Name: modified microsecure vitrification: a safe, simple and highly effective cryopreservation procedure for human blastocysts
Uploaded: 2017-03-02T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 35 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Modified MicroSecure Vitrification: A Safe, Simple and Highly Effective Cryopreservation Procedure for Human Blastocysts at JoVE.com

سوف MC Schiewe أود أن أشكر السيد غابة غارنر في مركز الخصوبة في لاس فيغاس لالخبرات الإحصائية له في تحليل وتقييم بيانات مركز السيطرة على الأمراض وسرت السنوية. أيضا، الكتاب أود أن أشكر المدير الطبي، والدكتور روبرت اندرسون، لدعمه المتفاني والإيمان في قدراتنا التقنية والخبرة.

<ol>
	<li>Edgar, D. H., Gook, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+critical+appraisal+of+cryopreservation+(slow+cooling+versus+vitrification)+of+human+oocytes+and+embryos.">A critical appraisal of cryopreservation (slow cooling versus vitrification) of human oocytes and embryos.</a> Hum. Reprod. Update. 16, 536-554 (2012).</li><li>Schiewe, M. C., Whitney, J. B., Anderson, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+risk+of+monochorionic+dizygotic+twin+blastocyst+formation+associated+with+early+laser+zona+dissection+of+group+cultured+embryos.">Potential risk of monochorionic dizygotic twin blastocyst formation associated with early laser zona dissection of group cultured embryos.</a> Fertil. Steril. 103, 417-421 (2015).</li><li>Schiewe, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+historic+development+and+incorporation+of+four+assisted+reproductive+technologies+shaping+today's+IVF+industry.">The historic development and incorporation of four assisted reproductive technologies shaping today's IVF industry.</a> J. Fertil. In Vitro Reprod. Med. Genet. 4, 2-9 (2016).</li><li>Rall, W. F., Fahy, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ice-free+cryopreservation+of+mouse+embryos+at+-196+degrees+C+by+vitrification.">Ice-free cryopreservation of mouse embryos at -196 degrees C by vitrification.</a> Nature. 313, 573-575 (1985).</li><li>Rall, W. F., Wood, M. J., Kirby, C., Whittingham, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+mouse+embryos+cryopreserved+by+vitrification.">Development of mouse embryos cryopreserved by vitrification.</a> J. Reprod. Fertil. 80, 499-504 (1987).</li><li>Schiewe, M. C., Rall, W. F., Stuart, L. D., Wildt, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+cryoprotectant,+cooling+rate+and+in+situ+straw+dilution+using+conventional+freezing+or+vitrification+for+cryopreserving+sheep+embryos.">Analysis of cryoprotectant, cooling rate and in situ straw dilution using conventional freezing or vitrification for cryopreserving sheep embryos.</a> Theriogenology. 36, 279-293 (1991).</li><li>Lane, M., Schoolcraft, W. B., Gardner, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vitrification+of+mouse+and+human+blastocysts+using+a+novel+cryoloop+container-less+technique.">Vitrification of mouse and human blastocysts using a novel cryoloop container-less technique.</a> Fertil. Steril. 72, 1073-1078 (1999).</li><li>Mukaida, T., Oka, C., Goto, T., Takahashi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Artificial+shrinkage+of+blastocoeles+using+either+a+micro-needle+or+a+laser+pulse+prior+to+the+cooling+steps+of+vitrification+improves+survival+rate+and+pregnancy+outcome+of+vitrified+human+blastocysts.">Artificial shrinkage of blastocoeles using either a micro-needle or a laser pulse prior to the cooling steps of vitrification improves survival rate and pregnancy outcome of vitrified human blastocysts.</a> Hum. Reprod. 21, 3246-3252 (2006).</li><li>Kuwayama, M., Vatja, G., Ieda, S., Kato, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+open+and+closed+methods+for+vitrification+of+human+embryos+and+elimination+of+potential+contamination.">Comparison of open and closed methods for vitrification of human embryos and elimination of potential contamination.</a> Reprod. Biomed. Online. 11, 608-614 (2005).</li><li>Vanderzwalmen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Births+after+vitrification+at+morula+and+blastocyst+stages:+effect+of+artificial+reduction+of+the+blastocoelic+cavity+before+vitrification.">Births after vitrification at morula and blastocyst stages: effect of artificial reduction of the blastocoelic cavity before vitrification.</a> Hum. Reprod. 17, 744-751 (2002).</li><li>Schiewe, M. C., Marco-Jim&#233;nez, F., AkdemirKo&#231;, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quality+control+factors+influencing+the+successful+and+reliable+implementation+of+oocyte+and+embryo+vitrification.">Quality control factors influencing the successful and reliable implementation of oocyte and embryo vitrification.</a> Cryopreservation. , (2016).</li><li>Stachecki, J. J., Garrisi, J., Sabino, S., Caetano, J. P. J., Wiemer, K., Cohen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+safe,+simple,+and+successful+vitrification+method+for+bovine+and+human+blastocysts.">A new safe, simple, and successful vitrification method for bovine and human blastocysts.</a> Reprod. Biomed. Online. 17, 360-367 (2008).</li><li>Panagiotidis, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Open+versus+closed+vitrification+of+blastocysts+from+an+oocyte-donation+programme:+a+prospective+randomized+study.">Open versus closed vitrification of blastocysts from an oocyte-donation programme: a prospective randomized study.</a> Reprod. Biomed. Online. 26, 470-476 (2013).</li><li>Papatheodorou, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Open+versus+closed+oocyte+vitrification+system:+a+prospective+randomized+study.">Open versus closed oocyte vitrification system: a prospective randomized study.</a> Reprod. Biomed. Online. 26, 595-602 (2013).</li><li>Schiewe, M. C., Zozula, S., Anderson, R. E., Fahy, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+microSecure+vitrification+(&#181;S-VTF)+for+the+effective+cryopreservation+of+human+embryos+and+oocytes.">Validation of microSecure vitrification (&#181;S-VTF) for the effective cryopreservation of human embryos and oocytes.</a> Cryobiology. 71, 264-272 (2015).</li><li>Schiewe, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroSecure+vitrification+for+oocytes+and+embryos:+optimum+simplicity,+security+and+cost+and+effectiveness+combining+FDA-approved+products.">MicroSecure vitrification for oocytes and embryos: optimum simplicity, security and cost and effectiveness combining FDA-approved products.</a> J. Clin. Embryol. 13, 33-51 (2010).</li><li>Rall, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+affecting+the+survival+of+mouse+embryos+cryopreserved+by+vitrification.">Factors affecting the survival of mouse embryos cryopreserved by vitrification.</a> Cryobiology. 24, 387-402 (1987).</li><li>Seki, S., Mazur, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+warming+rate+on+the+survival+of+vitrified+mouse+oocytes+and+on+the+recrystallization+of+intracellular+ice.">Effect of warming rate on the survival of vitrified mouse oocytes and on the recrystallization of intracellular ice.</a> Biol. Reprod. 79, 727-737 (2008).</li><li>Schiewe, M. C., Stringfellow, D. A., Givens, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=General+hygiene+and+quality+control+practices+in+an+embryo-production+laboratory.">General hygiene and quality control practices in an embryo-production laboratory.</a> Manual of the International Embryo Transfer Society: A Procedural Guide and General Information for the Use of Embryo Transfer Technology, Emphasizing Sanitary Precautions. , (2008).</li><li>Whitney, J. B., Nugent, N. L., Anderson, R. E., Schiewe, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+center+validation+of+routine+blastocyst+biopsy+implementation.">Single center validation of routine blastocyst biopsy implementation.</a> J. Asst. Reprod. Genet. , (2016).</li><li>Liebermann, L., Conaghan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Artificial+collapse+prior+blastocyst+vitrification:+improvement+of+clinical+outcomes.">Artificial collapse prior blastocyst vitrification: improvement of clinical outcomes.</a> J. Clin. Embryol. 16, 107-118 (2014).</li><li>Parmegiani, L., Tatone, C., Cognigni, G. E., Bernardi, S., Troilo, E., Arnone, A., Maccarini, A. M., Di Emidio, G., Vitti, M., Filicori, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+warming+increases+survival+of+slow-frozen+sibling+oocytes:+a+step+towards+a+single+warming+procedure+irrespective+of+the+freezing+protocol.">Rapid warming increases survival of slow-frozen sibling oocytes: a step towards a single warming procedure irrespective of the freezing protocol.</a> Reprod Biomed Online. , (2014).</li></ol>

