هذا العمل كان تدعمها "مؤسسة العلوم الطبيعية الوطنية الصينية" (المنحة رقم 31400936، 31460260) و "العلوم الطبيعية مؤسسة جيانغشي مقاطعة من الصين" (20171BAB215020). ونشكر أيضا البرنامج المشترك بين جامعة نانتشانغ، وجامعة الملكة ماري في لندن لدعم هذا العمل.

عليها جميع الأساليب الموصوفة هنا بالعناية بالحيوان واستخدام اللجنة لجامعة نانتشانغ.
1-تجميع المعدات والاتصال مبضع
<ol><li>تصميم المعلمة كل المتطلبات (الملحق الرقم 1).</li>
	<li>تقديم المعلمة لمصنع محلي لتصنيع لوحات اﻷكريليك.</li>
	<li>تجميع جميع أنحاء في التسلسل: استخدام كلوروفورم لضم 7 لوحات اﻷكريليك التجارية في دبابة مع قسم حمام القناة والمياه (الشكل 1). تنبيه: كلوروفورم تنتج مواد سامة عندما يجتمع الضوء والأكسجين. قم بتجميع الجهاز في غطاء دخان.</li>
	<li>تثبيت الكهربائية والتدفئة من خلال الثقب في المجلس اﻷكريليك #1 (الشكل 2A، رأس السهم).</li>
	<li>لتثبيت وحدة التحكم بدرجة الحرارة، إنشاء حفرة صغيرة على متنها اﻷكريليك #2 استخدام مثقاب كهربائي، وتثبيت كاشف درجة الحرارة (الشكل 2A، سهم). تثبيت الحرارة رقمية على الدبابة (الشكل 2A). ملاحظة: ينبغي أن يكون الكشف عن درجة الحرارة داخل 1 سم تحت سطح الماء.</li>
	<li>لتوفير الوصول إلى السلطة، ضبط الجهد أدناه 24 الخامس قبل تشغيل المعدات.</li>
	<li>إزالة علبة النفايات قسم من مبضع.</li>
	<li>ربط قناة المقاطع مع صاحب بليد مبضع مع سيليكون محايدة للتسرب (الشكل 2). ملاحظة: لا تشويه أي تسرب السيليكون المحايد فوق الجزء العلوي من النصل حتى أن يتم استبدال شفرة القديمة بسهولة.</li>
	<li>الجاف بين عشية وضحاها للسماح كلوروفورم وسيليكون محايدة تسرب الوقت لترسيخ.</li>
	<li>قم بتثبيت الشفرة لصاحب بليد. صب الماء في حوض ماء (الشكل 2). ينبغي أن تلمس سطح الماء فقط الجزء العلوي من الشفرة (الشكل 2D، رأس السهم).</li>
</ol>2. البارافين تمزيقها
ملاحظة: غالباً ما تتراكم الحطام على الحواف العليا أو السفلي لكتلة الشمع وسطح الماء. يجب أن يتم مسح هذا الحطام بانتظام.
<ol><li>
أداء البارافين التقليدية تمزيقها10.
	<ol>
<li>المشبك العينة جزءا لا يتجزأ من البارافين في مبضع روتاري وبليد في حامل بليد.</li>
		<li>يجب بدوره وقسم العينة.</li>
		<li>نقل الشريط البارافين مقطوع إلى حمام الماء الدافئ 38.5 درجة مئوية.</li>
		<li>اختيار متابعة المقاطع على المجهر الشريحة من سطح الماء بعد تتكشف.</li>
		<li>جاف الشرائح في فرن في 42 درجة مئوية بين عشية وضحاها.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
تحسين البارافين تمزيقها (الشكل 3)
	<ol>
<li>قم بتشغيل المعدات.</li>
		<li>فتح السخان مع تبديل الكشف عن درجة الحرارة وضبط درجة حرارة المستهدفة بين 38.0 درجة مئوية إلى 40.0 ° C ل 1 (ح) مقدما الماء دافئ.</li>
		<li>تعديل كتلة البارافين المكتسبة عن طريق تضمين البارافين؛ ثم وضع كتلة البارافين في المشبك كاسيت مبضع وتأمينه. ملاحظة: تعدل الحدود العليا والسفلي من كتلة البارافين أفقياً لمنع الشريط قسم من تشكيل قوس وأصبح غير قادر على التدفق من خلال قناة أبواب ضيقة.</li>
		<li>بسرعة نهج العينة بقطع المقاطع أكثر سمكا.</li>
		<li>ضبط لسماكة قسم مناسب (10 ميكرون للعقول الكبار الماوس والماوس الكبار الكليتين وادمغة الأجنة الماوس، 4 ميكرون لعيون الزرد). بدوره ويجب وسوف تلقائياً أدخل المقاطع قناة المقاطع وحمام.</li>
		<li>قسم العينة في جرة قطع بطيئة وموحدة (الشكل 3A). ملاحظة: سوف تتغير ثيثيكنيس للقسم الأول بعد أن تم إيقاف ويجب لبضع دقائق. ينبغي الاستعاضة عن ريش المتاح لدى الفروع خدوش على التوالي.</li>
		<li>دليل الأقسام في قاعة حمام لتطفو في خط (الشكل 3، 3 ج). ملاحظة: إذا كان رئيس القسم تتمسك بالجدار الدائرة، استخدام دليل فرشاة لإبقائها عائمة.</li>
		<li>تلتزم الأقسام على شرائح المجهر. بعد المقاطع كاملة تتكشف في حوض ماء، عدة أقسام منفصلة مع ملاقط. ثم اعتقالهما من حمام الماء على الشرائح المجهر (3D الشكل). ملاحظة: المقاطع ينبغي أن يتم انتقاؤها من مؤخرة حمام الماء، كما في قناة المقاطع والامامي من حمام الماء سوف لا يكون بعد أصبح جاهزاً تماما.</li>
		<li>الجاف للشرائح عن طريق وضعها في فرن 42 درجة مئوية بين عشية وضحاها. يمكن ثم تخزين الشرائح في درجة حرارة الغرفة إلى أجل غير مسمى.</li>
	</ol>
</li>
