Name: murine kidney transplant technique
Uploaded: 2015-10-20T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 58 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Kidney Transplant Technique at JoVE.com

وأيد هذا العمل في جزء من 1R03DK096151.

تم شراء جميع الفئران من مختبر جاكسون (بار هاربور، ME)، ويوجد تحت ظروف خالية الممرض في جامعة كولورادو دينفر، مرفق مركز باربرا ديفيس الحيوانية وفقا للمبادئ التوجيهية المعاهد الوطنية للصحة وبموافقة من جامعة كولورادو دينفر IACUC. 1. المانحة الكلى الحصاد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعقيم جميع الأدوات، وارتداء القفازات المعقمة في جميع أنحاء الداخلي والحفاظ على مجال معقم. أداء جميع العمليات الجراحية باستخدام مجهر التشغيل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جراحيا إزالة الكلى الماوس المانحة من-تخدير بنتوباربيتال (60mg / كغ IP) الجهات المانحة. تأكد عمق التخدير بواسطة إصبع القدم قرصة، ومراقبة معدل التنفس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مقطع الفراء ثم لشل حركة الماوس بنسبة 4 في اتجاه والقيود. تحضير الجلد مع بوفيدون اليود وثنى الماوس بطريقة عقيمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل 2 سم خط الوسط شق البطن الرأسي ودخول تجويف البطن. سحب الأمعاء متفوق وتخريج ذلكإلى صدره. الحفاظ على الأمعاء ملفوفة في الشاش المعقم رطبة طوال الإجراء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد هوية السفن البطن كبيرة وتعبئتهم، وتحديد أي فروع أسفل الظهر وإما يكوي أو ligate لهم 10/0 النايلون خياطة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> على الفور البعيدة في الأوعية الكلوية اليسرى ندف الوريد الأجوف السفلي (IVC) والشريان الأورطي البطني (AA) وبصرف النظر عن طريق تشريح حادة على مدى ما يقرب من 2mm و. Ligate مع 10/0 النايلون وتقسيم الشرايين الصغيرة وفروع وريدية من الأوعية الكلوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الآن فصل الوريد الكلوي من الشريان الكلوي بعناية من قبل تشريح حادة من هذه الهياكل. وهذا يسمح لخلق دقيق للرقعة كاريل في نهاية القريبة من الوريد الكلوي، والتي سيتم استخدامها لتشكيل مفاغرة نهاية إلى جنب إلى المستلمين IVC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد وligate وتقسيم السفن الكظرية اليسرى. هذا يسمح بالوصول إلى الشريان الأورطي الكظري ويتم وضع خياطة 6-0 الحرير حول الشريان الأورطي في إطار التحضير للربط، ولكن ليست مرتبطة في الوقت الحالي. </لى&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعبئة الكلى والسفن والحالب من بها أمام المحيطة بها. تدوير الكلى إلى اليمين وligate / تقسيم أي فروع الخلفي. ثم تعود الكلى إلى اليسار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الآن توجيه الانتباه إلى الحالب. من دون إزعاج نقير كلوي تحرير الحالب من المناطق المحيطة بها أمام مع الحرص على الحفاظ على الأوعية الحالب. تقسيم الحالب في مستوى الأسهري. الكلى جاهز الآن للشفاء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن ببطء 300 وحدة من الهيبارين في IVC القاصي وبالتالي heparinizing الجهة المانحة. التعادل لأسفل الخيط الحرير 6-0 وضعت حول AA الكظري ويروي الكلية اليسرى عن طريق الشريان الأورطي البطني البعيدة مع 0.8ml من الحل الهيبارين المالحة (100 U / مل). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة لم تعد نضح إنشاء كاريل التصحيح وريدي فورا للقضاء على ارتجاعي في الكلى. سحب الوريد الكلوي نحو الكلى وكشف عن AA والشريان الكلوي تحت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقسيم الشريان الأورطي المجاور للالشريان الكلوي خلق كعب والبريد الكفة كما هو مبين في الشكل 1. إزالة الكلى والسفن والحالب من الجهة المانحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الكلى مباشرة إلى مستلم معدة سلفا (0 دقيقة البارد الوقت نقص التروية) أو تخزينها في 4 درجة مئوية في حل من اختيار لوقت محدد مسبقا حتى وقت الزرع. الموت الرحيم الجهات المانحة التي exsanguanation وخلع عنق الرحم. إجمالي الوقت للتعافي الكلى المانحة تقريبا. 15-20 دقيقة. </li></ol> 2. الكلى زراعة تقنية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الماوس المتلقي مع بنتوباربيتال (60mg / كغ جرعة أولية IP، من 25mg جرعة تكميلية / كغ IP إذا لزم الأمر). تأكد عمق التخدير بواسطة إصبع القدم قرصة، ومراقبة معدل التنفس. مقطع الفراء ثم شل الماوس بنسبة 4 في اتجاه والقيود وتطبيق مرهم للعين للعيون. تحضير الجلد مع بوفيدون اليود وثنى الماوس بطريقة عقيمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل 2 سم خط الوسط شق البطن الرأسي ودخول تجويف البطن. سحب الأمعاءمتفوق وتخريج إلى صدره. الحفاظ على الأمعاء ملفوفة في الشاش المعقم رطبة طوال الإجراء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في هذا الوقت إجراء استئصال الكلية اليمنى. Ligate الشريان الكلوي والوريد مع 6-0 خيوط الحرير. استئصال القاصي الكلى إلى الغرز. Ligate الحالب مع 6-0 الحرير ثم تقسيم الأقرب إلى الكلى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عزل الشريان الأورطي البطني والوريد الأجوف السفلي (IVC) أدناه الأوعية الكلوية. ضع 4-0 العلاقات القطن حول الأبهر والوريد الأجوف السفلى متفوقة ثم أقل شأنا من موقع مفاغرة. تحديد وligate أي سفن قطني داخل الميدان مع 10-0 النايلون خياطة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عقدة العلاقات القطن، لأول مرة أدنى تليها متفوقة. وبهذه الطريقة يتم الاحتفاظ بعض الدم في الشريان الأورطي جعل بضع الأبهر أسهل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشكيل بضع الأبهر بإبرة 30G للدخول إلى تجويف الشريان الأورطي. تمديد شق مع المقص الصغير غرامة على طول حوالي 2mm و. