يمكن تطبيق حقن Waterjet للمكونات النشطة ، مثل السوائل أو الجسيمات النانوية أو الجسيمات الدقيقة أو الأدوية المغلفة أو حتى الخلايا الحية بشكل أكثر دقة عند مقارنتها بحقن الإبرة في الأنسجة المختلفة المستهدفة. تتطلب الأساليب طفيفة التوغل توطينا دقيقا للدواء في طبقات محددة مسبقا من الأنسجة المستهدفة عن طريق الاختيار المسبق لضغوط الحقن. ينصب تركيزنا الحالي على العلاج الخلوي لسلس البول.
ومع ذلك ، فقد تم بالفعل توسيع هذه التقنية لتجديد الأنسجة العضلية المصابة بعد النوبات القلبية الشديدة. في الوقت الحاضر ، لا يمكن تطبيق هذه التقنية إلا من قبل الباحثين ذوي الخبرة أو الأطباء المرخصين في الدراسات ما قبل السريرية. ليس المقصود استخدامه في الإجراءات المختبرية الروتينية لأنه تم تطويره للأغراض السريرية المستقبلية.
للبدء ، ضع مجرى البول مع المثانة المتصلة التي تم تشريحها من خنزير Landrace الأنثوي البالغ على إسفنجة تحاكي مرونة قاع الحوض السفلي. ثم باستخدام المثانة ، حدد اتجاه مجرى البول. هذا ممكن بسبب توطين الحالب والأربطة الثلاثة ، والتي تثبت المثانة في تجويف البطن والحوض.
بعد توجيه مجرى البول بشكل صحيح ، قم بقطعه طوليا على الجانب الظهري بمساعدة قسطرة. بعد ضبط كثافة الخلايا للخلايا اللحمية المشتقة من الأنسجة الدهنية الخنازير إلى 2.4 مرة 10 إلى الخلايا السادسة لكل ملليلتر ، قم بتسمية الخلايا بغشاء فلورسنت أخضر قابل للنفاذ بقعة خلية حية ، ثم استنشق تعليق الخلية باستخدام المحقنة وتطبيق إبرة الحقن بالمنظار الخلوي ويليامز. بعد ذلك ، إما أن تمسك الإبرة فوق مليلترين من وسائط النمو في أنبوب طرد مركزي 15 ملليلتر أو تدخل الإبرة في أنسجة مجرى البول المفتوحة.
في كلتا الحالتين ، حقن 250 ميكرولتر يدويا من تعليق الخلية. الخلايا التي يتم حقنها في مجرى البول الجثوي من قبة الحقن. جمع الخلايا التي يتم حقنها في الوسائط مباشرة عن طريق الطرد المركزي.
بالنسبة للخلايا التي يتم حقنها في مجرى البول الجثة، قم بشفطها من قبة الحقن باستخدام إبرة قياس 18 مطبقة على حقنة. نقل الخلايا المستنشقة إلى أنبوب الطرد المركزي وكرها عن طريق الطرد المركزي. أعد تعليق كل من كريات الخلايا في أربعة ملليلترات من وسائط النمو.
لتحديد إنتاجية الخلية وقابليتها للبقاء، امزج 20 من تعليق الخلية جيدا مع 20 ميكرولتر من التربان الأزرق. ثم املأ 10 ميكرولترات من هذا الخليط في كل غرفة من مقياس الدم. تحت المجهر عد الخلايا في جميع مربعات الزاوية الأربعة.
عد الخلايا البيضاء غير الملطخة كخلايا قابلة للحياة والخلايا الملطخة الزرقاء كخلايا ميتة ، ثم احسب عدد الخلايا لكل ملليلتر. بالنسبة للحقن عبر Waterjet ، اضبط كثافة الخلايا اللحمية المشتقة من الأنسجة الدهنية الخنازير إلى ست مرات من 10 إلى 6 خلايا لكل ملليلتر. قم بتسميتها كما هو موضح سابقا واملأ تعليق الخلية في وحدة الجرعات الخاصة بجهاز Waterjet الخالي من الإبرة.
ثم إما أن تمسك فوهة الحقن فوق مليلترين من وسائط النمو في أنبوب طرد مركزي 15 ملليلتر أو فوق أنسجة مجرى البول المفتوحة بقليل. في كلتا الحالتين ، حقن 100 ميكرولتر من تعليق الخلية. استخدم ضغطا عاليا لاختراق الأنسجة متبوعا بمرحلة ضغط منخفض لحقن الخلايا.
تشكل الخلايا المحقونة في مجرى البول الجثوي قبة حقن. جمع الخلايا التي يتم حقنها في الوسائط مباشرة عن طريق الطرد المركزي. بالنسبة للخلايا التي يتم حقنها في مجرى البول الجثة، قم بشفطها خارج قبة الحقن.
انقل الخلايا المستنشقة إلى أنبوب طرد مركزي ، وقم بتكويرها باستخدام الطرد المركزي كما هو موضح سابقا. بعد الطرد المركزي ، أعد تعليق كلا الكريات في أربعة ملليلتر من وسائط النمو. زرع الخلايا التي تم استردادها بعد الحقن في أطباق زراعة الأنسجة بكثافة خمس مرات 10 إلى الخلايا الخامسة لكل طبق.
بعد ثلاث ساعات من الحضانة عند 37 درجة مئوية ، وقبل قياس AFM مباشرة ، استبدل وسائط النمو بثلاثة ملليلترات من وسائط L-15 من Leibovitz بدون L-glutamine. لقياس مرونة الخلايا الفردية ، حدد بصريا خلية واحدة وركز عليها. ثم ضع ماوس الكمبيوتر في منتصف الخلية ولتحسين دقة القياسات ، ضع طرف AFM مباشرة فوق نواة الخلية.
بعد ذلك ، ركز على الكابولي وحركه على ماوس الكمبيوتر. ثم ابدأ القياس بتشغيل وقياس 50 خلية على الأقل. يتم استخدام معلمة نقطة الضبط التي تم الحصول عليها عن طريق معايرة الكابولي ويتم قياس خلية واحدة ثلاث مرات.
كانت صلاحية الخلايا التي يتم تسليمها من خلال إبرة ويليامز أعلى من الحقن بواسطة الطائرة المائية باستخدام إعدادات E60-10. كشف التقييم الميكانيكي الحيوي للحقن في سائل الالتقاط أن حقن إبرة ويليامز لم تظهر فرقا كبيرا في المعامل المرن عند مقارنتها بالضوابط ، في حين أن حقن Waterjet خفضت بشكل كبير من المعامل المرن الخلوي بنسبة 40 إلى 50٪ وبالمثل ، في عينات أنسجة مجرى البول الجثث ، لم تسفر حقن إبرة ويليامز عن أي فرق كبير في المعامل المرنة الخلوية مقارنة بالضوابط. ومع ذلك ، لوحظ انخفاض كبير بنسبة 51 ٪ بعد حقن Waterjet.
على المرء فقط التأكد من أن حقن الإبرة لا تخترق الأنسجة التي تسبب الإصابة بشكل كامل. مع Waterjet ، يتعين على المرء فقط وضع الجهاز في الموضع الصحيح في منطقة الحقن بينما يتم الباقي تلقائيا بواسطة الجهاز نفسه. نظرا لأنه تم تطوير جهاز Waterjet ليتناسب مع أجهزة التنظير الداخلي ويتناسب معها ، يمكنك استخدام تطبيقات Waterjet لأي موقع في الجسم يمكن الوصول إليه بواسطة تقنيات تنظير المثانة أو التنظير الداخلي هذه لتجديد الأنسجة والقيام بمهمة الإصلاح.
