بتمويل جزئي من وزارة الزراعة الأميركية للأبحاث مشروع متعدد الدولة W - 2171 &quot;خلية جرثومة وتطور الجنين والتلاعب لتحسين الثروة الحيوانية&quot; هي بالتقدير والعرفان. هي أيضا من المواهب الفنية رايان كالاهان ، الذي أعد الرسومات الفنية للجزء الفيديو من هذه المادة ، بالتقدير والعرفان.

1. تقييم مدى ملاءمة الأجنة لحفظ البرودة 1 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ينبغي أن توضع العينات المأخوذة من الجهاز التناسلي للإناث المانحة الفردية إلى الجنين متساوي التوتر المتوسط ​​عقد لمدة 10 دقائق قبل التقييم باستخدام stereomicroscope. تكون على يقين من أن تبقي الأجنة الإناث من كل الجهات المانحة منفصلة عن بعضها البعض لتمكين الوالدين من تحديد النسل نقل الأجنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام التكبير المنخفضة (≤ 10X) ، وينبغي عزل عينات من الإناث المانحة الفردية في مجموعات منفصلة تتكون من بويضة غير مخصبة ، تتحول أجنة ، أو نوعية الأجنة قابلة للتحويل. الصف الجودة فقط 1 أو 2 في الأجنة morula المضغوط عبر مراحل الكيسة الموسع التنمية هي مناسبة لحفظ البرودة ، ويجب أن يتم تجاهل كل الآخرين (إلا الإناث المتلقي متزامن متوفرة للأجنة الجودة 3 درجة ونسبة الحمل بعد نقل ما يقرب من 25 يعتبر مقبولا -30 ٪). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فحص نوعية الصف 1 و 2 morula المضغوط من خلال توسيع الأجنة مرحلة الكيسة في التكبير ≥ 50X لضمان الشفافة زونا الجنين سليم وعدم وجود المواد (على سبيل المثال ، الخلايا ، المخاط) التمسك الشفافة زونا. ينبغي فصل أي الجنين مع الشفافة زونا متصدع أو مفقود أو مع وجود المواد الشفافة زونا ملتصق من أجنة أخرى ، وإما أن يتم تجاهل أو معالجتها بشكل منفصل. </li></ol> 2. غسل الأجنة للحد من احتمال انتقال عدوى الأمراض 2 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل المنطقة الشفافة ، أجنة سليمة في الحد الأدنى من حجم الجنين متساوي التوتر المتوسط ​​عقد في أول بئر المتوسطة الجنين الغسيل (مثل الفوسفات مخزنة المالحة دمجها مع المضادات الحيوية والألبومين في المصل البقري ، مصل العجل الوليد ، أو كحول البولي فينيل). إبقاء الأجنة الإناث من كل الجهات المانحة منفصلة ، وليس محاولة لغسل الأجنة أكثر من 10 في وقت واحد. نقل الأجنة في حجم أدنى من المتوسط ​​في كل غسل المتعاقبة لتحقيق تخفيف المسلسل ≥ 1:100 ، ويكون لاستخدام بعض نصائح التعامل مع الجنين العقيمة التي يتم تغييرها بين كل غسل المتعاقبة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الأجنة إلى 4 يغسل أكثر كما هو موضح في 2.1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا كان انتقال الأمراض الفيروسية من القلق ، وغسل الأجنة مرتين في محلول التربسين 0.25 ٪ ، وذلك لمدة التعرض المجموع الكلي لالتربسين لا يزيد على 90 ثانية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد يغسل التربسين اثنين ، غسل الأجنة 5 مرات اكثر في المتوسط ​​الجنين الغسيل كما هو موضح في 2.1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد غسل الجنين النهائي والأجنة في مكان عقد الجنين متساوي التوتر المتوسط. </li></ol> 3. التجفيف الأجنة قبل الحفظ بالتبريد 3 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ينبغي نقل الأجنة في الحد الأدنى من حجم الجنين متساوي التوتر المتوسط ​​عقد في حل مفرط التوتر (1،4-1،5 تركيز مولار) من عامل واق من البرد (CPA) مثل جلايكول الإثيلين أو الجلسرين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح للجلوس في الأجنة تجميد المتوسطة (CPA مفرط التوتر الحل) حتى تصل إلى التوازن التناضحي. لأن جلايكول الإثيلين يتخلل الخلايا الجنينية بسرعة أكبر مما يفعل الجلسرين ، مرات موازنة وعادة ما تكون أقل بالنسبة للأجنة في جلايكول الإثيلين (5 دقائق) مما كانت عليه في الجلسرين (10 دقيقة). ويمكن تحقيق جزء من موازنة هذا الوقت أثناء وبعد يتم تحميل الأجنة في القش (الموصوفة في الخطوة التالية). </li></ol> 4. تحميل الأجنة إلى مل بلاستيك سترو 0.25 للحفظ بالبرودة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نعلق نهاية المكونات القطن من قش البلاستيك 0.25 مل (11.5 سم طول العمل) إلى الجنين جهاز التحميل ، ونضح ما يقرب من 1.3 سم من محلول مفرط التوتر اتفاق السلام الشامل في قش المسمى بشكل صحيح. مجموعة متنوعة من الإجراءات العلامات موجودا ، بما في ذلك استخدام التسميات المطبوعة المرفقة إما القش المكونات الختم أو القش لآخر اتصال مع محول القش. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة القش من حل سلطة التحالف المؤقتة ، ونضح ما يقرب من 0.15 سم من الهواء لخلق فقاعة الهواء الصغيرة داخل القش. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح جنين واحد في حوالي 0.8 سم من محلول مفرط التوتر اتفاق السلام الشامل في القش. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة القش من حل سلطة التحالف المؤقتة ونضح ما يقرب من 0.15 سم من الهواء لإنشاء الثاني فقاعة الهواء الصغيرة داخل القش (فقاعات الهواء تعمل على عزل فعليا الجنين داخل القش). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح حوالي 9.1 سم من حل سلطة التحالف المؤقتة لملء تماما من القش ، ويجري معينة لجذب حجم كاف من حل سلطة التحالف المؤقتة لترطيب فينيل (PVC) المسحوق الموجود داخل القطن نهاية المكونات من القش. الحل CPA يؤدي إلى مسحوق هلام بولي كلوريد الفينيل وختم بأن نهاية القش. