Name: mating-based overexpression library screening in yeast
Uploaded: 2018-07-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 39 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mating-based Overexpression Library Screening in Yeast at JoVE.com

ونحن ممتنون لمناقشات عميقة مع الأعضاء في جو المختبر ومختبر تشونغ، والدعم المالي من جامعة ولاية رأيت.

ملاحظة: بروتوكول الموصوفة هنا صمم لفحص والبلازميدات مكتبة الواردة في عشر لوحات 96-جيدا لكن يمكن تحجيمها صعودا أو هبوطاً تبعاً لذلك. البروتوكول يحتاج إلى تكرار لإكمال فحص مكتبة كاملة. عادة، يمكن أن تعالج بشكل مريح الفحص ضد 10 لوحات من الجينات مكتبة في كل مرة بشخص واحد.
1-الإعداد للتحول الخميرة 96-جيدا
ملاحظة: هذه الخطوة ويتم ذلك كما سبق وصف7،10.
<ol><li>الكوة 5 ميليلتر (حوالي 50 – 100 نانوغرام) من بلازميد الحمض النووي من مكتبة بلازميد المنتشرة في كل من لوحة 96-بئر مستديرة القاع جيدا. ملاحظة: سيكون مثالاً لتلك المكتبة خميرة جينات overexpression مكتبة10.</li>
	<li>تلقيح 150 مل من الخميرة ببتون سكر العنب (YPD) وسائط الإعلام في قارورة 500 مل مع مستعمرة (2-3 مم) من سلالة الخميرة فرداني W303α. تبني عليها بين عشية وضحاها في 30 درجة مئوية مع الهز (200 لفة في الدقيقة).</li>
	<li>في صباح اليوم التالي، قياس OD600 الثقافة بين عشية وضحاها، وتمييع ثقافة الخميرة OD600 = 0.1 في (تصل إلى) 2 لتر YPD. احتضان عند 30 درجة مئوية مع الهز (200 لفة في الدقيقة) ح ~ 5 حتى يصل إلى الثقافة OD600 = 0.4 – 0.6.</li>
</ol>2-الخميرة التحول
<ol><li>حصاد الثقافة الخميرة بملء 8 زجاجات الطرد المركزي العقيمة 250 مل وسينتريفوجينج لهم في درجة حرارة الغرفة في س 3,000 ز للحد الأدنى 10 من أجل إيقاف المادة طافية دون تعطيل بيليه. ملاحظة: القيام بجميع الخطوات الطرد المركزي في درجة حرارة الغرفة.</li>
	<li>أغسل الخميرة مع العقيمة المقطر H2o. لهذا، إضافة 100 مل من العقيم ح2س لكل زجاجة للطرد المركزي ودوامه أن ريسوسبيند بيليه الخلية. دمج الخلايا غسلها 2 زجاجات والطرد المركزي لهم في س 3,000 ز 5 كحد أدنى من أجل إيقاف المادة طافية.</li>
	<li>تغسل الخلايا في كل زجاجة في 100 مل من 0.1 م ليواك/1XTE (100 مم ليواك؛ 10 ملم تريس، pH 8.0; 1 مم يدتا) والطرد المركزي لهم في 3,000 س ز 5 كحد أدنى من أجل إيقاف المادة طافية.</li>
	<li>بينما سينتريفوجينج، يغلي 5 مل من سمك السلمون الحيوانات المنوية الحمض النووي (10 مغ/مل) عند 100 درجة مئوية باستخدام سخان كتلة لمدة 3 دقائق وثم تبرد على الجليد.</li>
	<li>ريسوسبيند بيليه الخلية في 25 مل من 0.1 م ليواك/1XTE في كل زجاجة، والجمع بين الخلايا ريسوسبينديد ونقلها إلى قارورة 150 مل. إضافة 5 مل من الحيوانات المنوية السلمون يبرد قبل الحمض النووي واحتضان أنه عند 30 درجة مئوية مع الهز (225 لفة في الدقيقة) لمدة 30 دقيقة.</li>
	<li>صب الخليط خلية في خزان كاشف المتاح عقيمة، واستخدام ماصة متعددة القنوات، نقل 35 ميليلتر من الخليط خلية لكل بئر من الجولة-أسفل لوحة 96-البئر الذي يحتوي على مكتبة بلازميد الحمض النووي. لوحات دوامة 96-البئر باستخدام فورتيكسير طبق لمدة 1 دقيقة 1,000 لفة في الدقيقة. احتضان لوحات لمدة 30 دقيقة في 30 درجة مئوية دون المصافحة. ملاحظة: لا المكدس اللوحات، وحتى يمكن نقل الحرارة أكثر كفاءة. وقد وجدنا أن فورتيكسينج لوحات 96-بئر 1,000 لفة في الدقيقة لا يسبب السائل إلى تسرب من الآبار، ولكن ينبغي اختبار سرعة دوامة آمنة قبل القيام بالخطوة.</li>
	<li>وفي قارورة، تعد 200 مل من تحويل المخزن المؤقت الذي يحتوي على تركيز نهائي من 40% PEG3350 و [دمس] 10% 0.1 م ليواك. إعداد المخزن المؤقت التحول فورا قبل الاستخدام ومزجها جيدا بالهز.</li>
	<li>لوحات إزالة 96-جيدا من الحاضنة 30 درجة مئوية ومزجها لمدة 30 ثانية 1,000 لفة في الدقيقة باستخدام فورتيكسير لوحة. إضافة 125 ميليلتر من المخزن المؤقت التحول لكل بئر ومن ثم دوامة لوحات لمدة 1 دقيقة 1,000 لفة في الدقيقة.</li>
	<li>احتضان لوحات عند 30 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة وثم الحرارة صدمة الخميرة بوضع اللوحات في حاضنة 42 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. ملاحظة: لا المكدس اللوحات.</li>
	<li>الطرد المركزي لوحات لمدة 5 دقائق في 3,000 س ز. إزالة المخزن المؤقت التحول من الآبار بعكس اللوحات على حاوية نفايات وبقوة إلقاء المخزن المؤقت من اللوحات. لطخة لوحات مقلوبة على منشفة ورقية نظيفة لإزالة أي سائل على رأس اللوحات بسرعة.</li>
	<li>شطف الخلايا عن طريق إضافة إلى ميليلتر 200 لوحات من التسرب الحد الأدنى المتوسط المقابلة لعلامة اختيار على بلازميد المكتبة. ملاحظة: قمنا باستخدام وسيلة اتفاق جولة أوروغواي اصطناعية.</li>
	<li>الطرد المركزي لوحات لمدة 5 دقائق في 3,000 س ز وإزالة المادة طافية على حاوية نفايات كما في الخطوة 2، 10.</li>
	<li>إضافة 160 ميليلتر أورا-المتوسطة تحتوي على حد أدنى 2% الجلوكوز. دوامة لوحات لمدة 1 دقيقة 1,000 لفة في الدقيقة واحتضانها لهم عند 30 درجة مئوية عن 48 ساعة دون المصافحة. بعد 48 ساعة، ملاحظة أن بيليه خميرة المحولة مرئياً في الجزء السفلي من كل بئر.</li>
	<li>استخدام موزع سائلة، إضافة 100 ميليلتر من اتفاق جولة أوروغواي، وسائل الإعلام التي تحتوي على الجلوكوز في كل من مجموعة جديدة من لوحات 96-جيدا جيدا.</li>
