Name: isolation of mouse endometrial epithelial and stromal cells for in vitro decidualization
Uploaded: 2017-03-02T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 37 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Mouse Endometrial Epithelial and Stromal Cells for In Vitro Decidualization at JoVE.com

وأيد هذا العمل من المنح المقدمة من مؤسسة أبحاث منطقة فلاندرز (FWO G.0856.13N) ومجلس البحوث في جامعة الكويت لوفين (OT / 13/113). ويتم تمويل KDC قبل FWO بلجيكا. ويتم تمويل ه أوراسكوم تليكوم / 13/113. ونود أن نشكر خلية منشأة التصوير الأساسية لوفين جامعة الكويت (http://gbiomed.kuleuven.be/english/corefacilities/microscopy/cic/cic.htm) لاستخدام المجهر متحد البؤر.

<ol>
	<li>Cummings, A. M., Yochim, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+the+uterus+in+preparation+for+gestation:+a+model+for+the+action+of+progesterone.">Differentiation of the uterus in preparation for gestation: a model for the action of progesterone.</a> J Theor Biol. 106 (3), 353-374 (1984).</li><li>Jabbour, H. N., Kelly, R. W., Fraser, H. M., Critchley, H. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endocrine+regulation+of+menstruation.">Endocrine regulation of menstruation.</a> Endocr Rev. 27 (1), 17-46 (2006).</li><li>Wang, X., Matsumoto, H., Zhao, X., Das, S. K., Paria, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+signals+direct+the+formation+of+tight+junctional+permeability+barrier+in+the+decidualizing+stroma+during+embryo+implantation.">Embryonic signals direct the formation of tight junctional permeability barrier in the decidualizing stroma during embryo implantation.</a> J Cell Sci. 117 (Pt 1), 53-62 (2004).</li><li>Zygmunt, M., Herr, F., Munstedt, K., Lang, U., Liang, O. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenesis+and+vasculogenesis+in+pregnancy.">Angiogenesis and vasculogenesis in pregnancy.</a> Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. 110 Suppl 1, S10-S18 (2003).</li><li>Power, M. L., Schulkin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The evolution of the human placenta. , (2012).</li><li>Finn, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+initiation+of+the+decidual+cell+reaction+in+the+uterus+of+the+aged+mouse.">The initiation of the decidual cell reaction in the uterus of the aged mouse.</a> J Reprod Fertil. 11 (3), 423-428 (1966).</li><li>Grant, K. S., Wira, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+mouse+uterine+stromal+cells+on+epithelial+cell+transepithelial+resistance+(TER)+and+TNFalpha+and+TGFbeta+release+in+culture.">Effect of mouse uterine stromal cells on epithelial cell transepithelial resistance (TER) and TNFalpha and TGFbeta release in culture.</a> Biol Reprod. 69 (3), 1091-1098 (2003).</li><li>De Clercq, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+expression+of+transient+receptor+potential+channels+in+human+endometrial+stromal+cells+during+the+luteal+phase+of+the+menstrual+cycle.">Functional expression of transient receptor potential channels in human endometrial stromal cells during the luteal phase of the menstrual cycle.</a> Hum Reprod. 30 (6), 1421-1436 (2015).</li><li>Pieper, F. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+vimentin+expression+in+cultured+epithelial+cells.">Regulation of vimentin expression in cultured epithelial cells.</a> Eur J Biochem. 210 (2), 509-519 (1992).</li><li>Greaves, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+mouse+model+of+endometriosis+mimics+human+phenotype+and+reveals+insights+into+the+inflammatory+contribution+of+shed+endometrium.">A novel mouse model of endometriosis mimics human phenotype and reveals insights into the inflammatory contribution of shed endometrium.</a> Am J Pathol. 184 (7), 1930-1939 (2014).</li><li>Pierro, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stromal-epithelial+interactions+modulate+estrogen+responsiveness+in+normal+human+endometrium.">Stromal-epithelial interactions modulate estrogen responsiveness in normal human endometrium.</a> Biol Reprod. 64 (3), 831-838 (2001).</li><li>Kim, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progesterone-dependent+release+of+transforming+growth+factor-beta1+from+epithelial+cells+enhances+the+endometrial+decidualization+by+turning+on+the+Smad+signalling+in+stromal+cells.">Progesterone-dependent release of transforming growth factor-beta1 from epithelial cells enhances the endometrial decidualization by turning on the Smad signalling in stromal cells.</a> Mol Hum Reprod. 11 (11), 801-808 (2005).</li><li>Chen, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coculturing+human+endometrial+epithelial+cells+and+stromal+fibroblasts+alters+cell-specific+gene+expression+and+cytokine+production.">Coculturing human endometrial epithelial cells and stromal fibroblasts alters cell-specific gene expression and cytokine production.</a> Fertil Steril. 100 (4), 1132-1143 (2013).</li><li>Renaud, J., Martinoli, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+Insert+Co-culture+System+of+Two+Cellular+Types+in+the+Absence+of+Cell-Cell+Contact.">Development of an Insert Co-culture System of Two Cellular Types in the Absence of Cell-Cell Contact.</a> J Vis Exp. (113), (2016).</li><li>Arnold, J. T., Kaufman, D. G., Seppala, M., Lessey, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometrial+stromal+cells+regulate+epithelial+cell+growth+in+vitro:+a+new+co-culture+model.">Endometrial stromal cells regulate epithelial cell growth in vitro: a new co-culture model.</a> Hum Reprod. 16 (5), 836-845 (2001).</li><li>Park, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+well-defined+in+vitro+three-dimensional+culture+of+human+endometrium+and+its+applicability+to+endometrial+cancer+invasion.">A well-defined in vitro three-dimensional culture of human endometrium and its applicability to endometrial cancer invasion.</a> Cancer Lett. 195 (2), 185-192 (2003).</li></ol>