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ختم الطرف الآخر من القش مع مسحوق البلاستيك ، وسدادات من البلاستيك الختم القش ، أو السداده الحرارة. </li></ol> 5. وضع الجنين في سعر آلة التحكم تجميد الأجنة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قد تكون مبرمجة إما حمام الميثانول أو آلات تجميد السائل بخار النيتروجين عن الحفظ بالتبريد سابق للانغراس الأجنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحميل القش التي تحتوي على جنين<html> السراج في جهاز التجميد الذي تم تبريده في درجة الحرارة من درجة حرارة الهواء المحيط إلى -6 درجة مئوية. القش تحميل القطن حتى نهاية المكونات (ما لم يتم استخدام سدادات بلاستيكية الختم القش أو محولات القش ، والتي وضعت في نهاية حالة المكونات الأقطان). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح للجلوس على الأجنة هذه الدرجة لمدة لا تقل عن 2 دقيقة قبل المتابعة. </li></ol> 6. زراعة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بمجرد أن يبرد الأجنة إلى -6 درجة مئوية ، واستخدام زوج من الملاقط فائق التبريد في النيتروجين السائل (أو عصا القطن ذات الرؤوس منغمسين في النيتروجين السائل) للحث على تكوين بلورات الثلج في حل سلطة الائتلاف المؤقتة داخل القش عن طريق لمس ملقط (أو القطن يميل العصا) إلى عمود من الحل إما فوق أو تحت الجنين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فإن الماء في حل بلورة اتفاق السلام الشامل في المنطقة تتعرض لالنيتروجين السائل ، وبلورات الجليد سوف تمتد الى عمود من حل سلطة التحالف المؤقتة على الفور المحيطة الجنين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عقد أجنة في بذر درجة الحرارة لمدة 10 دقيقة قبل تبريد أخرى. </li></ol> 7. استمرار الجفاف الجنين <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بارد الأجنة بمعدل 0.5 C. C / دقيقة لتصل إلى درجة حرارة -34 ° ° هذا المعدل التبريد مهم لضمان استمرار الجفاف الجنين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عقد أجنة في -34 لمدة 10 دقائق درجة مئوية قبل تغرق الأجنة في النيتروجين السائل (-196 درجة مئوية). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> cryopreserved مكان الأجنة إلى القدح المسمى بشكل مناسب (مليئة النيتروجين السائل) تعلق على قصب المسمى بشكل مناسب ، ووضع العصا في علبة من ديوار النيتروجين السائل لتخزين قصيرة أو طويلة الأجل. </li></ol> 8. ذوبان الأجنة Cryopreserved <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سحب علبة في عنق ديوار النيتروجين السائل ، وضمان أن تظل العلبة تحت خط الصقيع في ديوار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> موقع القصب يحتوي على الجنين أن إذابة ، وبسرعة وبدقة إزالة القش من القدح ، ويجري بعض القش بعدم دافئة أخرى في القدح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الاستمرار على القش في الهواء لمدة 3-5 ثواني (للحد من وقوع لالشفافة زونا تصدع 4) ، ثم تغرق في حمام مائي 37 ° C ل25-30 ثانية إضافية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة القش من حمام الماء ، مسح القشة (الحرص على عدم تلطيخ تحديد الجنين على القش) ، واستخدام جهاز لقطع القش القصاصة قبالة نهاية المكونات غير القطن من القش (إذا أغلقت الحرارة باستخدام مسحوق أو PVC ) ، أو إزالة المكونات بعناية ختم البلاستيك ، وإما : <ol type="a" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحميل القش الى جهاز نقل الجنين ونقل في أسرع وقت ممكن إلى مستلم الجنين متزامن (ولكن فقط إذا كان الجنين به cryopreserved جلايكول الإثيلين واتفاق السلام الشامل) ، أو </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عقد نهاية مفتوحة لأكثر من طبق القش التي تحتوي على تركيز 1.0 مولار من السكروز (مركب غير تتخلل) ، واستخدم مقصا لقطع القطن نهاية المكونات من القش. وينبغي أن محتويات القش تتدفق بحرية الى حل السكروز ، ولكن دفع عمود صغير من الهواء من خلال القش قد يكون ضروريا في حال وجود أي وسيط المتبقية داخل القش. يسمح للبقاء في الأجنة حل سكروز لمدة 10 دقائق ، ثم نقل الأجنة في جنين عقد متساوي التوتر المتوسط ​​لمدة 10 دقيقة. تقييم الأجنة في مرحلة ما بعد ذوبان الجليد ، تحميل في قش جديدة ، ونقلها إلى المتلقي الإناث مناسبة. </li></ol></li></ol> 9. ممثل النتائج : قد مجموعة متنوعة من العوامل التي تؤثر على الحمل والعيش معدلات المواليد الناتجة من نقل أجنة مجمدة سابق للانغراس إذابة للإناث المتلقي متزامن 5. أجنة في مراحل النمو أقل تقدما من morula المضغوط أو أكثر تقدما من الكيسة توسعت في كثير من الأحيان لا تنجو من عملية الحفظ بالتبريد وكذلك الأجنة في morula المدمجة ، الكيسة في وقت مبكر ، الكيسة ، ومراحل الكيسة الموسع التطور الجنيني. أجنة من الدرجة 1 و 2 جودة المحصول ارتفاع معدلات الحمل في مرحلة ما بعد ذوبان الجليد مما تفعل الجودة الصف 3 أجنة (التي عادة لا cryopreserved بسبب انخفاض معدلات الحمل في مرحلة ما بعد ذوبان الجليد). أساء الأجنة خلال تجميد الجنين أو الجنين ذوبان الإجراءات من المرجح أن تظهر انخفاض معدلات الحمل. نقل الأجنة الإناث إلى المتلقي الذي دقي دورات غير متزامنة مع تلك الأنثى المانحة تنتج عادة انخفاض معدلات الحمل. الأجنة المنتجة في المختبر أو التلاعب بها بطريقة ما (على سبيل المثال ، تحتاج فحص أو شطر) العائد عادة انخفاض معدلات الحمل. في ظل ظروف مثلى ، بعد الحصول على معدلات الحمل نقل المجمدة المذابة - الماعز في الأجنة الحية المستمدة عادة 60-70 ٪ 6،7 في الماشية ، 65-75 ٪ في الأغنام 8،9،10،11 ، و60-70 ٪ في 12،13،14،15. وبالمثل ، فإن معدلات الحمل تم الحصول عليها بعد نقل مجمدة مذوبة في المختبر أجنة المنتجة عادة 40-50 ٪ في الأبقار 6،16 ، 25-35 ٪ في الاغنام 17 و 30-40 ٪ في الماعز 18. بلي 1 &quot;/&gt; الجدول 1. معدلات الحمل المتوقعة التالية نقل أجنة مجمدة إذابة الأنواع المحلية من تربية الحيوانات المجترة للإناث المتلقي متزامن.