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل حد لمفاغرة جانب الكفة الأبهر المانحة الكعب وأصابع القدمين لالشريان الأورطي المستلم في الشكل التالي. وضع 10-0 النايلون خياطة إقامة غرزة في الشريان الأورطي المانحة وإلى الزاوية السفلية من شق في الشريان الأورطي المتلقي وربطة عنق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الثاني 10-0 النايلون مقابل لأول مرة في الشريان الأورطي المانحة والزاوية العليا من شق في الشريان الأورطي البطني وربطة عنق. جعل خط خياطة يمتد من أعلى إلى أدنى في الجدار الجانبي من الشريان الأورطي وربطة عنق ضد غرزة إقامة ضعت سابقا. ثم خياطة الجدار الإنسي بطريقة تشغيل وربطة عنق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل حد لمفاغرة الجانب من الوريد الكلوي المانحة إلى المستلم IVC في الشكل التالي. ثقب IVC بإبرة 30G وتوسيع شق مع المقص الصغير غرامة. ربط الوريد الكلوي المانحة إلى الزاوية السفلية من شق في IVC مع 10-0 النايلون. جعل خط خياطة تشغيل بين الوريد الكلوي وIVC وربطة عنق. ملاحظة: من المهم بمكان أيضا أن سمك الكامل يمر من إبرة خياطة بما في ذلك adventit الأوعية الدمويةوحقق الجيش العراقي والبطانية. انقلاب للخارج من حواف يضمن أيضا أن هناك البطانية إلى البطانية الاتصال، والذي يساعد في الختم والشفاء من anastomoses. في حين أن عامل التخثر لوقف نزيف الدم يمكن أن تكون مفيدة للحد من التسريبات، ونحن نوصي بأن الطبيب الجراح بدلا من ذلك الاعتماد على أسلوب جيد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأكد من أن anastomoses هي &quot;نظيفة&quot;. وهذا يعني، أن الجدران المعارضة لا اشتعلت عند وضع غرز. وهذا يؤدي إلى انقباض كبير في التدفق من شأنها أن تؤدي إلى الكسب غير المشروع فشل وفي الحالات القصوى إلى شلل هند أطرافهم. ملاحظة: هناك عامل آخر بالغ الأهمية هو ضمان أن التوتر من خطوط خياطة المفاغرة هو أيضا الأمثل. فضفاضة جدا، وسوف يكون هناك تسرب لا رجعة فيه، وضيق جدا وتضيق لتدفق سيؤدي. إذا على الجانب الشرياني هذا سوف يؤدي ذلك إلى ضعف التروية من الكسب غير المشروع، إذا كان على الجانب الوريدي الكلى ازدحام سيؤدي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الافراج عن القاصي 4-0 القطن التعادل إعادة إنشاء التدفق الوريدي. مرة واحدة الارقاء من الوريديوقد لوحظ لنا مفاغرة تدريجيا تخفيف الداني التعادل 4-0 القطن ومراقبة مفاغرة شريانية لالارقاء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الروابط القطن من الماوس مرة واحدة وتعتبر كل من anastomoses آمنة. بيرس المثانة مع إبرة 20 G خلق اثنين من الثقوب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمرير نصائح من ملقط المنحنية من خلال الثقوب وسحب الحالب المانحة من خلال المثانة مع ملقط مع نهاية القريبة من الحالب التي ترتكز على جدار المثانة مع اثنين من 10-0 خيوط النايلون. تقليم طول الزائد من الحالب جاحظ من الحفرة الثانية مما يسمح الحالب إلى التراجع داخل المثانة وإغلاق الفتحة مع اثنين من 10-0 خيوط النايلون. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إرجاع الأمعاء إلى البطن. إغلاق جدار البطن في طبقتين باستخدام 5-0 خياطة الحرير بطريقة قيد التشغيل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدارة بلعة 1.0 مل من العقيمة، محلول ملحي دافئ في البطن كما الانعاش السوائل عند الإغلاق، وحقن 0.8 مل من المعتاد المالحة تحت الجلد بعد العملية. لا supporti أخرىيلزم اتخاذ تدابير هاء أثناء الجراحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استرداد الحيوان على بطانية الاحترار. مجموع وقت زرع تقريبا. 35-45 دقيقة. إدارة المسكنات مثل البوبرينورفين، 0.05 ملغ / كغ، SC، 0.1-0.2 مل في بداية الإجراء وكل 6-12 ساعة لمدة 72 ساعة بعد المرجع. </li></ol> 3. الجزء المقابل استئصال الكلية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تبعا لمتطلبات البروتوكول، بعد عدة أيام من إجراء عملية الزرع، إجراء استئصال الكلية المقابل تحت التخدير الأيزوفلورين (5٪ الأيزوفلورين استنشاقه لتحريض، 1،5-2،0٪ للصيانة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أدخل تجويف البطن وسحب بلطف الأمعاء إلى اليمين الحيوان. فضح الكلية اليسرى وتشريح حادة من اللفافة المحيطة بها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Ligate في الشريان الكلوي، الوريد والحالب مع خيوط الحرير 6-0 ثم استئصال الكلى فوق الغرز وإزالة الكلى. إجمالي الوقت المنطوق تقريبا. 10 دقيقة. </li></ol> 4. تقييم الكسب غير المشروع <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مقياس creati المصلتسعة باستخدام طريقة تتجمع القلوية (رد فعل جافي). </li></ol>

