التمويل: هذا العمل كانت مدعومة بتمويل من المعهد الوطني الإمبراطوري لمركز البحوث الصحية (NIHR) البحوث الطبية الحيوية (BRC)، وفي NIHR الصحة حماية البحوث وحدة (هبرو) في "التهابات الجهاز التنفسي" في "امبريال كوليدج لندن" في الشراكة مع إنكلترا الصحة العامة (PHE) ومركز البحوث متعدية سلامة المرضى الإمبراطورية NIHR. الآراء التي أعرب عنها هي آراء المؤلفين وليس بالضرورة تلك المستشفيات العامة، وفي NIHR، ووزارة الصحة أو "إنكلترا الصحة العامة".

التقنيات المستخدمة في البروتوكول التالي أقرتها "لجنة أخلاقيات البحوث لندن الغربية" (مرجع رقم 15/لو/0444).
1-الآنف الاستيعاب (غ)
<ol><li>
التحضير قبل أخذ العينات نا
	<ol>
<li>عند القيام نا، أولاً غسل اليدين ووضع قفازات، يفضل أن يكون ذلك أمام المريض.</li>
		<li>فحص تجويف الآنف باستخدام شعلة رأس، والطبيب استخدام الإبهام غير المهيمنة على التراجع عن آنف المريض لتصور تجويف الآنف. ملاحظة: منظار الآنف غير مطلوب عادة.</li>
		<li>تصور تجويف الآنف ودونية توربيناتي قبل أخذ العينات. ملاحظة: ناريس (الخياشيم) ليست جولة في المقطع العرضي، وأنها تذهب مباشرة إلى الوراء. عموما، يمكن اعتبار أدنى توربيناتي انتفاخ أو المسافات البادئة على الجدار الجانبي للأنف، مع الأنفي تشكيل الجدار الآنسي شقة، على نحو سلس. أننا نريد أن عينة من هذا أدنى توربيناتي، نظراً ظهارة الكامنة ظهارة عضو بسيط في الجهاز التنفسي44.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
نا أخذ العينات
	<ol>
<li>عند أخذ العينات، وتمرير "سام نا" بلطف حتى التجويف الآنف، توجيه أن تكون مسطحة ضد أدنى توربيناتي.</li>
		<li>أطلب من الجهات المانحة لاستخدام سبابة الضغط سام على الغشاء المخاطي للأنف. يمكن أن يسبب نا طفيفة دغدغة، مع سقي العين ممكنة، كما يمتص من الصندوق متعدد الأطراف. ملاحظة: في البالغين، ونحن عموما أداء نا ل 60 ثانية.</li>
		<li>بعد الامتصاص من الصندوق متعدد الأطراف، إزالة الجهاز نا من الآنف ووضع مرة أخرى في الأنبوب الأصلي.</li>
		<li>معالجة العينات مباشرة في المختبر أو تجميدها، كما هو مفصل في وقت لاحق في هذا البروتوكول. ملاحظة: وتجري دراسة نا في مجموعة متنوعة من نماذج التحدي مخاطية الآنف، وكذلك في أمراض مختلفة من الخطوط الجوية. ومع ذلك، ينبغي إجراء التحقق من صحة ضد أساليب أخذ العينات الجهاز التنفسي الأخرى لكل السكان دراسة والمريض.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2-الشعب الهوائية امتصاص (BA)
<ol><li>
التحضير قبل أخذ العينات با ملاحظة: ويقوم با بموظفين متخصصين في جناح القصبات.<ol>
<li>قبل وضع الجهاز با أسفل القسطرة، تحقق من أن سام هو البثق وسحب مرة أخرى إلى القسطرة.</li>
		<li>قبل القيام بمكتبة الإسكندرية على مريض، إجراء شهادة بكالوريوس وهمية على جهاز محاكاة القصبات.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
با أخذ العينات
	<ol>
<li>اجتياز الفحص أسفل القصبة الهوائية والقصبات الرئيسية الحق إلى مستوى intermedius القصبات الهوائية، مجرد الدانية إلى الشعبة في الفصوص السفلية اليمنى ويمين الوسط. ملاحظة: نحن عادة عينة من intermedius القصبات الهوائية، على الرغم من أن يمكن تذوق مواقع أخرى داخل مجرى الهواء. عند مراقبة القسطرة وسام، واحد لا يمكن رؤية تلميح الفحص. ونلاحظ الخطوات البسيطة التالية لمكتبة الإسكندرية، بمجرد الفحص قد وصلوا إلى موقع أخذ العينات المطلوب.</li>
		<li>قسطرة أسفل: أدخل القسطرة با من خلال قناة التشغيل الفحص حتى تلميح أبيض مرئياً فقط في مجرى الهواء، بحد أقصى 1 سم القاصي إلى نهاية الفحص. يبقى نصيحة الفحص والقسطرة في وسط التجويف مجرى الهواء. احرص على تقليل الاتصال بين طرف القسطرة وفي الغشاء المخاطي للشعب الهوائية الحد من خطر التآكل للغشاء المخاطي.</li>
		<li>خارج سام: كساد مقبض الجهاز با حيث أن سام هو مقذوف في التجويف مجرى الهواء الفص اليمين الوسط أو اليمين السفلي. تحت الرؤية المباشرة، منحنى غيض الفحص لضمان أن سام هو جعل الاتصال مع الصندوق متعدد الأطراف على الجدار مجرى الهواء. ترك سام داخل مجرى الهواء، شقة بالجدار المخاطي لمدة 30 ثانية.</li>
		<li>في سام: نظرة من خلال الفحص لضمان أن المسبار سام رطبة مستقيمة ولا بنت مرة أخرى على مدى نهاية القسطرة. إذا لزم الأمر، يمكن أن يقدم طرف القسطرة والفحص مرة أخرى إلى تصويب SAM. تحت الرؤية المباشرة، تتراجع سام مستقيم بلطف مرة أخرى إلى القسطرة. ملاحظة: إذا لم يكن هناك صعوبة تراجعه SAM إلى القسطرة، سحب الجهاز كله مع سام مقذوف مرة أخرى من أصل مجرى الهواء.</li>
		<li>قسطرة تصل: سحب القسطرة كامل من قناة التشغيل الفحص.</li>
		<li>قطع سام: SAM هو قطع مقص معقم وثم وضع في كريوتوبي على الجليد. ويمكن معالجة هذه العينات بطرق متفاوتة، كما هو مفصل في وقت لاحق في هذا البروتوكول.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3-تجهيز نا وعينات با
ملاحظة: وهناك العديد من الخيارات لتجهيز مختبر العينات الناتجة عن نا ومكتبة الإسكندرية. تسعى هذه البروتوكولات لتخزين العينات لاستخدامها في وقت لاحق، والوت العينة الصندوق متعدد الأطراف من سام.
<ol><li>
خيارات لمعالجة فورية لعينات نا ومكتبة الإسكندرية
	<ol>
<li>الخيار 1: تخزين سام رطبة على الجليد لبضع ساعات قبل إجراء مزيد من المعالجة.</li>