يقدم MC Schiewe كعضو في المجلس الاستشاري العلمي لالمبتكرة كرو الشركات وباعتباره المدير الفني لكاليفورنيا بنك بردي. وقد دفعت إنتاج هذا الفيديو المقال لمن الحفاوة الخصوبة. الكتاب ليس لديهم اتفاقات أو تضارب في المصالح المالية المتنافسة على الكشف فيما يتعلق التزجيج الأمشاج والأجنة.

اليوم، هناك توقعات عالية لتحقيق بقاء الكيسة كاملة (&gt; 95٪)، وتحقيق النجاح زرع مماثلة لتلك الأجنة الطازجة. وقد اقترح بعض الجماعات أن معدلات المواليد الحية دورات نقل الأجنة المزجج وربما أعلى من الكيسات الأريمية جديدة عندما يتم زرع الجنين cryopreserved سليمة في بيئة صحية الرحم، وحفز غير هرمونية. تشير البيانات المتوفرة لدينا بشكل واضح أن التزجيج تحتفظ بشكل فعال وموثوق سلامة الجنين جديدة. وعلاوة على ذلك، وقد أثبتنا أن لدينا العقيم، طريقة مغلقة، ودعا MicroSecure التزجيج (ميكرو-VTF)، ويمكن تحقيق هذه النتيجة المثلى مماثلة أو أكبر من المعايير التجارية (أي أنظمة جهاز مفتوحة) المستخدمة في صناعة التلقيح الاصطناعي. ويرتبط الاختلاف مع التكرار التقني والموثوقية بين الأفراد الذين يستخدمون العديد من التزجيج الأجهزة / الأساليب. بدوره، أدى هذا في inconsistencies بين برامج تطبيق التزجيج. ولذلك، فإنه ليس من المستغرب أن الألفة جهاز هو عامل مهم فيما يتعلق الكفاءة المختبر ونتائج ناجحة. هذا هو مفهوم &quot;التوقيع الفني&quot; 11 الذي يفسر لماذا التكرار بين البرامج قد يكون مشكلة. وليس فقط تطوير أكثر من عشرة أجهزة التجارية تعقيد هذه الظاهرة، فقد أنشأت المخاوف مراقبة الجودة. لحسن الحظ، أغلقت أنظمة التزجيج، مثل ميكرو-VTF، رابيد-I، وVitriSafe، تثبت الآن أن تكون فعالة بنفس القدر لفتح أنظمة الجهاز 12 و 13 و 14. MicroSecure VTF هو الرواية، وتقنية التزجيج العقيم وضعها مع سهولة التقنية، والموثوقية، والبرد الأمن في الاعتبار. من خلال الجمع بين استخدام اثنين من الأجهزة المعتمدة سابقا، ادارة الاغذية والعقاقير المتوافقة، بل هو نظام التزجيج غير التجاري ثإيث ميزة واضحة من وجود منخفضة التكلفة المعمول بها، على النقيض من الأجهزة المتخصصة. وبالإضافة إلى ذلك، جعلت لها تزويرها فريدة من نوعها والمنضوية ثنائي اللون نظام وضع العلامات، فضلا عن العديد من المزايا الأخرى لمراقبة الجودة، ميكرو-VTF خيارا جذابا العالمي 11. كجهاز VTF غير التجاري، إلا أن تطبيقه الصناعة على نطاق واسع يتطور ببطء. فقط من خلال نشر المستمر للسلامة والأمن وفعاليته السريرية وكسب ميكرو-VTF تزايد استخدام. في أغسطس عام 2014، عندما تواجه مع عدم القدرة على الحصول على الأصلي 0.3 مل الجنين القش المصنعة مع، غير فتل المكونات مسعور الداخلية، وكنا قادرين على تعديل موثوق طريقة ميكرو-VTF. باختصار، تم تكييفها على نحو فعال السائل المنوي 0.3 مل / القش الجنين جديدة مع المقابس القطن PVP بهم. وقد تحقق ذلك ببساطة عن طريق إنشاء ختم الداخلية قبل المكونات القطن، وبالتالي منع الاتصال وسائل فتل معغيض VTF فتح باب العضوية (أي flexipette تحتوي على الجنين أو البيض). وعلاوة على ذلك، إذا قضبان ID-40 ملم لا يمكن الوصول إليها، قضية الطفو المرتبطة أخف قضبان 30 مم ويمكن counterweighted باستخدام اثنين من الكرات. وقد جعلت هذه خطوات إضافية تقنية أقل قليلا بسيطة، ولكن لا تزال فعالة للغاية. اليوم، والاقتصاد والفعالية أصبحت المخاوف تتزايد أهميتها، وعادة ما تكون المزججة الكيسات الأريمية الخزعة على حدة حتى يتم تأكيد وضعهم المجموعية على تقرير الوراثة. الكيسات الأريمية مع حالة عدم توازن الصبغيات غير قابل للحياة أكد عادة ما يحصل تجاهل، مع موافقة المريض، في غضون أسابيع. وبالتالي، يتم تجاهل أغلبية (&gt; 50٪) من أجهزة VTF بعد التخزين على المدى القصير، مما تسبب في تصاعد التكلفة السنوية عند استخدام الأجهزة التجارية. وعموما، ميكرو-VTF هو إجراء عالية فعال وموثوق به، وتكرار لحفظ البرودة من الكيسات الأريمية الإنسان. متفوقة مراقبة الجودة تصميم securelتسميات ص وأمان بتخزين الأجنة / البويضات حين القضاء على فشل الانتعاش وتحسين البقاء على قيد الحياة بعد ارتفاع درجات الحرارة والحيوية، الأمر الذي يبرر استخدام النظام كنهج الجميع على التزجيج الجنين.