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

Decidualization هو التمايز التي تعتمد على هرمون البروجسترون من خلايا انسجة بطانة الرحم إلى خلايا الساقطية إفراز الجولة. في الإنسان، هذه العملية تحدث بشكل عفوي خلال مرحلة الجسم الأصفر من الدورة الشهرية، وبدأت في الخلايا اللحمية المحيطة خلايا الأوعية الدموية لتشكيل predecidua. ومع ذلك، في القوارض، وجود الكيسة لا بد للحث على decidualization. حقيقة أن decidualization يحدث إلا بعد الاتصال مع الخلايا الظهارية بطانة الرحم يعني أن هناك عوامل مهمة تفرز من خلايا الظهارية للحث على decidualization في سدى الكامنة. وعلى الرغم من هذا الاختلاف في بدء عملية decidualization ينبغي الاعتراف، والحقيقة أن decidualization الإنسان يصبح أكثر قوة على زرع الأجنة تشير إلى أن آليات مماثلة يمكن أن تشارك. في المختبر غالبا ما تستخدم مزارع الخلايا لدراسة تأثير جزيئات محددة خلال عملية decidualization.ومع ذلك، فإن توافر وكمية من الأنسجة البشرية التي يمكن جمعها وغالبا ما يقتصر ويرافقه الاختلافات، وعلى سبيل المثال، مرحلة دورة، وعدد حالات الحمل وجود أمراض النساء مثل التهاب بطانة الرحم أو غدي. العديد من هذه القضايا يمكن الوقاية منها عن طريق استخدام أنسجة الفئران التي يمكن الوصول إليها بسهولة ومرحلة دورة مستقلة. ميزة أخرى قوية من استخدام أنسجة الفئران هي الفرصة لاستخدام القوارض المعدلة وراثيا وإمكانية إعداد عدد كبير من التجارب. في هذه اللحظة، وقد وصفت العديد من البروتوكولات العزلة مختلفة في الأدب مع تفاوت الكبير في السن من الحيوانات وفترة في مرحلة الشياع في لحظة الاستخدام. تقدم هذه الدراسة طريقة جديدة لبطانة الرحم المشترك الثقافات الأولية للانسجة والخلايا الظهارية التي تم اتخاذها الاستفادة من دورة داقية موحدة من قبل حقن يومية من هرمون الاستروجين قبل العزلة. وعلاوة على ذلك، هرمون الاستروجين هو كnown للحث على الانتشار في الخلايا الظهارية وانسجة الخلايا مما يزيد العائد في العزلة. واستند بروتوكول العزلة وصفها في هذه الورقة على غرانت وآخرون. 7، ومع ذلك، تم إدراج المزيد من الخطوات الأمثل لزيادة الغلة، والنقاء، والجدوى من ثقافات مختلفة من الخلايا. أولا، كان HBSS تستكمل دائما مع المضادات الحيوية لتجنب التلوث من ثقافة الأولية. خلال عزل MEEC، تم إجراء التكيف درجة حرارة (15 دقيقة عند 37 درجة مئوية) لزيادة حصاد الخلايا الظهارية أثناء عملية الهضم الأول. بعد ذلك، أدرج خطوة إضافية لتهدئة النشاط الأنزيمي بعد التربسين الهضم عن طريق إضافة المتوسطة التي تحتوي على FBS لكبح نشاطها. وعلاوة على ذلك، صدرت MEECs من خلال مرشح والذي كانت شبكة أكبر مما هو شائع وصفها (100 ميكرون) لأنها غالبا ما تأتي في مجموعات وأوراق الخلية. وعلاوة على ذلك، تم تخفيض التلوث من قبل خلايا انسجة عن طريق أداء الوظيفةخطوة itional التي تم فصلها استنادا MEECs وMESCs على الترسيب الجاذبية. وأخيرا، تم المصنف MEECs coverslips على المغلفة الكولاجين لزيادة المرفق من الخلايا لcoverslips الزجاج، كما أصبح واضحا أن التعلق coverslips الزجاج غير المصقول أو المطلي PLL-لم يكن كافيا. خلال عزل MESCs، واستكملت كولاجيناز (1 ملغ / مل) لتحسين الهضم. وعلاوة على ذلك، تم تنفيذ هذه الخطوة الهضم في مكررة لتجنب التلوث من MEECs المتبقية. أدت كل هذه خطوات إضافية في ثقافات نقية وقابلة للحياة السكان خلية متجانسة. تم تقييم نقاء سكان الخلية مع المناعية وQRT-PCR تستخدم فيمنتين كعلامة انسجة وcytokeratin باعتباره علامة الظهارية. بشكل واضح، وقد لوحظ نمط التعبير الآخر من فيمنتين وcytokeratin في MEEC ومسك. ومع ذلك، فإنه يمكن أن يكون لاحظت أن التعبير مرنا نسبيا من فيمنتين وcytokeratin مشابه في الثقافات MEEC. Similيتم نشر النتائج ع من قبل مجموعات بحثية أخرى، حيث تنمو الخلايا الظهارية في الثقافة اكتساب فيمنتين التعبير 9. الأهم من ذلك هو الاختلاف في التعبير البروتين بين فيمنتين وcytokeratin كما لوحظ في stainings immunohistological من السكان مختلفة من الخلايا. أظهر المناعية المزدوج الذي EECS كانت إيجابية للcytokeratin وكانت ESC إيجابية لفيمنتين. استخدام هذه العلامات في المناعية هو وسيلة ثابتة وتستخدم standardly للإشارة إلى أنواع الخلايا 10. على الرغم من أن الكثير من الأبحاث قد أجريت على decidualization من مسك، فإنه لا يزال من الممكن أن وجود الخلايا الظهارية في هذا النموذج قد يغير من نتائج decidualization. أولا، وقد تبين أنه إذا MEEC تنمو إلى أحادي الطبقة بحضور المتوسطة مكيفة مسك أو في إعداد ثقافة مشتركة، أحادي الطبقة لديها مقاومة كهربائية تحسين الظهارية الخلايا بطريق الظهارة (طير)، والناجمة عن العوامل التي يفرزها مسك 7. وعلاوة على ذلك، بييرو وآخرون. 11 تقدم أي دليل على انتشار الظهارية، وتتأثر 17β استراديول، قد بوساطة العوامل يفرز من خلايا انسجة، وبدلا من ذلك، يمكن للخلايا الظهارية الافراج عن العوامل التي تعدل انسجة decidualization 12 و 13. وعموما، فمن الواضح أن البيئة المشارك ثقافة الظهارية انسجة توفر وضعا أكثر الفسيولوجية التي تسمح للتفاعل نظير الصماوي والاتصالات. وقد وصفت طريقة زراعة اثنين من أنواع مختلفة من الخلايا باستخدام نظام المشاركة في ثقافة إدراج سابق 14 و 15 و تم تكييفها للاستخدام الخلايا الأولية الفئران. من خلال الكشف عن مستويات البرولاكتين مرنا باعتباره من قراءة لdecidualization، تقنية الموضحة لديها استنساخه جدا للقراءة خارج لdecidualization المتاحة والسماح للليالي بالتالي دراسة للعلاقة بين الظهارية انسجة خلال decidualization. إشارات نظير الصماوي بوساطة من MEEC قد يغير مدى decidualization في خلايا انسجة. وعلاوة على ذلك، فإن النموذج يسمح لتعديل معين من الجانب الظهارية دون أن يؤثر بشكل مباشر على خلايا انسجة. لذلك، هذا التعاون ثقافة MEEC ومسك تقدم أداة مثالية لتقييم تأثير الهرمونات، السيتوكينات، وما إلى ذلك على الخلايا الظهارية مع التدريجي على قراءة decidualization اللحمية. ميزة أخرى لهذا النظام المشترك الثقافة هو أنه يسمح للباحثين للتحقيق في تورط بروتين معين في العملية decidualization سواء في الظهارية أو مقصورة انسجة باستخدام الخلايا المعزولة من الحيوانات المعدلة وراثيا. وعلاوة على ذلك، فإن هذه التقنية أن تكون مفيدة جدا للتحقيق في الكيسة التصاق لتقييم ما إذا كانت العوامل نظير الصماوي يفرز من قبل خلايا الظهارية في وجود الكيسة كافية للحث على decidualization من انسجة الكامنةالخلايا. خطوة هامة في غزو الأرومة الغاذية ربطها تدهور المصفوفة خارج الخلية، التي تتوسط فيها عمل الإنزيمات المحللة للبروتين. التقنية المقترحة يمكن تطبيقها كنموذج في المختبر للتحقيق في الحديث عبر بين الكيسة، والخلايا الظهارية وسدى الداعمة. ومع ذلك، في هذه اللحظة لا يعرف إلا القليل عن أصل الخلايا الظهارية التي يمكن أن تكون اللمعية كذلك غدي. لذلك، هناك حاجة إلى مزيد توصيف الصورة الجينية والجزيئية للخلايا الظهارية. وبالإضافة إلى ذلك، يقتصر الطريقة الموصوفة في المعرفة المتاحة عن الاستقطاب من الخلايا الظهارية. في هذه اللحظة، لم تؤخذ استقطاب الخلايا الظهارية في الاعتبار. ومع ذلك، يتم وصف الاختلافات في التعبير عن بروتينات الغشاء في الأغشية القمية والقاعدية. الاستقطاب غير المناسب للطبقة الطلائية يمكن أن يكون لها تأثير على التفاعل نظير الصماوي بين epitheliالقاعدة والخلايا اللحمية. ومع ذلك، طرق للحصول على الخلايا الظهارية الاستقطاب وصفت ويمكن إدراجها في تقنية وصفها 15 و 16. وإجمالا، يقترح بروتوكول صفها تقنية لإنشاء مزارع الخلايا الأولية من الماوس طلائي بطانة الرحم وخلايا انسجة بنجاح. نتائج هذا الأسلوب في مزارع الخلايا نقية كما أكد QRT-PCR والمناعية من فيمنتين وcytokeratin. في النهاية تم عرض الظهارية وانسجة الثقافة المشتركة التي تسمح للتحقيق في إشارات نظير الصماوي بوساطة إما MEEC و / أو مسك في عملية decidualization.