		<li>الخيار 2: فورا تجميد عميق "سامز نا" في جمع الأنبوبة. وبالمثل، تجميد سامز با في قنينات المبردة بعد الإزالة، مع مقص، من جهاز أخذ العينات.</li>
		<li>الخيار 3: مكان سام منفصلة في شطف المخزن المؤقت (300 ميليلتر) قبل معالجة التجميد العميق مباشرة أو غير مباشرة.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
خيارات شطف المخزن المؤقت لعينات نا ومكتبة الإسكندرية ملاحظة: ويتوقف اختيار شطف المخزن المؤقت على ما يجري ليتم تحليلها في العينة الصندوق متعدد الأطراف، ونقترح البدائل الرئيسية الأربعة:<ol>
<li>استخدام المخزن مؤقت مناسبة للمناعة إجراءات فحص معدّة مسبقاً. هذه المخازن المؤقتة يجب أن تحتوي على كمية صغيرة من المنظفات (0.05%) فضلا عن البروتين، مثل الأبقار ألبومين المصل (BSA) % 1.</li>
		<li>وبدلاً من ذلك، استخدام المخزن مؤقت الذي يحتوي على أكبر كمية من المنظفات، حيث يحدث تحلل الخلية. ملاحظة: يمكننا استخدام المخازن المؤقتة التي تحتوي على تريتون-X أو NP40 بتركيز 1%. المخازن المؤقتة لتحلل الخلية تمكين السيتوكينات سواء داخل الخلية وخارج الخلية تكون التيد من سام، ويؤدي عموما إلى مستويات أعلى من السيتوكينات والمستقطبات. هذه المخازن المؤقتة يجب أن تحتوي أيضا على البروتين، وهي تتكون مع جيش صرب البوسنة إلى 1%.</li>
		<li>لقياس الحمض النووي الريبي، مثل PCR الكمي للجيش الملكي النيبالي الفيروسية أو قياس المضيف الجيش الملكي النيبالي، إضافة المخزن المؤقت لاستخراج الحمض النووي الريبي مباشرة إلى سام رطبة. ملاحظة: المخازن المؤقتة لاستخراج "الحمض النووي الريبي تشاوتروبيك" تحتوي على جوانيدينيوم التي ديناتوريس البروتينات. وبديل إضافة المخزن المؤقت لاستخراج الحمض النووي الريبي إلى السائل التيد بروميد الميثيل الواردة في المناعة أو خلية تفسخ المخزن المؤقت.</li>
		<li>استخدام المذيبات العضوية، مثل حامض trifluoroacetic، لاستخراج الدهون ونواتج الأيض، للتقييم من قبل قياس الطيف الكتلي. ملاحظة: وترد تفاصيل عن جميع هذه الكواشف في قسم المواد.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
تقنية شطف
	<ol>
<li>لأي من التقنيات شطف أعلاه، إدراج SAM في أنبوب مايكرو--أجهزة الطرد مركزي 2 مل، جنبا إلى جنب مع المخزن المؤقت المطلوب استخراج.</li>
		<li>دوامة تخلط العينة لمدة 30 ثانية لغسل سام المرفقة فضفاضة السوائل والجزيئات الحيوية.</li>
		<li>لضمان استعادة عينة كاملة، أداء شطف الطرد المركزي عن طريق إضافة SAM رطبة لتدور تصفية عمود المصغر الذي يدرج في نفس 2 مل أنبوب مايكرو--أجهزة الطرد المركزي المستخدمة للغسيل. ملاحظة: يمكن استخدام نوعين من تدور تصفية العمود صغير. الأول يحتوي على فقط شبكة بلاستيكية، الذي يحمل وسام في مكان، السماح شطف كامل من السوائل. وبدلاً من ذلك، إذا كان العمل مع المواد المعدية، استخدام مرشحات تدور مع حجم مسام 0.22 ميكرومتر. عوامل التصفية هذه سيتم تعقيم العينات، وهي مناسبة للعينات مع الاشتباه في الإصابة المتفطرات. ومع ذلك، ينبغي أن تكون عوامل التصفية هذه المحتضنة مسبقاً مع المخزن المؤقت، لتقليل ملزمة للوسطاء لعامل التصفية بتفاعلات غير محددة.</li>
		<li>استخدام الملقط المعقم لنقل SAM رطبة لتصفية تدور. تغيير الملقط بين عينات لمنع التلوث.</li>
		<li>عينات للطرد المركزي لمدة 20 دقيقة في 16,000 س ز في أجهزة الطرد مركزي المصغر تبريده إلى 4 درجات مئوية.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
مثال موجز بروتوكول
	<ol>
<li>في المختبر، تسمية 2 مل أنابيب صغيرة-أجهزة الطرد المركزي لجمع العينات وإضافة وحدة التخزين المطلوبة شطف المخزن المؤقت (عادة 300 ميليلتر نا؛ 100 ميليلتر لمكتبة الإسكندرية). إغلاق الغطاء ووضع على الجليد.</li>
		<li>بعد أخذ العينات (أما فورا أو في المختبر) سام هو إزالتها من التعامل مع استخدام الملقط ووضعها في المخزن المؤقت الذي يحتوي على أنبوب جمع (المنتجة في الخطوة السابقة). ضمان الحد أقصى أنبوب ميكروسينتريفوجي مغلق بشكل أمن ونقل العينات، على الجليد، إلى المختبر لإجراء مزيد من المعالجة.</li>
		<li>إزالة أنابيب تحتوي على المخزن سام وشطف من مزيجها نقل الحاويات ودوامه لمدة 30 ثانية.</li>
		<li>استخدام الملقط العقيمة، إزالة سام ومكان في عمود دوران (مع أو بدون تصفية خلات السليولوز ميكرومتر 0.22).</li>
		<li>تجمع المخزن المؤقت شطف من أنبوب جمع والاحتفاظ بهم.</li>
		<li>ضع عمود الدوران، مع سام، في أنبوب جمع الأصلي (أو عينات واحد جديد إذا العقيمة التصفية) وإضافة مجموعة المخزن المؤقت في عمود الدوران. بهذه الطريقة، سيمر سائل الغسيل عن طريق عمود الدوران مرة أخرى إلى أنبوب جمع، المساعدة على الوت العينة من SAM.</li>
		<li>الطرد المركزي العينات مع أغطية مختومة (16,000 س ز، 20 دقيقة، 4 درجة مئوية).</li>
		<li>إزالة العينات من أجهزة الطرد المركزي ووضع في رف.</li>
		<li>افتح غطاء مختومة من الأنابيب وإزالة عمود الدوران المتضمن SAM. التخلص من العمود سام وتدور في حاوية نفايات مناسبة.</li>
		<li>-الأنابيب بعناية قاسمة النذرة الواردة داخل الأنبوب إلى المسمى المبردة. سجل إجمالي حجم النذرة ووحدة التخزين في كل قاسمة.</li>
		<li>نقل الأنابيب المبردة مختومة لثلاجة-80 درجة مئوية وتخزين تستقيم حتى الاستخدام.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

