يسمح نهجنا بتقليل المرض الغازي في علاج متلازمة ماير-روكيتانسكي-كوستر-هاوزر من خلال الجمع بين رأب المهبل بالمنظار واسترجاع البويضات لعلاجات الخصوبة المستقبلية. المزايا الرئيسية لنهجنا هي شرط تخدير واحد والتغلب على عدم جدوى استرجاع البويضات عبر المهبل في مرضى روكيتانسكي الأصغر سنا. سيتم عرض الإجراء من قبل ديانا ديلبراتو ، أخصائي أمراض النساء الأول في وحدة العقم لدينا وأليساندرا ألتيري وغريتا سيرميسوني ، وهما من كبار علماء الأجنة السريرية من مختبر الإنجاب المساعد لدينا.
ابدأ تحفيز المبيض الخاضع للرقابة في اليوم 14 من يوم الجراحة. مراقبة استجابة المبيض عن طريق الموجات فوق الصوتية عبر البطن التسلسلية والقياسات المصاحبة للاستراديول والبروجستيرون. إنشاء استرواح الصفاق بتقنية مفتوحة.
ضع مبزل سري واحد بقطر 10 ملليمترات لإدخال منظار البطن وثلاثة مبازل بطول خمسة ملليمترات في الأرباع السفلية الوسطى واليمنى واليسرى. تحت الرؤية بالمنظار ، استخدم إبرة تجويف مفردة قياس 17 متصلة بمضخة شفط ، كما هو شائع الاستخدام للاسترجاع عبر المهبل من خلال المبازل المركزي والأيسر لثقب المبيض الأيمن والأيسر ، على التوالي. ارفع المبايض وامسكها بالملقط بالمنظار لتسهيل تعرض البصيلات.
عند شفط بصيلات متعددة قريبة من بعضها البعض ، احتفظ بطرف الإبرة في المبيض لتقليل عدد المرات التي تنتقل فيها قشرة المبيض والخطر الكامن في النزيف. تشريح الصفاق عن طريق رفع وشق الشريط البريتوني بشكل عرضي بين قرني الرحم البدائيين ، ثم تمديد الشق جانبيا وأماميا وخلفيا. فضح الدمل المهبلي على نهج العجان وقم بإجراء شق على شكل حرف H وإنشاء مساحة مهبلية جديدة عن طريق تشريح حاد وغير حاد للمساحة الحويصلية المستقيمية.
ثم اسحب الهوامش البريتونية المشرحة إلى حافة الدهليز المهبلي. موقف الغرز المتقطعة في polydioxanone الاصطناعية القابلة للامتصاص 3-0 للمفاغرة الدهليزي البريتوني. ابدأ خياطة خيط محفظة في بوليديوكسانون خيوط أحادية قابلة للامتصاص 2-0 في كل نصف حوضي من الصفاق المعبأ فوق المثانة مع نقل الضام للرباط المستدير ، والبرزخ البوقي ، ورباط الرحم والمبيض ، والورقة البريتونية الجانبية.
بعد ذلك ، قم بتضمين الجانب الجانبي للمستقيم والجانب الأمامي من مصل المستقيم مباشرة أسفل التقاطع المستقيمي السيني. أخيرا ، ضع شاشا مغطى بالبارافين في المهبل الجديد المغطى بالبريتوني. اجمع الشفاطات المسامية في أنابيب مستديرة القاع بطول 10 ملم تبقى دافئة في حاضنة محمولة وانقلها على الفور إلى مختبر علم الأجنة مع وقت نقل يبلغ حوالي 10 دقائق.
عندما يتم جمع جميع مجمعات البويضات الركامية ، ضعها في طبق من أربعة آبار يحتوي على وسط الإخصاب وقم بتسمية الغطاء والقاع بالبيانات المتعلقة بهوية المريض. احتضانها عند 37 درجة مئوية في جو متحكم فيه يحتوي على 6٪ ثاني أكسيد الكربون و 5٪ أكسجين. تأكد من إجراء فحص مزدوج للإجراء من قبل عضو ثان من موظفي المختبر.
إجراء إزالة خلايا الهالة الركامية في غضون 38 ساعة بعد تحفيز الإباضة. ضع مجمعات البويضات الركامية في البئر المركزي الذي يحتوي على الإنزيم لتفريق الخلايا الركامية باستخدام ماصة باستور زجاجية ، مع سحب المحلول المحتوي على مجمعات البويضات الركامية برفق لأعلى ولأسفل لمدة تصل إلى 30 ثانية. انقل البويضات إلى طبق البئر المركزي الثاني الذي يحتوي فقط على وسط HEPES المخزن ، مع التأكد من إزاحة الحد الأدنى من الإنزيم.