بطانة الرحم البشري هو البطانة الداخلية للرحم ويخضع لدورات شهرية من انهيار وإصلاح تمهيدا لحالات الحمل المحتملة. وهو يتألف من طبقة واحدة من الخلايا الطلائية المبطنة لتجويف الرحم وسدى الكامنة التي تختلف في السمك وفقا لتقلبات المبيض هرمونات الاستروجين والبروجستيرون. خلال مرحلة الجسم الأصفر، وارتفاع هرمون البروجسترون بعد الإباضي لحث على تمايز الخلايا اللحمية بطانة الرحم إلى خلايا الساقطية أكبر، جولة، وهي عملية تسمى decidualization 1 و 2. في الإنسان، تحدث هذه الظاهرة بشكل عفوي لتشكيل predecidua، ولكنه يصبح أكثر وضوحا على زرع الأجنة. والنتيجة الوظيفية decidualization هي أن الرحم يصبح عابر تقبلا لزرع الجنين. وصفت هذه الفترة باسم &quot;نافذة زرع&quot;. خلال الفترة المبكرة من زرع الأجنة، البريد decidualizedوالخلايا اللحمية ndometrial المحيطة الجنين زرع توفر حاجزا لمنع مرور المواد الضارة إلى الجنين 3. خلال فترة الحمل، وهذا الساقط توفير المواد الغذائية للجنين النامي قبل اتخذت المشيمة مكان، وستشكل لاحقا الجزء الأمهات من المشيمة (4). الاعتبارات الأخلاقية والعملية تحد من تصميم الدراسات الإنسان للتحقيق في عملية decidualization ولقد دفعت استخدام النماذج الحيوانية. كونه عضوا في مجموعة المشيمة دموية مشيمائية، فإن بطانة الرحم من القوارض تخضع أيضا decidualization قبل المشيمة 5. في القوارض، ومع ذلك، فإن الشروع في عملية decidualization يعتمد على وجود الكيسات الأريمية في تجويف الرحم، مما يدل على أن التحفيز الإضافي اللازم لتحريك ردود الساقطية 6. هذا ينطوي على الاتصالات المعقدة بين عشرالبريد خلايا بطانة الرحم الظهارية التي لها اتصال مباشر مع الكيسة، والخلايا اللحمية الأساسية. ومع ذلك، decidualization يمكن أن يتسبب بشكل مصطنع استخدام المنبهات مثل الخدش الميكانيكي أو تقطير النفط في الرحم تستعد هرمونيا. على الرغم من الدراسات المجراة باستخدام نماذج decidualization الاصطناعية سمحت لنا لتحسين رؤيتنا في عملية معقدة إشارات من decidualization، الميكانيكية دراسات معمقة، على سبيل المثال، التحقيق في البلاغ الذي لا غنى عنه بين الخلايا الظهارية واللحمية، محدودة. لذلك، في الدراسات المختبرية decidualization يمكن استخدامها لمعالجة مسارات مهمة ودراسة العمليات الأساسية. تحقيقا لهذه الغاية، مزارع الخلايا اللحمية بطانة الرحم الأولية يمكن إعدادها من بطانة الرحم البشري أو القوارض. توظيف القوارض يوافق على استخدام الحيوانات المعدلة وراثيا للتحقيق في دور بروتين معين من الاهتمام أثناء عملية decidualization. ومع ذلك، غير ناضج، prepuberوغالبا ما تستخدم تاي الفئران من أجل تجنب المضاعفات دورة داقية، بينما في حالات أخرى يتم جمع رحم من جميع مراحل دورة داقية، مما يؤدي إلى عدم التجانس في الثقافات. وعلاوة على ذلك، وقد تمت دراسة عملية decidualization في بروتوكولات مختلفة، على سبيل المثال، عن طريق (ط) الهرمونات المكمل (الاستروجين والبروجسترون أو الأدينوزين الأدينوزين الحلقي (المخيم)) إلى وسيلة زراعة، أو (ب) عزل الخلايا الساقطة من الفئران في اليوم 4.5 من (الزائفة) الحمل، والتي تتطلب ضرورة إضافية لفحص المكونات والذكور أجريت لهم هذه العمليات. هذه القيود تدل على ضرورة وجود طريقة موحدة للدراسة في decidualization المختبر. في هذه الدراسة، وهذا نموذج الفسيولوجية لفحص في المختبر decidualization بدءا من الكبار، وستعرض غير (الزائفة) الفئران الحوامل. في هذه الطريقة، سوف حقن يومية من 17β استراديول (E2) تحفز تكاثر خلايا بطانة الرحم، مما أدى إلى زيادة العائد من متجانسة وصالسكان الخلية لدى عودتهم. وعلاوة على ذلك، فإن استخدام نظام coculturing يسمح دراسة الحديث المتبادل-الظهارية انسجة والقدرة على التعامل مع عملية decidualization على مستويات مختلفة.