وتعتبر النتائج من تقنيات أخذ العينات الهوائية الموجودة اختلافاً كبيرا؛ تقنيات أخذ العينات البديلة ضرورية لتوحيد معايير البحث داخل هذا الحقل5. نا با تسمح بأخذ عينات من الصندوق متعدد الأطراف بطريقة غير الغازية، وإمكانيات مثيرة لقياس الاستجابات المناعية في الخطوط الجوية صحية والمريضة. هذه التقنيات توفر العديد من المزايا المحتملة عبر التقنيات الموجودة، بما في ذلك زيادة قابلية التحمل، السرعة لأخذ العينات، والقدرة على تكرار أخذ العينات، وكثيراً ما خفض التباين بين المستخدم، وانخفض إضعاف المناعة الوسطاء5 . وينبغي الأمثل لكل دراسة مدة الاستيعاب والمعالجة التقنية المستخدمة والمحافظة على دقة بين الأحداث أخذ العينات. بالإضافة إلى ذلك، في حالة با، الموقع لأخذ العينات داخل مجرى الهواء ينبغي أن عناية تتكرر بين الأفراد.
نا، ولا سيما مكتبة الإسكندرية، تقنيات لا تزال جديدة نسبيا للبحوث السريرية. ومع ذلك، قد أدت إلى فوائد هذه التقنيات في استخدامها في العديد من الدراسات، بما في ذلك التحقق من صحة الحذر ضد التقنيات البديلة5. هذه الأجهزة متوفرة الآن كما تم وضع علامة CE الأجهزة جاهزة للاستخدام على نطاق واسع في أبحاث الجهاز التنفسي. بينما نا ومكتبة الإسكندرية ينتج كثير حجم عينة أصغر من تقنيات أخذ العينات بديلة، يمكن أن يؤدي ارتفاع التركيزات التي يتم الحصول عليها حساسية أكبر للوسطاء المناعية وفرة منخفضة.
اعتماداً على التطبيقات المتلقين للمعلومات المطلوبة، يمكن تجميد عينات نا ومكتبة الإسكندرية مباشرة للمعالجة فيما بعد، تعزيز جدوى الدراسة في بيئة بحوث سريرية. البروتوكول لمعالجة عينة يمكن تكييفها لتناسب التطبيقات المصب خاصة أيضا. تقنيات المعالجة المقترحة يمكن أن تستخدم لجمع من البروتين أو الدهون محصنة ضد الوسطاء أو الأحماض النووية، ولكن ينبغي أن يكون الأمثل لكل دراسة. على وجه الخصوص، يمكن أن تكون التيد الصندوق متعدد الأطراف مع مختلف المخازن المؤقتة. أولاً، يمكن استخدام المخزن المؤقت للمناعة لقياس السيتوكينات المخاطي والمستقطبات والأجسام المضادة6،45. يمكن أيضا استخدام المخازن المؤقتة مع أعلى مستويات المنظفات لضمان حدوث تحلل الخلية، مما يسمح بإدراج السيتوكينات داخل الخلوية. تحميل استخراج "الحمض النووي الريبي تشاوتروبيك" ينبغي استخدام المخازن المؤقتة لتحديد العدوى الفيروسية، الفيروسية، تستضيف مرناً، وميكروبيومي. وبدلاً من ذلك، يمكن استخدام المذيبات العضوية ليبيدوميكس والطيف الكتلي.
وفي الختام، الاستيعاب المباشر للصندوق متعدد الأطراف من الأسطح المخاطية تقنية مثيرة مع إمكانية استخدامها في الجهاز التنفسي، وأمراض المعدة والأمعاء، الجهاز البولي وغيرها من الأمراض المخاطية. ومع ذلك، هذه التقنيات الواعدة في امتصاص سيتطلب التحقق من دقة أخذ العينات والمعالجة التقنية لفحوصات الفردية (المؤشرات الحيوية) في كل إعداد المرض. وبالإضافة إلى ذلك، هذه الأساليب دقة رواية المخاطية أخذ العينات سوف تتطلب التحقق من الصحة ضد العينات التقليدية، مثل من الدم والتنفس والبلغم. مع هذه التقنيات، يمكن استخدام الصندوق متعدد الأطراف لقياس الميكروبات، السيتوكينات، المستقطبات، بروستانويدس، والأجسام المضادة.

