אנחנו רוצים להודות לקבוצת סורין (מילאנו, איטליה) שספק לנו מעגלי זלוף הכליות בהתאמה אישיים. יתר על כן אנו מודים XVIVO זלוף Inc (גטבורג, שוודיה) שספק לנו פתרון Steen, BBraun AG (Melsungen, גרמניה) לאספקה ​​עם משאבות מזרק, וריבר GmbH &amp; Co KG (Reutlingen, גרמניה).

הערה: סקירה סכמטי של פרוטוקול המחקר מוצגת באיור 1. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig1.jpg" /> פרוטוקול איור 1. מחקר. פרוטוקול מחקר זה של normothermic לשעבר vivo זלוף הכליות מבוסס על מודל חזירי. לאחר נתיחה כירורגית של כלי השיט של שתל הכליה ושטיפה עם 500 מיליליטר של היסטידין-טריפטופן-ketoglutarate (HTK), ניתן לאחזר את השתל. לאחר הקירור (SCS) במשך 3 שעות, שתל הכליה perfused normothermic vivo לשעבר (NEVKP) במשך שעות מרובות עד ההשתלה המיועדת. כל בעלי החיים קיבלו טיפול הומני בעמידה ב&#39;העקרונות של מעבדה טיפול בבעלי חיים &#39;&#39; &#39;שגובשו על ידי האגודה הלאומית למחקר רפואי ו&#39;&#39; המדריך לטיפול בחי מעבדה &#39;&#39; שפורסם על ידי המכון הלאומי לבריאות,אונטריו, קנדה. ועדת הטיפול בבעלי חיים של טורונטו הכללית מכון המחקר אישרה את כל המחקרים. 1. בעלי חיים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש חזירי הזכר יורקשייר (27-33 קילוגרם) בפרוטוקול זה. </li></ol> 2. איברים אחזור <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נוהל לפני ניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בית חזירי יורקשייר זכר במתקן מחקר בשבוע אחד לפחות כדי להפחית את רמת הלחץ שלהם. לצום חזירים למינימום של 6 שעות לפני האינדוקציה של ההרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ליזום הרדמה של החזיר על ידי זריקה תוך שרירית של קטמין (25 מ&quot;ג / קילוגרם), אטרופין (0.04 מ&quot;ג / קילוגרם), וmidazolam (0.15 מ&quot;ג / קילוגרם). בהמשך לכך, להעביר את בעלי החיים ממתקן הדיור לחדר הניתוח (OR). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את החזיר במצב שכיבה על השולחן או. תן לו לנשום 2 ליטר של חמצן עם 5% מisoflurane באופן ספונטני. לאחר רגיעה, לחשוף את מיתרי קול עם לרינגוסקופ ולרסס אותם עם לידוקאין 2% כדי למנוע התכווצות נגרמת על ידי אינטובציה. אפאינטובציה ter עם צינור 6.5 מ&quot;מ, לחסום את השרוול עם 3-5 מיליליטר של אוויר. הערה: Capnometry חושף את המיקום הנכון של הצינור לקנה הנשימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מנמיכים את הגז isoflurane ל -2.5%. הגדר את הנשמה ל14-16 נשימות / דקה והנפח של גאות ושפל עד 10 - 15 מיליליטר / קילוגרם משקל גוף. לפקח מקרוב החזיר. קצב לב וריווי חמצן נרשמים על ידי oxymetry דופק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בתנאים סטריליים, להציג 8.5 האב x 10 סנטימטר צנתר לתוך וריד הצוואר בSeldinger טכניקה 13. לכן, שימוש במחט לנקב את כלי הוורידים. לאחר החדרת תיל, להחליף את המחט עם קטטר. לחסל את החוט ולתקן את הצנתר לעור. נהל 200 מיליליטר של תמיסת חומצת החלב של רינגר לשעה בכל הניתוח. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הליך כירורגי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות חיטוי וכיסוי של שדה הניתוח, לבצע חתך קו האמצע מxyphoid לאגן. כדי לטשטש את החשיפה, להאריך את הגישה הניתוחית עםחתך לרוחב עזב. מכסה את המעיים קטנים והגדולים במגבת ולמקם אותם בצד השמאל לגישה אופטימלית לכליה הימנית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפרד את נחות הווריד הנבוב (IVC) מאב העורקים בבטן. סניפים של אב העורקים ולקשור מחלק האחורי של אב העורקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר נתיחת אב העורקים מלאה לחלק האחורי, לעבור קשירה סביב גולגולת אב העורקים לסניפי הכליות. בנוסף, הנח שני חיבורי אותיות גולגולת של הסתעפות הכסל. מניחים עניבה סביב עורק הכליה השמאלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשחרר את הכליה הימנית מהרקמה חסיד שלה. לנתח את הווריד, עורק, ושופכן כליה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את הסרעפת ולנהל 1,000 הפרין IU למשקל תורם קילוגרם ללב. למודל DCD, להזריק 40 mval של KCl intracardially 3 דקות לאחר heparinization המערכתי כדי לגרום לדום לב. דום הלב מוערך כנקודת התחלת איסכמיה חמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בינתיים, לאוסף של דם, לחבר את הקווים של שקיות CPDA (ציטראט, פוספט, דקסטרוז,denosine) לקטטר הציג לוריד הצוואר השמאלי העליון. בצע רך ספין (1500 XG ללא בלם). הסר פלזמה ומעיל באפי בתנאים סטריליים (בטיחות ביולוגית ממשלת כיתה השנייה) ולאחסן את אריתרוציטים לעירוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Cannulate אב העורקים עם קו סומק איבר מעל הסתעפות הכסל. לקשור את חיבורי האותיות באב העורקים ועורק הכליה השמאלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את הכליות עם היסטידין-טריפטופן-ketoglutarate פתרון (HTK) עם לחץ של 100 סנטימטר H 2 O. הצמד את הווריד בחזה ולאסוף את הדם באמצעות צנתר הצוואר. חותך את וריד הבטן מתחת לוריד הכליה כדי לאבטח סומק אופטימלי של הכליה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר סומק מלא של הכליה הימנית, לאחזר את השתל עם קטע של אב העורקים. חותך את וריד הכליה ולהשאיר את השופכן ארוך. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור הכנת הטבלה של שתל הכליה לזלוף <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשחרר את הכליות מהרקמה חסיד. סגור את חלק הגולגולת של אב העורקים עם עניבהND cannulate את החלק התחתון עם מפחית &quot;x 3/8&quot; 1/4. לקשור את ענפי עורקים קטנים יותר המגיעים מאב העורקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Cannulate וריד הכליה עם מפחית 1/4 &quot;x 3/8&quot; ישירות. צנרר השופכן עם האב 8 האכלת צינור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הכליות על קרח עד תחילת NEVKP. </li></ol></li></ol> 3. Ex vivo זלוף כליות Normothermic (NEVKP) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנת מעגל זלוף מעגל זלוף מורכב של ילוד ציוד לב-ריאה עוקפת (איור 2). <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig2.jpg" /> איור 2. סכמטי ציור של מעגל זלוף. המעגל מורכב מיילודי טכנולוגית מעקף לב-ריאה. פתרון זלוף נאסף במאגר הוורידים. משאבה צנטריפוגלית מניעה את הפתרון לoxygenator, שבו הוא מועשר בחמצן וחימם עד 37 מעלות צלזיוס. לאחר הרשות הפלסטיניתssing מסנן בועת עורקים, perfusate מונע עם לחץ של 60-80 מ&quot;מ כספית דרך עורק הכליה לכליה. יצוא הוורידים (0-3 מ&quot;מ כספית) מוביל את perfusate חזרה למאגר הוורידים. משאבות מזרק והעירוי להבטיח את האספקה ​​עם תרכובות נוספות. השתן שנאסף ברחבי זלוף. מאפייני מעגל זלוף נרשמים ברציפות. דגימות לפי שעה גז ורידים ועורקי דם, וסמני פגיעה בכליות מנותחות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"> <li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר את מעגל זלוף המותאם אישית שנעשה במכשיר זלוף הכליות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר את צינורות למאגר וoxygenator ורידים. חבר את צינורות קו עורקים ליצוא העורקים של oxygenator ולמקם את מסנן הבועה במחזיק בה. חבר את קו הטיהור. חבר את צינורות קו ורידים לכניסה של מאגר הוורידים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להערכה במהלך זלוף, חבר את הבדיקה הטמפרטורה לשקע עורקים, לחבר את מד הזרימה וbuחיישן bble לצינורות קו עורקים, ולחבר את קווי לחץ. חבר את חיישן הרמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר את קווי מדגם ורידים ועורקים ליציאות מדגם ורידים ועורקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקם את תא האיבר על דוכן ולהציג את צינורות ורידים ועורקים דרך החורים מוכנים. לתקן את הצינור לשולחן וקאמריים בתקיפות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את צינור היניקה למשאבה ההרים ולמקם קצה אחד לתא כדי לאסוף את הנוזלים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר את צינור החמצן למכל הדלק המכיל 95% O 2/5% CO 2 וoxygenator. חבר את צינורות הסקה לoxygenator ותא האיבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צינורות שימוש מלחציים כדי לסגור את קווי יצוא ורידים ועורקים. החל מהדק צינור נוסף ליצוא של מאגר הוורידים. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנת זלוף הפתרון, תוספי נוספים, ואחול במעגל <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש משאבת עירוי אחד להחליף את השתן מיוצר עםלקטט רינגר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש משאבת מזרק אחד לניהול תזונה (גלוקוז 0.5 מיליליטר / שעה, חומצות אמינו 0.5 מיליליטר / שעה) ואינסולין (5 IU / שעה) לתוך מאגר הוורידים. לנצל משאבת מזרק שנייה להחדיר vasodilator (verapamil, 0.25 מ&quot;ג / שעה) ישירות לתוך הקו העורק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלא את מאגר הוורידים עם פתרון זלוף. , לכן לשפוך חומצת חלב רינגר (175 מיליליטר), פתרון Steen (200 מיליליטר), DRO (27 מיליליטר), הפרין (1,000 IU), סודיום ביקרבונט כדי להתאים את ה- pH, וגלוקונאט סידן לתוך מאגר הוורידים. לבסוף, להוסיף אריתרוציטים שטופים (125 מיליליטר). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל את המכונה הריאה לב (HLM). הפעל את לוחות לחץ, טמפרטורה, רמה, וחיישן בועה. הפעל את מערכת ניהול נתונים (DMS) כדי להקליט את הנתונים לאורך זלוף. הפעל את יחידת החימום כדי לחמם את פתרון זלוף ותא האיבר עד 37 מעלות צלזיוס. פתח את אספקת O 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את מהדק הצינור מאחורי מאגר הוורידים ולשחרר את centrifugראש משאבת אל מאוויר לחלוטין. התחל המשאבה צנטריפוגלית ב 1000 סל&quot;ד, ולאפשר הפתרון להיות מונע לאורך כל המעגל. הצמד את צינורות עוקפים את מסנן העורקים ולשחרר אוויר ממסנן העורקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפס קווי לחץ. הפעל את משאבות מזרק ועירוי. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כליות השתל זלוף <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הכליות מהקרח, ולמקם את הכליה על מצעים בתא האיבר. מניחים את הצנתר שתן לאספן השתן. לאחר שווידאת כי הוורידים והעורקים צינורות חופשיים של אוויר, לחבר את המחברים לצינורות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את קיצור הדרך בין העורקים וורידי קווי צינורות. הגדר את לחץ הדם 75 מ&quot;מ כספית על ידי המסדיר את המהירות של המשאבה צנטריפוגלית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחצי שיא, זרימת דם, טמפרטורה, ונוכחות של בועות ברציפות עם DMS. שימו לב לערכים בזהירות לאורך זלוף. במהלך זלוף, דליפת דם לתוך התא הוא Collected באמצעות צינורות היניקה בחזרה למאגר הוורידים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רשום את כמות השתן המיוצר. לאסוף דגימות דם ושתן ורידים לשעה. צג זלוף על ידי לקיחת ורידים ודגימות גז דם העורקים וaminotransferase aspartate (AST), וניתוח חומצת החלב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בסופו של זלוף, נתק את צינורות מעורק הכליה ווריד, לשטוף את השתל עם HTK הקר, ולאחסן אותו על קרח בשקית איבר סטרילי עד להשתלה. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Wolfe, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+mortality+in+all+patients+on+dialysis,+patients+on+dialysis+awaiting+transplantation,+and+recipients+of+a+first+cadaveric+transplant.">Comparison of mortality in all patients on dialysis, patients on dialysis awaiting transplantation, and recipients of a first cadaveric transplant.</a> The New England journal of medicine. 341 (23), 1725-1730 (1999).</li><li>Rabbat, C. G., Thorpe, K. E., Russell, J. D., Churchill, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+mortality+risk+for+dialysis+patients+and+cadaveric+first+renal+transplant+recipients+in+Ontario,+Canada.">Comparison of mortality risk for dialysis patients and cadaveric first renal transplant recipients in Ontario, Canada.</a> Journal of the American Society of Nephrology : JASN. 11 (5), 917-922 (2000).</li><li>Fuquay, R., Teitelbaum, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplant+outcomes+and+dialysis+modality.">Transplant outcomes and dialysis modality.</a> Contributions to nephrology. 178, 251-257 (2012).</li><li>Ingsathit, A., Kamanamool, N., Thakkinstian, A., Sumethkul, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival+advantage+of+kidney+transplantation+over+dialysis+in+patients+with+hepatitis+C:+a+systematic+review+and+meta-analysis.">Survival advantage of kidney transplantation over dialysis in patients with hepatitis C: a systematic review and meta-analysis.</a> Transplantation. 95 (7), 943-948 (2013).</li><li>Davis, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+extent+and+predictors+of+waiting+time+geographic+disparity+in+kidney+transplantation+in+the+United+States.">The extent and predictors of waiting time geographic disparity in kidney transplantation in the United States.</a> Transplantation. 97 (10), 1049-1057 (2014).</li><li>Perico, N., Cattaneo, D., Sayegh, M. H., Remuzzi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delayed+graft+function+in+kidney+transplantation.">Delayed graft function in kidney transplantation.</a> Lancet. 364 (9447), 1814-1827 (2004).</li><li>Maggiore, U., Cravedi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+marginal+kidney+donor.">The marginal kidney donor.</a> Current opinion in organ transplantation. 19 (4), 372-380 (2014).</li><li>Dittrich, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+cold+storage+on+renal+ischemia+reperfusion+injury+after+non-heart-beating+donor+explantation.">Influence of cold storage on renal ischemia reperfusion injury after non-heart-beating donor explantation.</a> Nephron. Experimental nephrology. 96 (3), e97-e102 (2004).</li><li>Summers, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+donor+age+and+cold+storage+time+on+outcome+in+recipients+of+kidneys+donated+after+circulatory+death+in+the+UK:+a+cohort+study.">Effect of donor age and cold storage time on outcome in recipients of kidneys donated after circulatory death in the UK: a cohort study.</a> Lancet. 381 (9868), 727-734 (2013).</li><li>Hosgood, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=et+al.+pilot+study+assessing+the+feasibility+of+a+short+period+of+normothermic+preservation+in+an+experimental+model+of+non+heart+beating+donor+kidneys.">et al. pilot study assessing the feasibility of a short period of normothermic preservation in an experimental model of non heart beating donor kidneys.</a> The Journal of surgical research. 171 (1), 283-290 (2011).</li><li>Hosgood, S. A., Patel, M., Nicholson, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+conditioning+effect+of+ex+normothermic+perfusion+in+an+experimental+kidney+model.">The conditioning effect of ex normothermic perfusion in an experimental kidney model.</a> The Journal of surgical research. 182 (1), 153-160 (2013).</li><li>Nicholson, M. L., Hosgood, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+transplantation+after+ex+vivo+normothermic+perfusion:+the+first+clinical+study.+American+journal+of+transplantation.">Renal transplantation after ex vivo normothermic perfusion: the first clinical study. American journal of transplantation.</a> official journal of the American Society of Transplantation and the American Society of Transplant Surgeons. 13 (5), 1246-1252 (2013).</li><li>Seldinger, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Catheter+replacement+of+the+needle+in+percutaneous+arteriography;+a+new+technique.">Catheter replacement of the needle in percutaneous arteriography; a new technique.</a> Acta radiologica. 39 (5), 368-376 (1953).</li><li>Stubenitsky, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exsanguinous+metabolic+support+perfusion--a+new+strategy+to+improve+graft+function+after+kidney+transplantation.">Exsanguinous metabolic support perfusion--a new strategy to improve graft function after kidney transplantation.</a> Transplantation. 70 (8), 1254-1258 (2000).</li><li>Delpech, P. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+warm+ischaemia+combined+with+cold+preservation+on+the+hypoxia-inducible+factor+1&#945;+pathway+in+an+experimental+renal+autotransplantation+model.">Effects of warm ischaemia combined with cold preservation on the hypoxia-inducible factor 1&#945; pathway in an experimental renal autotransplantation model.</a> The British journal of surgery. , (1002).</li><li>Cypel, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normothermic+ex+vivo+lung+perfusion+in+clinical+lung+transplantation.">Normothermic ex vivo lung perfusion in clinical lung transplantation.</a> The New England journal of medicine. 364 (15), 1431-1440 (2011).</li><li>Knaak, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subnormothermic+Ex+vivo+liver+perfusion+reduces+endothelial+cell+and+bile+duct+injury+after+DCD+pig+liver+transplantation.">Subnormothermic Ex vivo liver perfusion reduces endothelial cell and bile duct injury after DCD pig liver transplantation.</a> Liver transplantation : official publication of the American Association for the Study of Liver Diseases and the International Liver Transplantation Society. , (2014).</li><li>Hosgood, S. A., Nicholson, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+normothermic+perfusion+of+declined+human+kidneys+after+inadequate+in+situ+perfusion.">Ex vivo normothermic perfusion of declined human kidneys after inadequate in situ perfusion.</a> American journal of transplantation official journal of the American Society of Transplantation and the American Society of Transplant Surgeons. 14 (2), 490-491 (2014).</li><li>Op den Dries, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+normothermic+machine+perfusion+and+viability+testing+of+discarded+human+donor+livers.">Ex vivo normothermic machine perfusion and viability testing of discarded human donor livers.</a> American journal of transplantation official journal of the American Society of Transplantation and the American Society of Transplant Surgeons. 13 (5), 1327-1335 (2013).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