	<li>استخدام تلوين الهيماتوكسيلين ويوزين (أنه) من أجل التقييم ل تحسين أسلوب8.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Chung, K., Deisseroth, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CLARITY+for+mapping+the+nervous+system.">CLARITY for mapping the nervous system.</a> Nature Methods. 10 (6), 508-513 (2013).</li><li>Fujita, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+neuron+differentiation+in+the+central+nervous+system+by+tritiated+thymidine+autoradiography.">Analysis of neuron differentiation in the central nervous system by tritiated thymidine autoradiography.</a> Journal of Comparative Neurology. 122 (3), 311-327 (1964).</li><li>Mironov, V., Boland, T., Trusk, T., Forgacs, G., Markwald, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+printing:+Computer-aided+jet-based+3D+tissue+engineering.">Organ printing: Computer-aided jet-based 3D tissue engineering.</a> Trends in Biotechnology. 21 (4), 157-161 (2003).</li><li>Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryosectioning+tissues.">Cryosectioning tissues.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 3 (8), (2008).</li><li>Viebahn, C., Luttenberg, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+modified+anti-roll+plate+as+a+remedy+for+the+ill-effects+of+electrical+charge+during+cryosectioning.">A modified anti-roll plate as a remedy for the ill-effects of electrical charge during cryosectioning.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 37 (7), 1157-1160 (1989).</li><li>Onozato, M. L., Hammond, S., Merren, M., Yagi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+a+completely+automated+tissue-sectioning+machine+for+paraffin+blocks.">Evaluation of a completely automated tissue-sectioning machine for paraffin blocks.</a> Journal of Clinical Pathology. 66 (2), 151-154 (2013).</li><li>Sabaliauskas, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+zebrafish+histology.">High-throughput zebrafish histology.</a> Methods. 39 (3), 246-254 (2006).</li><li>Chen, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hybrid-Cut:+An+Improved+Sectioning+Method+for+Recalcitrant+Plant+Tissue+Samples.">Hybrid-Cut: An Improved Sectioning Method for Recalcitrant Plant Tissue Samples.</a> Journal of Visualized Experiments. (117), e54754 (2016).</li><li>Kucherenko, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paraffin-Embedded+and+Frozen+Sections+of+Drosophila+Adult+Muscles.">Paraffin-Embedded and Frozen Sections of Drosophila Adult Muscles.</a> Journal of Visualized Experiments. (46), e2438 (2010).</li><li>Cornell, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paraffin+Embedding+and+Thin+Sectioning+of+Microbial+Colony+Biofilms+for+Microscopic+Analysis.">Paraffin Embedding and Thin Sectioning of Microbial Colony Biofilms for Microscopic Analysis.</a> Journal of Visualized Experiments. (133), e57196 (2018).</li><li>Whiteland, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunohistochemical+detection+of+T-cell+subsets+and+other+leukocytes+in+paraffin-embedded+rat+and+mouse+tissues+with+monoclonal+antibodies.">Immunohistochemical detection of T-cell subsets and other leukocytes in paraffin-embedded rat and mouse tissues with monoclonal antibodies.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 43 (3), 313-320 (1995).</li><li>Tucker, D. K., Foley, J. F., Bouknight, S. A., Fenton, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sectioning+Mammary+Gland+Whole+Mounts+for+Lesion+Identification.">Sectioning Mammary Gland Whole Mounts for Lesion Identification.</a> Journal of Visualized Experiments. (125), e55796 (2017).</li><li>Venegas-Pino, D. E., Banko, N., Khan, M. I., Shi, Y., Werstuck, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+Analysis+and+Characterization+of+Atherosclerotic+Lesions+in+the+Murine+Aortic+Sinus.">Quantitative Analysis and Characterization of Atherosclerotic Lesions in the Murine Aortic Sinus.</a> Journal of Visualized Experiments. (82), e50933 (2013).</li><li>Lau, S. K., Chu, P. G., Weiss, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD163:+A+specific+marker+of+macrophages+in+paraffin-embedded+tissue+samples.">CD163: A specific marker of macrophages in paraffin-embedded tissue samples.</a> American Journal of Clinical Pathology. 122 (5), 794-801 (2004).</li><li>Campbell-Thompson, M. L., Heiple, T., Montgomery, E., Zhang, L., Schneider, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Staining+Protocols+for+Human+Pancreatic+Islets.">Staining Protocols for Human Pancreatic Islets.</a> Journal of Visualized Experiments. (63), e4068 (2012).</li></ol>

