نود أن نشكر الموظفين الإداريين من CIBIO (جامعة ترينتو) ومعهد علم الأعصاب CNR للحصول على المساعدة. ويدعم جيوفاني بروفنزانو التي كتبها زمالة ما بعد الدكتوراه من FONDAZIONE فيرونيسى (ميلان الايطالي). وقد تم تمويل هذا العمل من قبل الوزارة الإيطالية للجامعة والبحث (PRIN 2008 منحة # 200894SYW2_002 وPRIN 2010-2011 منحة # 2010N8PBAA_002 إلى YB)، جامعة ترينتو (CIBIO بدء منحة لYB) ومؤسسة تيليثون (منحة # GGP13034 ل YB).

وأجريت جميع التجارب بما يتفق مع توجيهات الاتحاد الأوروبي 2010/63 / الاتحاد الأوروبي وتمت الموافقة من قبل وزارة الصحة الإيطالية. 1. رعاية الحيوان والإسكان والعلاج <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أداء جميع البروتوكولات التجريبية باستخدام الفئران وفقا للمبادئ التوجيهية للرعاية الحيوان المؤسسية المعنية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحفاظ على الحيوانات في 12 ساعة ضوء / دورة الظلام مع الغذاء والماء بالمال وبالشهرة أيضا الإعلانية المتاحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بيت الفئران في مجموعات من 2-4، في أقفاص البولي الماوس من الحجم العادي مع نشارة الخشب والمواد الفراش أسبوعيا تغيرت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام العمر والفئران يقابل الجنس، لأن التعرض للمرض يمكن أن تختلف مع تقدم العمر والجنس في نماذج الفئران مختلفة من الاضطرابات العصبية النمائية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اختيار عدد مناسب من الحيوانات للوصول إلى دلالة إحصائية (ما لا يقل عن 10 الفئران في التركيب الوراثي للدراسة السلوكية و4 الفئران في التركيب الوراثي للتجربة المناعية). </li></ol> 2. موريس المياه المتاهة (MWM) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام دبابات التعميم (قطرها 100 سم والطول 50 سم). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع بعض الإشارات البصرية على غرفة المقسمات حول الخزان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع منصة قطرها 10 سم في خزان في موقع ثابت في قلب واحدة من أربعة أجزاء وهمية. الحفاظ على منصة مخفية في نفس الربع لجميع المحاكمات في جميع الدورات التدريبية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملء حوض السباحة مع ماء الصنبور حتى النظام الأساسي هو 1 سم فوق سطح الماء. وينبغي أن يكون توازن درجة حرارة الماء وثيق إلى 22 ° C؛ هذه الخطوة قد تستغرق عدة ساعات. إضافة الماء الساخن لتقصير الوقت اللازم للتوازن درجة حرارة الماء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة حوالي 1.5-2 لتر من الطلاء الأبيض، وغير سامة لجعل المياه مبهمة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المسار اكتساب الداخلي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انشاء نظام تتبع MWM مع كاميرات CCD القياسية ومجالس الفيديو. اختيار نظام الفيديو تتبع لرصد وتحليل العديد من المتغيرات مثل طول الطريق، هيئة الأوراق الماليةالمؤسسة العامة الكمون، والوقت الذي يقضيه في كل رباعي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقسيم الساحة في أربعة أجزاء وضبط إعدادات الكشف للتأكد من النقيض الأمثل بين الحيوانات والخلفية لتتبع الحية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد منطقة المنصة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعيين وقت المحاكمة الحد الأقصى إلى 60 ثانية. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> MWM اختبار <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل الاختبار السلوك، تسمح الفئران فترة التكيف من 20-25 دقيقة في منطقة حيث أنها لا تستطيع رؤية حمام السباحة أو العظة المكانية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدريب كل فأر لمدة 9 أيام (تجربتان متتالية يوميا، مع 20-30 دقيقة فاصل بينهما). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التبديل على جهاز الكمبيوتر والكاميرا والبدء في برنامج نظام تتبع الفيديو. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خذ الماوس بواسطة ذيله ووضعه في الماء، مع رئيس وأشار تجاه جانب حمام السباحة، بدءا من واحدة من المواقف بداية الأربعة (الشمال والجنوب والشرق والغرب). لكل الماوس، وينبغي أن يكون موضع بداية مختلفة وpseudorandomized عبر التجارب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح للسباحة الماوس والبحث عن platfاسندت لمدة أقصاها 60 ثانية. عندما يصل الحيوان المنصة، يسمح لها بالبقاء على منصة لمدة 20 ثانية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا فشل الماوس لتحديد موقع منصة في ذلك الوقت، وتوجيه بلطف الماوس إلى منصة، وعقد من قبل ذيله والسماح لها بالبقاء هناك لمدة 20 ثانية. وبمجرد الانتهاء من الحيوانات كل التجربتين، يجف تشغيله مع منشفة وضعه مرة أخرى في قفص. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كل يوم من فترة التدريب، كرر نفس الإجراء (الخطوات 2.3.4-2.3.6). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء اختبار التحقيق في يوم 9 بعد درب التدريب الأخير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة منصة من التجمع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح للسباحة الماوس وابحث عن منصة لمدة أقصاها 60 ثانية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دوري، والتحقق من درجة حرارة الماء بحيث يجب أن يكون نفس (22 ° C) وتنظيف حوض السباحة. </li></ol></li></ol> 3. إعداد أقسام من perfused لحيوانات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التضحية الفئران في نهاية MWM. أربعة الفئران في التركيب الوراثي يجب تخدير قبل euthanizأوجه فقا للمبادئ التوجيهية المحلية والدولية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يروي الحيوان transcardially (قص الحق auriclewith مقص للسماح النزيف وإدخال قنية فراشة في البطين الأيسر ليروي) مع الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) لمدة 4-5 دقيقة، تليها 4٪ لامتصاص العرق في برنامج تلفزيوني لمدة 10-15 دقيقة 22. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشريح وبعد إصلاح العقول في 4٪ امتصاص العرق في 4 درجة مئوية لمدة لا تقل عن 12 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع العقول في 50 مل أنابيب البوليسترين المخروطية التي تحتوي على 15 مل من 0.02٪ أزيد الصوديوم في 0.1 M PBS وتخزينها في 4 درجات مئوية حتى المطلوبة للتشريح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع وإزالة المخيخ قبل vibratome القطع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الغراء الدماغ تستقيم مع موقع القطع، superglue به، على لوحة صاحب vibratome. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع الدماغ إلى 20-40 ميكرومتر أقسام الاكليلية سميكة، من أجل المسلسل على مدار الحصين الظهرية، على vibratome المناسب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع vibratome شرائح مع فرشاة الدهان ونقل إلى 24 لوحة متعددة أيضا تحتوي على 1 مل من 0.1 M PBS لكل بئر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> متجر أقسام قصيرة المدى في برنامج تلفزيوني أو على المدى الطويل في 0.02٪ أزيد الصوديوم في برنامج تلفزيوني في 4 درجات مئوية (الأنسجة يمكن أن تستخدم لمدة تصل إلى واحد). </li></ol> 4. المناعية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل 3-5 أقسام الحصين الظهرية لكل الماوس، في 24 لوحة متعددة جيدا تحتوي على 500 ميكرولتر من 0.1 M PBS لكل بئر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل المقاطع الواردة في كل بئر مع 500 ميكرولتر من 0.1 M PBS (5 دقائق، 3 مرات مع لطيف الهز). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إخماد النشاط البيروكسيداز الذاتية، التي يحتضنها قسم 1٪ H 2 O 2 في برنامج تلفزيوني لمدة 20 دقيقة مع الإثارة لطيف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل المقاطع في 0.1 M PBS مع الإثارة لطيف (3 × 5 دقائق). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Permeabilization من الأنسجة: احتضان المقاطع لمدة 5 دقائق في 0.2٪ تريتون X-100 في برنامج تلفزيوني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلال الخطوات المذكورة أعلاه (4.4، 4.5)، وجعل ما يكفي من عازلة تمنع (10٪ الماعز المصل و 0.1٪ تريتون-X100 في PBS) للتجربة برمتها (لكم رقمص أقسام × 100 ميكرولتر × 3 خطوات). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملاحظة: استخدام مصل من نفس النوع الذي صدر في آب الثانوي (مترافق لالبيوتين). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> منع غير محددة وملزمة من الأجسام المضادة، التي يحتضنها المقاطع في عرقلة العازلة (100 ميكرولتر / قسم) لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة (RT) مع الإثارة لطيف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان المقاطع في أب الأساسي (بيرك) المخفف في عرقلة العازلة، بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية، مع الإثارة لطيف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل المقاطع في 0.1 M PBS مع الإثارة لطيف (3 × 5 دقائق). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان مع أب الثانوي مترافق مع البيوتين (1: 250) المخفف في عرقلة العازلة (نفس المستخدمة في الخطوة 4.6) لمدة 1 ساعة على RT مع الإثارة لطيف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد ABC الكاشف في نفس الوقت، لأن أفيدين والبيوتين تتطلب على الأقل 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة إلى المجمع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد حجم المطلوب من كاشف ABC وفقا لبروتوكول الصانعين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل المقاطع في 0.1 M PBS مع الإثارة لطيف (3 × 5 دقائق). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Incubatأقسام ه لمدة 45 دقيقة في RT مع ABC الكاشف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل المقاطع في 0.1 M PBS مع الإثارة لطيف (3 × 5 دقائق). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد DAB حل العمل، ويجب أن يتم في كل خطوة تنطوي على DAB في غطاء الدخان كما DAB هو مادة مسرطنة وماسخة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل حل DAB إلى لوحة جديدة عن طريق التحويل من البلاستيك ماصة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أقسام مكان في لوحة تحتوي DAB حل وصفيحة دوامة ببطء العمل من جهة، للسماح الحد الأقصى للتعرض إلى أقسام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رصد رد فعل DAB على المجهر حتى تتطور إشارة كافية (2-5 دقيقة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وقف رد فعل على كثافة اللون المطلوب عن طريق غسل الأنسجة في 0.1 M PBS (3 × 5 دقائق). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام التبييض لتعطيل أي حل ما تبقى الركيزة DAB في غطاء الدخان ليلة وضحاها والتصرف فيها وفقا للمبادئ التوجيهية المختبر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أقسام جبل على الجيلاتين المغلفة الشرائح التي تطفو في برنامج تلفزيوني. ثم تجفيفها في درجة حرارة الغرفة على الأقل 3-4 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يذوى بالتسلسل المقاطع في 50٪، 70٪، 95٪والإيثانول بنسبة 100٪ لمدة 2 دقيقة لكل منهما، واضحة في 100٪ الزيلين لمدة 5 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ساترة باستخدام تصاعد المتوسطة وترك في غطاء الدخان لتجف بين عشية وضحاها. </li></ol> عدد 5. خلية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عدد الخلايا رفع معنوياته إيجابية، وينبغي تحليل 4:57 أقسام على مستوى الحصين الظهرية للحيوان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحصول على صور متعددة مشرق الميدان من كل قسم في 200X التكبير باستخدام مجهر المناسب، ومن ثم تجميعها باستخدام برامج معالجة الصور. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أداء عدد الخلايا في صور فسيفساء-تحويل شجار باستخدام البرمجيات الحرة يماغيج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عدد الخلايا رفع معنوياته الملون في طبقة الخلايا الحبيبية نقير وعلى مدى سنتين إلى ثلاث خانات عد من 100 × 100 ميكرون لكل منهما. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويتم التعبير عن الكثافة الخليوي وعدد من الخلايا المسمى في نافذة الفرز (100 × 100 ميكرون). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء تحليل إحصائي لتقييم فرق كبير بين الأنماط الجينية. ويمكن تحقيق ذلك مع تي الطالباختبار أو ANOVA تليها الاختبار اللاحق المناسب باستخدام البرمجيات التجارية. تعيين مستوى دلالة إحصائية عند P &lt;0.05. </li></ol>