<ol>
	<li>Lindner, G. M., Wright, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bovine+embryo+morphology+and+evaluation.">Bovine embryo morphology and evaluation.</a> Theriogenology. 20, 407-416 (1983).</li><li>Stringfellow, D. A., Stringfellow, D. A., Givens, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recommendations+for+the+sanitary+handling+of+in+vivo+derived+embryos.">Recommendations for the sanitary handling of in vivo derived embryos.</a> Manual of the International Embryo Transfer Society. , 65-68 (2010).</li><li>Youngs, C. R., Leibo, S. P., Godke, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryo+cryopreservation+in+domestic+mammalian+livestock+species.">Embryo cryopreservation in domestic mammalian livestock species.</a> CAB Reviews: Perspectives in Agriculture, Veterinary Science, Nutrition and Natural Resources. , (2010).</li><li>Rall, W. F., Meyer, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zona+fracture+damage+and+its+avoidance+during+the+cryopreservation+of+mammalian+embryos.">Zona fracture damage and its avoidance during the cryopreservation of mammalian embryos.</a> Theriogenology. 31, 683-692 (1989).</li><li>Spell, A. R., Beal, W. E., Corah, L. R., Lamb, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluating+recipient+and+embryo+factors+that+affect+pregnancy+rates+of+embryo+transfer+in+beef+cattle.">Evaluating recipient and embryo factors that affect pregnancy rates of embryo transfer in beef cattle.</a> Theriogenology. 56, 287-297 (2001).</li><li>Hasler, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+current+status+of+oocyte+recovery,+in+vitro+embryo+production,+and+embryo+transfer+in+domestic+animals,+with+an+emphasis+on+the+bovine.">The current status of oocyte recovery, in vitro embryo production, and embryo transfer in domestic animals, with an emphasis on the bovine.</a> J. Anim. Sci. 76, 52-74 (1998).</li><li>Hasler, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+affecting+frozen+and+fresh+embryo+transfer+pregnancy+rates+in+cattle.">Factors affecting frozen and fresh embryo transfer pregnancy rates in cattle.</a> Theriogenology. 56, 1401-1415 (2001).</li><li>Heyman, Y., Vincent, C., Garnier, V., Cognie, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transfer+of+frozen-thawed+embryos+in+sheep.">Transfer of frozen-thawed embryos in sheep.</a> Veterinary Record. 120, 83-85 (1987).</li><li>McGinnis, L. K., Duplantis, S. C., Youngs, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryopreservation+of+sheep+embryos+using+ethylene+glycol.">Cryopreservation of sheep embryos using ethylene glycol.</a> Anim. Reprod. Sci. 30, 273-280 (1993).</li><li>Shelton, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+affecting+viability+of+fresh+and+frozen-thawed+sheep+demi-embryos.">Factors affecting viability of fresh and frozen-thawed sheep demi-embryos.</a> Theriogenology. 37, 713-721 (1992).</li><li>Bettencourt, E. M., Bettencourt, C. M., Silva, J. C. E., Ferreira, P., Matos, C. P., Ram&#227;o, R. J., Rocha, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fertility+rates+following+the+transfer+of+ovine+embryos+cryopreserved+using+three+protocols.">Fertility rates following the transfer of ovine embryos cryopreserved using three protocols.</a> Small Ruminant Research. 82, 112-116 (2009).</li><li>Chemineau, P., Procureur, R., Cogni&#233;, Y., Lef&#232;vre, P. C., Locatelli, A., Chupin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production,+freezing+and+transfer+of+embryos+from+a+bluetongue-infected+goat+herd+without+bluetongue+transmission.+Theriogenology.">Production, freezing and transfer of embryos from a bluetongue-infected goat herd without bluetongue transmission. Theriogenology.</a> 26, 279-290 (1986).</li><li>Baril, B., Casamitjana, P., Perrin, J., Vallet, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryo+production+freezing+and+transfer+in+Angora,+Alpine+and+Saanen+goats.">Embryo production freezing and transfer in Angora, Alpine and Saanen goats.</a> Zuchthyg. 24, 101-115 (1989).</li><li>Guignot, F., Bouttier, A., Baril, G., Salvetti, P., Pignon, P., Beckers, J. F., Touz&#233;, J. L., Cogni&#233;, J., Traldi, A. S., Cogni&#233;, Y., Mermillod, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+vitrification+method+allowing+direct+transfer+of+goat+embryos.">Improved vitrification method allowing direct transfer of goat embryos.</a> Theriogenology. 66, 1004-1011 (2006).</li><li>Nowshari, M. A., Holtz, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+culture+of+goat+morulae+to+blastocysts+before+freezing.">In vitro culture of goat morulae to blastocysts before freezing.</a> Theriogenology. 44, 983-988 (1995).</li><li>Machatkova, M., Hulinska, P., Reckova, Z., Hanzalova, K., Spanihelova, J., Pospisil, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+production+of+embryos+from+high+performance+cows+and+the+development+of+frozen-thawed+embryos+after+transfer:+a+field+study.">In vitro production of embryos from high performance cows and the development of frozen-thawed embryos after transfer: a field study.</a> Veterinarni Medicina. 53, 358-364 (2008).</li><li>Mart&#237;nez, A. G., Valc&#225;rcel, A., Furnus, C. C., de Matos, D. G., Iorio, G., de las Heras, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryopreservation+of+in+vitro-produced+ovine+embryos.">Cryopreservation of in vitro-produced ovine embryos.</a> Small Ruminant Research. 63, 288-296 (2006).</li><li>Han, Y., Meintjes, M., Graff, K., Denniston, R., Zhang, L., Ziomek, C., Godke, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caprine+offspring+born+from+fresh+and+frozen-thawed+in+vitro-produced+embryos.">Caprine offspring born from fresh and frozen-thawed in vitro-produced embryos.</a> Veterinary Record. 149, 714-716 (2001).</li><li>Leibo, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+one-step+method+for+direct+nonsurgical+transfer+of+frozen-thawed+bovine+embryos.">A one-step method for direct nonsurgical transfer of frozen-thawed bovine embryos.</a> Theriogenology. 21, 767-790 (1984).</li><li>Voelkel, S. A., Hu, Y. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+ethylene+glycol+as+a+cryoprotectant+for+bovine+embryos+allowing+direct+transfer+of+frozen-thawed+embryos+to+recipient+females.">Use of ethylene glycol as a cryoprotectant for bovine embryos allowing direct transfer of frozen-thawed embryos to recipient females.</a> Theriogenology. 37, 687-697 (1992).</li><li>Rall, W. F., Fahy, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ice-free+cryopreservation+of+mouse+embryos+at+-196&#176;C+by+vitrification.">Ice-free cryopreservation of mouse embryos at -196&#176;C by vitrification.</a> Nature. 313, 573-575 (1985).</li><li>Notter, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+importance+of+genetic+diversity+in+livestock+populations+of+the+future.">The importance of genetic diversity in livestock populations of the future.</a> J. Anim. Sci. 77, 61-69 (1999).</li><li>Thibier, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Data+retrieval+committee+statistics+of+embryo+transfer-+year+2008.+The+worldwide+statistics+of+embryo+transfers+in+farm+animals.">Data retrieval committee statistics of embryo transfer- year 2008. The worldwide statistics of embryo transfers in farm animals.</a> Embryo Transfer Newsletter. 27, 13-19 (2009).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