الكتاب على براءة اختراع هذا الجهاز وتعلن لا تضارب المصالح.

لتحسين البارافين قسم التشكل وإيجاد حل لمشكلة الوقت الضائع أثناء تقطيع البارافين التقليدية، أنشأنا تحسين بارافين تمزيقها الأسلوب الذي يجمع بين القطع وتتكشف. يعتمد هذا الأسلوب محسنة على المعدات البسيطة التي تضم قناة قسم وحمام مائي وسخان مع تبديل الكشف عن درجة حرارة. الشريط قسم يدخل حمام ا?...

من المهم دراسة الخصائص المورفولوجية في الأبحاث البيولوجية. على الرغم من أن التكنولوجيا الجديدة قد سمح الباحثين مراعاة أهدافها مباشرة من الأنسجة كاملة أو الكائنات الحية1،2،3، قطع العينة إلى أجزاء رقيقة، متبوعاً تلطيخ، تبقى المرحلة الابتدائية الأسلوب فورنوت مورفولوجيا الأنسجة فقط ولكن أيضا البروتين تستهدف مباشرة في الأنسجة. الخفيفة الميكروسكوب يستخدم ثلاثة أنواع المقاطع: البارافين، المجمدة، وسيميثين. على الرغم من أن كريوسيكتيونينج المشتركة لحماية أنتيجينيسيتي الأنسجة، وإعداد نموذج بسيط، مورفولوجيا الأنسجة المحتفظ بها الفقراء وغير مناسب لتقطيع رقيقة4،5. تقطيع البارافين هو الأسلوب الأكثر استخداماً لنستعرض مورفولوجيا حفظت جيدا. كما العينات المجففة تماما وجزءاً لا يتجزأ من الشمع، يمكن تخزين كتل البارافين إلى أجل غير مسمى. وباﻹضافة إلى ذلك، تقطيع البارافين تنتج مقاطع رقيقة تحسين وصول المسبار البيولوجية في مزيد من التجارب، والحد من خلية طبقة تراكب في اتجاه Z.
ومع ذلك، تمزيقها البارافين التقليدية شاقة وتتطلب مهارة المشغل. مقاطع البارافين الخضوع للتثبيت والجفاف، والتضمين، وقطع والعائمة. نقل قسم شرائط من صاحب السكين إلى حمام الماء الأهم من ذلك ضرورية ولكنها صعبة لصغار المشغلين. لا سيما في الهواء الجاف، شرائط القسم سوف تطور بسبب الكهرباء الساكنة ويصعب أن تتكشف على سطح الماء الدافئ. يوصي بتحسين قسم الجودة، يبلل سطح الأنسجة المكشوفة بين مبضع بليد يمر، وتبريد كتل الشمع بغمر لهم في الماء المثلج، أو رفع درجة الرطوبة مع مرطب قرب مبضع6،7 . وتشمل أحدث أساليب لتحسين تمزيقها البارافين التضمين البارافين الهجين، كريوسيكتيونينج8، والقسم التجاري نقل نظام المساعدة9. على الرغم من أن هذه الأساليب تحسين جزئيا البارافين تمزيقها السرعة والجودة، أنها تجعل تمزيقها مرهقة أكثر بكثير، ونظم نقل القسم التجاري غالية الثمن.
في هذا البروتوكول، نحن لشرح كيفية إنشاء معدات بسيطة ورخيصة ومرنة خطوة خطوة، التي يمكن أن تكون مرتبطة إلى صاحب شفرة مبضع الدوارة. وتتألف هذه المعدات قناة قسم وحمام مائي وسخان مع تبديل الكشف عن درجة حرارة. بعد القطع، تتدفق إلى القناة قسم العشرات من الأقسام وأدخل حمام المياه مباشرة، وهكذا تتكشف تلقائياً. وهذا يحسن كفاءة البارافين تمزيقها ويجعل هذه التكنولوجيا أكثر ملاءمة. باستخدام هذا الأسلوب والكبار أكثر أقسام هيبوكامبال الماوس، وأقسام الكلي الماوس الكبار، (E15.5) عمرها يوما 15.5 الجنينية الماوس الدماغ المقاطع والعين الزرد الكبار المقاطع كانت تحصد في وقت أقل وبقيت سليمة أكثر شكلياً. يمكن أيضا استخدام هذا الأسلوب لعينات الأنسجة الأخرى التي تتطلب البارافين المعجل تمزيقها مع تجنب فقدان التمييز القسم.