	<li>دوامة لوحات تحتوي على الخميرة المحولة (من الخطوة 2، 13) 1,000 لفة في الدقيقة لمدة 30 س. باستخدام وحدة النسخ متماثل 96-دبوس بلاستيك عقيمة ووضع الدبابيس في الآبار التي تحتوي على الخميرة المحولة وتطعيم لهم ثم إلى الآبار المقابلة للوحات الجديدة مليئة بوسائل الإعلام. احتضان لوحات جديدة عند 30 درجة مئوية ح 24. ملاحظة: إذا كان يعمل مع 10 لوحات، المتوسط يمكن أيضا يمكن الاستغناء عن يدوياً باستخدام الماصات متعدد القنوات.</li>
	<li>بعد 24 ساعة، ينبغي أن يكون بيليه خميرة مرئية في الجزء السفلي من كل بئر يحتوي على الخميرة المحولة بنجاح. لحفظ هذه سلالات الخميرة كمخزون والغليسيرول، إضافة 50 ميليلتر من الجلسرين 50% لكل بئر، دوامة لوحات لمدة 30 ثانية 1,000 لفة في الدقيقة، ختم اللوحات مع ختم الشريط وتجميدها في-80 درجة مئوية. ملاحظة: الخطوات المذكورة أعلاه تحتاج إلى تتم مرة واحدة فقط. البدء من مخزونات والغليسيرول العروض المستقبلية لنماذج مختلفة من الخميرة ضد نفس مكتبة كاشف المتاح الخزان والشروع فورا من الخطوات المذكورة أدناه.</li>
</ol>3-التزاوج بين الخلايا التي تحتوي على جينات مكتبة والخميرة الاستعلام
<ol><li>لإنعاش سلالات مكتبة من المخزون والغليسيرول، تأخذ لوحات 96-جيدا للخروج من الثلاجة-80 درجة مئوية، إزالة الشريط الختم، وترك الخميرة ذوبان الجليد في درجة حرارة الغرفة لمدة حوالي 30 دقيقة.</li>
	<li>بمجرد قد إذابة الخميرة، استخدام وحدة النسخ متماثل 96-دبوس بلاستيك عقيمة لتطعيم الأرصدة والغليسيرول إلى 160 ميليلتر الطازجة التي تحتوي على اتفاق جولة أوروغواي-وسائط 2% الجلوكوز في لوحات 96-جيدا واحتضانها لهم عند 30 درجة مئوية ل 24 h. فورا بعد أن يتم استخدام سلالات المكتبة ، ختم اللوحات مع ختم الشريط، وإعادتها إلى الثلاجة-80 درجة مئوية.</li>
	<li>في نفس اليوم هي إذابة سلالات مكتبة (W303α)، تطعيم سلالة الخميرة الاستعلام (هنا، فوس في W303a) إلى 50 مل YPD، وأنها تنمو بين عشية وضحاها في 30 درجة مئوية مع الهز 250 لفة في الدقيقة.</li>
	<li>في صباح اليوم التالي، صب سلالة الخميرة الاستعلام إلى خزان كاشف المتاح عقيمة، والكوة ميليلتر 160 من سلالة الاستعلام لكل بئر من صفيحة 96-جيدا ماصة متعددة باستخدام.</li>
	<li>استخدام موزع السائلة، الاستغناء عن 160 ميليلتر من YPD وسائل الإعلام في كل من عشر لوحات 96-جيدا جيدا. استخدام هذه اللوحات في وقت لاحق للتزاوج سلالة الخميرة الاستعلام مع الخميرة المكتبة.</li>
	<li>باختصار دوامة سلالة لوحة 96-كذلك يتضمن سلالة الاستعلام ومن ثم استخدام وحدة النسخ متماثل 96-دبوس معقم لنقل الاستعلام إلى لوحات YPD.</li>
	<li>باختصار دوامة المكتبة سلالة لوحات، وكل لوحة مكتبة السلالة، استخدام وحدة النسخ متماثل 96-دبوس معقم جديدة لنقل سلالات مكتبة إلى لوحات YPD التي قد تم تلقيح مع سلالة الاستعلام. ملاحظة: الخلايا في والغليسيرول تفقد صلاحيتها بعد عدة دورات تجميد ذوبان الجليد. العودة سلالات مكتبة للتخزين طويل الأجل (الثلاجة-80 درجة مئوية) أقرب الاحتفاظ المكتبة في ذات نوعية جيدة، وجاهزة للاستخدام في المستقبل. حفظت بشكل صحيح، يمكن تجميد الأسهم والغليسيرول وإذابة 10 مرات على الأقل. نوصي بشدة أيضا حفظ نسخة عمل ونسخ احتياطية من الأسهم والغليسيرول. عندما لا يعمل العامل المخزون، فورا جعل جديدة تعمل نسخة من نسخة احتياطية.</li>
	<li>احتضان لوحات YPD عند 30 درجة مئوية ل h. 24 علما أن بيليه خميرة سيكون مرئياً في الجزء السفلي من كل بئر بعد 24 ساعة.</li>
	<li>لوحات ملء 96-جيدا مع متوسط تسرب الحد أدنى الذي يحتوي على 2% رافينوسي، المقابلة لعلامات التحديد على بلازميد في سلالة الاستعلام وكذلك على بلازميد المكتبة (مثلاً، هنا أورا-له-).</li>
	<li>استخدام النسخ متماثل 96-دبوس عقيمة لنقل الخميرة من YPD التزاوج الثقافات لوسائط الإعلام الانتقائي. احتضان لوحات 96-جيدا عند 30 درجة مئوية عن 48 ساعة؛ الخميرة فقط الخلايا التي قد تزاوج وشكلت مثنوية الخلايا لذلك، تحتوي على كلا بلازميد الاستعلام وبلازميد المكتبة سوف تكون قادرة على النمو في هذه الوسائط. بعد يومين، نلاحظ أن بيليه مرئياً في الجزء السفلي من الآبار.</li>
</ol>4-اكتشاف الإنزيم
<ol><li>
بعد 48 ساعة نمو في وسائل الإعلام الانتقائي التي تحتوي على رافينوسي، على الفور الخميرة لوحات أجار.
	<ol>
<li>إعداد مجموعات من لوحات أورا-صاحب التسرب تتضمن أجار 2% باستخدام ألواح البوليسترين واضحة وواحدة تحتوي على اللبن 2% والجلوكوز 2% أخرى تحتوي على 2.</li>
		<li>لوحات دوامة 96-جيدا لمدة 1 دقيقة 1,000 لفة في الدقيقة، ثم بقعة الخميرة لوحات أورا-صاحب الانقطاع عن الدراسة التي تحتوي على اللبن 2% واجار 2% (هي التي يسببها الجينات فوس ومكتبة) ولوحات أورا-صاحب التسرب الذي يحتوي على الجلوكوز 2% و 2% أجار (الجينات فوس ومكتبة القمع) باستخدام جهاز اكتشاف روبوتية، التي رصدت الثقافة في كل جيدا على لوحات أجار في البيلوروسية (أيالثقافة في 1 كذلك رصدت للبقع 4 على لوحة أجار).</li>
