات إصلاح لتحسين الطعوم الكلى هامشية قبل الزرع. على سبيل المثال، يمكن تثبيط مسارات الموالية للالتهابات، والمناعة، ونقل الجينات، وكذلك الإدارة الخلايا الجذعية تكون التقنيات المستقبلية لتعديل الطعوم الكلى خلال فترة صون وتحسين نتائج المتلقي.

الكلى هي الأجهزة الصلبة المزروعة في معظم الأحيان. للمرضى الذين يعانون من نهاية مرحلة المرض الكلوي وزراعة الكلى يقدم أفضل متوسط ​​العمر المتوقع، وتحسين نوعية الحياة بالمقارنة مع غسيل الكلى 1-4. يمثل استمرار نقص الجهاز مشكلة حادة في مجال الطب زرع (الجدول 1) 5. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td></td><td> الولايات المتحدة * </td><td> المنطقة الأوروبية لزرع الأعضاء ** </td></tr><tr><td> المرضى على قائمة الانتظار لزراعة الكلى </td><td> 101563 (فبراير 2015) </td><td> 10689 (ديسمبر 2014) </td></tr><tr><td> الكلى المتبرع المتوفى زرعها في عام 2014 </td><td> 10650 </td><td> 3119 </td></tr><tr><td> متوسط ​​وقت الانتظار لالمتوفى زرع الكلى المانحة (بالسنوات) </td><td> تصل إلى 5 سنوات * </td><td> تصل إلى 4 سنوات ** </td></tr></tbody></table> الجدول 1. الكلىنقص الكسب غير المشروع في الولايات المتحدة ومنطقة الأوروبية لزرع الأعضاء. يتأثر نتيجة زرع الكلى سلبا وقت الانتظار، مع نتائج الفقيرة للمرضى تعرضوا لغسيل الكلى لفترة طويلة 6. وقد أثار هذا الاهتمام في ترقيع الكلى هامشية كمصدر إضافي من الجهات المانحة، مثل الكلى من متبرعين كبار السن، والجهات المانحة مع التواكب المرضي متعددة (مدد معايير الجهات المانحة (تنمية الطفولة المبكرة)، والكلى المتبرع بها بعد الموت القلبي (DCD). الكلى المانحة الهامشية التي كانت ورفض في الماضي تعتبر الآن لزرع 7. والعقبة الرئيسية لاستخدام الطعوم الكلى هامشية هي تقنية الحفاظ على تخزين اللاتأكسجي البارد. حاليا، يتم تخزين الطعوم الكلى بشكل ثابت على الجليد أو perfused لفي 4 ° C بدون أوكسجين. ويرتبط تقنية الحفاظ الأكسجين الباردة مع إصابة الكسب غير المشروع الجارية خلال الحفاظ على الكلى ولا تسمح تقييم الكسب غير المشروع بسبب عدم وجود متعبolism وإنتاج البول. على وجه الخصوص، الطعوم الكلى هامشية تتحمل التخزين البارد سيئة، مما أدى إلى إصابة الكلى كبيرة، وارتفاع معدلات تأخير وظيفة الكسب غير المشروع (DGF) 8،9. DGF هو عامل النذير لضعف وظيفة الكسب غير المشروع على المدى الطويل. خارج الجسم نضح الكلى يمثل طريقة بديلة لحفظ وتقييم وإصلاح الأجهزة. في نموذج الخنازير، وعرضت نتائج مفيدة للكلى perfused لخارج الحي في ظل ظروف سوي الحرارة 10،11. أظهرت أول تجربة سريرية أجريت في عام 2013 على معدل أقل من تأخر وظيفة الكسب غير المشروع عندما تم perfused لاسترجاع الكلى من معايير الممتدة المانحين لمدة 1 ساعة على الفور قبل زرع 12. تقدم هذه الورقة نموذجا للسوي الحرارة خارج الجسم الحي الكلى التروية (NEVKP). الهدف من هذه الدراسة هو تقليل تطبيقها الوقت نقص التروية الباردة إلى أدنى حد ممكن وتمديد فترة NEVKP. NEVKPهو وسيلة الحفاظ البديلة التي تهدف للحد من الأضرار التي يمكن أن تسببها تقنيات التخزين البارد.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Neonatal cardiopulmonary bypass technology</td>
			<td>SORIN GROUP Canada Inc (Markhan, Canada)</td>
			<td>Custom made</td>
			<td>Neonatal venous reservoir D100 (500 mL, 1/16&#34; in- and outflow), neonatal oxygenator D100, centrifugal pump head (Revolution), arterial bubble filter (D130)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heart lung machine, St&#246;ckert S3</td>
			<td>SORIN GROUP Canada Inc (Markhan, Canada)</td>
			<td>Custom made</td>
			<td>Centrifugal pump, roller pump, control panel (sensors for pressure, flow, temperature, bubbles, and level), oxygen blender, heater unit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="3">Tubing</td>
			<td>SORIN GROUP Canada Inc (Markhan, Canada)</td>
			<td>01906BPC SG XS</td>
			<td>3/16&#34;x 1/16&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>019071PC SG XS</td>
			<td>1/4&#34;x 1/16&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>019060PC SG XH</td>
			<td>3/8&#34;x 1/16&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubing connectors</td>
			<td>SORIN GROUP Canada Inc (Markhan, Canada)</td>
			<td></td>
			<td>Various sizes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>STEEN solution</td>
			<td>XVIVO (G&#246;teborg, SWE)</td>
			<td>19004</td>
			<td>200 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ringer&#39;s lactate</td>
			<td>Baxter (Mississauga, ON, CAN)</td>
			<td>JB2324</td>
			<td>175 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate</td>
			<td>Hospira (Montr&#233;al, QC, CAN)</td>
			<td>6625050</td>
			<td>pH dependent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium gluconate</td>
			<td>Pharmaceutical Partners of Canada (Richmond Hill, ON)</td>
			<td>C31110</td>
			<td>Calcium dependent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin</td>
			<td>Sandoz Canada Inc (Toronto, ON, CAN)</td>
			<td>10750</td>
			<td>1000 IU</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amino acid and glucose, Travasol 10%</td>
			<td>Baxter (Mississauga, ON, CAN)</td>
			<td>JB6760</td>
			<td>1 mL/h</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast acting insulin, Novorapid</td>
			<td>Novo Nordisk Canada Inc (Mississauga, ON, CAN)</td>
			<td>DS6H748</td>
			<td>5 IE/h</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Verapamil</td>
			<td>Sandoz Canada Inc (Quebec, QC, CAN)</td>
			<td>52216</td>
			<td>0,25 mg/h</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