<table><tbody><tr><td>Incubator</td><td>Boekel Scientific</td><td>133000-2</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol&amp;nbsp;</td><td>Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>Xylene&amp;nbsp;</td><td>Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid</td><td>1330-20-7</td><td></td></tr><tr><td>Paraplast</td><td>Leica</td><td>39601006</td><td></td></tr><tr><td>Heated Paraffin Embedding Module</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Commercial acrylic board</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trichloromethane</td><td>Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid</td><td>67-66-3</td><td></td></tr><tr><td>Tubular electric heating element(12 V 200 W)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Temperature controller(12 V 120 W)</td><td>Mingsuo</td><td>XH-W3002</td><td></td></tr><tr><td>Rotary microtome&amp;nbsp;</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Neutral silicone sealant</td><td></td><td></td><td>Link the water channel with the microtome knife holder</td></tr><tr><td>Voltage transformer</td><td>Dearll</td><td>S-250-12</td><td></td></tr><tr><td>Disposable blade</td><td>Accu-Edge</td><td>4689</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxylin</td><td>Baso Diagnostics Inc.</td><td>BA-4025</td><td></td></tr><tr><td>Eosin&amp;nbsp;</td><td>Baso Diagnostics Inc.</td><td>BA-4025</td><td></td></tr><tr><td>Microslide</td><td>Sail Brand</td><td>7105</td><td></td></tr><tr><td>Neutral balsam</td><td>Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid</td><td>10004160</td><td></td></tr><tr><td>Coverslip&amp;nbsp;</td><td>Citoglas</td><td>10212424C</td><td></td></tr><tr><td>Microscope</td><td>Carl Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hydrochloric acid</td><td>Xilong Chemical</td><td>7647-01-0</td><td></td></tr><tr><td>Water bath for paraffin sections</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HistoCore Arcadia C&amp;nbsp;- Cold Plate</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>paraffin repellent spray&amp;nbsp;</td><td>Thermo Scientific</td><td>9990420</td><td></td></tr></tbody></table>

the cutting and floating method for paraffin-embedded tissue for sectioning

تقطيع الأنسجة جزءا لا يتجزأ من البارافين يستخدم على نطاق واسع في علم الأنسجة وعلم الأمراض. ومع ذلك، أنها مملة. لتحسين هذا الأسلوب، وضعت العديد من الشركات التجارية أنظمة نقل قسم معقدة باستخدام الماء السائل. لتبسيط هذه التكنولوجيا، أنشأنا طريقة بسيطة باستخدام معدات محلية الصنع الذي يجمع بين قطع والعائمة داخل دائرة ترموستاتي بسيطة؛ ولذلك، أدخل المقاطع تلقائياً حمام الماء على سطح الماء. وقطعت الحصين من العقول الماوس الكبار والكليتين الماوس الكبار وادمغة الفأر الجنينية وعيون الزرد الكبار باستخدام البارافين التقليدية تمزيقها وطريقة عرضها للمقارنة. ويبين التحليل الإحصائي أن لدينا طريقة تحسين حفظ الوقت وإنتاج أعلى جودة المقاطع. وباﻹضافة إلى ذلك، البارافين تقطيع العينة كلها في فترة زمنية قصيرة من السهل لصغار المشغلين.