		<li>بعد أن شاهد، اسمحوا لوحات أجار الجاف، وثم وضعها في حاضنة 30 درجة مئوية رأسا على عقب. تصوير لوحات أجار كل 24 ساعة لتسجيل نمو أسرع/أكثر خميرة التي أنقذت السمية على سلالة الاستعلام أو تسجل نمواً أبطأ/أقل من الذي يتفاقم السمية على سلالة الاستعلام. احتضان اللوحات لمدة 4 أيام. ملاحظة: الثقافة في كل جيدا يمكن رصدها على ألواح أجار 1 إلى 1, كما هو موضح في أسلوب المستندة إلى التحول سابق10. ومع ذلك، 1-إلى-4 شاهد هنا (والتي يمكن وضع مريح حتى باستخدام آلة اكتشاف الروبوتية) يزيد بشكل كبير مدى متانة المقايسة بالحد من العدد إيجابيات كاذبة. وتعتبر الزيارات إيجابية فقط عندما تظهر جميع المستعمرات 4 من نفس جيدا النمط الظاهري مماثلة.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol>
	<li>Dujon, B. A., Louis, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+diversity+and+evolution+in+the+budding+yeasts+(Saccharomycotina).">Genome diversity and evolution in the budding yeasts (Saccharomycotina).</a> Genetics. 206 (2), 717-750 (2017).</li><li>Khurana, V., Lindquist, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modelling+neurodegeneration+in+Saccharomyces+cerevisiae:+why+cook+with+baker's+yeast.">Modelling neurodegeneration in Saccharomyces cerevisiae: why cook with baker's yeast.</a> Nature Reviews Neuroscience. 11 (6), 436-449 (2010).</li><li>Willingham, S., Outeiro, T. F., DeVit, M. J., Lindquist, S. L., Muchowski, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Yeast+genes+that+enhance+the+toxicity+of+a+mutant+huntingtin+fragment+or+alpha-synuclein.">Yeast genes that enhance the toxicity of a mutant huntingtin fragment or alpha-synuclein.</a> Science. 302 (5651), 1769-1772 (2003).</li><li>Outeiro, T. F., Lindquist, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Yeast+cells+provide+insight+into+alpha-synuclein+biology+and+pathobiology.">Yeast cells provide insight into alpha-synuclein biology and pathobiology.</a> Science. 302 (5651), 1772-1775 (2003).</li><li>Cooper, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alpha-synuclein+blocks+ER-Golgi+traffic+and+Rab1+rescues+neuron+loss+in+Parkinson's+models.">Alpha-synuclein blocks ER-Golgi traffic and Rab1 rescues neuron loss in Parkinson's models.</a> Science. 313 (5785), 324-328 (2006).</li><li>Treusch, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+links+between+Abeta+toxicity,+endocytic+trafficking,+and+Alzheimer's+disease+risk+factors+in+yeast.">Functional links between Abeta toxicity, endocytic trafficking, and Alzheimer's disease risk factors in yeast.</a> Science. 334 (6060), 1241-1245 (2011).</li><li>Ju, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+yeast+model+of+FUS/TLS-dependent+cytotoxicity.">A yeast model of FUS/TLS-dependent cytotoxicity.</a> PLoS Biology. 9 (4), 1001052 (2011).</li><li>Sun, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+determinants+and+genetic+modifiers+of+aggregation+and+toxicity+for+the+ALS+disease+protein+FUS/TLS.">Molecular determinants and genetic modifiers of aggregation and toxicity for the ALS disease protein FUS/TLS.</a> PLoS Biology. 9 (4), 1000614 (2011).</li><li>Johnson, B. S., McCaffery, J. M., Lindquist, S., Gitler, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+yeast+TDP-43+proteinopathy+model:+Exploring+the+molecular+determinants+of+TDP-43+aggregation+and+cellular+toxicity.">A yeast TDP-43 proteinopathy model: Exploring the molecular determinants of TDP-43 aggregation and cellular toxicity.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (17), 6439-6444 (2008).</li><li>Fleming, M. S., Gitler, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+yeast+plasmid+overexpression+screen.">High-throughput yeast plasmid overexpression screen.</a> Journal of Visualized Experiments. (53), e2836 (2011).</li><li>Herskowitz, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Life+cycle+of+the+budding+yeast+Saccharomyces+cerevisiae.">Life cycle of the budding yeast Saccharomyces cerevisiae.</a> Microbiological Reviews. 52 (4), 536-553 (1988).</li><li>Suter, B., Auerbach, D., Stagljar, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Yeast-based+functional+genomics+and+proteomics+technologies:+the+first+15+years+and+beyond.">Yeast-based functional genomics and proteomics technologies: the first 15 years and beyond.</a> Biotechniques. 40 (5), 625-644 (2006).</li><li>Barmada, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amelioration+of+toxicity+in+neuronal+models+of+amyotrophic+lateral+sclerosis+by+hUPF1.">Amelioration of toxicity in neuronal models of amyotrophic lateral sclerosis by hUPF1.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (25), 7821-7826 (2015).</li><li>Jackson, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preservation+of+forelimb+function+by+UPF1+gene+therapy+in+a+rat+model+of+TDP-43-induced+motor+paralysis.">Preservation of forelimb function by UPF1 gene therapy in a rat model of TDP-43-induced motor paralysis.</a> Gene Therapy. 22 (1), 20-28 (2015).</li></ol>