<ol>
	<li>Castren, E., Elgersma, Y., Maffei, L., Hagerman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+neurodevelopmental+disorders+in+adulthood.">Treatment of neurodevelopmental disorders in adulthood.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 32, 14074-14079 (2012).</li><li>Ehninger, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversal+of+learning+deficits+in+a+Tsc2+/-+mouse+model+of+tuberous+sclerosis.">Reversal of learning deficits in a Tsc2+/- mouse model of tuberous sclerosis.</a> Nature medicine. 14, 843-848 (2008).</li><li>West, A. E., Greenberg, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+activity-regulated+gene+transcription+in+synapse+development+and+cognitive+function.">Neuronal activity-regulated gene transcription in synapse development and cognitive function.</a> Cold Spring Harbor perspectives in biology. 3, (2011).</li><li>Goorden, S. M., van Woerden, G. M., van der Weerd, L., Cheadle, J. P., Elgersma, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cognitive+deficits+in+Tsc1+/-+mice+in+the+absence+of+cerebral+lesions+and+seizures.">Cognitive deficits in Tsc1+/- mice in the absence of cerebral lesions and seizures.</a> Annals of neurology. 62, 648-655 (2007).</li><li>Cui, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurofibromin+regulation+of+ERK+signaling+modulates+GABA+release+and+learning.">Neurofibromin regulation of ERK signaling modulates GABA release and learning.</a> Cell. 135, 549-560 (2008).</li><li>Brielmaier, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autism-relevant+social+abnormalities+and+cognitive+deficits+in+engrailed-2+knockout+mice.">Autism-relevant social abnormalities and cognitive deficits in engrailed-2 knockout mice.</a> PloS one. 7, e40914 (2012).</li><li>Provenzano, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hippocampal+dysregulation+of+neurofibromin-dependent+pathways+is+associated+with+impaired+spatial+learning+in+engrailed+2+knock-out+mice.">Hippocampal dysregulation of neurofibromin-dependent pathways is associated with impaired spatial learning in engrailed 2 knock-out mice.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 34, 13281-13288 (2014).</li><li>Morgan, J. I., Curran, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stimulus-transcription+coupling+in+neurons:+role+of+cellular+immediate-early+genes.">Stimulus-transcription coupling in neurons: role of cellular immediate-early genes.</a> Trends in neurosciences. 12, 459-462 (1989).</li><li>Steward, O., Schuman, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+synthesis+at+synaptic+sites+on+dendrites.">Protein synthesis at synaptic sites on dendrites.</a> Annual review of neuroscience. 24, 299-325 (2001).</li><li>Gutmann, D. H., Parada, L. F., Silva, A. J., Ratner, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurofibromatosis+type+1:+modeling+CNS+dysfunction.">Neurofibromatosis type 1: modeling CNS dysfunction.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 32, 14087-14093 (2012).</li><li>Costa, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+for+the+learning+deficits+in+a+mouse+model+of+neurofibromatosis+type+1.">Mechanism for the learning deficits in a mouse model of neurofibromatosis type 1.</a> Nature. 415, 526-530 (2002).</li><li>Silva, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+for+the+learning+and+memory+deficits+associated+with+neurofibromatosis+type.">A mouse model for the learning and memory deficits associated with neurofibromatosis type.</a> I. Nature. 15, 281-284 (1997).</li><li>Morris, R. G., Garrud, P., Rawlins, J. N., O'Keefe, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Place+navigation+impaired+in+rats+with+hippocampal+lesions.">Place navigation impaired in rats with hippocampal lesions.</a> Nature. 297, 681-683 (1982).</li><li>Praag, H., Kempermann, G., Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Running+increases+cell+proliferation+and+neurogenesis+in+the+adult+mouse+dentate+gyrus.">Running increases cell proliferation and neurogenesis in the adult mouse dentate gyrus.</a> Nature. 2, 266-270 (1999).</li><li>Adams, J. P., Sweatt, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+psychology:+roles+for+the+ERK+MAP+kinase+cascade+in+memory.">Molecular psychology: roles for the ERK MAP kinase cascade in memory.</a> Annual review of pharmacology and toxicology. 42, 135-163 (2002).</li><li>Di Cristo, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Requirement+of+ERK+activation+for+visual+cortical+plasticity.">Requirement of ERK activation for visual cortical plasticity.</a> Science. 292, 2337-2340 (2001).</li><li>Satoh, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ERK2+contributes+to+the+control+of+social+behaviors+in+mice.">ERK2 contributes to the control of social behaviors in mice.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 31, 11953-11967 (2011).</li><li>Sgado, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+GABAergic+neurons+in+the+hippocampus+and+cerebral+cortex+of+Engrailed-2+null+mutant+mice:+implications+for+autism+spectrum+disorders.">Loss of GABAergic neurons in the hippocampus and cerebral cortex of Engrailed-2 null mutant mice: implications for autism spectrum disorders.</a> Experimental neurology. 247, 496-505 (2013).</li><li>Sgado, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptome+profiling+in+engrailed-2+mutant+mice+reveals+common+molecular+pathways+associated+with+autism+spectrum+disorders.">Transcriptome profiling in engrailed-2 mutant mice reveals common molecular pathways associated with autism spectrum disorders.</a> Molecular autism. 4, 51 (2013).</li><li>Cheh, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=En2+knockout+mice+display+neurobehavioral+and+neurochemical+alterations+relevant+to+autism+spectrum+disorder.">En2 knockout mice display neurobehavioral and neurochemical alterations relevant to autism spectrum disorder.</a> Brain research. 1116, 166-176 (2006).</li><li>Dawson, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+the+broader+phenotype+of+autism:+genetic,+brain,+and+behavioral+perspectives.">Defining the broader phenotype of autism: genetic, brain, and behavioral perspectives.</a> Development and psychopathology. 14, 581-611 (2002).</li><li>Gage, G. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+animal+perfusion+fixation+for+rodents.">Whole animal perfusion fixation for rodents.</a> J Vis Exp. (65), (2012).</li><li>Maei, H. R., Zaslavsky, K., Teixeira, C. M., Frankland, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+is+the+Most+Sensitive+Measure+of+Water+Maze+Probe+Test+Performance.">What is the Most Sensitive Measure of Water Maze Probe Test Performance.</a> Frontiers in integrative neuroscience. 3, 4 (2009).</li><li>Guzowski, J. F., Setlow, B., Wagner, E. K., McGaugh, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experience-dependent+gene+expression+in+the+rat+hippocampus+after+spatial+learning:+a+comparison+of+the+immediate-early+genes+Arc,+c-fos+and+zif268.">Experience-dependent gene expression in the rat hippocampus after spatial learning: a comparison of the immediate-early genes Arc, c-fos and zif268.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 21, 5089-5098 (2001).</li></ol>