التزجيج هو واحد الأكثر تأثيرا تكنولوجيا المساعدة على الإنجاب في صناعة التخصيب في المختبر (IVF) منذ تطوير حقن الحيوانات المنوية بالبويضة. اليوم، الكيسات الأريمية هي cryopreserved دون خسارة في بقاء الجنين المرتبطة سابقا مع التقليدية أساليب بطيئة تجميد 1. مع موثوقة بعد ارتفاع درجة حرارة بقاء الجنين، وصناعة العقم هو تحويل إلى استخدام المفضل لدورات نقل الأجنة cryopreserved، والتي تسفر عن نتائج الحمل مماثلة أو أعلى من نقل الأجنة الطازجة التقليدي. بالتعاون مع خزعة الكيسة والفحص الجيني قبل الغرس (PGS)، أصبح التزجيج أداة السريرية الحيوية لتحسين نتائج الولادة الحية صحية عن طريق سوي الصيغة الصبغية واحد نقل الأجنة 2 و 3. وقد وضعت الفئران التزجيج الجنين في منتصف 1980s 4، </سوب&gt; 5 وتكييفها للزراعة الحيوانات بحلول عام 1990 (6). واستنادا إلى فرضية أن الحلول التزجيج تشكل دولة glasseous متبدل الاستقرار، وخالية من الاضرار تشكيل الكريستال الجليد، وقد ثبت ذلك للحفاظ على أكثر كفاءة ونزاهة الخلوية كاملة من الأجنة. ومن المثير للاهتمام، فإن القبول واعد من التزجيج في علم الأجنة البشرية لم تبدأ تتحقق حتى القرن 21. وتزامنت المنشورات مبكرة تشجيع استخدام التزجيج مع تطور أجهزة النظام &quot;فتح&quot; فريدة من نوعها 7، 8، 9. ومع ذلك، فإن اعتماد التزجيج في الممارسة السريرية بطيئة، كما جاءت في وقت التحسينات في بطء الكيسة تجميد وقد يحدث أيضا. نجاح تجميد بطء التقليدية، بالإضافة إلى التزجيج هي التي تنسجم، مع إدخال تحسينات في نظم الاستزراع الجنين، وكذلك مع incorporatأيون النهج انهيار جوف الأريمة، مما عزز كل من البقاء على قيد الحياة من الأديم الظاهر الغاذي، وبعد ذلك، زرع 10. في العقد الماضي، تكنولوجيا التزجيج ألقى بظلاله بسرعة الممارسات التجميد التقليدية. إلى حد كبير، ويرجع ذلك إلى تطوير أجهزة التزجيج المتخصصة بذلك. وقد أعاقت بعض من هذه الأجهزة السلامة العامة والكفاءة والفعالية من التزجيج السريري عن طريق إدخال عيوب التصميم الكامنة في الأجهزة المستخدمة في صناعة IVF 11. وبالفعل، فإن الفروق الدقيقة في الأجهزة المختلفة إدخال الاختلاف الفني الكبير بين البرامج، التي يشار إليها عادة باسم &quot;التوقيعات التقنية&quot; (12). وهكذا، والمجلات العلمية، مثل مجلة التجارب متصور (إن الرب)، يمكن أن تكون مصدرا قيما لإظهار التفاصيل التقنية، والتي سوف تساعد على تقليل التباين النتيجة. مشكلة مستمرة أخرى هي أن لياليتستمر لى بعد علم الأجنة إلى أن معلومات خاطئة، وحتى اليوم، بناء على مزاعم بأن &quot;تبريد فائقة السريع للأجنة أو بويضات في&quot; نظام التزجيج فتح &#39;(أي اتصال الجنين المباشر مع النيتروجين السائل (LN 2)) هو شرط أساسي لتحسين معدلات النجاح &quot;. ومن الواضح أن هذا الاعتقاد غير دقيق، استنادا إلى نجاح مؤكد من العقيم مغلقة أنظمة 13، 14، 15. واستنادا إلى مبادئ cryobiological من التزجيج، وفعالية التزجيج تعتمد أكثر كبير على معدلات ارتفاع درجات الحرارة من على معدلات 16، 17، 18 التبريد. بشكل عام، بغض النظر عن الجهاز التزجيج المستخدمة، يجب أن يتجاوز معدل ارتفاع درجات الحرارة ومعدل التبريد لضمان بقاء معدلات عالية. معدلات ارتفاع درجات الحرارة العالية تقليل الفرصة لأي نمو الجليد (أي recrystallization من الشوائب الأنوية في حلول البرد) خلال المرحلة devitrification من ارتفاع حرارة الارض. منح، واستقرار الحل التزجيج (أي نوع وتركيز وكلاء واق من البرد المستخدمة) قد يكون له تأثير الخلط، ولكن هذا تم تناولها في منشور مستقل 11. النظر في المسائل معدل التبريد والاحترار، وقد وضعت MicroSecure التزجيج (ميكرو-VTF) في عام 2008 باعتبارها غير التجاري طريقة ادارة الاغذية والعقاقير المتوافقة وغير مكلفة، أن أمثل الجوانب مراقبة الجودة من التزجيج. وكان فريد من نوعه من حيث أنه قدم للتزوير، المنضوية، ووضع العلامات المزدوجة اللون. وعلاوة على ذلك، عن طريق تحميل وتخزين الأجنة مباشرة في flexipette معقمة تستخدم لpipetting ل(أي بدون pipetting للسطح جهاز ثانوي) وباستخدام القش الراتنج ionomeric أن ختم اللحام تماما باستخدام سداده الآلي، وقد تم القضاء على التباين الفني على نحو فعال. عند تقييم جompleteness من التزجيج الأجهزة لاستخدامها المحتمل، وهناك العديد من العوامل لمراقبة الجودة التي ينبغي أن تؤخذ في الاعتبار، بما في ذلك: أن يلتزم 1) وسم علامات -هل تمنع المحتملة بشكل آمن؟ هم تزويرها؟ أنها لا تقدم ثنائي اللون إمكانية تحديد؟ هل تتطلب تسمية الثانوي، ويمكن تسمية إزالتها بسهولة لأغراض حفظ السجلات (أي المريض التحقق) بعد ارتفاع درجات الحرارة؟ 2) يتم تحميلها بسهولة التقنية الأجنة -هل تمنع بسهولة إلى / على الجهاز في الوقت المناسب وببساطة تحديد وتعقب ما بعد الاحتباس الحراري؟ 3) البساطة الإجرائية / التكرار -Does طريقة التزجيج عرض البساطة والموثوقية التي تسمح بسهولة عن التكرار، مما يقلل من التباين بين الفنيين (الداخلية) وبرامج (الخارجية)؟ 4) LN 2 سعة التخزين هل يمكن أن الأجهزة بسهولة وأمان التعامل معها وحددت؟ هو ستو بهمالغضب الفضاء المحتملين كفاءة؟ هل جهاز عرض الأمن والسلامة من ضرر مادي أو الملوثات المحتملة كنظام مغلق العقيم؟ 5) إمكانية الاسترداد / قابلية البقاء -هل تصميم الجهاز عرضة للمشاكل المحتملة في انتعاش مضمونة من الأجنة، وأنها سوف موثوق تزجج والحفاظ على كامل سلامة الخلوية بعد ارتفاع درجات الحرارة؟ القلق نوعية محددة الأخير، ومعدل الاسترداد، وفعلا تم التقليل من المستغرب في التقارير المنشورة. يتم ذلك عن طريق إخفاء عموما نتائج سلبية (أي الجنين المفقود أو البيض) في معدلات البقاء على قيد الحياة عادة-جيدة. أي جهاز عرضة للانتعاش يتعارض (&lt;99٪) معيب بشكل خطير ويشكل التزاما الإجرائية. لدينا العقيم، أغلق طريقة ميكرو-VTF وقد وضعت استراتيجيا لحساب كل تدبير لمراقبة الجودة. ومع ذلك، وبعد 5 سنوات من النجاح السريري متفوقة والتحقق من صحة 14، وكان الإجراء رس يكون تعديلها. تم إزالة الأصلي 0.3 مل القش الجنين (امتلاك المكونات مسعور) من صناعة التلقيح الاصطناعي واستبدالها مع القش المني 0.3 مل امتلاك المكونات القياسية القطن / PVP (أي يعاد تغليف باعتباره السائل المنوي / جنين القش). تلخص هذه الورقة الإجرائية الخطوات والاستراتيجيات المحددة اللازمة لتنفيذ ميكرو-VTF بأمان، ببساطة، وعلى نحو فعال. وعلاوة على ذلك، نسلط الضوء على التعديل () المطلوبة لحساب موثوق لفرض قيود على العرض، إلى أن يحين الوقت الذي يتم فيه يعيد حاوية القش مثالية بديلة مرة أخرى في المختبرات الطبية.

