باستخدام البروتوكول الموصوف ، يمكننا مقارنة البطين الأيسر لقلب المتبرع ، ووظيفة البطين بعد الحفظ ، ويمكننا فحص اختلاف بيولوجيا الحفظ في كلا البطينين أثناء عملية الحفظ هذه. تستخدم هذه التقنية نظام التروية خارج الجسم الحي لفحص وظائف القلب بعد حفظه. يوفر أدوات قوية وموثوقة لفحص العلاجات الجديدة لتحسين وظائف قلب المتبرع بعد حفظه.
ابدأ بتحضير العجين كما هو موضح في النص وقم بتشكيل قطعة صغيرة من العجين على شكل بيضاوي للحصول على الرأس. نعلقه على نهاية حبلا السباغيتي الجاف. اغمس الرأس في محلول السكر المحضر بالفعل وقم بإزالته ببطء بمجرد أن يتم تغليفه جيدا بطبقة رقيقة من المحلول.
بعد ذلك ، قم بتعليق خصلة السباغيتي على كتلة رغوة البوليسترين أو حوامل أخرى للسماح بتكوين غطاء متساو ولامع فوق الرأس وتجفيفه طوال الليل. في اليوم التالي ، اغمس القالب في مطاط السيليكون المشتت في الزيلين وضع حبلا السباغيتي مرة أخرى في كتلة رغوة البوليسترين عند 37 درجة مئوية لمدة ساعتين أو حتى يجف. كرر هذه الخطوة مرة أخرى.
ثم ضع القالب في الماء لفصل البالون وجمعه. قم بتخزين البالون في 0.02٪ أزيد الصوديوم. الآن ، قم بقطع طرف طرفين حادين من إبرة قياس 22 وقم بتركيب طرف حاد على بالون السيليكون بينما الطرف الآخر غير الحاد لأنبوب PE.
استخدم خياطة حريرية 4-0 لربط البالون في مكانه على الإبرة. خذ الماوس C57Black / 6 وقم بحقن 200 وحدة من الهيبارين داخل الصفاق في بطن لمنع التخثر. بعد التأكد من التخدير المناسب بقرصة إصبع القدم ، قم بعمل شق أسفل القص مباشرة.
وباستخدام المقص ، افتح الصدر عن طريق قطع الحجاب الحاجز في الأضلاع. ثم قم بطي جدار الصدر الأمامي لكشف الصدر بالكامل قبل إجراء قطع في الشريان الأورطي النازل بالقرب من قوس الشريان الأورطي. الآن ، انقل قلب الفأر ورئتيه والغدة الصعترية إلى الثلج البارد هيستيدين - تريبتوفان - كيتوغلوتارات ، أو HTK buffer ، لعزل الأعضاء.
كشف الشريان الأورطي عن طريق إزالة أي نسيج ضام. قم بتوصيل نهاية الشريان الأورطي بإبرة قياس 22 واربطها بخيط حرير 6-0. تأكد من أن القنية فوق جذر الأبهر ، حتى لا تتداخل مع الصمام الأبهري.
قم بلف الشريان الأورطي لمدة 10 دقائق تقريبا باستخدام 10 ملليلتر من المخزن المؤقت HTK ، مبرد مسبقا إلى أربع درجات مئوية. اعتمادا على نوع التجربة ، إما تخزين القلب في أنبوب سعة 50 ملليلتر مع HTK بارد لمدة ثماني ساعات أو إجراء عملية الوفرة على الفور. لإجراء الوفرة ، قم بتوصيل القلب المثبت على الإبرة بالقنية في جهاز Langendorff واربطه بخيط من الحرير.
ابدأ الوفرة في وضع التدفق المستمر بمعدل ثلاثة ملليلتر في الدقيقة ، ثم بعد التغيير إلى وضع الضغط الثابت عند 70 إلى 80 ملم من الزئبق ، اضبط معدل التروية إلى حوالي ستة ملليلتر في الدقيقة. بعد ذلك ، قم بتوصيل بالون سيليكون مملوء بالماء مفرغ من الهواء بمحول ضغط وحقنة مملوءة بالماء باستخدام صنبور ثلاثي الاتجاهات. بعد 15 إلى 20 دقيقة من فترة التوازن بعد التروية السابقة ، اقطع الأذين الأيمن ، أو التهاب المفاصل الروماتويدي ، وأدخل البالون في البطين الأيمن ، أو RV ، من خلال التهاب المفاصل الروماتويدي. استخدم شريطا لتثبيت البالون داخل عربة سكن متنقلة وتقليل المنطقة المفتوحة من التهاب المفاصل الروماتويدي للمساعدة في تقييد البالون في البطين.