طريقة تحسين زيادة عدد المقاطع البارافين سليمة. نحن اختبار هذا الأسلوب الجديد في الأنسجة هيبوكامبال الماوس الكبار والكليتين الماوس الكبار وادمغة الفأر الجنينية وعيون الزرد. تم إضافة المياه إلى الخزان، وتمت المحافظة على درجة حرارة الماء بين 38.0 درجة مئوية إلى 40.0 ° C. بعد نح...

Watch this Scientific Journal Video about The Cutting and Floating Method for Paraffin-embedded Tissue for Sectioning at JoVE.com

The Cutting and Floating Method for Paraffin-embedded Tissue for Sectioning

بالقطع وأسلوب عائم للأنسجة جزءا لا يتجزأ من البارافين لتقطيع

نقدم هنا، وضع بروتوكول لتحسين البارافين تمزيقها. ويجمع هذا الأسلوب قطع والعائمة باستخدام دائرة ترموستاتي بسيطة لتجنب عملية التحويل المطلوبة بالطريقة التقليدية. نتيجة لذلك كانت إلى حد كبير تحسين الكفاءة وعدد المقاطع البارافين سليمة.

Sectioning of the paraffin-embedded tissue is widely used in histology and pathology. However, it is tedious. To improve this method, several commercial ...

the-cutting-floating-method-for-paraffin-embedded-tissue-for

Research

JoVE Journal

Neuroscience

18.2K Views.  Nanchang University. نقدم هنا، وضع بروتوكول لتحسين البارافين تمزيقها. ويجمع هذا الأسلوب قطع والعائمة باستخدام دائرة ترموستاتي بسيطة لتجنب عملية التحويل المطلوبة بالطريقة التقليدية. نتيجة لذلك كانت إلى حد كبير تحسين الكفاءة وعدد المقاطع البارافين سليمة.

Video: The Cutting and Floating Method for Paraffin-embedded Tissue for Sectioning

Thin Sectioning of Slice Preparations for Immunohistochemistry

Many investigations in neuroscience, as well as other disciplines, involve studying small, yet macroscopic pieces or sections of tissue that have been preserved, freshly removed, or excised but kept viable, as in slice preparations of brain tissue.  Subsequent microscopic studies of this material can be challenging, as the tissue samples may be difficult to handle.  Demonstrated here is a method for obtaining thin cryostat sections of tissue with a thickness that may range from 0.2-5.0 mm.  We routinely cut 400 micron thick Vibratome brain slices serially into 5-10 micron coronal cryostat sections.  The slices are typically first used for electrophysiology experiments and then require microscopic analysis of the cytoarchitecture of the region from which the recordings were observed.  We have constructed a simple device that allows controlled and reproducible preparation and positioning of the tissue slice.  This device consists of a cylinder 5 cm in length with a diameter of 1.2 cm, which serves as a freezing stage for the slice.  A ring snugly slides over the cylinder providing walls around the slice allowing the tissue to be immersed in freezing compound (e.g., OCT).  This is then quickly frozen with crushed dry ice and the resulting  wafer  can be position easily for cryostat sectioning.  Thin sections can be thaw-mounted onto coated slides to allow further studies to be performed, such as various staining methods, in situ hybridization, or immunohistochemistry, as demonstrated here.

The present method allows reproducible cryostat sectioning of small, difficult-to-manage, tissue pieces, such as biopsies and brain slices. We utilize a simple aluminum freezing stage to facilitate handling of tissue and a standard cryostat to routinely produce 5-10 micron serial sections from 400 micron thick brain slices.

Sectioning رقيقة من الاستعدادات لشريحة المناعية

Many investigations in neuroscience, as well as other disciplines, involve studying small, yet macroscopic pieces or sections of tissue that have been ...

Biology

Protocol for HER2 FISH Using a Non-cross-linking, Formalin-free Tissue Fixative to Combine Advantages of Cryo-preservation and Formalin Fixation

Morphologic assessment of formalin-fixed, paraffin-embedded (FFPE) tissue samples has been the gold standard for cancer diagnostics for decades due to its excellent preservation of morphology. Personalized medicine increasingly provides individually adapted and targeted therapies for characterized individual diseases enabled by combined morphological and molecular analytical technologies and diagnostics. Performance of morphologic and molecular assays from the same FFPE specimen is challenging because of the negative impact of formalin due to chemical modification and cross-linking of nucleic acids and proteins. A non-cross-linking, formalin-free tissue fixative has been recently developed to fulfil both requirements, i.e., to preserve morphology like FFPE and biomolecules like cryo-preservation. Since FISH is often required in combination with histopathology and molecular diagnostics, we tested the applicability of FISH protocols on tissues treated with this new fixative. We found that formalin post-fixation of histological sections of non-cross-linking, formalin-free and paraffin-embedded (NCFPE) breast cancer tissue generated equivalent results to those with FFPE tissue in human epidermal growth factor receptor 2 (HER2) FISH analysis. This protocol describes how a FISH assay originally developed and validated for FFPE tissue can be used for NCFPE tissues by a simple post-fixation step of histological sections.

