تتميز أمراض الانسداد المخاطي بلزوجة غير طبيعية لمخاط مجرى الهواء. يوضح البروتوكول كيفية استخدام الريولوجيا لقياس لزوجة المخاط وتحليل البيانات لاختبار العلاجات التي تستهدف المخاط. يوفر ريولوجيا المخاط مؤشرات حيوية كمية محددة.
إن استخدام جهاز على الطاولة يبسط إلى حد كبير الخدمات اللوجستية لقياس هذه المؤشرات الحيوية في العينات السريرية مثل عينات البلغم البشري. لا يزال استخدام ريولوجيا المخاط كأداة تشخيص لأمراض الانسداد يمثل تحديا. تظهر مجموعة متزايدة من الأدلة وجود علاقة قوية بين خصائص الريولوجيا والالتهابات والعدوى البكتيرية.
المخاط موجود دائما في واجهة الجسم حيث يقوم بتليين ويلعب دورا وقائيا. يمكن تطبيق ريولوجيا المخاط على أنظمة أخرى مثل مسارات الجهاز الهضمي والأعضاء التناسلية. للحصول على قياسات دقيقة ، يعد التعامل الصحيح مع العينة ووضعها أمرا بالغ الأهمية.
يمكن أن يعزز العرض المرئي دقة هذا الاختبار. سيوضح هذا الإجراء كيندال شافر ، فني أبحاث من مختبر الهواء. ابدأ بفرز بلغم مجرى الهواء الذي تم جمعه أو المخاط في أكواب عينات معقمة.
في حالة البلغم ، قم بإزالة اللعاب الزائد من العينة فور جمعها. ضع العينات على الجليد لنقلها. الحد من وقت النقل إلى أقل من أربع ساعات.
تحليل العينات في وقت الجمع. قم بتجانس المخاط عن طريق السحب بلطف لأعلى ولأسفل ثلاث إلى خمس مرات باستخدام ماصة إزاحة إيجابية. أو ماصة مباشرة في أنابيب الطرد المركزي الدقيقة.
تخزين العينات في 80 درجة مئوية حتى معالجتها. Aliquot العينات للتخزين في أحجام أكبر من أو تساوي 500 ميكرولتر لضمان حجم كاف للتجارب. قبل الاقتباس ، ماصة البلغم الطازج والمجمد أو المخاط مباشرة أو تجانس العينات.
إصلاح الأليكوتات المطلوبة لتكرار القياسات والعلاجات. احتضان الأليكوتات ليتم اختبارها عند 37 درجة مئوية لمدة خمس دقائق على الأقل قبل القياس. لاختبار العوامل الدوائية ، استخدم تركيزات عالية من محاليل المخزون لمنع تخفيف العينة.
أضف ما بين 1٪ إلى 10٪ من حجم الكاشف المطلوب مباشرة على العينة. تأكد من عدم بقاء أي قطرة من المركب على جانب الأنبوب. احتضان العينات عند 37 درجة مئوية لطول الفترة الزمنية المطلوبة، للسماح بتفاعل كيميائي.
امزج عينة المخاط والكاشف عن طريق النقر على الجزء السفلي من أنبوب الطرد المركزي الدقيق كل دقيقتين للسماح بالاختراق التدريجي للكاشف في عينة المخاط دون المساس بشبكة المخاط. عند مقارنة كواشف دوائية متعددة ، تأكد من أن وقت الحضانة متشابه. قم بتشغيل الجهاز وتهيئة البرنامج.
حدد قياسا جديدا. أدخل رقم تعريف العينة ضمن معرف القياس واسم المشغل ضمن المشغل للمتابعة. أدخل معلومات أو تعليقات إضافية ضمن التعليقات.
حدد مجموعة هندسية وافحص الألواح الكبيرة والصغيرة بعناية ، للتأكد من أن الألواح نظيفة وفي حالة ممتازة. أدخل اللوحة الكبيرة بإحكام على المنبر السفلي. أدخل اللوحة الصغيرة بلطف على المنبر العلوي وقم بقفل اللوحة عن طريق الدوران قليلا حتى سماع نقرة ، مما يشير إلى أن اللوحة مثبتة بشكل صحيح.
لاحظ أن التذبذب الحر للوحة العلوية أمر طبيعي. انتظر حتى تصل درجة الحرارة إلى 37 درجة مئوية القيمة المستهدفة. ثم ابدأ المعايرة التلقائية، كما هو مطلوب من قبل البرنامج.
