الهدف الرئيسي من هذه التجربة هو وصف إجراء نقل الجنين بالمنظار في الأرنب كنموذج. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أن هذا واحد يعمل على نقل الأجنة باستخدام تقنية سهلة، والحد الأدنى من الغازية. وعلاوة على ذلك، يعمل بروتوكول حفظ التبريد الفعال للجنين هنا، كما تم وصفه، على تخزين أجنة الأرانب على المدى الطويل، مما يوفر قدرات لوجستية مرنة زمنياً والقدرة على نقل العينة.
وكما نعلم، فإن تكنولوجيات الإنجاب التي تتلقى المساعدة هي قيد التقييم المستمر لتحسين النتائج والحد من المخاطر المرتبطة بها. لذلك، باستخدام كلا التقنيات، يمكن استخدام الأرنب كنموذج حيواني مثالي للتكاثر البشري للإجابة على الأسئلة الرئيسية في هذا المجال، مثل آثار التلاعب الجنين في المختبر على النسل. إن البرهان المرئي لهذه الأمور أمر بالغ الأهمية حيث يصعب تعلم خطوات نقل الأجنة، لأنه يجب أن يتم ذلك بدقة كبيرة لضمان نجاح هذه التقنية.
بالنسبة للتبخير الجنيني ، غمر الأجنة في محلول موازين لمدة دقيقتين ، متبوعًا باحتضان لمدة دقيقة واحدة في محلول التعبئة. في نهاية الحضانة، تحميل الأجنة في 125 ميكرولتر البلاستيك القش الصغير، والزوجين نهاية مغلقة من القش الصغير مع مجهرية ملليلتر مناسبة. قاعدة التعرق المتوسطة تصل إلى ثلث طول القش، تليها فقاعة الهواء الصغيرة.
بعد ذلك ، استخدم منظار مجسم لاستنشاق الأجنة في 40 ميكرولترات من محلول التكذيب ، تليها فقاعة هواء صغيرة أخرى وقاعدة متوسطة كافية لنقل الكسر السائل الأول إلى قطن القش الصغير. ثم أغلق الطرف المفتوح من القش الصغير بقش بقش، غمس القشة المصغرة مباشرة في النيتروجين السائل لتحقيق التزجيج، وتخزين القش الصغير في سخرية النيتروجين السائل. لإذابة الأجنة لنقلها، ضع القش الصغير أفقياً 10 سنتيمترات من بخار النيتروجين السائل لمدة 20 إلى 30 ثانية.
عندما تبدأ عملية التبلور داخل القش الصغير ، غمر القش الصغير في حمام الماء 25 درجة مئوية لمدة 10 إلى 15 ثانية. إزالة فورا المقبس القش والقطن واستخدام microdispenser مقرونة لطرد محتويات القش مصغرة في لوحة تحتوي على 25 درجة مئوية قاعدة المتوسطة تكملها 0.33 محلول السكروز الضروس، والتي يجب أن تبقى الأجنة خلال خمس دقائق. ثم نقل الأجنة إلى لوحة من وسط قاعدة جديدة لاحتضان خمس دقائق أخرى.
كما عدة أيام قبل سن الأجنة التي سيتم نقلها، لاحظ turgidity ولون الفرج من الأرانب الإناث 4.5 الشهر الإناث ناضجة المتاحة، والحث على الإباضة في الحيوانات تقبلا مع حقن واحد داخل العضو من ميكروغرام واحد من خلات buserelin بغض النظر عن وزن الجسم. في يوم النقل ، شطف الأجنة الطازجة أو المذابة في 37 درجة مئوية قاعدة المتوسطة تحت منظار مجسم ، وإرفاق تكوين مناسب 17 قياس فوق الجافية القسطرة لحقنة ملليلتر واحد. تعرق سنتيمتر واحد من قاعدة المتوسطة في القسطرة، تليها فقاعة الهواء الصغيرة.