<table><tbody><tr><td>ThinCert Tissue culture insert for 24 well plates; 1 &amp;micro;m pore size; transparant</td><td>Greiner Bio-one</td><td>662610</td><td>Inserts are also provided for other multiwell plates and/or other pore sizes. Other suppliers: Merck Millipore.&lt;br/&gt; https://shop.gbo.com/en/row/articles/catalogue/article/&lt;br/&gt;0110_0110_0090_0030/13408/&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Nunc Cell culture treated 24 well plates</td><td>Thermo Scientific</td><td>142475</td><td>http://www.thermofisher.com/order/catalog/product/142475</td></tr><tr><td>8-Bromoadenosine 3&amp;prime;,5&amp;prime;-cyclic monophosphate sodium salt</td><td>Sigma Aldrich</td><td>B7880</td><td>Prepare a stock solution of 100 mM in Milli Q water. Store aliquots at -20 &amp;deg;C.&lt;br/&gt; http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/b7880?lang=en&amp;amp;region=BE&amp;nbsp;&lt;br/&gt;</td></tr><tr><td>Medroxyprogesterone 17-acetate</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M1629</td><td>Prepare a stock solution of 250 &amp;micro;M in ethanol. Store aliquots at -20 &amp;deg;C.&lt;br/&gt; http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/m1629?lang=en&amp;amp;region=BE&amp;nbsp;&lt;br/&gt;</td></tr><tr><td>Arachis oil</td><td>Supermarket</td><td></td><td>Standard cooking arachis oil that can be found in every supermarket is used</td></tr><tr><td>PrestoBlue cell viability reagent</td><td>Thermo Scientific</td><td>A13261</td><td>https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/A13261?ICID=cvc-prestoblue-c1t1</td></tr><tr><td>HBSS 1x, no calcium, no magnesium, no phenol red</td><td>Gibco</td><td>14175-046</td><td>Store in fridge as long as possible. Use cold HBSS+ during the protocol.&lt;br/&gt; https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/14175046&amp;nbsp;&lt;br/&gt;</td></tr><tr><td>17-&amp;beta; Estradiol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>E8875</td><td>Prepare a stock solution of 1 mg/mL in EtOH before diluting in arachis oil (1:1,000).&lt;br/&gt;http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/e8875?lang=en&amp;amp;region=BE</td></tr><tr><td>Cell medium filter Stericup, 0.22 &amp;micro;m, polyethersulfone, 500 mL, radio-sterilized</td><td>Merck Millipore</td><td>SCGPU05RE</td><td>http://www.merckmillipore.com/BE/en/product/Stericup-GP%2C-0.22%C2%A0%C2%B5m%2C-polyethersulfone%2C-500%C2%A0mL%2C-radio-sterilized,MM_NF-SCGPU05RE</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin (5,000 U/mL)</td><td>Gibco</td><td>15070-063</td><td>https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/15070063?ICID=search-15070-063</td></tr><tr><td>DMEM/F12, phenol red, L-glutamine, HEPES</td><td>Gibco</td><td>11330-032</td><td>https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/11330057?ICID=search-11330-057</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum, qualified, heat inactivated, E.U.-approved, South America Origin</td><td>Gibco</td><td>10500-056</td><td>https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/10500064?ICID=search-10500-064</td></tr><tr><td>Amphotericin B</td><td>Gibco</td><td>15290-018</td><td>https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/15290018?ICID=search-15290-018</td></tr><tr><td>Gentamicin (50 mg/mL)</td><td>Gibco</td><td>15750-037</td><td>https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/15750037?ICID=search-15750-037</td></tr><tr><td>DMEM, low glucose, pyruvate, no glutamine, no phenol red</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D5921</td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/d5921?lang=en&amp;amp;region=BE</td></tr><tr><td>MCDB-105</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M6395</td><td>Dilute in Milli Q water, adjust pH to 7 with NaOH and filter before use. Store in the dark.&lt;br/&gt; http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/m6395?lang=en&amp;amp;region=BE&amp;nbsp;&lt;br/&gt;</td></tr><tr><td>Insulin from bovine pancreas</td><td>Sigma Aldrich</td><td>I1882</td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/i1882?lang=en&amp;amp;region=BE</td></tr><tr><td>Coverslips, glass, 18 mm &amp;Oslash;</td><td>Glaswarenfabrik Karl Hecht</td><td>1001/18</td><td>http://www.hecht-assistent.de/187/?L=1&amp;amp;tx_rmproducts_pi1[g]=937&lt;br/&gt;&amp;amp;tx_rmproducts_pi1[p]=3504&lt;br/&gt;&amp;amp;tx_rmproducts_pi1[v]=20088&lt;br/&gt;&amp;amp;cHash=abd12065683fe74b00eaa&lt;br/&gt;5e562824d06</td></tr><tr><td>Poly-L-lysine</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P2636</td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/p2636?lang=en&amp;amp;region=BE</td></tr><tr><td>Collagenase type IA from Clostridium histolyticum</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C2674</td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/c2674?lang=en&amp;amp;region=BE</td></tr><tr><td>DPBS, no calcium, no magnesium</td><td>Gibco</td><td>14190-094</td><td>https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/14190094?ICID=search-14190-094</td></tr><tr><td>Trypsin from bovine pancreas</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T7409</td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/t7409?lang=en&amp;amp;region=BE</td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA (0.05%), phenol red</td><td>Gibco</td><td>25300-054</td><td>Warm to room temperature before use.&lt;br/&gt; https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/25300054?ICID=search-25300-054&amp;nbsp;&lt;br/&gt;</td></tr><tr><td>Cell strainer, 40 &amp;micro;m mesh, disposable</td><td>BD Falcon</td><td>352340</td><td>https://www.fishersci.com/shop/products/falcon-cell-strainers-4/p-48680</td></tr><tr><td>Cell strainer, 100 &amp;micro;m mesh, disposable</td><td>BD Falcon</td><td>352360</td><td>https://www.fishersci.com/shop/products/falcon-cell-strainers-4/p-48680</td></tr><tr><td>Millex-GP Syringe Filter Unit, 0.22&amp;nbsp;&amp;micro;m, polyethersulfone, 33&amp;nbsp;mm, gamma sterilized</td><td>Merck Millipore</td><td>SLGP033RS</td><td>https://www.merckmillipore.com/BE/en/product/Millex-GP-Syringe-Filter-Unit%2C-0.22%C2%A0%C2%B5m%2C-polyethersulfone%2C-33%C2%A0mm%2C-gamma-sterilized,MM_NF-SLGP033RS?bd=1</td></tr><tr><td>Acetic acid (glacial) 100%</td><td>Merck Millipore</td><td>1.00063</td><td>https://www.merckmillipore.com/BE/en/product/Acetic-acid-%28glacial%29-100%25,MDA_CHEM-100063</td></tr><tr><td>Collagen I</td><td>Corning&amp;nbsp;</td><td>354236</td><td>From rat tail.&lt;br/&gt; https://catalog2.corning.com/LifeSciences/en-BR/Shopping/ProductDetails.aspx?categoryname=&amp;amp;&lt;br/&gt;productid=354236%28&lt;br/&gt;Lifesciences%29#&amp;nbsp;&lt;br/&gt;</td></tr><tr><td>Pancreatin from porcine pancreas</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P3292</td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/p3292?lang=en&amp;amp;region=BE</td></tr><tr><td>35 mm Tissue Culture Dishes, Polystyrene, Sterile</td><td>BD Falcon</td><td>353001</td><td>https://us.vwr.com/store/catalog/product.jsp?product_id=4675630</td></tr><tr><td>Ethanol absolute AnalaR NORMAPUR ACS, Reag. Ph. Eur. analytical reagent</td><td>VWR Chemicals</td><td>20821296</td><td>https://uk.vwr.com/store/catalog/product.jsp?catalog_number=20821.310DP</td></tr><tr><td>monoclonal rabbit anti-human vimentin (D21H3)&amp;nbsp;</td><td>Cell Signalling Tech</td><td>#5741</td><td>Use 1/500.&lt;br/&gt; http://www.cellsignal.com/products/primary-antibodies/vimentin-d21h3-xp-rabbit-mab/5741&lt;br/&gt;</td></tr><tr><td>monoclonal mouse anti-human pan cytokeratin&amp;nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C2562</td><td>Use 1/1,000.&lt;br/&gt;http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/c2562?lang=en&amp;amp;region=BE</td></tr><tr><td>Paraformaldehyde Solution, 4% in PBS</td><td>Affymetrix</td><td>19943</td><td>http://www.affymetrix.com/catalog/130621/USB/Paraformaldehyde+Solution+4+percent+in+PBS#1_1</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma Aldrich</td><td>X100</td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/SIAL/X100?lang=en&amp;amp;region=BE&amp;amp;gclid=&lt;br/&gt;Cj0KEQjwhN-6BRCJsePgxru9iIw&lt;br/&gt;BEiQAI8rq&lt;br/&gt;879lESeuIU4N4AEQRLNEXj4f&lt;br/&gt;8z65KkD-q8Xr35sQDRgaAp-k&lt;br/&gt;8P8HAQ</td></tr><tr><td>Goat serum</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G9023</td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/g9023?lang=en&amp;amp;region=BE</td></tr><tr><td>Goat anti-rabbit Alexa Fluor 488</td><td>Thermo Scientific</td><td>A-11034</td><td>http://www.thermofisher.com/order/genome-database/searchResults?query=488&amp;amp;&lt;br/&gt;resultPage=1&amp;amp;&lt;br/&gt;resultsPerPage=15&amp;amp;&lt;br/&gt;autocomplete=&amp;amp;&lt;br/&gt;searchMode=keyword&amp;amp;&lt;br/&gt;productTypeSelect=antibody&amp;amp;&lt;br/&gt;targetTypeSelect&lt;br/&gt;=antibody_secondary&amp;amp;&lt;br/&gt;species=ltechall&amp;amp;keyword=&lt;br/&gt;488#filters=genericsort2:\%22Capra%20hircus\%22;;generic6:^\%22Oryctolagus%20cuniculus\%22$;;conjugates:^\%22Alexa%20Fluor&amp;amp;reg;%20488\%22$;;</td></tr><tr><td>Goat anti-mouse Alexa Fluor 594</td><td>Thermo Scientific</td><td>A-11032</td><td>http://www.thermofisher.com/order/genome-database/searchResults?query=594&amp;amp;&lt;br/&gt;resultPage=1&amp;amp;&lt;br/&gt;resultsPerPage=15&amp;amp;&lt;br/&gt;autocomplete=&amp;amp;&lt;br/&gt;priorSearchTerms=&amp;amp;&lt;br/&gt;searchMode=keyword&amp;amp;&lt;br/&gt;productTypeSelect=antibody&amp;amp;&lt;br/&gt;targetTypeSelect=&lt;br/&gt;antibody_secondary&amp;amp;&lt;br/&gt;species=ltechall&amp;amp;&lt;br/&gt;keyword=594#filters=genericsort2:\%22Capra%20hircus\%22;;generic6:^\%22Mus%20musculus\%22$;;</td></tr><tr><td>VECTASHIELD mounting medium with DAPI</td><td>Vector Laboratories</td><td>H-1200</td><td>http://vectorlabs.com/vectashield-mounting-medium-with-dapi.html</td></tr><tr><td>DPBS, with calcium and magnesium</td><td>Gibco</td><td>14040174</td><td>https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/14040133</td></tr></tbody></table>