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

هنا، يمكننا وصف بروتوكولا لأداء شاشة overexpression بلازميد في استخدام التزاوج لإدخال بلازميد المكتبة في نموذج الخميرة الخميرة. باستخدام هذا النهج، يمكن فحص نماذج متعددة من الخميرة سمية البروتين أمراض الأعصاب باستخدام نفس المجموعة من الخميرة تحول مع مكتبة بلازميد. عملية شاقة للتحول يحتاج فقط ?...

مهدها الخميرة Saccharomyces cerevisiae كانت تستخدم على نطاق واسع في البحوث العلمية الأساسية1 فهم العمليات الخلوية التي تتصل مباشرة بالأمراض التي تصيب الإنسان. وعلاوة على ذلك، قد استخدمت ككائن نموذج لدراسة البروتينات البشرية المرتبطة بالمرض، مثل تلك المرتبطة بأمراض الأعصاب الأكثر شيوعاً، بما في ذلك مرض الزهايمر ومرض باركنسون ومرض هنتنغتون والجانبي الضموري 2من التصلب الجانبي (المرض). ميزة نموذج الخميرة هو السهولة التي يمكن أن يؤديها شاشة على نطاق الجينوم لتحديد المسارات الخلوية المتصلة بسمية البروتينات ذات الصلة بالمرض، مما يعطي نظرة ثاقبة إليه سميتها. شاشة واحدة من هذا القبيل يطلق على شاشة مكتبة overexpression، فيه كل من جينات الخميرة 5,500 في مكتبة أراييد تتحول إلى نموذج خميرة على تحديد الجينات التي يمكن تعديل السمية عند أوفيريكسبريسيد. هذا أسلوب الفرز قد طبقت بنجاح في نماذج الخميرة متعددة الأعصاب المرتبطة بالمرض البروتينات، بما في ذلك هونتينجتين لمرض هنتنغتون3، α-سينوكلين لمرض باركنسون4،5 ، Aβ6من مرض الزهايمر، وفوس، ماساتشوستس-43 للمرض7،،من89. الخطوة كثيفة العمالة أكثر من الشاشة على حدة في حين أنه يتم عادة في طريقة الفائق10، هو تحويل جينات الخميرة 5,500 من مكتبة أراييد. يجب أن يتم تنفيذ هذه الخطوة في كل مرة يتم تكرار الفحص، وكلما نموذجا خميرة المنشأة حديثا تحتاج إلى دراسة. من المهم إيجاد وسيلة أكثر كفاءة لإنجاز هذه المهمة.
[ستبلى] يمكن أن توجد خلايا الخميرة في أشكال فرداني والنباتات على حد سواء. هناك نوعان من المقابلة للتزاوج أنواع الخلايا فرداني، يزاوج نوع والخلايا α. فرداني للتزاوج كل نوع تنتج وتفرز فرمون التزاوج المحددة الخاصة بهم، التي تستجيب فقط الخلايا نوع التزاوج المعاكس. وهذا يسمح للتزاوج بين والخلايا α لإنتاج الخلايا ضعفاني مستقرة،/α. هذه العملية هي عفوية وذات كفاءة عالية11. يمكن لنا أن نستفيد من هذه دورة حياة فريدة من نوعها S. cerevisiae لإدخال بلازميد المكتبة. وبشكل أكثر تحديداً، ستحول كل الجينات في مكتبة صفت بلازميد إلى الخلايا فرداني من نوع التزاوج واحد، أي، خلية α. سيتم تخزين هذه الخلايا التي تحتوي على جينات مكتبة ثم والغليسيرول الأسهم في شكل 96-جيدا أراييد. لكل طراز الخميرة التي تحتاج إلى فحص، يمكن إذابة خلايا الخميرة التي تحتوي على جينات مكتبة من المخزون والغليسيرول، ويمكن أن يتم الفحص عن طريق التزاوج مع نموذج الخميرة من اهتمام بالمقابل التزاوج نوع، أينوع التزاوج. هذه الفكرة من استخدام التزاوج للجمع بين اثنين من الجينات في الخميرة ليست جديدة. قد طبقت بنجاح في الخميرة الفائق الفرز الهجين اثنين، فيه بناء طعم (أي، Gal4-الحمض النووي-ملزمة المجال الأنشطار) في نوع التزاوج واحد جمعت عن طريق التزاوج مع بنية بري من مكتبة أراييد 12-غير أن هذه الاستراتيجية لم تطبق ابدأ في عروض مكتبة أوفيريكسبريشن، التي استخدمت دائماً طرق التحويل التقليدية.
قبل إنشاء مختبرنا نموذج خميرة فوس البروتين المرتبط بالمرض7. من خلال الفحص مكتبة أوفيريكسبريشن باستخدام أسلوب التحويل اكتشفنا خمس جينات الخميرة (ECM32، NAM8، SBP1، SKO1، و VHR1) أن إنقاذ سمية فوس عند أوفيريكسبريسيد. وتأكدت هذه النتائج بشكل مستقل مع دراسة مماثلة بآخر مجموعة8. وأبدى hUPF1، homolog الإنسان من ECM32، لاحقاً لقمع السمية في الخلايا العصبية الأولية13 وفي نموذج حيوان من المرض14 كذلك. باستخدام هذه الجينات الخمسة كدليل على المبدأ، علينا أن نبرهن أن الجينات خمس جميع المثل إنقاذ فوس السمية عند إدخالها في نموذج الخميرة فوس بالتزاوج. حيث يمكن تخزينها بشكل دائم في الأسهم والغليسيرول خلايا الخميرة التي تحتوي على جينات مكتبة وإحياء كلما دعت الحاجة، سيتم إزالة هذا الأسلوب القائم على التزاوج خطوة وقتاً طويلاً لتحويل كل مرة المكتبة بحاجة إلى فحص ضد. منذ التزاوج ذات كفاءة عالية بأي تحويل بلازميد المعنية، هذه الاستراتيجية أيضا إلى حد كبير يقلل التكلفة المرتبطة بتنقية وتحويل مكتبة بلازميد كبيرة. سوف نطبق هذا الأسلوب بنجاح إلى مكتبة الفرز ضد الخميرة نموذج فوس.