<ol>
	<li>Skoskiewicz, M., Chase, C., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kidney+transplants+between+mice+of+graded+immunogenetic+diversity.">Kidney transplants between mice of graded immunogenetic diversity.</a> Transplant Proc. 5 (1), 721-725 (1973).</li><li>Kalina, S. L., Mottram, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microsurgical+technique+for+renal+transplantation+in+mice.">A microsurgical technique for renal transplantation in mice.</a> Aust N Z J Surg. 63 (3), 213-216 (1993).</li><li>Han, W. R., Murray-Segal, L. J., Mottram, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modified+technique+for+kidney+transplantation+in+mice.">Modified technique for kidney transplantation in mice.</a> Microsurgery. 19 (6), 272-274 (1999).</li><li>Ge, F., Gong, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategies+for+successfully+establishing+a+kidney+transplant+in+a+mouse+model.">Strategies for successfully establishing a kidney transplant in a mouse model.</a> Exp Clin Transplant. 9 (5), 287-294 (2011).</li><li>Martins, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Learning+curve,+surgical+results+and+operative+complications+for+kidney+transplantation+in+mice.">Learning curve, surgical results and operative complications for kidney transplantation in mice.</a> Microsurgery. 26 (8), 590-593 (2006).</li><li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primarily+vascularized+allografts+of+hearts+in+mice.+The+role+of+H-2D,+H-2K,+and+non-H-2+antigens+in+rejection.">Primarily vascularized allografts of hearts in mice. The role of H-2D, H-2K, and non-H-2 antigens in rejection.</a> Transplantation. 16 (4), 343-350 (1973).</li><li>Zhang, Z., Chen, H., Qian, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kidney+Transplantation+in+Mice.">Kidney Transplantation in Mice.</a> Experimental Organ Transplantation. , 45-64 (2013).</li><li>Zhang, L., Moskovitz, M., Piscatelli, S., Longaker, M. T., Siebert, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemodynamic+study+of+different+angled+end-to-side+anastomoses.">Hemodynamic study of different angled end-to-side anastomoses.</a> Microsurgery. 16 (2), 114-117 (1995).</li><li>Liu, Q., Mirc, D., Fu, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+mechanisms+of+thrombosis+in+intact+bent+microvessels+of+rat+mesentery.">Mechanical mechanisms of thrombosis in intact bent microvessels of rat mesentery.</a> J Biomech. 41 (12), 2726-2734 (2008).</li><li>Chesnutt, J. K., Han, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tortuosity+triggers+platelet+activation+and+thrombus+formation+in+microvessels.">Tortuosity triggers platelet activation and thrombus formation in microvessels.</a> J Biomech Eng. 133 (12), 121004 (2011).</li><li>Han, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+vessel+buckling+within+soft+surrounding+tissue+generates+tortuosity.">Blood vessel buckling within soft surrounding tissue generates tortuosity.</a> J Biomech. 42 (16), 2797-2801 (2009).</li><li>Gutierrez-Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraluminal+thrombus+and+neointimal+hyperplasia+after+microvascular+surgery.">Intraluminal thrombus and neointimal hyperplasia after microvascular surgery.</a> Surg Neurol. 24 (2), 153-159 (1985).</li><li>Khouri, R. K., Cooley, B. C., Kenna, D. M., Edstrom, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thrombosis+of+microvascular+anastomoses+in+traumatized+vessels:+fibrin+versus+platelets.">Thrombosis of microvascular anastomoses in traumatized vessels: fibrin versus platelets.</a> Plast Reconstr Surg. 86 (1), 110-117 (1990).</li><li>Johnson, P. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+platelet+deposition+at+the+human+microvascular+anastomosis:+effect+on+downstream+platelet+deposition+to+intact+and+injured+vessels.">Initial platelet deposition at the human microvascular anastomosis: effect on downstream platelet deposition to intact and injured vessels.</a> Plast Reconstr Surg. 90 (4), 650-658 (1992).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