normothermic ex vivo kidney perfusion for the preservation of kidney grafts prior to transplantation

Kidney transplantation has become a well-established treatment option for patients with end-stage renal failure. The persisting organ shortage remains a serious problem. Therefore, the acceptance criteria for organ donors have been extended leading to the usage of marginal kidney grafts. These marginal organs tolerate cold storage poorly resulting in increased preservation injury and higher rates of delayed graft function. To overcome the limitations of cold storage, extensive research is focused on alternative normothermic preservation methods.
Ex vivo normothermic organ perfusion is an innovative preservation technique. The first experimental and clinical trials for ex vivo lung, liver, and kidney perfusions demonstrated favorable outcomes.
In addition to the reduction of cold ischemic injury, the method of normothermic kidney storage offers the opportunity for organ assessment and repair. This manuscript provides information about kidney retrieval, organ preservation techniques, and isolated ex vivo normothermic kidney perfusion (NEVKP) in a porcine model. Surgical techniques, set up for the perfusion solution and the circuit, potential assessment options, and representative results are demonstrated.

في ما يلي نتائج ست تجارب باستخدام نموذج استرجاع الكلى القلب النابض يتم عرض. بعد مطاردة الموقع واسترجاع الكلى في، تم تخزين الطعوم على الجليد لمدة 3 ساعات (SCS)، في حين أعدت كريات الدم الحمراء. لإعداد سريرية، وهذا يحاكي الوقت اللازم لاسترجاع وإعداد الجدول الخلفي. تم تنفيذ NEVKP لمدة 10 ساعة. للحفاظ على الظروف الفسيولوجية ومحاكاة في الجسم الحي المحيطة بها لالكلى، وينبغي تسخين الغرفة الجهاز ومختومة. نضح والبول حل بديل يجب أن تمثل القيم الفسيولوجية لتحليل غازات الدم، وضغط oncotic، والأسمولية. القيم الطبيعية (قيم خط الأساس) التي تم الحصول عليها من الخنازير يوركشاير في الموقع، وتقع في كل وصف شخصية، على التوالي (أرقام 3-13). والهدف من NEVKP هو ضمان أن يتم توفير الكسب غير المشروع مع الأكسجين والتغذية الكافية. كما نقص التروية كاليفورنيايستخدم تضيق الأوعية، وبالتالي زيادة مقاومة داخل الكلية، وتحقيق تدفق مستمر مع الضغط مستقر يعد مؤشرا جيدا لنسبة الأوكسجين الكافي. بعد الوصول إلى درجة الحرارة الكسب غير المشروع المستهدف من 37 ° C عن طريق إعادة التدفئة من الجهاز بعد SCS، قيم التدفق والمقاومة داخل الكلية لا تزال مستقرة مع الضغط المستمر الفسيولوجية حوالي 60-80 مم زئبق في جميع أنحاء نضح كله (أرقام 3 و 4). كمية إنتاج البول تعتمد أساسا على تكوين الحل نضح (الشكل 5). قياسات ساعة من الوريدي والشرياني بو 2 تكشف عن النشاط الأيضي في الكلى. تم احتساب استهلاك الأكسجين باستخدام المعادلة ((بو 2 الفن - ص 2 فين) س تدفق / وزن) (الشكل 6) 14. خلال الرقم الهيدروجيني نضح، HCO 3، والشوارد مستقرة دون الحاجة إلى تدخلات (أرقام 7-10). في الوقت الحقيقي AST والقياسات اللاكتات يخدم لمراقبة تلف الخلايا. تم الكشف عن أي زيادة من المعلمات من إصابة الخلية خلال الفترة NEVKP (أرقام 11 و 12). الأسمولية من الحل نضح هو مستقر (الشكل 13). تقييم النسيجي يكشف عن تغيرات طفيفة (الشكل 14-16). <img alt="الشكل (3)" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig3.jpg" /> الشكل 3. متوسط ​​التدفق الشرياني بانحراف معياري (مل / دقيقة). وخلال نضح يبقى تدفق في مجموعة والفسيولوجية. قيم الفسيولوجية الخنازير، وتقاس في الموقع: تعني الفن. تدفق: 170 ± 57 مل / دقيقة (المدى 83-325 مل / دقيقة). <img alt="الرقم 4" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig4.jpg" /> الرقم 4. المقاومة داخل الكلية (IRR)، يعني والانحراف المعياري (مم زئبق / </strong&gt; مل / دقيقة). ولا يزال الضغط الشرياني يعني (MAP) المستمر بين 60 و 80 مم زئبق. المقاومة داخل