بعد 20 دقيقة من جمع البيانات الوظيفية لعربة سكن متنقلة ، قم بقطع الأذين الأيسر ، أو LA ، وأدخل بالونا مملوءا بالماء مفرغا في البطين الأيسر ، أو LV ، من خلال لوس أنجلوس. استخدم الشريط لتثبيت البالون داخل LV.To ومعايرة محول الضغط ، وقم أولا بملء حقنة سعة 10 ملليلتر بمحلول ملحي دافئ وقم بتوصيل المحقنة بالقبة من خلال صنبور ثلاثي الاتجاهات. افتح الصنبور واملأ القبة ببطء بالمحلول الملحي قبل إغلاق جميع الصنابير وإزالة المحقنة. بعد ذلك ، قم بتوصيل القبة المملوءة بمحول الطاقة عن طريق توصيل مقياس الضغط بالطرف الثالث من الصنبور ثلاثي الاتجاهات.
في برنامج التسجيل ، من القائمة المنسدلة للقناة المتصلة بمحول الطاقة ، حدد خيار Bridge Amp. انقر فوق 0 قبل بدء التسجيل لضبط قراءة محول الطاقة على صفر ملليمتر من الزئبق. بعد عدة ثوان من التسجيل ، ادفع المحقنة ببطء وقم بزيادة الضغط إلى 100.
انقر فوق إيقاف لإنهاء التسجيل. في مربع الحوار تحويل الوحدات، حدد مساحة تسجيل صفر ملليمتر من الزئبق وانقر فوق السهم إلى 1 قبل كتابة صفر ملليمتر من الزئبق. وبالمثل ، حدد منطقة التسجيل ل 100 ملم من الزئبق.
انقر فوق السهم إلى 2 واكتب 100 ملليمتر من الزئبق. الآن ، انقر فوق "موافق" لمعايرة محول الطاقة. بعد الانتهاء من المعايرة ، أعد تسمية القناة المقابلة لمحول الضغط مع البالون باسم ضغط البطين ، أو ضغط الجهد المنخفض ، وابدأ التسجيل عندما يكون القلب متصلا بالنظام.
بعد إدخال البالون في البطين، اضبط حجم الماء في البالون باستخدام حقنة ميكرومتر من خلال الصنبور ثلاثي الاتجاهات للحفاظ على الضغط الانبساطي النهائي عند خمسة إلى 10 ملليمترات من الزئبق. بعد ذلك ، أعد تسمية قناة فارغة ك dP / dt واحتفظ بقناة المصدر المشتقة كضغط البطين. تسجل هذه القناة نسبة تغير الضغط في تجويف البطين أثناء الانكماش.
حدد فترة القياس المستقرة قبل الانتقال إلى الإعداد في وحدة ضغط الدم. ثم حدد ضغط الجهد المنخفض كقناة إدخال وانقر فوق تحديد قبل الضغط على موافق. الآن ، انقر فوق عرض المصنف لإزالة أي دورة قلبية شاذة ، و عرض الجدول لإنشاء الجداول لمتوسط الحد الأقصى dP / dt والحد الأدنى dP / dt للفترة المحددة. عندما تم تخزين قلب الفأر في المخزن المؤقت HTK لمدة صفر ساعة قبل التروية ، تم تسجيل ضغط انقباضي أعلى ل LV مقارنة ب RV. بالإضافة إلى ذلك ، بالمقارنة مع عربة سكن متنقلة ، أظهر LV أيضا تقلصا عضليا أكثر بكثير ، فضلا عن الاسترخاء.
ومع ذلك ، عندما تم إجراء التروية على القلب بعد تعريضه لثماني ساعات من التخزين البارد ، أظهر كل من LV و RV انخفاضا وظيفيا كبيرا مقارنة بمرحلة ساعة الصفر. لوحظ أن الانخفاضات تكون أكثر حدة في LV مقارنة ب RV. كان انكماش وانحلال الجهد المنخفض بعد التخزين لمدة ثماني ساعات 25.1٪ و 30.7٪ من الوظيفة المقابلة للتخزين لمدة ساعة الصفر ، بينما عرضت عربة سكن متنقلة 32.5٪ و 29.1٪ من الوظيفة ، مقارنة بخط الأساس لساعة الصفر. كان الإشارة إلى خلل الكسب غير المشروع الأولي للجهد المنخفض بعد التخزين المطول أكثر أهمية من خلل RV. تعتمد جودة الحفظ إلى حد كبير على نضح HTK.
من المهم التأكد من أن التروية متسقة لمقارنة العلاجات المختلفة بدقة. من خلال القياس الدقيق لوظيفة قلب المتبرع للحفظ ، يمكن أن تكون هذه الطريقة سهلة التكيف مع فحص الأدوية التي يمكن أن تحسن وظيفة قلب المتبرع ثم التحقق من صحتها باستخدام نموذج زرع غير متجانس.