اتقان هذه التقنية زرع أمر صعب، ولكن بمجرد إنجازه وإنما هي أداة بحث قوية جدا. سوف يكافأ الجراح المريض / الباحث عن طريق الاهتمام بأدق التفاصيل واتساق التقنية، والذي هو المفتاح لإتقان أي عملية جراحية، حتى أكثر من ذلك في النماذج الحيوانية الصغيرة. الصعوبات التقنية لاتقان زرع الكلى الماوس هي طيات كثيرة، ومن المحتمل جدا أن الخبرة في غيرها من النماذج زرع الحيوانات الصغيرة يجب أن اكتسبت قبل تناول هذا الإجراء. من المهم للتأكد من أن anastomoses هي &quot;نظيفة&quot;، أي يجب ألا يتم القبض على جدران الأوعية الدموية المتعارضة عند وضع غرز من أجل الحفاظ على التجويف البراءة. وإلا لن يكون هناك انقباض كبير في التدفق من شأنها أن أكثر من النتيجة المحتملة في الكسب غير المشروع فشل وفي الحالات القصوى تؤدي إلى hind-أطرافهم الشلل. ومن الأهمية بمكان أيضا أن سمك الكامل يمر من إبرة خياطة<html> بما في ذلك البرانية الوعائية والبطانية تتحقق لأن هذا يؤدي إلى evertion السليم من حواف ضمان عدم وجود اتصال البطانية إلى البطانية التي تساعد في الختم والشفاء من anastomoses. في حين أن عامل التخثر لوقف نزيف الدم يمكن أن تكون مفيدة للحد من التسريبات، ونحن نوصي بأن الطبيب الجراح بدلا من ذلك الاعتماد على أسلوب جيد. كما يجب إيلاء الاهتمام لضمان التوتر من خطوط خياطة المفاغرة هو الأمثل، فضفاضة جدا، وسوف يكون هناك تسرب لا رجعة فيه، إلى تدفق ضيق وانخفاض سيؤدي. إذا على الجانب الشرياني هذا سوف يؤدي ذلك إلى ضعف التروية من الكسب غير المشروع، إذا كان على الجانب الوريدي الكلى ازدحام سيؤدي. تحقيق هذا التوتر الصحيح هو أن مسألة الممارسة والخبرة مع غيرها من نماذج الاوعية الدموية الدقيقة الحيوانات الصغيرة تكون مساعدة كبيرة. قبل كل شيء اتساق التقنية والاهتمام الثابت بالتفاصيل سوف تسفر الماوس ممتازة وبقاء الكسب غير المشروع، وظيفة زرع الكلى. ر &quot;&gt; والقيود المفروضة على هذه التقنية تخضع فقط من الاستخدامات التي يمكن تطبيقها من قبل المحقق. كما هو الحال مع أي إجراء الاوعية الدموية الدقيقة، لوحظ تقنية طالما جيدة كما يجب أن تكون النتائج قابلة للتكرار. تم تخفيض الإصابة بتجلط الشرايين باستخدام هذه التقنية بشكل كبير. هذه النتائج في 03/01 على الأقل من جميع عمليات زرع الكلى يجري تحويلها من أعطال فنية المحتملة لبيانات قابلة للاستخدام، مما أدى إلى انخفاض التكاليف وزيادة الإنتاجية. باعتبارها أوعية دموية بالكامل، نموذج زرع مثلي ستشمل التطبيقات المستقبلية رفض / دراسات التسامح وظاهرة تأخر ظيفة الكسب غير المشروع والتحقيق في آليات الإصابة نقص التروية / ضخه.

منذ عام 1973 كان نموذج زرع الكلى في الفئران أداة بحث قيمة، ولكن أعاقت المسائل التقنية استخدامه على نطاق واسع. على مر السنين العديد من الصحف قد نشرت تفصيل التحسينات / التحسينات على هذا الإجراء. كنموذج للأوعية دموية في المقام الأول زرع الأعضاء الصلبة هذا الإجراء هو على الارجح في المرتبة الثانية بعد منتبذ نموذج زرع القلب الذي ابتكر أيضا من قبل المختبر روسيل في 1973 6. كلا النموذجين تصلح للبحث في الاستجابات رفض خيفي، وتطوير وظيفة الكسب غير المشروع تأخر وإصابة نقص التروية ضخه. واحدة من القضايا الأكثر شيوعا ليتم الإبلاغ مع زرع الكلى هي معدلات عالية نسبيا من تخثر الشرايين 4،5،7 التي مررنا بها أيضا في مختبرنا. لذلك شرعنا في إجراء استعراض أدبيات تشكيل خثرة وربما العثور على سبب هذه المشكلة التقنية ووضع أيضاحل ممكن. السبب الأكثر احتمالا لتجلط الدم هو مسار متعرج إلى حد ما يأخذ الدم من الشريان الأورطي المتلقي، في الشريان الأورطي الكلوي المانحة ثم إلى الشريان الكلوي المانحة. هذا المسار يسبب اضطرابات في الشريان الكلوي الذي يمكن أن يؤدي إلى تنشيط صفائح الدم وتشكيل خثرة. استنادا إلى الملاحظات الأخيرة والبحث من المؤلفات ذات الصلة 8-14 توصلنا مع تقنية جديدة التي قللت تجلط الدم إلى 0٪. تقنية الموضحة هنا تختلف من التقنيات ذكرت سابقا في تشكيل الشرايين الكعب والقدم صفعة المرافق التي تحسن تدفق الدم ويقلل بشكل ملحوظ تشكيل خثرة. وشكلت صفعة بقسمة الشريان الأورطي الأشعة تحت الكلى في وجه الفوهة الشرايين الكلوية في زاوية أقل من 45 درجة إلى المحور الطولي من الشريان الأبهر (الشكل 1A و 1B). هذه النتائج في الكفة تقريبا 2mm و في الطول. يتم تشكيل كاريل التصحيح وريدي من قبل transecting صالوريد ENAL في IVC وبالتالي زيادة قطر الكفة. والأشعة تحت الكلى المانحة البطن الشريان الأورطي الكعب والقدم صفعة هو anastomosed نهاية إلى الجانب إلى الشريان الأورطي البطني المستفيدة والوريد الكلوي المانحة / IVC التصحيح هو anastomosed نهاية إلى الجانب إلى المستلم في البطن الأجوف السفلي الأجوف (IVC) . ثم يتم عرض الحالب إلى ويرتكز إلى المثانة كما وصفها هان وآخرون 3. لهذه الدراسة زراعة غير المعالجة مع أوقات نقص التروية الدافئ فقط (أي، لا نقص التروية الباردة) ومقارنة. في هذه الحالة يشير نقص التروية الدافئ إلى الوقت من وقف تدفق الدم عبر الكلى المانحة (الخطوة 1.11 أدناه) وضخه من الكسب غير المشروع في المتلقي (الخطوة 2.11 أدناه). يشير نقص التروية الباردة إلى الوقت الذي الكلى لا perfused ويتم الاحتفاظ في التخزين البارد حتى بداية إجراء عملية الزرع.