الكتاب ليس لديهم ما يكشف

هنا، ونحن نقدم بروتوكول المناعية رفع معنوياته للكشف عن تنشيط الخلايا العصبية التالية MWM في En2 - / - الفئران، نموذج الفأر من الاضطرابات العصبية النمائية. تم الكشف عن انخفاض مستويات رفع معنوياته في الحقل الفرعي CA3 من En2 - / - المسوخ مقارنة WT. بشكل مختلف عن ما لوحظ...

وتشمل الاضطرابات العصبية النمائية مجموعة واسعة وغير متجانسة من الاضطرابات مثل متلازمة داون، متلازمة X الهش (FXS)، متلازمة ريت، الورم العصبي الليفي، التصلب درني وASD، والتي تشعر بالانزعاج تطوير ونضوج الجهاز العصبي المركزي (CNS) في وقت مبكر خلال فترة ما قبل الولادة 1. ويمكن لهذه الاختلالات التنموية الدماغ يسبب عميقة، تأثير مدى الحياة على وظيفة الحركة واللغة والتعلم وعملية الذاكرة. هناك عدد هائل من العوامل الوراثية والبيئية قد تورطت في التسبب في اضطرابات النمو العصبي خلال السنوات القليلة الماضية 2،3. حتى لو الآليات الجزيئية الكامنة وراء النمط الظاهري السريرية لا تزال مجهولة، فإن النتائج المذكورة أعلاه قد سمحت تطوير عدة نماذج الماوس من هذه الاضطرابات. وقد تم تحديد العجز في التعلم والذاكرة في عدد من هذه النماذج الماوس مثل TSC1 +/-، TSC2 +/-،NF1 +/- وEn2 - / - الفئران 2،4-7. تحديا هاما في مجال اضطرابات النمو العصبي هو تحديد العمليات الخلوية والجزيئية الكامنة والذاكرة والتعلم اختلال وظيفي. يمكن مسارات الإشارات اختيار تفعيلها خلال التعلم أو الذاكرة لحث على نسخ من جينات معينة وتؤدي في نهاية المطاف إلى دي نوفو تخليق البروتين. وبفعل الجينات المباشرة في وقت مبكر (IEGs) تفعيل والتي تعتمد على البروتين التعديلات متشابك بسرعة في الخلايا العصبية في الدماغ ردا على نشاط الخلايا العصبية والتدريب السلوكي 8،9. وقد ارتبطت العجز في مسارات الإشارات التي تنطوي على neurofibromin مع ضعف في التعلم في الاضطرابات العصبية النمائية. Neurofibromin هو نتاج الجين NF1، الذي يسبب نوع الورم العصبي الليفي 1، متلازمة وراثية معقدة تتميز أورام الجهاز العصبي، والتأخير السلوكية والحركية، وديسا المعرفي الطفرةbilities 10. متخالف الفئران لNF1 حذف يقتصر على الخلايا العصبية المثبطة تظهر عجز في المرحلة المبكرة من التقوية على المدى الطويل (LTP)، وكذلك التعلم المكاني للخطر في MWM 5،11،12. ومن المثير للاهتمام، ونقص NF1 في هذا النموذج الماوس يؤدي إلى تفعيل أكثر من رأس الإشارات في interneurons المثبطة أثناء التعلم، مما أدى إلى زيادة الفسفرة ERK وأخيرا في تعزيز الشاذ الإفراج GABA من هذه الخلايا العصبية 5. وبناء على هذه النتائج، والتصور من نشاط الخلايا العصبية بعد المهام السلوكية يمثل وسيلة لإعادة بناء الدوائر المحددة المعنية في الأمراض العصبية النمائية. بروتوكول المناعية الموصوفة هنا يهدف إلى تقييم وقياس مستويات ERK الفسفرة الحصين التالية MWM في نموذج الفأر ASD مع العجز المعرفي. ويستخدم على نطاق واسع MWM للتحقيق الحصين التعلم المكاني يعتمد والذاكرة في القوارض 13،14 </sتصل&gt;. قررنا استخدام ERK الفسفرة كما قراءات الجزيئية التعلم قرن آمون التي تعتمد على المهمة، منذ ظهر ERK أن يكون لها دورا أساسيا في التعلم والذاكرة تشكيل 15. وعلاوة على ذلك، فإن مسار ERK ضروري لتعتمد على خبرة ليونة في القشرة البصرية تطوير 16. أخيرا، الفئران التي تفتقر إلى واحد من اثنين ERK وإيسفورمس (ERK2) في المعرض CNS ملحوظ الشذوذ في السلوك المعرفي والعاطفي والاجتماعي 17، مشيرا إلى أن ERK إشارات قد تلعب دورا حاسما في التسبب في اضطرابات النمو العصبي مثل ASD. كنا Engrailed 2 بالضربة القاضية (En2 - / -) الفئران كنموذج للاضطرابات النمو العصبي. En2 - / - أظهرت الفئران الخصائص التشريحية والسلوكية &quot;ASD تشبه&quot;، بما في ذلك فقدان interneurons الدماغ الأمامي 18، خفضت التعبير عن الجينات المرتبطة ASD-19، وانخفضت مؤانسة، والمرونة الإدراكية ضعف 6،7،20. learni المكانينانوغرام وعيوب الذاكرة، مثل تلك الحالات المكتشفة في MWM، هي قوية خصوصا في En2 - / - الفئران 6،7 و قد تكون ذات صلة إدراكيا لوحظت في مرضى ASD 21. وعلاوة على ذلك، أظهرنا أن التعلم المكاني ضعف في MWM يرتبط مع انخفاض التعبير neurofibromin وزيادة مستويات رفع معنوياته في نقير En2 - / - الفئران البالغة 7. هنا نقدم بروتوكول مفصلة لتوصيف المناعى لرفع معنوياته بعد MWM في هذا النموذج الماوس ASD.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>EthoVision XT 8</td>
			<td>Noldus Information Technology</td>
			<td></td>
			<td>This software platform is not a requirement &#8211; there are many other behavioral softwares on the market.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tempera Paint</td>
			<td>Giotto - Fila Group Company</td>
			<td></td>
			<td>White and liquid, non toxic. Used to prepare opaque water in the Morris water maze.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vibratome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>VT1200</td>
			<td>Equivalent models from other companies can be used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 well plate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>CLS3524</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100% ethanol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A406-20</td>
			<td>Used to make ethanol gradient for dehydration prior to slide mounting.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>VWR</td>
			<td>66004-950</td>
			<td>Toxic - to be used under hood. Change xylene every month depending on use.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Azide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>&#160;S2002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P3813-10PAK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ddH2O</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma&#160;</td>
			<td>T-8787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Hydrogen Peroxide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H1009-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Goat Serum</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>G9023-10ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ABC kit Vectastain&#160;</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>PK-6100</td>
			<td>Add in a volume of 5 ml of PBS 2 drops of reagent A, mix and then add 2 drops of reagent B and mix.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAB peroxidase substrate</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>SK-4100</td>
			<td>Add in a volume of 5 ml ddH2O: 2 drops of buffer stock solution and mix; 4 drops of DAB and mix; 2 drops of H2O2 and mix.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pERK antibody</td>
			<td>Cell Signaling Technologies&#160;</td>
			<td>4370</td>
			<td>Dilution 1:500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotinylated Goat Anti-Rabbit IgG Antibody</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>BA-1000&#160;</td>
			<td>Dilution 1:250</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SuperFrost Slides&#160;</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td>1879</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslips</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>12-548-B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPX</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>317616</td>
			<td>Mounting medium for slides. Equivalent mounting medium can be used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>&#160;Zeiss&#160;</td>
			<td>Axio Imager.M2</td>
			<td>Equivalent microscope can be used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adobe Photoshop</td>
			<td>Adobe Systems, San Jose, CA</td>
			<td></td>
			<td>To assemble images.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image J software</td>
			<td>National Institute of Health</td>
			<td></td>
			<td>Free software can be downloaded at http://rsb.info.nih.gov/ij/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SigmaPlot 11.0</td>
			<td>Systat Software Inc. (USA)</td>
			<td></td>
			<td>Equivalent softwares for statistical analysis can be used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prism 6</td>
			<td>GraphPad Software, Inc. (La Jolla, CA, USA)</td>
			<td></td>
			<td>Equivalent softwares for statistical analysis can be used.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