<table><tbody><tr><td>Aluminum Cane</td><td>IVM</td><td>XC055</td><td></td></tr><tr><td>Ball bearings, 3/32&quot;</td><td>VXB.com</td><td>KIT15977</td><td>stainless steel</td></tr><tr><td>CBS semen/embryo straw, 0.3 mL</td><td>CryoBioSystems</td><td>25292</td><td>individual sterile</td></tr><tr><td>Color, ID rods, 30 mm</td><td>CryoBioSystems</td><td>019021-26</td><td>weighted</td></tr><tr><td>Culture tubes, 15 mL</td><td>Falcon</td><td>352099</td><td>Conical</td></tr><tr><td>Culture tubes, 10 mL</td><td>Falcon</td><td>352057</td><td>Snap-cap</td></tr><tr><td>Cryosleeves</td><td>Nalgene</td><td>5016-001</td><td></td></tr><tr><td>Filter, 250 mL</td><td>Fisher Sci.</td><td>09-740-2A</td><td>0.22 &amp;mu;m</td></tr><tr><td>Flasks, Tissue Culture 50 mL</td><td>Falcon</td><td>353014</td><td></td></tr><tr><td>Flexipettes, 300 &amp;mu;m ID</td><td>Cook Med.</td><td>K-FPIP-1300-10BS-5</td><td>Sterile, 20/pack</td></tr><tr><td>Forcep, Large</td><td>Miltex</td><td>6-30TC</td><td></td></tr><tr><td>Forcep, Splinter - fine</td><td>Miltex</td><td>17-305</td><td></td></tr><tr><td>Goblet</td><td>IVM</td><td>PA003</td><td></td></tr><tr><td>Heat Sealer, SYMS 1</td><td>CryoBioSystems</td><td>16399</td><td>110 V or 220 V with adapter</td></tr><tr><td>Hepes-buffered media&amp;nbsp;</td><td>Life Global or</td><td>LGGH-100; 100&amp;nbsp;mL, or</td><td>stored at 2 - 8 &amp;ordm;C</td></tr><tr><td></td><td>Irvine Scientific</td><td>H-HTF; 90126; 100 mL</td><td>with non-essential AA&#039;s</td></tr><tr><td>Labels, Cryo</td><td>GA International</td><td>CL-23T1</td><td>Various colors</td></tr><tr><td>Liquid Nitrogen Tank, 40&amp;nbsp;L</td><td>MVE or Taylor Warton</td><td>various</td><td>liquid storage&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>LN&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;; Dewar flask, 0.5&amp;nbsp;L</td><td>Hampton Research</td><td>HR4-695</td><td>Stainless steel</td></tr><tr><td>6-well Custer Dishes</td><td>Biogenics</td><td>015/020</td><td>plasticware by case</td></tr><tr><td>Pipette Bulb, Micro Cap</td><td>Drummond</td><td>Fisher#13681451</td><td>Hole on bulb apex</td></tr><tr><td>Petri Dishes, 35 mm</td><td>Falcon</td><td>351006</td><td></td></tr><tr><td>Petri Dishes, 58 mm</td><td>Nunc</td><td>150288</td><td></td></tr><tr><td>Petri Dishes, 100 mm</td><td>Falcon</td><td>351029</td><td></td></tr><tr><td>Pipette Tips, ART long</td><td>Fisher Sci.</td><td>02-707-80</td><td>10 - 100 &amp;mu;L</td></tr><tr><td>Pipet Aid</td><td>Drummond or Falcon</td><td>various</td><td>rechargeable</td></tr><tr><td>Pipetting Device, Stripper</td><td>Cooper Surgical</td><td>MXL3-STR</td><td></td></tr><tr><td>Pipettes, Serological 1&amp;nbsp;mL</td><td>Falcon</td><td>357521</td><td></td></tr><tr><td>Pipettes, Serological 2&amp;nbsp;mL</td><td>Falcon</td><td>357507</td><td></td></tr><tr><td>Pipettes, Serological 5&amp;nbsp;mL</td><td>Falcon</td><td>357543</td><td></td></tr><tr><td>Pipettes, Serological 10&amp;nbsp;mL</td><td>Falcon</td><td>357551</td><td></td></tr><tr><td>Scissors, Surgical Mayo</td><td>Miltex</td><td>5-SC-16</td><td></td></tr><tr><td>Stereomicroscope</td><td>Nikon, Olympus, Leica</td><td>various</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Gauze pads, 4&quot; x 4&quot;</td><td>Kendall Healthcare</td><td>6939</td><td></td></tr><tr><td>Synthetic serum</td><td>Life Global, or</td><td>LGPS-20; 20 mL, or</td><td>stored at 2 - 8 &amp;ordm;C</td></tr><tr><td></td><td>Irvine Scientific</td><td>SS-99193; 12 x 10 mL</td><td>purchase low endotoxin lot</td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>Sigma Chemical Co.</td><td>#S9378</td><td>Aliquot into 50&amp;nbsp;mL flasks, 1 year;&lt;br/&gt;
17.1 g/flask + Medium to 50 mL;&lt;br/&gt;
makes a 1 M solution;&lt;br/&gt;
Filter with 0.22 &amp;micro;m unit</td></tr><tr><td>Timer</td><td>Nalgene</td><td>5016-001</td><td></td></tr><tr><td>Thawing Solution</td><td>Innovative Cryo Enterprises</td><td>BL-TS (&amp;le;1.0 M Sucrose)</td><td>T1, T2, T3, T4; tored at 2 - 8 &amp;ordm;C for &amp;le;1 month after opening</td></tr><tr><td>Vitrification Solution*,**</td><td>Innovative Cryo Enterprises</td><td>BL-VS (&amp;ge;7.9 M [Glycerol/EG])</td><td>V1, V2, V3; stored at 2 - 8 &amp;ordm;C for &amp;le;1 month after opening</td></tr><tr><td colspan="4">* Non-permeating cryoprotective additives may include: sucrose, ficoll and sodium hyaluronate&amp;nbsp;</td></tr><tr><td colspan="4">** Other commercial preparations are typically ethylene glycol (EG)/dimethyl sulfoxide (DMSO; 30% v/v; 4.8 M), but could be EG/propylene glycol (32% v/v; 5.2 M). Mixed solutions are typically used to reduce cryo-toxicity concerns of a high molar solution. Commercial solutions typically include an ES and VS solution. The formulation of commercial preparation is typically proprietary property.</td></tr></tbody></table>

modified microsecure vitrification: a safe, simple and highly effective cryopreservation procedure for human blastocysts