<table><tbody><tr><td>Instrument</td><td>Roboz #</td><td>Fine Science Tools #</td><td>Arosurgical #</td></tr><tr><td>Straight micro-dissecting forcep #5</td><td>RS-5015</td><td>11295-51</td><td></td></tr><tr><td>Curved micro-dissecting forcep #7</td><td>RS-5047</td><td>11297-00</td><td></td></tr><tr><td>Curved serrated forcep</td><td>RS-5137</td><td>11052-10</td><td></td></tr><tr><td>Vannas micro-dissecting scissors, short</td><td>RS-5610</td><td></td><td>09.140.08</td></tr><tr><td>Micro-dissecting scissors, straight, sharp, long</td><td></td><td>11.602.11</td><td></td></tr><tr><td>Micro spring handle needle holder</td><td></td><td></td><td>11.549.15</td></tr><tr><td>Straight mosquito forcep</td><td></td><td>91308-12</td><td></td></tr><tr><td>Micro-dissecting scissors, straight, blunt</td><td>RS-5962</td><td>14078-10</td><td></td></tr><tr><td>Micro-dissecting scissors, curved, blunt</td><td>RS-5981</td><td>14079-10</td><td></td></tr><tr><td>Micro retractor</td><td>RS-6540</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Instrument tray, 10&amp;rdquo; x 6 &amp;frac12;&amp;rdquo; x &amp;frac34;&amp;rdquo;</td><td>RT-1350S</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Silk suture, 5/0, 22.5m spool</td><td></td><td>18020-50</td><td></td></tr><tr><td>Suture</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10/0 nylon</td><td></td><td></td><td>T4A10Q07</td></tr><tr><td>5/0 silk</td><td></td><td></td><td>E19A05N</td></tr><tr><td>Gloves</td><td></td><td>Drapes</td><td></td></tr><tr><td>Biogel from Medex Supply</td><td></td><td>Precept, #64-9012-9</td><td></td></tr><tr><td>Syringes</td><td></td><td>Cotton applicators</td><td></td></tr><tr><td>B-D 1cc insulin, #329424</td><td></td><td>Fisher-brand, #23-400-100</td><td></td></tr><tr><td>Povidone-Iodine swabs</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PDI, #B40600</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>4/0 Cotton ties</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Domestic cotton autoclaved with instruments</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

murine kidney transplant technique

The first mouse kidney transplant technique was published in 19731 by the Russell laboratory. Although it took some years for other labs to become proficient in and utilize this technique, it is now widely used by many laboratories around the world. A significant refinement to the original technique using the donor aorta to form the arterial anastomosis instead of the renal artery was developed and reported in 1993 by Kalina and Mottram 2 with a further advancement coming from the same laboratory in 1999 3. While one can become proficient in this model, a search of the literature reveals that many labs still experience a high proportion of graft loss due to arterial thrombosis. We describe here a technique that was devised in our laboratory that vastly reduces the arterial thrombus reported by others 4,5. This is achieved by forming a heel-and-toe cuff of the donor infra-renal aorta that facilitates a larger anastomosis and straighter blood flow into the kidney.

هذه التقنية الجراحية يسمح لأي بسيطة الكسب غير المشروع دراسات البقاء على قيد الحياة / الرفض، أو بروتوكولات تجريبية معقدة للغاية. في الأرقام أدناه ونحن لشرح مزايا استخدام هذه التقنية المحسنة مفاغرة شريانية. باستخدام هذه التقنية خفضنا بشكل كبير من الإصابة بتجلط الشرايين من 35٪ إلى 0٪ وبالتالي زيادة الإنتاجية. وقد استخدمنا هذه التقنية لأكثر من سنة واحدة مع نفس 0٪ نتيجة تخثر الحفاظ على الشكل 1 يصف طريقة لتشكيل الشرايين الكعب والقدم صفعة الذي هو أساس هذه التقنية الجديدة. توفر هذه صفعة لمفاغرة أطول وأكثر استقامة مسار تدفق الدم إلى الكلى. كل من هذه النقاط يؤدي إلى الاضطراب قلل بشكل كبير مما يقلل من احتمال تنشيط صفائح الدم وتشكيل خثرة. <img alt="الشكل 1" src="/files/ftp_upload/52848/52848fig1.jpg" /> <sترونج&gt; الشكل 1. تمثيل تخطيطي لإعداد الكفة المانحة وما ينتج عنها من مفاغرة الشرايين. (A) رسم تخطيطي خط تصور تشكيل الكفة الشرايين كعب وأخمص القدمين. وشكلت صفعة بقسمة الشريان الأورطي البطني بشكل غير مباشر عبر فتحة الشرايين الكلوية في زاوية أقل من 45 درجة إلى المحور الطولي من الشريان الأبهر (B) رسم تخطيطي مبسط يظهر كيف ينقسم الشريان الأورطي الأشعة تحت الكلى لتشكيل الكفة. (C) الكفة تصور التجويف الناتج. (D) ومفاغرة الانتهاء (هياكل الوريدي والحالبي لا يظهر لوضوح) النتائج الكبيرة في التجويف مستعرضة ومسار تدفق الدم التوالي. <img alt="الرقم 2" src="/files/ftp_upload/52848/52848fig2.jpg" /> الشكل 2. تحليل المناعى. (A) الدوري حمض شيف مقطع من مراقبة عدم هيئة تنظيم الاتصالات الملطخةالكلى nsplanted. (B) عملية زرع الكلى مسانج في POD 8 باستخدام تقنية المنقحة يوضح الخلايا أنبوبي الداني العادية، والتي هي مكعبي الشكل، مع السيتوبلازم واضح وضوء نواة مستديرة في وسط الخلية. هناك أدلة على إصابة خفيفة الحدود فرشاة (الأسهم) ولكن الغالبية من الحدود فرشاة منتظمة والحفاظ عليها جيدا. التكبير: 400X. <img alt="الشكل (3)" src="/files/ftp_upload/52848/52848fig3.jpg" /> الجدول 1. مقارنة حدوث تجلط الدم ونقص التروية الأوقات الحميمة بين الطريقتين. وأعرب جميع القيم كما يعني ± SD. لإجراء المقارنات واحدة، يتم تقييم البيانات الموزعة عادة باستخدام المفردة، الذيل يومين ر الطالب الاختبارات، ويتم تحليل البيانات غير العادة التي وزعتها اللامعلمية المفردة مان ويتني U الاختبار. تعتبر القيم P أقل من 0.05 significan إحصائيات.

