עבודה זו נתמכה על ידי תרומות של הקרן למחקר-פלנדריה (FWO G.0856.13N) ומועצת המחקר של KU Leuven (OT / 13/113). KDC ממומן על ידי בלגיה FWO. AH ממומנת על ידי OT / 13/113. ברצוננו להודות מתקן Core תא הדמיה של KU Leuven (http://gbiomed.kuleuven.be/english/corefacilities/microscopy/cic/cic.htm) לשימושם של המיקרוסקופ confocal.

<ol>
	<li>Cummings, A. M., Yochim, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+the+uterus+in+preparation+for+gestation:+a+model+for+the+action+of+progesterone.">Differentiation of the uterus in preparation for gestation: a model for the action of progesterone.</a> J Theor Biol. 106 (3), 353-374 (1984).</li><li>Jabbour, H. N., Kelly, R. W., Fraser, H. M., Critchley, H. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endocrine+regulation+of+menstruation.">Endocrine regulation of menstruation.</a> Endocr Rev. 27 (1), 17-46 (2006).</li><li>Wang, X., Matsumoto, H., Zhao, X., Das, S. K., Paria, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+signals+direct+the+formation+of+tight+junctional+permeability+barrier+in+the+decidualizing+stroma+during+embryo+implantation.">Embryonic signals direct the formation of tight junctional permeability barrier in the decidualizing stroma during embryo implantation.</a> J Cell Sci. 117 (Pt 1), 53-62 (2004).</li><li>Zygmunt, M., Herr, F., Munstedt, K., Lang, U., Liang, O. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenesis+and+vasculogenesis+in+pregnancy.">Angiogenesis and vasculogenesis in pregnancy.</a> Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. 110 Suppl 1, S10-S18 (2003).</li><li>Power, M. L., Schulkin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The evolution of the human placenta. , (2012).</li><li>Finn, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+initiation+of+the+decidual+cell+reaction+in+the+uterus+of+the+aged+mouse.">The initiation of the decidual cell reaction in the uterus of the aged mouse.</a> J Reprod Fertil. 11 (3), 423-428 (1966).</li><li>Grant, K. S., Wira, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+mouse+uterine+stromal+cells+on+epithelial+cell+transepithelial+resistance+(TER)+and+TNFalpha+and+TGFbeta+release+in+culture.">Effect of mouse uterine stromal cells on epithelial cell transepithelial resistance (TER) and TNFalpha and TGFbeta release in culture.</a> Biol Reprod. 69 (3), 1091-1098 (2003).</li><li>De Clercq, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+expression+of+transient+receptor+potential+channels+in+human+endometrial+stromal+cells+during+the+luteal+phase+of+the+menstrual+cycle.">Functional expression of transient receptor potential channels in human endometrial stromal cells during the luteal phase of the menstrual cycle.</a> Hum Reprod. 30 (6), 1421-1436 (2015).</li><li>Pieper, F. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+vimentin+expression+in+cultured+epithelial+cells.">Regulation of vimentin expression in cultured epithelial cells.</a> Eur J Biochem. 210 (2), 509-519 (1992).</li><li>Greaves, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+mouse+model+of+endometriosis+mimics+human+phenotype+and+reveals+insights+into+the+inflammatory+contribution+of+shed+endometrium.">A novel mouse model of endometriosis mimics human phenotype and reveals insights into the inflammatory contribution of shed endometrium.</a> Am J Pathol. 184 (7), 1930-1939 (2014).</li><li>Pierro, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stromal-epithelial+interactions+modulate+estrogen+responsiveness+in+normal+human+endometrium.">Stromal-epithelial interactions modulate estrogen responsiveness in normal human endometrium.</a> Biol Reprod. 64 (3), 831-838 (2001).</li><li>Kim, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progesterone-dependent+release+of+transforming+growth+factor-beta1+from+epithelial+cells+enhances+the+endometrial+decidualization+by+turning+on+the+Smad+signalling+in+stromal+cells.">Progesterone-dependent release of transforming growth factor-beta1 from epithelial cells enhances the endometrial decidualization by turning on the Smad signalling in stromal cells.</a> Mol Hum Reprod. 11 (11), 801-808 (2005).</li><li>Chen, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coculturing+human+endometrial+epithelial+cells+and+stromal+fibroblasts+alters+cell-specific+gene+expression+and+cytokine+production.">Coculturing human endometrial epithelial cells and stromal fibroblasts alters cell-specific gene expression and cytokine production.</a> Fertil Steril. 100 (4), 1132-1143 (2013).</li><li>Renaud, J., Martinoli, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+Insert+Co-culture+System+of+Two+Cellular+Types+in+the+Absence+of+Cell-Cell+Contact.">Development of an Insert Co-culture System of Two Cellular Types in the Absence of Cell-Cell Contact.</a> J Vis Exp. (113), (2016).</li><li>Arnold, J. T., Kaufman, D. G., Seppala, M., Lessey, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometrial+stromal+cells+regulate+epithelial+cell+growth+in+vitro:+a+new+co-culture+model.">Endometrial stromal cells regulate epithelial cell growth in vitro: a new co-culture model.</a> Hum Reprod. 16 (5), 836-845 (2001).</li><li>Park, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+well-defined+in+vitro+three-dimensional+culture+of+human+endometrium+and+its+applicability+to+endometrial+cancer+invasion.">A well-defined in vitro three-dimensional culture of human endometrium and its applicability to endometrial cancer invasion.</a> Cancer Lett. 195 (2), 185-192 (2003).</li></ol>

החוקרים אין לי מה לחשוף.