السريرية الجنين التزجيج تطورت مع تطور الأجهزة التزجيج فريدة من نوعها في القرن 21 ومع الاعتقاد الخاطئ بأن تبريد فائقة السريع في نظام &quot;فتح&quot; (أي مباشرة LN 2 الاتصال) كان ضرورة لتحسين نجاح التزجيج. أدت العقيدة المحيطة أهمية معدلات التبريد لممارسات غير آمنة تخضع لاختلاف التقنية، وإنشاء أجهزة التزجيج أن تجاهل العوامل الهامة لمراقبة الجودة (على سبيل المثال، وسهولة الاستخدام، التكرار، والموثوقية والأمن ووضع العلامات، وسلامة التخزين). فهم العيوب مراقبة الجودة من الأجهزة الأخرى المسموح بها لتطوير طريقة ميكرو-VTF آمنة ومأمونة، للتكرار، وموثوق بها تهدف إلى تقليل التباين داخل الأقاليم وفيما بين فني. بنفس القدر من الأهمية، والجمع بين توافر جهازين ادارة الاغذية والعقاقير المتوافقة القائمة: 1) 0.3 مل ionomeric القش الراتنج الجنين مع المنضوية، ثنائي اللون، العبث فوضع العلامات على السطح مع تكرار إمكانات اللحام ختم. و2) تقصير، وتستخدم عادة، الرقم 300 ميكرون flexipettes عقيمة لتحميل مباشرة على الجنين (ق) من أجل إنشاء جهاز التزجيج العالمية عالية الفعالية. مثل العقيم أخرى، أغلقت أنظمة التزجيج (على سبيل المثال، وارتفاع الأمن التزجيج (HSV)، رابيد-ط، وVitriSafe) تستخدم على نحو فعال في الطب التناسلي، microSecure التزجيج (ميكرو-VTF) أثبتت أنه يمكن تحقيق ارتفاع البقاء على قيد الحياة بعد ارتفاع درجات الحرارة والحمل النتائج مع اهتمامها إلى البساطة، وخفض التباين الفني. على الرغم من أن القش الجنين 0.3 مل تحتوي على المكونات مسعور الداخلية تم استبدال تجاريا مع القش المني القياسية التي تمتلك pyrrolidone القطن البولي فينيل (PVP) المقابس، وأنها حافظت تكوينها الراتنج ionomeric لضمان اللحام الختم. ومع ذلك، يمكن للسدادات قطنية الفتيل من محتويات السائل الجنين من flexipettes عند الاتصال. وقد تم تكييف طريقة ميكرو-VTF تعديلها لتشمل اللحام الداخلي إضافيةختم قبل المكونات على الجانب تحميل الجهاز. الخطوة الفنية إضافة إلى إجراء ميكرو-VTF لم تؤثر في التطبيق الناجح، ومعدلات البقاء على قيد الحياة عالية كما (&gt; 95٪) وتستمر معدلات الحمل اليوم.

وقد تحسنت 1341 الكيسات الأريمية المزجج بين عامي 2012 وحتى يونيو عام 2014، وانتشال 1341 الأجنة (100٪)، في حين نجا 1316 (98.1٪). الكيسات الأريمية تحتاج فحص شهدت أكثر من 99.5٪ البقاء على قيد الحياة. على نقل الغالب واحدة، واختبارها وراثيا، سوي الصيغة الصبغية والأجنة المزجج، كنا قادرين على تحقيق بعض من أعلى معدلات التوطين ومعدلات المواليد الأحياء في الولايات المتحدة الأمريكية، بغض النظر عن العمر (الشكل 3) 20، وفقا لإحصاءات الوطنية الأخيرة التي أبلغ عنها المركز السيطرة على الأمراض وجمعية تكنولوجيا التناسل المساعدة (الجدولين 1 و 2). تقييم عدد سكانها المريض التشخيص الجيد (أقل من 35 سنة) لدورات cryopreserved وحدها (الجدول 1)، تفوق مختبرنا المعدل الوطني لكلا معدلات زرع (أي كفاءة الجنين إلى وضع الحمل) ويعيشون في نهاية المطاف معدلات المواليد<html> أكثر من 30٪. بالإضافة إلى ذلك، أدى التحقق من صحة / التحقق الأولي لدينا القش تخزين تعديل في منتصف 2014 باستخدام 70، الكيسات الأريمية مختل الصيغة الصبغية إعادة المزجج-البحوث وافق في استرداد 100٪ و 100٪ البقاء على قيد الحياة. <img alt="شكل 1" src="/files/ftp_upload/54871/54871fig1.jpg" /> الشكل 1. إعداد MicroSecure VTF. يتم تجميع الطبق VTF (A) مع 3 صفوف متميزة من الحلول التزجيج، التي تستخدم 3 قطرات تغسل قبل وضع في المتميزة، قطرات عقد مرقمة. بالإضافة إلى ذلك، يتم تأمين الماصات الفردية مع نصائح VTF تقصير (أي flexipettes الرقم 300 ميكرون)، ونظمت في رفوف أنبوب الستايروفوم (ب)، والتي يمكن أن تكون استدارة للاستخدام منظم. لاحظ أن المتاح لمبة micropipette التجمع pipetting لتمثيل يوضع على الرف الستايروفوم.<html> arget = &quot;_ فارغة&quot;&gt; الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم. <img alt="الشكل 2" src="/files/ftp_upload/54871/54871fig2.jpg" /> الشكل 2. التعديل الكيسة نظام الدرجات. حساباتنا غاردنر نظام الكيسة الدرجات المعدلة للفتق الناجم عن الخلايا TE لتسهيل الكيسة الخزعة. ويعتبر التعديل تفريخ السابق لأوانه الكيسات الأريمية الكاملة (A: الصف 3 = أقل من 10٪ فتق) والكيسات الأريمية الموسعة (B: الصف 4 = ما يصل الى 50٪ فتق)، في حين أن الكيسة الفقس (C) لديه أكثر من 50٪ فتق 16. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54871/54871fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> 54871fig3.jpg &quot;/&gt; الشكل 3. نتائج الحمل مقارنة. على مدى فترة التراكمي لمدة 1.5، وتمت مقارنة البيانات الحمل لتقييم آثار نقل حرارة المزجج-الكيسات الأريمية سوي الصيغة الصبغية (ن = 172 دورة / 144 نقل) مقارنة بالدورات غير PGS (ن = 160 دورة / 153 نقل) التي تنطوي في الغالب جديدة نقل 18. لأغراض تجريبية لدينا، هذه البيانات يكشف بوضوح أن الكيسات الأريمية الخزعة المزجج قبل إجراء ميكرو-VTF حفاظ على بقائها. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54871/54871fig3large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> مصدر البيانات </td><td> # دورات </td><td> يعني # الأجنة المنقولة </td><td> زرع الاسعار (٪) </td><td> أسعار الميلاد الحية (٪) </td></tr><tr><td> ملحوظة: مختبر * </td><td> 144 </td><td> 1.2 </td><td> 74.00٪ </td><td> 74.50٪ </td></tr><tr><td> متوسط ​​الوطنية </td><td> 20423 </td><td> 1.7 </td><td> 39.60٪ </td><td> 44.10٪ </td></tr><tr><td colspan="5"> * بلغ متوسط ​​البيانات على أساس الأداء عام 2014 مقاطعة أورانج الخصوبة، مركز الخصوبة جنوب كاليفورنيا، ومركز جنوب كاليفورنيا للعيادات لطب التناسلي باستخدام الحفاوة الحالي الخصوبة مختبر (ملحوظة مختبر) التي تأسست الإجراء microSecure التزجيج في عام 2008. </td></tr></tbody></table> الجدول 1. 2014 CDC بمساعدة الاحصائيات الإنجابية. المجمدة نقل البيانات الجنين الحمل من النساء تحت سن 35 سنة من ثلاثة الإبلاغ عيادات الطبيب باستخدام لدينا ملاحظة مختبر مقارنة مع المتوسط ​​القومي للولايات المتحدة عام 2013 أكثر من 450 عيادة التقارير. <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td colspan="2"> المتوسطات سرت الوطنية </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> العيادة - الدولة </td><td> نساء </td><td> نساء </td><td> نساء </td><td> نساء </td></tr><tr><td></td><td> &lt;35 عاما </td><td> 35-37 عاما </td><td> 38-40 عاما </td><td> 41-42 عاما </td></tr><tr><td> SCCRM-CA * </td><td> 63.1٪ </td><td> 58.3٪ </td><td> 40.6٪ </td><td> 32.3٪ </td></tr><tr><td> CCRM-CO * </td><td> 64.7٪ </td><td> 61.5٪ </td><td> 40.4٪ </td><td> 32.2٪ </td></tr><tr><td> الجيش الملكي المغربي-NJ * </td><td> 63.2٪ </td><td> 59.7٪ </td><td> 34.6٪ </td><td> 18.7٪ </td></tr><tr><td> متوسط ​​الوطنية </td><td> 48.6٪ </td><td> 38.3٪ </td><td> 24.3٪ </td><td> 12.3٪ </td></tr><tr><td colspan="5"> مركز كاليفورنيا SCCRM الجنوبي للطب التناسلي. مركز CCRM كولورادو لللطب التناسلي. والجيش الملكي المغربي-Reproductive الطب شركاه </td></tr><tr><td colspan="5"> * هذه العيادات الرائدة نفذت جميع الغالب المزجج دورات نقل الأجنة، وذلك بالتعاون مع الاختبار الجيني قبل الغرس، في الممارسة المعتادة للرعاية المرضى لتحسين نجاح ولادة حية في جنين المزروعة. </td></tr></tbody></table> الجدول 2. 2014 التراكمي معدلات المواليد الحية، وكما ذكرت من قبل المجتمع لتقنيات التناسل المساعدة (سرت)، لعيادة SCCRM استخدام لدينا الحفاوة الخصوبة مختبر في نيوبورت بيتش، كاليفورنيا، يتناقض مع العديد من البرامج المحترمة الأخرى، وكذلك مع سرت المعدلات الوطنية.