מחקר זה מוכיח כי NEVKP עם פתרון המבוסס על כדורית אדומה יכול להתבצע עם תוצאות מצוינות לתקופה ממושכת של זמן במודל חזירי. במהלך 10 שעות זלוף vivo לשעבר הכליות הפגינו פרמטרים יציבים זלוף, חילוף חומרים כליות פעילים, הומאוסטזיס, ופגיעת כלייתית מינימאלית. ייצור שתן ופגיעה בכליות תלויה בהרכב של פתרון זלוף. חשוב לשמור על לחץ וosmolarity של perfusate oncotic בטווח פיסיולוגי. בפרט, לחץ oncotic נמוך יגרום לייצור שתן גבוה unphysiologically עם בצקת כליות משמעותית וסמנים גוברים של פגיעה בכליות. אלבומין פתרון Steen מכיל נבחר במודל זה כדי לווסת את לחץ oncotic וכדי לדמות תנאים פיסיולוגיים לכליות. סודיום ביקרבונט וגלוקונאט סידן מתווספים למערכת כדי להשיג ערכים פיסיולוגיים של pH, HCO 3 </sub&gt;, נתרן, אשלגן, סידן, וכלוריד. הבחירה והמינון של vasodilator חשוב כדי להבטיח את זרימת דם מספקת ואספקת חמצן. יש הטכניקה של normothermic לשעבר vivo זלוף כליות מספר מגבלות. זלוף Ex vivo אינו קשור לתמיכה הורמונלית של הכליות, שעלולים להשפיע באופן שלילי זלוף תקופות ארוכות יותר. בנוסף, הטכנולוגיה החדשה, בנקודת זמן זו, קשורה לעלויות מוגברות. שיפורים עתידיים עשויים לפשט את הטכנולוגיה ולהפחית את העלויות. הפיתוח של מכשיר זלוף כליות נייד עשוי לאפשר להימנע מאחסון כליות קר בעתיד לחלוטין. המחסור החמור האיבר ומתמיד מוביל לעלייה בשימוש באיברים שוליים (תלי ECD או כליות DCD) 7. נכון לעכשיו, שימור איברים מבוסס על קירור סטטי או זלוף מכונה היפותרמיה. כזמן איסכמי קר ממושך יש שד משמעותימעשה על התוצאה של תפקוד כליות של קריטריונים סטנדרטיים 15 ושתלים שוליים 8,9, טכניקות שימור חדשות מזעור אחסון קר הם בעלי עניין מיוחד 16-19. מכשול עיקרי לשימוש בשתלים שוליים יותר בהרחבה הוא חוסר היכולת להעריך את האיכות ויכולת הקיום של איברים לפני ההשתלה. נכון לעכשיו, רק פרמטרים קליניים כגון גיל תורם, מחלות תורם קשור, וזמן איסכמיה החם של השתלים המשמשים להחלטת אם איבר מקובל או סרב להשתלה. על ידי שמירה על השתל בתנאי normothermic, הערכת שתל המבוססת על מאפייני זלוף ונתונים אפשרי. פרמטרים בזמן אמת כגון זרימת כליות וכלי דם, יתר לחץ, התנגדות intrarenal, ייצור שתן, צריכת חמצן, ופרמטרי פגיעה בכליות (כגון AST וחומצת חלב) אמורים להיות פרמטרים שימושיים כדי להעריך את הכדאיות של השתל. בadditיון, חילוף החומרים הפעילים במהלך NEVKP מאפשר היישום של אסטרטגיות תיקון כדי לשפר את שתלי כליות שוליים לפני ההשתלה. לדוגמא, עיכוב של מסלולים הפרו-דלקתיים, משפר תפקוד מערכת חיסון, העברת גנים, כמו גם ממשל בתאי גזע יכול להיות טכניקות עתיד לשנות שתלי כליות בזמן השימור ולשפר את תוצאת נמען.