Decidualization הוא הבידול תלוי פרוגסטרון של תאי סטרומה רירית רחם לתאי decidual עגולים והסתרתו. ב אדם, תהליך זה מתרחש באופן ספונטני במהלך שלב הלוטאלי של המחזור והוא יזם בתאים סטרומה סביב תאי כלי הדם כדי ליצור את predecidua. עם זאת, במכרסמים, הנוכחות של הבלסטוציסט היא הכרחית כדי לגרום decidualization. העובדה decidualization מתרחשת רק לאחר מגע עם תאי אפיתל רירית הרחם מרמז כי גורמים חשובים מופרשים על ידי תאי אפיתל לגרום decidualization ב stroma הבסיסית. למרות ההבדל הזה התנעת decidualization ראויה להכרה, העובדה decidualization אדם הופך להיות יותר חזק על השתלת עובר עולה כי מנגנונים דומים יכולים להיות מעורבים. במבחנה בתרביות תאים משמשים לעתים קרובות כדי לחקור את ההשפעה של מולקולות ספציפיות בתהליך decidualization.עם זאת, הזמינות והכמות של רקמה אנושית שניתן לגבות מוגבלת לעתים קרובות ומלווים וריאציות, למשל, מחזור שלב, מספר ההריונות ונוכחות של מחלות גינקולוגיות כמו אנדומטריוזיס או אדנומיוזיס. רבים של בעיות אלה ניתן למנוע על ידי שימוש ברקמה בעכברים כי הוא נגיש ושלב במחזור עצמאית. יתרון חזק נוסף של שימוש רקמות בעכברים הוא ההזדמנות להשתמש מכרסמים מהונדסים גנטי ואפשרות ההתקנה מספר רב של ניסויים. כרגע, פרוטוקולי בידוד שונים תוארו בספרות עם שונות גבוהות בעידן של החיות והתקופה בשלב הייחום ברגע השימוש. מחקר זה מציג שיטה חדשה תרבויות-שיתוף רירית הרחם העיקרי של סטרומה ותאי אפיתל שבו היתרון צולמה של מחזור הייחום מתוקנן זריקה יומית של אסטרוגן לפני הבידוד. יתר על כן, אסטרוגן הוא known לגרום התפשטות בתאי אפיתל סטרומה אשר מגדילה עוד יותר את התשואה לכל בידוד. פרוטוקול הבידוד המתואר במאמר זה התבסס על ואח גרנט. 7, לעומת זאת, צעדים אופטימיזציה נוספים נכללו כדי להגדיל את התשואה, טוהר, ואת הכדאיות של תרביות תאים השונות. ראשית, HBSS תמיד משלים עם אנטיביוטיקה כדי למנוע זיהום של התרבות העיקרית. במהלך הבידוד של MEEC, עיבוד טמפרטורה נעשה (15 דקות ב 37 מעלות צלזיוס) כדי להגדיל את היבול של תאי אפיתל במהלך העיכול הראשון. הבא, צעד נוסף נכלל למתן הפעילות האנזימטית לאחר עיכול טריפסין על ידי הוספת בינוני המכיל FBS לעכב את פעילותו. יתר על כן, MEECs הועבר דרך פילטר של שבו הרשת הייתה גדולה יותר מה שמתואר בדרך כלל (100 מיקרומטר) כפי שהם באים בדרך כלל באשכולות ויריעות תא. יתר על כן, זיהום על ידי תאי סטרומה הופחת על ידי ביצוע רחבצעד itional שבו MEECs ו MESCs הופרדו מבוסס על שקיעה הכבידה. לבסוף, MEECs היו זורעים על coverslips מצופה קולגן להגדיל את הקובץ המצורף של תאים coverslips זכוכית, כפי שהתברר כי מצורף coverslips זכוכית ללא ציפוי או PLL מצופה היה מספיק. במהלך הבידוד של MESCs, collagenase (1 מ&quot;ג / מ&quot;ל) נוספה כדי לשפר את העיכול. יתר על כן, צעד עיכול זה בוצע בשני עותקים, כדי למנוע זיהום של MEECs נותר. כל פעולות נוספות הבאות הביאו תרבויות טהורות ובת קיימא של אוכלוסיות תאים הומוגנית. טוהר אוכלוסיית התא הוערך עם immunostaining ו qRT-PCR באמצעות vimentin כסמן סטרומה cytokeratin כסמן אפיתל. מובן כי דפוס ביטוי הפוך של vimentin ו cytokeratin נצפה MEEC ו המסקלין. עם זאת, ניתן להבחין כי הביטוי mRNA היחסי של vimentin ו cytokeratin דומה בתרבויות MEEC. similתוצאות ar מתפרסמות על ידי קבוצות מחקר אחרות, שבו תאי אפיתל בביטוי vimentin לרכוש תרבות 9. מה שחשוב יותר הוא ההבדל ביטוי חלבון בין vimentin ו cytokeratin כמו נצפתה stainings immunohistological של אוכלוסיות תאים שונות. immunostaining הזוגי הראה כי EECS היה חיובי עבור cytokeratin ו- ESC היה חיובי עבור vimentin. שימוש סמנים אלה immunostaining הוא שיטה הוקמה standardly משמש כדי לציין את סוגי התאים 10. למרות הרבה מחקר שבוצע על decidualization של המסקלין, אפשרי עדיין כי הנוכחות של תאי אפיתל מודל זה עשויה לשנות את התוצאות של decidualization. ראשית, הוכח שאם MEEC לגדול בשכבה בנוכחות בינוני המסקלין ממוזג או בסביבה שיתוף תרבות, בשכבה יש התנגדות חשמלית משופרת אפיתל תאי transepithelial (TEER), כתוצאה מגורמים המופרשים המסקלין 7. יתר על כן, פיירו et al. 11 סיפקו הוכחות לכך התפשטות אפיתל, מושפע 17β-אסטרדיול, עשוי להיות מתווכת על ידי גורמים המופרשים מתאי סטרומה, ולחילופין, תאי אפיתל יכול לשחרר גורמים לווסת סטרומה decidualization 12, 13. בסך הכל, זה ברור שסביבת שיתוף התרבות-סטרומה אפיתל מספקת מצב פיסיולוגי יותר המאפשר אינטראקציה ותקשורת paracrine. השיטה של culturing שני סוגי תאים שונים באמצעות מערכת שיתוף תרבות כנס שתוארה קודם לכן 14, 15 ו הותאמה לשימוש של תאים ראשוניים בעכברים. על ידי זיהוי של רמות ה- mRNA פרולקטין בתור מחוץ לקרוא decidualization, הטכניקה המתוארת יש לקריאה מתוך לשחזור מאוד עבור decidualization זמין ולאפשרזה ובכך בחקר היחסים אפיתל סטרומה במהלך decidualization. אותות paracrine בתיווך מן MEEC עשויים לשנות את היקף decidualization בתאים סטרומה. יתר על כן, המודל מאפשר אפנון ספציפי של הצד אפיתל ללא ישירות המשפיע על תאי סטרומה. לכן, זו התרבות המשותפת של MEEC ו המסקלין מציעה כלי מושלם כדי להעריך את ההשפעה של הורמונים, ציטוקינים, וכו &#39;על תאי אפיתל עם מחוץ לקרוא על decidualization סטרומה. יתרון נוסף של מערכת שיתוף תרבות זו הוא שהיא מאפשרת לחוקרים לחקור את מעורבותם של חלבון מסוים של תהליך decidualization כלשהי באחד משני אפיתל או תא סטרומה באמצעות תאים מבודדים מבעלי חיים מהונדסים. יתר על כן, טכניקה זו תהיה מועילה מאוד לחקור דבקה הבלסטוציסט להעריך האם גורמי paracrine מופרש מתא אפיתל בנוכחות של הבלסטוציסט מספיקים כדי לגרום decidualization של סטרומה הבסיסיתתאים. צעד חשוב הפלישה trophoblast בקורלציה השפלה מטריקס, אשר מתווכת על ידי פעולה של אנזימים פרוטאוליטים. הטכניקה המוצעת ניתן ליישם מודל במבחנה לחקור את ההצטלבות בין הבלסטוציסט, לתאי האפיתל ואת stroma תומך. עם זאת, כרגע מעט מאוד ידוע על מקורם של תאי אפיתל אשר יכול להיות גם לומינל כפי בלוטות. לכן, אפיון נוסף של הפרופיל הגנטי והמולקולרי של תאי אפיתל נדרש. בנוסף, השיטה המתוארת היא מוגבלת הידע הזמין על הקיטוב של תאי אפיתל. כרגע, הקיטוב של תאי אפיתל לא נלקח בחשבון. עם זאת, ההבדלים בביטוי של חלבונים בממברנה מתוארים ממברנות apical ואת הבסיס. הקיטוב לא ראוי של שכבת האפיתל יכול להשפיע על האינטראקציה paracrine בין epitheliאל ותאי סטרומה. עם זאת, שיטות להשיג תאי אפיתל מקוטבים התואר ויכולות להיכלל הטכניקה המתוארת 15, 16. בסך הכל, הפרוטוקול המתואר מציע טכניקת בהצלחה להקים בתרביות תאים ראשוניות של אפיתל עכבר רירית רחם ותאי סטרומה. טכניקה זו גורמת בתרביות תאים טהורות כפי שאושרה על ידי qRT-PCR ו immunostaining של vimentin ו cytokeratin. בסופו של דבר, גידול אפיתל סטרומה שיתוף תרבות הוצגה המאפשר חקירת אותות paracrine בתיווך או MEEC ו / או המסקלין בתהליך decidualization.