إجراء الفرز على أساس التزاوج يرد بإيجاز في الشكل 1. في البداية، تتحول إلى سلالة خميرة فرداني من التزاوج α نوع استخدام بروتوكول تحول الفائق خميرة التي يحتوي على كل من لوحة 96-جيدا جيدا الخميرة تحول مع بلازميد مكتبة محددة المكتبة بلازميد صفت. يتم حفظ هذه المجموعة من الخميرة المحولة كمخزون والغليسيرول يمكن إذابة وإحياؤها لاستخدامها في وقت لاحق. نموذج الخميرة من الاهتمام، في هذه الحالة سمية فوس، يجب أن يتم إنشاؤها في سلالة خميرة فرداني مع نوع التزاوج المعاكس (التزاوج نوع). في طريقة الفائق باستخدام معقم 96-دبوس مثاليان، سلالة فوس وسلالات الخميرة التي تحتوي على مكتبة بلازميد يتم تحويلها إلى لوحات 96-البئر الذي يحتوي على الوسائط الغنية، ويسمح لرفيقه. بعد التزاوج، كمية صغيرة من كل بئر الثقافة التزاوج يتم نقلها إلى 96-جيدا لوحات تحتوي على وسائط الإعلام التسرب الاصطناعية في الخميرة مثنوية فقط التي تحتوي على كلا فوس ومكتبة الجينات يمكن أن تنمو. ثم يتم استخدام جهاز اكتشاف روبوتية لنقل الثقافة الخميرة من كل بئر على لوحات أجار فيها فعل التعبير عن فوس والجينات المكتبة.  بالإضافة إلى ذلك، رصدت الثقافة الخميرة للتحكم في لوحات أجار حيث فوس والجينات مكتبة لا يعبر عن. في أعقاب النمو على ألواح أجار، سيتم تحديد الجينات التي إنقاذ أو تزيد من حدة سمية فوس.

<table><tbody><tr><td>salmon Sperm DNA (SS-DNA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>&amp;nbsp; D1626</td><td></td></tr><tr><td>YPD broth</td><td>Research Products International (RPI)</td><td>Y20090</td><td></td></tr><tr><td>Granulated Agar</td><td>Fisher Sci</td><td>BP97445</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-Glucose</td><td>Research Products International (RPI)</td><td>G32040</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-Galactose</td><td>Research Products International (RPI)</td><td>G33000</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-Raffinose Pentahydrate</td><td>Research Products International (RPI)</td><td>R20500</td><td></td></tr><tr><td>Ammonium Sulfate</td><td>Fisher Sci</td><td>A702-500</td><td></td></tr><tr><td>Synthetic Ura- drop out medium</td><td>Clontech</td><td>630416</td><td></td></tr><tr><td>Yeast amino acid drop out supplement -Histidine/-Uracil</td><td>Clontech</td><td>630422</td><td></td></tr><tr><td>Yeast Nitrogen Base without Amino Acids and Ammonium Sulfate</td><td>Research Products International (RPI)</td><td>Y20060</td><td></td></tr><tr><td>Dimethyl Sulfoxide (DMSO)</td><td>Fisher Sci</td><td>S67496</td><td></td></tr><tr><td>Lithium acetate, anhydrous</td><td>Fisher Sci</td><td>AC268640010</td><td></td></tr><tr><td>Polyethylene Glycol 3350 (PEG-3350)</td><td>Spectrum Chemical&amp;nbsp;</td><td>PO125-12KG</td><td></td></tr><tr><td>96 Pin Replicator&amp;nbsp;</td><td>Scinomix</td><td>SCI-5010-OS</td><td></td></tr><tr><td>Nunc OmniTray</td><td>Thermo Sci</td><td>140156</td><td></td></tr><tr><td>Corning Costar 96 well assay plate, round bottom with lid</td><td>Fisher Sci</td><td>07-200-760</td><td>non-treated, sterile</td></tr><tr><td>Eppendorf&amp;nbsp;Research plus Multichannel Pipette</td><td>Eppendorf</td><td>TI13690052</td><td>30-300ul volume</td></tr><tr><td>Fisherbrand&amp;nbsp;Isotemp Digital Dry Baths/Block Heaters</td><td>Fisher Sci</td><td>88-860-023</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf&amp;nbsp;MixMate</td><td>Eppendorf</td><td>21-379-00</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf 5810R Centrifuge</td><td>Fisher Sci</td><td>05-413-112</td><td></td></tr><tr><td>Avanti J-26 XPI Centrifuge</td><td>Beckman</td><td>393127</td><td></td></tr><tr><td>MultiFlo FX Multi-Mode Dispenser</td><td>BioTek</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Rotor HDA&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td><td>Singer Instruments</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