Watch this Scientific Journal Video about Modified MicroSecure Vitrification: A Safe, Simple and Highly Effective Cryopreservation Procedure for Human Blastocysts at JoVE.com

Modified MicroSecure Vitrification: A Safe, Simple and Highly Effective Cryopreservation Procedure for Human Blastocysts

MicroSecure Vitrification was developed as a non-commercial, aseptic closed vitrification device system that is compliant with FDA good manufacturing and tissue-handling practices. Due to the withdrawal of hydrophobic plugged embryo straws from the industry, the vitrification procedure was modified to include an inner seal before the standard internal cotton plug.

تعديل التزجيج MicroSecure: وفعالة للغاية إجراء الحفظ بالتبريد آمنة وبسيطة والكيسات الأريمية الإنسان

Clinical embryo vitrification evolved with the development of unique vitrification devices in the 21st century and with the misconception that ultra-rapid ...

modified-microsecure-vitrification-safe-simple-highly-effective

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

11.9K Views.  Ovation Fertility. MicroSecure Vitrification was developed as a non-commercial, aseptic closed vitrification device system that is compliant with FDA good manufacturing and tissue-handling practices. Due to the withdrawal of hydrophobic plugged embryo straws from the industry, the vitrification procedure was modified to include an inner seal before the standard internal cotton plug.

Video: Modified MicroSecure Vitrification: A Safe, Simple and Highly Effective Cryopreservation Procedure for Human Blastocysts

Minimally Invasive Embryo Transfer and Embryo Vitrification at the Optimal Embryo Stage in Rabbit Model

Assisted reproductive techniques (ARTs), such as in vitro embryo culture or embryo cryopreservation, affect natural development patterns with perinatal and postnatal consequences. To ensure the innocuousness of ART applications, studies in animal models are necessary. In addition, as a last step, embryo development studies require evaluation of their capacity to develop full-term healthy offspring. Here, embryo transfer to the uterus is indispensable to perform any ARTs-related experiment.
The rabbit has been used as a model organism to study mammalian reproduction for over a century. In addition to its phylogenetic proximity to the human species and its small size and low maintenance cost, it has important reproductive characteristics such as induced ovulation, a chronology of early embryonic development similar to humans and a short gestation that allow us to study the consequences of ART application easily. Moreover, ARTs (such as intracytoplasmic sperm injection, embryo culture, or cryopreservation) are applied with suitable efficiency in this species.
Using the laparoscopic embryo transfer technique and the cryopreservation protocol presented in this article, we describe 1) how to transfer embryos through an easy, minimally invasive technique and 2) an effective protocol for long-term storage of rabbit embryos to provide time-flexible logistical capacities and the ability to transport the sample. The outcomes obtained after transferring rabbit embryos at different developmental stages indicate that morula is the ideal stage for rabbit embryo recovery and transfer. Thus, an oviductal embryo transfer is required, justifying the surgical procedure. Furthermore, rabbit morulae are successfully vitrified and laparoscopically transferred, proving the effectiveness of the described techniques.

Assisted reproductive techniques (ARTs) are in continuous evaluation to improve outcomes and reduce the associated risks. This manuscript describes a minimally invasive embryo transfer procedure with an efficient cryopreservation protocol that allows the use of rabbits as an ideal animal model of human reproduction.

نقل الاجنه طفيف التوغل والتزجيج الجنيني في مرحله الجنين الأمثل في نموذج الأرنب

Assisted reproductive techniques (ARTs), such as in vitro embryo culture or embryo cryopreservation, affect natural development patterns with perinatal ...

Human Blastocyst Biopsy and Vitrification

Blastocyst biopsy is performed to obtain a reliable genetic diagnosis during IVF cycles with preimplantation genetic testing. Then, the ideal workflow entails a safe and efficient vitrification protocol, due to the turnaround time of the diagnostic techniques and to transfer the selected embryo(s) on a physiological endometrium in a following natural cycle. A biopsy approach encompassing the sequential opening of the zona pellucida and retrieval of 5-10 trophectoderm cells (ideally 7-8) limits both the number of manipulations required and the exposure of the embryo to sub-optimal environmental conditions. After proper training, the technique was reproducible across different operators in terms of timing of biopsy (~8 min, ranging 3-22 min based on the number of embryos to biopsy per dish), conclusive diagnoses obtained (~97.5%) and live birth rates after vitrified-warmed euploid blastocyst transfer (&#62;40%). The survival rate after biopsy, vitrification and warming was as high as 99.8%. The re-expansion rate at 1.5 h from warming was as high as 97%, largely dependent on the timing between biopsy and vitrification (ideally &#8804;30 min), blastocyst morphological quality and day of biopsy. In general, it is better to vitrify a collapsed blastocyst; therefore, in non-PGT cycles, laser-assisted artificial shrinkage might be performed to induce embryo collapse prior to cryopreservation. The most promising future perspective is the non-invasive analysis of the IVF culture media after blastocyst culture as a putative source of embryonic DNA. However, this potential avant-garde is still under investigation and a reliable protocol yet needs to be defined and validated.

Blastocyst biopsy and vitrification are required to efficiently conduct preimplantation genetic testing. An approach entailing the sequential opening of the zona pellucida and retrieval of 7-8 trophectoderm cells in day 5-7 post-insemination limits both the number of manipulations required and the exposure of the embryo to sub-optimal environmental conditions.

خزعة الكيسة الكيسية البشرية والتزجيج

Blastocyst biopsy is performed to obtain a reliable genetic diagnosis during IVF cycles with preimplantation genetic testing. Then, the ideal workflow ...