الكلية أقل من 0.5 مم زئبق / مل / دقيقة باستمرار. <img alt="الرقم 5" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig5.jpg" /> الرقم 5. إجمالي حجم البول، يعني والانحراف المعياري (مل). يعتمد إجمالي حجم البول بشكل رئيسي على تكوين الحل نضح. وارتفاع ضغط oncotic والأسمولية، وانخفاض إنتاج البول. <img alt="الشكل (6)" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig6.jpg" /> الرقم 6. استهلاك الأوكسجين، الانحراف المتوسط ​​والمعياري (مل / دقيقة / ز). <img alt="الرقم 7" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig7.jpg" /> الرقم 7. درجة الحموضة وريدي، الانحراف المتوسط ​​والقياسية. وريما درجة الحموضةاعتصامات مستمرة في مجموعة الفسيولوجية دون إدارة بيكربونات. قيم الخنازير الفسيولوجية، وتقاس في الموقع: درجة الحموضة 7.46 ± 0.06 (المدى 7،34-7،63). <img alt="الرقم 8" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig8.jpg" /> الرقم 8. HCO 3 الوريدي، يعني والانحراف المعياري (مليمول / لتر). ولا يزال HCO 3 في مجموعة والفسيولوجية دون إدارة بيكربونات. قيم الخنازير الفسيولوجية، وتقاس في الموقع: HCO 3 30.3 ± 2.4 ملمول / لتر (المدى 21،6-35،8 مليمول / لتر). <img alt="الرقم 9" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig9.jpg" /> الرقم 9. تركيز الصوديوم الوريدي، الانحراف المتوسط ​​والمعياري (مليمول / لتر). ولا يزال الصوديوم في مجموعة والفسيولوجية. قيم الفسيولوجية الخنازير، وتقاس في الموقع: 137.1 &amp;# 177؛ 3.8 ملمول / لتر (المدى 118،7-140،9 مليمول / لتر). <img alt="الرقم 10" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig10.jpg" /> الرقم 10. تركيز البوتاسيوم وريدي، الانحراف المتوسط ​​والمعياري (مليمول / لتر). ولا يزال البوتاسيوم المستمر في نطاق الفسيولوجية. قيم الخنازير الفسيولوجية، وتقاس في الموقع: 3.85 ± 0.46 مليمول / لتر (المدى 3،5 حتي 5،36 مليمول / لتر). <img alt="الرقم 11" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig11.jpg" /> الرقم 11. وريدي ناقلة أمين الأسبارتات، يعني والانحراف المعياري. (AST، U / L) في خارج الحي نضح الكلى سوي الحرارة، AST يوضح علامة إصابة الخلية. قيم AST منخفضة طوال التروية. <img alt="الرقم 12" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig12.jpg" /> الرقم 12: اللاكتات<html> والانحراف المتوسط ​​والمعياري (مليمول / لتر). وفي خارج الحي نضح الكلى سوي الحرارة، وأملاح تمثل علامة إصابة الخلية. قيم مستقرة طوال التروية. <img alt="الرقم 13" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig13.jpg" /> الرقم 13: الأسمولية من المصل، يعني والانحراف المعياري (الميلي أسمول / L) A الأسمولية المستمرة في حل نضح يؤمن إنتاج منخفض، ولكن ثابت البول. قيم الخنازير الفسيولوجية، وتقاس في الموقع: 282 ± 1.7 الميلي أسمول / L (المدى 279-283 الميلي أسمول / L). <img alt="الرقم 14" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig14.jpg" /> الرقم 14: علم ​​الأنسجة (H &amp; E) 50X / 200X التكبير من تقاطع corticomedullary تظهر خفيفة أنبوبي تشكل الفجوات. لا توجد علامات النخر.arget = &quot;_ فارغة&quot;&gt; اضغط هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم. <img alt="الرقم 15" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig15.jpg" /> الرقم 15: علم ​​الأنسجة (PAS) 50X / 200X التكبير من تقاطع corticomedullary تظهر خفيفة أنبوبي تشكل الفجوات. لا توجد مؤشرات على نخر. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52909/52909fig15large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الرقم 16" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig16.jpg" /> الرقم 16: علم ​​الأنسجة (TUNEL تلطيخ) 25X / 200X التكبير. أحيانا جدا هي ملطخة النوى مما يدل على معدلات منخفضة جدا من موت الخلايا المبرمج. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52909/52909fig16large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation at JoVE.com

