هنا نقدم بروتوكول جراحي للأرانب بهدف تقييم مواد استبدال العظام من حيث قدرات تجديد العظام. المبدأ الأساسي لهذا النموذج العجلي الأرنب هو أن تنمو أنسجة العظام الجديدة عموديا على رأس الجزء القشري من الجمجمة. يسمح هذا النموذج بتقييم مواد استبدال العظام لتجديد العظام عن طريق الفم والقحف الوجه من حيث دعم نمو العظام ودعم النيوفاسكلارية.
النموذج مهم جدا لتقييم تجديد العظام كما أنه يقيس النمو خارج الرحم من الأنسجة العظمية الجديدة فوق العظام الناضجة. بالمقارنة مع النماذج التقليدية، حيث تتجدد العظام الجديدة لملء العيب الذي تم إنشاؤه بشكل مصطنع للعودة في النهاية إلى مستواه الأولي. باستخدام اسطوانات كبيرة مثبتة على جماجم الأرانب، osteoconduction، osteoinduction، وهشاشة العظام، والأوعية الدموية الناجمة عن المواد يمكن تقييمها إما على الحيوانات الحية أو التضحية.
إثبات الإجراء سيكون لورين مارجر، باحث مشارك من مختبرنا،. بعد تخدير الحيوانات، ضع القنية الوريدية في الوريد الهامشي من الأذن وأبقيه مغلقًا حتى يكتمل النوب. وضع الأرنب في موقف عرضة والحفاظ على رأسه في تمديد عمودي.
تخدير القصبة الهوائية محليا عن طريق رش 10٪ ليدوكاين. حرك أنبوبًا إنتراً صغيرًا في القصبة الهوائية للأرانب حتى يمكن سماع تدفق الهواء في الأنبوب. هذا سوف يفتح الحنجرة ويسهل إدخال الأنبوب النهائي.
بعد ذلك، أدخل دليلًا في الأنبوب لإصلاح موضع الأنبوب في القصبة الهوائية. إزالة أنبوب قطرها الصغير وشريحة أنبوب endotracheal النهائي على الدليل. إزالة الدليل وتضخيم البالون في نهاية أنبوب البطانة لختم ومنع الجهاز في القصبة الهوائية.
بغزارة باستمرار الفنتانيل للحث على المسكنات. 2-4 ملليغرام لكل كيلوغرام من البروبوفول للحث على التخدير وأربعة ملليلتر لكل كيلوغرام في الساعة من خلات الرنين للحفاظ على الظروف متساوي القياس. تهوية على الفور الحيوان مع 3٪ sevoflurane في الأكسجين النقي.
أولا، ضع الأرنب على وسادة ساخنة تعيين إلى 39 درجة مئوية على طاولة الجراحة، ووضع مسبار درجة حرارة المستقيم. حلق فروة الرأس. فرك الجلد مع 10٪ providone اليود لتطهير الموقع.
ثم، ستائر الأرنب مع ستائر الجراحية العقيمة وقطع منطقة الوصول إلى الجمجمة. تطهير موقع الجراحة مع 10٪ providone اليود مرة ثانية. للبدء ، التخدير محليا مع حقن تحت الجلد من الليدوكائين على الجمجمة.
استخدم المشرط لتمزيق الجلد عبر خط القوس الغيلي من المدارات إلى protuberance القذالي الخارجي ، مع التأكد من أن الـ periosteum مقنّف. استخدم مصعدًا في الزّهر الزّي لرفع الـ periosteum برفق على جانبي الشق. شطف الموقع مع المالحة العقيمة.
أولاً، حدد موقع الوسائط وخيوط الإكلال على الجمجمة. لاحظ أن هذه الخطوط التشريحية تشكل صليباً. سيتم وضع الاسطوانات في كل من الأرباع التي يحددها الصليب ، مما يضمن أن حافة الأسطوانة ليست فوق الغرز.
ضع الأسطوانة الأولى على الربع العلوي الأيسر مستلقيًا على الجهاز مسطحًا قدر الإمكان. إصلاح موقف الاسطوانة مع ضغط اليد القوية والمسمار في المسمار الصغيرة حتى يشعر المقاومة. تأكد من أن الرأس المسمار هو تدفق مع علامة التبويب اسطوانة.