רירית הרחם האנושית הוא הציפוי הפנימי של הרחם עובר מחזורים חודשיים של התמוטטות ותיקון כהכנת הריונות אפשריים. הוא מורכב בשכבה אחת של תאי אפיתל המצפים את לומן הרחם ואת stroma הבסיסית אשר משתנה עובי פי תנודות של אסטרוגן הורמונים בשחלות ופרוגסטרון. בשלב הלוטאלי, עלייתו פרוגסטרון postovulatory תהיה להשרות התמיינות של תאי סטרומה רירית רחם אל, תאי decidual עגולים גדולים, תהליך הנקרא decidualization 1, 2. ב אדם, תופעה זו מתרחשת באופן ספונטני כדי ליצור את predecidua, אבל הופך בולט יותר על השתלת העובר. תוצאה תפקודית של decidualization היא שהרחם זמני הופך פתוח השתלה עוברת. מרווח זה מסומן כמו &quot;החלון של השתלה&quot;. במהלך התקופה המוקדמת של השתלה עוברת, דואר decidualizedתאי ndometrial סטרומה סביב עובר ההשתלה יספקו מחסום למנוע המעבר של חומרים מזיקים לעובר 3. במהלך הריון, decidua זו תספק חומרי הזנה עבור העובר המתפתח לפני placentation שקרה, ובהמשך תהווה את החלק האימהי של השליה 4. שיקולים אתיים ומעשיים להגביל את העיצוב של מחקרים בבני אדם כדי לחקור את תהליך decidualization ו יש הנחיות השימוש במודלים של בעלי חיים. להיות חבר בקבוצת placentation hemochorial, האנדומטריום של מכרסמים יעבור גם decidualization לפני placentation 5. במכרסמים, לעומת זאת, תחילת תהליך decidualization תלוי בנוכחות של blastocysts לומן הרחם, המציין כי גירוי נוסף יש צורך יפעיל את התגובות decidual 6. זה מתווה תקשורת מורכבת שבין הדואר רירית רחם אפיתל תאים שיש קשר ישיר עם הבלסטוציסט, ואת בתאי סטרומה הבסיסיים. אף על פי כן, decidualization יכול להיגרם באופן מלאכותי באמצעות גירויים כמו גירוד מכאני או ההחדרה של שמן רחם דרוך הורמונלית. למרות שמחקרי in vivo באמצעות מודלי decidualization מלאכותיים אפשרו לנו לשפר את תובנה שלנו בתהליך האיתות המורכב של decidualization, המחקרים מעמיקים מכניסטית, למשל, חקירת התקשורת ההכרחית בין תאי אפיתל סטרומה, מוגבלת. לכן, במבחנה מחקרים decidualization ניתן להשתמש כדי לתפעל מסלולים חשובים וללמוד תהליכים בסיסיים. לשם כך, תרביות תאי סטרומה רירית רחם עיקריות ניתן להגדיר מ רירית רחם אדם או מכרסמים. העסקת מכרסמים מסכימה השימוש בבעלי חיים מהונדסים גנטית כדי לחקור את התפקיד של חלבון מסוים של עניין בתהליך decidualization. עם זאת, לא בוגר, prepuberעכברי ty משמשים לעתים קרובות כדי למנוע סיבוכים של מחזור הייחום, בעוד שבמקרים אחרים uteri נאסף מכל שלבי מחזור הייחום, שתוצאתה ההטרוגניות התרבויות. יתר על כן, בתהליך של decidualization נחקר פרוטוקולים שונים, למשל, על ידי (i) הורמונים וישלימו (אסטרוגן, פרוגסטרון או monophosphate אדנוזין המחזורי (cAMP)) למדיום culturing, או על ידי (ii) בידוד של תאי decidual מעכברים בבית יום 4.5 של (פסאודו) הריון, אשר הביקוש להם צורך נוסף לבדיקת תקע וזכרים שעוקרים. מגבלות אלו האחרונות ממחישות את הצורך של שיטה סטנדרטית ללמוד decidualization במבחנה. במחקר זה, מודל פיסיולוגי לבחון במבחנת decidualization החל מבוגר, שאינם (פסאודו) עכברות הרות יוצגו. בשיטה זו, זריקה יומית של 17β-אסטרדיול (E2) תניע תרבות תאים של רירית רחם, ותוצאה היא תשואה מוגברת של הומוגנית pאוכלוסיות תאי יור. יתר על כן, השימוש של מערכת coculturing מאפשר לימוד של crosstalk-סטרומה אפיתל היכולת לתפעל את תהליך decidualization ברמות שונות.