تتكون في الغالب لأن الأجنة من المياه ، فمن الأهمية بمكان أن تكون الأجنة سابق للانغراس المجففة والمبردة كاف ببطء وفقا لبروتوكول الموصوفة هنا لتجنب تشكيل الخلايا الكريستال الجليد. مرة واحدة في عملية التبريد قد بدأت ، من المهم للحفاظ على اتجاه وتغير درجات الحرارة وتجنب التقلبات في درجات الحرارة. الشروع في تكوين بلورات الثلج (&quot;بذور&quot;) في درجة حرارة مناسبة لإيجاد حل سلطة الائتلاف المؤقتة محددة أمر بالغ الأهمية. تعديلات على هذا التبريد البطيء / سريعة الذوبان لطريقة الحفظ بالتبريد سابق للانغراس الجنين وتشمل طريقة من خطوة واحدة (حيث العمود الأخير من المتوسط ​​تحميلها في القش هو الحل بدلا من السكروز CPA) (19) وأسلوب النقل المباشر (حيث الأجنة المجمدة في غليكول الاثيلين وإذابة ونقل مباشرة إلى رحم الأنثى المتلقية دون إزالة أول جلايكول الإثيلين من الجنين) 20. لتقليل حجم غليكول الاثيلين أودع في رحم النقل المباشر (DT) الأنثى المتلقية ، فإنه من المستحسن لملء القش 0.25 مل 6 سم مع عقد المتوسطة قبل المتابعة كما هو موضح سابقا. وتجدر الإشارة إلى أن معيار طوعي موجود في صناعة نقل الجنين التجارية التي ينبغي تجميد الأجنة لDT cryopreserved سابق للانغراس في اللون الأصفر وتخزينها في قش أصفر اللون في كؤوس ديوار النيتروجين السائل. صناعة تجارية كما متطلبات وضع العلامات المحددة لجميع الأجنة cryopreserved التي ينبغي اتباعها. بديل واحد إلى هذا الأسلوب هو التزجيج 21 ، وهي طريقة غير متوازنة من حيث الحفظ بالتبريد هو تبريد أكثر مركزة للغاية حل سلطة الائتلاف المؤقتة (6-8 M) بسرعة فائقة مما تسبب في حل سلطة الائتلاف المؤقتة إلى التغيير من السائل إلى حالة &quot;زجاجي&quot; دون الجليد تشكيل الكريستال. التزجيج هو المرجح أكثر ملاءمة لحفظ البرودة الأجنة التي هي أقل تقدما تنمويا من morula المضغوط بسبب حساسيتها لزيادة درجة الحرارة. هذه التقنية قد طلب الحفاظ على الموارد الوراثية الفريدة 22 ، فضلا عن الدولية التجارية جنين حيث تم نقل صناعة cryopreserved أكثر من 55 ٪ من حوالي 500،000 سابق للانغراس الأجنة البقرية نقل في السنة التقويمية 2008 (23).