معظم أمراض الجهاز التنفسي يسبب استجابة التهابية، وهناك حاجة ملحة لأخذ عينات من سطح المخاطية التنفسية في حساسية الآنف، الالتهابات الفيروسية والفطرية، السل، والربو، ومرض الرئة المزمن، الرئوي تليف الرئة وسرطان 1. Aspirate البلعوم (جيش الشعب الجديد)، وغسل الآنف والغسل للفيسيولوجيا (BAL) هي الأساليب الشائعة لأخذ عينات من مجرى الهواء العلوي والسفلي. ومع ذلك، تقدم هذه التقنيات مشاكل كبيرة بما في ذلك قابلية التحمل الفقراء، وتمييع وسطاء التهابات، وعجز متكرر تكرار أخذ العينات2. بديل واحد لأخذ العينات من جيش الشعب الجديد هو استخدام مسحات، أما من النايلون تدفقوا، القطن، أو رايون3،4، ولكن هذه لها أيضا القيود، نظراً لأنها تسبب الانزعاج وتلف ظهارة الآنف، وفي بعض الحالات الملزمة لا رجعة فيه من 5من الوسطاء التحريضية. عموما لا يمكن أن تتكرر هذه التقنيات متسلسل أكثر من ساعة، وتقنيات بديلة قد تكون أكثر فعالية في الكشف عن وفرة منخفضة السيتوكينات والمستقطبات5،6. بالإضافة إلى ذلك، قد تنشئ تقلب المستخدم المرتبطة بهذه التقنيات التناقضات في البيانات، أسفر عن شرط أفواج المرضى أكبر.
بدلاً من ذلك، استخدمت تقنيات الاستيعاب باستخدام الأسفنج سواء الطبيعية أو الاصطناعية لجمع الصندوق متعدد الأطراف من الأسطح المخاطية. الأسفنج العيون تتكون من السليلوز الطبيعية (مثلاً، ويك-الجوف) وقد استخدمت عينة اللعاب، سرطان عنق الرحم، والإفرازات المهبلية7. وباﻹضافة إلى ذلك، الأسفنج التركيبية المصنوعة من البولي فينيل الكحول (PVA) وكانت خلات البولي فينيل الهيدروكسيلية (ةبفا) المستخدمة8. وقد تم مقارنة سبع مواد مختلفة الاستيعابية لأخذ عينات من السوائل عن طريق الفم قبل قياس9من الأجسام المضادة، في حين استخدمت ميني البولي يوريثان-الأسفنج لجمع الدموع البشرية10.
ورق الترشيح تتكون من السليلوز الطبيعي من نبات القطن قد استخدمت على نطاق واسع ﻻستيعاب إفرازات الآنف منذ الورقة رائد علام والزملاء في عام 199211،،من1213،14، 15،،من1617. أقراص ورق الترشيح قد صدرت من تصفية بطاقات (مثل Shandon)، وقد استخدمت لقياس الهيستامين والسيتوكينات بعد تسيطر تحديات حساسية الآنف والحساسية الطبيعية تعرض18،19 ،،من2021. ومع ذلك، مجموعات مختلفة من ورق الترشيح تختلف في درجة ملزمة البروتين وبعض الفشل للإفراج عن السيتوكينات. ولذلك كانت أساليب استخدام مصفوفة الاستيعابية اصطناعية (SAM) المتقدمة2،،من2223. سامز الآن تستخدم عادة للحصول على بروميد الميثيل الآنف قبل na. هذه المواد الماصة مريحة لاستخدام، ويمكن الحصول على الصندوق متعدد الأطراف حتى من انوف ملتهبة على فترات متكررة على مدى فترات طويلة من الزمن.
امتصاص الآنف نموذج "أخذ العينات المخاطية الدقة" استخدام سام لأخذ العينات من الصندوق متعدد الأطراف في مجرى الهواء العلوي. أجهزة نا تصنع كعلامة CE الأجهزة الطبية من المواد الطبية باستخدام غرف نظيفة وخالية من الغبار والمواد المسببة للحساسية. أخذ العينات نا يتكون من مقبض وسام في كريوتوبي عقيمة. سام يتكون من البوليمرات، عادة من الألياف، ولكن كما أنها متاحة كالرغوة، وهذه تم تحديدها لتكون لينة والاستيعاب، مع فتل السريع لجمع العينات. وقد سامز ملزمة البروتين الحد الأدنى للسماح شطف كفاءة من إفرازات استيعابها. نا هو أسلوب لطيف جداً، وغير الغازية التي يمكن إجراؤها على الجهات المانحة من جميع الإعمار. وباﻹضافة إلى ذلك، أخذ العينات المسلسل، بل كل بضع دقائق، من الممكن. وقد تم التحقق من صحة نا ضد مجرى الهواء العلوي الحالي أخذ العينات التقنيات5 وتكرار أخذ العينات قد سمح توليد البيانات الحركية عقب التحدي المتمثل في مجرى الهواء مع حساسية23،،من2425، 26 من الذيفان الجرثومي والفيروسي من نوع TLR يضع (جها، ألف- et al.، مخطوطة في إعداد). كما استخدمت نا في الرضع للتحقيق في التاريخ الطبيعي [أتوبي]27،،من2829 وفيروسي التهاب القصيبات30.
ميكروسامبلينج برونتشوسكوبيك (خدمات إدارة المباني) هو إجراء لجمع من الصندوق متعدد الأطراف في مجرى الهواء السفلي الذي تم تطويره بواسطة أوليمبوس31،،من3233. للأسف، هذا النظام خدمات إدارة المباني مرخص فقط في اليابان. أوليمبوس إمداد خدمات إدارة المباني نظامين: واحدة مع ألياف بوليستر الهيدروكسيلية (فب) التحقيق34،35،،من3637، وواحدة مع القطن التحقيق3833،، 39 , 40 , 41 , 42 , 43-وكان عقبة كأداء أن المسبار خدمات إدارة المباني المستخدمة في المرضى الذين يعانون من الربو بسبب الاتصال المخاطي النزيف، مع نصف جميع العينات الملوثة بالدم. استنتج المؤلفون أن ليس من المجدي لنموذج الصندوق متعدد الأطراف باستخدام هذا النظام خدمات إدارة المباني من الخطوط الطرفية في مرضى الربو43.
وكبديل لذلك، قمنا بتطوير استخدام سام ناعمة التي يمكن أن يؤديها خلال التحقيق برونتشوسكوبيك للخطوط الجوية السفلي، بما في ذلك أثر العدوى التجريبية من مواضيع الربو مع رهينوفيروس6بكالوريوس. الجهاز با يتكون من: قسطرة أجوف خارجية وقطعة يد التي يقذف SAM في التنشيط وسلك دليل بلاستيك وسط يحتوي سام في نهايته. أما بالنسبة للجمعية الوطنية، مجموعات مكتبة الإسكندرية مصنوعة من المواد الطبية باستخدام غرف نظيفة وخالية من الغبار والمواد المسببة للحساسية. بالإضافة إلى ذلك، هي أجهزة CE علامة وترد المشع أشعة غاما. قطاع سام لينة، والاستيعاب، وقد فتل السريع لجمع العينات. كما أنها ملزمة البروتين الحد الأدنى للسماح شطف كفاءة من إفرازات استيعابها. الجهاز يمكن أن يصلح من خلال قناة العامل الفحص ويمكن استخدامها بسرعة ودقة نموذج الصندوق متعدد الأطراف في مواقع محددة من الاهتمام داخل مجرى الهواء. على عكس BAL أو خدمات إدارة المباني، با لا ينتج نزيف الاتصال أو الانزعاج المريض إضافية بعد انتهاء الإجراء.
ينبغي النظر بعناية في تجهيز العينات نا ومكتبة الإسكندرية. يمكن أن تكون العينات مباشرة المجمدة والمجهزة على دفعات، أو يمكن معالجتها فورا. نوع المعالجة ويمكن تكييف تجاه بعض التطبيقات المتلقين للمعلومات، بما في ذلك تحديدكم المستقطبات والمناعية، السيتوكينات أو التيونس الفيروسية، والبكتيرية، والخلية المضيفة المرتبطة الحمض النووي الريبي. نحن نقدم مجموعة السريرية والمختبرية تقنيات المعالجة المرتبطة مع نا ومكتبة الإسكندرية كدليل للباحثين السريرية.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1562">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:253px;">Nasosorption (adult, 7mm width)</td>
			<td style="width:108px;">Hunt Developments</td>
			<td style="width:140px;">NSFL-FXI-11</td>
			<td style="width:1061px;">Different sizes are available for different patient groups/ages.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:253px;">Bronchosorption</td>
			<td style="width:108px;">Hunt Developments</td>
			<td style="width:140px;">BSFL-FXI-11</td>
			<td>Minimum bronchoscope channel size 2mm; Max working length 815mm</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:253px;">Corning&#160;Costar&#160;Spin-X&#160;centrifuge tube filters (without membrane)</td>
			<td style="width:108px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:140px;">CLS9301-1000EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:253px;">Corning&#160;Costar&#160;Spin-X&#160;centrifuge tube filters (0.22um membrane)</td>
			<td style="width:108px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:140px;">CLS8160-24EA</td>
			<td>For sterilisation of samples with infection risk.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:253px;">Assay (elution) buffer</td>
			<td style="width:108px;">Millipore</td>
			<td style="width:140px;">AB-33k</td>
			<td>Not listed on the Millipore website but available through enquiry or general lab supply companies, such as Cedarlane. Contains 0.05% Tween-20 and 1% BSA.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:253px;">NP-40 Cell lysis buffer</td>
			<td style="width:108px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:140px;">FNN0021</td>
			<td>Add bovine serum albumin to 1% (w/v). Can recover higher absolute mediator levels.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:253px;">Buffer RLT (RNA extraction)</td>
			<td style="width:108px;">Qiagen</td>
			<td align="right" style="width:140px;">79216</td>
			<td>Allows recovery of RNA from nasosorption and bronchosorption samples.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:253px;">Trifluoroacetic acid</td>
			<td style="width:108px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:140px;">302031-100ML-M</td>
			<td>For elution of samples to be used in HPLC applications</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:253px;">2.0ml micro-centrifuge tubes</td>
			<td style="width:108px;">Costar</td>
			<td align="right" style="width:140px;">3213</td>
			<td>2ml tubes are required for the Spin-X tube filters, traditional 1.5ml tubes will not fit these.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