isolation of mouse endometrial epithelial and stromal cells for in vitro decidualization

Decidualization هو عملية المفاضلة التي تعتمد على هرمون البروجسترون من خلايا انسجة بطانة الرحم، وهو شرط أساسي لنجاح زرع الأجنة. رغم ما بذل الكثير من الجهود للكشف عن الآليات الكامنة وراء decidualization، والإشارات الدقيقة بين الخلايا الظهارية التي هي على اتصال مع الجنين والخلايا اللحمية الأساسية لا تزال غير مفهومة. لذلك، ودراسة decidualization بطريقة يأخذ كل الظهارية وخلايا اللحمية في الاعتبار يمكن تحسين معرفتنا حول التفاصيل الجزيئية للdecidualization. لهذا الغرض، في النماذج الحية من decidualization الاصطناعي هي من الناحية الفسيولوجية الأكثر أهمية. ومع ذلك، والتلاعب من الاتصالات بين الخلايا غير محدود. حاليا، في الثقافات المختبر من خلايا انسجة بطانة الرحم يتم استخدامها للتحقيق في التشكيل من decidualization عدة جزيئات الإشارة. تقليديا، وخلايا انسجة الإنسان أو الماوس بطانة الرحم هيمستخدم. ومع ذلك، فإن توافر العينات البشرية وفي كثير من الأحيان محدودة. وعلاوة على ذلك، ويرافق استخدام أنسجة الفئران مع التنوع في طريقة زراعة. تقدم هذه الدراسة طريقة التحقق من صحة وموحدة للحصول النقي بطانة الرحم الخلايا الظهارية (EEC) والثقافات اللحمية الخليوي (ESC) باستخدام الكبار الفئران سليمة تعامل مع هرمون الاستروجين لمدة ثلاثة أيام متتالية. تم تحسين بروتوكول لتحسين العائد، والسلامة، ونقاء من الخلايا وكذلك تمديد لدراسة decidualization في coculture الجماعة الاقتصادية الأوروبية وESC. هذا النموذج قد تكون مناسبة لاستغلال أهمية كل أنواع الخلايا في decidualization وتقييم مساهمة الجزيئات يشير الهامة التي يفرزها EEC أو ESC خلال الاتصالات بين الخلايا.