mating-based overexpression library screening in yeast

الخميرة مهدها قد استخدمت على نطاق واسع كنموذج لدراسة البروتينات المرتبطة بالأمراض التي تصيب الإنسان. الفحص الوراثي على نطاق الجينوم أداة قوية التي يشيع استخدامها في الدراسات الخميرة. التعبير عن عدد من البروتينات المرتبطة بأمراض الأعصاب في الخميرة الأسباب سيتوتوكسيسيتي وتشكيل التجميعية، ولخص النتائج في المرضى الذين يعانون من هذه الاضطرابات. هنا، يمكننا وصف طريقة لفحص نموذج خميرة من البروتين المرتبط بالتصلب العضلي الجانبي فوس لمعدلات سميته. بدلاً من استخدام التحويل، هذا البرنامج فحص جديدة تعتمد على التزاوج من الخميرة لإدخال لمكتبة أراييد من البلازميدات في نموذج الخميرة. يحتوي الأسلوب على التزاوج اثنين من مزايا واضحة: أولاً، أنها ذات كفاءة عالية؛ ثانيا، يمكن تخزين مكتبة والبلازميدات arrayed قبل تحويلها للطويلة الأجل أسهم والغليسيرول وتطبيقها بسرعة على شاشات أخرى دون أن الخطوة كثيفة العمالة للتحول إلى نموذج الخميرة في كل مرة. ونحن تثبت كيف يمكن أن تستخدم هذا الأسلوب بنجاح على الشاشة للجينات التي تعديل سمية فوس.

البروتين المرتبط بالمرض فوس، الحمض النووي الريبي/DNA بروتين، درست سابقا في الخميرة فرداني7،8. الوراثية الفحص باستخدام الأسلوب القائم على التحول اكتشفت عدة جينات الخميرة التي تقمع سمية فوس. Homolog الإنسان واحدة من جينات الخميرة اتضح فيما بعد أ...

Watch this Scientific Journal Video about Mating-based Overexpression Library Screening in Yeast at JoVE.com

Mating-based Overexpression Library Screening in Yeast

تقدم هذه المقالة طريقة التزاوج القائم لتسهيل فحص أوفيريكسبريشن في مهدها الخميرة استخدام مكتبة صفت بلازميد.

فحص مكتبة Overexpression المستندة إلى التزاوج في الخميرة

Budding yeast has been widely used as a model in studying proteins associated with human diseases. Genome-wide genetic screening is a powerful tool ...

mating-based-overexpression-library-screening-in-yeast

Research

JoVE Journal

Genetics

7.6K Views.  Wright State University. تقدم هذه المقالة طريقة التزاوج القائم لتسهيل فحص أوفيريكسبريشن في مهدها الخميرة استخدام مكتبة صفت بلازميد.

Video: Mating-based Overexpression Library Screening in Yeast

A Yeast 2-Hybrid Screen in Batch to Compare Protein Interactions

Screening for protein-protein interactions using the yeast 2-hybrid assay has long been an effective tool, but its use has largely been limited to the discovery of high-affinity interactors that are highly enriched in the library of interacting candidates. In a traditional format, the yeast 2-hybrid assay can yield too many colonies to analyze when conducted at low stringency where low affinity interactors might be found. Moreover, without a comprehensive and complete interrogation of the same library against different bait plasmids, a comparative analysis cannot be achieved. Although some of these problems can be addressed using arrayed prey libraries, the cost and infrastructure required to operate such screens can be prohibitive. As an alternative, we have adapted the yeast 2-hybrid assay to simultaneously uncover dozens of transient and static protein interactions within a single screen utilizing a strategy termed DEEPN (Dynamic Enrichment for Evaluation of Protein Networks), which incorporates high-throughput DNA sequencing and computation to follow the evolution of a population of plasmids that encode interacting partners. Here, we describe customized reagents and protocols that allow a DEEPN screen to be executed easily and cost-effectively.

Batch processing of yeast 2-hybrid screens allows for direct comparison of the interaction profiles of multiple bait proteins with a highly complex set of prey fusion proteins. Here, we describe refined methods, new reagents, and how to implement their use for such screens.

شاشة 2-هجين خميرة في دفعة المقارنة بين تفاعلات البروتين

Screening for protein-protein interactions using the yeast 2-hybrid assay has long been an effective tool, but its use has largely been limited to the ...

Biochemistry

A Deep-sequencing-assisted, Spontaneous Suppressor Screen in the Fission Yeast Schizosaccharomyces pombe

A genetic screen for mutant alleles that suppress phenotypic defects caused by a mutation is a powerful approach to identify genes that belong to closely related biochemical pathways. Previous methods such as the Synthetic Genetic Array (SGA) analysis, and random mutagenesis techniques using ultraviolet (UV) or chemicals like ethyl methanesulfonate (EMS) or N-ethyl-N- nitrosourea (ENU), have been widely used but are often costly and laborious. Also, these mutagen-based screening methods are frequently associated with severe side effects on the organism, inducing multiple mutations that add to the complexity of isolating the suppressors. Here, we present a simple and effective protocol to identify suppressor mutations in mutants which confer a growth defect in Schizosaccharomyces pombe. The fitness of cells with a growth deficiency in standard rich liquid media or synthetic liquid media can be monitored for recovery using an automated 96-well plate reader over an extended period. Once a cell acquires a suppressor mutation in the culture, its descendants outcompete those of the parental cells. The recovered cells that have a competitive growth advantage over the parental cells can then be isolated and backcrossed with the parental cells. The suppressor mutations are then identified using whole-genome sequencing. Using this approach, we have successfully isolated multiple suppressors that alleviate the severe growth defects caused by loss of Elf1, an AAA+ family ATPase that is important in nuclear mRNA transport and maintenance of genomic stability. There are currently over 400 genes in S. pombe with mutants conferring a growth defect. As many of these genes are uncharacterized, we propose that our method will hasten the identification of novel functional interactions with this user-friendly, high-throughput approach.