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

وقد أدى النقص الحاد في الجهاز زيادة استخدام الطعوم الكلى هامشية للزرع. وقد أثار هذا الاهتمام في وسائل التخزين البديلة، لأن الطعوم هامشية خاصة يتسامح مع التخزين البارد سيئة. تقنية سوي الحرارة خارج الجسم الحي الكلى التروية (NEVKP) تمثل طريقة الحفاظ رواية لترقيع الكلى قبل الزرع.

سوي الحرارة<em&gt; السابقين فيفو</em&gt; الإرواء الكلى للحفاظ على الكلى الطعوم قبل الزرع

Kidney transplantation has become a well-established treatment option for patients with end-stage renal failure. The persisting organ shortage remains a ...

normothermic-ex-vivo-kidney-perfusion-for-preservation-kidney-grafts

Google

Research

JoVE Journal

Medicine

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

18.9K Views.  Toronto General Hospital.  وقد أدى النقص الحاد في الجهاز زيادة استخدام الطعوم الكلى هامشية للزرع. وقد أثار هذا الاهتمام في وسائل التخزين البديلة، لأن الطعوم هامشية خاصة يتسامح مع التخزين البارد سيئة. تقنية سوي الحرارة خارج الجسم الحي الكلى التروية (NEVKP) تمثل طري...