لمحة عامة عن بروتوكول ويوضح الشكل 1A لمحة عامة عن البروتوكول. تم استخدام حقن يومية من E2 (100 نانوغرام) لمدة ثلاثة أيام متتالية لمزامنة الحيوانات وتوحيد مرحلة من مراحل دورة داقية. دورة داقية يمكن تقييم من قبل lavages المهبلية، وينقسم إلى مقدمات الوداق، شبق، هجوع الودق، ومرحلة تلية الوداق. يمكن أن يتم تعيين مرحلة دورة وفقا لنسبة من خلايا بشرية في غسيل، التي تخضع لتغيرات هرمونية. وزيادة مستويات هرمون الاستروجين جعل الحيوانات تتطور إلى مرحلة الشبق. يمكن بسهولة الكشف عن هذه المرحلة من وجود خلايا الظهارية متقرن حصرا وعدم وجود الكريات البيض (الشكل 1B). في يوم 4، رحم من الحيوانات التي هي في مرحلة الشياع يتم جمع وMEEC ومسك معزولة (الشكل 1C). Decidualization جليكون ذلك حافزا بإضافة 0.5 ملي المخيم و1 ميكرومتر MPA إلى 2٪ FBS المتوسطة خلال فترة الحضانة من 5 د. مراقبة نوعية MEEC ومسك الثقافات نقاء الثقافات الخلية الأولية يمكن تقييمها من قبل الفرق في فيمنتين وcytokeratin التعبير. فيمنتين غير لخيوط المتوسطة التي يعبر عنها في خلايا اللحمة المتوسطة، وبالتالي في الخلايا اللحمية بطانة الرحم. Cytokeratin هو خيوط وسيطة وجدت في الهيكل الخلوي من الأنسجة الطلائية. ويبين الشكل 2A مستوى التعبير مرنا من فيمنتين وcytokeratin في MEEC ومسك تقييم استخدام QRT-PCR. مستويات فيمنتين على نسبة عالية من مسك وانخفاض في MEEC (2.2x العالي، ف &lt;0.001)، في حين أن مستويات cytokeratin مرتفعة في MEEC وانخفاض في مسك (36X العالي، ف &lt;0.001). أجري فيمنتين / تلطيخ مزدوج cytokeratin وأشار إلى أن الخلايا اللحمية تعبر عن فيمنتين في حين epitخلايا helial تعبر عن cytokeratin (الشكل 2B، C). وقد استخدم غياب الأجسام المضادة الأولية كوسيلة لمراقبة سلبية على المناعية (الشكل 2D، E). تظهر هذه stainings immunohistological أن كلا من مزارع الخلايا بطانة الرحم (MEEC ومسك) لديها نقاء تصل إلى 90٪. Decidualization في MEEC / مسك Cocultures بعد العزلة، والمصنف خلايا بطانة الرحم الماوس واللحمية في نظام الثقافة المشتركة لمحاكاة بيئة الرحم. وكانت الخلايا المستزرعة حتى شكلت خلايا الظهارية أحادي الطبقة في إدراج الثقافة الخلية (قيم طير من 800 - 1000 / جيد)، وصلت إلى خلايا انسجة دولة شبه متموجة. وكان المستحث Decidualization في الخلايا اللحمية مع تطبيق 0.5 ملي المخيم و1 ميكرومتر MPA. بعد خمسة أيام من الحضانة، تم تقييم مستويات مرنا البرولاكتين في الخلايا اللحمية التي كتبها QRT-PCR مؤشرا لdecidualization (الشكل 3A). وأعرب عن مستويات البرولاكتين العالية في الخلايا تتعرض للهرمونات وnondetectable في الخلايا المحتضنة مع وسيلة التحكم (P &lt;0.01). منذ الخلايا الظهارية من الصعب تصور داخل إدراج ثقافة الخلية، تم إجراء فحص قابلية على الفور بعد فترة الحضانة لمدة خمسة أيام (الشكل 3B). تمت إضافة مزيج من متوسط ​​النمو الطبيعي وكاشف الجدوى إلى الآبار وحضنت لمدة الحد الأدنى من 8-12 ساعة. وأشار التحول من اللون الأزرق إلى اللون الوردي مشرق وجود خلايا الظهارية قابلة للحياة. لاحظ أن تحول لون سوف تحدث فقط عند وجود خلايا قابلة للحياة. <img alt="شكل 1" src="/files/ftp_upload/55168/55168fig1.jpg" /> الشكل 1: نظرة شاملة من البروتوكول. (أ) مخطط للبروتوكول العزلة بدأت مع ثلاثةأيام متتالية من حقن هرمون الاستروجين. في يوم 3، وينبغي إعداد التحضيرات اللازمة. في يوم 4، يتم تقييم مرحلة الشبق (المشار إليها نجوم) عن طريق إجراء غسيل المهبل. مسك وMEEC يتم عزل باستخدام الخطوات الهضم مختلفة. في يوم 6، أو عندما الخلايا هي متكدسة، decidualization يمكن أن يتسبب في نظام المشاركة في الثقافة بإضافة المخيم والمناطق البحرية المحمية إلى المتوسطة وفترة الحضانة من خمسة أيام (يوم 6-11). (ب) الصورة التمثيلية للمرحلة الشياع تتميز بوجود خلايا الظهارية متقرن في غسل المهبل (التكبير 10X). (C) الصورة التمثيلية للمسك وMEEC (التكبير 20X، شريط مقياس: 100 ميكرون). <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55168/55168fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الشكل 2" src="/files/ftp_upload/55168/55168fig2.jpg" /> <stron<html> ز&gt; الشكل 2: المناعية والكمي RT-PCR لفيمنتين وCytokeratin في MEEC ومسك. (أ) مستويات رسول الحمض النووي الريبي فيمنتين وcytokeratin التعبير للدلالة على نقاء الثقافات. وتم قياس كمية الحمض النووي الريبي مستويات نسبيا في الوسط الهندسي من الجينات التدبير المنزلي ACTB وTBP. وقد أظهرت البيانات كما يعني ± SEM. فيمنتين / تلطيخ مزدوج cytokeratin على الثقافات مسك (ب) والثقافات MEEC (C). إدراج في الجهة اليسرى يظهر عرض التكبير 63X. السيطرة السلبية مع الأجسام المضادة الأولية حذفت لمسك (D) وMEEC (E) (مقياس شريط: 50 ميكرومتر). ***: P &lt;0.001 مع اتجاهين أنوفا مع تصحيح بونفيروني لاختبار متعددة. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55168/55168fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> EP-together.within الصفحات = &quot;1&quot;&gt; <img alt="الشكل (3)" src="/files/ftp_upload/55168/55168fig3.jpg" /> الرقم 3: التحقق من Decidualization عبر RT-PCR. مستويات (A) مرنا التعبير للبرولاكتين في خلايا انسجة لتقييم decidualization. وتم قياس كمية الحمض النووي الريبي مستويات نسبيا في الوسط الهندسي من الجينات التدبير المنزلي PGK1 وTBP. ويظهر التغير أضعاف في الخلايا المستزرعة في السيطرة أو المتوسطة ساقطي كما يعني ± SEM. (ب) صور توضيحية للخلايا انسجة قبل (أعلى) وبعد (القاع) التحفيز decidualization. إدراج على اليمين يوضح التكبير من خلية انسجة decidualized. يتميز Decidualization عن وجود خلايا متعددة النوى، وأشار السهام السوداء. (C) صور الممثل لتقييم قابلية الخلايا الظهارية في إدراج بعد الفحص. وتم التقاط الصور على الفور بعد إدارة كاشف الجدوى (Prestoblue) (0 ح) ووصباح ollowing (ON). **: ف &lt;0.01 مع اختبار مان ويتني U. ON: بين عشية وضحاها. شريط مقياس: 100 ميكرون. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55168/55168fig3large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Mouse Endometrial Epithelial and Stromal Cells for In Vitro Decidualization at JoVE.com

Isolation of Mouse Endometrial Epithelial and Stromal Cells for In Vitro Decidualization

تقدم هذه الدراسة طريقة موحدة والتحقق من صحتها للعزلة وثقافة الماوس الرئيسي انسجة بطانة الرحم والخلايا الظهارية، والتي يمكن استخدامها في نظام coculture للدراسة في decidualization المختبر.

