هذا هو نموذج استئصال ورم الدماغ الذي تشتد الحاجة إليه في البحوث قبل السريرية على العلاجات لأورام الدماغ. فهو يسمح باستئصال موحد من خلال نهج طفيف التوغل ، بينما في الوقت نفسه ، يقترن أيضا بنظام آلي للحفاظ على الأنسجة. يسمح هذا البروتوكول للحيوان بالبقاء على قيد الحياة بعد الجراحة ، وبالتالي ، يساعد في فهم التغيرات في حالة المرض بعد العلاج في نفس الحيوان.
هذا يساعد في التطبيقات العلاجية المتسلسلة والفاصل الزمني. باستخدام هذه التقنية ، يمكننا تقييم بيولوجيا المرض والتخطيط للإدارة اللاحقة المحتملة. وهذا له آثار وفرص كبيرة في اكتشاف الأدوية والعلاجات الجديدة.
يمكن توسيع مفاهيم الاستئصال الموحد ، ونهج الحد الأدنى من التدخل الجراحي ، والحفاظ الآلي على الأنسجة لتشمل أنواعا أخرى من الأورام في أنظمة الأعضاء المختلفة ، مثل أورام الكبد وسرطانات الرأس والرقبة. البروتوكول بسيط والنظام سهل الاستخدام. من الأفضل قراءة البروتوكول المنشور ، والذي يحتوي على جميع الخطوات اللازمة واستكشاف الأخطاء وإصلاحها.
ابدأ التجربة بتقييم الماوس للتخدير عن طريق قرص إصبع القدم. ضع مرهم العيون على العينين لتجنب جفاف القرنية. ثم ضع الماوس على إطار مجسم.
قم بإزالة الدبابيس من الجراحة السابقة وتطهير الجلد بدورات متناوبة من مقشر كحول قائم على الكلورهيكسيدين أو البيتين. ثم قم بإنشاء شق طولي طولي بطول سنتيمتر واحد على طول الندبة الجراحية السابقة باستخدام مشرط معقم. قم بتوصيل قطعة يد MIRS بالذراع التجسيمي من خلال محول المرحلة.
لإعداد ماكينة MIRS، أدخل سلك الطاقة الذي تم ضبطه على اللوحة الخلفية في وعاء سلك الطاقة. قم بتشغيل الطاقة إلى النظام أو إيقاف تشغيلها عن طريق التبديل بين الصفر والواحد. أدخل أحد طرفي خرطوم النيتروجين في التركيب الذكري على اللوحة الخلفية لوحدة التحكم.
قم بتدوير صمولة الاتصال في اتجاه عقارب الساعة لتشديده. تأكد من أن ضغط الإمداد لا يتجاوز 100 PSIG وقم بتوصيل الخرطوم بإمدادات النيتروجين. أغلق غطاء منفذ التفريغ لتجنب أي تسرب.
تحقق من ضبط مقبض الشفط الموجود في الجزء الأمامي من وحدة التحكم على 100 ، وعدم وجود تسرب في نظام الشفط ، وأن ضغط إمداد مدخلات النيتروجين صحيح. أدخل موصل دواسة القدم الرمادي في وعاء رمادي حتى ينقر. بنفس الطريقة، أدخل موصل القبضة الزرقاء في الوعاء الأزرق.
قم بتعبئة كل قبضة عن طريق شفط السائل المعقم في الفتحة من خلال الأنابيب والقبضة ثم إلى العلبة لضمان تشحيم الجزء الداخلي من الأنابيب والقبضة. حدد وضع الطموح على اللوحة الأمامية لوحدة التحكم وابدأ باستخدام دواسة القدم. أدخل قنية MIRS 23-G في فتحة النتوء على عمق 2.5 ملم.
ابدأ عملية الاستئصال عن طريق الضغط على دواسة القدم المتصلة بالقنية. قم بإجراء دورات كاملة من الاستئصال باستخدام مقبض التحكم في القبضة. بعد عملية الاستئصال ، اسحب قنية MIRS ذات المقياس 23 وأضف خمسة ملليلتر من 1X PBS لطرد الأنابيب وإزاحة أي حطام متبقي.