A Deep-sequencing-assisted, Spontaneous Suppressor Screen in the Fission Yeast Schizosaccharomyces pombe

We present a simple suppressor screen protocol in fission yeast. This method is efficient, mutagen-free, and&#160; selective&#160; for&#160; mutations that&#160; often&#160; occur at&#160; &#160;a&#160; single&#160; genomic&#160; locus.&#160; The protocol is suitable for isolating suppressors that alleviate growth defects in liquid culture that are caused by a mutation or a drug.

شاشة القامع عميق--التسلسل-ساعد، عفوية في "انشطار الخميرة" شيزوساكتشاروميسيس بومبي

A genetic screen for mutant alleles that suppress phenotypic defects caused by a mutation is a powerful approach to identify genes that belong to closely ...

Enhanced Yeast One-hybrid Screens To Identify Transcription Factor Binding To Human DNA Sequences

Identifying the sets of transcription factors (TFs) that regulate each human gene is a daunting task that requires integrating numerous experimental and computational approaches. One such method is the yeast one-hybrid (Y1H) assay, in which interactions between TFs and DNA regions are tested in the milieu of the yeast nucleus using reporter genes. Y1H assays involve two components: a &#8216;DNA-bait&#8217; (e.g., promoters, enhancers, silencers, etc.) and a &#8216;TF-prey,&#8217; which can be screened for reporter gene activation. Most published protocols for performing Y1H screens are based on transforming TF-prey libraries or arrays into DNA-bait yeast strains. Here, we describe a pipeline, called enhanced Y1H (eY1H) assays, where TF-DNA interactions are interrogated by mating DNA-bait strains with an arrayed collection of TF-prey strains using a high density array (HDA) robotic platform that allows screening in a 1,536 colony format. This allows for a dramatic increase in throughput (60 DNA-bait sequences against &#62;1,000 TFs takes two weeks per researcher) and reproducibility. We illustrate the different types of expected results by testing human promoter sequences against an array of 1,086 human TFs, as well as examples of issues that can arise during screens and how to troubleshoot them.

Here, we present an enhanced yeast one-hybrid screening protocol to identify the transcription factors (TFs) that can bind to a human DNA region of interest. This method uses a high-throughput screening pipeline that can interrogate the binding of &#62;1,000 TFs in a single experiment.

شاشات الهجين واحد الخميرة المحسنة لتحديد عامل النسخ ملزمة لتسلسل الحمض النووي البشري

Identifying the sets of transcription factors (TFs) that regulate each human gene is a daunting task that requires integrating numerous experimental and ...

A Comparative Approach to Characterize the Landscape of Host-Pathogen Protein-Protein Interactions

Significant efforts were gathered to generate large-scale comprehensive protein-protein interaction network maps. This is instrumental to understand the pathogen-host relationships and was essentially performed by genetic screenings in yeast two-hybrid systems. The recent improvement of protein-protein interaction detection by a Gaussia luciferase-based fragment complementation assay now offers the opportunity to develop integrative comparative interactomic approaches necessary to rigorously compare interaction profiles of proteins from different pathogen strain variants against a common set of cellular factors.
This paper specifically focuses on the utility of combining two orthogonal methods to generate protein-protein interaction datasets: yeast two-hybrid (Y2H) and a new assay, high-throughput Gaussia princeps protein complementation assay (HT-GPCA) performed in mammalian cells.
A large-scale identification of cellular partners of a pathogen protein is performed by mating-based yeast two-hybrid screenings of cDNA libraries using multiple pathogen strain variants. A subset of interacting partners selected on a high-confidence statistical scoring is further validated in mammalian cells for pair-wise interactions with the whole set of pathogen variants proteins using HT-GPCA. This combination of two complementary methods improves the robustness of the interaction dataset, and allows the performance of a stringent comparative interaction analysis. Such comparative interactomics constitute a reliable and powerful strategy to decipher any pathogen-host interplays.

This article focuses on the identification of high-confident interaction datasets between host and pathogen proteins using a combination of two orthogonal methods: yeast two-hybrid followed by a high-throughput interaction assay in mammalian cells called HT-GPCA.

A المنهج المقارن لتوصيف المشهد من المضيف الممرض البروتين البروتين التفاعلات

Significant efforts were gathered to generate  large-scale comprehensive protein-protein interaction network maps. This is  instrumental to understand the ...

Immunology and Infection

High-throughput Yeast Plasmid Overexpression Screen

The budding yeast, Saccharomyces cerevisiae, is a powerful model system for defining fundamental mechanisms of many important cellular processes, including those with direct relevance to human disease. Because of its short generation time and well-characterized genome, a major experimental advantage of the yeast model system is the ability to perform genetic screens to identify genes and pathways that are involved in a given process. Over the last thirty years such genetic screens have been used to elucidate the cell cycle, secretory pathway, and many more highly conserved aspects of eukaryotic cell biology 1-5. In the last few years, several genomewide libraries of yeast strains and plasmids have been generated 6-10. These collections now allow for the systematic interrogation of gene function using gain- and loss-of-function approaches 11-16. Here we provide a detailed protocol for the use of a high-throughput yeast transformation protocol with a liquid handling robot to perform a plasmid overexpression screen, using an arrayed library of 5,500 yeast plasmids. We have been using these screens to identify genetic modifiers of toxicity associated with the accumulation of aggregation-prone human neurodegenerative disease proteins. The methods presented here are readily adaptable to the study of other cellular phenotypes of interest.