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> اسم كاشف </th><th> شركة </th><th> فهرس العدد </th><th> تعليقات (اختياري) </th></tr><tr><td> BioLife تجميد المتوسطة </td><td> Agtech ، وشركة </td><td> C18 ، C18A </td><td> غليكول الاثيلين 1.5 M </td></tr><tr><td> Emcare تجميد جلايكول الإثيلين الحل </td><td> ICPBio الاستنساخ </td><td> IC8 ، IC10 </td><td> غليكول الاثيلين 1.5 M </td></tr><tr><td> ViGro تجميد جلايكول الإثيلين زائد </td><td> Bioniche صحة الحيوان </td><td> EVM835 </td><td> غليكول الاثيلين 1.5 M </td></tr><tr><td> Emcare تجميد الجلسرين 10 ٪ الحل </td><td> ICPBio الاستنساخ </td><td> IC12 </td><td> 1.34 M الجلسرين </td></tr><tr><td> Emcare السكروز M 1 ذوبان الجليد </td><td> ICPBio الاستنساخ </td><td> IC16 </td><td> 1.0 M السكروز </td></tr><tr><td> ViGro خطوة واحدة ذوبان الجليد </td><td> Bioniche صحة الحيوان </td><td> EVM247 ، EVM847 </td><td> 1.0 M السكروز </td></tr><tr><td> ViGro أذاب 1-2-3 زائد </td><td> Bioniche صحة الحيوان </td><td> EVM248 ، EVM848 </td><td> 5 ٪ ، 2.5 ٪ ، 0 ٪ الجلسرين مع 0.5 ، 0.5 ، 0.6 ٪ سكروز </td></tr><tr><td> Emcare CSU ذوبان طقم </td><td> ICPBio الاستنساخ </td><td> IC20 </td><td> 6 ٪ و 3 ٪ ، 0 ٪ والسكروز الجلسرين 10.3 ٪ </td></tr><tr><td> BioLife عقد نقل والمتوسطة </td><td> Agtech ، وشركة </td><td> C15 ، C15A </td><td> تعديل في برنامج تلفزيوني مع جيش صرب البوسنة 0.4 ٪ (ألبومين المصل البقري) </td></tr><tr><td> Emcare عقد حل </td><td> ICPBio الاستنساخ </td><td> IC2 ، IC4 ، IC6 </td><td> 0.4 ٪ BSA (ألبومين المصل البقري) العازلة المماسح و(zwitterions الخاملة) </td></tr><tr><td> بالإضافة إلى عقد ViGro </td><td> Bioniche صحة الحيوان </td><td> EVM024 ، EVM824 </td><td></td></tr><tr><td> SYNGRO القابضة المتوسطة </td><td> Bioniche صحة الحيوان </td><td> ESM024 ، ESM224 ، ESM828 </td><td> يحتوي hyaluronan ؛ لا توجد منتجات ذات المنشأ الحيواني </td></tr><tr><td> BioLife تعديل D - PBS </td><td> Agtech ، وشركة </td><td> C06 </td><td> الفوسفات مخزنة في تعديل Dulbecco المالحة </td></tr><tr><td> BioLife BSA الكسر الخامس </td><td> Agtech ، وشركة </td><td> B09 </td><td> الأبقار مصل الزلال مجفف بالتجميد ، جزء الخامس </td></tr><tr><td> BioLife مضاد فطري للمضادات الحيوية </td><td> Agtech ، وشركة </td><td> B01 </td><td> الأمفوتريسين - B ، G البنسلين ، سلفات الستربتوميسين </td></tr><tr><td> BioLife التربسين طقم </td><td> Agtech ، وشركة </td><td> C22A </td><td> 25 غ مجفد التربسين ، والمياه المعقمة ، معقمة D - PBS </td></tr></tbody></table><table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> اسم المعدات </th><th> شركة </th><th> فهرس العدد </th><th> تعليقات (اختياري) </th></tr><tr><td> بيول بارد الفريزر معدل للرقابة </td><td> نظم FTS </td><td> رابعا -40 ق. </td><td> الميثانول حمام الفريزر </td></tr><tr><td> تجميد المجمد التحكم معدل للرقابة </td><td> Cryologic </td><td> CL2200 </td><td> النيتروجين السائل المجمد </td></tr></tbody></table>

cryopreservation of preimplantation embryos of cattle, sheep, and goats

قد يكون سابق للانغراس الأجنة cryopreserved من الأبقار والأغنام والماعز لتخزين قصيرة أو طويلة الأجل. سابق للانغراس الأجنة وتتكون أساسا من الماء ، وتجنب تشكيل الكريستال الجليد بين الخلايا أثناء عملية الحفظ بالتبريد هو من أهمية قصوى للحفاظ على سلامة الجنين. توضع الأجنة في حل مفرط التوتر (1،4-1،5 م) من عامل واق من البرد (CPA) مثل جلايكول الإيثيلين (EG) أو الجلسرين (GLYC) لإنشاء التدرج التناضحي التي تسهل الجفاف الخلوية. بعد الوصول إلى توازن التناضحي الأجنة في حل سلطة الائتلاف المؤقتة ، التي يتم تحميلها منفردة في حل سلطة الائتلاف المؤقتة مفرط التوتر في قش البلاستيك 0.25 مل التجميد. توضع الأجنة في الفريزر معدل تسيطر على درجة حرارة مئوية -6 وبفعل الجليد تشكيل الكريستال في حل سلطة الائتلاف المؤقتة التي تحيط بالجنين ، وتبلور يسبب زيادة في تركيز سلطة الائتلاف المؤقتة خارج الجنين ، مما تسبب في مزيد من الجفاف الخلوية. ويتم تبريد أجنة بمعدل 0.5 درجة دقيقة / C ، مما يتيح المزيد من الجفاف ، وإلى درجة حرارة -34 درجة مئوية قبل أن سقطت في النيتروجين السائل (-196 درجة مئوية). يجب إذابة Cryopreserved الأجنة قبل نقلها إلى المتلقي (مركب) من الإناث. تتم إزالة القش التي تحتوي على أجنة من ديوار النيتروجين السائل ، الذي عقد في الهواء درجة حرارة الغرفة لمدة 3 إلى 5 ثوان ، ووضع في حمام الماء 37 درجة مئوية لمدة 25 إلى 30 ثانية. cryopreserved الأجنة في GLYC توضع في حل M 1 من السكروز لمدة 10 دقيقة لإزالة اتفاق السلام الشامل قبل نقلها إلى المتلقي (مركب) من الإناث. الأجنة في cryopreserved المصري ، ومع ذلك ، يمكن أن تنتقل مباشرة إلى الرحم من المتلقي.

Watch this Scientific Journal Video about Cryopreservation of Preimplantation Embryos of Cattle, Sheep, and Goats at JoVE.com

Cryopreservation of Preimplantation Embryos of Cattle, Sheep, and Goats

قد يكون سابق للانغراس الأجنة cryopreserved بعد التنسيب إلى حل واق من البرد مفرط التوتر يسبب الجفاف الخلوية. بعد موازنة ، يتم بفعل الجليد تشكيل الكريستال في حل المحيطة الجنين. مزيد من الجفاف كما يحدث يبرد ببطء لدرجات حرارة تحت الصفر الجنين قبل سقوطها في النيتروجين السائل للتخزين.