ثم أغلق الجرح بدباسة وأزل الماوس من الإطار التجسيمي. أعد الماوس إلى وسادة التدفئة للتعافي من التخدير قبل وضعه مرة أخرى في قفصه. بعد التجربة ، قم بتطهير القنية بوسائط مبردة وهواء لدفع جميع الأنسجة المقطوعة مرة أخرى إلى علبة التجميع.
قم بإزالة علبة التجميع من النظام ووضع غطاء. بعد ذلك ، ضع الطرف البعيد للقنية في بيروكسيد الهيدروجين بنسبة 3٪ وقم بتطبيق الشفط لملء خط الشفط مرة أخرى إلى علبة جمع الشفط. اتركه يقف لمدة 60 إلى 90 ثانية وانبض الهواء والوسائط بشكل متقطع لتنظيفه.
اغمر عينة الورم في طبق زراعة الأنسجة الذي يحتوي على وسط تحلل RBC لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة. ثم ضع مرشحا بحجم 70 ميكرون على أنبوب مخروطي سعة 50 ملليلتر واستخدم مكبس حقنة لتمرير عينة الورم عبر الفلتر. باستخدام ماصة النقل ، استخدم وسائط RPMI 1640 لتمرير الخلايا وأي كتلة أنسجة عبر الفلتر.
جهاز طرد مركزي بسرعة 428 مرة G لمدة خمس دقائق عند أربع درجات مئوية. تخلص من السوبرناتانت وأعد تعليق كل عينة في خمسة ملليلترات من متوسط RPMI 1640 المحضر. ضع العينات في حاضنة الاهتزاز لمدة 20 دقيقة عند 200 دورة في الدقيقة عند 37 درجة مئوية.
بعد الحضانة ، قم بالطرد المركزي للعينات بسرعة 428 مرة G لمدة خمس دقائق عند أربع درجات مئوية وتخلص من supernatant. قم بتصفية الخلايا المفردة من خلال مصفاة خلايا 70 ميكرون وأجهزة الطرد المركزي عند 274 مرة G لمدة ثلاث دقائق عند أربع درجات مئوية. قم بإجراء تحليل جدوى الخلية باستخدام التربان الأزرق ومقياس الدم.
تسبب الاستئصال الجراحي في الفئران باستخدام MIRS في انخفاض كبير في عبء الورم كما هو موضح في انخفاض متوسط إشارة خط الأساس الحيوي للمجموعات التي تعاني من عبء الورم الكبير والصغير على حد سواء. بالمقارنة مع صور التصوير بالرنين المغناطيسي قبل الاستئصال للأورام ، يمكن تحديد تجويف الاستئصال في فحوصات ما بعد الاستئصال كمنطقة كبيرة مستديرة منخفضة الكثافة في موقع تلقيح الورم. في الأقسام الملطخة H & E ، لوحظ تجويف استئصال دائري واضح مع حافة من منتجات الدم والالتهابات والخلايا السرطانية المتبقية.
زاد حجم الاستئصال بشكل كبير عندما تم إجراء دورتين لفتحة القطع ، مما سمح بتحسين حجم الاستئصال وفقا لعبء الورم. أظهرت مقارنة البقاء على قيد الحياة في الفئران مع الأورام غير المعالجة مقابل الفئران التي تخضع لاستئصال الأورام بواسطة MIRS زيادة في البقاء على قيد الحياة من 16 إلى 22 يوما في مجموعة الأورام الصغيرة. وبالمثل ، في المجموعة التي تعاني من عبء ورم أكبر ، زاد متوسط البقاء على قيد الحياة من 12 إلى 19 يوما.
ظهرت صور الفحص المجهري الضوئي للعينات المأخوذة من نظام الحفاظ على الأنسجة كخلايا مفردة مع وجود بضع قطع صغيرة من الأنسجة في اليوم صفر. بعد سبعة أيام ، أظهرت الخلايا التي تم حصادها باستخدام MIRS تكوين الغلاف العصبي في ثقافات التعليق ، مما يشير إلى إمكانية بدء الورم. من المهم تطهير نظام الأنابيب وتنظيفه مباشرة بعد الإجراء لتجنب انسداد النظام.
بعد هذا الإجراء ، يمكن استخدام دراسات فعالية العلاجات والدراسات على العلامات التشخيصية والتنبؤية على الحيوانات الباقية على قيد الحياة بعد الاستئصال الجراحي باستخدام نظام الاستئصال الأقل بضعا.