Here we describe a plasmid overexpression screen in Saccharomyces cerevisiae, using an arrayed plasmid library and a high-throughput yeast transformation protocol with a liquid handling robot.

شاشة عالية الإنتاجية الخميرة Overexpression البلازميد

The budding yeast, Saccharomyces cerevisiae, is a powerful model system for defining fundamental mechanisms of many important cellular processes, ...

Biology

Competitive Genomic Screens of Barcoded Yeast Libraries

By virtue of advances in next generation sequencing technologies, we have access to new genome sequences almost daily. The tempo of these advances is accelerating, promising greater depth and breadth. In light of these extraordinary advances, the need for fast, parallel methods to define gene function becomes ever more important. Collections of genome-wide deletion mutants in yeasts and E. coli have served as workhorses for functional characterization of gene function, but this approach is not scalable, current gene-deletion approaches require each of the thousands of genes that comprise a genome to be deleted and verified. Only after this work is complete can we pursue high-throughput phenotyping. Over the past decade, our laboratory has refined a portfolio of competitive, miniaturized, high-throughput genome-wide assays that can be performed in parallel. This parallelization is possible because of the inclusion of DNA 'tags', or 'barcodes,' into each mutant, with the barcode serving as a proxy for the mutation and one can measure the barcode abundance to assess mutant fitness. In this study, we seek to fill the gap between DNA sequence and barcoded mutant collections. To accomplish this we introduce a combined transposon disruption-barcoding approach that opens up parallel barcode assays to newly sequenced, but poorly characterized microbes. To illustrate this approach we present a new Candida albicans barcoded disruption collection and describe how both microarray-based and next generation sequencing-based platforms can be used to collect 10,000 - 1,000,000 gene-gene and drug-gene interactions in a single experiment.

We have developed comprehensive, unbiased genome-wide screens to understand gene-drug and gene-environment interactions. Methods for screening these mutant collections are presented.

الجينوم شاشات التنافسية للمكتبات الخميرة Barcoded

By virtue of advances in next generation sequencing technologies, we have access to new genome sequences almost daily.  The tempo of these advances is ...

<meta charset="utf8"></head><body>تحسين وظائف البروتين من خلال تقنيات عرض سطح الخميرة

Protein Engineering by Yeast Surface Display

Protein engineering enables the improvement of existing functions of a given protein or the generation of novel functions. One of the most widely used and versatile tools in the protein engineering field is yeast surface display, where a pool of randomized proteins is expressed on the surface of yeast. The linkage of phenotype (e.g., binding of the yeast-displayed protein to the antigen of interest) and genotype (the plasmid encoding for the protein variant) enables selection of this library for desired properties and subsequent sequencing of enriched variants. By combining magnetic bead selection with flow cytometric sorting, protein variants with enhanced binding to a target antigen can be selected and enriched. Notably, in addition to affinity maturation, binding to a target can also be achieved without any initial binding affinity. Here, we provide a step-by-step protocol that covers all essential parts of a yeast surface display selection campaign and gives examples of typical yeast surface display results. We demonstrate that yeast surface display is a broadly applicable and robust method that can be established in any molecular biology laboratory with access to flow cytometry.

<meta charset="utf8"></head><body>هندسة البروتين بواسطة عرض سطح الخميرة

This protocol describes the essential steps for conducting yeast surface display selection campaigns to enrich protein variants binding to an antigen of interest.

هندسة البروتين بواسطة عرض سطح الخميرة

Protein engineering enables the improvement of existing functions of a given protein or the generation of novel functions. One of the most widely used and ...

Bioengineering

Directed Evolution Method in Saccharomyces cerevisiae: Mutant Library Creation and Screening

Directed evolution in Saccharomyces cerevisiae offers many attractive advantages when designing enzymes for biotechnological applications, a process that involves the construction, cloning and expression of mutant libraries, coupled to high frequency homologous DNA recombination in vivo. Here, we present a protocol to create and screen mutant libraries in yeast based on the example of a fungal aryl-alcohol oxidase (AAO) to enhance its total activity. Two protein segments were subjected to focused-directed evolution by random mutagenesis and in vivo DNA recombination. Overhangs of ~50 bp flanking each segment allowed the correct reassembly of the AAO-fusion gene in a linearized vector giving rise to a full autonomously replicating plasmid. Mutant libraries enriched with functional AAO variants were screened in S. cerevisiae supernatants with a sensitive high-throughput assay based on the Fenton reaction. The general process of library construction in S. cerevisiae described here can be readily applied to evolve many other eukaryotic genes, avoiding extra PCR reactions, in vitro DNA recombination and ligation steps.

Directed Evolution Method in Saccharomyces cerevisiae: Mutant Library Creation and Screening

We present a detailed protocol to construct and screen mutant libraries for directed evolution campaigns in Saccharomyces cerevisiae.

توجه طريقة تطور في<em&gt; خميرة الخباز</em&gt;: المسخ مكتبة الخلق والفرز

Directed evolution in Saccharomyces cerevisiae offers many attractive advantages when designing enzymes for biotechnological applications, a process that ...

فحص مكتبة Overexpression المستندة إلى التزاوج في الخميرة

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

شاشة 2-هجين خميرة في دفعة المقارنة بين تفاعلات البروتين

شاشة القامع عميق--التسلسل-ساعد، عفوية في "انشطار الخميرة" شيزوساكتشاروميسيس بومبي

شاشات الهجين واحد الخميرة المحسنة لتحديد عامل النسخ ملزمة لتسلسل الحمض النووي البشري

A المنهج المقارن لتوصيف المشهد من المضيف الممرض البروتين البروتين التفاعلات

شاشة عالية الإنتاجية الخميرة Overexpression البلازميد

الجينوم شاشات التنافسية للمكتبات الخميرة Barcoded

هندسة البروتين بواسطة عرض سطح الخميرة

هندسة البروتين بواسطة عرض سطح الخميرة

هندسة البروتين بواسطة عرض سطح الخميرة

توجه طريقة تطور في