immunohistochemical visualization of hippocampal neuron activity after spatial learning in a mouse model of neurodevelopmental disorders

تحريض فسفرته كيناز الخلية التنظيم (بيرك) هو قراءات الجزيئية الموثوقة التي تعتمد على التعلم تنشيط الخلايا العصبية. هنا، نحن تصف بروتوكول المناعية رفع معنوياته لدراسة الملف الشخصى تنشيط الخلايا العصبية قرن آمون بعد التعرض لمهمة التعلم المكاني في نموذج الفأر تتميز العجز المعرفي من أصل النمو العصبي. على وجه التحديد، وكنا المناعية رفع معنوياته لدراسة تفعيل الخلايا العصبية التالية موريس المياه متاهة (MWM، وهي مهمة التعلم المعتمد على الحصين الكلاسيكية) في Engrailed-2 بالضربة القاضية (En2 - / -) الفئران، وهذا نموذج من اضطرابات طيف التوحد (ASD). بالمقارنة مع النوع البري (WT) الضوابط، En2 - / - أظهرت الفئران عجز التعلم المكاني كبيرة في MWM. بعد MWM، تم الكشف عن اختلافات كبيرة في عدد الخلايا العصبية رفع معنوياته إيجابية في الحقول الفرعية الحصين محددة من En2 - / - الفئران، بالمقارنة مع الحيوانات WT. وبالتالي، يمكن لدينا بروتوكول كشف بقوة الاختلافات فيالخلايا العصبية رفع معنوياته الإيجابية المرتبطة ضعف التعلم المعتمد على الحصين في نموذج الفأر من ASD. بشكل أعم، لدينا بروتوكول يمكن تطبيقها على التحقيق في الملف الشخصى تفعيل الخلايا العصبية قرن آمون في كلا النموذجين الماوس وراثية أو الدوائية تتميز العجز المعرفي.

وقد تم تصميم بروتوكول صفها هنا للتصور، من خلال المناعية، والتعبير عن علامة معينة من نشاط الخلايا العصبية الحصين بعد MWM في نموذج الفأر من الاضطرابات العصبية النمائية. وقد تم نقل كل البيانات التجريبية المبينة في هذا القانون من عملنا مؤخرا 7. استخدمت الحصول عليها ?...

Watch this Scientific Journal Video about Immunohistochemical Visualization of Hippocampal Neuron Activity After Spatial Learning in a Mouse Model of Neurodevelopmental Disorders at JoVE.com

Immunohistochemical Visualization of Hippocampal Neuron Activity After Spatial Learning in a Mouse Model of Neurodevelopmental Disorders

وصفنا بروتوكول المناعية لدراسة الملف الشخصى تنشيط الخلايا العصبية قرن آمون بعد التعرض لمهمة التعلم المكاني في نموذج الفأر تتميز العجز المعرفي من أصل النمو العصبي. ويمكن تطبيق هذا البروتوكول لكلا النموذجين الماوس وراثية أو الدوائية تتميز العجز المعرفي.

التصور المناعى من الحصين العصبية آخر بعد المكانية التعلم في نموذج الفأر من الاضطرابات العصبية النمائية

Induction of phosphorylated extracellular-regulated kinase (pERK) is a reliable molecular readout of learning-dependent neuronal activation. Here, we ...

immunohistochemical-visualization-hippocampal-neuron-activity-after

Research

JoVE Journal

Neuroscience

11.2K Views.  University of Trento.  وصفنا بروتوكول المناعية لدراسة الملف الشخصى تنشيط الخلايا العصبية قرن آمون بعد التعرض لمهمة التعلم المكاني في نموذج الفأر تتميز العجز المعرفي من أصل النمو العصبي. ويمكن تطبيق هذا البروتوكول لكلا النموذجين الماوس وراثية أو الدوائية تتميز...