باستخدام ماصة إزاحة إيجابية ، ماصة ببطء بين 250 و 500 ميكرولتر من العينة في وسط اللوحة السفلية الكبيرة. بمجرد إيداعها على اللوحة ، ستعتمد العينات اللزجة شكل قبة ، في حين أن العينات عالية المرونة قد تتطلب قطعا ماديا. اخفض رأس القياس الذي يحمل اللوحة الصغيرة عبر البرنامج وراقب العينة.
إذا تم تحميلها بشكل صحيح على اللوحة السفلية ، فستقوم العينة بإجراء اتصال وسيتم تمركزها بين اللوحتين. للتأكد من أن العينة تملأ الفجوة، استخدم دالة الفجوة المخفضة حتى لا تعود العينة في شكل مقعر ثنائي المقعر أو محاذاة مع حافة اللوحة. تعمل وظيفة الفجوة المنخفضة على خفض حافة القياس بزيادات قدرها 0.1 ملليمتر وتقتصر على 7 زيادات.
إذا بقيت فجوة بعد الزيادات 7 ، فانقر فوق إعادة التثبيت للعودة إلى الموضع الأولي وضبط موضع العينة وحجمها. إذا تم تقليل الفجوة بشكل كبير ، فقم بإزالة العينة الزائدة باستخدام ملعقة بحركة دائرية على طول حافة اللوحة العلوية. قم بقص العينة الزائدة بلطف لتجنب إجهاد القص.
اخفض الغطاء الواقي لتجنب أي إسقاط عرضي للسوائل الملوثة أثناء التذبذب. لبدء القياس ، انقر فوق بدء التحليل. ستستغرق الدورة بأكملها من أربع إلى سبع دقائق.
تجنب التحدث بصوت عال ولمس الجهاز أو المقعد طوال مدة الدورة. البيئة الهادئة أمر بالغ الأهمية في الدقيقتين الأوليين. بمجرد اكتمال الدورة ، انقر فوق التالي لرفع رأس القياس وإنشاء تقرير تحليل العينة.
بمجرد سحب رأس القياس بالكامل ، ارفع الغطاء الواقي. تخلص من العينة وقم بإزالة الألواح بعناية. تنظيف وتطهير الأطباق باستخدام الماء الدافئ والصابون.
تم قياس الخصائص المرنة اللزجة لثمانية ميغادالتون PEO بخمسة تركيزات وتمت مقارنتها مباشرة بين مقياس الريومتر الموجود على الطاولة والذي تم تقييمه ومقياس الريومتر السائب التقليدي. على النقيض من حلول PEO ، يمثل مخاط الربو الحالة سلوكا مرنا صلبا يهيمن عليه عند سلالة منخفضة ويتميز بتقاطع عند سلالة عالية. بالإضافة إلى ذلك ، أكدت القياسات الثلاثية التي أجريت في محلول PEO بنسبة 1.5٪ وعينة مخاط الفحص السريري ، أن الخصائص اللزجة المرنة الخطية كانت قابلة للتكرار بدرجة كبيرة للقيم التي تم الحصول عليها من العينة البيولوجية.
تم قياس التغيرات في الخصائص اللزجة المرنة للمخاط بعد العلاج بعامل حال للبلغم. تم اختبار تأثيرات TCEP على مرونة لزوجة المخاط المقايسة في بيئة سريرية باستخدام مقياس الريومتر الموجود على الطاولة. أسفرت معالجة حال للبلغم عن عينة أكثر شبها بالسوائل مع انخفاض في المعامل المعقد بمقدار 4.6 أضعاف ، ومعامل المرونة بمقدار 5.1 أضعاف ، ومعامل اللزج بمقدار 1.9 ضعف ، وإجهاد كروس أوفر بمقدار 3.3 أضعاف ، وإجهاد العائد المتقاطع بمقدار 5.7 أضعاف ، وزيادة في نسبة التخميد بمقدار 2.8 ضعف.
يمكن أن يساعد قياس مرونة لزوجة مخاط مجرى الهواء في بيئة سريرية سريعة الخطى في تخصيص علاج المرضى على أساس كل حالة على حدة ، بالإضافة إلى توفير بروتوكول موحد لاختبار المركبات الدوائية الجديدة. تستخدم هذه التقنية حاليا لفحص آثار معدلات CFTR الفعالة للغاية على بلغم التليف الكيسي واختبار فعالية الأدوية المختلفة التي تهدف إلى تغيير خصائص المخاط.