Minimum Volume Vitrification of Immature Feline Oocytes

In wild animals&#8217; conservation programs, gamete banking is crucial to safeguard genetic resources of valuable individuals and rare species and to promote biodiversity preservation. In felids, most species are threatened with extinction, and domestic breeds are used as a model to increase the efficiency of protocols for germplasm banking. Among oocyte cryopreservation techniques, vitrification is more and more popular in human and veterinary assisted reproduction. Cryotop vitrification, which was at first developed for human oocytes and embryos, has demonstrated to be well-suited for cat oocytes. This method offers several advantages, such as the feasibility in field conditions and the speed of the procedure, which can be helpful when several samples need to be processed. However, the efficiency is strongly dependent on the operator&#8217;s skills, and intra- and inter-laboratory standardization are needed, as well as personnel training. This protocol describes minimum volume vitrification of immature feline oocytes on a commercial support in a step by step field-friendly protocol, from oocyte collection to warming. Following the protocol, preservation of oocyte integrity and viability at warming (as high as 90%) can be expected, although there is still room for improvement in post-warming maturation and embryonic development outcomes.

This manuscript describes a protocol for the minimum volume vitrification of immature cat oocytes with laboratory-made media on commercial supports. It covers every step from oocyte isolation from ex vivo gonads to vitrification and warming.

الحد الأدنى من حجم الحساسية من البويضات غير ناضجة القطط

In wild animals&#8217; conservation programs, gamete banking is crucial to safeguard genetic resources of valuable individuals and rare species and to ...

Vitrification of In Vitro Matured Oocytes Collected from Adult and Prepubertal Ovaries in Sheep

In livestock, in vitro embryo production systems can be developed and sustained thanks to the large number of ovaries and oocytes that can be easily obtained from a slaughterhouse. Adult ovaries always bear several antral follicles, while in pre-pubertal donors the maximal numbers of oocytes are available at 4 weeks of age, when ovaries bear peak numbers of antral follicles. Thus, 4 weeks old lambs are considered good donors, even if the developmental competence of prepubertal oocytes is lower compared to their adult counterpart. 
Basic research and commercial applications would be boosted by the possibility of successfully cryopreserving vitrified oocytes obtained from both adult and prepubertal donors. The vitrification of oocyte collected from prepubertal donors would also allow shortening the generation interval and thus increasing the genetic gain in breeding programs. However, the loss of developmental potential after cryopreservation makes mammalian oocytes probably one of the most difficult cell types to cryopreserve. Among the available cryopreservation techniques, vitrification is widely applied to animal and human oocytes. Despite recent advancements in the technique, exposures to high concentrations of cryoprotective agents as well as chilling injury and osmotic stress still induce several structural and molecular alterations and reduce the developmental potential of mammalian oocytes. Here, we describe a protocol for the vitrification of sheep oocytes collected from juvenile and adult donors and matured in vitro prior to cryopreservation. The protocol includes all the procedures from oocyte in vitro maturation to vitrification, warming and post-warming incubation period. Oocytes vitrified at the MII stage can indeed be fertilized following warming, but they need extra time prior to fertilization to restore damage due to cryopreservation procedures and to increase their developmental potential. Thus, post-warming culture conditions and timing are crucial steps for the restoration of oocyte developmental potential, especially when oocyte are collected from juvenile donors.

The protocol aims at providing a standard method for the vitrification of adult and juvenile sheep oocytes. It includes all the steps from the preparation of the in vitro maturation media to the post-warming culture. Oocytes are vitrified at the MII stage using Cryotop to ensure the minimum essential volume.

التزجيج في البويضات الناضجة في المختبر التي تم جمعها من المبيضين الكبار وprepubertal في الأغنام

In livestock, in vitro embryo production systems can be developed and sustained thanks to the large number of ovaries and oocytes that can be easily ...

Morphometric Protocol for the Objective Assessment of Blastocyst Behavior During Vitrification and Warming Steps

This article describes the noninvasive method of blastocyst morphometry based on time-lapse microphotography for the accurate monitoring of a blastocyst&#39;s volume changing during individual phases before and after vitrification. The method can be useful in searching for the most optimal timing of blastocyst exposure to different concentrations of cryoprotectants by observing blastocyst shrinkage and re-expansion in different pre- and post-vitrification phases. With this methodology, the blastocyst vitrification protocol can be optimized. For a better demonstration of the usefulness of this morphometric method, two different blastocyst preparation protocols for vitrification are compared; one with using an artificial blastocoel collapsing and one without this intervention before vitrification. Both blastocysts&#39; volume changes are followed by time-lapse microphotography and measured by photo-editing software tools. The measurements are taken every 20 seconds in previtrification phases and every 5 minutes in the post-warming period. The changes of the blastocyst dimensions per time unit are presented graphically in line diagrams. The results show a long equilibration previtrification phase in which the intact blastocyst first shrinks and then slowly refills the blastocoel, entering vitrification with a fluid-filled blastocoel. The artificially collapsed blastocyst remains in its shrunken stage through the entire equilibration phase. During the vitrification phase, it also does not change its volume. Since the blastocyst morphometry shows a constant volume of the artificially collapsed blastocysts during the previtrification step, it seems that this stage could be shorter. The described protocol provides many additional comparative parameters of blastocyst behavior during and after cryopreservation on the basis of the speed and intensity of the volume changes, the number of partial blastocoel contractions or total blastocyst collapses, and the time to a total blastocoel re-expansion or the time to hatching.

Here we present a time-lapse morphometric protocol to follow the intensity of blastocyst shrinkage and re-expansion during previtrification interventions and post-warming recovery. The application of the protocol is possible in in vitro fertilization laboratories equipped with time-lapse microscopes and is recommended in the development of an optimal blastocyst vitrification method.

بروتوكول شكلي للتقييم الموضوعي للسلوك الكيسة أثناء التزجيج والخطوات الاحترار

This article describes the noninvasive method of blastocyst morphometry based on time-lapse microphotography for the accurate monitoring of a ...

Bioengineering

Cryopreservation of Preimplantation Embryos of Cattle, Sheep, and Goats

Preimplantation embryos from cattle, sheep, and goats may be cryopreserved for short- or long-term storage. Preimplantation embryos consist predominantly of water, and the avoidance of intracellular ice crystal formation during the cryopreservation process is of paramount importance to maintain embryo viability. Embryos are placed into a hypertonic solution (1.4 &#x2013; 1.5 M) of a cryoprotective agent (CPA) such as ethylene glycol (EG) or glycerol (GLYC) to create an osmotic gradient that facilitates cellular dehydration. After embryos reach osmotic equilibrium in the CPA solution, they are individually loaded in the hypertonic CPA solution into 0.25 ml plastic straws for freezing. Embryos are placed into a controlled rate freezer at a temperature of -6&deg;C. Ice crystal formation is induced in the CPA solution surrounding the embryo, and crystallization causes an increase in the concentration of CPA outside of the embryo, causing further cellular dehydration. Embryos are cooled at a rate of 0.5&deg;C/min, enabling further dehydration, to a temperature of -34&deg;C before being plunged into liquid nitrogen (-196&deg;C). Cryopreserved embryos must be thawed prior to transfer to a recipient (surrogate) female. Straws containing the embryos are removed from the liquid nitrogen dewar, held in room temperature air for 3 to 5 sec, and placed into a 37&deg;C water bath for 25 to 30 sec. Embryos cryopreserved in GLYC are placed into a 1 M solution of sucrose for 10 min for removal of the CPA before transfer to a recipient (surrogate) female. Embryos cryopreserved in EG, however, may be directly transferred to the uterus of a recipient.

Preimplantation embryos may be cryopreserved after placement into a hypertonic cryoprotective solution to cause cellular dehydration. After equilibration, ice crystal formation is induced in the solution surrounding the embryo. Further dehydration occurs as the embryo is slowly cooled to subzero temperatures before plunging into liquid nitrogen for storage.