Video: Immunohistochemical Visualization of Hippocampal Neuron Activity After Spatial Learning in a Mouse Model of Neurodevelopmental Disorders

Fluorescence Recovery After Photobleaching (FRAP) of Fluorescence Tagged Proteins in Dendritic Spines of Cultured Hippocampal Neurons

FRAP has been used to quantify the mobility of GFP-tagged proteins. Using a strong excitation laser, the fluorescence of a GFP-tagged protein is bleached in the region of interest. The fluorescence of the region recovers when the unbleached GFP-tagged protein from outside of the region diffuses into the region of interest. The mobility of the protein is then analyzed by measuring the fluorescence recovery rate. This technique could be used to characterize protein mobility and turnover rate.
In this study, we express the (enhanced green fluorescent protein) EGFP vector in cultured hippocampal neurons. Using the Zeiss 710 confocal microscope, we photobleach the fluorescence signal of the GFP protein in a single spine, and then take time lapse images to record the fluorescence recovery after photobleaching. Finally, we estimate the percentage of mobile and immobile fractions of the GFP in spines, by analyzing the imaging data using ImageJ and Graphpad softwares.
This FRAP protocol shows how to perform a basic FRAP experiment as well as how to analyze the data.

Fluorescence Recovery After Photobleaching FRAP of Fluorescence Tagged Proteins in Dendritic Spines of Cultured Hippocampal Neurons

FRAP has been used to quantify the mobility of Green Fluorescence Protein (GFP)-tagged proteins in cultured cells. We examined the mobile/immobile fractions of the GFP by analyzing the fluorescence recovery percentage after photobleaching. In this study, FRAP was performed at spines of hippocampal neurons.

مضان الانتعاش بعد Photobleaching (FRAP) من البروتينات المرتبطة دلاليا الإسفار في العمود الفقري شجيري الخلايا العصبية الحصين مثقف

FRAP has been used to quantify the mobility of GFP-tagged proteins. Using a strong excitation laser, the fluorescence of a GFP-tagged protein is bleached ...

Using MazeSuite and Functional Near Infrared Spectroscopy to Study Learning in Spatial Navigation

MazeSuite is a complete toolset to prepare, present and analyze navigational and spatial experiments1. MazeSuite can be used to design and edit adapted virtual 3D environments, track a participants' behavioral performance within the virtual environment and synchronize with external devices for physiological and neuroimaging measures, including electroencephalogram and eye tracking.
Functional near-infrared spectroscopy (fNIR) is an optical brain imaging technique that enables continuous, noninvasive, and portable monitoring of changes in cerebral blood oxygenation related to human brain functions2-7. Over the last decade fNIR is used to effectively monitor cognitive tasks such as attention, working memory and problem solving7-11. fNIR can be implemented in the form of a wearable and minimally intrusive device; it has the capacity to monitor brain activity in ecologically valid environments. 
Cognitive functions assessed through task performance involve patterns of brain activation of the prefrontal cortex (PFC) that vary from the initial novel task performance, after practice and during retention12. Using positron emission tomography (PET), Van Horn and colleagues found that regional cerebral blood flow was activated in the right frontal lobe during the encoding (i.e., initial na&iuml;ve performance) of spatial navigation of virtual mazes while there was little to no activation of the frontal regions after practice and during retention tests. Furthermore, the effects of contextual interference, a learning phenomenon related to organization of practice, are evident when individuals acquire multiple tasks under different practice schedules13,14. High contextual interference (random practice schedule) is created when the tasks to be learned are presented in a non-sequential, unpredictable order. Low contextual interference (blocked practice schedule) is created when the tasks to be learned are presented in a predictable order.
Our goal here is twofold: first to illustrate the experimental protocol design process and the use of MazeSuite, and second, to demonstrate the setup and deployment of the fNIR brain activity monitoring system using Cognitive Optical Brain Imaging (COBI) Studio software15. To illustrate our goals, a subsample from a study is reported to show the use of both MazeSuite and COBI Studio in a single experiment. The study involves the assessment of cognitive activity of the PFC during the acquisition and learning of computer maze tasks for blocked and random orders. Two right-handed adults (one male, one female) performed 315 acquisition, 30 retention and 20 transfer trials across four days. Design, implementation, data acquisition and analysis phases of the study were explained with the intention to provide a guideline for future studies.

MazeSuite is a complete toolset to prepare, present and analyze navigational and spatial experiments. Functional near-infrared spectroscopy (fNIR) is an optical brain imaging technique that enables noninvasive and portable monitoring of cerebral blood oxygenation changes. This paper summarizes collective use of MazeSuite and fNIR within a cognitive processing learning paradigm.

باستخدام MazeSuite والوظيفية الأدنى مطياف الأشعة تحت الحمراء لدراسة التعلم في الملاحة المكانية

MazeSuite is a complete toolset to prepare, present and analyze navigational and spatial experiments1. MazeSuite can be used to design and edit adapted ...

Hippocampal Insulin Microinjection and In vivo Microdialysis During Spatial Memory Testing

Glucose metabolism is a useful marker for local neural activity, forming the basis of methods such as 2-deoxyglucose and functional magnetic resonance imaging. However, use of such methods in animal models requires anesthesia and hence both alters the brain state and prevents behavioral measures. An alternative method is the use of in vivo microdialysis to take continuous measurement of brain extracellular fluid concentrations of glucose, lactate, and related metabolites in awake, unrestrained animals. This technique is especially useful when combined with tasks designed to rely on specific brain regions and/or acute pharmacological manipulation; for example, hippocampal measurements during a spatial working memory task (spontaneous alternation) show a dip in extracellular glucose and rise in lactate that are suggestive of enhanced glycolysis1-3,4-5, and intrahippocampal insulin administration both improves memory and increases hippocampal glycolysis6. Substances such as insulin can be delivered to the hippocampus via the same microdialysis probe used to measure metabolites. The use of spontaneous alternation as a measure of hippocampal function is designed to avoid any confound from stressful motivators (e.g. footshock), restraint, or rewards (e.g. food), all of which can alter both task performance and metabolism; this task also provides a measure of motor activity that permits control for nonspecific effects of treatment. Combined, these methods permit direct measurement of the neurochemical and metabolic variables regulating behavior.