Video: Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

A Method for Murine Islet Isolation and Subcapsular Kidney Transplantation

Since the early pioneering work of Ballinger and Reckard demonstrating that transplantation of islets of Langerhans into diabetic rodents could normalize their blood glucose levels, islet transplantation has been proposed to be a potential treatment for type 1 diabetes 1,2. More recently, advances in human islet transplantation have further strengthened this view 1,3. However, two major limitations prevent islet transplantation from being a widespread clinical reality: (a) the requirement for large numbers of islets per patient, which severely reduces the number of potential recipients, and (b) the need for heavy immunosuppression, which significantly affects the pediatric population of patients due to their vulnerability to long-term immunosuppression. Strategies that can overcome these limitations have the potential to enhance the therapeutic utility of islet transplantation.
Islet transplantation under the mouse kidney capsule is a widely accepted model to investigate various strategies to improve islet transplantation. This experiment requires the isolation of high quality islets and implantation of islets to the diabetic recipients. Both procedures require surgical steps that can be better demonstrated by video than by text. Here, we document the detailed steps for these procedures by both video and written protocol. We also briefly discuss different transplantation models: syngeneic, allogeneic, syngeneic autoimmune, and allogeneic autoimmune.

Transplantation of isolated islets has been proposed to be a potential treatment for type 1 diabetes. Here we describe a method to isolate islets from mouse pancreata and transplant them to the subcapsular space of the kidney.

وهناك طريقة لعزل جزيرة الفئران تحت المحفظة وزراعة الكلى

Since the early pioneering work of Ballinger and Reckard demonstrating that transplantation of islets of Langerhans into diabetic rodents could normalize ...

Steps for the Autologous Ex vivo Perfused Porcine Liver-kidney Experiment

The use of ex vivo perfused models can mimic the physiological conditions of the liver for short periods, but to maintain normal homeostasis for an extended perfusion period is challenging. We have added the kidney to our previous ex vivo perfused liver experiment model to reproduce a more accurate physiological state for prolonged experiments without using live animals. Five intact livers and kidneys were retrieved post-mortem from sacrificed pigs on different days and perfused for a minimum of 6 hr. Hourly arterial blood gases were obtained to analyze pH, lactate, glucose and renal parameters. The primary endpoint was to investigate the effect of adding one kidney to the model on the acid base balance, glucose, and electrolyte levels. The result of this liver-kidney experiment was compared to the results of five previous liver only perfusion models. In summary, with the addition of one kidney to the ex vivo liver circuit, hyperglycemia and metabolic acidosis were improved. In addition this model reproduces the physiological and metabolic responses of the liver sufficiently accurately to obviate the need for the use of live animals. The ex vivo liver-kidney perfusion model can be used as an alternative method in organ specific studies. It provides a disconnection from numerous systemic influences and allows specific and accurate adjustments of arterial and venous pressures and flow.

Steps for the Autologous Ex vivo Perfused Porcine Liver-kidney Experiment

Study of the animal organ physiology can be achieved by performing an experimental ex vivo perfusion system. The addition of a porcine kidney, as a homeostatic organ to our previously developed ex vivo liver perfusion model can be a principal step to achieve a better physiological environment.

The use of ex vivo perfused models can mimic the physiological conditions of the liver for short periods, but to maintain normal homeostasis for an ...

Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. In most transplant regions 20-30% of patients on the waiting list for liver transplantation die without receiving an organ transplant or are delisted for disease progression. One strategy to increase the donor pool is the utilization of marginal grafts, such as fatty livers, grafts from older donors, or donation after cardiac death (DCD). The current preservation technique of cold static storage is only poorly tolerated by marginal livers resulting in significant organ damage. In addition, cold static organ storage does not allow graft assessment or repair prior to transplantation.
These shortcomings of cold static preservation have triggered an interest in warm perfused organ preservation to reduce cold ischemic injury, assess liver grafts during preservation, and explore the opportunity to repair marginal livers prior to transplantation. The optimal pressure and flow conditions, perfusion temperature, composition of the perfusion solution and the need for an oxygen carrier has been controversial in the past.
In spite of promising results in several animal studies, the complexity and the costs have prevented a broader clinical application so far. Recently, with enhanced technology and a better understanding of liver physiology during ex vivo perfusion the outcome of warm liver perfusion has improved and consistently good results can be achieved.
This paper will provide information about liver retrieval, storage techniques, and isolated liver perfusion in pigs. We will illustrate a) the requirements to ensure sufficient oxygen supply to the organ, b) technical considerations about the perfusion machine and the perfusion solution, and c) biochemical aspects of isolated organs.

Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts

Marginal grafts, such as fatty livers, grafts from older donors, or livers retrieved after cardiac death (DCD) tolerate conventional, cold static storage only poorly. We developed a novel model of subnormothermic ex vivo liver perfusion for preservation, assessment, and repair of marginal liver grafts prior to transplantation.

تقنية Subnormothermic<em&gt; فيفو السابقين</em&gt; الكبد الإرواء للتخزين، تقييم، وإصلاح الطعوم الكبد الهامشية

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. In most transplant regions 20-30% of patients on the waiting list for ...

Mouse Kidney Transplantation: Models of Allograft Rejection

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely replicates both the technical and pathological processes that occur in human renal transplantation. Although mouse models of allogeneic rejection in organs other than the kidney exist, and are more technically feasible, there is evidence that different organs elicit disparate rejection modes and dynamics, for instance the time course of rejection in cardiac and renal allograft differs significantly in certain strain combinations. This model is an attractive tool for many reasons despite its technical challenges. As inbred mouse strain haplotypes are well characterized it is possible to choose donor and recipient combinations to model acute allograft rejection by transplanting across MHC class I and II loci. Conversely by transplanting between strains with similar haplotypes a chronic process can be elicited were the allograft kidney develops interstitial fibrosis and tubular atrophy. We have modified the surgical technique to reduce operating time and improve ease of surgery, however a learning curve still needs to be overcome in order to faithfully replicate the model. This study will provide key points in the surgical procedure and aid the process of establishing this technique.

Here, we present a protocol to study the immunology of rejection. The surgical model presented reports a short operating time and a concise technique. Depending on the donor-recipient strain combination, the transplanted kidney may develop acute cellular rejection or chronic allograft damage, defined by interstitial fibrosis and tubular atrophy.

الماوس زرع الكلى: نماذج من طعم خيفي رفض

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely ...

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

In contrast to conventional static cold preservation (0-4 &#176;C), ex situ machine perfusion may provide better preservation of donor livers. Continuous perfusion of organs provides the opportunity to improve organ quality and allows ex situ viability assessment of donor livers prior to transplantation. This video article provides a step by step protocol for ex situ normothermic machine perfusion (37 &#176;C) of human donor livers using a device that provides a pressure and temperature controlled pulsatile perfusion of the hepatic artery and continuous perfusion of the portal vein. The perfusion fluid is oxygenated by two hollow fiber membrane oxygenators and the temperature can be regulated between 10 &#176;C and 37 &#176;C. During perfusion, the metabolic activity of the liver as well as the degree of injury can be assessed by biochemical analysis of samples taken from the perfusion fluid. Machine perfusion is a very promising tool to increase the number of livers that are suitable for transplantation.

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

Here we present a protocol describing oxygenated ex situ machine perfusion of donor liver grafts. This article contains a step by step protocol to procure and prepare the liver graft for machine perfusion, prepare the perfusion fluid, prime the perfusion machine and perform oxygenated normothermic machine perfusion of the liver graft.

خارج الموقع سوي الحرارة آلة الإرواء من الأكباد المانحة

In contrast to conventional static cold preservation (0-4 &#176;C), ex situ machine perfusion may provide better preservation of donor livers. Continuous ...