כליות הן האיברים מוצקים הנפוצה ביותר המושתלים. לחולים הסובלים ממחלת כליות סופנית, השתלת הכליה מציעה תוחלת חיים טובה יותר, ושיפור איכות חיים בהשוואה לדיאליזה 1-4. מחסור האיברים מתמיד מהווה בעיה חמורה בתחום רפואת השתלה (טבלת 1) 5. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td></td><td> ארצות הברית * </td><td> אזור Eurotransplant ** </td></tr><tr><td> חולים ברשימת ההמתנה להשתלת הכליה </td><td> 101563 (פברואר, 2015) </td><td> 10689 (בדצמבר 2014) </td></tr><tr><td> כליות תורם שנפטרו הושתלו בשנת 2014 </td><td> 10650 </td><td> 3,119 </td></tr><tr><td> חציון זמן המתנה להשתלת כליה תורם שנפטרה (בשנים) </td><td> עד 5 שנים * </td><td> עד 4 שנים ** </td></tr></tbody></table> כליות 1. טבלהמחסור שתל בארה&quot;ב וEurotransplant האזור. התוצאה של השתלת כליה מושפעת לרעה מזמן ההמתנה, עם תוצאה פחות טובה לחולי דיאליזה ממושכת נתון 6. זה מופעל על עניין בשתלים שוליים כליות כמקור תורם נוסף, כגון כליות מתורמים מבוגרים, תורמים עם מחלות רקע מרובים (תורמי קריטריונים מורחבים (ECD), וכליות נתרמו לאחר מוות לבבי (DCD). כליות תורמות שוליות שהיו סרב בעבר נחשב כיום להשתלה 7. מכשול עיקרי לשימוש בשתלים בכליות שוליים הוא טכניקת השימור של שטח אחסון anoxic הקר. נכון לעכשיו, שתלי כליות מאוחסנים באופן סטטי על קרח או perfused ב 4 ° C ללא חמצן. טכניקת שימור anoxic הקרה קשורה עם פגיעה מתמשכת בשתל שימור כליות ואינה מאפשרת הערכת שתל בגלל חוסר metabolism וייצור שתן. בפרט, שתלי כליות שוליים לסבול אחסון קר גרוע, וכתוצאה מכך לפגיעה בכליות משמעותית, ושיעור גבוה של תפקוד מתעכב שתל (DGF) 8,9. DGF הוא גורם מנבא לתפקוד שתל ארוך טווח עני. זלוף כליות חוץ מייצג שיטה חלופית לשימור, ההערכה והתיקון של איברים. במודל חזירי, תוצאות מועילות הוצגו לכליות perfused vivo לשעבר בתנאי normothermic 10,11. הניסוי הקליני הראשון שבוצע בשנת 2013 הפגין שיעור נמוך יותר של תפקוד שתל מתעכב כאשר כליות אחזור מתורמי קריטריונים מורחבים היו perfused עבור שעה 1 מייד לפני ההשתלה 12. מאמר זה מציג מודל של normothermic לשעבר vivo זלוף הכליות (NEVKP). מטרתו של מחקר זה היא לצמצם את זמן איסכמיה הקרה מיושם עד למינימום ולהאריך את תקופת NEVKP. NEVKPהיא שיטת שימור חלופית שמטרתו להפחית את הנזקים שיכולים להיגרם על ידי טכניקות אחסון קרות.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Neonatal cardiopulmonary bypass technology</td>
			<td>SORIN GROUP Canada Inc (Markhan, Canada)</td>
			<td>Custom made</td>
			<td>Neonatal venous reservoir D100 (500 mL, 1/16&#34; in- and outflow), neonatal oxygenator D100, centrifugal pump head (Revolution), arterial bubble filter (D130)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heart lung machine, St&#246;ckert S3</td>
			<td>SORIN GROUP Canada Inc (Markhan, Canada)</td>
			<td>Custom made</td>
			<td>Centrifugal pump, roller pump, control panel (sensors for pressure, flow, temperature, bubbles, and level), oxygen blender, heater unit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="3">Tubing</td>
			<td>SORIN GROUP Canada Inc (Markhan, Canada)</td>
			<td>01906BPC SG XS</td>
			<td>3/16&#34;x 1/16&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>019071PC SG XS</td>
			<td>1/4&#34;x 1/16&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>019060PC SG XH</td>
			<td>3/8&#34;x 1/16&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubing connectors</td>
			<td>SORIN GROUP Canada Inc (Markhan, Canada)</td>
			<td></td>
			<td>Various sizes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>STEEN solution</td>
			<td>XVIVO (G&#246;teborg, SWE)</td>
			<td>19004</td>
			<td>200 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ringer&#39;s lactate</td>
			<td>Baxter (Mississauga, ON, CAN)</td>
			<td>JB2324</td>
			<td>175 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate</td>
			<td>Hospira (Montr&#233;al, QC, CAN)</td>
			<td>6625050</td>
			<td>pH dependent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium gluconate</td>
			<td>Pharmaceutical Partners of Canada (Richmond Hill, ON)</td>
			<td>C31110</td>
			<td>Calcium dependent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin</td>
			<td>Sandoz Canada Inc (Toronto, ON, CAN)</td>
			<td>10750</td>
			<td>1000 IU</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amino acid and glucose, Travasol 10%</td>
			<td>Baxter (Mississauga, ON, CAN)</td>
			<td>JB6760</td>
			<td>1 mL/h</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast acting insulin, Novorapid</td>
			<td>Novo Nordisk Canada Inc (Mississauga, ON, CAN)</td>
			<td>DS6H748</td>
			<td>5 IE/h</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Verapamil</td>
			<td>Sandoz Canada Inc (Quebec, QC, CAN)</td>
			<td>52216</td>
			<td>0,25 mg/h</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