إصلاح علامة التبويب الأخرى في الاسطوانة بنفس الطريقة لتأمين الاسطوانة بإحكام على الجمجمة. تأكد من أن الأسطوانة ثابتة بشكل خفي إلى العظم. ثم كرر هذا الإجراء بأكمله لتأمين اسطوانة على كل من الأرباع الثلاثة الأخرى.
للبدء، حفر حفرة الاختلاط تحت الري الملحي مع دبر دائري على العظام على وسط المنطقة التي يحدها الاسطوانة. تأكد من ظهور النزيف. بعد ذلك، حفر اثنين من أكثر الثقوب intermedullary على طول المحور يمر عبر اثنين من مسامير التبويب على الحواف الداخلية للاسطوانة.
على طول الفأس المتعامد، حفر اثنين من أكثر ثقوب باطن اختلط على الحواف الداخلية للاسطوانة. كرر عملية الحفر هذه للاسطوانات الثلاث الأخرى. ثم، تعبئة الاسطوانة الأولى إلى حافة مع عينة المواد.
إغلاق الاسطوانة عن طريق تركيب الغطاء. كرر عملية التعبئة هذه للاسطوانات الثلاث الأخرى. أغلق الجلد فوق الأسطوانات مع خياطة متقطعة غير قابلة لإعادة الانسة وطبق صلصة قابلة للرش على الجرح.
بعد ذلك، وقف المسكنات والتخدير العرض والتحقق من استرداد التنفس الذاتي. بمجرد أن يستعيد الحيوان تنفسًا مستقلًا ، أوقف التهوية. الحفاظ على الحيوان تحت الأكسجين النقي قبل الصحوة كاملة.
حقن هيدروكلوريد buprenophine تحت الجلد. كرر الحقن كل ست ساعات لمدة ثلاثة أيام كما بعد مسكن الجراحية. السماح للحيوان أن يستيقظ تماما قبل نقله إلى السكن المعتاد مع الماء والتغذية الكاملة.
ويكرس النموذج الموصوف في هذا الفيديو لتقييم osteoconduction، osteoinduction، وتكنيد العظام، وneovascularization في بدائل العظام. بمجرد الانتهاء من الجراحة، يمكن رصد نمو العظام في نقاط زمنية مختلفة باستخدام التصوير المقطعي للعظام على الحيوانات الحية. تحليل إضافي يتطلب التضحية بالحيوانات.
بعد القتل الرحيم، يتم قسمة العينات ويتم إزالة الاسطوانات بعناية. ثم يتم إصلاح الخزعات مع حل من الفورمالديهايد 4٪ في برنامج تلفزيوني. بعد ذلك، قد تستخدم الميكراتوغرافيا لتقييم نمو العظام.
ويمكن أيضا معالجة العينات من أجل التلطيخ النسيجي. تحليل الهستوموروميترية والتلطخات المحددة ثم ممكن لاستكمال التحليل بشكل أكثر تحديدا. بما أن هذا البروتوكول هو طريقة جراحية ، فإن جميع الخطوات حاسمة ويجب اتباعها بشكل صحيح.
من المهم أن يتم تدريبك على التجارب على الحيوانات، خاصة في التعامل مع الأرانب والتخدير. وبصرف النظر عن الطرق المذكورة، يمكن تحليل الخلايا بشكل أكثر تحديدا باستخدام عملية استئصال الخلايا المتدفقة. ويمكن أيضاً تقييم تطور المادة، ونضوج الأنسجة العظمية، والميكانيكا باستخدام المسافة البادئة النانوية، على سبيل المثال.
بمساعدة هذا النموذج، تم إجراء العديد من التقييمات. على سبيل المثال ، بالنسبة لأقفاص التيتانيوم أو السيراميك ، أغشية GBM ، العوامل العظمية ، تحت المواليد الجدد أو آلية النيوفاكوسلارية أثناء عملية تجديد العظام.