absorption of nasal and bronchial fluids: precision sampling of the human respiratory mucosa and laboratory processing of samples

أساليب الاستيعاب الآنف (غ) وامتصاص الشعب الهوائية (BA) استخدام مصفوفات الاستيعابية الاصطناعية (SAM) لامتصاص السوائل البطانة المخاطية (الصندوق متعدد الأطراف) الجهاز التنفسي البشرية. نا هو أسلوب غير الغازية التي تمتص السوائل من أدنى توربيناتي، ويسبب عدم الراحة الحد الأدنى. نا قد أثمر نتائج استنساخه مع القدرة شكل متكرر تكرار أخذ العينات من مجرى الهواء العلوي.
وعلى سبيل المقارنة، أساليب بديلة لأخذ العينات في الجهاز التنفسي الغشاء المخاطي، مثل التطلع البلعوم (جيش الشعب الجديد) وينظف التقليدية، هي أكثر الغازية وقد تسفر عن زيادة البيانات تقلب. أساليب أخرى لها حدود، على سبيل المثال، الخزعات والشعب الهوائية الإجراءات الغازية والبصاق يحتوي على العديد من القتلى وتموت الخلايا ويتطلب تسييل، التنفس الزفير المكثفات (EBC) يحتوي على الماء واللعاب وعينات الغسل تمييع و متغير.
يمكن أن يؤديها با من خلال قناة العامل الفحص في العيادة. أخذ العينات هو جيد التحمل، ويمكن أن تجري في مواقع متعددة في مجرى الهواء. با النتائج في الصندوق متعدد الأطراف عينات يجري تمييع أقل من عينات للفيسيولوجيا الغسل (بال).
يوضح هذا المقال أساليب نا ومكتبة الإسكندرية، وكذلك تجهيز مختبر العينات الناتجة عن ذلك، التي يمكن أن تكون مصممة للعلامات البيولوجية المتلقين للمعلومات المرجوة التي يجري قياسها. تقنيات امتصاص هذه بدائل مفيدة لتقنيات أخذ العينات التقليدية المستخدمة في البحوث السريرية في الجهاز التنفسي.