<table><tbody><tr><td>ThinCert Tissue culture insert for 24 well plates; 1 &amp;micro;m pore size; transparant</td><td>Greiner Bio-one</td><td>662610</td><td>Inserts are also provided for other multiwell plates and/or other pore sizes. Other suppliers: Merck Millipore.&lt;br/&gt; https://shop.gbo.com/en/row/articles/catalogue/article/&lt;br/&gt;0110_0110_0090_0030/13408/&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Nunc Cell culture treated 24 well plates</td><td>Thermo Scientific</td><td>142475</td><td>http://www.thermofisher.com/order/catalog/product/142475</td></tr><tr><td>8-Bromoadenosine 3&amp;prime;,5&amp;prime;-cyclic monophosphate sodium salt</td><td>Sigma Aldrich</td><td>B7880</td><td>Prepare a stock solution of 100 mM in Milli Q water. Store aliquots at -20 &amp;deg;C.&lt;br/&gt; http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/b7880?lang=en&amp;amp;region=BE&amp;nbsp;&lt;br/&gt;</td></tr><tr><td>Medroxyprogesterone 17-acetate</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M1629</td><td>Prepare a stock solution of 250 &amp;micro;M in ethanol. Store aliquots at -20 &amp;deg;C.&lt;br/&gt; http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/m1629?lang=en&amp;amp;region=BE&amp;nbsp;&lt;br/&gt;</td></tr><tr><td>Arachis oil</td><td>Supermarket</td><td></td><td>Standard cooking arachis oil that can be found in every supermarket is used</td></tr><tr><td>PrestoBlue cell viability reagent</td><td>Thermo Scientific</td><td>A13261</td><td>https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/A13261?ICID=cvc-prestoblue-c1t1</td></tr><tr><td>HBSS 1x, no calcium, no magnesium, no phenol red</td><td>Gibco</td><td>14175-046</td><td>Store in fridge as long as possible. Use cold HBSS+ during the protocol.&lt;br/&gt; https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/14175046&amp;nbsp;&lt;br/&gt;</td></tr><tr><td>17-&amp;beta; Estradiol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>E8875</td><td>Prepare a stock solution of 1 mg/mL in EtOH before diluting in arachis oil (1:1,000).&lt;br/&gt;http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/e8875?lang=en&amp;amp;region=BE</td></tr><tr><td>Cell medium filter Stericup, 0.22 &amp;micro;m, polyethersulfone, 500 mL, radio-sterilized</td><td>Merck Millipore</td><td>SCGPU05RE</td><td>http://www.merckmillipore.com/BE/en/product/Stericup-GP%2C-0.22%C2%A0%C2%B5m%2C-polyethersulfone%2C-500%C2%A0mL%2C-radio-sterilized,MM_NF-SCGPU05RE</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin (5,000 U/mL)</td><td>Gibco</td><td>15070-063</td><td>https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/15070063?ICID=search-15070-063</td></tr><tr><td>DMEM/F12, phenol red, L-glutamine, HEPES</td><td>Gibco</td><td>11330-032</td><td>https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/11330057?ICID=search-11330-057</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum, qualified, heat inactivated, E.U.-approved, South America Origin</td><td>Gibco</td><td>10500-056</td><td>https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/10500064?ICID=search-10500-064</td></tr><tr><td>Amphotericin B</td><td>Gibco</td><td>15290-018</td><td>https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/15290018?ICID=search-15290-018</td></tr><tr><td>Gentamicin (50 mg/mL)</td><td>Gibco</td><td>15750-037</td><td>https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/15750037?ICID=search-15750-037</td></tr><tr><td>DMEM, low glucose, pyruvate, no glutamine, no phenol red</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D5921</td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/d5921?lang=en&amp;amp;region=BE</td></tr><tr><td>MCDB-105</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M6395</td><td>Dilute in Milli Q water, adjust pH to 7 with NaOH and filter before use. Store in the dark.&lt;br/&gt; http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/m6395?lang=en&amp;amp;region=BE&amp;nbsp;&lt;br/&gt;</td></tr><tr><td>Insulin from bovine pancreas</td><td>Sigma Aldrich</td><td>I1882</td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/i1882?lang=en&amp;amp;region=BE</td></tr><tr><td>Coverslips, glass, 18 mm &amp;Oslash;</td><td>Glaswarenfabrik Karl Hecht</td><td>1001/18</td><td>http://www.hecht-assistent.de/187/?L=1&amp;amp;tx_rmproducts_pi1[g]=937&lt;br/&gt;&amp;amp;tx_rmproducts_pi1[p]=3504&lt;br/&gt;&amp;amp;tx_rmproducts_pi1[v]=20088&lt;br/&gt;&amp;amp;cHash=abd12065683fe74b00eaa&lt;br/&gt;5e562824d06</td></tr><tr><td>Poly-L-lysine</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P2636</td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/p2636?lang=en&amp;amp;region=BE</td></tr><tr><td>Collagenase type IA from Clostridium histolyticum</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C2674</td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/c2674?lang=en&amp;amp;region=BE</td></tr><tr><td>DPBS, no calcium, no magnesium</td><td>Gibco</td><td>14190-094</td><td>https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/14190094?ICID=search-14190-094</td></tr><tr><td>Trypsin from bovine pancreas</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T7409</td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/t7409?lang=en&amp;amp;region=BE</td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA (0.05%), phenol red</td><td>Gibco</td><td>25300-054</td><td>Warm to room temperature before use.&lt;br/&gt; https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/25300054?ICID=search-25300-054&amp;nbsp;&lt;br/&gt;</td></tr><tr><td>Cell strainer, 40 &amp;micro;m mesh, disposable</td><td>BD Falcon</td><td>352340</td><td>https://www.fishersci.com/shop/products/falcon-cell-strainers-4/p-48680</td></tr><tr><td>Cell strainer, 100 &amp;micro;m mesh, disposable</td><td>BD Falcon</td><td>352360</td><td>https://www.fishersci.com/shop/products/falcon-cell-strainers-4/p-48680</td></tr><tr><td>Millex-GP Syringe Filter Unit, 0.22&amp;nbsp;&amp;micro;m, polyethersulfone, 33&amp;nbsp;mm, gamma sterilized</td><td>Merck Millipore</td><td>SLGP033RS</td><td>https://www.merckmillipore.com/BE/en/product/Millex-GP-Syringe-Filter-Unit%2C-0.22%C2%A0%C2%B5m%2C-polyethersulfone%2C-33%C2%A0mm%2C-gamma-sterilized,MM_NF-SLGP033RS?bd=1</td></tr><tr><td>Acetic acid (glacial) 100%</td><td>Merck Millipore</td><td>1.00063</td><td>https://www.merckmillipore.com/BE/en/product/Acetic-acid-%28glacial%29-100%25,MDA_CHEM-100063</td></tr><tr><td>Collagen I</td><td>Corning&amp;nbsp;</td><td>354236</td><td>From rat tail.&lt;br/&gt; https://catalog2.corning.com/LifeSciences/en-BR/Shopping/ProductDetails.aspx?categoryname=&amp;amp;&lt;br/&gt;productid=354236%28&lt;br/&gt;Lifesciences%29#&amp;nbsp;&lt;br/&gt;</td></tr><tr><td>Pancreatin from porcine pancreas</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P3292</td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/p3292?lang=en&amp;amp;region=BE</td></tr><tr><td>35 mm Tissue Culture Dishes, Polystyrene, Sterile</td><td>BD Falcon</td><td>353001</td><td>https://us.vwr.com/store/catalog/product.jsp?product_id=4675630</td></tr><tr><td>Ethanol absolute AnalaR NORMAPUR ACS, Reag. Ph. Eur. analytical reagent</td><td>VWR Chemicals</td><td>20821296</td><td>https://uk.vwr.com/store/catalog/product.jsp?catalog_number=20821.310DP</td></tr><tr><td>monoclonal rabbit anti-human vimentin (D21H3)&amp;nbsp;</td><td>Cell Signalling Tech</td><td>#5741</td><td>Use 1/500.&lt;br/&gt; http://www.cellsignal.com/products/primary-antibodies/vimentin-d21h3-xp-rabbit-mab/5741&lt;br/&gt;</td></tr><tr><td>monoclonal mouse anti-human pan cytokeratin&amp;nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C2562</td><td>Use 1/1,000.&lt;br/&gt;http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/c2562?lang=en&amp;amp;region=BE</td></tr><tr><td>Paraformaldehyde Solution, 4% in PBS</td><td>Affymetrix</td><td>19943</td><td>http://www.affymetrix.com/catalog/130621/USB/Paraformaldehyde+Solution+4+percent+in+PBS#1_1</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma Aldrich</td><td>X100</td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/SIAL/X100?lang=en&amp;amp;region=BE&amp;amp;gclid=&lt;br/&gt;Cj0KEQjwhN-6BRCJsePgxru9iIw&lt;br/&gt;BEiQAI8rq&lt;br/&gt;879lESeuIU4N4AEQRLNEXj4f&lt;br/&gt;8z65KkD-q8Xr35sQDRgaAp-k&lt;br/&gt;8P8HAQ</td></tr><tr><td>Goat serum</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G9023</td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/g9023?lang=en&amp;amp;region=BE</td></tr><tr><td>Goat anti-rabbit Alexa Fluor 488</td><td>Thermo Scientific</td><td>A-11034</td><td>http://www.thermofisher.com/order/genome-database/searchResults?query=488&amp;amp;&lt;br/&gt;resultPage=1&amp;amp;&lt;br/&gt;resultsPerPage=15&amp;amp;&lt;br/&gt;autocomplete=&amp;amp;&lt;br/&gt;searchMode=keyword&amp;amp;&lt;br/&gt;productTypeSelect=antibody&amp;amp;&lt;br/&gt;targetTypeSelect&lt;br/&gt;=antibody_secondary&amp;amp;&lt;br/&gt;species=ltechall&amp;amp;keyword=&lt;br/&gt;488#filters=genericsort2:\%22Capra%20hircus\%22;;generic6:^\%22Oryctolagus%20cuniculus\%22$;;conjugates:^\%22Alexa%20Fluor&amp;amp;reg;%20488\%22$;;</td></tr><tr><td>Goat anti-mouse Alexa Fluor 594</td><td>Thermo Scientific</td><td>A-11032</td><td>http://www.thermofisher.com/order/genome-database/searchResults?query=594&amp;amp;&lt;br/&gt;resultPage=1&amp;amp;&lt;br/&gt;resultsPerPage=15&amp;amp;&lt;br/&gt;autocomplete=&amp;amp;&lt;br/&gt;priorSearchTerms=&amp;amp;&lt;br/&gt;searchMode=keyword&amp;amp;&lt;br/&gt;productTypeSelect=antibody&amp;amp;&lt;br/&gt;targetTypeSelect=&lt;br/&gt;antibody_secondary&amp;amp;&lt;br/&gt;species=ltechall&amp;amp;&lt;br/&gt;keyword=594#filters=genericsort2:\%22Capra%20hircus\%22;;generic6:^\%22Mus%20musculus\%22$;;</td></tr><tr><td>VECTASHIELD mounting medium with DAPI</td><td>Vector Laboratories</td><td>H-1200</td><td>http://vectorlabs.com/vectashield-mounting-medium-with-dapi.html</td></tr><tr><td>DPBS, with calcium and magnesium</td><td>Gibco</td><td>14040174</td><td>https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/14040133</td></tr></tbody></table>

