الاستراتيجيات الحالية لفحص البول دواء مكلفة لأداء للتحليل الروتيني من لوحات متزايدة كبيرة من المخدرات من تعاطي كما هو مطلوب لاختبار مكان العمل، فضلا عن تطبيقات مراقبة المخدرات العلاجية. بالإضافة إلى ذلك، فإن الأساليب القائمة على المقايسات الأمينية عرضة للتحيز وتقتصر في نهاية المطاف على التحليل المستهدف لألواح الأدوية المعروفة. الميزة الرئيسية لطريقتنا، والتي يشار إليها MSI-CE-MS-MS، هو أنه يسمح للفحص السريع من لوحة المخدرات غير محدود والايض بهم مع دقة عالية والحد الأدنى من workup عينة.
وهناك حاجة ملحة إلى طريقة فرز عالية الإنتاجية وبأسعار معقولة لتحسين نتائج المرضى من خلال تأكيد الالتزام بأنظمة جرعات المخدرات وتعظيمها، مع الكشف عن الاستخدام غير المشروع للمخدرات. ويمكن تطبيق منصة الفصل المتعددة هذه على مجموعة متنوعة من مجالات البحث الأخرى المتصلة بتحديد سمات المستقلبات المستهدفة أو غير المستهدفة في العينات البيولوجية المعقدة. تبدأ عن طريق ذوبان عينات البول الصباحية التي تم جمعها من المرضى الذين يعانون من تاريخ معروف من الأدوية الموصوفة طبيًا للتخزين ناقص 80 درجة مئوية على الجليد ودوامة العينات المذابة لمدة 30 ثانية.
بعد ذلك ، رواسب العينات عن طريق الطرد المركزي والجمع بين ثلاثة 10 ميكرولتر aliquots من كل عينة مع 10 ميكرولترات من المعايير الداخلية deuterated ، وخمسة ميكرولترات من 4 - فلورو - L - فينيل ألانين و 3 - chloro - L - التيروزين الحل و 25 ميكرولتر من المياه ديونيد. ثم الطرد المركزي الخلائط لمدة دقيقة واحدة ونقل 20 ميكرولترات من كل عينة إلى قارورة البولي بروبلين الفردية. لضبط المعلمات غير المغطى بالسيليكا الشعرية تكييف، وقطع 135 سنتيمترا طويلة، 50 ميكرومتر القطر الداخلي، و360 ميكرومتر خارجي قطرها من الشعيرات الدموية.
استخدام صانع نافذة شعري لإزالة حوالي 7 ملليمتر من طلاء البولي أميد من طرفي كل شعري. بعد ذلك ، قم بتثبيت مداخل الشعيرات الدموية في الكهرباء الشعرية ، أو خرطوشة CE ، عن طريق حلق كل شعرية لاثنين من المنعطفات 360 درجة ، مع الحرص على بروز حوالي ملليمترين من منافذ الشعيرات الدموية من إبرة بخاخ CE. عندما تم تثبيت جميع الشعيرات الدموية، قم بتحميل خرطوشة CE بعناية في نظام CE وتخزين بخاخ CE من مصدر الأيونات.
ضع الكروماتوغرافيا السائلة، أو بخاخ LC، في مصدر الأيونات وحدد تدفق في برنامج النظام لإعداد تكييف الشعيرات الدموية. تعيين مدة الميثانول، واحد هيدروكسيد الصوديوم الضرس، والمياه الأيونية، وخلفية تدفق المنحل بالكهرباء إلى 30 دقيقة لكل تدفق ووضع مضخة متساويوقراطية على أهبة الاستعداد خلال فترة تكييف الشعيرات الدموية. بعد تدفق الماضي، وتنظيف مطياف الكتلة الشعيرات الدموية، أو CE-MS بخاخ، وCE القطب مع الميثانول مناديل غارقة.
قم بتنظيف واجهة CE-MS مع محلول ماء واحد إلى واحد من الإيزوبروبانول لإزالة أي رواسب الملح المتبقية. استبدل بخاخ LC بخاخ CE-MS الذي تم تنظيفه وشعرية شعرية مكيفة حديثًا في واجهة سائلة العاصفة المحورية. ثم تشغيل مضخة متساوي الراسمي وتطبيق الجهد من 30 كيلوفولت لمدة 15 دقيقة لضمان أن يتم تحقيق مستقر CE الحالي قبل تحليل البول.
في برنامج النظام، حدد preconditioning، تعيين تدفق إلى 600 ثانية، وتحديد موقف ملف المنحل بالكهرباء الخلفية. تعيين الحقن لحقن هيدرودينامية العينات في 100 ملليبار لمدة خمس ثوان وحقن كهربائيا الفواصل الكهربائية الخلفية في 30 كيلوفولت لمدة 75 ثانية. تعيين الجهد تطبيقها إلى 30 كيلوفولت، ودرجة حرارة خرطوشة إلى 25 درجة مئوية، والوقت تشغيل الإجمالي إلى 40 دقيقة.