وقد استخدمت في عدد من الدراسات بسهولة نا وقياس غير إينفاسيفيلي التهاب الغشاء المخاطي. عقب إدارة حساسية للأنف، ويمكن ملاحظة مستويات البروستاغلاندين-D2 (PGD2) صعود وهبوط في غضون دقائق (الشكل 1)، تمشيا مع تحبب الخلية الصاري (ثوايتيس et al., مخطوطة في الإعداد). بالإضافة إلى ذلك، يمكن قياس وسطاء التهاب النوع الثاني، مثل إيل-5 (الشكل 2، طبع بإذن من 24)، في الساعات التالية لحساسية الآنف التحدي23،24. في التجريبية الإصابة بالربو التحسسي وضوابط صحية، استخدمت نا لقياس فريق وسطاء، بما في ذلك انترفيرون-غاما (IFN-γ)، على مدى 7 أيام (الشكل 3، طبع بإذن من 6). بالإضافة إلى ذلك، أظهرت نا في الإصابة بالفيروس المخلوي التنفسي (RSV) الطبيعية للرضع، RSV مرتبطة بمستويات مرتفعة من السيتوكينات الالتهابية، مثل IFN-γ، بالنسبة إلى غير RSV الرضع المصابين بالتهاب القصيبات وضوابط صحية ( 4 الرقم، وطبع بإذن من 30). من المثير للاهتمام، لم يكن هذا التمييز بين RSV والتهاب القصيبات غير RSV كبير في جيش الشعب الجديد وقت مطابقة العينات (الشكل 4).
كما استخدمت با خلال العدوى التجريبية للربو التحسسي مع رهينوفيروس. في يوم 4 من العدوى رهينوفيروس، مستويات IFN-γ، CXCL11، إيل-10، وايل-5 كانت مرتفعة من الأساس (الشكل 5؛ ألف، باء، جيم ودال، على التوالي). بالإضافة إلى ذلك، أظهرت هذه التقنية مستويات مرتفعة من إيل-5 في مجرى الهواء أقل من الربو حساسية أثناء الإصابة رهينوفيروس، بالنسبة لضوابط صحية (الشكل 5) (الشكل 5 طبع بإذن من 6).
تولدت هذه النتائج تمثيلية من عينات التيد استخدام مقايسة العازلة التي تحتوي على 0.05% توين-20 و 1% جيش صرب البوسنة (انظر الجدول للمواد).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56413/56413fig1.jpg"> الشكل 1 : توليد السريع والتخليص من البروستاغلاندين-D2 عقب التحدي حساسية الآنف. قياس مستويات البروستاغلاندين-D2 (PGD2) من امتصاص الآنف الواتس في عينات المسلسل عقب التحدي حساسية الآنف مع تيموثي العشب حبوب اللقاح (n = 5). ويمثل كل خط البيانات من فرد واحد. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56413/56413fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56413/56413fig2.jpg"> الشكل 2 : قياس الحركية إيل-5 عقب التحدي حساسية الآنف. إنتاج إيل-5 في عينات الامتصاص الأنفي المسلسل عقب التحدي حساسية الآنف. كرر ثلاثة وأجريت دراسات الحساسية التحدي، مع المشاركين (n = 19) تلقي الغفل (أزرق)، منخفضة الجرعة (10 ملغ) بريدنيزون عن طريق الفم (برتقالي)، أو بريدنيزون عن طريق الفم جرعة عالية (25 ملغ) (أحمر) ساعة واحدة قبل الإدارة المسببة للحساسية. خطوط الدلالة هندسي وأشرطة الخطأ فواصل الثقة 95% من جميع المشاركين. (الرقم طبع بإذن من ليكر et al.، "علم المناعة المخاطية"، 2017). <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56413/56413fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56413/56413fig3.jpg"> الشكل 3 : تحريض الانترفيرون γ أثناء الإصابة رهينوفيروس. خلال التحدي العدوى من البالغين الأصحاء (n = 11، الأزرق) والربو التحسسي (n = 28، الأحمر) مع رهينوفيروس-16، استخدمت عينات الامتصاص الأنفي لقياس مستويات الانترفيرون-γ (IFN-γ). وتمثل البيانات كقطع معكرونة A) الخام من الأفراد ومستويات ب) متوسط مع أشرطة الخطأ تدل على النطاقات المجال. (الرقم طبع بإذن من هانسيل et al. 6)- <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56413/56413fig3large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56413/56413fig4.jpg"> الشكل 4 : ناسوسوربشن يميز انترفيرون-γ المرتفعة المرتبطة بالعدوى RSV الرضع. امتصاص الآنف والبلعوم تطلع (جيش الشعب الجديد) المستخدمة لقياس مستويات الانترفيرون γ في الرضع بالتهاب القصيبات المرتبطة بالإصابة بالفيروس المخلوي التنفسي (RSV) (ن أحمر، = 12)، ممرض غير RSV تنفسي (n الخضراء، = 12)، وصحية عناصر التحكم (الأزرق، n = 9). تم تحليل البيانات باستخدام اختبار كروسكال-واليس مع تصحيح دونس لمقارنات متعددة (* * *ف< 0.001). خطوط ترمز إلى القيم الوسطية وأشرطة الخطأ النطاقات المجال. (الرقم معدلة بإذن من ثوايتيس et al. 30)- <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56413/56413fig4large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56413/56413fig5.jpg"> الشكل 5 : الوسطاء التهابات في الشعب الهوائية امتصاص عينات خلال العدوى رهينوفيروس. عقب الإصابة رهينوفيروس-16 من ضوابط صحية (n = 10، الأزرق) والمتطوعين الربو التحسسي (n = 23، الأحمر)، استيعاب الشعب الهوائية واستخدمت لقياس مستويات A) IFN-γ، ب) CXCL11، ج) إيل-10، وايل-5 د) عند خط الأساس، وفي يوم 4 من الإصابة. توقيع البيانات تحليلها بواسطة الرتبي اختبار رتبة (مطابقة العينات) واختبار مان-ويتني (عينات لا مثيل لها). الرقم طبع بإذن من هانسيل et al. 6 <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56413/56413fig5large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>

Watch this Scientific Journal Video about Absorption of Nasal and Bronchial Fluids: Precision Sampling of the Human Respiratory Mucosa and Laboratory Processing of Samples at JoVE.com

Absorption of Nasal and Bronchial Fluids: Precision Sampling of the Human Respiratory Mucosa and Laboratory Processing of Samples

ويصف هذه المخطوطة استخدام تقنيات الاستيعاب الآنف والشعب الهوائية، وعلى وجه التحديد باستخدام مصفوفات الاستيعابية الاصطناعية (SAM) لأخذ عينات السوائل البطانة المخاطية (بروميد الميثيل) من مجرى الهواء العلوي والسفلي. هذه الأساليب توفير أفضل المواصفات وقابلية التحمل من تقنيات أخذ العينات التنفسية الموجودة.

امتصاص السوائل الآنف والشعب الهوائية: دقة أخذ العينات البشرية الغشاء المخاطي للجهاز التنفسي وتجهيز مختبر عينات

The methods of nasal absorption (NA) and bronchial absorption (BA) use synthetic absorptive matrices (SAM) to absorb the mucosal lining fluid (MLF) of the ...

absorption-nasal-bronchial-fluids-precision-sampling-human

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Medical-Surgical Nursing

Medicine

Unit 1

Upper Respiratory Tract Infections

SCIENTISTS IN ACTION

29.3K Views.  St Mary's Hospital. ويصف هذه المخطوطة استخدام تقنيات الاستيعاب الآنف والشعب الهوائية، وعلى وجه التحديد باستخدام مصفوفات الاستيعابية الاصطناعية (SAM) لأخذ عينات السوائل البطانة المخاطية (بروميد الميثيل) من مجرى الهواء العلوي والسفلي. هذه الأساليب توفير أفضل المواصفات وقابلية التح?...

Video: Absorption of Nasal and Bronchial Fluids: Precision Sampling of the Human Respiratory Mucosa and Laboratory Processing of Samples

Processing of Human Reduction Mammoplasty and Mastectomy Tissues for Cell Culture

Experimental examination of normal human mammary epithelial cell (HMEC) behavior, and how normal cells acquire abnormal properties, can be facilitated by in vitro culture systems that more accurately model in vivo biology. The use of human derived material for studying cellular differentiation, aging, senescence, and immortalization is particularly advantageous given the many significant molecular differences in these properties between human and commonly utilized rodent cells1-2. Mammary cells present a convenient model system because large quantities of normal and abnormal tissues are available due to the frequency of reduction mammoplasty and mastectomy surgeries.
The mammary gland consists of a complex admixture of many distinct cell types, e.g., epithelial, adipose, mesenchymal, endothelial. The epithelial cells are responsible for the differentiated mammary function of lactation, and are also the origin of the vast majority of human breast cancers. We have developed methods to process mammary gland surgical discard tissues into pure epithelial components as well as mesenchymal cells3. The processed material can be stored frozen indefinitely, or initiated into primary culture. Surgical discard material is transported to the laboratory and manually dissected to enrich for epithelial containing tissue. Subsequent digestion of the dissected tissue using collagenase and hyaluronidase strips stromal material from the epithelia at the basement membrane. The resulting small pieces of the epithelial tree (organoids) can be separated from the digested stroma by sequential filtration on membranes of fixed pore size. Depending upon pore size, fractions can be obtained consisting of larger ductal/alveolar pieces, smaller alveolar clusters, or stromal cells. We have observed superior growth when cultures are initiated as organoids rather than as dissociated single cells. Placement of organoids in culture using low-stress inducing media supports long-term growth of normal HMEC with markers of multiple lineage types (myoepithelial, luminal, progenitor)4-5. Sufficient numbers of cells can be obtained from one individual's tissue to allow extensive experimental examination using standardized cell batches, as well as interrogation using high throughput modalities.
Cultured HMEC have been employed in a wide variety of studies examining the normal processes governing growth, differentiation, aging, and senescence, and how these normal processes are altered during immortal and malignant transformation4-15,16. The effects of growth in the presence of extracellular matrix material, other cell types, and/or 3D culture can be compared with growth on plastic5,15. Cultured HMEC, starting with normal cells, provide an experimentally tractable system to examine factors that may propel or prevent human aging and carcinogenesis.