الحفظ بالتبريد سابق للانغراس الجنين من الأبقار والأغنام والماعز

Preimplantation embryos from cattle, sheep, and goats may be cryopreserved for short- or long-term storage.  Preimplantation embryos consist predominantly ...

Biology

Cryopreservation of Mouse Embryos by Ethylene Glycol-Based Vitrification

Cryopreservation of mouse embryos is a technological basis that supports biomedical sciences, because many strains of mice have been produced by genetic modifications and the number is consistently increasing year by year. Its technical development started with slow freezing methods in the 1970s1, then followed by vitrification methods developed in the late 1980s2. Generally, the latter technique is advantageous in its quickness, simplicity, and high survivability of recovered embryos. However, the cryoprotectants contained are highly toxic and may affect subsequent embryo development. Therefore, the technique was not applicable to certain strains of mice, even when the solutions are cooled to 4&deg;C to mitigate the toxic effect during embryo handling. At the RIKEN BioResource Center, more than 5000 mouse strains with different genetic backgrounds and phenotypes are maintained3, and therefore we have optimized a vitrification technique with which we can cryopreserve embryos from many different strains of mice, with the benefits of high embryo survival after vitrifying and thawing (or liquefying, more precisely) at the ambient temperature4.
Here, we present a vitrification method for mouse embryos that has been successfully used at our center. The cryopreservation solution contains ethylene glycol instead of DMSO to minimize the toxicity to embryos5. It also contains Ficoll and sucrose for prevention of devitrification and osmotic adjustment, respectively. Embryos can be handled at room temperature and transferred into liquid nitrogen within 5 min. Because the original method was optimized for plastic straws as containers, we have slightly modified the protocol for cryotubes, which are more easily accessible in laboratories and more resistant to physical damages. We also describe the procedure of thawing vitrified embryos in detail because it is a critical step for efficient recovery of live mice. These methodologies would be helpful to researchers and technicians who need preservation of mouse strains for later use in a safe and cost-effective manner.

An ethylene glycol-based vitrification method for mouse embryos is described. It is advantageous to other methods in its simplicity and low embryonic toxicity, and therefore can be broadly applicable to many strains of mice, including inbred and gene-modified mice.

الحفظ بالتبريد من أجنة الفئران التي التزجيج جلايكول الإثيلين ، واستنادا

Cryopreservation of mouse embryos is a technological basis that supports biomedical sciences, because many strains of mice have been produced by genetic ...

Bulk Droplet Vitrification for Primary Hepatocyte Preservation

Vitrification is a promising ice-free alternative for classic slow-freezing (at approximately 1 &#176;C/min) cryopreservation of biological samples. Vitrification requires extremely fast cooling rates to achieve transition of water into the glass phase while avoiding injurious ice formation. Although pre-incubation with cryoprotective agents (CPA) can reduce the critical cooling rate of biological samples, high concentrations are generally needed to enable ice-free cryopreservation by vitrification. As a result, vitrification is hampered by CPA toxicity and restricted to small samples that can be cooled fast. It was recently demonstrated that these inherent limitations can be overcome by bulk droplet vitrification. Using this novel method, cells are first pre-incubated with a low intracellular CPA concentration. Leveraging rapid osmotic dehydration, the intracellular CPA is concentrated directly ahead of vitrification, without the need to fully equilibrate toxic CPA concentrations. The cellular dehydration is performed in a fluidic device and integrated with continuous high throughput generation of large sized droplets that are vitrified in liquid nitrogen. This ice-free cryopreservation method with minimal CPA toxicity is suitable for large cell quantities and results in increased hepatocyte viability and metabolic function as compared to classical slow-freezing cryopreservation. This manuscript describes the methods for successful bulk droplet vitrification in detail.

This manuscript describes an ice-free cryopreservation method for large quantities of rat hepatocytes whereby primary cells are pre-incubated with cryoprotective agents at a low concentration and vitrified in large droplets.

التزجيج الحبريه السائبة للحفاظ علي الخلايا الكبدية الاساسيه

Vitrification is a promising ice-free alternative for classic slow-freezing (at approximately 1 &#176;C/min) cryopreservation of biological samples. ...

Fertility Preservation Through Oocyte Vitrification: Clinical and Laboratory Perspectives

Preserving female fertility is crucial in a multifunctional healthcare system that takes care of patients' future quality of life. Oocyte cryopreservation is recognized by several international scientific societies as the gold standard for fertility preservation in postpubertal women, for both medical and non-medical indications. The main medical indications are oncologic diseases, gynecologic diseases such as severe endometriosis, systemic diseases compromising the ovarian reserve, and genetic conditions involving premature menopause. This paper describes the whole clinical and laboratory work-up of a fertility preservation treatment by outlining recommendations for objective and evidence-based counseling. Furthermore, it focuses on the effectiveness of the procedure and describes the most appropriate strategies to fully exploit the ovarian reserve and maximize the number of oocytes retrieved in the shortest possible time. The evaluation of the ovarian reserve, the definition of an ideal stimulation protocol, as well as oocyte retrieval, denudation, and vitrification procedures have been detailed along with approaches to maximize their efficacy, efficiency, and safety.

Oocyte cryopreservation is recognized by several international scientific societies as the gold standard for fertility preservation in postpubertal women. Appropriate clinical and laboratory strategies ensure maximum efficacy, efficiency, and safety of fertility preservation treatments.

الحفاظ على الخصوبة من خلال التزجيج Oocyte: المنظورات السريرية والمختبرية

Preserving female fertility is crucial in a multifunctional healthcare system that takes care of patients' future quality of life. Oocyte cryopreservation ...

Medicine

<meta charset="utf8"></head><body>تقييم صلاحية البصيلات في أنسجة قشرة المبيض البشري المزجج

Vitrification of Ovarian Cortex Tissue to Achieve a Glassy State of Aggregation

Ovarian tissue cryopreservation (OTC) is an important option for fertility preservation. For patients whose gonadotoxic treatments cannot be postponed or for pre-pubertal girls, it is often the only option for fertility protection. Cryopreservation can be performed either by vitrification or by slow freezing. Slow freezing is currently the standard approach. An increasing number of studies indicate that vitrification can replace slow freezing in the state-of-the-art in vitro fertilization (IVF) laboratories, significantly improving thawing survival rates and simplifying the technical aspects of cryopreservation. A metal grid-based, high-throughput protocol for rapid vitrification of ovarian cortex tissue, suitable for clinical routine, is described. The sterilization of metal grids and liquid nitrogen ensures high quality, meeting good manufacturing practice (GMP) standards. Vitrification was conducted to ensure ultra-rapid cooling rates. Instead of slowly thawing, samples were rapidly warmed. To assess follicular viability, calcein staining was performed both prior to cryopreservation and after rapid warming. The successful application of vitrification and rapid warming using metal grids is reported. No significant differences in follicular viability were observed prior to vitrification and after rapid warming. These results substantiate the high capacity of tissue vitrification for clinical routine applications as a potential substitute for the widely used slow-freezing method.

<meta charset="utf8"></head><body>أضواء الكاتب: تعزيز الحفاظ على الخصوبة لدى مرضى السرطان من الإناث من خلال تزجيج أنسجة المبيض ونمو البصيلات في المختبر

A protocol for the vitrification of ovarian tissue, as an alternative cryopreservation method to the widely used slow freezing protocol, is presented.

تزجيج أنسجة قشرة المبيض لتحقيق حالة زجاجية من التراكم

Ovarian tissue cryopreservation (OTC) is an important option for fertility preservation. For patients whose gonadotoxic treatments cannot be postponed or ...