عزل ماوس بطانة الرحم طلائي واللحمية خلايا ل<em&gt; في المختبر</em&gt; Decidualization

Decidualization is a progesterone-dependent differentiation process of endometrial stromal cells and is a prerequisite for successful embryo implantation. ...

isolation-mouse-endometrial-epithelial-stromal-cells-for-vitro

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Isolation of Mouse Endometrial Epithelial and Stromal Cells for In Vitro Decidualization

23.9K Views.  Katholieke Universiteit Leuven (KU Leuven).  تقدم هذه الدراسة طريقة موحدة والتحقق من صحتها للعزلة وثقافة الماوس الرئيسي انسجة بطانة الرحم والخلايا الظهارية، والتي يمكن استخدامها في نظام coculture للدراسة في decidualization المختبر. 

Video: Isolation of Mouse Endometrial Epithelial and Stromal Cells for In Vitro Decidualization

Isolation of Human Endometrial Stromal Cells for In Vitro Decidualization

The differentiation of human endometrial stromal cells (HESC) from fibroblast-like appearance into secretory decidua is a transformation required for embryo implantation into the uterine lining of the maternal womb. Improper decidualization has been established as a root cause for implantation failure and subsequent early embryo miscarriage. Therefore, understanding the molecular mechanisms underlying decidualization is advantageous to improving the rate of successful births. In vivo based studies of artificial decidualization are often limiting due to ethical dilemmas associated with human research, as well as translational complications within animal models. As a result, in vitro assays through primary cell culture are often utilized to explore the modulation of decidualization via hormones. This study provides a detailed protocol for the isolation of HESC and subsequent artificial decidualization via the supplementation of hormones to the culturing medium. Further, this study provides a well-designed method to knockdown any gene of interest by utilizing lipid-based siRNA transfections. This protocol permits the optimization of culture purity as well as product yield, thereby maximizing the ability to utilize this model as a reliable method to understand the molecular mechanisms underlying decidualization, and the subsequent quantification of secreted agents by decidualized endometrial stromal cells.

Isolation of Human Endometrial Stromal Cells for In Vitro Decidualization

This study presents a validated and optimized procedure for the isolation and culture of human endometrial stromal cells to conduct in vitro decidualization assay. Further, this study provides a detailed method to efficiently knockdown a specific gene using siRNAs in human endometrial stromal cells.

عزل الخلايا اللحمية الرحم البشرية في المختبر ديسيدواليزيشن

The differentiation of human endometrial stromal cells (HESC) from fibroblast-like appearance into secretory decidua is a transformation required for ...

Two Methods for Establishing Primary Human Endometrial Stromal Cells from Hysterectomy Specimens

Many efforts have been devoted to establish in vitro cell culture systems. These systems are designed to model a vast number of in vivo processes. Cell culture systems arising from human endometrial samples are no exception. Applications range from normal cyclic physiological processes to endometrial pathologies such as gynecological cancers, infectious diseases, and reproductive deficiencies. Here, we provide two methods for establishing primary endometrial stromal cells from surgically resected endometrial hysterectomy specimens. The first method is referred to as &#8220;the scraping method&#8221; and incorporates mechanical scraping using surgical or razor blades whereas the second method is termed &#8220;the trypsin method.&#8221; This latter method uses the enzymatic activity of trypsin to promote the separation of cells and primary cell outgrowth. We illustrate step-by-step methodology through digital images and microscopy. We also provide examples for validating endometrial stromal cell lines via quantitative real time polymerase chain reactions (qPCR) and immunofluorescence (IF).

Establishing primary endometrial stromal cell culture systems from hysterectomy specimens is a valuable biological technique and a crucial step prior to pursuing a vast array of research aims. Here, we describe two methods used to establish stromal cultures from surgically resected endometrial tissues of human patients.&#160;

طريقتين لإنشاء أولي خلايا وانسجة بطانة الرحم الإنسان من استئصال الرحم العينات

Many efforts have been devoted to establish in vitro cell culture systems. These systems are designed to model a vast number of in vivo processes. Cell ...

Medicine

Generation of a Mouse Artificial Decidualization Model with Ovariectomy for Endometrial Decidualization Research

Endometrial decidualization is a unique differentiation process of the endometrium, closely related to menstruation and pregnancy. Impairment of decidualization leads to various endometrial disorders, such as infertility, recurrent miscarriage, and preterm birth. The development and use of the endometrial decidualization model in reproductive studies have been a highlight for reproductive researchers for a long time. The mouse has been extensively used in studying reproduction and decidualization. There are three well-established mouse models regarding decidualization, namely natural pregnancy decidualization (NPD), artificial decidualization (AD), and in vitro decidualization (IVD). Among them, AD is considered a reliable model for mouse decidualization, which is easy to implement and close to NPD. This paper focuses on a modified method of the generation and application process of the mouse artificial decidualization model with ovariectomy to avoid ovarian effects, which can obtain highly reproducible results with small within group variances. This method provides a good and reliable animal model for the study of endometrial decidualization.

Here, we describe the method of generating an artificial decidualization model using the ovariectomized mouse, a classic endometrial decidualization experiment in the research field of endometrial decidualization.

توليد نموذج إزالة الترسيب الاصطناعي للفأر مع استئصال المبيض لأبحاث إزالة ترسبات بطانة الرحم

Endometrial decidualization is a unique differentiation process of the endometrium, closely related to menstruation and pregnancy. Impairment of ...

Isolation of Primary Human Decidual Cells from the Fetal Membranes of Term Placentae

The decidua, also known as the pregnant endometrium, is a critically important reproductive tissue. Decidual cells, comprised mainly of decidualized stromal cells and immune cells, are responsible for the secretion of hormonal and inflammatory factors which are critical for successful blastocyst implantation, placental development and play a role in the initiation of labor at term and preterm. Many pregnancy complications can arise from perturbations of a fine balance of different cell populations comprising decidua. Alterations in the proportion of specific decidual cell types may disrupt these crucial processes and increase the risk of developing serious complications of pregnancy, such as embryo implantation failure, intrauterine growth restriction, preeclampsia and preterm labor. The protocol outlined here demonstrates a cost and time effective method for the isolation of primary human decidual cells collected from the fetal membranes of term placentae. By combining enzymatic digestion and gentle mechanical disruption of the decidual tissue, a high yield of decidual cells was obtained with virtually no chorion contamination. Importantly, isolated decidual cells were characterized (stromal cells (55-60%), leukocytes (35%), epithelial (1%) or trophoblast (0.01%) cells) and maintained high viability (80%) which was confirmed by multicolor imaging flow cytometry assay. This protocol is specific to the decidua parietalis and can be adapted to first and second trimester placentae. Once isolated, decidual cells can be used for a multitude of experimental applications aiming to understand the role of different decidual cell sub-populations in pregnancy complications.

This protocol demonstrates a method for the isolation of primary human decidual cells collected from the fetal membranes of term placentae which can be used for a variety of applications (i.e. immunocytochemistry, flow cytometry, etc.) aiming to study the role of different cell populations in pregnancy complications.

