소변 약물 검진을위한 현재 전략은 작업 장소 테스트뿐만 아니라 치료 약물 모니터링 응용 프로그램에 필요한 남용약물의 점점 더 큰 패널의 일상적인 분석을 위해 수행하는 비용이 많이 듭니다. 또한, 아미노 분석법을 기반으로 하는 방법은 편견에 취약하 고 궁극적으로 알려진 된 약물 패널의 대상 분석에 국한. MSI-CE-MS라고 하는 당사 방법의 주요 장점은, 높은 정확도와 최소한의 견본 작동으로 무제한 약 패널 및 그들의 대사 산물의 급속한 검열을 허용한다는 것입니다.
불법 약물 사용을 공개하면서 준수를 확인하고 약물 투여 제도를 최적화하여 환자 결과를 개선하기 위한 고처리량 및 저렴한 선별 방법에 대한 긴급한 필요성이 있습니다. 이 멀티플렉스 분리 플랫폼은 복잡한 생물학적 샘플에서 표적 또는 비표적 대사산물 프로파일링과 관련된 다양한 다른 연구 영역에 적용될 수 있다. 먼저 알려진 처방약 내역을 가진 환자로부터 수집된 식별되지 않은 아침 소변 샘플을 얼음에 뺀 80도 저장하고 해동 된 샘플을 30 초 동안 소용돌이로 유도합니다.
다음으로, 원심분리에 의한 샘플을 퇴적시키고 각 시료의 10마이크로리터 알리쿼트 3개, 중수소 내표준 10개, 4-플루오로-L-페닐라닌 5개 마이크로리터, 3-클로로-L-티로신 용액 5개, 디온화수 25마이크로리터를 결합한다. 그런 다음 혼합물을 1분 동안 원심분리하고 각 샘플의 20 마이크로리터를 개별 폴리프로필렌 바이알로 옮킨다. 코팅되지 않은 융합 실리카 모세관 컨디셔닝 파라미터를 설정하려면 길이 135cm, 내경 50마이크로미터, 스풀에서 360 마이크로미터 외경 모세관을 잘라냅니다.
모세관 창 제조 업체를 사용하여 각 모세관의 양쪽 끝에서 약 7 밀리미터의 폴리아미드 코팅을 제거하십시오. 다음으로, 모세관 입구를 모세혈관 전기포고, 또는 CE 카트리지에 설치하여, 각 모세혈관을 2360도 회전에 대해 반복하여 CE 분무기 바늘에서 모세혈관 콘센트의 약 2밀리미터를 돌출하는 데 주의를 기울인다. 모든 모세혈관이 설치되면 CE 카트리지를 CE 시스템에 조심스럽게 로드하고 CE 분무기를 이온 소스에서 저장합니다.
액체 크로마토그래피(LC 분무기)를 이온 소스에 넣고 시스템의 소프트웨어에서 플러시를 선택하여 모세관 컨디셔닝을 설정합니다. 메탄올의 지속 시간을 설정, 1 개의 어금니 나트륨 수산화, 탈이온 된 물, 및 배경 전해질 플러시 당 30 분으로 플러시 하 고 모세관 컨디셔닝 기간 동안 대기에 등대 펌프를 배치. 마지막 플러시 후, 모세관 전기 포충제 질량 분광계 또는 CE-MS 분무기를 청소하고, 메탄올에 젖은 물티슈로 CE 전극을 청소한다.
CE-MS 인터페이스를 1 대 1 의 isopropanol 물 용액으로 청소하여 잔류 염 침전물을 제거합니다. LC 분무기를 세척된 CE-MS 분무기와 새로 조절된 모세관을 동축 칼집 액체 인터페이스로 대체합니다. 그런 다음 동위 상각 펌프를 켜고 소변 분석 전에 안정적인 CE 전류 프로파일이 달성되도록 15 분 동안 30 킬로볼트의 전압을 적용합니다.
시스템 소프트웨어에서 사전 컨디셔닝을 선택하고 플러시를 600초로 설정하고 백그라운드 전해질 파일 위치를 지정합니다. 5초 동안 100밀리바에서 시료를 유체역학적으로 주입하고 75초 동안 30킬로볼트에 배경 전해질 스페이서를 전기적으로 주입하도록 주입하도록 주입한다. 적용된 전압을 30킬로볼트로 설정하고 카트리지 온도를 섭씨 25도로 설정하고 총 실행 시간을 40분으로 설정합니다.