Fluorescence in-situ hybridization (FISH) is often required in combination with histopathology and molecular diagnostics for selection of therapy in personalized medicine. A novel non-cross-linking, formalin-free tissue fixative that allows high quality morphologic, molecular and FISH analyses from the same specimen by addition of a post-fixation step before FISH is presented.

بروتوكول ل HER2 الأسماك باستخدام مثبت أنسجة-الربط بين الصليب وخالية من الفورمالين للجمع بين مزايا الحفاظ على البرد والتثبيت الفورمالين

Morphologic assessment of formalin-fixed, paraffin-embedded (FFPE) tissue samples has been the gold standard for cancer diagnostics for decades due to its ...

Cancer Research

Paraffin Embedding and Thin Sectioning of Microbial Colony Biofilms for Microscopic Analysis

Sectioning via paraffin embedding is a broadly established technique in eukaryotic systems. Here we provide a method for the fixation, embedding, and sectioning of intact microbial colony biofilms using perfused paraffin wax. To adapt this method for use on colony biofilms, we developed techniques for maintaining each sample on its growth substrate and laminating it with an agar overlayer, and added lysine to the fixative solution. These optimizations improve sample retention and preservation of micromorphological features. Samples prepared in this manner are amenable to thin sectioning and imaging by light, fluorescence, and transmission electron microscopy. We have applied this technique to colony biofilms of Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas synxantha, Bacillus subtilis, and Vibrio cholerae. The high level of detail visible in samples generated by this method, combined with reporter strain engineering or the use of specific dyes, can provide exciting insights into the physiology and development of microbial communities.

We describe fixation, paraffin embedding, and thin sectioning techniques for microbial colony biofilms. In prepared samples, biofilm substructure and reporter expression patterns can be visualized by microscopy.

تضمين البارافين وتمزيقها رقيقة من الأغشية الحيوية الميكروبية مستعمرة للتحليل المجهري

Sectioning via paraffin embedding is a broadly established technique in eukaryotic systems. Here we provide a method for the fixation, embedding, and ...

Immunology and Infection

Transplantation Into the Mouse Ovarian Fat Pad

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic transplantation of ovarian surface and tubal epithelia include intraperitoneal and intrabursal administration of cells. The respective limitations of these methods include poorly defined location of injected cells and limited space volume. Furthermore, they are poorly suited for long-term structural preservation of transplanted organs. To address these challenges, we have developed an alternative approach, which is based on the introduction of cells and tissue fragments into the mouse fat pad. The mouse ovarian fat pad is located in the immediate vicinity of the ovary and uterine tube (aka oviduct, fallopian tube), and provides a familiar microenvironment for cells and tissues of these organs. In our approach fluorescence-labeled mouse and human cells, and fragments of the uterine tube are engrafted by using minimally traumatic dorsal incision surgery. Transplanted cells and their outgrowths are easily located in the ovarian fat pad for over 40 days. Long-term transplantation of the entire uterine tube allows correct preservation of all principle tissue components, and does not result in adverse side effects, such as fibrosis and inflammation. Our approach should be uniquely applicable for answering important biological questions such as differentiation, regenerative and neoplastic potential of specific cell populations. Furthermore, it should be suitable for studies of microenvironmental factors in normal development and cancer.

We describe an ovarian fad pad transplantation assay suitable for studies of normal and transformed epithelia of the female reproductive tract. The mouse fat pad allows transplantation of large tissue fragments, is easily accessible for surgery and imaging, and provides the most favorable native environment for tissues of M&#252;llerian origin.

زرع في وسادة الفأرة المبيض الدهون

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic ...

Medicine

Establishment and Analysis of Tumor Slice Explants As a Prerequisite for Diagnostic Testing