Hippocampal Insulin Microinjection and In vivo Microdialysis During Spatial Memory Testing

Modulation of hippocampally-dependent spatial working memory by direct intrahippocampal microinjection, accompanied and followed by in vivo microdialysis for metabolites in conscious, behaving animals.

الحصين حقن مكروي الأنسولين و<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; Microdialysis أثناء اختبار الذاكرة المكانية

Glucose metabolism is a useful marker for local neural activity, forming the basis of methods such as 2-deoxyglucose and functional magnetic resonance ...

Quantitative Analysis of Climbing Defects in a Drosophila Model of Neurodegenerative Disorders

Locomotive defects resulting from neurodegenerative disorders can be a late onset symptom of disease, following years of subclinical degeneration, and thus current therapeutic treatment strategies are not curative. Through the use of whole exome sequencing, an increasing number of genes have been identified to play a role in human locomotion. Despite identifying these genes, it is not known how these genes are crucial to normal locomotive functioning. Therefore, a reliable assay, which utilizes model organisms to elucidate the role of these genes in order to identify novel targets of therapeutic interest, is needed more than ever. We have designed a sensitized version of the negative geotaxis assay that allows for the detection of milder defects earlier and has the ability to evaluate these defects over time. The assay is performed in a glass graduated cylinder, which is sealed with a wax barrier film. By increasing the threshold distance to be climbed to 17.5 cm and increasing the experiment duration to 2 min&#160;we have observed a greater sensitivity in detecting mild mobility dysfunctions. The assay is cost effective and does not require extensive training to obtain highly reproducible results. This makes it an excellent technique for screening candidate drugs in Drosophila mutants with locomotion defects.

We present an optimized inexpensive and reliable negative geotaxis assay in Drosophila melanogaster as a model for neurodegenerative disorders. Being more sensitive to mild locomotor defects, this assay will help screen for potential genetic interactions and drug targets.

التحليل الكمي من العيوب تسلق في نموذج ذبابة الفاكهة من الاضطرابات العصبية

Locomotive defects resulting from neurodegenerative disorders can be a late onset symptom of disease, following years of subclinical degeneration, and ...

Sex Differences in Mouse Hippocampal Astrocytes after In-Vitro Ischemia

Astrogliosis following hypoxia/ischemia (HI)-related brain injury plays a role in increased morbidity and mortality in neonates. Recent clinical studies indicate that the severity of brain injury appear to be sex dependent, and that the male neonates are more susceptible to the effects of HI-related brain injury, resulting in more severe neurological outcomes as compared to females with comparable brain injuries. The development of reliable methods to isolate and maintain highly enriched populations of sexed hippocampal astrocytes is essential to understand the cellular basis of sex differences in the pathological consequences of neonatal HI. In this study, we describe a method for creating sex specific hippocampal astrocyte cultures that are subjected to a model of in-vitro ischemia, oxygen-glucose deprivation, followed by reoxygenation. Subsequent reactive astrogliosis was examined by immunostaining for the Glial Fibrillary Acidic Protein (GFAP) and S100B. This method provides a useful tool to study the role of male and female hippocampal astrocytes following neonatal HI, separately.

Sex Differences in Mouse Hippocampal Astrocytes after In-Vitro Ischemia

Astrocytes are one of the most important key players in the central nervous system (CNS). Here, we are reporting a practical method of sexed hippocampal astrocyte culture protocol in order to study the mechanisms underlying the astrocyte function in male and female neonate pups after in-vitro ischemia.

الفروق بين الجنسين في ماوس الحصين النجمية بعد<em&gt; في المختبر</em&gt; نقص التروية

Astrogliosis following hypoxia/ischemia (HI)-related brain injury plays a role in increased morbidity and mortality in neonates. Recent clinical studies ...

High Resolution Quantitative Synaptic Proteome Profiling of Mouse Brain Regions After Auditory Discrimination Learning

The molecular synaptic mechanisms underlying auditory learning and memory remain largely unknown. Here, the workflow of a proteomic study on auditory discrimination learning in mice is described. In this learning paradigm, mice are trained in a shuttle box Go/NoGo-task to discriminate between rising and falling frequency-modulated tones in order to avoid a mild electric foot-shock. The protocol involves the enrichment of synaptosomes from four brain areas, namely the auditory cortex, frontal cortex, hippocampus, and striatum, at different stages of training. Synaptic protein expression patterns obtained from trained mice are compared to na&#239;ve controls using a proteomic approach. To achieve sufficient analytical depth, samples are fractionated in three different ways prior to mass spectrometry, namely 1D SDS-PAGE/in-gel digestion, in-solution digestion and phospho-peptide enrichment. 
High-resolution proteomic analysis on a mass spectrometer and label-free quantification are used to examine synaptic protein profiles in phospho-peptide-depleted and phospho-peptide-enriched fractions of synaptosomal protein samples. A commercial software package is utilized to reveal proteins and phospho-peptides with significantly regulated relative synaptic abundance levels (trained/na&#239;ve controls). Common and differential regulation modes for the synaptic proteome in the investigated brain regions of mice after training were observed. Subsequently, meta-analyses utilizing several databases are employed to identify underlying cellular functions and biological pathways.

The identification of molecules and pathways controlling synaptic plasticity and memory is still a major challenge in neuroscience. Here, a workflow is described addressing the relative quantification of synaptic proteins supposedly involved in the molecular reorganization of synapses during learning and memory consolidation in an auditory learning paradigm.

عالية الدقة الكمية متشابك بروتيوم من التنميط ماوس مناطق الدماغ بعد السمعية التمييز التعلم

The molecular synaptic mechanisms underlying auditory learning and memory remain largely unknown. Here, the workflow of a proteomic study on auditory ...