الحفظ بالتبريد سابق للانغراس الجنين من الأبقار والأغنام والماعز

Preimplantation embryos from cattle, sheep, and goats may be cryopreserved for short- or long-term storage.  Preimplantation embryos consist predominantly ...

cryopreservation-of-preimplantation-embryos-of-cattle-sheep-and-goats

Research

JoVE Journal

Biology

30.5K Views.  Iowa State University. قد يكون سابق للانغراس الأجنة cryopreserved بعد التنسيب إلى حل واق من البرد مفرط التوتر يسبب الجفاف الخلوية. بعد موازنة ، يتم بفعل الجليد تشكيل الكريستال في حل المحيطة الجنين. مزيد من الجفاف كما يحدث يبرد ببطء لدرجات حرارة تحت الصفر الجنين قبل سقوطها في النيتروجين السا?...

Video: Cryopreservation of Preimplantation Embryos of Cattle, Sheep, and Goats

Dissection of 6.5 dpc Mouse Embryos

Analysis of gene expression patterns during early stages of mammalian embryonic development can provide important clues about gene function, cell-cell interaction and signaling mechanisms that guide embryonic patterning. However, dissection of the mouse embryo from the decidua shortly after implantation can be a challenging procedure, and detailed step-by-step documentation of this process is lacking.

Here we demonstrate how post-implantation (6.5 dpc) embryos are isolated by first dissecting the uterus of a pregnant mouse (detection of the vaginal plug was designated day 0.5 poist coitum) and subsequently dissecting the embryo from maternal decidua. The dissection of Reichert's membrane is described as well as the removal of the ectoplacental cone.

Isolation of postimplantation-stage embryos allows one to study gene patterning and analyze cell-lineage decision making processes during embryonic development, but proper dissection of the early embryo can be challenging. This protocol describes a method for isolating early primitive-streak-stage embryos (~6.5 days post coitum [dpc]).

تشريح 6.5 أجنة الفئران DPC

Analysis of gene expression patterns during early stages of mammalian embryonic development can provide important clues about gene function, cell-cell ...

Plastic Embedding and Sectioning of Xenopus laevis Embryos

Plastic sections maintain true tissue morphology in thin sections of tissue that can be immunostained with fluorescent secondary antibodies, making this method more useful than paraffin-embedded or frozen sections for many types of tissue. The method for staining, plastic embedding, and sectioning is demonstrated in this video.

البلاستيك وتضمينها Sectioning الجنين المورق القيطم

Collection and Cryopreservation of Hamster Oocytes and Mouse Embryos

Embryos and oocytes were first successfully cryopreserved more than 30 years ago, when Whittingham et al. 1 and Wilmut 2 separately described that mouse embryos could be frozen and stored at -196 &deg;C and, a few years later, Parkening et al. 3 reported the birth of live offspring resulting from in vitro fertilization (IVF) of cryopreserved oocytes. Since then, the use of cryopreservation techniques has rapidly spread to become an essential component in the practice of human and animal assisted reproduction and in the conservation of animal genetic resources. Currently, there are two main methods used to cryopreserve oocytes and embryos: slow freezing and vitrification. A wide variety of approaches have been used to try to improve both techniques and millions of animals and thousands of children have been born from cryopreserved embryos. However, important shortcomings associated to cryopreservation still have to be overcome, since ice-crystal formation, solution effects and osmotic shock seem to cause several cryoinjuries in post-thawed oocytes and embryos. Slow freezing with programmable freezers has the advantage of using low concentrations of cryoprotectants, which are usually associated with chemical toxicity and osmotic shock, but their ability to avoid ice-crystal formation at low concentrations is limited. Slow freezing also induces supercooling effects that must be avoided using manual or automatic seeding 4. In the vitrification process, high concentrations of cryoprotectants inhibit the formation of ice-crystals and lead to the formation of a glasslike vitrified state in which water is solidified, but not expanded. However, due to the toxicity of cyroprotectants at the concentrations used, oocytes/embryos can only be exposed to the cryoprotectant solution for a very short period of time and in a minimum volume solution, before submerging the samples directly in liquid nitrogen 5. In the last decade, vitrification has become more popular because it is a very quick method in which no expensive equipment (programmable freezer) is required. However, slow freezing continues to be the most widely used method for oocyte/embryo cryopreservation. In this video-article we show, step-by-step, how to collect and slowly freeze hamster oocytes with high post-thaw survival rates. The same procedure can also be applied to successfully freeze and thaw mouse embryos at different stages of preimplantation development.

In this video-article we present a step-by-step demonstration on how to collect and cryopreserve hamster oocytes with high post-thaw survival rates. The same procedure can also be applied to successfully freeze and thaw mouse embryos at different stages of preimplantation development.

جمع والحفظ بالتبريد من البويضات والأجنة الهامستر ماوس

Embryos and oocytes were first successfully cryopreserved more than 30 years ago, when Whittingham et al. 1 and Wilmut 2 separately described that mouse ...

Upright Imaging of Drosophila Embryos

Several well-known morphogenetic gradients and cellular movements occur along the dorsal/ventral axis of the Drosophila embryo. However, the current techniques used to view such processes are somewhat limited. The following protocol describes a new technique for mounting fixed and labeled Drosophila embryos for coronal viewing with confocal imaging. This method consists of embedding embryos between two layers of glycerin jelly mounting media, and imaging jelly strips positioned upright. The first step for sandwiching the embryos is to make a thin bedding of glycerin jelly on a slide. Next, embryos are carefully aligned on this surface and covered with a second layer of jelly. After the second layer is solidified, strips of jelly are cut and flipped upright for imaging. Alternatives are described for visualizing the embryos depending upon the type of microscope stand to be used. Since all cells along the dorsal-ventral axis are imaged within a single confocal Z-plane, our method allows precise measurement and comparison of fluorescent signals without photobleaching or light scattering common to 3D reconstructions of longitudinally mounted embryos.

Upright Imaging of Drosophila Embryos

Here we present a mounting protocol for stained Drosophila embryos in an upright position that allows imaging of cross-sections using Confocal microscopy.

تستقيم تصوير ذبابة الفاكهة الأجنة

Several well-known morphogenetic gradients and cellular movements occur along the dorsal/ventral axis of the Drosophila embryo. However, the current ...