Watch this Scientific Journal Video about Murine Kidney Transplant Technique at JoVE.com

Murine Kidney Transplant Technique

The goal of this manuscript is to describe the steps required to perform a kidney transplant in a mouse, paying particular attention to the details of the arterial anastomosis.

الكلى الفئران زرع تقنية

The first mouse kidney transplant technique was published in 19731 by the Russell laboratory. Although it took some years for other labs to become ...

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

15.9K Views.  University of Colorado, Denver. The goal of this manuscript is to describe the steps required to perform a kidney transplant in a mouse, paying particular attention to the details of the arterial anastomosis. 

Video: Murine Kidney Transplant Technique

A Method for Murine Islet Isolation and Subcapsular Kidney Transplantation

Since the early pioneering work of Ballinger and Reckard demonstrating that transplantation of islets of Langerhans into diabetic rodents could normalize their blood glucose levels, islet transplantation has been proposed to be a potential treatment for type 1 diabetes 1,2. More recently, advances in human islet transplantation have further strengthened this view 1,3. However, two major limitations prevent islet transplantation from being a widespread clinical reality: (a) the requirement for large numbers of islets per patient, which severely reduces the number of potential recipients, and (b) the need for heavy immunosuppression, which significantly affects the pediatric population of patients due to their vulnerability to long-term immunosuppression. Strategies that can overcome these limitations have the potential to enhance the therapeutic utility of islet transplantation.
Islet transplantation under the mouse kidney capsule is a widely accepted model to investigate various strategies to improve islet transplantation. This experiment requires the isolation of high quality islets and implantation of islets to the diabetic recipients. Both procedures require surgical steps that can be better demonstrated by video than by text. Here, we document the detailed steps for these procedures by both video and written protocol. We also briefly discuss different transplantation models: syngeneic, allogeneic, syngeneic autoimmune, and allogeneic autoimmune.

Transplantation of isolated islets has been proposed to be a potential treatment for type 1 diabetes. Here we describe a method to isolate islets from mouse pancreata and transplant them to the subcapsular space of the kidney.

وهناك طريقة لعزل جزيرة الفئران تحت المحفظة وزراعة الكلى

Since the early pioneering work of Ballinger and Reckard demonstrating that transplantation of islets of Langerhans into diabetic rodents could normalize ...

Murine Renal Transplantation Procedure

Renal orthotopic transplantation in mice is a technically challenging procedure. Although the first kidney transplants in mice were performed by Russell et al over 30 years ago (1) and refined by Zhang et al years later (2), few people in the world have mastered this procedure. In our laboratory we have successfully performed 1200 orthotopic kidney transplantations with &gt; 90% survival rate. The key points for success include stringent control of reperfusion injury, bleeding and thrombosis, both during the procedure and post-transplantation, and use of 10-0 instead of 11-0 suture for anastomoses.
Post-operative care and treatment of the recipient is extremely important to transplant success and evaluation. All renal graft recipients receive antibiotics in the form of an injection of penicillin immediately post-transplant and sulfatrim in the drinking water continually. Overall animal health is evaluated daily and whole blood creatinine analyses are performed routinely with a portable I-STAT machine to assess graft function.

Renal transplantation in mice is a technically challenging procedure that requires careful post-operative care and treatment for success.

فأري إجراء زراعة الكلى

Renal orthotopic transplantation in mice is a technically challenging procedure. Although the first kidney transplants in mice were performed by Russell ...

Biology

Isolation and Transplantation of Different Aged Murine Thymic Grafts.

The mechanisms that regulate the efficacy of thymic selection remain ill-defined. The method presented here allows in vivo analyses of the development and selection of T cells specific for self and foreign antigens. The approach entails implantation of thymic grafts derived from various aged mice into immunodeficient scid recipients. Over a relatively short period of time the recipients are fully reconstituted with T cells derived from the implanted thymus graft. Only thymocytes seeding the thymus at the time of isolation undergo selection and develop into mature T cells. As such, changes in the nature and specificity of the engrafted T cells as a function of age-dependent thymic events can be assessed. Although technical expertise is required for successful thymic transplantation, this method provides a unique strategy to study in vivo a wide range of pathologies that are due to or a result of aberrant thymic function and/or homeostasis.