A method to process human mammary surgical discard material is described. Processed tissue, in the form of organoids, can be stored frozen indefinitely or placed in culture for long-term growth. This method enables experimental examination of normal human epithelial cell biology, and the effects of exogenous perturbations.

تجهيز رأب الثدي لحد من استئصال الثدي والأنسجة البشرية للثقافة الخليوي

Experimental  examination of normal human mammary epithelial cell (HMEC) behavior, and how  normal cells acquire abnormal properties, can be facilitated ...

Methodology for Sputum Induction and Laboratory Processing

The technique of sputum induction and processing is a recognized non-invasive method allowing the collection and analysis of cells from the airways, which is interesting in various respiratory diseases like asthma, chronic obstructive pulmonary disease (COPD), chronic cough, or idiopathic pulmonary fibrosis. This technique is well tolerated, safe and non-invasive, but is currently limited to research services and specialized centers in clinical practice because it is technically demanding, time-consuming, and requires trained staff. The success rate of sputum induction and analysis is about 80%.
Here, we describe the induction and laboratory processing of sputum samples. Sputum is induced by inhalation of hypertonic or isotonic saline with salbutamol. For the processing, we use the whole sputum technique. Dithiothreitol (DTT) is used to allow mucolysis of sputum samples. The primary aim of sputum processing is to obtain a differential cell count to study the cell types present in the airway lumen. Additional analyses may also be performed on sputum supernatant and sputum cells, which may allow further investigation into inflammatory processes and immune mechanisms. Examples include studying mediators in sputum supernatant and performing a large spectrum of analysis on sputum cells such as flow cytometry, genomics, or proteomics.
Finally, representative results of sputum analysis in healthy controls, asthmatics, and COPD patients are presented.

Here we describe the technique of sputum induction. This protocol also explains the sputum processing to perform a differential cell count and to collect sputum supernatant and cells for further analysis.

منهجية الاستقراء البصاق وتجهيز المختبرات

The technique of sputum induction and processing is a recognized non-invasive method allowing the collection and analysis of cells from the airways, which ...

Sampling Strategies and Processing of Biobank Tissue Samples from Porcine Biomedical Models

In translational medical research, porcine models have steadily become more popular. Considering the high value of individual animals, particularly of genetically modified pig models, and the often-limited number of available animals of these models, establishment of (biobank) collections of adequately processed tissue samples suited for a broad spectrum of subsequent analyses methods, including analyses not specified at the time point of sampling, represent meaningful approaches to take full advantage of the translational value of the model. With respect to the peculiarities of porcine anatomy, comprehensive guidelines have recently been established for standardized generation of representative, high-quality samples from different porcine organs and tissues. These guidelines are essential prerequisites for the reproducibility of results and their comparability between different studies and investigators. The recording of basic data, such as organ weights and volumes, the determination of the sampling locations and of the numbers of tissue samples to be generated, as well as their orientation, size, processing and trimming directions, are relevant factors determining the generalizability and usability of the specimen for molecular, qualitative, and quantitative morphological analyses. Here, an illustrative, practical, step-by-step demonstration of the most important techniques for generation of representative, multi-purpose biobank specimen from porcine tissues is presented. The methods described here include determination of organ/tissue volumes and densities, the application of a volume-weighted systematic random sampling procedure for parenchymal organs by point-counting, determination of the extent of tissue shrinkage related to histological embedding of samples, and generation of randomly oriented samples for quantitative stereological analyses, such as isotropic uniform random (IUR) sections generated by the &#34;Orientator&#34; and &#34;Isector&#34; methods, and vertical uniform random (VUR) sections.

The practical application and performance of methods for generation of representative tissue samples of porcine animal models for a broad spectrum of downstream analyses in biobank projects are demonstrated, including volumetry, systematic random sampling, and differential processing of tissue samples for qualitative and quantitative morphologic and molecular analyses types.

استراتيجيات أخذ العينات وتجهيزها لعينات الأنسجة المصرف البيولوجي من النماذج الطبية الخنزير

In translational medical research, porcine models have steadily become more popular. Considering the high value of individual animals, particularly of ...

Remote Laboratory Management: Respiratory Virus Diagnostics

An uptick in recent pandemics (Ebola, Zika, MERS, influenza, etc.) underlines the need for a more 'nimble,' coordinated response that addresses a multitude of issues ranging from transportation, access, facilities, equipment, and communication to provider training. To address this need, we have developed an innovative, scalable, logistics-enhanced, mobile, laboratory facility for emergencies and epidemics in resource-constrained global settings. Utilizing a background in clinical operations as an academic medical center, we designed a rapidly-deployable, modular BSL-2 and BSL-3 facility with user-friendly software for tracking and management of drugs and supplies in remote regions during epidemics and outbreaks. Here, we present our intermodal, mobile, expandable shipping-container laboratory units. The design of the laboratory facilitates off-grid usage by minimizing power consumption and allowing alternate water sources. The unit's information communication technology (ICT) platform provides (i) user-friendly tablet-based documentation, (ii) enhanced tracking of patients and supplies, and (iii) integrated communication onsite with built-in telehealth capabilities. To ensure quality in remote environments, we have developed a checklist for a basic laboratory workflow and a protocol for respiratory viral diagnosis using reverse-transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). As described, this innovative and comprehensive approach allows for the provision of laboratory capability in resource-limited global environments.

A rapidly-deployable, off-grid laboratory has been designed and built for remote, resource-constrained global settings. The features and critical aspects of the logistically-enhanced, expandable, multifunctional laboratory modules are explored. A checklist for a basic laboratory workflow and a protocol for a respiratory viral diagnostic test are developed and presented.

إدارة مختبر بعد: تشخيص الفيروس التنفسي

An uptick in recent pandemics (Ebola, Zika, MERS, influenza, etc.) underlines the need for a more 'nimble,' coordinated response that addresses a ...