ثم تُفطّن خمسة إلى سبعة أجنة و10 ميكرولترات من وسط القاعدة، تليها فقاعة هواء صغيرة أخرى، وآخر سنتيمتر من وسط القاعدة. بمجرد تحميل الأجنة ، ضع أرنب المتلقي المذبق في قفص على مرحلة الاحترار ، وطبق المرهم على عيون الحيوان. بعد التأكد من عدم الاستجابة لدواسة منعكس، حلق الفراء من البطن البطني، وتنظيف المنطقة الجراحية مع صابون غلوكونات الكلورهيكسيدين، وإزالة أي الشعر المتبقية.
غطي المنطقة بغطاء معقمة مع ثقب للمنطقة الجراحية، وأدخل تروكار واحد بالمنظار خمسة سنتيمترات في تجويف البطن، سمين السد إلى عملية الزيفويد، واستخدام ضغط ينظم التوفق الميكانيكي لتضخيم تجويف البريتوني. أدخل كاميرا المنظار من خلال التروكر بالمنظار، وأدخل الإبرة فوق الجافية 17 قياسًا في المنطقة الأربية، على بعد سنتيمترين إلى ثلاثة سنتيمترات من إنفيندبولوم. أدخل القسطرة المحملة من خلال الإبرة فوق الجافية في البطن، وأدخل سنتيمتر أو سمين من القسطرة فوق الجافية من خلال إينفرومبولوم في الأمبولة.
اِكتئِبُ بلطف مُضاغط القثطار لإطلاق الأجنة في oviduct. يجب على كل من فقاعات الهواء الخروج من القسطرة. إزالة القسطرة بعد إطلاق الأجنة، والتعرق وإطلاق الوسط المتبقي للتأكد من عدم وجود الأجنة.
بعد التأكد من نجاح نقل الأجنة، قم بإزالة الإبرة فوق الجافية وكاميرا المنظار، وإطلاق ثاني أكسيد الكربون البطني من خلال التروكر بالمنظار. تنظيف شق trocar مع محلول الكلورهيكسيدين، وإغلاق الجرح مع الألومنيوم micronised وخلع الملابس البلاستيكية. ثم علاج الحيوان بالمضادات الحيوية المناسبة والتكليس، ومراقبة الحيوان حتى الشفاء التام.
ينقل الجنين بالمنظار الحد الأدنى من الغازية يضع الأرنب بين أفضل النماذج الحيوانية للدراسات الإنجابية، مع نسبة عالية من الأجنة الجديدة المنقولة مما يؤدي إلى جرو. وتجدر الإشارة إلى أن القيم الأعلى تتحقق عندما يتم نقل الأجنة الطازجة مع الأجنة في مرحلة المورولا المبكرة أو المدمجة. ويلاحظ نتائج مماثلة بعد مبكرة وضغطت نقل مورولا الأرنب، لا سيما مع morulae المدمجة، مما يؤكد فعالية وموثوقية هذه التقنية لنقل الأجنة الطازجة في vitrified في الأرانب.
بعد هذا الإجراء، يمكن تنفيذ طرق أخرى مثل التقنيات الإنجابية المساعدة المشروطة من أجل الإجابة على أسئلة إضافية مثل كيف يمكن أن تترتب على إضافة الكثافة تأثير مسكن في وقت لاحق من الحياة. بعد التطور الأخير ، تمهد هذه التقنية الطريق أمام العلماء في مجال التكاثر لاستكشاف هذا التأثير في البشر استنادًا إلى المسافة الفيلوجينية الوثيقة بين الأرانب والبشر. وهكذا، يمكن أن توفر هذه التقنية نتائج قابلة للتحويل بسهولة إلى الطب السريري البشري، وكذلك في أنواع الثدييات الأخرى.
لا ننسى أن لدينا طريقة تقدم بعض المزايا الصحية والاقتصادية المطابقة لمفهوم ثلاثة R من رعاية الحيوان، واستبدال، والحد، والصقل، من خلال تنويه الهدف من تحسين معاملة الإنسان من الحيوانات التجريبية.