isolation of mouse endometrial epithelial and stromal cells for in vitro decidualization

Decidualization הוא תהליך התמיינות תלוי פרוגסטרון של תאי סטרומה רירית רחם הוא תנאי הכרחי להשתלת עובר מוצלחת. למרות מאמצים רבים נעשו כדי לחשוף את המנגנון הבסיסי של decidualization, האיתות המדויקת בין תאי אפיתל כי נמצאים בקשר עם העובר ואת בתאי סטרומה הבסיסיים נותרה הבינה היטב. לכן, לומד decidualization באופן שלוקח הוא אפיתל ותאי סטרומה בחשבון יכול לשפר את הידע שלנו לגבי הפרטים המולקולריים של decidualization. לשם כך, במודלים vivo של decidualization מלאכותית פיזיולוגית הרלוונטי ביותר; עם זאת, מניפולציה של תקשורת בין תאית מוגבלת. נכון לעכשיו, בתרבויות במבחנה של תאי סטרומה רירית רחם נמצא בשימוש כדי לחקור את האפנון של decidualization ידי מספר מולקולות איתות. כמקובל, תאי סטרומה אדם או עכבר רירית רחם הםמְשׁוּמָשׁ. עם זאת, את הזמינות של דגימות אנושיות לעתים קרובות מאוד מוגבלת. יתר על כן, השימוש ברקמות murine מלווה במגוון בשיטת culturing. מחקר זה מציג שיטה תוקפת סטנדרטית להשיג תא רירית רחם אפיתל טהור (EEC) ו- Cell סטרומה (ESC) תרבויות באמצעות עכברים שלמים מבוגרים שטופלו באסטרוגן במשך שלושה ימים רצופים. הפרוטוקול הוא מותאם כדי לשפר את התשואה, כדאיות, וטוהר של התאים הוארך נוסף על מנת ללמוד decidualization בתוך coculture של EEC ו- ESC. מודל זה עשוי להיות מתאים כדי לנצל את החשיבות של שני סוגי תאים decidualization וכדי להעריך את התרומה של מולקולות איתות משמעותי המופרשים EEC או ESC במהלך תקשורת בין תאית.