This report provides a detailed description of transplanting murine thymi from different aged donor mice under the kidney capsule of immunodeficient mouse recipients. The goal of this approach is to model T cell development and thymic selection events in vivo.

العزل وزرع مختلفة المسنين الفئران التوتة الطعوم.

The mechanisms that regulate the efficacy of thymic selection remain ill-defined. The method presented here allows in vivo analyses of the development and ...

Immunology and Infection

Mouse Kidney Transplantation: Models of Allograft Rejection

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely replicates both the technical and pathological processes that occur in human renal transplantation. Although mouse models of allogeneic rejection in organs other than the kidney exist, and are more technically feasible, there is evidence that different organs elicit disparate rejection modes and dynamics, for instance the time course of rejection in cardiac and renal allograft differs significantly in certain strain combinations. This model is an attractive tool for many reasons despite its technical challenges. As inbred mouse strain haplotypes are well characterized it is possible to choose donor and recipient combinations to model acute allograft rejection by transplanting across MHC class I and II loci. Conversely by transplanting between strains with similar haplotypes a chronic process can be elicited were the allograft kidney develops interstitial fibrosis and tubular atrophy. We have modified the surgical technique to reduce operating time and improve ease of surgery, however a learning curve still needs to be overcome in order to faithfully replicate the model. This study will provide key points in the surgical procedure and aid the process of establishing this technique.

Here, we present a protocol to study the immunology of rejection. The surgical model presented reports a short operating time and a concise technique. Depending on the donor-recipient strain combination, the transplanted kidney may develop acute cellular rejection or chronic allograft damage, defined by interstitial fibrosis and tubular atrophy.

الماوس زرع الكلى: نماذج من طعم خيفي رفض

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely ...

Fate Mapping of Human Embryonic Stem Cells by Teratoma Formation 

Human embryonic stem cells (hESCs) have an unlimited capacity for self-renewal, and the ability to differentiate into cells derived from all three embryonic germ layers (1). Directed differentiation of hESCs into specific cell types has generated much interest in the field of regenerative medicine (e.g., (2-5)), and methods for determining the in vivo fate of selected or manipulated hESCs are essential to this endeavor. We have adapted a highly efficient teratoma formation assay for this purpose. A small number of specifically selected hESCs is mixed with undifferentiated wild type hESCs and Phaseolus vulgaris lectin to form a cell pellet. This is grafted beneath the kidney capsule in an immunodeficient mouse. As few as 2.5 x 105 hESCs are needed to form a 16 cm3 teratoma within 8-12 weeks. The fate of the originally selected hESCs can then be determined by immunohistochemistry. This method provides a valuable tool for characterizing tissue-specific reagents for cell-based therapy.

Fate Mapping of Human Embryonic Stem Cells by Teratoma Formation

Directed differentiation of hESCs into specific cells has generated much interest in regenerative medicine. We provide a concise, step-by-step protocol for determining the in vivo fate of selected hESCs that provides a valuable tool for characterizing tissue-specific reagents for cell-based therapy.

رسم مصير الخلايا الجذعية الجنينية البشرية من خلال تكوين ورم مسخي

Human embryonic stem cells (hESCs) have an unlimited capacity for self-renewal, and the ability to differentiate into cells derived from all three ...

Heterotopic Renal Autotransplantation in a Porcine Model: A Step-by-Step Protocol

Kidney transplantation is the treatment of choice for patients suffering from end-stage renal disease. It offers better life expectancy and higher quality of life when compared to dialysis. Although the last few decades have seen major improvements in patient outcomes following kidney transplantation, the increasing shortage of available organs represents a severe problem worldwide. To expand the donor pool, marginal kidney grafts recovered from extended criteria donors (ECD) or donated after circulatory death (DCD) are now accepted for transplantation. To further improve the postoperative outcome of these marginal grafts, research must focus on new therapeutic approaches such as alternative preservation techniques, immunomodulation, gene transfer, and stem cell administration.
Experimental studies in animal models are the final step before newly developed techniques can be translated into clinical practice. Porcine kidney transplantation is an excellent model of human transplantation and allows investigation of novel approaches. The major advantage of the porcine model is its anatomical and physiological similarity to the human body, which facilitates the rapid translation of new findings to clinical trials. This article offers a surgical step-by-step protocol for an autotransplantation model and highlights key factors to ensure experimental success. Adequate pre- and postoperative housing, attentive anesthesia, and consistent surgical techniques result in favorable postoperative outcomes. Resection of the contralateral native kidney provides the opportunity to assess post-transplant graft function. The placement of venous and urinary catheters and the use of metabolic cages allow further detailed evaluation. For long-term follow-up studies and investigation of alternative graft preservation techniques, autotransplantation models are superior to allotransplantation models, as they avoid the confounding bias posed by rejection and immunosuppressive medication.

Porcine models of organ transplantation provide an important platform to study mechanisms of organ preservation. This article describes a heterotopic porcine renal autotransplantation model, which allows investigating new approaches to improve the outcome of transplantation using marginal kidney grafts.

منتبذ الكلوي الزرع الذاتي في لحم الخنزير نموذج: بروتوكول خطوة بخطوة

Kidney transplantation is the treatment of choice for patients suffering from end-stage renal disease. It offers better life expectancy and higher quality ...