ثم، باستخدام الجدول الزمني، وتطبيق التدرج الضغط من اثنين millibars في الدقيقة من صفر إلى 40 دقيقة أثناء الفصل. عندما اكتمال عملية الحصول على العينة، شطف الشعيرات الدموية في 50 ملليبار من الضغط مع الشوارد الخلفية بين عشية وضحاها بينما يكون في رذاذ الشعيرات الدموية في مصدر أيون. تعيين الكشف عن الأيونات الموجب TOF-MS إلى امتداد نسبة كتلة إلى الشحن من 50 إلى 1، 700، مع معدل الحصول على البيانات من 500 ميلي ثانية لكل طيف، وتأكد من أن يتم تخزين كل من ملف التعريف والبيانات المركزية في تنسيق الملف D.
تعيين ظروف التأين الكهربائي إلى الشعيرات الدموية والفولتية فوهة من 2000 فولت لكل من، وغاز البخاخات إلى 10 جنيه لكل بوصة مربعة، وتسليم الغاز تجفيف إلى ثمانية لترات في الدقيقة الواحدة في 300 درجة مئوية مع تدفق الغاز غظيم من 3.5 لتر في الدقيقة الواحدة في 195 درجة مئوية أثناء الاستحواذ. ثم تعيين إعدادات الجهد MS من تجزئة، مقشطة، وأوكتابول تردد لاسلكي واحد إلى 120، 65، و 750 فولت، على التوالي، وتعيين التحكم في الصك والبيانات المعلمات اكتساب وفقا لتصميم التجربة. لتحليل البيانات، افتح بيانات CE-MS متعددة الأجزاء في برنامج النظام.
تحت الكروماتوجرامات، تعيين بيانات الاستخراج وأشكال البيانات الكروماتوغرام والبيانات الطيفية كتلة لوضع الملف الشخصي. تحت النعومة، حدد مكعبات الترايتي سافيتزكي-اْلْي، و اضبط عرض الدالة على 15 نقطة. ثم انقر فوق دمج MS وتعيين التكامل إلى agile.
تحت مرشحات الذروة، تعيين الحد الأقصى لعدد القمم إلى 11. تحت عرض، انقر فوق قائمة الذروة التكامل وحدد رقم الذروة، وقت الاحتفاظ، ذروة المنطقة، ذروة الارتفاع، ونسبة الإشارة إلى الضوضاء. ثم احفظ المعلمات تحت اسم أسلوب فريد وتطبيق الأسلوب على عملية تفسير كل مجموعة بيانات.
وفي هذا التحليل التمثيلي لمختلف العقاقير الأيزوميرية من تعاطيها واستقلاباتها، تم الكشف عن 30 ذروة محلولة من 10 عينات مستقلة من خليط المخدرات دون ترحيل العينات. ويمكن حل اثنين آخرين من شبائه الأفيون التساوية تماما كـ 20 ذروة متميزة مع الحصول على بيانات التفحص الكامل. وبالمثل، تم حل كامل اثنين من الأيزومرات الأمفيتامينية في هذا التحليل متعدد الأجزاء CE-MS، للتمييز بين تعاطي الميثامفيتامين غير المشروع من إساءة الاستخدام المحتملة للفيننترمين، وهو منبه يوصف يستخدم كوسيلة لإخماد الشهية لفقدان الوزن.
وفي هذا التحليل التمثيلي لفحص المخدرات، استُنتجت نتيجة فحص إيجابي للميثادون من خلال الكشف عن ذروة إشارة كبيرة تُهَلَّم مع ذروة الميثادون-د 3 مع وجود خطأ في الكتلة المنخفضة. لم يتم الكشف عن أي إشارات أخرى في أي عينات بول أخرى داخل نفس المدى وتجاوز تركيز الميثادون المكتشف 13 ضعف الحد الموصى به مقارنة بنسبة استجابة أيونات قياسها في العينة وتصحيحها بواسطة عامل تخفيف البول أربعة أضعاف ، مما يؤكد التزام المرضى بالعلاج الصيانة الميثادون. هنا، تم تحليل تكوين حقن تسلسلي في متعدد الجزء CE-MS، التي تتألف من خمسة calibrants المخدرات المختلفة، في مكررة داخل تشغيل واحد جنبا إلى جنب مع البول الاصطناعية فارغة.
تم الكشف عن المستقلبات المخدرات كما أيونات جزيئية potenated فوق حدود فحصها قطع. بعد هذا الإجراء، يمكن أيضا أن يتم تحليل عدد كبير من المستقلبات القطبية والأيونية في البول من قبل MSI CMS لدعم البحوث الأيضية القائمة على اكتشاف. وبالإضافة إلى ذلك، يمكن تحقيق مراقبة شاملة لمجموعة واسعة من العقاقير الخارجية المنشأ واستقلاباتها، بما في ذلك الأدوية غير الموصوفة والعقاقير غير المشروعة المعرضة لتعاطيها.
ويمكن أيضا أن تستخدم هذه الطريقة الأمثل لفحص روتينية غيرها من المخدرات تعاطي. يمكن أن تكون هذه اصطناع القنب أو الكحول ويمكن أيضا أن نفرق بين مصفوفة البول الاصطناعية أو وهمية وعينة البول الطبيعية، حقيقية، تبرعت أصيلة كذلك. تذكر أن الحذر دائماً عند العمل مع السوائل البيولوجية.