Murine Kidney Transplant Technique

The first mouse kidney transplant technique was published in 19731 by the Russell laboratory. Although it took some years for other labs to become proficient in and utilize this technique, it is now widely used by many laboratories around the world. A significant refinement to the original technique using the donor aorta to form the arterial anastomosis instead of the renal artery was developed and reported in 1993 by Kalina and Mottram 2 with a further advancement coming from the same laboratory in 1999 3. While one can become proficient in this model, a search of the literature reveals that many labs still experience a high proportion of graft loss due to arterial thrombosis. We describe here a technique that was devised in our laboratory that vastly reduces the arterial thrombus reported by others 4,5. This is achieved by forming a heel-and-toe cuff of the donor infra-renal aorta that facilitates a larger anastomosis and straighter blood flow into the kidney.

The goal of this manuscript is to describe the steps required to perform a kidney transplant in a mouse, paying particular attention to the details of the arterial anastomosis.

الكلى الفئران زرع تقنية

The first mouse kidney transplant technique was published in 19731 by the Russell laboratory. Although it took some years for other labs to become ...

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, normothermic ex vivo liver perfusion (NEVLP) has been introduced as a method to evaluate and modify organ function. NEVLP has many advantages in comparison to hypothermic and subnormothermic perfusion including reduced preservation injury, restoration of normal organ function under physiologic conditions, assessment of organ performance, and as a platform for organ repair, remodeling, and modification. Both murine and porcine NEVLP models have been described. We demonstrate a rat model of NEVLP and use this model to show one of its important applications &#8212; the use of a therapeutic molecule added to liver perfusate. Catalase is an endogenous reactive oxygen species (ROS) scavenger and has been demonstrated to decrease ischemia-reperfusion in the eye, brain, and lung. Pegylation has been shown to target catalase to the endothelium. Here, we added pegylated-catalase (PEG-CAT) to the base perfusate and demonstrated its ability to mitigate liver preservation injury. An advantage of our rodent NEVLP model is that it is inexpensive in comparison to larger animal models. A limitation of this study is that it does not currently include post-perfusion liver transplantation. Therefore, prediction of the function of the organ post-transplantation cannot be made with certainty. However, the rat liver transplant model is well established and certainly could be used in conjunction with this model. In conclusion, we have demonstrated an inexpensive, simple, easily replicable NEVLP model using rats. Applications of this model can include testing novel perfusates and perfusate additives, testing software designed for organ evaluation, and experiments designed to repair organs.

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

There is a significant liver donor shortage, and criteria for liver donors have been expanded. Normothermic ex vivo liver perfusion (NEVLP) has been developed to evaluate and modify organ function. This study demonstrates a rat model of NEVLP and tests the ability of pegylated-catalase, to mitigate liver preservation injury.

نموذج حيوانات صغيرة من نضح الكبد نورموثيرميك السابقين فيفو

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, ...

Orthotopic Kidney Auto-Transplantation in a Porcine Model Using 24 Hours Organ Preservation And Continuous Telemetry

In the present era of organ transplantation with critical organ shortage, various strategies are employed to expand the pool of available allografts for kidney transplantation (KT). Even though, the use of allografts from extended criteria donors (ECD) could partially ease the shortage of organ donors, ECD organs carry a potentially higher risk for inferior outcomes and postoperative complications. Dynamic organ preservation techniques, modulation of ischemia-reperfusion and preservation injury, and allograft therapies are in the spotlight of scientific interest in an effort to improve allograft utilization and patient outcomes in KT.
Preclinical animal experiments are playing an essential role in translational research, especially in the medical device and drug development. The major advantage of the porcine orthotopic auto-transplantation model over ex vivo or small animal studies lies within the surgical-anatomical and physiological similarities to the clinical setting. This allows the investigation of new therapeutic methods and techniques and ensures a facilitated clinical translation of the findings. This protocol provides a comprehensive and problem-oriented description of the porcine orthotopic kidney auto-transplantation model, using a preservation time of 24 hours and telemetry monitoring. The combination of sophisticated surgical techniques with highly standardized and state-of-the-art methods of anesthesia, animal housing, perioperative follow up, and monitoring ensure the reproducibility and success of this model.

Large animal models play an essential role in preclinical transplantation research. Due to its similarities to the clinical setup, the porcine model of orthotopic kidney auto-transplantation described in this article provides an excellent in vivo setting for the testing of organ preservation techniques and therapeutic interventions.