그런 다음 시간표를 사용하여 분당 2 밀리바의 압력 그라데이션을 분리 하는 동안 0~40분으로 적용합니다. 샘플 수집이 완료되면 모세관이 이온 소스의 CE 분무기에 있는 동안 밤새 백그라운드 전해질로 50 밀리바의 압력으로 모세관을 헹구는다. TOF-MS 양성 이온 검출을 스펙트럼당 500밀리초의 데이터 수집 률로 50~1, 700의 대량 충전 비율에 걸쳐 TOF-MS 양성 이온 검출을 설정하고 프로파일과 센트로이드 데이터가 모두 D 파일 형식으로 저장되어 있는지 확인합니다.
전자분무 이온화 조건을 모세관과 각각 2,000볼트의 노즐 전압, 분무기 가스를 평방 인치당 10파운드로 설정하고, 건조 가스는 300°C.에서 분당 3.5리터의 시스 가스 흐름을 195도에서 분당 3.5리터로 전달합니다. 그런 다음 조각가, 스키머 및 옥타폴 하나의 무선 주파수의 MS 전압 설정을 각각 120, 65 및 750 볼트로 설정하고 실험 의 설계에 따라 계측기 제어 및 데이터 수집 파라미터를 설정합니다. 데이터 분석을 위해 시스템 소프트웨어에서 다중 세그먼트 CE-MS 데이터를 엽니다.
크로마토그램 아래에 추출 데이터와 크로마토그램 및 질량 스펙트럼 데이터 형식을 프로파일 모드로 설정합니다. 스무딩하에서 이차 적인 입방 사비츠키 골레이를 선택하고 기능 폭을 15점으로 설정합니다. 그런 다음 통합 MS를 클릭하고 통합기를 민첩하게 설정합니다.
피크 필터에서 최대 피크 수를 11개로 설정합니다. 뷰에서 통합 피크 목록을 클릭하고 피크 번호, 보존 시간, 피크 영역, 피크 높이 및 신호 대 잡음 비율을 선택합니다. 그런 다음 고유한 메서드 이름으로 매개 변수를 저장하고 각 데이터 집합의 해석을 위해 메서드를 프로세스에 적용합니다.
이러한 대표적인 분석에서 남용및 대사산물의 다양한 등방성 이소성 약물의 대표적인 분석에서, 30개의 해결된 피크10개의 독립적인 샘플에서 약물 혼합물의 이월 없이 검출되었다. 두 개의 다른 등소 오피오이드는 전체 스캔 데이터 수집과 20 개의 뚜렷한 피크로 완전히 해결 될 수 있습니다. 유사 하 게, 두 암페타민 위치 이소머 완전히이 다부문 CE-MS 분석에서 해결 되었다, phentermine의 잠재적인 오용에서 불법 메 담 페타민 남용을 구별 하기 위해, 체중 감량에 대 한 식욕 억제제로 사용 되는 처방 된 자극 제.
본 대표적인 약물 스크리닝 분석에서 메타돈의 양성 선별 검사 결과는 질량 오차가 낮은 메타돈의 d3 피크와 함께 공동 마이그레이션하는 대형 신호 피크의 검출에 의해 추론되었다. 다른 신호는 동일한 실행 내의 다른 소변 샘플에서 검출되지 않았으며 검출된 메타단 농도는 샘플에서 측정된 이온 반응 비율에 비해 권장 컷오프 한계의 13배를 초과하고 4배 소변 희석 인자에 의해 보정되어 환자가 메타단 유지 보수 요법에 대한 준수를 확인하였다. 여기서, 5개의 상이한 약물 교정물로 구성된 다중 세그먼트 CE-MS의 직렬 사출 구성은 합성 소변 공백과 함께 단일 실행 내에서 중복으로 분석되었다.
약물 대사 산물그들의 검열 차단 한계 위에 그들의 potenated 분자 이온으로 검출 되었다. 이 절차에 따라, 소변에 있는 극성 및 이온 대사 산물의 다수는 또한 발견 기지를 둔 신진 대사 연구를 지원하기 위해 MSI CMS에 의해 분석될 수 있습니다. 또한, 다양 한 다양 한 외인 성 약물과 그들의 대사 산물의 포괄적인 감시를 달성 할 수 있습니다., 비 처방 약물 및 남용 하기 쉬운 불법 약물을 포함 하 여.
이 최적화 된 방법은 정기적으로 학대의 다른 약물을 선별하는 데 사용할 수 있습니다. 이들은 대마초 또는 알코올 대사 산물일 수 있으며 우리의 방법은 합성 또는 가짜 소변 매트릭스와 자연, 실제, 진정으로 기증 된 소변 샘플을 구별 할 수 있습니다. 생물학적 유체로 작업할 때 항상 주의를 기울여야 합니다.