סקירה כללית של פרוטוקול איור 1 א ממחיש סקירה כללית של הפרוטוקול. זריקה יומית של E2 (100 ng) במשך שלושה ימים רצופים שמשה לסנכרן החיות ולתקנן את השלב של מחזור הייחום. מחזור הייחום ניתן להעריך על ידי lavages בנרתיק מחולק proestrus, ייחום, diestrus והפאזה metestrus. שלב המחזור יכול להיקבע בהתאם ליחס של תאי desquamated ב השטיפה, אשר חשופים לשינויים הורמונליים. הגדלת רמות של אסטרוגן תגרום החיות להתפתח לשלב ייחום. בשלב זה ניתן לאתר בקלות על ידי נוכחות של תאי אפיתל cornified בלעדי והיעדר לויקוציטים (איור 1B). ביום 4, uteri של חיות שנמצאות בשלב ייחום נאספים MEEC ו המסקלין מבודדים (תרשים 1C). ג Decidualizationלהיגרם על ידי הוספת 0.5 מ&quot;מ cAMP ו -1 מיקרומטר MPA למדיום FBS 2% במהלך תקופת הדגירה של 5 ד. בקרת איכות של תרבויות MEEC ו המסקלין טוהר בתרביות תאים ראשוניים ניתן להעריך על ידי ההבדל ביטוי vimentin ו cytokeratin. Vimentin הוא סיבי ביניים אשר באה לידי ביטוי בתאים mesenchymal, ומכאן בתאי סטרומה רירית הרחם. Cytokeratin הוא סיבי ביניים נמצא שלד התא של רקמות אפיתל. איור 2 א מראה את רמת ביטוי mRNA של vimentin ו cytokeratin ב MEEC ו המסקלין הוערכה באמצעות qRT-PCR. רמות vimentin עשירות המסקלין ודלות MEEC (2.2x גבוה, p &lt;0.001), בעוד שרמות cytokeratin עשירות MEEC ודל המסקלין (36x גבוה, p &lt;0.001). Vimentin / צביעה כפולה cytokeratin בוצעה וציינה כי תאי סטרומה להביע vimentin ואילו epitתאים helial להביע cytokeratin (תרשים 2B, C). העדר נוגדן ראשוני שימש כביקורת שלילית עבור immunostaining (איור 2 ד, ה). stainings immunohistological אלה מראים כי הן בתרביות תאים של רירית הרחם (MEEC ו המסקלין) יש טוהר של עד 90%. Decidualization ב MEEC / המסקלין cocultures לאחר בידוד, עכבר תאי רירית רחם סטרומה היו זורעים במערכת שיתוף התרבות לחקות את הסביבה של רירית הרחם. תאים בתרבית עד לתאי האפיתל נוצרו בשכבה של כנס תרבית תאים (ערכי TEER של 800 - 1,000 / טוב), ואת בתאי סטרומה הגיעו למצב תת ומחוברות. Decidualization הושר תאי סטרומה עם היישום של 0.5 המ&quot;מ cAMP ו -1 מיקרומטר MPA. לאחר חמישה ימים של דגירה, רמות ה- mRNA פרולקטין הוערכו בתאים סטרומה ידי qRT-PCR משום אינדיקציה decidualization (איור 3 א). רמות הפרולקטין היו מבוטאות בכמות גבוהה בתאים נתונים ההורמונים nondetectable בתאים מודגרות עם מדיום הביקורת (p &lt;0.01). מאחר ותאי אפיתל קשים לדמיין בתוך מוסיף תרבית תאים, assay כדאית בוצעה מייד לאחר תקופת הדגירה של חמישה ימים (איור 3 ב). שילוב של מדיום גידול רגיל ריאגנט כדאיות נוסף הבארות וטופח במשך תקופה של 8 מינימאלי - h 12. מעבר צבע מכחול ורוד בהיר הצביע על הנוכחות של תאי אפיתל קיימא. ראוי לציין, כי שינוי הצבע יתרחש רק כאשר תאי קיימא נוכחים. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/55168/55168fig1.jpg" /> איור 1: סקירה כללית של הפרוטוקול. (א) תכנית של פרוטוקול הבידוד מתחילה עם שלושימים רצופים של זריקות אסטרוגן. ביום 3, צריכות להיות מוכנות את ההכנות הדרושות. ביום 4, שלב ייחום מוערך (מסומן על ידי כוכב) על ידי ביצוע שטיפה וגינלית. המסקלין ו MEEC מבודדים באמצעות צעדי עיכול שונים. ביום 6, או כאשר תאים הם ומחובר, יכול להיגרם decidualization במערכת שיתוף התרבות ידי הוספת cAMP ו MPA הבינוני תקופת דגירה של חמישה ימים (יום 6 - 11). (ב) תמונה מייצגת של השלב ייחום מאופיין בנוכחות של תאים cornified אפיתל של שטיפה וגינלית (בהגדלה 10X). (C) תמונה מייצגת של המסקלין ו MEEC (בהגדלה 20X, סרגל קנה מידה: 100 מיקרומטר). <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55168/55168fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/55168/55168fig2.jpg" /> <stron<html> g&gt; איור 2: Immunostaining וכמותי RT-PCR עבור vimentin ו Cytokeratin ב MEEC ו המסקלין. (א) רמות RNA שליח ביטוי vimentin ו cytokeratin כדי לציין את הטוהר של תרבויות. רמות RNA כומתו יחסית לממוצע הגיאומטרי של גנים משק ACTB ו TBP. נתונים הוצגו כממוצע ± SEM. Vimentin / צביעה כפולה cytokeratin על תרבויות המסקלין (B) ותרבויות MEEC (C). הכנס ב משמאל מראה נוף בהגדלה 63X. בקרה שלילית עם נוגדן ראשוני השמיט עבור המסקלין (ד) ו MEEC (E) (סרגל קנה מידה: 50 מיקרומטר). ***: P &lt;0.001 עם ANOVA דו כיוונית עם תיקון Bonferroni למבחנים מרובים. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55168/55168fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> EP-together.within-page = &quot;1&quot;&gt; <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/55168/55168fig3.jpg" /> איור 3: תיקוף Decidualization באמצעות RT-PCR. (א) רמות mRNA ביטוי פרולקטין בתאי סטרומה להעריך decidualization. רמות RNA כומתו יחסית לממוצע הגיאומטרי של גנים משק PGK1 ו TBP. השינוי לקפל בתאים בתרבית בשליטה או בינוני decidual מוצג ממוצע ± SEM. (ב) תמונות להמחשה של תאי סטרומה לפני (למעלה) ואחרי גירוי decidualization (למטה). את הכנס מימין ממחיש בהגדלה של תא סטרומה decidualized. Decidualization מאופיין בנוכחות של תאים multinucleated, שמסומן על ידי חיצים שחורים. (ג) נציג תמונות של הערכה של כדאיות התא האפיתל את הכנס לאחר assay. התמונות צולמו מיד לאחר מתן של מגיב הכדאיות (Prestoblue) (0 ח) ואת following הבוקר (אונ). **: P &lt;0.01 עם מאן-ויטני מבחן U. ON: לילה. סרגל קנה מידה: 100 מיקרומטר. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55168/55168fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Mouse Endometrial Epithelial and Stromal Cells for In Vitro Decidualization at JoVE.com

Isolation of Mouse Endometrial Epithelial and Stromal Cells for In Vitro Decidualization

מחקר זה מציג שיטה סטנדרטית ומאומתים עבור בידוד והתרבות של סטרומה רירית הרחם העכבר העיקרי ותאי אפיתל, אשר ניתן להשתמש בהם במערכת coculture ללמוד decidualization במבחנה.

