eVOLVER يعطي الباحثين الحرية التجريبية، والقدرة على تحديد تجاربهم نمو الثقافة الخاصة بهم مع ردود الفعل الآلي على معلمات متعددة وتوسيع نطاقها إلى أي حجم يحتاجون إليه. eVOLVER أكثر مرونة من الأجهزة الأخرى. يمكن للمستخدمين بسهولة تخصيص البرمجيات في بيثون وكذلك الأجهزة ، عن طريق تعديل الأكمام الذكية التي تحمل أجهزة الاستشعار لكل ثقافة.
يمكن أن يبدو النظام معقدًا للوهلة الأولى مع العديد من المكونات والاتصالات. يعطي الدليل المرئي للمستخدمين لأول مرة المزيد من الثقة في إجراء التجارب بمفردهم. الإعداد المناسب أمر بالغ الأهمية.
تأكد من فهم ما يفعله كل مكون. حتى تتمكن من تأكيد أنها تعمل. تأكد من توجيه كل شيء بشكل صحيح وتوصيله بإحكام.
في حين أن مصممة لمعالجة البكتيريا والخميرة الهوائية في ظروف مختلفة، يمكن أيضا أن يتم تعديل eVOLVER للتخمير اللاهوائي أو للحفاظ على خلايا الثدييات في التعليق. هذا الفيديو سوف يوضح كيفية إعداد و تهيئة وتشغيل تجربة ثقافة مستمرة عالية الإنتاجية باستخدام النظام الأساسي eVOLVER. في اليوم السابق للتجربة، إعداد وسائل الإعلام، وقنينات، وتلقين وفقا للمخطوطة.
في ثلاثة قاروب كبيرة، وإعداد اثنين من القارض 10٪، وقار واحد من 70٪ الإيثانول. باستخدام مفاتيح على جهاز eVOLVER، تشغيل إمدادات الطاقة فولت خمسة على eVOLVER، والانتظار لمدة خمس ثوان، ثم بدوره على امدادات الطاقة 12 فولت. إذا كان يتم تشغيل قوارير متعددة من زجاجة الوسائط نفسها، قم بتوصيل خطوط إدخال وسائط متعددة مع تقسيمات الأنابيب.
يمكن إنشاء مقسمات أنابيب مخصصة مع مكونات أقل. غمر خطوط مدخلات وسائل الإعلام في أول منبر التبييض وخطوط eflux وسائل الإعلام في التبييض الثاني. قم بتوصيل نهاية اتجاه مجرى النهر لخطوط إدخال الوسائط بقارق الثاني مع خطوط eflux.
ضع خطوط النفايات في كاربوي النفايات. إضافة لتر واحد إلى اثنين من التبييض في carboy النفايات لتعقيم النفايات المتولدة خلال التجربة. باستخدام شاشة اللمس على eVOLVER، انتقل إلى قسم الإعداد وتشغيل جميع المضخات لمدة 20 ثانية لملء خطوط السوائل مع 10٪ التبييض.
السماح للتبييض للجلوس في الخطوط لمدة 30 دقيقة على الأقل لتعقيم. تشغيل المضخات مرة أخرى باستخدام شاشة اللمس حتى لم تعد مغمورة الخطوط، ودفع الهواء من خلال خطوط للحصول على أكبر قدر ممكن من التبييض. ضع خطوط إدخال الوسائط في منبر الإيثانول، واملأ الخطوط بالإيثانول، واغسلها بالهواء.
ثم، إرفاق وسائل الاعلام خطوط المدخلات إلى زجاجات وسائل الإعلام مع وصلات أقل وتشغيل المضخات حتى وسائل الاعلام يعمل بشكل كامل من خلال خطوط طرد أي الإيثانول المتبقية. جزئيا إدراج قوارير معقمة في الأكمام الذكية eVOLVER وربط خطوط المدخلات إلى قش التدفق القصير وخطوط النفايات إلى القش طويل eflux وفقا لترميز اللون. اضبط على شاشة اللمس eVOLVER لتشغيل جميع المضخات بزيادات 10 ثانية لملء القنينات بالوسائط.