normothermic ex vivo kidney perfusion for the preservation of kidney grafts prior to transplantation

Kidney transplantation has become a well-established treatment option for patients with end-stage renal failure. The persisting organ shortage remains a serious problem. Therefore, the acceptance criteria for organ donors have been extended leading to the usage of marginal kidney grafts. These marginal organs tolerate cold storage poorly resulting in increased preservation injury and higher rates of delayed graft function. To overcome the limitations of cold storage, extensive research is focused on alternative normothermic preservation methods.
Ex vivo normothermic organ perfusion is an innovative preservation technique. The first experimental and clinical trials for ex vivo lung, liver, and kidney perfusions demonstrated favorable outcomes.
In addition to the reduction of cold ischemic injury, the method of normothermic kidney storage offers the opportunity for organ assessment and repair. This manuscript provides information about kidney retrieval, organ preservation techniques, and isolated ex vivo normothermic kidney perfusion (NEVKP) in a porcine model. Surgical techniques, set up for the perfusion solution and the circuit, potential assessment options, and representative results are demonstrated.

בבעקבות התוצאות של שישה ניסויים תוך שימוש במודל של אחזור כליות מכות-לב מוצגים. לאחר בסומק באתר ואחזור בכליות, שתלי אוחסנו על קרח 3 שעות (SCS) תוך אריתרוציטים הוכנו. להגדרה הקלינית, זה מדמה את הזמן הנדרש לאחזור והכנת השולחן בחזרה. NEVKP בוצע במשך 10 שעות. כדי לשמור על תנאים פיסיולוגיים ולדמות in vivo מסביב לכליה, קאמרי האיבר צריך להיות מחומם ואטום. זלוף ופתרון החלפת שתן צריך לייצג ערכים פיסיולוגיים לניתוח גז בדם, לחץ oncotic, וosmolarity. ערכים נורמלים (ערכי בסיס) המתקבלים מחזירי יורקשייר באתר, נמצאים בכל תיאור דמות, בהתאמה (איורים 3-13). המטרה של NEVKP היא להבטיח כי השתל מסופק עם חמצן ותזונה מספקים. כCA איסכמיהמשתמש התכווצות כלי דם, ובכך להגדיל התנגדות intrarenal, השגת זרימה מתמדת עם לחץ יציב הוא אינדיקטור טוב לחמצון נאות. לאחר טמפרטורת שתל היעד של 37 מעלות צלזיוס הוא הגיע באמצעות חימום מחדש של האיברים לאחר SCS, זרימת ערכים והתנגדות intrarenal להישאר יציבים עם לחץ פיסיולוגי קבוע של כ 60-80 מ&quot;מ כספית לאורך כל זלוף (איורים 3 ו -4). כמות ייצור שתן תלויה בעיקר בהרכב של פתרון זלוף (איור 5). מדידות לפי שעה של ורידים והעורקים PO 2 לחשוף את הפעילות המטבולית של הכליות. צריכת החמצן חושב באמצעות המשוואה ((PO אמנות 2 - PO Ven 2) זרימת x / משקל) (איור 6) 14. במהלך pH זלוף, 3 HCO, ואלקטרוליטים יציבים ללא צורך בהתערבויות (איורים 7-10). בזמן אמת AST ומדידות לקטט ישמשו לניטור נזק לתאים. אין גידול של פרמטרים של פציעת תא מזוהה בתקופת NEVKP (איורים 11 ו -12). Osmolarity של פתרון זלוף היא יציב (איור 13). הערכה היסטולוגית מגלה שינויים קלים (איור 14 - 16). <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig3.jpg" /> איור זרימת דם 3. ממוצעת עם סטיית תקן (מיליליטר / דקה). במהלך זלוף הזרימה נשארת בטווח פיסיולוגי. ערכים חזירי פיסיולוגיים, נמדדו באתר: מתכוונים אמנות. זרימה: 170 ± 57 מיליליטר / דקה (טווח 83-325 מיליליטר / דקה). <img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig4.jpg" /> 4. התנגדות איור Intrarenal (IRR), אומר וסטיית תקן (מ&quot;מ כספית / </strong&gt; מיליליטר / דקה). הלחץ הממוצע בעורקים (MAP) נשארת קבוע בין 60 ל 80 מ&quot;מ כספית. התנגדות intrarenal היא מתחת ל -0.5 מ&quot;מ כספית / מיליליטר / דקה כל הזמן. <img alt="איור 5" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig5.jpg" /> איור 5. סה&quot;כ נפח שתן, אומר וסטיית תקן (מיליליטר). סך הכל נפח השתן בעיקר תלוי בהרכב של פתרון זלוף. לחץ oncotic וosmolarity גבוה יותר, נמוך יותר ייצור השתן. <img alt="איור 6" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig6.jpg" /> צריכת איור 6. חמצן, סטייה ממוצעת וסטנדרטית (/ דקות / g מיליליטר). <img alt="איור 7" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig7.jpg" /> איור 7. ורידי pH, סטייה ממוצעת וסטנדרטית. הרמ&quot;א pHקבוע תוספות בטווח פיסיולוגי ללא ממשל של bicarbonates. ערכים חזירי פיסיולוגיים, נמדדו באתר: pH 7.46 ± 0.06 (טווח 7.34-7.63). <img alt="איור 8" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig8.jpg" /> איור ורידי 8. HCO 3, אומר וסטיית תקן (mmol / L). HCO 3 נשאר בטווח פיסיולוגי ללא ממשל של bicarbonates. ערכים חזירי פיסיולוגיים, נמדדו באתר: HCO 3 30.3 ± 2.4 mmol / L (טווח 21.6-35.8 mmol / L). <img alt="איור 9" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig9.jpg" /> 9. ריכוז איור ורידי נתרן, סטייה ממוצעת וסטנדרטית (mmol / L). נתרן נשאר בטווח פיסיולוגי. ערכים חזירי פיסיולוגיים, נמדדו באתר: 137.1 &amp;177 #; 3.8 mmol / L (טווח 118.7-140.9 mmol / L). <img alt="איור 10" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig10.jpg" /> 10. ריכוז איור ורידי אשלגן, סטייה ממוצעת וסטנדרטית (mmol / L). אשלגן נשאר קבוע בטווח פיסיולוגי. ערכים חזירי פיסיולוגיים, נמדדו באתר: 3.85 ± 0.46 mmol / L (טווח 3.5-5.36 mmol / L). <img alt="איור 11" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig11.jpg" /> איור 11. aminotransferase aspartate ורידים, אומר וסטיית תקן. (AST; U / L) בזלוף כליות normothermic vivo לשעבר, AST מדגים סמן פציעת תא. ערכי AST הם נמוכים לאורך זלוף. <img alt="איור 12" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig12.jpg" /> איור 12: קטט<html> , סטייה ממוצעת וסטנדרטית (mmol / L). בזלוף כליות normothermic vivo לשעבר, חומצת החלב מייצג סמן פציעת תא. הערכים הם יציבים לאורך זלוף. <img alt="איור 13" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig13.jpg" /> איור 13:. Osmolarity של הסרום, אומר וסטיית תקן (mOsm / L) osmolarity קבועה בפתרון זלוף מאבטחת ייצור שתן נמוך אך קבוע. ערכים חזירי פיסיולוגיים, נמדדו באתר: 282 ± 1.7 mOsm / L (טווח 279-283 mOsm / L). <img alt="איור 14" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig14.jpg" /> איור 14:. היסטולוגיה (H &amp; E) 50X / 200X הגדלה של צומת corticomedullary מראה vacuolization צינור קל. אין סימנים של נמק.arget = &quot;_ blank&quot;&gt; לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו. <img alt="איור 15" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig15.jpg" /> איור 15: היסטולוגיה (PAS) 50X / 200X הגדלה של צומת corticomedullary מראה vacuolization צינור קל.. אין סימנים של נמק. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52909/52909fig15large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 16" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig16.jpg" /> איור 16:. היסטולוגיה (צביעת TUNEL) 25x הגדלה / 200X. לעתים רחוקות גרעינים מוכתמים מפגינים שיעורים נמוכים מאוד של אפופטוזיס. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52909/52909fig16large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation at JoVE.com