בידוד של עכבר רירית הרחם אפיתל סטרומה תאים עבור<em&gt; במבחנה</em&gt; Decidualization

Decidualization is a progesterone-dependent differentiation process of endometrial stromal cells and is a prerequisite for successful embryo implantation. ...

isolation-mouse-endometrial-epithelial-stromal-cells-for-vitro

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Isolation of Mouse Endometrial Epithelial and Stromal Cells for In Vitro Decidualization

23.9K Views.  Katholieke Universiteit Leuven (KU Leuven).  מחקר זה מציג שיטה סטנדרטית ומאומתים עבור בידוד והתרבות של סטרומה רירית הרחם העכבר העיקרי ותאי אפיתל, אשר ניתן להשתמש בהם במערכת coculture ללמוד decidualization במבחנה. 

Video: Isolation of Mouse Endometrial Epithelial and Stromal Cells for In Vitro Decidualization

Isolation of Human Endometrial Stromal Cells for In Vitro Decidualization

The differentiation of human endometrial stromal cells (HESC) from fibroblast-like appearance into secretory decidua is a transformation required for embryo implantation into the uterine lining of the maternal womb. Improper decidualization has been established as a root cause for implantation failure and subsequent early embryo miscarriage. Therefore, understanding the molecular mechanisms underlying decidualization is advantageous to improving the rate of successful births. In vivo based studies of artificial decidualization are often limiting due to ethical dilemmas associated with human research, as well as translational complications within animal models. As a result, in vitro assays through primary cell culture are often utilized to explore the modulation of decidualization via hormones. This study provides a detailed protocol for the isolation of HESC and subsequent artificial decidualization via the supplementation of hormones to the culturing medium. Further, this study provides a well-designed method to knockdown any gene of interest by utilizing lipid-based siRNA transfections. This protocol permits the optimization of culture purity as well as product yield, thereby maximizing the ability to utilize this model as a reliable method to understand the molecular mechanisms underlying decidualization, and the subsequent quantification of secreted agents by decidualized endometrial stromal cells.

Isolation of Human Endometrial Stromal Cells for In Vitro Decidualization

This study presents a validated and optimized procedure for the isolation and culture of human endometrial stromal cells to conduct in vitro decidualization assay. Further, this study provides a detailed method to efficiently knockdown a specific gene using siRNAs in human endometrial stromal cells.

לבידוד של תאי סטרומה רירית הרחם אדם במבחנה Decidualization

The differentiation of human endometrial stromal cells (HESC) from fibroblast-like appearance into secretory decidua is a transformation required for ...

Two Methods for Establishing Primary Human Endometrial Stromal Cells from Hysterectomy Specimens

Many efforts have been devoted to establish in vitro cell culture systems. These systems are designed to model a vast number of in vivo processes. Cell culture systems arising from human endometrial samples are no exception. Applications range from normal cyclic physiological processes to endometrial pathologies such as gynecological cancers, infectious diseases, and reproductive deficiencies. Here, we provide two methods for establishing primary endometrial stromal cells from surgically resected endometrial hysterectomy specimens. The first method is referred to as &#8220;the scraping method&#8221; and incorporates mechanical scraping using surgical or razor blades whereas the second method is termed &#8220;the trypsin method.&#8221; This latter method uses the enzymatic activity of trypsin to promote the separation of cells and primary cell outgrowth. We illustrate step-by-step methodology through digital images and microscopy. We also provide examples for validating endometrial stromal cell lines via quantitative real time polymerase chain reactions (qPCR) and immunofluorescence (IF).

Establishing primary endometrial stromal cell culture systems from hysterectomy specimens is a valuable biological technique and a crucial step prior to pursuing a vast array of research aims. Here, we describe two methods used to establish stromal cultures from surgically resected endometrial tissues of human patients.&#160;

שתי שיטות לקביעת אדם תאי רירית הרחם סטרומה ראשיים מדוגמאות כריתת הרחם

Many efforts have been devoted to establish in vitro cell culture systems. These systems are designed to model a vast number of in vivo processes. Cell ...

Medicine

Generation of a Mouse Artificial Decidualization Model with Ovariectomy for Endometrial Decidualization Research

Endometrial decidualization is a unique differentiation process of the endometrium, closely related to menstruation and pregnancy. Impairment of decidualization leads to various endometrial disorders, such as infertility, recurrent miscarriage, and preterm birth. The development and use of the endometrial decidualization model in reproductive studies have been a highlight for reproductive researchers for a long time. The mouse has been extensively used in studying reproduction and decidualization. There are three well-established mouse models regarding decidualization, namely natural pregnancy decidualization (NPD), artificial decidualization (AD), and in vitro decidualization (IVD). Among them, AD is considered a reliable model for mouse decidualization, which is easy to implement and close to NPD. This paper focuses on a modified method of the generation and application process of the mouse artificial decidualization model with ovariectomy to avoid ovarian effects, which can obtain highly reproducible results with small within group variances. This method provides a good and reliable animal model for the study of endometrial decidualization.

Here, we describe the method of generating an artificial decidualization model using the ovariectomized mouse, a classic endometrial decidualization experiment in the research field of endometrial decidualization.

יצירת מודל דצידואליזציה מלאכותית של עכבר עם כריתת שחלות למחקר דצידואליזציה של רירית הרחם

Endometrial decidualization is a unique differentiation process of the endometrium, closely related to menstruation and pregnancy. Impairment of ...

Isolation of Primary Human Decidual Cells from the Fetal Membranes of Term Placentae

The decidua, also known as the pregnant endometrium, is a critically important reproductive tissue. Decidual cells, comprised mainly of decidualized stromal cells and immune cells, are responsible for the secretion of hormonal and inflammatory factors which are critical for successful blastocyst implantation, placental development and play a role in the initiation of labor at term and preterm. Many pregnancy complications can arise from perturbations of a fine balance of different cell populations comprising decidua. Alterations in the proportion of specific decidual cell types may disrupt these crucial processes and increase the risk of developing serious complications of pregnancy, such as embryo implantation failure, intrauterine growth restriction, preeclampsia and preterm labor. The protocol outlined here demonstrates a cost and time effective method for the isolation of primary human decidual cells collected from the fetal membranes of term placentae. By combining enzymatic digestion and gentle mechanical disruption of the decidual tissue, a high yield of decidual cells was obtained with virtually no chorion contamination. Importantly, isolated decidual cells were characterized (stromal cells (55-60%), leukocytes (35%), epithelial (1%) or trophoblast (0.01%) cells) and maintained high viability (80%) which was confirmed by multicolor imaging flow cytometry assay. This protocol is specific to the decidua parietalis and can be adapted to first and second trimester placentae. Once isolated, decidual cells can be used for a multitude of experimental applications aiming to understand the role of different decidual cell sub-populations in pregnancy complications.

This protocol demonstrates a method for the isolation of primary human decidual cells collected from the fetal membranes of term placentae which can be used for a variety of applications (i.e. immunocytochemistry, flow cytometry, etc.) aiming to study the role of different cell populations in pregnancy complications.

בידוד של ראשי תאים Decidual האנושי בקרום עוברי של המונח Placentae

The decidua, also known as the pregnant endometrium, is a critically important reproductive tissue. Decidual cells, comprised mainly of decidualized ...