Cryopreservation of Mouse Embryos by Ethylene Glycol-Based Vitrification

Cryopreservation of mouse embryos is a technological basis that supports biomedical sciences, because many strains of mice have been produced by genetic modifications and the number is consistently increasing year by year. Its technical development started with slow freezing methods in the 1970s1, then followed by vitrification methods developed in the late 1980s2. Generally, the latter technique is advantageous in its quickness, simplicity, and high survivability of recovered embryos. However, the cryoprotectants contained are highly toxic and may affect subsequent embryo development. Therefore, the technique was not applicable to certain strains of mice, even when the solutions are cooled to 4&deg;C to mitigate the toxic effect during embryo handling. At the RIKEN BioResource Center, more than 5000 mouse strains with different genetic backgrounds and phenotypes are maintained3, and therefore we have optimized a vitrification technique with which we can cryopreserve embryos from many different strains of mice, with the benefits of high embryo survival after vitrifying and thawing (or liquefying, more precisely) at the ambient temperature4.
Here, we present a vitrification method for mouse embryos that has been successfully used at our center. The cryopreservation solution contains ethylene glycol instead of DMSO to minimize the toxicity to embryos5. It also contains Ficoll and sucrose for prevention of devitrification and osmotic adjustment, respectively. Embryos can be handled at room temperature and transferred into liquid nitrogen within 5 min. Because the original method was optimized for plastic straws as containers, we have slightly modified the protocol for cryotubes, which are more easily accessible in laboratories and more resistant to physical damages. We also describe the procedure of thawing vitrified embryos in detail because it is a critical step for efficient recovery of live mice. These methodologies would be helpful to researchers and technicians who need preservation of mouse strains for later use in a safe and cost-effective manner.

An ethylene glycol-based vitrification method for mouse embryos is described. It is advantageous to other methods in its simplicity and low embryonic toxicity, and therefore can be broadly applicable to many strains of mice, including inbred and gene-modified mice.

الحفظ بالتبريد من أجنة الفئران التي التزجيج جلايكول الإثيلين ، واستنادا

Cryopreservation of mouse embryos is a technological basis that supports biomedical sciences, because many strains of mice have been produced by genetic ...

Isolation and Purification of Kinesin from Drosophila Embryos

Motor proteins move cargos along microtubules, and transport them to specific sub-cellular locations. Because altered transport is suggested to underlie a variety of neurodegenerative diseases, understanding microtubule based motor transport and its regulation will likely ultimately lead to improved therapeutic approaches. Kinesin-1 is a eukaryotic motor protein which moves in an anterograde (plus-end) direction along microtubules (MTs), powered by ATP hydrolysis. Here we report a detailed purification protocol to isolate active full length kinesin from Drosophila embryos, thus allowing the combination of Drosophila genetics with single-molecule biophysical studies. Starting with approximately 50 laying cups, with approximately 1000 females per cup, we carried out overnight collections. This provided approximately 10 ml of packed embryos. The embryos were bleach dechorionated (yielding approximately 9 grams of embryos), and then homogenized. After disruption, the homogenate was clarified using a low speed spin followed by a high speed centrifugation. The clarified supernatant was treated with GTP and taxol to polymerize MTs. Kinesin was immobilized on polymerized MTs by adding the ATP analog, 5'-adenylyl imidodiphosphate at room temperature. After kinesin binding, microtubules were sedimented via high speed centrifugation through a sucrose cushion. The microtubule pellet was then re-suspended, and this process was repeated. Finally, ATP was added to release the kinesin from the MTs. High speed centrifugation then spun down the MTs, leaving the kinesin in the supernatant. This kinesin was subjected to a centrifugal filtration using a 100 KD cut off filter for further purification, aliquoted, snap frozen in liquid nitrogen, and stored at -80 &deg;C. SDS gel electrophoresis and western blotting was performed using the purified sample. The motor activity of purified samples before and after the final centrifugal filtration step was evaluated using an in vitro single molecule microtubule assay. The kinesin fractions before and after the centrifugal filtration showed processivity as previously reported in literature. Further experiments are underway to evaluate the interaction between kinesin and other transport related proteins.

Isolation and Purification of Kinesin from Drosophila Embryos

This is a protocol to isolate active full length Kinesin from Drosophila embryos for single-molecule biophysical studies. We show how to collect embryos, make the embryo lysate, and then polymerize microtubules (MTs). Kinesin is purified by immobilizing it on the MTs, spinning down the Kinesin-MT complexes, and then releasing the kinesin from the MTs via ATP addition.

العزلة وتنقية كينيسين من ذبابة الفاكهة الأجنة

Motor proteins move cargos along microtubules, and transport them to specific sub-cellular locations. Because altered transport is suggested to underlie a ...

Mouse Sperm Cryopreservation and Recovery using the I&middot;Cryo Kit

Thousands of new genetically modified (GM) strains of mice have been created since the advent of transgenesis and knockout technologies. Many of these valuable animals exist only as live animals, with no backup plan in case of emergency. Cryopreservation of embryos can provide this backup, but is costly, can be a lengthy procedure, and generally requires a large number of animals for success. Since the discovery that mouse sperm can be successfully cryopreserved with a basic cryoprotective agent (CPA) consisting of 18&#37; raffinose and 3&#37; skim milk, sperm cryopreservation has become an acceptable and cost-effective procedure for archiving, distributing and recovery of these valuable strains.
 Here we demonstrate a newly developed I&bull;Cryo kit for mouse sperm cryopreservation. Sperm from five commonly-used strains of inbred mice were frozen using this kit and then recovered. Higher protection ratios of sperm motility (&gt; 60&#37;) and rapid progressive motility (&gt; 45&#37;) compared to the control (basic CPA) were seen for sperm frozen with this kit in 5 inbred mouse strains. Two cell stage embryo development after IVF with the recovered sperm was improved consistently in all 5 mouse strains examined. Over a 1.5 year period, 49 GM mouse lines were archived by sperm cryopreservation with the I&bull;Cryo kit and later recovered by IVF.

Mouse Sperm Cryopreservation and Recovery using the I&amp;middot;Cryo Kit

Here we demonstrate the newly developed I&#x2022;Cryo kit for mouse sperm cryopreservation. Two-cell stage embryo development with frozen-thawed sperm was improved consistently in 5 mouse strains with the use of this kit. Over a 1.5 year period, 49 genetically modified mouse lines were archived by sperm cryopreservation with the I&#x2022;Cryo kit and later successfully recovered by IVF.