قم بإزالة خلايا الهالة المتبقية باستخدام ماصات التعري بأقطار داخلية متناقصة. تقييم مرحلة نضوج البويضة ، وفصل البويضات الطور الثاني. نقل بويضات الطور الثاني في طبق بتري 60 ملم يحتوي على تسع قطرات من وسط زراعة واحدة مستمر مغطى بستة ملليمترات من الزيت المعدني.
احتضانها عند 37 درجة مئوية في جو متحكم فيه يحتوي على 6٪ ثاني أكسيد الكربون و 5٪ أكسجين. املأ صندوق التبريد حتى الأعلى بالنيتروجين السائل الطازج وقم بتغطيته حتى يتم استخدامه لتقليل التشتت والتبخر. استخدم ماصة متجرد بقطر داخلي يبلغ 170 ميكرومتر لتجنب إتلاف البويضات أثناء التلاعب.
رج برفق كل قارورة من محلول التوازن ومحلول التزجيج ومحلول الغسيل لخلط المحتويات قبل الاستخدام. تحضير غطاء طبق بتري 60 ملليلتر مع قطرة واحدة من 50 ميكرولتر من محلول الغسيل واحد. ضع قطرات قبل الاستخدام مباشرة للحد من التبخر المتوسط.
خذ طبق البويضة من الحاضنة وانقل بويضات الطور الثاني مع الحد الأدنى من الحجم المتوسط من طبق الثقافة إلى 50 ميكرولتر من محلول الغسيل. الاستغناء عن قطرات 50 ميكرولتر من محلول الغسيل الثاني ، ومحلول التوازن الأول ، ومحلول التوازن الثاني على مقربة ونقل البويضات من محلول الغسيل المتساقط الأول إلى محلول الغسيل المتساقط الثاني. ادمج قطرة محلول التوازن واحد في محلول الغسيل الثاني وانتظر لمدة دقيقتين حتى يتم الخلط التلقائي لكلا المحلولين.
بعد ذلك ، ادمج قطرة محلول التوازن اثنين مع القطرات المدمجة سابقا واتركها لمدة دقيقتين أخريين. أخيرا ، ادمج قطرة جديدة سعة 100 ميكرولتر من محلول التوازن ثلاثة إلى القطرات المدمجة سابقا واتركها لمدة دقيقة إضافية. ضع البويضات في قطرة 100 ميكرولتر من محلول التوازن أربعة لمدة 10 دقائق.
قم بتوزيع قطرتين سعة 50 ميكرولتر من محلول التزجيج وقطرة واحدة سعة 100 ميكرولتر من محلول التزجيج. حرك البويضات بالتتابع إلى ثلاث قطرات من محلول التزجيج لمدة 60 ثانية بحيث تبقى البويضات في كل قطرة لمدة 20 ثانية تقريبا. عندما يتم ترك ما يقرب من 10 ثوان قبل نهاية 60 ثانية من الحضانة ، ضع جهاز التبريد تحت المجهر.
احمل البويضات عند طرف الماصة وضعها على جهاز التبريد بأقل قدر ممكن من محلول التزجيج. استنشاق محلول التزجيج الزائد ، وترك البويضات مغطاة بطبقة رقيقة من محلول التزجيج. اغمس جهاز التبريد مباشرة في النيتروجين السائل وحركه بسرعة.
احتفظ بالجهاز في النيتروجين السائل وقم بتغطيته بغطاء واقي. تم الجمع بين الإجراءات بالمنظار المصاحبة لاسترجاع البويضات ورأب المهبل بنجاح في جميع المرضى. تم استرجاع ما معدله 11.4 5.4 بويضة وتم حفظ 9.6 4.3 M2 بويضة بالتبريد.
كان إجمالي متوسط وقت التشغيل 114 17 دقيقة. كان فقدان الدم أثناء العملية ضئيلا في جميع المرضى ولم يلاحظ أي أحداث سلبية أثناء العملية. في اليوم الثالث بعد الجراحة ، بدأ المرضى في استخدام الموسع اليومي وخرجوا في اليوم 6.0 1.0.
يوصى بشفط البصيلات بحذر داخل المبيض ، مع إيلاء الاهتمام الواجب للتعبئة التلقائية للمبيضين من أجل ضمان الوصول والاسترجاع الأمثل.