عملية زرع الكلى التلقائية في نموذج بورسين باستخدام 24 ساعة لحفظ الأعضاء والقياس المستمر عن بعد

In the present era of organ transplantation with critical organ shortage, various strategies are employed to expand the pool of available allografts for ...

Digital Home-Monitoring of Patients after Kidney Transplantation: The MACCS Platform

The MACCS (Medical Assistant for Chronic Care Service) platform enables secure sharing of key medical information between patients after kidney transplantation and physicians. Patients provide information such as vital signs, well-being, and medication intake via smartphone apps. The information is transferred directly into a database and electronic health record at the kidney transplant center, which is used for routine patient care and research. Physicians can send an updated medication plan and laboratory data directly to the patient app via this secure platform. Other features of the app are medical messages and video consultations. Consequently, the patient is better-informed, and self-management is facilitated. In addition, the transplant center and the patient's local nephrologist automatically exchange notes, medical reports, laboratory values, and medication data via the platform. A telemedicine team reviews all incoming data on a dashboard and takes action, if necessary. Tools to identify patients at risk for complications are under development. The platform exchanges data via a standardized secure interface (Health Level 7 (HL7), Fast Healthcare Interoperability Resources (FHIR)). The standardized data exchange based on HL7 FHIR guarantees interoperability with other eHealth solutions and allows rapid scalability to other chronic diseases. The underlying data protection concept is in concordance with the latest European General Data Protection Regulation. Enrollment started in February 2020, and 131 kidney transplant recipients are actively participating as of July 2020. Two large German health insurance companies are currently funding the telemedicine services of the project. The deployment for other chronic kidney diseases and solid organ transplant recipients is planned. In conclusion, the platform is designed to enable home monitoring and automatic data exchange, empower patients, reduce hospitalizations, and improve adherence, and outcomes after kidney transplantation.

The MACCS platform&#160;is a comprehensive telemedicine concept aiming at better outcomes after kidney transplantation by sharing key medical information between patients and physicians. A telemedicine team reviews incoming data to detect potential complications and to improve adherence in kidney transplant recipients to achieve better long-term outcomes.

المراقبة المنزلية الرقمية للمرضى بعد زرع الكلى: منصة MACCS

The MACCS (Medical Assistant for Chronic Care Service) platform enables secure sharing of key medical information between patients after kidney ...

Robot-Assisted Kidney Transplantation

This paper describes robot-assisted kidney transplantation (RAKT) from a living donor. The robot is docked between the parted legs of the patient, placed in the supine Trendelenburg position. Kidney allografts are provided by a living donor. Before vascular anastomosis, the kidney allograft is prepared by inserting a double-J stent in the ureter, and the temperature for the anastomosis is lowered by wrapping it in an ice-packed gauze. A 12 mm or 8 mm port for the robotic camera and three 8 mm ports for robotic arms are placed. A peritoneal pouch is created for the kidney allograft by raising the peritoneal flaps on both sides over the psoas muscle before dissecting the iliac vessels and bladder. A 6 cm Pfannenstiel incision is made to insert the kidney into the peritoneal pouch, lateral to the right iliac vessels. 
After clamping the external iliac vein with Bulldogs clamps, a venotomy is performed, and the graft renal vein is anastomosed to the external iliac vein in an end-to-side continuous manner with a 6/0 polytetrafluoroethylene suture. After clamping the graft renal vein, the iliac vein is declamped. This is followed by clamping of the external iliac artery, arteriotomy, arterial anastomosis with a 6/0 polytetrafluoroethylene suture, clamping of the graft renal artery, and declamping of the external iliac artery. Reperfusion is then carried out, and ureteroneocystostomy is performed using the Lich-Gregoir technique. The peritoneum is closed at a few locations with polymer locking clips, and a closed-suction drain is placed through one of the working ports. After deflating the pneumoperitoneum, all incisions are closed.

This paper provides technical details for robot-assisted kidney transplantation from a living donor.

زراعة الكلى بمساعدة الروبوت

This paper describes robot-assisted kidney transplantation (RAKT) from a living donor. The robot is docked between the parted legs of the patient, placed ...