Culture and Imaging of Human Nasal Epithelial Organoids

Individualized therapy for cystic fibrosis (CF) patients can be achieved with an in vitro disease model to understand baseline Cystic Fibrosis Transmembrane conductance Regulator (CFTR) activity and restoration from small molecule compounds. Our group recently focused on establishing a well-differentiated organoid model directly derived from primary human nasal epithelial cells (HNE). Histology of sectioned organoids, whole-mount immunofluorescent staining, and imaging (using confocal microscopy, immunofluorescent microscopy, and bright field) are essential to characterize organoids and confirm epithelial differentiation in preparation for functional assays. Furthermore, HNE organoids produce lumens of varying sizes that correlate with CFTR activity, distinguishing between CF and non-CF organoids. In this manuscript, the methodology for culturing HNE organoids are described in detail, focusing on the assessment of differentiation using the imaging modalities, including the measurement of baseline lumen area (a method of CFTR activity measurement in organoids that any laboratory with a microscope can employ) as well as the developed automated approach to a functional assay (which requires more specialized equipment).

A detailed protocol is presented here to describe an in vitro organoid model from human nasal epithelial cells. The protocol has options for measurements requiring standard laboratory equipment, with additional possibilities for specialized equipment and software.

زراعة وتصوير المواد العضوية الظهارية الأنفية البشرية

Individualized therapy for cystic fibrosis (CF) patients can be achieved with an in vitro disease model to understand baseline Cystic Fibrosis ...

Collection, Expansion, and Differentiation of Primary Human Nasal Epithelial Cell Models for Quantification of Cilia Beat Frequency

Measurements of cilia function (beat frequency, pattern) have been established as diagnostic tools for respiratory diseases such as primary ciliary dyskinesia. However, the wider application of these techniques is limited by the extreme susceptibility of ciliary function to changes in environmental factors e.g., temperature, humidity, and pH. In the airway of patients with Cystic Fibrosis (CF), mucus accumulation impedes cilia beating. Cilia function has been investigated in primary airway cell models as an indicator of CF Transmembrane conductance Regulator (CFTR) channel activity. However, considerable patient-to-patient variability in cilia beating frequency has been found in response to CFTR-modulating drugs, even for patients with the same CFTR mutations. Furthermore, the impact of dysfunctional CFTR-regulated chloride secretion on ciliary function is poorly understood. There is currently no comprehensive protocol demonstrating sample preparation of in vitro airway models, image acquisition, and analysis of Cilia Beat Frequency (CBF). Standardized culture conditions and image acquisition performed in an environmentally controlled condition would enable consistent, reproducible quantification of CBF between individuals and in response to CFTR-modulating drugs. This protocol describes the quantification of CBF in three different airway epithelial cell model systems: 1) native epithelial sheets, 2) air-liquid interface models imaged on permeable support inserts, and 3) extracellular matrix-embedded three-dimensional organoids. The latter two replicate in vivo lung physiology, with beating cilia and production of mucus. The ciliary function is captured using a high-speed video camera in an environment-controlled chamber. Custom-built scripts are used for the analysis of CBF. Translation of CBF measurements to the clinic is envisioned to be an important clinical tool for predicting response to CFTR-modulating drugs on a per-patient basis.

This protocol describes nasal epithelial cell collection, expansion, and differentiation to organotypic airway epithelial cell models and quantification of cilia beat frequency via live-cell imaging and custom-built scripts.

جمع وتوسيع وتمايز نماذج الخلايا الظهارية الأنفية البشرية الأولية لتحديد تردد ضربات الأهداب

Measurements of cilia function (beat frequency, pattern) have been established as diagnostic tools for respiratory diseases such as primary ciliary ...

A Traditional Chinese Medicine Characteristic Therapy for Bronchial Asthma: Moxibustion

Bronchial asthma is a chronic inflammatory disease of the airway which can lead to symptoms such as recurrent wheezing, shortness of breath, chest tightness, or cough, as a result of increased airway reactivity. With high diurnal variation, these symptoms often occur or worsen at night or in the morning. By burning and roasting the Chinese medica above human acupoints, moxibustion is a type of treatment that stimulates the activity of the human meridians through drugs and heat stimulation to prevent and treat diseases. According to the principle of syndrome differentiation and treatment of traditional Chinese medicine, acupoints are selected on the corresponding parts, which has a definite effect. It is regarded as a characteristic traditional Chinese medicine therapy for bronchial asthma. This protocol elaborates the methods and steps of patient management, material preparation, selection of acupoints, operation, and postoperative nursing to ensure safe and effective moxibustion treatment to significantly improve the clinical symptoms and quality of life of patients with bronchial asthma.

This protocol presents a curative procedure of moxibustion in treating patients with bronchial asthma.

علاج مميز للطب الصيني التقليدي للربو القصبي: الكى

Bronchial asthma is a chronic inflammatory disease of the airway which can lead to symptoms such as recurrent wheezing, shortness of breath, chest ...

التقاط عينات أنسجة التليف تحت المخاطي عن طريق الفم لتحليل المكاني - أوميكس

Isolation of Cells with Morphological and Spatial Information from Oral Submucous Fibrosis Samples by Laser Capture Microdissection

Oral submucous fibrosis (OSF) is a common type of potentially malignant disorder in the oral cavity. The atrophy of epithelium and fibrosis of the lamina propria and the submucosa are often found on histopathological slides. Epithelial dysplasia, epithelial atrophy, and senescent fibroblasts have been proposed to be associated with the malignant transformation of OSF. However, because of the heterogeneity of potentially malignant oral disorders and oral squamous cell carcinoma, it is difficult to identify the specific molecular mechanisms of malignant transformation in OSF. Here, we present a method to obtain a small number of epithelial or mesenchymal cells carrying morphological data and spatial information by laser capture microdissection on formalin-fixed paraffin-embedded tissue slides. Using a microscope, we can precisely capture microscale (~500 cells) dysplastic or atrophic epithelial tissue and fibrotic subepithelial tissue. The extracted cells can be evaluated by genome or transcriptome sequencing to acquire genomic and transcriptomic data with morphological and spatial information. This approach removes the heterogeneity of bulk OSF tissue sequencing and the interference caused by cells in non-lesioned areas, allowing for precise spatial-omics analysis of OSF tissue.

تسليط الضوء على المؤلف: فتح أسرار الأورام الخبيثة المحتملة عن طريق الفم 

Laser capture microdissection of oral submucous fibrosis tissues allows for precise extraction of cells from histological regions of interest for the analysis of multi-omics data with morphological and spatial information.

عزل الخلايا بالمعلومات المورفولوجية والمكانية من عينات التليف تحت المخاطي للفم عن طريق التشريح المجهري لالتقاط الليزر

Oral submucous fibrosis (OSF) is a common type of potentially malignant disorder in the oral cavity. The atrophy of epithelium and fibrosis of the lamina ...