Low-Density Primary Hippocampal Neuron Culture

The ability to probe the structure and physiology of individual nerve cells in culture is crucial to the study of neurobiology, and allows for flexibility in genetic and chemical manipulation of individual cells or defined networks. Such ease of manipulation is simpler in the reduced culture system when compared to the intact brain tissue. While many methods for the isolation and growth of these primary neurons exist, each has its own limitations. This protocol describes a method for culturing low-density and high-purity rodent embryonic hippocampal neurons on glass coverslips, which are then suspended over a monolayer of glial cells. This &#39;sandwich culture&#39; allows for exclusive long-term growth of a population of neurons while allowing for trophic support from the underlying glial monolayer. When neurons are of sufficient age or maturity level, the neuron coverslips can be flipped-out of the glial dish and used in imaging or functional assays. Neurons grown by this method typically survive for several weeks and develop extensive arbors, synaptic connections, and network properties.

This article describes the protocol for culturing low-density primary hippocampal neurons growing on glass coverslips inverted over a glial monolayer. The neuron and glial layers are separated by paraffin wax beads. The neurons grown by this method are suitable for high-resolution optical imaging and functional assays.

منخفض الكثافة الابتدائية الحصين العصبية الثقافة

The ability to probe the structure and physiology of individual nerve cells in culture is crucial to the study of neurobiology, and allows for flexibility ...

Assessing Spatial Learning and Memory in Small Squamate Reptiles

Clinical research has leveraged a variety of paradigms to assess cognitive decline, commonly targeting spatial learning and memory abilities. However, interest in the cognitive processes of nonmodel species, typically within an ecological context, has also become an emerging field of study. In particular, interest in the cognitive processes in reptiles is growing although experimental studies on reptilian cognition are sparse. The few reptilian studies that have experimentally tested for spatial learning and memory have used rodent paradigms modified for use in reptiles. However, ecologically important aspects of the physiology and behavior of this taxonomic group must be taken into account when testing for spatially based cognition. Here, we describe modifications of the dry land Barnes maze and associated testing protocol that can improve performance when probing for spatial learning and memory ability in small squamate reptiles. The described paradigm and procedures were successfully used with male side-blotched lizards (Uta stansburiana), demonstrating that spatial learning and memory can be assessed in this taxonomic group with an ecologically relevant apparatus and protocol.

This paper describes a modification of the Barnes maze, a standard rodent paradigm used to assess spatial memory and learning, for use in small squamate reptiles.

تقييم التعلم المكاني والذاكرة في Squamate الزواحف الصغيرة

Clinical research has leveraged a variety of paradigms to assess cognitive decline, commonly targeting spatial learning and memory abilities. However, ...

The Use of Trace Eyeblink Classical Conditioning to Assess Hippocampal Dysfunction in a Rat Model of Fetal Alcohol Spectrum Disorders

Neonatal rats were administered a relatively high concentration of ethyl alcohol (11.9% v/v) during postnatal days 4-9, a time when the fetal brain undergoes rapid organizational change and is similar to accelerated brain changes that occur during the third trimester in humans. This model of fetal alcohol spectrum disorders (FASDs) produces severe brain damage, mimicking the amount and pattern of binge-drinking that occurs in some pregnant alcoholic mothers. We describe the use of trace eyeblink classical conditioning (ECC), a higher-order variant of associative learning, to assess long-term hippocampal dysfunction that is typically seen in alcohol-exposed adult offspring. At 90 days of age, rodents were surgically prepared with recording and stimulating electrodes, which measured electromyographic (EMG) blink activity from the left eyelid muscle and delivered mild shock posterior to the left eye, respectively. After a 5 day recovery period, they underwent 6 sessions of trace ECC to determine associative learning differences between alcohol-exposed and control rats. Trace ECC is one of many possible ECC procedures that can be easily modified using the same equipment and software, so that different neural systems can be assessed. ECC procedures in general, can be used as diagnostic tools for detecting neural pathology in different brain systems and different conditions that insult the brain.

Trace eyeblink classical conditioning (ECC) was used to assess hippocampal-dependent associative learning in adult rats that were administered a high concentration (11.9% v/v) of alcohol during early neonatal brain development. In general, ECC procedures are sound diagnostic tools for detecting brain dysfunction across many psychological and biomedical settings.

استخدام الاشراط الكلاسيكي اييبلينك تتبع لتقييم هيبوكامبال الخلل في نموذج الفئران من اضطرابات طيف الكحول الجنيني

Neonatal rats were administered a relatively high concentration of ethyl alcohol (11.9% v/v) during postnatal days 4-9, a time when the fetal brain ...

Measuring Synaptic Vesicle Endocytosis in Cultured Hippocampal Neurons

During endocytosis, fused synaptic vesicles are retrieved at nerve terminals, allowing for vesicle recycling and thus the maintenance of synaptic transmission during repetitive nerve firing. Impaired endocytosis in pathological conditions leads to decreases in synaptic strength and brain functions. Here, we describe methods used to measure synaptic vesicle endocytosis at the mammalian hippocampal synapse in neuronal culture. We monitored synaptic vesicle protein endocytosis by fusing a synaptic vesicular membrane protein, including synaptophysin and VAMP2/synaptobrevin, at the vesicular lumenal side, with pHluorin, a pH-sensitive green fluorescent protein that increases its fluorescence intensity as the pH increases. During exocytosis, vesicular lumen pH increases, whereas during endocytosis vesicular lumen pH is re-acidified. Thus, an increase of pHluorin fluorescence intensity indicates fusion, whereas a decrease indicates endocytosis of the labelled synaptic vesicle protein. In addition to using the pHluorin imaging method to record endocytosis, we monitored vesicular membrane endocytosis by electron microscopy (EM) measurements of Horseradish peroxidase (HRP) uptake by vesicles. Finally, we monitored the formation of nerve terminal membrane pits at various times after high potassium-induced depolarization. The time course of HRP uptake and membrane pit formation indicates the time course of endocytosis.

Synaptic vesicle endocytosis is detected by light microscopy of pHluorin fused with synaptic vesicle protein and by electron microscopy of vesicle uptake.