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

המחסור החמור האיבר הביא שימוש מוגבר של שתלים בכליות שוליים להשתלה. זה מופעל על עניין בשיטות אחסון חלופיים, מאז שתלי שוליים במיוחד לסבול אחסון קר גרוע. הטכניקה של normothermic לשעבר vivo זלוף כליות (NEVKP) מייצגת שיטת שימור רומן לשתלי כליה לפני ההשתלה.

Normothermic<em&gt; Ex Vivo</em&gt; זלוף כליות לשימור הכליה שתלים לפני השתלה

Kidney transplantation has become a well-established treatment option for patients with end-stage renal failure. The persisting organ shortage remains a ...

normothermic-ex-vivo-kidney-perfusion-for-preservation-kidney-grafts

Research

JoVE Journal

Medicine

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

18.9K Views.  Toronto General Hospital.  המחסור החמור האיבר הביא שימוש מוגבר של שתלים בכליות שוליים להשתלה. זה מופעל על עניין בשיטות אחסון חלופיים, מאז שתלי שוליים במיוחד לסבול אחסון קר גרוע. הטכניקה של normothermic לשעבר vivo זלוף כליות (NEVKP) מייצגת שיטת שימור רומן לשתלי כליה לפני הה?...

Video: Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

Steps for the Autologous Ex vivo Perfused Porcine Liver-kidney Experiment

The use of ex vivo perfused models can mimic the physiological conditions of the liver for short periods, but to maintain normal homeostasis for an extended perfusion period is challenging. We have added the kidney to our previous ex vivo perfused liver experiment model to reproduce a more accurate physiological state for prolonged experiments without using live animals. Five intact livers and kidneys were retrieved post-mortem from sacrificed pigs on different days and perfused for a minimum of 6 hr. Hourly arterial blood gases were obtained to analyze pH, lactate, glucose and renal parameters. The primary endpoint was to investigate the effect of adding one kidney to the model on the acid base balance, glucose, and electrolyte levels. The result of this liver-kidney experiment was compared to the results of five previous liver only perfusion models. In summary, with the addition of one kidney to the ex vivo liver circuit, hyperglycemia and metabolic acidosis were improved. In addition this model reproduces the physiological and metabolic responses of the liver sufficiently accurately to obviate the need for the use of live animals. The ex vivo liver-kidney perfusion model can be used as an alternative method in organ specific studies. It provides a disconnection from numerous systemic influences and allows specific and accurate adjustments of arterial and venous pressures and flow.

Steps for the Autologous Ex vivo Perfused Porcine Liver-kidney Experiment

Study of the animal organ physiology can be achieved by performing an experimental ex vivo perfusion system. The addition of a porcine kidney, as a homeostatic organ to our previously developed ex vivo liver perfusion model can be a principal step to achieve a better physiological environment.

צעדים לעצמיים ב<em&gt; Ex vivo</emניסוי כבד וכליה&gt; perfused בשר חזירים

The use of ex vivo perfused models can mimic the physiological conditions of the liver for short periods, but to maintain normal homeostasis for an ...

Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. In most transplant regions 20-30% of patients on the waiting list for liver transplantation die without receiving an organ transplant or are delisted for disease progression. One strategy to increase the donor pool is the utilization of marginal grafts, such as fatty livers, grafts from older donors, or donation after cardiac death (DCD). The current preservation technique of cold static storage is only poorly tolerated by marginal livers resulting in significant organ damage. In addition, cold static organ storage does not allow graft assessment or repair prior to transplantation.
These shortcomings of cold static preservation have triggered an interest in warm perfused organ preservation to reduce cold ischemic injury, assess liver grafts during preservation, and explore the opportunity to repair marginal livers prior to transplantation. The optimal pressure and flow conditions, perfusion temperature, composition of the perfusion solution and the need for an oxygen carrier has been controversial in the past.
In spite of promising results in several animal studies, the complexity and the costs have prevented a broader clinical application so far. Recently, with enhanced technology and a better understanding of liver physiology during ex vivo perfusion the outcome of warm liver perfusion has improved and consistently good results can be achieved.
This paper will provide information about liver retrieval, storage techniques, and isolated liver perfusion in pigs. We will illustrate a) the requirements to ensure sufficient oxygen supply to the organ, b) technical considerations about the perfusion machine and the perfusion solution, and c) biochemical aspects of isolated organs.

Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts

Marginal grafts, such as fatty livers, grafts from older donors, or livers retrieved after cardiac death (DCD) tolerate conventional, cold static storage only poorly. We developed a novel model of subnormothermic ex vivo liver perfusion for preservation, assessment, and repair of marginal liver grafts prior to transplantation.

טכניקה של Subnormothermic<em&gt; Ex Vivo</em&gt; הכבד זלוף לאחסון, ההערכה, ותיקון שתלי כבד שולי

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. In most transplant regions 20-30% of patients on the waiting list for ...

Mouse Kidney Transplantation: Models of Allograft Rejection

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely replicates both the technical and pathological processes that occur in human renal transplantation. Although mouse models of allogeneic rejection in organs other than the kidney exist, and are more technically feasible, there is evidence that different organs elicit disparate rejection modes and dynamics, for instance the time course of rejection in cardiac and renal allograft differs significantly in certain strain combinations. This model is an attractive tool for many reasons despite its technical challenges. As inbred mouse strain haplotypes are well characterized it is possible to choose donor and recipient combinations to model acute allograft rejection by transplanting across MHC class I and II loci. Conversely by transplanting between strains with similar haplotypes a chronic process can be elicited were the allograft kidney develops interstitial fibrosis and tubular atrophy. We have modified the surgical technique to reduce operating time and improve ease of surgery, however a learning curve still needs to be overcome in order to faithfully replicate the model. This study will provide key points in the surgical procedure and aid the process of establishing this technique.

Here, we present a protocol to study the immunology of rejection. The surgical model presented reports a short operating time and a concise technique. Depending on the donor-recipient strain combination, the transplanted kidney may develop acute cellular rejection or chronic allograft damage, defined by interstitial fibrosis and tubular atrophy.

השתלת כליה עכבר: מודלים של דחיית השתל

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely ...

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

In contrast to conventional static cold preservation (0-4 &#176;C), ex situ machine perfusion may provide better preservation of donor livers. Continuous perfusion of organs provides the opportunity to improve organ quality and allows ex situ viability assessment of donor livers prior to transplantation. This video article provides a step by step protocol for ex situ normothermic machine perfusion (37 &#176;C) of human donor livers using a device that provides a pressure and temperature controlled pulsatile perfusion of the hepatic artery and continuous perfusion of the portal vein. The perfusion fluid is oxygenated by two hollow fiber membrane oxygenators and the temperature can be regulated between 10 &#176;C and 37 &#176;C. During perfusion, the metabolic activity of the liver as well as the degree of injury can be assessed by biochemical analysis of samples taken from the perfusion fluid. Machine perfusion is a very promising tool to increase the number of livers that are suitable for transplantation.

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

Here we present a protocol describing oxygenated ex situ machine perfusion of donor liver grafts. This article contains a step by step protocol to procure and prepare the liver graft for machine perfusion, prepare the perfusion fluid, prime the perfusion machine and perform oxygenated normothermic machine perfusion of the liver graft.

באתרו לשעבר Normothermic מכונת זלוף של כבדים תורמים

In contrast to conventional static cold preservation (0-4 &#176;C), ex situ machine perfusion may provide better preservation of donor livers. Continuous ...

Murine Kidney Transplant Technique

The first mouse kidney transplant technique was published in 19731 by the Russell laboratory. Although it took some years for other labs to become proficient in and utilize this technique, it is now widely used by many laboratories around the world. A significant refinement to the original technique using the donor aorta to form the arterial anastomosis instead of the renal artery was developed and reported in 1993 by Kalina and Mottram 2 with a further advancement coming from the same laboratory in 1999 3. While one can become proficient in this model, a search of the literature reveals that many labs still experience a high proportion of graft loss due to arterial thrombosis. We describe here a technique that was devised in our laboratory that vastly reduces the arterial thrombus reported by others 4,5. This is achieved by forming a heel-and-toe cuff of the donor infra-renal aorta that facilitates a larger anastomosis and straighter blood flow into the kidney.

The goal of this manuscript is to describe the steps required to perform a kidney transplant in a mouse, paying particular attention to the details of the arterial anastomosis.

טכניקת השתלת כליה בעכברים

The first mouse kidney transplant technique was published in 19731 by the Russell laboratory. Although it took some years for other labs to become ...

Intravascular Delivery of Biologics to the Rat Kidney

The renal microvascular compartment plays an important role in the progression of kidney disease and hypertension, leading to the development of End Stage Renal Disease with high risk of death for cardiovascular events. Moreover, recent clinical studies have shown that renovascular structure and function may have a great impact on functional renal recovery after surgery. Here, we describe a protocol for the delivery of drugs into the renal artery of rats. This procedure offers significant advantages over the frequently used systemic administration as it may allow a more localized therapeutic effect. In addition, the use of rodents in pharmacodynamic analysis of preclinical studies may be cost effective, paving the way for the design of translational experiments in larger animal models. Using this technique, infusion of rat recombinant Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF) protein in rats has induced activation of VEGF signaling as shown by increased expression of FLK1, pAKT/AKT, pERK/ERK. In summary, we established a protocol for the intrarenal delivery of drugs in rats, which is simple and highly reproducible.

The administration of drugs for recovery of kidney function requires control of the localization and distribution of the therapeutic compound. Here, we describe in detail a simple technique for intrarenal delivery of drugs in rats. This procedure may be easily performed with no mortality and high reproducibility.

משלוח intravascular של מוצרים ביולוגיים לכליה עכברוש

The renal microvascular compartment plays an important role in the progression of kidney disease and hypertension, leading to the development of End Stage ...

