جمع الحيوانات المنوية فرق الجودة باستخدام الكثافة المتدرجة الطرد المركزي

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال فسيولوجيا الحيوانات المنوية، مثل محددات المواد الكيميائية لجودة الحيوانات المنوية. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي قدرتها على فصل كميات كبيرة من العينة حسب الجودة ، وكذلك القدرة على التكيف عند مقارنتها بالطرق البديلة. على الرغم من أن هذه الطريقة يمكن أن توفر نظرة ثاقبة في الاختلافات في نوعية الحيوانات المنوية، فإنه يمكن أيضا أن تطبق على عينات أخرى مثل أنواع الخلايا المختلطة أو المكونات دون الخلية مع كثافات مختلفة.

للبدء، وجعل اثنين من 3 ملليلتر بيركوليتر dilutions في أنبوبين منفصلين. في أنبوب اختبار نظيف ، تمييع 1 ملليلتر من عينة السائل المنوي مع 2 ملليلتر من PBS. الأنابيب بلطف لخلط الحل.

إضافة 3 ملليلتر من انخفاض كثافة Percoll sollution إلى أنبوب مخروطي معقم. ثم، دقيق ماصة 3 ملليلتر من حل Percoll الكثافة أعلى تحت أقل كثافة حل Percoll. في حين إمالة أنبوب مخروطي في زاوية 45 درجة، ماص 3 ملليلتر من عينة من السائل المنوي المخفف على رأس التدرج كثافة Percoll.

بعد إعداد أنبوب فارغ، الطرد المركزي كلا الأنابيب في 1500 Gs لمدة 20 دقيقة. ضمان أن ثلاث طبقات متميزة من السائل المنوي قد شكلت في الحوض بعد الطرد المركزي. باستخدام ماصة جمع الطبقات الثلاث من السائل المنوي، بدءا من الطبقة العليا، تليها الطبقة الوسطى، وتنتهي مع بيليه الثابت في الجزء السفلي من الأنبوب.

نقل كل من الطبقات إلى أنبوب جهاز طرد مركزي صغير معقمة. تخفيف كل عينة من عينات السائل المنوي مع 1.5 ملليلتر من برنامج تلفزيوني والطرد المركزي العينات في 1500 Gs لمدة عشر دقائق. وأخيرا، صب قبالة فائقة وإعادة تشكيل الكريات مع العازلة حركية.

في هذا البروتوكول، تم استخدام تقنية الطارد المركزي للتدرج في كثافة Percoll، أو PDGC، لفصل عينة السائل المنوي إلى ثلاث طبقات متميزة. يتم فصل الحيوانات المنوية إلى طبقة عالية الجودة تحت محلول الكثافة الأعلى، وطبقة متوسطة الجودة بين حلول الكثافة الأعلى وأدنى، وطبقة منخفضة الجودة أعلى من محلول الكثافة المنخفض. ويتضح من هذه الاختلافات في نوعية الحيوانات المنوية من الاختلافات في القدرة على البقاء، والتنقل، وpenetrability.

أثناء محاولة هذا الإجراء، من المهم أن نتذكر أن العينات تحتاج إلى إحضارها إلى درجة حرارة الغرفة. يعتمد نجاح PDGC على إعداد دقيق للتدرج وكذلك جمع دقيق للطبقات المعزولة. بعد تطورها، مهدت هذه التقنية الطريق لأبحاثنا في مجال الحيوانات المنوية لاستكشاف العلامات الحيوية للخصوبة في أنواع الطيور.