Organotypic primary tissue explant cultures, which include precision-cut slices, represent the three-dimensional (3-D) tissue architecture as well as the multicellular interactions of native tissue. Tissue&#160;slices immediately cut from freshly resected tumors preserve spatial aspects of intratumor heterogeneity (ITH), thus making them useful surrogates of in vivo biology. Careful optimization of tissue slice preparation and cultivation conditions is fundamental for the predictive diagnostic potential of tumor slice explants. In this regard, murine models are valuable, as these provide a consistent flow of tumor material to perform replicate and reproducible experiments. This protocol describes the culturing of murine lung tumor-derived tissue slices using a rotating incubation unit, a system that enables intermittent exposure of tissues to oxygen and nutrients. Our previous work showed that the use of rotating incubation units improves the viability of tissue compared to other culture methods, particularly floating slices and stagnant filter supports. Here, we further show that slice thickness influences the viability of cultured slices, suggesting that optimization of slice thickness should be done for different tissue types. Pronounced ITH in relevant oncogenic functions, such as signaling activities, stromal cell infiltration or expression of differentiation markers, necessitates evaluation of adjacent tissue slices for the expression of markers altered by drug treatment or cultivation itself. In summary, this protocol describes the generation of murine lung tumor slices and their culture on a rotating incubation unit and demonstrates how slices should be systematically analyzed for the expression of heterogeneous tissue markers, as a prerequisite prior to drug response studies.

We provide a method for the generation, cultivation and systematic analysis of organotypic slices derived from murine lung tumors. We also describe how to optimize for slice thickness, and how to select drug concentrations to treat tumor slices.

إنشاء وتحليل لشريحة الورم Explants كشرط مسبق للاختبار التشخيصي

Organotypic primary tissue explant cultures, which include precision-cut slices, represent the three-dimensional (3-D) tissue architecture as well as the ...

Hybrid-Cut: An Improved Sectioning Method for Recalcitrant Plant Tissue Samples

Maintaining plant section integrity is essential for studying detailed anatomical structures at the cellular, tissue, or even organ level. However, some plant cells have rigid cell walls, tough fibers and crystals (calcium oxalate, silica, etc.), and high water content that often disrupt tissue integrity during plant tissue sectioning.
This study establishes a simple Hybrid-Cut tissue sectioning method. This protocol modifies a paraffin-based sectioning technique and improves the integrity of tissue sections from different plants. Plant tissues were embedded in paraffin before sectioning in a cryostat at -16 &#176;C. Sectioning under low temperature hardened the paraffin blocks, reduced tearing and scratching, and improved tissue integrity significantly. This protocol was successfully applied to calcium oxalate-rich Phalaenopsis orchid tissues as well as recalcitrant tissues such as reproductive organs and leaves of rice, maize, and wheat. In addition, the high quality of tissue sections from Hybrid-Cut could be used in combination with in situ hybridization (ISH) to provide spatial expression patterns of genes of interest. In conclusion, this protocol is particularly useful for recalcitrant plant tissue containing high crystal or silica content. Good quality tissue sections enable morphological and other biological studies.

This protocol describes a simple Hybrid-Cut tissue sectioning method that is useful for recalcitrant plant tissues. Good quality tissue sections enable anatomical studies and other biological studies including in situ hybridization (ISH).

الهجين قطع: طريقة محسنة باجتزاء لعينات الأنسجة النباتية المتمردة

Maintaining plant section integrity is essential for studying detailed anatomical structures at the cellular, tissue, or even organ level. However, some ...

Pancreatic Islet Embedding for Paraffin Sections

Experiments using isolated pancreatic islets are important for diabetes research, but islets are expensive and of limited abundance. Islets contain a mixed cell population in a structured architecture that impacts function, and human islets are widely variable in cell type composition. Current frequently used methods to study cultured islets include molecular studies performed on whole islets, lumping disparate islet cell types together, or microscopy or molecular studies on dispersed islet cells, disrupting islet architecture. For in vivo islet studies, paraffin-embedded pancreas sectioning is a powerful technique to assess cell-specific outcomes in the native pancreatic environment. Studying post-culture islets by paraffin sectioning would offer several advantages: detection of multiple outcomes on the same islets (potentially even the exact-same islets, using serial sections), cell-type-specific measurements, and maintaining native islet cell-cell and cell-substratum interactions both during experimental exposure and for analysis. However, existing techniques for embedding isolated islets post-culture are inefficient, time consuming, prone to loss of material, and generally produce sections with inadequate islet numbers to be useful for quantifying outcomes. Clinical pathology laboratory cell block preparation facilities are inaccessible and impractical for basic research laboratories. We have developed an improved, simplified bench-top method that generates sections with robust yield and distribution of islets. Fixed islets are resuspended in warm histological agarose gel and pipetted into a flat disc on a standard glass slide, such that the islets are distributed in a plane. After standard dehydration and embedding, multiple (10+) 4 - 5 &#181;m sections can be cut from the same islet block. Using this method, histological&#160;and immunofluorescent analyses can be performed on mouse, rat, and human islets. This is an effective, inexpensive, time-saving approach to assess cell-type-specific, intact-architecture outcomes from cultured islets.