تأكد من خلال الفحص البصري، تقوم مضخات eflux بإزالة الوسائط بكفاءة من خلال قش الإللوكس لمنع الفيض. ثم، ادفع قنينات لأسفل حتى تكون مغطاة بالكامل بالأكمام الذكية. على صفحة الإعداد التفاعلية لشاشة اللمس eVOLVER، اسحب إصبعًا عبر شاشة اللمس أو اضغط على الزر تحديد الكل لتحديد جميع القنينات وتعيين الظروف الأولية لدرجة الحرارة عند 30 درجة مئوية والتحريك إلى 10.
على جهاز كمبيوتر، حدد جهاز eVOLVER الذي سيتم تشغيل التجربة عليه. تأكد من تحديد إعدادات المعايرة المطلوبة. افتح لوحة معلومات eVOLVER وانتقل إلى صفحة إدارة التجارب.
حدد التجربة الأساسية في لوحة "مستكشف التجربة" أو تجربة موجودة كنقطة بداية وانقر فوق Clone . انتقل إلى صفحة محرر التجربة. استخدم لوحة فيال Selector و Parameter Definition لضبط درجة الحرارة إلى 30 درجة مئوية وتعيين عتبة أعلى وأسفل من OD لكل قارورة وفقًا للتصميم التجريبي.
حفظ التجربة بالنقر فوق حفظ. ثم انقر فوق السهم للعودة إلى صفحة إدارة التجارب ثم انقر فوق الزر تشغيل لتشغيل. بمجرد أن تكون التجربة قيد التنفيذ، انتقل إلى لوحة بيانات الوقت الفعلي في لوحة المعلومات التفاعلية.
لكل قارورة، تحقق من أن قيم OD يتم الاحتفاظ عند الصفر. تصفح من خلال الرسوم البيانية درجة الحرارة للتأكد من أن درجات الحرارة في أو تتقدم نحو 30 درجة مئوية. لإعداد inoculum، أولا قياس OD من الثقافات بين عشية وضحاها وحساب التخفيف الكامل المطلوب للثقافات بين عشية وضحاها على افتراض حجم قارورة 25 ملليلتر و OD البداية المطلوبة من حوالي 0.05.
من خلال ميناء أخذ العينات، ماصة الحجم المحسوب من inoculum أو خليط من inocula. تحقق من الرسوم البيانية على لوحة القيادة لمعرفة أن زيادة OD إلى 0.05. ويمكن رصد نمو الخلايا وظروف القارورة في الوقت الحقيقي مع استمرار التجربة، مما يسمح للباحث بالتدخل في حالة حدوث أي مشاكل.
eVOLVER هو منصة ثقافة مستمرة آلية تسمح بالسيطرة على ظروف الثقافة. وقد تم عرض الفروق النوعية بين الأنواع البرية، ودرجة الحرارة الحساسة، والمجموعات الحساسة للملح عندما تم رسم نسب السجل ضد الأجيال المستنِدة من بيانات معدل نمو eVOLVER. يشير اللون إلى درجة حرارة الاختيار، بينما تميز الشرطات تركيزات الملح.
المنحدر يصلح من خلال الجزء الخطي من كل قطعة باستخدام الحد الأدنى من ثلاث نقاط، تسفر عن قيمة اللياقة البدنية الكمية التي تصف كيف تتنافس سلالة البديل ضد سلالة مرجعية. تشير قيم اللياقة البدنية السلبية إلى أن السلالة البديلة هي خارج تتنافس من قبل سلالة مرجعية. تحقق دائما من أن جميع المضخات تعمل بكفاءة وأن خطوط السوائل واضحة من أي القباقيب.
يمكن أن يؤدي تجاوز السعة إلى تدمير تجربة ما ومن المحتمل أن يؤدي إلى تلف الأكمام الذكية. ويمكن فيما بعد تحديد عينات مأخوذة من "إيفولتفر" للتحقق من التغيرات الجينية نتيجة للتجربة. ويمكن استخدام هذه المعلومات لهندسة سلالات أو أنظمة جديدة.
بالنسبة للباحثين الذين يستخدمون التطور المختبري أو اختيار المكتبة، من السهل تطبيق ضغوط اختيار فريدة في كل تجربة eVOLVER. السيطرة على ردود الفعل والبيئات الديناميكية الآن يمكن الوصول إليها جدا أيضا. سوف carboy النفايات تحتوي على كميات صغيرة من التبييض والإيثانول بعد تجربة.
استشر منسق السلامة في المختبر للتخلص من النفايات بشكل صحيح.