الماوس حفظ بالبرودة والانتعاش الحيوانات المنوية باستخدام · لقد كرو كيت

Thousands of new genetically modified (GM) strains of mice have been created since the advent of transgenesis and knockout technologies.  Many of these ...

Analysis of Oxidative Stress in Zebrafish Embryos

High levels of reactive oxygen species (ROS) may cause a change of cellular redox state towards oxidative stress condition. This situation causes oxidation of molecules (lipid, DNA, protein) and leads to cell death. Oxidative stress also impacts the progression of several pathological conditions such as diabetes, retinopathies, neurodegeneration, and cancer. Thus, it is important to define tools to investigate oxidative stress conditions not only at the level of single cells but also in the context of whole organisms. Here, we consider the zebrafish embryo as a useful in vivo system to perform such studies and present a protocol to measure in vivo oxidative stress. Taking advantage of fluorescent ROS probes and zebrafish transgenic fluorescent lines, we develop two different methods to measure oxidative stress in vivo: i) a &#8220;whole embryo ROS-detection method&#8221; for qualitative measurement of oxidative stress and ii) a &#8220;single-cell&#160;ROS detection method&#8221; for quantitative measurements of oxidative stress. Herein, we demonstrate the efficacy of these procedures by increasing oxidative stress in tissues by oxidant agents and physiological or genetic methods. This protocol is amenable for forward genetic screens and it will help address cause-effect relationships of ROS in animal models of oxidative stress-related pathologies such as neurological disorders and cancer.

Here we report a protocol to measure oxidative stress in living zebrafish embryos. This procedure allows reactive oxygen species (ROS) detection in both whole embryo tissues and single-cell populations. This protocol will accomplish both qualitative and quantitative analyses.

تحليل الاكسدة في الزرد الأجنة

High levels of reactive oxygen species (ROS) may cause a change of cellular redox state towards oxidative stress condition. This situation causes ...

Isolation of microRNAs from Tick Ex Vivo Salivary Gland Cultures and Extracellular Vesicles

Ticks are important ectoparasites that can vector multiple pathogens. The salivary glands of ticks are essential for feeding as their saliva contains many effectors with pharmaceutical properties that can diminish host immune responses and enhance pathogen transmission. One group of such effectors are microRNAs (miRNAs). miRNAs are short non-coding sequences that regulate host gene expression at the tick-host interface and within the organs of the tick. These small RNAs are transported in the tick saliva via extracellular vesicles (EVs), which serve inter-and intracellular communication. Vesicles containing miRNAs have been identified in the saliva of ticks. However, little is known about the roles and profiles of the miRNAs in tick salivary vesicles and glands. Furthermore, the study of vesicles and miRNAs in tick saliva requires tedious procedures to collect tick saliva. This protocol aims to develop and validate a method for isolating miRNAs from purified extracellular vesicles produced by ex vivo organ cultures. The materials and methodology needed to extract miRNAs from extracellular vesicles and tick salivary glands are described herein.

Isolation of microRNAs from Tick Ex Vivo Salivary Gland Cultures and Extracellular Vesicles

The present protocol describes the isolation of microRNAs from tick salivary glands and purified extracellular vesicles. This is a universal procedure that combines commonly used reagents and supplies. The method also allows the use of a small number of ticks, resulting in quality microRNAs that can be readily sequenced.

عزل الحمض النووي الريبي الميكروي عن ثقافات الغدد اللعابية خارج الجسم الحي والحويصلات خارج الخلية

Ticks are important ectoparasites that can vector multiple pathogens. The salivary glands of ticks are essential for feeding as their saliva contains many ...

<meta charset="utf8"></head><body>تحسين حفظ المنوية المرجانية بالتبريد من الأنواع المرجانية المهددة بالانقراض

A Semi-Automated Workflow for the Cryopreservation of Coral Sperm to Support Biobanking and Aquaculture

Coral reefs are facing a crisis as the frequency of bleaching events caused by ocean warming increases, resulting in the death of corals on reefs around the world. The subsequent loss of genetic diversity and biodiversity can diminish the ability of coral to adapt to the changing climate, so efforts to preserve existing diversity are essential to maximize the resources available for reef restoration now and in the future. The most effective approach to secure genetics long-term is cryopreservation and biobanking, which permits the frozen storage of living samples at cryogenic temperatures in liquid nitrogen indefinitely. Cryopreservation of coral sperm has been possible since 2012, but the seasonal nature of coral reproduction means that biobanking activities are restricted to just a few nights per year when spawning occurs. Improving the efficiency of coral sperm processing and cryopreservation workflows is therefore essential to maximizing these limited biobanking opportunities. To this end, we set out to optimize cryopreservation processing pathways for coral sperm by building on existing technologies and creating a semi-automated approach to streamline the assessment, handling, and cryopreservation of coral sperm. The process, which combines computer-assisted sperm analysis, barcoded cryovials, and a series of linked auto-datasheets for simultaneous editing by multiple users, improves the efficiency of both sample processing and metadata management in the field. Through integration with cross-cutting research programs such as the Reef Restoration and Adaptation Program in Australia, cryopreservation can play a crucial role in large-scale reef restoration programs by facilitating the genetic management of aquaculture populations, supporting research to enhance thermal tolerance, and preventing the extinction of coral species. The described procedures will be utilized for coral cryopreservation and biobanking practitioners on reefs worldwide and will provide a model for the transition of cryopreservation technologies from research laboratories to large-scale applications.

<meta charset="utf8"></head><body>تسليط الضوء على المؤلف: تطوير تقنيات فعالة للحفظ بالتبريد والبنوك الحيوية لاستعادة الشعاب المرجانية العالمية

This protocol describes a semi-automated pathway to improve the efficiency and capacity of processing and cryopreservation of sperm from threatened coral species, aiming to secure genetic diversity and support reef restoration efforts.

سير عمل شبه آلي للحفظ بالتبريد للحيوانات المنوية المرجانية لدعم البنوك الحيوية وتربية الأحياء المائية

Coral reefs are facing a crisis as the frequency of bleaching events caused by ocean warming increases, resulting in the death of corals on reefs around ...