A Syngeneic Murine Model of Endometriosis using Naturally Cycling Mice

Endometriosis is a leading cause of pelvic pain and infertility. It is defined by the presence of endometrial tissue in extrauterine locations. The development of novel therapies and diagnostic tools for endometriosis has been limited due in part to challenges in studying the disease. Outside of primates, few mammals menstruate, and none develop spontaneous endometriosis. Rodent models are popular but require artificial induction of endometriosis, with many utilizing either immunocompromised mice or surgically induced disease. Recently, more attention has been given to models involving intraperitoneal injection. We present a murine model of endometriosis that integrates several features of existing endometriosis models into a novel, simplified system that relies on microscopic quantification in lieu of subjective grading. In this model, we perform hormonal stimulation of donor mice, intraperitoneal injection, systematic abdominal survey and tissue harvest, and histologic quantification that can be performed and verified at any time after necropsy. This model requires minimal resources and training; does not require expertise by lab technicians in murine survival surgery or in the identification of gross endometriotic lesions; can be used in immunocompromised, immunocompetent, and/or mutant mice; and reliably creates endometriotic lesions that are histologically consistent with human endometriotic disease.

Many rodent models of endometriosis are limited by technical complexity, reproducibility, and/or need for immunocompromised animals or special reporter mice. We present a simplified system of lesion induction using any experimental mouse with an independently verifiable, objective scoring system and with no requirement for ovariectomy or survival surgery.

מודל מורין סינגני של אנדומטריוזיס באמצעות עכברי רכיבה טבעיים

Endometriosis is a leading cause of pelvic pain and infertility. It is defined by the presence of endometrial tissue in extrauterine locations. The ...

Development of a Novel Endometrioma-Simulating Mouse Model

Establishment of an Experimental Mouse Model of Endometrioma to Study its Related Infertility

Endometrioma (OMA), a subtype of endometriosis characterized by the formation of endometriotic cysts in the ovaries, affects 17-44% of individuals diagnosed with endometriosis. Women with OMA often experience compromised fertility, yet the exact mechanisms underlying OMA-associated infertility remain unclear. Notably, existing animal models simulate superficial peritoneal endometriosis (SUP) and deep infiltrating endometriosis (DIE), leaving a notable gap in research focused on OMA. In response to the gap of knowledge, this paper introduces a pioneering OMA-simulating mouse model and provides a comprehensive description of the techniques and procedures employed in the model. With a high success rate of 83% and ovarian lesion specificity, this model holds significant promise for advancing our understanding of OMA, particularly in the context of infertility. It offers a valuable platform for conducting targeted research into OMA-associated fertility challenges, potentially paving the way for improved diagnostic and therapeutic strategies in the field of reproductive medicine.

This study introduces a novel mouse model specifically designed to simulate endometrioma, a clinically significant subtype of endometriosis. By utilizing C57BL/6J mice, the model aims to elucidate the pathophysiological mechanisms underlying endometrioma-related infertility, offering a refined tool to bridge the current knowledge gap in reproductive medicine.

Endometrioma (OMA), a subtype of endometriosis characterized by the formation of endometriotic cysts in the ovaries, affects 17-44% of individuals ...

Establishing 3D Endometrial Organoids from the Mouse Uterus

Endometrial tissue lines the inner cavity of the uterus and is under the cyclical control of estrogen and progesterone. It is a tissue that is composed of luminal and glandular epithelium, a stromal compartment, a vascular network, and a complex immune cell population. Mouse models have been a powerful tool to study the endometrium, revealing critical mechanisms that control implantation, placentation, and cancer. The recent development of 3D endometrial organoid cultures presents a state-of-the-art model to dissect the signaling pathways that underlie endometrial biology. Establishing endometrial organoids from genetically engineered mouse models, analyzing their transcriptomes, and visualizing their morphology at a single-cell resolution are crucial tools for the study of endometrial diseases. This paper outlines methods to establish 3D cultures of endometrial epithelium from mice and describes techniques to quantify gene expression and analyze the histology of the organoids. The goal is to provide a resource that can be used to establish, culture, and study the gene expression and morphological characteristics of endometrial epithelial organoids.

This protocol describes methodologies to establish mouse endometrial epithelial organoids for gene expression and histological analyses.

הקמת אורגנואידים 3D רירית הרחם מרחם העכבר

Endometrial tissue lines the inner cavity of the uterus and is under the cyclical control of estrogen and progesterone. It is a tissue that is composed of ...

Biology

הערכת הידבקות עוברים במודל תרבית משותפת במבחנה עם תאי אישיקאווה

Establishment of an Embryo Implantation Model In Vitro

Embryo implantation is the first step in the establishment of a successful pregnancy. An in vitro model for embryo implantation is critical for basic biological research, drug development, and screening. This paper presents a simple, rapid, and highly efficient in vitro model for embryo implantation. In this protocol, we first introduce mouse blastocyst acquisition and human endometrial adenocarcinoma cells (Ishikawa)&#160;preparation for implantation, followed by the co-culture method for mouse embryos and Ishikawa cells. Finally, we conducted a study to assess the impact of varying concentrations of 17-&#946;-estradiol (E2) and progesterone (P4) on embryo adhesion rates based on this model. Our findings revealed that high concentrations of E2 significantly reduced embryo adhesion, whereas the addition of progesterone could restore the adhesion rate. This model offers a simple and fast platform for evaluating and screening molecules involved in the adhesion process, such as cytokines, drugs, and transcription factors controlling implantation and endometrial receptivity.

מחבר זרקור: קידום אסטרטגיות טיפוליות לשיפור שיעורי ההריון על ידי ניתוח אינטראקציות עובר-אנדומטריום

This protocol describes methodologies to establish simple and efficient embryo implantation in vitro model for evaluating the relevant molecules affecting the embryo implantation process.

הקמת מודל השתלת עוברים במבחנה

Embryo implantation is the first step in the establishment of a successful pregnancy. An in vitro model for embryo implantation is critical for basic ...

בידוד של עכבר רירית הרחם אפיתל סטרומה תאים עבור

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

לבידוד של תאי סטרומה רירית הרחם אדם במבחנה Decidualization

שתי שיטות לקביעת אדם תאי רירית הרחם סטרומה ראשיים מדוגמאות כריתת הרחם

יצירת מודל דצידואליזציה מלאכותית של עכבר עם כריתת שחלות למחקר דצידואליזציה של רירית הרחם

בידוד של ראשי תאים Decidual האנושי בקרום עוברי של המונח Placentae

מודל מורין סינגני של אנדומטריוזיס באמצעות עכברי רכיבה טבעיים

Establishment of an Experimental Mouse Model of Endometrioma to Study its Related Infertility

הקמת אורגנואידים 3D רירית הרחם מרחם העכבר

הקמת מודל השתלת עוברים במבחנה

הקמת מודל השתלת עוברים במבחנה

הקמת מודל השתלת עוברים במבחנה