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, normothermic ex vivo liver perfusion (NEVLP) has been introduced as a method to evaluate and modify organ function. NEVLP has many advantages in comparison to hypothermic and subnormothermic perfusion including reduced preservation injury, restoration of normal organ function under physiologic conditions, assessment of organ performance, and as a platform for organ repair, remodeling, and modification. Both murine and porcine NEVLP models have been described. We demonstrate a rat model of NEVLP and use this model to show one of its important applications &#8212; the use of a therapeutic molecule added to liver perfusate. Catalase is an endogenous reactive oxygen species (ROS) scavenger and has been demonstrated to decrease ischemia-reperfusion in the eye, brain, and lung. Pegylation has been shown to target catalase to the endothelium. Here, we added pegylated-catalase (PEG-CAT) to the base perfusate and demonstrated its ability to mitigate liver preservation injury. An advantage of our rodent NEVLP model is that it is inexpensive in comparison to larger animal models. A limitation of this study is that it does not currently include post-perfusion liver transplantation. Therefore, prediction of the function of the organ post-transplantation cannot be made with certainty. However, the rat liver transplant model is well established and certainly could be used in conjunction with this model. In conclusion, we have demonstrated an inexpensive, simple, easily replicable NEVLP model using rats. Applications of this model can include testing novel perfusates and perfusate additives, testing software designed for organ evaluation, and experiments designed to repair organs.

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

There is a significant liver donor shortage, and criteria for liver donors have been expanded. Normothermic ex vivo liver perfusion (NEVLP) has been developed to evaluate and modify organ function. This study demonstrates a rat model of NEVLP and tests the ability of pegylated-catalase, to mitigate liver preservation injury.

מודל בעלי חיים קטנים של זלוף הכבד Normothermic Vivo לשעבר

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, ...

Optical Clearing and Imaging of Immunolabeled Kidney Tissue

Optical clearing techniques render tissue transparent by equilibrating the refractive index throughout a sample for subsequent three-dimensional (3-D) imaging. They have received great attention in all research areas for the potential to analyze microscopic multicellular structures that extend over macroscopic distances. Given that kidney tubules, vasculature, nerves, and glomeruli extend in many directions, which have been only partially captured by traditional two-dimensional techniques so far, tissue clearing also opened up many new areas of kidney research. The list of optical clearing methods is rapidly growing, but it remains difficult for beginners in this field to choose the best method for a given research question. Provided here is a simple method that combines antibody labeling of thick mouse kidney slices; optical clearing with cheap, non-toxic and ready-to-use chemical ethyl cinnamate; and confocal imaging. This protocol describes how to perfuse kidneys and use an antigen-retrieval step to increase antibody- binding without requiring specialized equipment. Its application is presented in imaging different multicellular structures within the kidney, and how to troubleshoot poor antibody penetration into tissue is addressed. We also discuss the potential difficulties of imaging endogenous fluorophores and acquiring very large samples and how to overcome them. This simple protocol provides an easy-to-setup and comprehensive tool to study tissue in three dimensions.

The combination of antibody labeling, optical clearing, and advanced light microscopy allows three-dimensional analysis of complete structures or organs. Described here is a simple method to combine immunolabeling of thick kidney slices, optical clearing with ethyl cinnamate, and confocal imaging that enables visualization and quantification of three-dimensional kidney structures.

ניקוי אופטי ודימות רקמות כליות של אימונוולילד

Optical clearing techniques render tissue transparent by equilibrating the refractive index throughout a sample for subsequent three-dimensional (3-D) ...

Orthotopic Kidney Auto-Transplantation in a Porcine Model Using 24 Hours Organ Preservation And Continuous Telemetry

In the present era of organ transplantation with critical organ shortage, various strategies are employed to expand the pool of available allografts for kidney transplantation (KT). Even though, the use of allografts from extended criteria donors (ECD) could partially ease the shortage of organ donors, ECD organs carry a potentially higher risk for inferior outcomes and postoperative complications. Dynamic organ preservation techniques, modulation of ischemia-reperfusion and preservation injury, and allograft therapies are in the spotlight of scientific interest in an effort to improve allograft utilization and patient outcomes in KT.
Preclinical animal experiments are playing an essential role in translational research, especially in the medical device and drug development. The major advantage of the porcine orthotopic auto-transplantation model over ex vivo or small animal studies lies within the surgical-anatomical and physiological similarities to the clinical setting. This allows the investigation of new therapeutic methods and techniques and ensures a facilitated clinical translation of the findings. This protocol provides a comprehensive and problem-oriented description of the porcine orthotopic kidney auto-transplantation model, using a preservation time of 24 hours and telemetry monitoring. The combination of sophisticated surgical techniques with highly standardized and state-of-the-art methods of anesthesia, animal housing, perioperative follow up, and monitoring ensure the reproducibility and success of this model.

Large animal models play an essential role in preclinical transplantation research. Due to its similarities to the clinical setup, the porcine model of orthotopic kidney auto-transplantation described in this article provides an excellent in vivo setting for the testing of organ preservation techniques and therapeutic interventions.

השתלת כליה אורתוטופית במודל פורצין באמצעות 24 שעות שימור איברים וטלמטריה רציפה

In the present era of organ transplantation with critical organ shortage, various strategies are employed to expand the pool of available allografts for ...

Digital Home-Monitoring of Patients after Kidney Transplantation: The MACCS Platform

The MACCS (Medical Assistant for Chronic Care Service) platform enables secure sharing of key medical information between patients after kidney transplantation and physicians. Patients provide information such as vital signs, well-being, and medication intake via smartphone apps. The information is transferred directly into a database and electronic health record at the kidney transplant center, which is used for routine patient care and research. Physicians can send an updated medication plan and laboratory data directly to the patient app via this secure platform. Other features of the app are medical messages and video consultations. Consequently, the patient is better-informed, and self-management is facilitated. In addition, the transplant center and the patient's local nephrologist automatically exchange notes, medical reports, laboratory values, and medication data via the platform. A telemedicine team reviews all incoming data on a dashboard and takes action, if necessary. Tools to identify patients at risk for complications are under development. The platform exchanges data via a standardized secure interface (Health Level 7 (HL7), Fast Healthcare Interoperability Resources (FHIR)). The standardized data exchange based on HL7 FHIR guarantees interoperability with other eHealth solutions and allows rapid scalability to other chronic diseases. The underlying data protection concept is in concordance with the latest European General Data Protection Regulation. Enrollment started in February 2020, and 131 kidney transplant recipients are actively participating as of July 2020. Two large German health insurance companies are currently funding the telemedicine services of the project. The deployment for other chronic kidney diseases and solid organ transplant recipients is planned. In conclusion, the platform is designed to enable home monitoring and automatic data exchange, empower patients, reduce hospitalizations, and improve adherence, and outcomes after kidney transplantation.

The MACCS platform&#160;is a comprehensive telemedicine concept aiming at better outcomes after kidney transplantation by sharing key medical information between patients and physicians. A telemedicine team reviews incoming data to detect potential complications and to improve adherence in kidney transplant recipients to achieve better long-term outcomes.