Ex vivo pancreatic islet studies are important for diabetes research. Existing techniques to study cultured islets in their native 3-dimensional architecture are time consuming, inefficient, and infrequently used. This work describes a new, simple, and efficient method for generating high-quality paraffin sections of whole cultured islets.

جزيرة البنكرياس التضمين لمقاطع البارافين

Experiments using isolated pancreatic islets are important for diabetes research, but islets are expensive and of limited abundance. Islets contain a ...

Optimized Thin Endometrium Mouse Model with Low Mortality and Minimal Adhesions

Establishing a Mouse Model of Thin Endometrium

Thin endometrium (TE) has been widely recognized as a critical cause of infertility. However, the pathogenesis of TE remains unclear, and satisfactory treatment options are still urgently needed. Several animal models of TE have been developed, but the mouse model involving abdominal surgery and injection of 95% ethanol presents a formidable challenge due to the high mortality rate and risk of intrauterine adhesions if not performed correctly. Here, we describe a detailed protocol that produces reliable and reproducible TE with a very low mortality rate and minimal intrauterine adhesions by injecting 95% ethanol into the mouse uterus with varying infusion times. The results showed that all of the mice successfully developed TE with infusion times ranging from 1-3 min, characterized by a typical reduction in endometrial thickness and the number of glands, as well as excessive endometrial fibrosis. These findings suggest that this mouse model is suitable for studying thin endometrium and can serve as a platform for developing future TE treatments.

This article describes a detailed protocol for producing a reliable and reproducible thin endometrium with a very low mortality rate and minimal intrauterine adhesions by injecting 95% ethanol into the mouse uterus within 1-3 min.

Thin endometrium (TE) has been widely recognized as a critical cause of infertility. However, the pathogenesis of TE remains unclear, and satisfactory ...

<meta charset="utf8"></head><body>تقييم الأوعية الدموية الدقيقة الرئوية باستخدام تلطيخ إيسولكتين B4 في الفئران

Quantifying Pulmonary Microvascular Density in Mice Across Lobules

The abnormal alternation of pulmonary angiogenesis is related to lung microvascular dysfunction and is deeply linked to vascular wall integrity, blood flow regulation, and gas exchange. In murine models, lung lobes exhibit significant differences in size, shape, location, and vascularization, yet existing methods lack consideration for these variations when quantifying microvascular density. This limitation hinders the comprehensive study of lung microvascular dysfunction and the potential remodeling of microvasculature circulation across different lobules. Our protocol addresses this gap by employing two sectioning methods to quantify pulmonary microvascular density changes, leveraging the size, shape, and distribution of airway branches across distinct lobes in mice. We then utilize Isolectin B4 (IB4) staining to label lung microvascular endothelial cells on different slices, followed by unbiased microvascular density analysis using the freely available software ImageJ. The results presented here highlight varying degrees of microvascular density changes across lung lobules with aging, comparing young and old mice. This protocol offers a straightforward and cost-effective approach for unbiased quantification of pulmonary microvascular density, facilitating research on both physiological and pathological aspects of lung microvasculature.

<meta charset="utf8"></head><body>كاشف الكاتب: التقدم في قياس كثافة الأوعية الدموية الدقيقة في رئتي الفئران المتقدمة في السن

Here, we describe a simple and economical protocol to perform unbiased quantification of pulmonary microvascular density for whole mice lung tissue using single staining of Isolectin B4.

قياس كثافة الأوعية الدموية الدقيقة الرئوية في الفئران عبر الفصيصات

The abnormal alternation of pulmonary angiogenesis is related to lung microvascular dysfunction and is deeply linked to vascular wall integrity, blood ...

بالقطع وأسلوب عائم للأنسجة جزءا لا يتجزأ من البارافين لتقطيع

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

Sectioning رقيقة من الاستعدادات لشريحة المناعية

بروتوكول ل HER2 الأسماك باستخدام مثبت أنسجة-الربط بين الصليب وخالية من الفورمالين للجمع بين مزايا الحفاظ على البرد والتثبيت الفورمالين

تضمين البارافين وتمزيقها رقيقة من الأغشية الحيوية الميكروبية مستعمرة للتحليل المجهري

زرع في وسادة الفأرة المبيض الدهون

إنشاء وتحليل لشريحة الورم Explants كشرط مسبق للاختبار التشخيصي

الهجين قطع: طريقة محسنة باجتزاء لعينات الأنسجة النباتية المتمردة

جزيرة البنكرياس التضمين لمقاطع البارافين

Establishing a Mouse Model of Thin Endometrium

قياس كثافة الأوعية الدموية الدقيقة الرئوية في الفئران عبر الفصيصات

قياس كثافة الأوعية الدموية الدقيقة الرئوية في الفئران عبر الفصيصات