Production of Humanized Mouse via Thymic Renal Capsule Grafting, CD34+ Cells Injection, and Cytokine Delivery

Animal models provide a vital translation between in vitro and in vivo biomedical research. Humanized mouse models provide a bridge in the representation of human systems, thereby allowing for a more accurate study of pathogenesis, biomarkers, and many other scientific queries. In this method described, immune-deficient NOD-scid IL2R&#947;null (NSG) mice are implanted with autologous thymus, injected with liver-derived CD34+ cells followed by a series of injected cytokine deliveries. In contrast to other models of a similar nature, the model described here promotes an improved reconstitution of immune cells by delivering cytokines and growth factors via transgenes encoded in AAV8 or pMV101 DNA-based vectors. Moreover, it offers long-term stability with reconstituted mice having an average lifespan of 30 weeks after CD34+ injections. Through this model, we hope to provide a stable and impactful method of studying immunotherapy and human disease in a murine model, thus demonstrating the need for predictive preclinical models.

Production of Humanized Mouse via Thymic Renal Capsule Grafting, CD34+ Cells Injection, and Cytokine Delivery

Humanized mouse models provide a more accurate representation of the human immune microenvironment. This manuscript describes the process in which these models are created through a renal graft of human thymus, injection of human CD34+ cells, and the targeted delivery of human cytokine transgenes to promote CD34+ cell proliferation and differentiation.

Animal models provide a vital translation between in vitro and in vivo biomedical research. Humanized mouse models provide a bridge in the representation ...

A Modified Surgical Technique for Kidney Transplantation in Mice

Kidney transplantation in mice is a complicated and challenging surgery procedure. There are very few publications demonstrating the key steps of this operation. Therefore, this article introduces the technique and points out the surgical caveats associated with this operation. In addition, important modifications in comparison to the conventional procedure are demonstrated. Firstly, a patch of the abdominal aorta is cut and prepared so that the proximal bifurcations of the renal artery, including the ureteral artery are transected together with the donor kidney en bloc. This reduces the risk of a ureter necrosis and avoids the development of a urinary tract occlusion. Secondly, a new method of the vascular anastomosis is demonstrated that allows the operator to flexibly increase or decrease the size of the anastomosis after renal transplant reperfusion has already been initiated. This avoids the development of vessel strictures and intraabdominal bleeding. Thirdly, a technique that enables the anastomosis of the delicate donor ureter and the recipient bladder that does not cause a trauma is shown. Adopting this protocol can shorten the operation time and reduces the damage to the recipient's bladder, thereby significantly increasing the operation success rate for the recipient mice.

This protocol presents a new surgical technique of mouse kidney transplantation focusing on a modified arterial anastomosis strategy. A vascular suture technique including a simple and safer ureter-bladder anastomosis method is also presented. These modifications shorten the operation time and improve the success rate of the mouse kidney transplantation procedure.

تقنية جراحية معدلة لزراعة الكلى في الفئران

Kidney transplantation in mice is a complicated and challenging surgery procedure. There are very few publications demonstrating the key steps of this ...

Orthotopic Rat Kidney Transplantation: A Novel and Simplified Surgical Approach

Kidney transplantation offers increased survival rates and improved quality of life for patients with end-stage renal disease, as compared to any type of renal replacement therapy. Over the past few decades, the rat kidney transplantation model has been used to study the immunological phenomena of rejection and tolerance. This model has become an indispensable tool to test new immunomodulatory pharmaceuticals and regimens prior to proceeding with expensive preclinical large animal studies.
This protocol provides a detailed overview of how to reliably perform orthotopic kidney transplantation in rats. This protocol includes three distinctive steps that increase the probability of success: perfusion of the donor kidney by flushing through the portal vein and the use of a cuff system to anastomose the renal veins and ureters, thereby decreasing cold and warm ischemia times. Using this technique, we have achieved survival rates beyond 6 months with normal serum creatinine in animals with syngeneic or tolerant kidney transplants. Depending on the aim of the study, this model can be modified by pre- or posttransplant treatments to study the acute, chronic, cellular, or antibody-mediated rejection. It is a reproducible, reliable, and cost-effective animal model to study different aspects of kidney transplantation.

The purpose of this manuscript and protocol is to explain and demonstrate in detail the surgical procedure of orthotopic kidney transplantation in rats. This method is simplified to achieve the correct perfusion of the donor kidney and shorten the reperfusion time by using the venous and ureteral cuff anastomosis technique.

زرع الكلي الفئران العظام: نهج الجراحية الجديدة والمبسطة

Kidney transplantation offers increased survival rates and improved quality of life for patients with end-stage renal disease, as compared to any type of ...

Extracting Intact Kidney from Mouse: A Technique to Obtain Kidney Without Renal Capsule from Murine Models

Source: Grainger, N. et al. <a href="https://www.jove.com/video/62040" target="_blank">Isolating and Imaging Live, Intact Pacemaker Regions of Mouse Renal Pelvis by Vibratome Sectioning.</a> J. Vis. Exp. (2021)
In this video, we describe the procedure for kidney extraction from the retroperitoneal space of the mouse. The extracted kidney can further be microdissected to obtain an intact kidney without a renal capsule and the surrounding fat layer.

استخراج الكلى السليمة من الفأر: تقنية للحصول على الكلى بدون كبسولة كلوية من نماذج الفئران

Source: Grainger, N. et al. Isolating and Imaging Live, Intact Pacemaker Regions of Mouse Renal Pelvis by Vibratome Sectioning. J. Vis. Exp. (2021)
In ...