يوفر البروتوكول نموذجا للتحقيق في آليات إصابة الأوعية الدموية والتطور اللاحق للوذمة بطريقة غير جراحية. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنه يمكنك متابعة الإصابة مباشرة بمرور الوقت دون تدخل جراحي. هذا يوفر سبلا لاختبار العلاجات بشكل أكثر كفاءة.
قد يكون من الصعب تعلم كيفية إجراء عروق الذيل المناسبة واستيعاب الحيوان في المنصة بشكل صحيح. بالنسبة لكلتا التقنيتين ، أوصي بالتحلي بالصبر وأخذ الأمور ببطء. للبدء ، تعامل برفق مع كابل الألياف الضوئية وقم بتوصيله بصندوق التحكم بالليزر ومحول الليزر لمجهر تصوير الشبكية ، ثم قم بتشغيل صندوق مصباح مجهر تصوير الشبكية.
قم بتشغيل الكمبيوتر وافتح برنامج التصوير. ضع قطعة من الورق الأبيض أمام عدسة المجهر واضبط توازن اللون الأبيض بالضغط على ضبط في برنامج التصوير. قم بتشغيل صندوق التحكم بالليزر عن طريق تدوير المفتاح واتباع التعليمات التي تظهر على شاشة صندوق التحكم بالليزر.
للتحقق من طاقة الليزر الأساسية ، اضبط صندوق التحكم بالليزر على 50 ملي واط و 2،000 مللي ثانية. ثم قم بتشغيل الليزر ووضع عداد الطاقة أمام العدسة. اضغط على دواسة مفتاح القدم لتنشيط الليزر ، بهدف أن تكون قراءة طاقة الليزر من 13 إلى 15 ملي واط.
بعد ذلك ، باستخدام شاشة صندوق التحكم بالليزر ، اضبط طاقة الليزر التجريبية على 100 مللي واط و 1،000 مللي ثانية ، وأوقف تشغيل الليزر. صب 300 ملليلتر من الماء في كأس زجاجية سعة 500 ملليلتر، وقم بتسخين الكأس الزجاجية في فرن الميكروويف لمدة دقيقة واحدة. ثم ضع الشاش في الماء الدافئ.
ضع بعد ذلك فأرا ذكرا يبلغ من العمر شهرين في مقيد. اضغط على الشاش الدافئ في ذيل الماوس برفق وابحث عن الأوردة المتوسعة. باستخدام إبرة قياس 26 ، قم بحقن الكمية المناسبة من البنغال الوردي وفقا لوزن الحيوان واضغط على موقع الحقن لمنع الورم الدموي أو النزيف قبل مسح الموقع.
ثم حرر الماوس من المقيد وأعده إلى القفص. اترك ثماني دقائق حتى تنتشر الوردة البنغالية قبل حقن التخدير. قم بتشغيل منصة الماوس الساخنة.
ثم أضف قطرة واحدة من فينيليفرين وتروبيكاميد في كل عين من الماوس. بعد تأكيد التخدير ، أضف قطرة واحدة من بروباراكائين هيدروكلوريد لكل عين ، ثم أضف مرهم العين إلى كلتا العينين. بعد ذلك ، قم بحقن 150 ميكرولتر من الكاربروفين تحت الجلد بين الأذنين.
ثم استوعب الماوس على المنصة واضبط المنصة حتى يصبح عرض قاع الشبكية واضحا ومركزا. عد الأوردة الشبكية والتقط صورة لقاع العين. بعد ذلك ، قم بتشغيل الليزر واستهدف الوريد الشبكي على بعد حوالي 375 ميكرومتر من القرص البصري.
قم بتشعيع الوعاء عن طريق الضغط على مفتاح القدم وتحريك شعاع الليزر قليلا حتى 100 ميكرومتر. كرر هذه الخطوة ثلاث مرات وحرك شعاع الليزر بعد كل نبضة حتى لا يتركز التشعيع في مكان واحد. كرر التشعيع على الأوعية الرئيسية الأخرى لتحقيق اثنين إلى ثلاثة انسداد.
بعد تشعيع الأوعية ، أطفئ المصباح وانتظر لمدة 10 دقائق. ثم أعد تشغيل المصباح ، واحسب عدد الأوردة المسدودة ، والتقط صورة لقاع العين. بعد الحصول على الصورة وحقن المحلول الملحي ، أضف قطرات تشحيم للعين ومرهم جل لكلتا العينين.
راقب الفأر وهو يتعافى من التخدير وأعده إلى القفص مع الحيوانات الأخرى فقط عندما يتعافى تماما. لم يكن عدد الانسدادات التي تحققت مباشرة بعد تشعيع الليزر مختلفا بين الحيوانات التي تم تعرضها بالليزر بعد 10 و 20 دقيقة من إعطاء البنغال الوردي. انخفض عدد الانسدادات المستمرة لمدة تصل إلى يوم واحد بعد انسداد الوريد الشبكي بشكل ملحوظ في الحيوانات التي تم استخدامها بالليزر بعد 20 دقيقة من إعطاء البنغال الوردي بشكل مستقل عن النمط الوراثي.
بدون تعديل الطاقة التجريبية البالغة 100 ملي واط ، لم ينتج عن طاقة الليزر الأساسية المنخفضة البالغة 11.5 ملي واط أي انسداد. في المقابل ، أدى إخراج الليزر الأساسي البالغ 13.5 ملي واط إلى انسداد ناجح. تحدث أربعة أنواع رئيسية من الانسدادات بعد التخثير الضوئي بالليزر: الأوعية المسدودة بالكامل ، والأوعية المغلقة جزئيا ، والأوعية المعاد تركيبها جزئيا ، والأوعية المعاد تركيبها بالكامل.
أمضت الأوعية الدموية المشععة للفئران الملغاة Casp9 للخلايا البطانية المحرضة لعقار تاموكسيفين وقتا أطول في حالات الانسداد الجزئي والمسدود جزئيا مقارنة بفئران C57 Black 6 ، التي قضت وقتا أطول في حالات مسدودة بالكامل. تتغير حالة انسداد الأوعية بسرعة خلال أول 10 دقائق بعد ملاحظة التخثير الضوئي بالليزر والنزيف على شكل اللهب بعد 24 ساعة من الإصابة. حدثت أمراض العيون المختلفة بعد انسداد الوريد الشبكي.
يمكن قياس مستوى وذمة الشبكية بعد انسداد الوريد الشبكي في العيون المصابة باستخدام صور التصوير المقطعي للتماسك البصري. يمكن أيضا تحديد حالة الطبقات العصبية من خلال تقييم عدم تنظيم الطبقات الداخلية للشبكية. يظهر هنا مثال على صورة التصوير المقطعي للتماسك البصري مع الملصقات المقابلة لكل طبقة.
من المهم قياس طاقة الليزر الأساسية. ستؤثر هذه القراءة بشكل كبير على نجاح الانسدادات ويمكن تحسينها. يمكن تنفيذ طرق إضافية مثل OCT و ERG و Optiger.
سيساعد ذلك في معالجة آثار إصابة الأوعية الدموية العصبية على سلامة الخلايا العصبية في شبكية العين ووظيفة المسار البصري. تمهد هذه التقنية الطريق لاستجواب المسارات الجزيئية التي تقود الأمراض الوعائية العصبية ، ومن خلال متابعة الحيوانات الفردية بمرور الوقت ، توفر البيانات التي يمكن ترجمتها بسهولة أكبر إلى مرض بشري.