عزل خلايا Decidual البشرية الأولية من الأغشية الجنينية لمصطلح مترافق

The decidua, also known as the pregnant endometrium, is a critically important reproductive tissue. Decidual cells, comprised mainly of decidualized ...

A Syngeneic Murine Model of Endometriosis using Naturally Cycling Mice

Endometriosis is a leading cause of pelvic pain and infertility. It is defined by the presence of endometrial tissue in extrauterine locations. The development of novel therapies and diagnostic tools for endometriosis has been limited due in part to challenges in studying the disease. Outside of primates, few mammals menstruate, and none develop spontaneous endometriosis. Rodent models are popular but require artificial induction of endometriosis, with many utilizing either immunocompromised mice or surgically induced disease. Recently, more attention has been given to models involving intraperitoneal injection. We present a murine model of endometriosis that integrates several features of existing endometriosis models into a novel, simplified system that relies on microscopic quantification in lieu of subjective grading. In this model, we perform hormonal stimulation of donor mice, intraperitoneal injection, systematic abdominal survey and tissue harvest, and histologic quantification that can be performed and verified at any time after necropsy. This model requires minimal resources and training; does not require expertise by lab technicians in murine survival surgery or in the identification of gross endometriotic lesions; can be used in immunocompromised, immunocompetent, and/or mutant mice; and reliably creates endometriotic lesions that are histologically consistent with human endometriotic disease.

Many rodent models of endometriosis are limited by technical complexity, reproducibility, and/or need for immunocompromised animals or special reporter mice. We present a simplified system of lesion induction using any experimental mouse with an independently verifiable, objective scoring system and with no requirement for ovariectomy or survival surgery.

نموذج مورين Syngeneic من بطانة الرحم باستخدام الفئران ركوب الدراجات بشكل طبيعي

Endometriosis is a leading cause of pelvic pain and infertility. It is defined by the presence of endometrial tissue in extrauterine locations. The ...

Development of a Novel Endometrioma-Simulating Mouse Model

Establishment of an Experimental Mouse Model of Endometrioma to Study its Related Infertility

Endometrioma (OMA), a subtype of endometriosis characterized by the formation of endometriotic cysts in the ovaries, affects 17-44% of individuals diagnosed with endometriosis. Women with OMA often experience compromised fertility, yet the exact mechanisms underlying OMA-associated infertility remain unclear. Notably, existing animal models simulate superficial peritoneal endometriosis (SUP) and deep infiltrating endometriosis (DIE), leaving a notable gap in research focused on OMA. In response to the gap of knowledge, this paper introduces a pioneering OMA-simulating mouse model and provides a comprehensive description of the techniques and procedures employed in the model. With a high success rate of 83% and ovarian lesion specificity, this model holds significant promise for advancing our understanding of OMA, particularly in the context of infertility. It offers a valuable platform for conducting targeted research into OMA-associated fertility challenges, potentially paving the way for improved diagnostic and therapeutic strategies in the field of reproductive medicine.

This study introduces a novel mouse model specifically designed to simulate endometrioma, a clinically significant subtype of endometriosis. By utilizing C57BL/6J mice, the model aims to elucidate the pathophysiological mechanisms underlying endometrioma-related infertility, offering a refined tool to bridge the current knowledge gap in reproductive medicine.

Endometrioma (OMA), a subtype of endometriosis characterized by the formation of endometriotic cysts in the ovaries, affects 17-44% of individuals ...

Establishing 3D Endometrial Organoids from the Mouse Uterus

Endometrial tissue lines the inner cavity of the uterus and is under the cyclical control of estrogen and progesterone. It is a tissue that is composed of luminal and glandular epithelium, a stromal compartment, a vascular network, and a complex immune cell population. Mouse models have been a powerful tool to study the endometrium, revealing critical mechanisms that control implantation, placentation, and cancer. The recent development of 3D endometrial organoid cultures presents a state-of-the-art model to dissect the signaling pathways that underlie endometrial biology. Establishing endometrial organoids from genetically engineered mouse models, analyzing their transcriptomes, and visualizing their morphology at a single-cell resolution are crucial tools for the study of endometrial diseases. This paper outlines methods to establish 3D cultures of endometrial epithelium from mice and describes techniques to quantify gene expression and analyze the histology of the organoids. The goal is to provide a resource that can be used to establish, culture, and study the gene expression and morphological characteristics of endometrial epithelial organoids.

This protocol describes methodologies to establish mouse endometrial epithelial organoids for gene expression and histological analyses.

إنشاء عضويات بطانة الرحم 3D من رحم الفأر

Endometrial tissue lines the inner cavity of the uterus and is under the cyclical control of estrogen and progesterone. It is a tissue that is composed of ...

Biology

تقييم التصاق الأجنة في نموذج الثقافة المشتركة في المختبر مع خلايا إيشيكاوا

Establishment of an Embryo Implantation Model In Vitro

Embryo implantation is the first step in the establishment of a successful pregnancy. An in vitro model for embryo implantation is critical for basic biological research, drug development, and screening. This paper presents a simple, rapid, and highly efficient in vitro model for embryo implantation. In this protocol, we first introduce mouse blastocyst acquisition and human endometrial adenocarcinoma cells (Ishikawa)&#160;preparation for implantation, followed by the co-culture method for mouse embryos and Ishikawa cells. Finally, we conducted a study to assess the impact of varying concentrations of 17-&#946;-estradiol (E2) and progesterone (P4) on embryo adhesion rates based on this model. Our findings revealed that high concentrations of E2 significantly reduced embryo adhesion, whereas the addition of progesterone could restore the adhesion rate. This model offers a simple and fast platform for evaluating and screening molecules involved in the adhesion process, such as cytokines, drugs, and transcription factors controlling implantation and endometrial receptivity.

تسليط الضوء على المؤلف: تطوير الاستراتيجيات العلاجية لتحسين معدلات الحمل من خلال تحليل تفاعلات الجنين وبطانة الرحم

This protocol describes methodologies to establish simple and efficient embryo implantation in vitro model for evaluating the relevant molecules affecting the embryo implantation process.

إنشاء نموذج زرع الجنين في المختبر

Embryo implantation is the first step in the establishment of a successful pregnancy. An in vitro model for embryo implantation is critical for basic ...

عزل ماوس بطانة الرحم طلائي واللحمية خلايا ل

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

عزل الخلايا اللحمية الرحم البشرية في المختبر ديسيدواليزيشن

طريقتين لإنشاء أولي خلايا وانسجة بطانة الرحم الإنسان من استئصال الرحم العينات

توليد نموذج إزالة الترسيب الاصطناعي للفأر مع استئصال المبيض لأبحاث إزالة ترسبات بطانة الرحم

عزل خلايا Decidual البشرية الأولية من الأغشية الجنينية لمصطلح مترافق

نموذج مورين Syngeneic من بطانة الرحم باستخدام الفئران ركوب الدراجات بشكل طبيعي

Establishment of an Experimental Mouse Model of Endometrioma to Study its Related Infertility

إنشاء عضويات بطانة الرحم 3D من رحم الفأر

إنشاء نموذج زرع الجنين في المختبر

إنشاء نموذج زرع الجنين في المختبر

إنشاء نموذج زرع الجنين في المختبر